RU2636027C2 - Пробиотические штаммы для применения в лечении или профилактике остеопороза - Google Patents
Пробиотические штаммы для применения в лечении или профилактике остеопороза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2636027C2 RU2636027C2 RU2015147106A RU2015147106A RU2636027C2 RU 2636027 C2 RU2636027 C2 RU 2636027C2 RU 2015147106 A RU2015147106 A RU 2015147106A RU 2015147106 A RU2015147106 A RU 2015147106A RU 2636027 C2 RU2636027 C2 RU 2636027C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- treatment
- prevention
- bone
- osteoporosis
- dsm
- Prior art date
Links
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 80
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 59
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 48
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title claims abstract description 30
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 68
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 36
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 claims abstract description 27
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 50
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 21
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 21
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 claims description 17
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 claims description 16
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 13
- 230000009245 menopause Effects 0.000 claims description 10
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 abstract description 4
- -1 Ca2+ ions Chemical class 0.000 abstract 2
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 67
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 55
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 30
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 23
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 229960005069 calcium Drugs 0.000 description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 19
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 14
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 14
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 12
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 12
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 12
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 9
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 8
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 7
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 5
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 5
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 5
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 4
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 102100032236 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11B Human genes 0.000 description 4
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 4
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000000450 urinary calcium excretion Effects 0.000 description 4
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 3
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 3
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 2
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186869 Lactobacillus salivarius Species 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010043267 Sp7 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 102100032317 Transcription factor Sp7 Human genes 0.000 description 2
- 206010062662 Uterine mass Diseases 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000037182 bone density Effects 0.000 description 2
- 230000037118 bone strength Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 238000003650 Calcium Assay Kit Methods 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001736 Calcium glycerylphosphate Substances 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 101001065556 Mus musculus Lymphocyte antigen 6G Proteins 0.000 description 1
- 101001098398 Mus musculus Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010030247 Oestrogen deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 210000002048 axillary vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004227 calcium gluconate Substances 0.000 description 1
- 229960004494 calcium gluconate Drugs 0.000 description 1
- 235000013927 calcium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- UHHRFSOMMCWGSO-UHFFFAOYSA-L calcium glycerophosphate Chemical compound [Ca+2].OCC(CO)OP([O-])([O-])=O UHHRFSOMMCWGSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940095618 calcium glycerophosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000019299 calcium glycerylphosphate Nutrition 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940087373 calcium oxide Drugs 0.000 description 1
- 235000012255 calcium oxide Nutrition 0.000 description 1
- 229940095672 calcium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L calcium;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000004821 effect on bone Effects 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000105 enteric nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940039412 ketalar Drugs 0.000 description 1
- VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N ketamine hydrochloride Chemical compound [Cl-].C=1C=CC=C(Cl)C=1C1([NH2+]C)CCCCC1=O VCMGMSHEPQENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- KRTSDMXIXPKRQR-AATRIKPKSA-N monocrotophos Chemical compound CNC(=O)\C=C(/C)OP(=O)(OC)OC KRTSDMXIXPKRQR-AATRIKPKSA-N 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 230000018889 transepithelial transport Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/306—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on bone mass, e.g. osteoporosis prevention
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложено применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 и применение штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации, по меньшей мере, с одним из штаммов Lactobacillus plantarum для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего. Предложено применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации с Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312 и Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313 для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего. Изобретения обеспечивают снижение потери кортикального слоя кости в лечении постменопаузального остеопороза. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 6 ил., 3 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei, или по меньшей мере одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei в комбинации по меньшей мере с одном пробиотическим штаммом, выбранным из Lactobacillus plantarum, для применения в лечении или профилактике остеопороза, или для применения с целью повышения абсорбции ионов Ca2+ у млекопитающего, предпочтительно у человека.
Уровень техники
Остеопороз является заболеванием, при котором кости становятся хрупкими и более подверженными переломам. Обычно снижается плотность костей, которая определяется количеством кальция и минералов в кости. Остеопороз является наиболее распространенным типом заболеваний костей. Примерно у половины женщин в возрасте старше 50 лет развивается перелом костей бедра, запястья, или позвонков (костей позвоночника) в течение жизни. Кость является живой тканью. Существующая кость постоянно замещается новой костной тканью. Остеопороз развивается, когда организм неспособен формировать достаточную костную ткань, когда слишком много существующей костной ткани реабсорбируется организмом, или при комбинации этих факторов. Кальций является одним из важных минералов, необходимых для формирования кости. При недостаточном употреблении кальция и витамина D или при недостаточной абсорбции кальция, поступающего с пищей, кости могут стать хрупкими и более подверженными переломам. Снижение эстрогена у женщин при менопаузе и снижение тестостерона у мужчин является ведущей причиной потери костной массы. Переломы, вызванные остеопорозом, являются серьезной проблемой для здоровья, и приводят к огромной экономической нагрузке на систему здравоохранения. Риск развития связанного с остеопорозом перелома в течение жизни является высоким в странах Запада (около 50% у женщин и 20% у мужчин), и переломы связаны со значительной смертностью и заболеваемостью. Кортикальное вещество кости составляет примерно 80% костной ткани в организме, и в некоторых исследованиях было показано, что кортикальное вещество является главной детерминантой прочности кости, и таким образом, склонности к переломам. Потеря костной массы в возрасте старше 65 лет обусловлена главным образом потерей кортикального вещества, а не губчатого вещества кости (Lancet, 2010, May 15; 375 (9727): 1729-36).
Скелет ремоделируется остеобластами (ОБ), формирующими кость, и остеокластами (ОК), резорбирующими кость. Макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF) повышает пролиферацию и выживание клеток-предшественников ОК, а также осуществляет повышающую регуляцию экспрессии активатора рецептора нуклеарного фактора кВ (RANK) в ОК. Это позволяет RANK лиганду (RANKL) связываться и начинать сигнальный каскад, приводящий к формированию ОК. Эффект RANKL может быть ингибирован остеопротегерином (ОПГ), который является рецептором-ловушкой для RANKL.
Связь между воспалением и потерей костной ткани хорошо изучена, и резорбция кости остеокластами при аутоиммунных заболеваниях управляется воспалительными цитокинами, продуцируемыми активированными Т-клетками. Кроме того, в некоторых исследованиях показано, что неспецифическое системное воспаление, о котором свидетельствую умеренно повышенные сывороточные уровни высокочувствительного С-реактивного белка (вчСРБ), связано с низкой минеральной плотностью костной ткани, повышенной резорбцией кости и увеличенным риском переломов. Дефицит эстрогена, развивающийся после менопаузы, приводит к повышению образования и удлинению выживания остеокластов. Полагают, что это обусловлено рядом факторов, включая потерю иммуносупрессивных эффектов эстрогена, что приводит к повышенной продукции цитокинов, стимулирующих остеокластогенез, и прямых эффектов эстрогена на ОК. В соответствии с этими данными, блокада воспалительных цитокинов ФНО-альфа и ИЛ-1 приводит к снижению маркеров резорбции костной ткани у женщин в раннем постменопаузальном периоде.
В недавние годы интенсивно изучалось значение кишечной микробиоты (КМ) для здоровья и заболеваний. КМ состоит из триллионов бактерий, которые вместе содержат в 150 раз больше генов, чем человеческий геном. Она приобретается при рождении, и хотя и является отдельной структурой, явно совместно эволюционирует с человеческим геномом, и может считаться многоклеточным органом, который сообщается с хозяином и влияет на него множеством способов. Состав КМ модулируется рядом факторов окружающей среды, такими как рацион и применение антибиотиков. Молекулы, продуцируемые кишечными бактериями, могут быть как благоприятными, так и вредными, и как известно, влияют на эндокринные клетки в кишечнике, энтеральную нервную систему, проницаемость кишечника и иммунную систему. Утверждается, что нарушение микробного состава вовлечено в ряд воспалительных состояний внутри и вне кишечника, включая болезнь Крона, язвенный колит, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, диабет, пищевые аллергии, экзему и астму, а также ожирение и метаболический синдром.
