RU2620004C1 - Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации - Google Patents
Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2620004C1 RU2620004C1 RU2016110306A RU2016110306A RU2620004C1 RU 2620004 C1 RU2620004 C1 RU 2620004C1 RU 2016110306 A RU2016110306 A RU 2016110306A RU 2016110306 A RU2016110306 A RU 2016110306A RU 2620004 C1 RU2620004 C1 RU 2620004C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- spermium
- bulls
- survival
- hours
- cryoconservation
- Prior art date
Links
- 244000309464 bull Species 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000008010 sperm capacitation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N bucladesine Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](OC(=O)CCC)[C@@H]2N1C(N=CN=C2NC(=O)CCC)=C2N=C1 CJGYSWNGNKCJSB-YVLZZHOMSA-N 0.000 description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960005263 bucladesine Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61D—VETERINARY INSTRUMENTS, IMPLEMENTS, TOOLS, OR METHODS
- A61D19/00—Instruments or methods for reproduction or fertilisation
- A61D19/02—Instruments or methods for reproduction or fertilisation for artificial insemination
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к воспроизводству крупного рогатого скота. Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации предусматривает выдерживание сперматозоидов в течение 4 часов при температуре 38,5°С в среде, содержащей индукторы капацитации. Затем охлаждают до 18-22°С, проводят окончательное разбавление и фасовку, выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 мин до -145°С и помещают в жидкий азот. Предлагаемый способ обеспечивает резкое увеличение выживаемости сперматозоидов.
Description
Относится к сельскохозяйственному производству, в частности к воспроизводству крупного рогатого скота, и может использоваться при искусственном осеменении коров криоконсервированной спермой, а также для создания криобанков спермы быков.
В настоящее время для криоконсервации сперматозоидов чаще всего используется следующая методика. Сперму смешивают с разбавителем в отношении 1:1 при 27°С, охлаждают до 18-22°С, производят окончательное разбавление, фасовку и эквилибрацию (выдержка при 4°С в течение 3-4 часов). Потом проводят программное охлаждение в течение 7,5 минут до температуры -145°С и для длительного хранения контейнер с образцами помещают в жидкий азот, имеющий температуру -196°С [1]. Описанный способ и был выбран в качестве прототипа.
Все разбавители спермы содержат криопротекторы, предназначенные для защиты сперматозоидов от разрушения при замораживании, обеспечивая максимально возможное выживание после оттаивания. Однако практика показывает, что какие бы криопротекторы ни применялись, выживает примерно половина.
Задачей настоящего изобретения была разработка способа замораживания спермы быков, позволяющая существенно поднять выживаемость при криоконсервации.
В результате многочисленных экспериментов было обнаружено, что значительному увеличению выживаемости спермы способствует ее капацитация перед замораживанием. Суть предлагаемого способа состоит в следующем. Сперматозоиды быков помещают в среду, содержащую индукторы капацитации, такие как гепарин, теофиллин, дбцАМФ, где выдерживают в течение 4 часов при 38,5°С, затем охлаждают до 18-22°С, производят окончательное разбавление и фасовку, потом выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 минут до -145°С и помещают в жидкий азот.
Эксперименты проводили во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных. Сперму быков Голштинской породы получали на племенном предприятии «Невское», где впоследствии проводилась криоконсервация.
Сперматозоиды отмывали от семенной плазмы двухкратным центрифугированием при 300 g в течение 10 мин в среде Sp-TALP, состоящей из: 100 мМ NaCl, 3.1 мМ KCl, 25 мМ NaHCO3, 0.3 мМ NaH2PO4, 21.6 мМ Lactate (sodium salt), 0.5 мМ CaCl2, 0.4 мМ MgCl2, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата и 0,1% поливинилалкоголя.
Капацитацию спермиев проводили в течение 4 часов при 38,5°С в такой же среде, где вместо поливинилалкоголя брали BSA в концентрации 6 мг/мл. В качестве индукторов капацитации применяли гепарин и пару соединений теофиллин/дбцАМФ. Подготовка к криоконсервации проводилась по методике, описанной выше.
В опытах участвовали девять быков, имеющих разные показатели продуктивности. Сперму каждого быка разделяли на три части. Первую готовили к замораживанию по обычной методике, вторую - по заявленному способу с использованием гепарина в качестве индуктора капацитации, третью - с применением пары теофиллин/дбцАМФ. Результаты первой группы попадали в контроль, второй - вариант 1, третьей - вариант 2.
Для исследования эффекта заявленного способа после криоконсервации образцы размораживали на водяной бане при 38,5°С в течение 10-12 секунд. Затем сперматозоиды отмывали от криопротектора двухкратным центрифугированием со средой Sp-TALP.
Соотношение погибших и выживших клеток определяли по стандартной методике путем окрашивания 0,06% раствором PropidiumIodid и подсчетом под микроскопом. Сперматозоиды, показывающие яркую флуоресценцию по всей головке, оценивались как мертвые, со слабо окрашенной головкой - как живые.
Общие усредненные показатели по выжившим сперматозоидам получились такими: контроль - 54%, вариант 1 - 73%, вариант 2 - 71%. Среднестатистическая погрешность не превысила 1%.