Пробиотические бактерии определяются как живые микроорганизмы, которые при применении в адекватных количествах обеспечивают благоприятное влияние на организм-носитель, и как полагают, изменяют состав кишечной микробиоты. Предполагаемые механизмы, лежащие в его основе, являются многочисленными, включая повышенную растворимость и абсорбцию минералов, усиленную барьерную функцию и модуляцию иммунной системы.
В Gilman et al, «The effect of Probiotic Bacteria on Transepithelial Calcium Transport and Calcium uptake in Human Intestinal-like Caco-2 cells», Curr. Issues Intestinal Microbial. 7: 1-6 («Влияние пробиотических бактерий на трансэпителиальный транспорт кальция и поглощение кальция в Сасо-2 клетках, подобных клеткам тонкой кишки человека») тестировали влияние штамма Lactobacillus salivarius (UCC 118) и штамма Bifidobacterium infantis (UCC 35624) на поглощение кальция и трансэпителиальный транспорт кальция в культуре Сасо-2 клеток, подобных клеткам тонкой кишки человека. Указанные штаммы не оказывали влияния на трансэпителиальный транспорт кальция в полностью дифференцированных Сасо-2 клетках в возрасте 16 суток. Поглощение кальция в монослоях Сасо-2 клеток спустя 24 часа существенно повышалось в клетках, подвергшихся воздействию Lactobacillus salivarius.
WO 99/02170 описывает применение лактобацилл в препарате не ферментированных энтеральных композиций для облегчения или повышения абсорбции минералов из рациона, таких как кальций, цинк, железо и магний. Экспериментами, выполненными в нем, поддерживающими заявленную абсорбцию, является in vitro модель транспортировки кальция с применением интестинальных линий Сасо-2 (карциногенной клеточной линии).
KR 101279852 раскрывает композиции для профилактики или лечения остеопороза, содержащие кальций и магний, в дополнение к специфическим штаммам молочнокислых бактерий, таких как Streptococcus thermophilus с номером депонированного штамма КСТС 11870ВР, Lactobacillus rhamnosus с номером депонированного штамма КСТС 11868ВР, и Lactobacillus paracasei с номером депонированного штамма КСТС11866ВР.
В данной области техники остается потребность в эффективных способах профилактики и лечения остеопороза у человека.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится в одном аспекте по меньшей мере к одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei, или по меньшей мере одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei в комбинации по меньшей мере с одном пробиотическим штаммом, выбранным из Lactobacillus plantarum, для применения в лечении или профилактике остеопороза, или для применения с целью повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего, предпочтительно у человека.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 раскрывает транспорт Са2+, тестированный с различными бактериальными штаммами, как описано в Эксперименте 1 и 2.
Фиг. 2 раскрывает оставшийся внутриклеточный Ca в клетках спустя 2 часа, как описано в Экспериментах 1 и 2.
Фиг. 3 описывает дизайн эксперимента и массу тела из эксперимента 3. Изложен дизайн эксперимента (А). У мышей в возрасте восемь недель применяли несущую среду (veh), отдельный Lactobacillus (L) штамм (L. para) или смесь трех штаммов (L. mix) в течение 6 недель, начиная за две недели до овариэктомии или имитации операции. Штаммы лактобацилл давали в питьевой воде в концентрации 109 колониеобразующих единиц (КОЕ) на мл, в то время как контрольные мыши получали питьевую воду с несущей средой. В конце исследования у мышей в возрасте 14 недель собирали ткани для последующего анализа. Овариэктомия приводила к ожидаемому повышению массы тела, по сравнению с мышами с имитацией операции, у которых не отмечено изменений после применения пробиотиков (В). Результаты приведены в виде среднего значения ± СКО (n=9-10), **р<0,01. С помощью критерия Стьюдента сравнивали овариэктомию и имитацию операции.
На Фигуре 4 показано, что пробиотики защищают мышей от индуцированной овариэктомией потери кортикальной костной ткани. У мышей в возрасте восьми недель применяли несущую среду (veh), отдельный Lactobacillus (L) штамм (L. para) или смесь трех штаммов (L. mix) в течение 6 недель, начиная за две недели до овариэктомии или имитации операции, для изучения профилактического влияния на индуцированную овариэктомией потерю костной ткани. В конце эксперимента анализировали выделенные бедренные кости с помощью микрокомпьютерной томографии высокого разрешения и периферической количественной компьютерной томографии (пККТ). Приведены примерные мкКТ изображения одной кортикальной секции от групп с имитацией операции и овариэктомией, получавших несущую среду и L. mix (А). Минеральную плотность кости в кортикальном слое (МПК) (В) и кортикальную область (С) измеряли путем пККТ в среднем диафизальном участке бедренной кости. Результаты приведены в виде среднего значения ± СКО (n=9-10), **р<0,01, *р<0,05. С помощью критерия Стьюдента сравнивали овариэктомию и имитацию операции, *р<0,05, проводили тест ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Даннета внутри групп, групп с овариэктомией и применением L. Рага и L. mix против группы со овариэктомией и применением несущей среды.
Фиг. 5 раскрывает, что пробиотики снижают экспрессию воспалительных цитокинов и отношение RANKL/ОПГ в кортикальном слое кости. QRT-PCR анализ экспрессии генов, которые, как известно, стимулируют резорбцию костной ткани; (А) Фактор некроза опухоли - альфа (ФНО-α), (В) Интерлейкин-1-бета (ИЛ-1-β), (С) Интерлейкин-6 (ИЛ-6), (D) отношение активатора рецептора лиганда нуклеарного фактора каппа-В (RANKL) и остеопротегерина (ОПГ), и индивидуальные графики для (Е) ОПГ, (F) RANKL и генов, которые, как известно, стимулируют формирование костной ткани; (G) Osterix, (Н) коллаген I типа a1 (ColIa1) и (I) остеокальцин в кортикальном слое кости у 14-недельных мышей после овариэктомии (ovx), получавших либо несущую среду (veh), либо смесь трех пробиотических штаммов Lactobacillus (L. mix) в течение 6 недель, начиная за две недели перед овариэктомией или имитированной операцией, для изучения профилактического эффекта лечения пробиотиками в отношении индуцированной овариэктомией потери костной ткани. Результаты приведены в виде среднего значения ± СКО (n=9-10), *р<0,05. С помощью критерия Стьюдента сравнивали овариэктомию и имитацию операции.
Фиг. 6 раскрывает, что относительная экскреция кальция повышается после овариэктомии у мышей, получавших несущую среду, но не у мышей, получавших L. para или L. mix. Кальций и креатинин измеряли в сыворотке и моче 14-недельных мышей, получавших несущую среду (veh), отдельный Lactobacillus (L) штамм (L. para) или смесь трех штаммов (L. mix) в течение 6 недель, начиная за две недели до овариэктомии или имитации операции. Относительную экскрецию кальция с мочой рассчитывали по формуле FECa= (уровень кальция в моче × сывороточный уровень креатинина) / (сывороточный уровень кальция × уровень креатинина в моче). Результаты приведены в виде среднего значения ± СКО, n=5-10 в каждой группе. *р<0,05. С помощью критерия Стьюдента сравнивали овариэктомию и имитацию операции, *р<0,05, проводили тест ANOVA с последующим применением апостериорного критерия Даннета внутри групп, групп с овариэктомией и применением L. Para и L. mix против группы со овариэктомией и применением несущей среды.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение относится в одном варианте осуществления по меньшей мере к одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei, или по меньшей мере одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei в комбинации по меньшей мере с одном пробиотическим штаммом, выбранным из Lactobacillus plantarum, для применения в лечении или профилактике остеопороза, или для применения с целью повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего, предпочтительно у человека.
Настоящее изобретение относится в одном варианте осуществления по меньшей мере к одному пробиотическому штамму для применения в лечении или профилактике остеопороза путем предотвращения потери кортикальной костной ткани, путем предотвращения потери минеральной плотности костей, и путем предотвращения резорбции костей.
Кортикальная костная ткань составляет примерно 80% от кости в организме, и в некоторых исследованиях было показано, что кортикальная костная ткань является главной детерминантой прочности кости, и следовательно, склонности к переломам. В экспериментах из настоящего изобретения было показано, что пробиотический штамм Lactobacillus paracasei, по отдельности или в комбинации со штаммами видов Lactobacillus plantarum, предотвращает потерю кортикальной костной ткани. Также в экспериментах из настоящего изобретения было показано, что применение пробиотиков изменяет иммунный статус в кости, приводя к ослаблению резорбции костной ткани. Кроме того, в экспериментах из изобретения также было показано, что минеральная плотность кости не снижается в группе, получавшей пробиотики, по сравнению с группой, получавшей несущую среду (Фигуры 4А-С). Минеральная плотность кости в кортикальном слое была выше во обеих группах получавших пробиотики, по сравнению с группой, получавшей несущую среду (р<0,05, Фигура 4В).
Настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei, или по меньшей мере одному Lactobacillus paracasei в комбинации по меньшей мере с одним пробиотическим штаммом, выбранным из Lactobacillus plantarum, для применения в лечении или профилактике остеопороза, для профилактики снижения минеральной плотности кости, для предотвращения потери костной ткани у млекопитающего, предпочтительно, у человека.
Настоящее изобретение относится по меньшей мере к одному пробиотическому штамму, выбранному из Lactobacillus paracasei, или по меньшей мере одному Lactobacillus paracasei в комбинации по меньшей мере с одним пробиотическим штаммом, выбранным из Lactobacillus plantarum, для применения в профилактике снижения минеральной плотности кости, для предотвращения потери костной ткани у млекопитающего, предпочтительно, у человека.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения по меньшей мере два или больше штаммов Lactobacillus plantarum применяют совместно в комбинации по меньшей мере с одним штаммом Lactobacillus paracasei. В другом варианте осуществления по меньшей мере два или больше, например, три или больше штаммов Lactobacillus paracasei применяют совместно в комбинации по меньшей мере с одним штаммом Lactobacillus plantarum.
В одном варианте осуществления изобретения пробиотический штамм является живым, инактивированным или мертвым. В одном варианте осуществления изобретения указанные штаммы присутствуют в композиции, содержащей дополнительно по меньшей мере один носитель. Носитель может быть любым носителем, обычно применяемым, например, в формах биологически активной добавки к пище. Носитель может быть любым носителем на основе злаков, таким как носитель из овсяной муки или ячменный носитель, который можно применять в качестве функциональной пищи или любого другого вида пищи. Носитель может быть водой или любым другим водным растворителем, в котором пробиотический штамм смешивают перед употреблением.
В одном варианте осуществления изобретения в композицию добавляют дополнительный Са2+ в форме, например, соли, например, карбоната кальция, хлорида кальция, солей кальция и лимонной кислоты, глюконата кальция, глицерофосфата кальция, лактата кальция, оксида кальция, сульфата кальция. Рекомендуемое суточное потребление (РСП) Са2+ составляет 800 мг. Количество Са2+ в композиции может быть в диапазоне 10-40% от РСП, предпочтительно, в диапазоне 15-30% от РСП. Таким образом, количество Са2+, например, в форме соли в композиции может быть в диапазоне 80-320 мг, предпочтительно, 120-240 мг. Количество Ca, добавляемого в композицию, можно регулировать до любого количества в вышеуказанном диапазоне, так чтобы композиция была стабильной и обеспечивала свои благоприятные эффекты.
Композиция может быть сухой не ферментированной композицией или ферментированной композицией. В случае сухой не ферментированной композиции ферментация осуществляется после употребления композиции индивидуумом, т.е. в желудочно-кишечном тракте. Кроме того, штаммы могут присутствовать в композиции в виде лиофилизированных штаммов.
Пробиотический штамм Lactobacillus paracasei может быть выбран из Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, и Lactobacillus paracasei 02:A, DSM 13432, a пробиотический штамм Lactobacillus plantarum может быть выбран из Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595, Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843, Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313, и Lactobacillus plantarum HEAL 99, DSM 15316.
Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434, и Lactobacillus paracasei 02:A, DSM 13432, были депонированы 10 апреля 2000 в Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH.
Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313, и Lactobacillus plantarum HEAL 99, DSM 15316 были депонированы в Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH 28 ноября 2002.
Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843 был депонирован 21 марта 1995, a Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595 был депонирован 5 июля 1991 в Deutsche Sammlung von Mikroorganimsen und Zellkulturen GmbH.
В одном варианте осуществления изобретения композиция, включающая по меньшей мере один штамм, может быть выбрана из группы, состоящей из пищевого продукта, биологически активной добавки к пище, медицинского продукта питания, функционального продукта питания и питательного продукта.
В случае, если указанная композиция является пищевым продуктом, она может быть выбрана из группы, включающей напитки, йогурты, соки, мороженое, хлеб, бисквиты, злаки, питательные батончики и спрэды.
Когда любой из вышеупомянутых штаммов применяют в композиции, такой как биологически активная добавка к пище, добавляемый носитель(и) известен специалисту в данной области техники. Любые другие ингредиенты, которые обычно используют в биологически активных добавках к пище, известны специалисту в данной области техники, и могут также быть добавлены обычным способом вместе со штаммами.
В одном варианте осуществления вышеупомянутый штамм(ы) пробиотиков присутствует в композиции в количестве примерно от 1×106 до 1×1014 КОЕ, предпочтительно от 1×108 до 1×1012 КОЕ, и более предпочтительно, от 1×109 до 1×1011 КОЕ. Штаммы могут также применяться по отдельности в вышеуказанном количестве воды или любого другого водного растворителя, в котором штаммы добавляют или смешивают перед употреблением.
Изобретение пригодно для применения у млекопитающих, предпочтительно у людей, таких как пожилые люди, женщины в постменопаузальном периоде и женщины в пременопаузальном периоде, у которых существует или может возникнуть проблема потери костной ткани, снижения минеральной плотности костей и повышения потери костной ткани или резорбции костей.
Здоровые люди, естественно, также могут извлекать пользу из изобретения для сохранения здоровья и предотвращения развития остеопороза.
Эксперименты
Эксперимент 1
Материалы и методы
«Транспортные растворы», общий объем 6 мл.
Транспортные растворы содержали сбалансированный солевой раствор Хэнкса (HBSS) с Са и Mg, Hepes (2%), глутамином (4 мМ), D-глюкозой (3,5 г/л) и CaCl2×2Н2O (1,47 г/л). Анализ раствора выявил содержание [Ca2+] 10,65 мМ.
«Базовый раствор»
Готовили подобно транспортному раствору, но без добавления экзогенного кальция.
Анализ этого раствора показан содержание [Са2+] 1,22 мМ.
Эксперимент 1:
1. Контроль только транспортного раствора.
2. Лиофилизированные Lactobacillus plantarum 299v. 0,788 мг, что соответствовало 4,02×108 бактерий/6 мл транспортного раствора.
3. Lactobacillus plantarum 299v. 4,02×108 бактерий/6 мл транспортного раствора.
4. Lactobacillus plantarum 299v. 4,95×108 бактерий/6 мл транспортного раствора.
5. Lactobacillus HEAL 19, 4,95×108 бактерий/6 мл транспортного раствора.
6. AMJ 1277. 4,95×108 бактерий/6 мл транспортного раствора. AMJ 1277 является мутантной формой Lactobacillus plantarum 299v.
Эксперимент 2:
1. CNCM I-2332, Lactobacillus acidophilus (La10); + 4,95×108 бактерий/6 мл транспортного раствора.
2. Lactobacillus plantarum 299v. 4,02×10 бактерий/6 мл транспортного раствора.
3. Контроль - только транспортный раствор.