Технический результат изобретения состоит в резком увеличении выживаемости спермы быков при криоконсервации.
Источники информации
1. В.И. Фисинин и др. Национальная технология замораживания и использования спермы племенных быков-производителей// Москва, 2008, с. 64-74.
Claims (1)
- Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации, согласно которому спермотазоиды выдерживают в течение 4 часов при 38,5°С в среде, содержащей индукторы капацитации, охлаждают до 18-22°С, проводят окончательное разбавление и фасовку, выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 минут до -145°С и помещают в жидкий азот.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2620004C1 true RU2620004C1 (ru) | 2017-05-22 |
Family
ID=58881256
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016110306A RU2620004C1 (ru) | 2016-03-21 | 2016-03-21 | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2620004C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070072166A1 (en) * | 2003-11-06 | 2007-03-29 | Anthony Michael | Semen preservation |
| EA009409B1 (ru) * | 2003-09-09 | 2007-12-28 | Крио-Инновейшен Кфт. | Способ улучшения выживаемости после размораживания криоконсервированного биологического материала посредством стимуляции гидростатическим сжатием |
| RU2323701C2 (ru) * | 2006-07-05 | 2008-05-10 | ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела (ВНИИплем) | Синтетическая среда для замораживания спермы быков |
| RU2399201C1 (ru) * | 2009-04-20 | 2010-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Астраханский государственный технический университет (ФГОУ ВПО АГТУ) | Способ повышения выживаемости половых клеток осетровых рыб при криоконсервации |
-
2016
- 2016-03-21 RU RU2016110306A patent/RU2620004C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA009409B1 (ru) * | 2003-09-09 | 2007-12-28 | Крио-Инновейшен Кфт. | Способ улучшения выживаемости после размораживания криоконсервированного биологического материала посредством стимуляции гидростатическим сжатием |
| US20070072166A1 (en) * | 2003-11-06 | 2007-03-29 | Anthony Michael | Semen preservation |
| RU2323701C2 (ru) * | 2006-07-05 | 2008-05-10 | ФГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела (ВНИИплем) | Синтетическая среда для замораживания спермы быков |
| RU2399201C1 (ru) * | 2009-04-20 | 2010-09-20 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Астраханский государственный технический университет (ФГОУ ВПО АГТУ) | Способ повышения выживаемости половых клеток осетровых рыб при криоконсервации |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Varo-Ghiuru et al. | Lutein, Trolox, ascorbic acid and combination of Trolox with ascorbic acid can improve boar semen quality during cryopreservation | |
| Galarza et al. | Cryopreservation of dog epididymal spermatozoa by conventional freezing or ultra-rapid freezing with nonpermeable cryoprotectant | |
| Parnpai et al. | Vitrification of buffalo oocytes and embryos | |
| Kuzlu et al. | The effect of different extenders on the sperm motility and viability of frozen Turkey semen | |
| Kopeika et al. | Cryopreservation of reproductive cells and embryos of laboratory, agricultural and wild animals | |
| KR101546487B1 (ko) | 저밀도 지질단백질과 항산화제를 포함하는 정자 동결보존용 조성물 및 이의 용도 | |
| Saragusty et al. | Controlled ice nucleation—Is it really needed for large-volume sperm cryopreservation? | |
| KR101439231B1 (ko) | 항동결 단백질을 이용하여 난소를 동결보존하는 방법 | |
| RU2620004C1 (ru) | Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации | |
| Varisli et al. | Short-term storage of rat sperm in the presence of various extenders | |
| Hori et al. | Influence of the time between removal and cooling of the canine epididymis on post-thaw caudal epididymal sperm quality | |
| Ullah et al. | Enhancement of extender excellence of frozen bull semen using α-Tocopherol as an antioxidant | |
| Stănescu et al. | Freezing of dog’s sperm: a review | |
| Wahjuningsih et al. | The effects of equilibration time and post-thawing temperatures in cryopreservation of gaga chicken semen | |
| Pappa et al. | Effect of fructose on thawed bull semen’s viability obtained by post-mortem collection | |
| Panhwar et al. | In-vitro impacts of Triladyl extender on semen quality parameters of Tharparkar bull | |
| US20250019648A1 (en) | A sperm extender medium | |
| Gerzilov | Influence of various cryoprotectants on the sperm mobility of Muscovy semen before and after cryopreservation. | |
| Saili et al. | Sperm quality of Bali bull following sexing and freezing using different cryoprotectants | |
| KR101413081B1 (ko) | 조류 정자의 보존용 조성물 및 이를 이용한 정자의 보존방법 | |
| RU2848316C1 (ru) | Питательная среда для консервации спермы быка и способ ее обработки для хранения и транспортировки | |
| CN103704205B (zh) | 一种含微量稀土的牛精液冷冻稀释液及其应用 | |
| HT A et al. | EFFECT OF CRYOPROTECTANTS AND CRYOPRESERVATION METHODS ON THE QUALITY OF BUFFALO OOCYTES | |
| Akyol et al. | Investigation of the effects of storage period for frozen bull semen on in vitro embryo production | |
| Sinha et al. | Effect of vitrification and slow freezing on in-vitro matured prepubertal goat oocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190322 |