Все штаммы, за исключением La10, культивировали в аэробных условиях в 30 мл MRS (30°С, 210 об/мин). La10 культивировали при 37°С и покрывали стерильным фильтрованным азотом перед герметизацией. Число инокулированных клеток составило 3×108 на флакон. Бактерии предварительно культивировали в течение ночи, и они находились в экспоненциальной фазе при инокуляции. Клетки собирали при ОП600=0,1-0,5, и для каждого штамма собирали объем, соответствующий 4,02×10 клеток. Образцы центрифугировали при 5000 об./мин, 3 минуты, надосадочную жидкость выливали, и клетки ресуспендировали в NaCl (0,9%). Клетки вновь центрифугировали, и удаляли надосадочную жидкость. Отмытый осадок ресуспендировали в транспортном растворе.
Клетки Сасо-2 промывали фосфатным буферным раствором (2 раза) перед анализом. 5CaCl2 (74 Бк/мл) добавляли в транспортные растворы. Затем добавляли смесь в объеме 0,5 мл, апикально на Сасо-2 клетки, растущие на вкладышах. В каждой лунке получали 6,7×107 бактерий на мл. В основную камеру добавляли только базальный раствор (1,5 мл), содержащий только эндогенный [Са2+] в HBSS (1,22 мМ). Суспензиями и контролями воздействовали на Сасо-2 клетки в течение 2 часов. Затем их удаляли аспирацией, и клетки промывали охлажденным на льду буферным раствором для промывания 3 раза в соответствии со способом, описанным в WO 99/02170. Сасо-2 клетки затем лизировали в 0,5 мл NaOH (0,5 М). Растворы в базальных камерах собирали для анализа транспорта с помощью сцинтиллятора (Tri-carb 2800TR, Perkin Elmer). В лизатах анализировали содержание 5Ca, а также содержание белка. Все измеренные величины для транспорта/поглощения Са2+ были нормализованы по содержанию белка в соответствующих клетках. Все ячейки проверяли до и после инкубации аналитическими растворами на трансэпителиальную резистентность (TEER). Не наблюдалось различий TEER до и после испытаний. TEER измеряли, чтобы убедиться, что нет утечки в эпителии. Разница в резистентности после испытания могла свидетельствовать о том, что внутриклеточные связи повреждены используемыми растворами.
Результаты
Для проведения сравнения результатов экспериментов 1 и 2, данные по транспорту и поглощению у изученных штаммов нормализовали по контрольному раствору без бактерий. Все результаты, таким образом, были представлены в процентах от контроля (подобно тому, как было сделано в WO 00/02170). Необходимо также отметить, что эксперименты 1 и 2 были выполнены на 16 и 21 сутки культивирования клеток, соответственно. В целом, наблюдалось, что среднеквадратические отклонения полученных результатов являются относительно большими. Это может быть обусловлено некоторой формой агрегации бактерий и Са2+, приводящей к изменению доступности Са2+. Это не наблюдалось у лиофилизированных бактерий, где среднеквадратические отклонения были относительно малыми, по сравнению с остальными образцами.
Транспорт Са2+
Результаты эксперимента 1 показали существенное улучшение транспорта Са2+, когда присутствовал штамм AMJ 1277 (134,7±18,9%, р=0,002), см. Фиг. 1. Ни один из других штаммов (Lp299v лиофилизированный и жизнеспособный, Lp299, Lp HEAL 19) не имел существенных различий в транспорте Са2+, см. Таблицу 1. В эксперименте 2 при тестировании La10 и Lp299v не было выявлено существенных различий в транспорте Ca2+, при сравнении образцов с Lp299 против контроля без бактерий (р=0,2). Для La10 отмечалось легкое снижение транспорта Са2+ в присутствии тех же самых бактерий (79,5±19,3%), и это изменение было достоверным (р=0,049).
Поглощение Са2+
Представленные данные по поглощению показали количество Са2+ в клетках спустя 2 часа. Для получения данных по действительному поглощению нужно добавить количества внутриклеточного Са2+ к количеству Са2+, выявленного в латеральных компартментах. Сумма этих данных описывает общее количество Са2+, транспортированного через апикальную мембрану. Результаты этих экспериментов в целом показывают снижение внутриклеточного [Са2+] в присутствии бактерий, по сравнению с контрольными растворами, не содержащими бактерий, см. Фигуру 2. Однако, только различия между лиофилизированным и живым Lp299v были значимыми (р=0,04 и р=0,02). Отмечаем, что промежуточные уровни внутриклеточного Са2+ составляют лишь небольшой процент, по сравнению с транспортируемыми количествами Са2+. Благодаря этому, продемонстрированный эффект поглощения Са2+ не оказывал такого влияния, как эффекты в отношении транспорта. Это можно наблюдать для лиофилизированного и живого Lp 299v, у которого было более высокое содержание внутриклеточного [Са2+], но не было показано улучшения транспорта.
Заключение
В присутствии штамма AMJ1277, мутанта Lactobacillus plantarum 299v, наблюдался повышенный транспорт и даже общее поглощение кальция, по сравнению с контролем и остальными штаммами. Таким образом, наблюдалась разница между штаммами.
Эксперимент 3
Мышиная модель с овариэктомией и лечением пробиотиками
Овариэктомия (ovx) приводит к потере костной ткани, связанной с изменением иммунного статуса. Целью этого эксперимента было определение того, может ли применение пробиотиков защищать мышей от потери костной ткани, индуцированной овариэктомией. У мышей применяли один штамм Lactobacillus (L), L. paracasei DSM 13434 (L. para), или смесь трех штаммов, L. paracasei DSM 13434, L. plantarum DSM 15312 и DSM 15313 (L. mix) в питьевой воде в течение 6 недель, начиная за две недели перед овариэктомией.
Мышей-самок C57BL/6N в возрасте шести недель получали от Charles River (Германия). Мышей помешали в стандартные условия содержания животных при контролируемой температуре (22°С) и периоде освещения (12 часов света, 12 часов темноты), и обеспечивали свободный доступ к свежей воде и не содержащему сои гранулированному корму R70 (Lactam в АВ, Стокгольм, Швеция). Модель овариэктомии (ovx) для остеопороза включена в указания FDA по доклинической и клинической оценке агентов, используемых для лечения постменопаузального остеопороза. Лечение пробиотиками начинали за две недели до овариэктомии в исследовании профилактического эффекта применения пробиотиков в отношении индуцированной овариэктомией потери костной ткани. У мышей применяли либо единственный штамм Lactobacillus (L), L paracasei DSM 13434 (L. para), либо смесь трех штаммов, L. paracasei DSM 13434, L. plantarum DSM 15312 и DSM 15313, обозначаемую как L. mix, в течение 6 недель. Штаммы пробиотиков выбирали на основе их противовоспалительных свойств. Штаммы лактобацилл применяли в питьевой воде в концентрации 109 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл, в то время как контрольные мыши получали питьевую воду с несущей средой. Бутылки с водой заменяли каждый полдень. Выживание штаммов лактобацилл проверяли регулярно, и спустя 24 часа концентрация падала в 10 раз, примерно до 108 КОЕ/мл. Каждая мышь выпивала в среднем 4,5 мл воды в сутки. Спустя две недели применения пробиотиков, у мышей проводили либо имитацию операции, либо овариэктомию, при ингаляционной анестезии изофлюраном (Forene; Abbot Scandinavia, Сольна, Швеция). Спустя четыре недели после операции собирали кровь из подкрыльцовой вены под анестезией кеталаром/домитором, а затем мышей умерщвляли цервикальной дислокацией. Ткани для выделения РНК немедленно извлекали и подвергали мгновенному замораживанию в жидком азоте для последующего анализа. Кости извлекали и фиксировали в 4% параформальдегиде. Все эксперименты на животных были разрешены местным Этическим комитетом по исследованиям на животных в Университете Гетеборга.
Периферическая количественная компьютерная томография (пККТ)
Компьютерную томографию проводили с pQCT ХСТ RESEARCH М (версия 4.5 В, Norland, Форт-Аткинсон, Висконсин, США), работающим с разрешением 70 пм. Параметры кортикального слоя кости анализировали ex vivo в среднедиафизальной области бедренной кости.
Анализ мкКТ высокого разрешения
Анализы КТ высокого разрешения проводили на дистальном отделе бедренной кости с применением 1172 модели КТ (Bruker micro-CT, Аартселаар, Бельгия). Получали изображения бедренной кости с рентгеновской трубкой напряжением 50 кВ и током 201 мкА, с 0,5 мм алюминиевым фильтром. Угол вращения сканирования составил 180°, а угловое приращение 0,70°. Размер объемного элемента составил 4,48 пм изотропно. Применяли NRecon (версия 1.6.9) для выполнения восстановления после сканирования. В бедренной кости выбирали губчатую зону проксимально к дистальной зоне роста для анализов в подходящем интересующем объеме (за исключением кортикальной зоны), начиная на расстоянии 538,5 пм от зоны роста, и продолжая на дополнительное продольное расстояние 134,5 пм в проксимальном направлении. Кортикальные измерения проводили в диафизальном участке бедренной кости, начиная на расстоянии 3,59 мм от зоны роста, и продолжая на дополнительное продольное расстояние 134,5 пм в проксимальном направлении. Для анализа МПК оборудование калибровали с керамическими стандартными образцами.
Выделение РНК и ПЦР в режиме реального времени
Общую РНК выделяли из кортикального слоя кости (концы бедренной кости удаляли, и костный мозг вымывали ФБР перед замораживанием) и костного мозга с применением реагента TriZol (Invitrogen, Лидинго, Швеция). РНК подвергали обратной транскрипции на кДНК с применением Набора для высокоактивной обратной транскрипции кДНК (#4368814, Applied Biosystems, Стокгольм, Швеция). Анализы РВ-ПЦР проводили с применением системы детекции последовательностей ABI Prism 7000 Sequence Detection System (РЕ Applied Biosystems). Мы применяли предварительно разработанные анализы РВ-ПЦР от Applied Biosystems (Швеция) для анализа уровней мРНК ИЛ-6 (Mm00446190_m1), ИЛ-1β (Mm00434228_m1), ФНОα (Mm00443258_m1), RANKL (Mm00441908_m1), ОПГ (Mm00435452_m1), Runx2 (Mm00501580_m1), Col1a1 (Mm00801666_g1), остеокальцина (Mm01741771_g1) и ТФРβ (Mm03024053_m1). Содержание мРНК для каждого гена рассчитывали с применением «метода стандартной кривой» (Руководство пользователя 2; РЕ Applied Biosystems), и приспосабливали для экспрессии 18S 94308329) рибосомальной РНК.
Анализ крови
Анализы проводили в соответствии с инструкциями производителя по анализу кальция в сыворотке и моче (QuantiChrom™ Calcium Assay Kit (DICA-500), Bioassays systems, Хэйворд, Калифорния, США), креатинина в сыворотке и моче (Mouse Creatinine Kit, Crystal Chem, Даунерс-Гроув, Иллинойс, США). В качестве маркера резорбции кости определяли сывороточные уровни фрагментов коллагена I типа с применением ИФА набора RatLaps ELISA kit (Nordic Bioscience Diagnostics, Херлев, Дания). Сывороточные уровни остеокальцина, маркера формирования кости, определяли с применением набора для иммунорадиометрического анализа мышиного остеокальцина (Immutopics, Сан-Клементе, Калифорния).
Проточная цитометрия
Клетки костного мозга собирали путем промывания 5 мл ФБР полости бедренной кости с помощью шприца. После центрифугирования при 515 g в течение 5 минут, осадок клеток ресуспендировали в Трис-буферном 0,83% растворе NH4Cl (рН 7,29) в течение 5 минут для лизиса эритроцитов, а затем промывали в ФБР. Клетки костного мозга ресуспендировали в среде для культивирования RPMI (РАА Laboratories, Пашинг, Австрия) перед применением. Рассчитывали общее количество лейкоцитов в костном мозге с применением автоматического счетчика клеток (Sysmex, Гамбург, Германия). Для анализов проточной цитометрии клетки окрашивали антителами к CD4, конъюгированными с аллофикоцианином, для детекции Т-хелперных клеток (Beckton-Dickinson), и антителами к CD8 цитотоксическим Т-клеткам, конъюгированными с флюоресцеин-изотиоцианатом (FITC) (Beckton-Dickinson), или антителами к Gr-1/Ly-6G, конъюгированными с перидинин-хлорофилловыми белками (PerCP) (BioLegend) для удаления гранулоцитов, и FITC-конъюгированными антителами к CD11b для детекции OCL клеток-предшественников (Beckton-Dickinson). Клетки затем подвергали анализу возбужденной флуоресценции сортированных клеток (FACS) на FACSCalibur (BD Pharmingen, Франклин-Лейке, Нью-Йорк, США), и анализировали с применением программного обеспечения FlowJo. Результаты выражены в виде распространенности клеток в %.
Статистический анализ
Все результаты статистического анализа представлены в виде среднего значения ± СКО. Разницу между группами рассчитывали с применением непарного Т-анализа. Сравнение множества групп рассчитывали с применением однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим тестом Даннета для коррекции множественных сравнений. Двухсторонний критерий p<0,05 считали значимым.
Результаты - Лечение пробиотиками защищает мышей от индуцированной овариэктомией потери кортикальной костной ткани и повышенной резорбции кости
Для определения профилактического эффекта лечения пробиотиками при индуцированной овариэктомией потере костной ткани, у мышей в возрасте восьми недель применяли несущую среду (veh), единственный штамм лактобацилл (L) (L. para) или смесь трех штаммов (L. mix) в течение шести недель, начиная за две недели перед овариэктомией или имитацией операции (Фигура 3А). Массу матки использовали в качестве показателя эстрогенового статуса, и овариэктомия приводила к ожидаемому уменьшению массы матки, которое было схожим при всех видах лечения (Таблица 2). Кроме того, при овариэктомии повышалась масса тела, масса жировой ткани и масса тимуса во всех экспериментальных группах (Фигура 3В, Таблица 2).
У мышей, получавших несущую среду, овариэктомия снижала минеральную плотность кортикального слоя кости и площадь поперечного сечения кортикального слоя кости в средне-диафизальном участке бедренной кости (р<0,01, Фигура 4А-С). Важно, что овариэктомия не снижала минеральную плотность кортикального слоя кости или площадь поперечного сечения кортикального слоя кости у мышей, леченных L. para или L. mix (Фигура 4А-С). Минеральная плотность кортикального слоя кости была выше у мышей с овариэктомией, леченных L. para или L. mix, по сравнению с мышей с овариэктомией, леченных несущей средой (р<0,05, Фигура 4В). Чтобы определить, вызван ли профилактический эффект пробиотиков в отношении кортикального слоя кости влиянием на резорбцию кости, анализировали сывороточные уровни С-концевых телопептидов (RatLaps). При овариэктомии повышались уровни RatLaps у мышей, леченных несущей средой (+45±11%, р<0,05, по сравнению с имитацией операции), но не у получавших L. para (20±9%, недостоверно) или L. mix (23±9%, недостоверно). Лечение пробиотиками не оказывало существенного влияния на формирование костной ткани, о чем свидетельствовал сывороточный уровень остеокальцина (данные не показаны). Параметры губчатого слоя кости (BV/TV и МПК губчатого слоя) в дистальном метафизальном участке бедренной кости существенно снижались при овариэктомии во всех экспериментальных группах (р<0,05, Таблица 1). Эти наблюдения демонстрируют, что лечение пробиотиками защищает мышей от индуцированной овариэктомией потери кортикального слоя кости и повышения резорбции кости.
Пробиотики снижают экспрессию воспалительных цитокинов и отношение RANKL/ОПГ в кортикальном слое кости.
Для изучения механизма влияния лечения пробиотиками на индуцированную овариэктомией потерю кортикальной костной ткани, мы определяли транскрипты мРНК, связанные с костью, в кортикальном слое кости (Фигура 5). Уровни мРНК ФНОα, воспалительного цитокина, продуцируемого миелоидными клетками, стимулирующего остеокластогенез, и ИЛ-1β понижающего регулятора эффектов ФНОα в кости, существенно снижались при лечении пробиотиками, по сравнению с лечением несущей средой у мышей после овариэктомии (ФНОα - 46%, р<0,05; ИЛ-1β - 61%, р<0,05%, Фигуры 5А и 5В). Экспрессия ИЛ-6 не отличалась в экспериментальных группах, хотя отмечалась тенденция к снижению экспрессии в группе, леченной пробиотиками (-20%, р=0,12, Фигура 5С).
Отношение RANKL/остеопротегерин (ОПГ) является главной детерминантой остеокластогенеза, и следовательно, резорбции кости. Важно, что лечение пробиотиками снижало отношение RANKL/ОПГ (-45%, р<0,05, по сравнению с лечением несущей средой, Фигура 5D), и это было вызвано повышением экспрессии ОПГ (ОПГ, +28%, p<0,05 и RANKL, +1%, не достоверно, Фигура 5Е, F). Напротив, на уровни мРНК трех генов, ассоциированных с остеобластами, Osterix, Col1a1 и остеокальцина, не оказывало влияния лечение пробиотиками (Фигура 5G-H).
Иммунный статус костного мозга
Некоторые противовоспалительные эффекты, проявляемы пробиотическими бактериями, как полагают, опосредованы индукцией регуляторных Т-клеток (Treg). FACS анализ костного мозга показал, что распространенность Treg (CD4+ CD25+ Foxp3+) клеток снижалась после овариэктомии в группе, получавшей несущую среду, но не у мышей, получавших пробиотики (Таблица 2). Treg клетки являются зависимыми от ТФРβ для их индукции и поддержки, и экспрессия ТФРβ повышалась в костном мозге у мышей после овариэктомии, леченных пробиотиками, по сравнению с мышами после овариэктомии, леченными несущей средой (+77±19%, р<0,01).
Также исследовали, модулирует ли лечение пробиотиками распространенность клеток - предшественников остеокластов (preOCL) в костном мозге. На распространенность preOCL (CD11b+Gr1-) в костном мозге не оказывала влияния овариэктомия в какой-либо из экспериментальных групп (Таблица 2).
Минеральный метаболизм
Относительная экскреция кальция с мочой (FECa= (уровень кальция в моче × креатинина в плазме) / (уровень кальция в плазме × уровень креатинина в моче)) увеличивалась после овариэктомии у мышей, леченных несущей средой (+86%, р<0,05%, Фигура 6). Индуцированное овариэктомией повышение FECa полностью предотвращалось при лечении пробиотиками, позволяя сделать предположение о повышении отложения Ca (Фигура 6). Отмечалась тенденция к повышению сывороточных уровней кальция после овариэктомии у мышей, леченных несущей средой, но не у мышей, леченных пробиотиками (+13%, р=0,05, Таблица 3). На отношение Са/креатинина в моче не оказывала влияния овариэктомия в какой-либо из экспериментальных групп (Таблица 3).
Таблица 2. Масса эстроген-чувствительных органов и иммунные клетки в костном мозге у мышей в возрасте восьми недель. Параметры губчатого слоя кости анализировали посредством КТ высокого разрешения в дистальном метафизальном участке бедренной кости; объем губчатого слоя кости в виде процентов от объема ткани (BV/TV); минеральная плотность губчатого слоя кости (BMD). Клетки костного мозга в бедренной кости окрашивали с антителами, распознающими CD4, Foxp3, CD25, CD11b и Gr1. Значения представляют проценты Treg (CD4+Foxp3+CD25+) или preOCL (CD11b+Gr1-) в общей популяции костного мозга. Результаты показаны в виде среднего значения ± СКО, n=6-10 для каждой группы. **р<0,01, *р<0,05, Т-критерий Стьюдента для овариэктомии против имитации операции, # р<0,05, ANOVA-Даннет в группах.
Таблица 3. Минеральный метаболизм. Кальций и креатинин определяли в сыворотке и моче мышей в возрасте 14-недель. Результаты приведены в виде среднего значения ± СКО, n=5-10 в каждой группе. **р<0,01, *р<0,05, (*) р=0,05. Применяли Т-критерий Стьюдента для сравнения овариэктомии и имитации операции, # р<0,05, ANOVA-Даннет в группах.
В итоге, данные из настоящего изобретения показали, что пробиотики в питьевой воде снижают индуцированную овариэктомией потерю кортикального слоя кости, позволяя сделать предположение о терапевтическом потенциале пробиотиков в лечении постменопаузального остеопороза. Кроме того, результаты подтверждают роль кишечной микробиоты в регуляции массы костной ткани.
Лечение L. para и the L. mix защищало мышей от индуцированной овариэктомией потери кортикальной костной ткани и повышения резорбции кости. Минеральная плотность кортикального слоя кости была выше при лечении L. para и L. mix, по сравнению с лечением несущей средой после овариэктомии. Относительная экскреция кальция с мочой и уровень маркера резорбции RatLaps повышались после овариэктомии в группе, получавшей несущую среду, но не у мышей, леченных L. para или L. mix. Таким образом, пробиотики ингибируют индуцированную овариэктомией экскрецию кальция с мочой. Лечение пробиотиками снижало экспрессию двух воспалительных цитокинов, ФНОα и ИЛ-1β, и повышало экспрессию ОПГ в кортикальном слое кости у мышей после овариэктомии. Кроме того, овариэктомия снижала распространенность регуляторных Т-клеток (CD4+CD25+Foxp3+) в костном мозге мышей, леченных несущей средой, но не мышей, леченных пробиотиками. Таким образом, пробиотики ингибируют индуцированное овариэктомией снижение распространенности регуляторных Т-клеток в костном мозге. Кроме того, пробиотики повышают экспрессию ТФРβ в костном мозге, и ингибируют индуцированное овариэктомией повышение маркера резорбции RatLap. В итоге, лечение L. para или L. mix предотвращает индуцированную овариэктомией потерю кортикального слоя кости. Результаты изобретения показывают, что это лечение пробиотиками изменяет иммунный статус в костной ткани, как продемонстрировано снижением экспрессии воспалительных цитокинов и повышением экспрессии ОПГ, приводящим к ослаблению резорбции костной ткани у мышей после овариэктомии.
Эксперимент 4
В этом эксперименте будет исследовано, влияют ли вышеуказанные пробиотики на вышеуказанные параметры (т.е. массу кортикальной костной ткани, минеральную плотность кости, резорбцию кости) у мышей-самок, уже перенесших овариэктомию, и, таким образом, уже со сниженной массой костной ткани. Овариэктомия у мышей-самок является хорошо изученной моделью постменопаузальной потери костной ткани у женщин. Схема эксперимента указана ниже.
Мыши после овариэктомии→4 недели→Лечение пробиотиками в течение 6 недель→конец.
Пробиотики будут в питьевой воде, и начнут лечение ими спустя 4 недели после овариэктомии. Доза составит 109 КОЕ/мл/сутки, а овариэктомия будет осуществлена в возрасте 9-10 недель. После окончания эксперимента будет проведен анализ (КТ) кости для измерения плотности и толщины, а также анализ сыворотки и костных маркеров.
Claims (30)
1. Применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики потери костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего.
2. Применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации с, по меньшей мере, одним пробиотическим штаммом Lactobacillus plantarum, выбранным из Lactobacillus plantarum 299, DSM 6595, Lactobacillus plantarum 299v, DSM 9843, Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312, Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313 и Lactobacillus plantarum HEAL 99, DSM 15316, для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики потери костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего.
3. Применение пробиотического штамма Lactobacillus paracasei 8700:2, DSM 13434 в комбинации с Lactobacillus plantarum HEAL 9, DSM 15312 и Lactobacillus plantarum HEAL 19, DSM 15313 для лечения или профилактики остеопороза, лечения или профилактики потери костной ткани или для повышения абсорбции ионов Са2+ у млекопитающего.
4. Применение по любому из пп. 1-3, где указанное млекопитающее является человеком.
5. Применение по любому из пп. 1-3 для лечения или профилактики остеопороза путем предотвращения потери кортикальной костной ткани, потери минеральной плотности костей и резорбции костей.
6. Применение по п. 4 для лечения или профилактики остеопороза путем предотвращения потери кортикальной костной ткани, потери минеральной плотности костей и резорбции костей.
7. Применение по любому из пп. 1-3, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в композиции, содержащей дополнительно, по меньшей мере, один носитель, выбранный из:
(i) биологически активной пищевой добавки;
(ii) пищи; или
(iii) воды или водного растворителя.
8. Применение по п. 4, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в композиции, содержащей дополнительно, по меньшей мере, один носитель, выбранный из:
(i) биологически активной пищевой добавки;
(ii) пищи; или
(iii) воды или водного растворителя.
9. Применение по п. 7, где указанная композиция дополнительно содержит Са2+.
10. Применение по п. 8, где указанная композиция дополнительно содержит Са2+.
11. Применение по любому из пп. 1-3, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×106 до 1×1014 КОЕ.
12. Применение по п. 11, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×108 до 1×1012КОЕ.
13. Применение по п. 12, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×109 до 1×1011 КОЕ.
14. Применение по п. 4, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×106 до 1×1014 КОЕ.
15. Применение по п. 14, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×108 до 1×1012 КОЕ.
16. Применение по п. 15, где указанный пробиотический штамм(ы) присутствует в количестве от 1×109 до 1×1011 КОЕ.
17. Применение по любому из пп. 1-3 для лечения или профилактики остеопороза, или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
18. Применение по п. 4 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
19. Применение по п. 5 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
20. Применение по п. 6 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
21. Применение по п. 7 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
22. Применение по п. 8 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
23. Применение по п. 9 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
24. Применение по п. 10 для лечения или профилактики остеопороза или лечения или профилактики потери костной ткани, связанных с менопаузой.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE1350414-7 | 2013-04-03 | ||
| SE1350414 | 2013-04-03 | ||
| SE1351571 | 2013-12-20 | ||
| SE1351571-3 | 2013-12-20 | ||
| PCT/SE2014/050399 WO2014163568A1 (en) | 2013-04-03 | 2014-04-03 | Probiotic strains for use in treatment or prevention of osteoporosis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015147106A RU2015147106A (ru) | 2017-05-05 |
| RU2636027C2 true RU2636027C2 (ru) | 2017-11-17 |
Family
ID=51659047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015147106A RU2636027C2 (ru) | 2013-04-03 | 2014-04-03 | Пробиотические штаммы для применения в лечении или профилактике остеопороза |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10245290B2 (ru) |
| EP (1) | EP2981274B1 (ru) |
| JP (1) | JP6103675B2 (ru) |
| KR (2) | KR102000514B1 (ru) |
| CN (3) | CN116889579A (ru) |
| AU (1) | AU2014250113B2 (ru) |
| BR (1) | BR112015025256B1 (ru) |
| CA (1) | CA2908051C (ru) |
| DK (1) | DK2981274T3 (ru) |
| ES (1) | ES2804615T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20201139T1 (ru) |
| MX (1) | MX371418B (ru) |
| NZ (1) | NZ712959A (ru) |
| PL (1) | PL2981274T3 (ru) |
| PT (1) | PT2981274T (ru) |
| RS (1) | RS60527B1 (ru) |
| RU (1) | RU2636027C2 (ru) |
| WO (1) | WO2014163568A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201507275B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2785355C2 (ru) * | 2018-11-01 | 2022-12-06 | Юниверсити-Индастри Кооперэйшн Груп Оф Кён Хи Юниверсити | Новые молочнокислые бактерии и их применение |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101867768B1 (ko) | 2016-08-12 | 2018-06-15 | 한국식품연구원 | 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 갱년기 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2018030837A1 (ko) * | 2016-08-12 | 2018-02-15 | 한국식품연구원 | 락토바실러스 아시도필루스를 포함하는 갱년기 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN106858605A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-06-20 | 吉林舒润生物科技有限公司 | 一种用于预防及治疗骨吸收相关疾病的益生菌钙功能食品 |
| WO2018130667A1 (en) * | 2017-01-12 | 2018-07-19 | Probi Ab | Probiotic compositions and uses thereof |
| TWI604052B (zh) * | 2017-02-20 | 2017-11-01 | 景岳生物科技股份有限公司 | 促進骨質再生的植物乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６６２及其組合物 |
| CN113143973A (zh) * | 2017-03-07 | 2021-07-23 | 景岳生物科技股份有限公司 | 抗骨质流失的副干酪乳杆菌菌株gmnl-653的组合物 |
| TWI607758B (zh) * | 2017-03-07 | 2017-12-11 | 景岳生物科技股份有限公司 | 改善乾癬症狀的副乾酪乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６５３及其組合物 |
| TWI607759B (zh) * | 2017-07-07 | 2017-12-11 | 景岳生物科技股份有限公司 | 副乾酪乳桿菌菌株ｇｍｎｌ－６５３用於製備抗骨質流失的組合物的用途 |
| CN108624520B (zh) * | 2017-03-16 | 2022-01-25 | 景岳生物科技股份有限公司 | 促进骨质再生的植物乳杆菌菌株gmnl-662及其组合物 |
| CA3081210C (en) * | 2017-11-02 | 2023-04-11 | University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University | Lactic acid bacteria and use for preventing or treating inflammatory diseases |
| CN108030096A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-05-15 | 浙江民生健康科技有限公司 | 一种钙铁锌与益生菌组合物及其应用 |
| KR102265538B1 (ko) * | 2018-02-02 | 2021-06-16 | 주식회사 고바이오랩 | 락토바실러스 플란타럼 kbl396 균주 및 그 용도 |
| TWI664910B (zh) * | 2018-04-24 | 2019-07-11 | 葡萄王生技股份有限公司 | 乳酸桿菌屬、其醫藥組合物及可食用組合物於治療、預防或改善骨質疾病的用途 |
| MX2020013439A (es) * | 2018-06-18 | 2021-05-12 | Probi Ab | Composiciones probioticas y usos de las mismas. |
| KR102107443B1 (ko) * | 2018-08-31 | 2020-05-07 | (주)바이오리듬 | 여성 갱년기 증상 예방 또는 치료용 유산균 프로바이오틱스 제제 |
| CA3111795A1 (en) | 2018-09-05 | 2020-03-12 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases |
| US11980647B2 (en) | 2018-09-05 | 2024-05-14 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
| KR102120479B1 (ko) * | 2018-10-30 | 2020-06-09 | 주식회사 종근당바이오 | 프로바이오틱스를 유효 성분으로 포함하는 이차성 골다공증의 예방 또는 치료용 조성물 |
| GB201905386D0 (en) | 2019-04-16 | 2019-05-29 | Probi Ab | Probiotic compositions and uses thereof |
| US12274719B2 (en) * | 2019-06-25 | 2025-04-15 | Synbio Tech Inc. | Method for improving walking capacity of elderly subjects |
| FR3102774B1 (fr) * | 2019-10-31 | 2021-10-01 | Vf Bioscience | Nouvelle souche de lactobacillus plantarum utile pour l’absorption intestinale du calcium |
| CN111109607A (zh) * | 2020-01-10 | 2020-05-08 | 青岛康益生物科技有限公司 | 一种用于预防和治疗骨质疏松症的健康食品 |
| CN111718903A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-29 | 江南大学 | 一种筛选可预防和/或治疗骨质疏松的药物的方法 |
| CN111621449B (zh) * | 2020-07-02 | 2022-07-12 | 安徽善和生物科技有限公司 | 一种益生菌及其在继发性骨质疏松中的应用 |
| TWI770811B (zh) * | 2021-02-05 | 2022-07-11 | 國立臺灣大學 | 一種益生菌、其組合物及用途 |
| CN115607595B (zh) * | 2021-07-13 | 2023-12-22 | 百岳特生物技术（上海）有限公司 | 诺丽果发酵物于制备改善体态及肌肤状况的组合物的用途 |
| CA3238788A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Eric Michael Schott | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
| US20230190834A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-22 | Solarea Bio, Inc. | Immunomodulatory compositions comprising microbial entities |
| CN114634901B (zh) * | 2022-05-18 | 2022-08-30 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种促进骨骼健康的干酪乳杆菌lc16及其培养方法与应用 |
| KR102796426B1 (ko) * | 2024-10-18 | 2025-04-24 | (주)네오리젠바이오텍 | 락토바실러스 파라카세이 l-30 균주 및 이의 용도 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001015715A2 (en) * | 1999-08-31 | 2001-03-08 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Composition for maintenance of bone or dental health or treatment of bone or dental disorders |
| JP2009114112A (ja) * | 2007-11-06 | 2009-05-28 | Tsujido Kagaku Kk | 抗骨粗鬆症剤 |
| RU2402341C2 (ru) * | 2005-07-05 | 2010-10-27 | Проби Аб | Применения lactobacillus для получения композиции, увеличивающей адсорбцию железа или его ионов, и для получения фармацевтической композиции для лечения анемии и способ увеличения адсорбции железа или его ионов млекопитающим |
| KR101279852B1 (ko) * | 2011-06-29 | 2013-07-09 | 주식회사 쎌바이오텍 | 골다공증 예방 또는 치료용 조성물 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2294099C (en) | 1997-07-05 | 2008-04-01 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Absorption of minerals |
| SE0003100D0 (sv) * | 2000-09-01 | 2000-09-01 | Probi Ab | New strains |
| CN1927010A (zh) * | 2005-09-06 | 2007-03-14 | 天津科技大学 | 具有增加骨密度、抑制血管紧张素转化酶功能的无乳糖发酵大豆乳及其制备方法 |
| EP1951273B1 (en) * | 2005-10-06 | 2014-02-12 | Probi Ab | Use of lactobacillus for treatment of autoimmune diseases |
| JP2009114111A (ja) * | 2007-11-06 | 2009-05-28 | Tsujido Kagaku Kk | カルシウム吸収促進剤 |
| JP2009144111A (ja) * | 2007-12-18 | 2009-07-02 | Kansai Paint Co Ltd | 塗料組成物及び塗膜形成方法 |
| SE533778C2 (sv) | 2009-05-14 | 2011-01-11 | Probi Ab | Probiotisk fruktdryck |
-
2014
- 2014-04-03 AU AU2014250113A patent/AU2014250113B2/en active Active
- 2014-04-03 CA CA2908051A patent/CA2908051C/en active Active
- 2014-04-03 RS RS20200844A patent/RS60527B1/sr unknown
- 2014-04-03 MX MX2015014016A patent/MX371418B/es active IP Right Grant
- 2014-04-03 ES ES14779522T patent/ES2804615T3/es active Active
- 2014-04-03 CN CN202310824073.1A patent/CN116889579A/zh active Pending
- 2014-04-03 RU RU2015147106A patent/RU2636027C2/ru active
- 2014-04-03 KR KR1020157030629A patent/KR102000514B1/ko active Active
- 2014-04-03 WO PCT/SE2014/050399 patent/WO2014163568A1/en not_active Ceased
- 2014-04-03 BR BR112015025256-7A patent/BR112015025256B1/pt active IP Right Grant
- 2014-04-03 CN CN201480020011.4A patent/CN105188723A/zh active Pending
- 2014-04-03 US US14/782,138 patent/US10245290B2/en active Active
- 2014-04-03 EP EP14779522.3A patent/EP2981274B1/en active Active
- 2014-04-03 CN CN202310826128.2A patent/CN117064923A/zh not_active Withdrawn
- 2014-04-03 JP JP2016506288A patent/JP6103675B2/ja active Active
- 2014-04-03 PT PT147795223T patent/PT2981274T/pt unknown
- 2014-04-03 KR KR1020177036076A patent/KR102129934B1/ko active Active
- 2014-04-03 DK DK14779522.3T patent/DK2981274T3/da active
- 2014-04-03 HR HRP20201139TT patent/HRP20201139T1/hr unknown
- 2014-04-03 NZ NZ712959A patent/NZ712959A/en unknown
- 2014-04-03 PL PL14779522T patent/PL2981274T3/pl unknown
-
2015
- 2015-10-01 ZA ZA2015/07275A patent/ZA201507275B/en unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001015715A2 (en) * | 1999-08-31 | 2001-03-08 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Composition for maintenance of bone or dental health or treatment of bone or dental disorders |
| RU2402341C2 (ru) * | 2005-07-05 | 2010-10-27 | Проби Аб | Применения lactobacillus для получения композиции, увеличивающей адсорбцию железа или его ионов, и для получения фармацевтической композиции для лечения анемии и способ увеличения адсорбции железа или его ионов млекопитающим |
| JP2009114112A (ja) * | 2007-11-06 | 2009-05-28 | Tsujido Kagaku Kk | 抗骨粗鬆症剤 |
| KR101279852B1 (ko) * | 2011-06-29 | 2013-07-09 | 주식회사 쎌바이오텍 | 골다공증 예방 또는 치료용 조성물 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2785355C2 (ru) * | 2018-11-01 | 2022-12-06 | Юниверсити-Индастри Кооперэйшн Груп Оф Кён Хи Юниверсити | Новые молочнокислые бактерии и их применение |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2636027C2 (ru) | Пробиотические штаммы для применения в лечении или профилактике остеопороза | |
| Yang et al. | Effective treatment of hypertension by recombinant Lactobacillus plantarum expressing angiotensin converting enzyme inhibitory peptide | |
| Arora et al. | Effect of Lactobacillus acidophilus NCDC 13 supplementation on the progression of obesity in diet-induced obese mice | |
| KR101349452B1 (ko) | 새로운 락트산간균 균주 및 헬리코박터 필로리에 대한 그사용 | |
| Bove et al. | Probiotic features of Lactobacillus plantarum mutant strains | |
| JP2022525058A (ja) | 慢性炎症性疾患および／または炎症性消化器疾患および／または癌の予防および／または治療のためのクリステンセネラ科細菌 | |
| JP5923492B2 (ja) | 腸管神経系の改善に用いるためのプロバイオティクス株 | |
| US20150182566A1 (en) | Lactic acid bacterium-containing preparation | |
| Yousf et al. | Probiotics and bone health: it takes GUTS to improve bone density | |
| JP2015502410A (ja) | ポリポーシスおよび結腸直腸癌を低減する方法 | |
| Vasile et al. | Probiotics-an alternative treatment for various diseases | |
| HK1220129B (en) | Probiotic strains for use in treatment or prevention of osteoporosis | |
| Hrdý et al. | Oral Supplementation With Selected Lactobacillus Acidophilus Triggers Antimicrobial Response, Activation of Innate Lymphoid Cells Type 3 And Improves Colitis | |
| McCoy | Effects of feeding Lactobacillus reuteri X-18 on blood chemistry and immune parameters in beagle (Canis familiaris) puppies |