RU2615179C2 - Устройства и способы культивирования клеток - Google Patents
Устройства и способы культивирования клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2615179C2 RU2615179C2 RU2015107737A RU2015107737A RU2615179C2 RU 2615179 C2 RU2615179 C2 RU 2615179C2 RU 2015107737 A RU2015107737 A RU 2015107737A RU 2015107737 A RU2015107737 A RU 2015107737A RU 2615179 C2 RU2615179 C2 RU 2615179C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dimensional
- cells
- dimensional body
- devices
- eukaryotic cells
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims description 22
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 54
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 154
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 54
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 37
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 29
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 25
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 15
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 12
- -1 borosilicate Substances 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 claims description 10
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 7
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 7
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 7
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 claims description 7
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 claims description 7
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 6
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 229920000049 Carbon (fiber) Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004917 carbon fiber Substances 0.000 claims description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 4
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 claims description 4
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 4
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 claims description 4
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims description 4
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims description 4
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 claims description 3
- 229930182556 Polyacetal Natural products 0.000 claims 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 19
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 14
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 12
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 229920004142 LEXAN™ Polymers 0.000 description 7
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 150000001447 alkali salts Chemical class 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 3
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 3
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000212977 Andira Species 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 229920006060 Grivory® Polymers 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 101000585553 Homo sapiens Glycodelin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004418 Lexan Substances 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 229920000491 Polyphenylsulfone Polymers 0.000 description 1
- 101710096655 Probable acetoacetate decarboxylase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920003295 Radel® Polymers 0.000 description 1
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 201000007197 atypical autism Diseases 0.000 description 1
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000003851 corona treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000002608 insulinlike Effects 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 238000001407 pulse-discharge detection Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003307 reticuloendothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N titanium oxide Inorganic materials [Ti]=O OGIDPMRJRNCKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
- C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/12—Apparatus for enzymology or microbiology with sterilisation, filtration or dialysis means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/24—Apparatus for enzymology or microbiology tube or bottle type
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/08—Flask, bottle or test tube
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/34—Internal compartments or partitions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/14—Scaffolds; Matrices
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/16—Particles; Beads; Granular material; Encapsulation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Air-Conditioning For Vehicles (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области биохимии, включает устройство и систему для культивирования клеток, а также способ культивирования клеток с использованием вышеуказанного устройства и системы (варианты). Устройство включает сферический трехмерный корпус с множеством двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса. Система содержит контейнер и группу сферических трехмерных корпусов, помещенных в контейнер. При этом трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер в диапазоне от 1 мм до 50 мм или отношение площади поверхности к объему между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3. Способ включает выбор группы эукариотических клеток и введение эукариотических клеток в контакт с трехмерным корпусом. Изобретения обеспечивают двухмерный рост эукариотических клеток. 4 н. и 32 з.п. ф-лы, 24 ил., 3 пр.
Description
[0001] Изобретение в целом относится к устройствам и способам культивирования клеток.
[0002] Существует несколько распространенных способов культивирования эукариотических клеток. Некоторые из данных способов были разработаны для культивирования относительно небольших количеств клеток, а другие были разработаны для выработки и сбора белков, секретируемых клетками в окружающую среду. Однако несколько систем были разработаны для увеличения масштаба коммерческого использования клеточной культуры для получения больших количеств клеток.
[0003] Наиболее обычный способ культивирования эукариотических клеток состоит в размножении в двухмерных колбах или лотках, например NUNCLON™ Δ CELL FACTORY, который содержит стопки колб для культивирования клеток. Данный способ имеет несколько недостатков, включая невозможность непрерывного мониторинга и регулирования параметров окружающей среды, например DO, pH и подачи ингредиентов/удаления продуктов выделения; низкую эффективность в показателях отношений площади поверхности к объему; потребность в инкубаторах большого объема; потребность в трудоемком манипулировании колбами для культивирования; и продолжительные периоды для посева и культивирования, которые могут быть дорогостоящими и неблагоприятными для жизнеспособности клеток.
[0004] В дополнение, клетки можно культивировать в трехмерных матрицах. Подобные матрицы могут содержать пористые, нетканые/тканые волокнистые и губчатые материалы, которые могут быть помещены на уплотненный слой внутри биореактора. Данные носители используются главным образом для выработки и сбора секретируемых белков, в то время как клетки остаются прикрепленными к матрице, а не для культивирования клеток, которые в конечном итоге удаляют и используют в качестве терапевтических средств. Примерами подобных носителей являются FIBRA-CELL®DISKS (New-Brunswick), и пористые керамические носители. См. Wang, G., W. Zhang, с соавт., «Modified CelliGen-packed bed bioreactors for hybridoma cell cultures». Cytotechnology 9(1-3): 41-9 (1992); и Timmins, N.E., A. Scherberich, с соавт., «Three-dimensional cell culture and tissue engineering in a T-CUP (tissue culture under perfusion)». Tissue Eng 13(8): 2021-8 (2007).
[0005] Однако культивирование в трехмерных матрицах может иметь некоторые недостатки. Например, может быть относительно трудно удалять клетки из матриц, а процессы удаления могут повреждать клетки. Продуцирование при использовании подобных устройств может быть трудным вследствие того, что поврежденные клетки нельзя легко прикреплять к поверхностям системы культивирования. Различия в типе и свойствах материалов, используемых в матрицах и колбах, также может вызывать изменение во взаимодействиях клеток.
[0006] В итоге, клетки можно культивировать в биореакторе при использовании непористых микроносителей в суспензии или в псевдоожиженном слое. Данный способ обеспечивает возможность клеточного роста в монослое на поверхности микроносителей. Однако использование данного способа требует отделения носителей от среды путем осаждения или фильтрации, которые не являются простыми процессами и могут не приводить к высокой степени извлечения клеток. Кроме того, микроносители имеют отклонения на поверхностях в клеточном масштабе, в результате чего получается культуральная среда, которая отличается от двухмерных систем культивирования.
[0007] Представленное раскрытие предоставляет устройства и способы двухмерного культивирования эукариотических клеток.
[0008] Согласно различным вариантам осуществления, предоставлено устройство для культивирования клеток. Устройство может содержать трехмерный корпус, содержащий множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет максимальный параметр, колеблющийся от приблизительно 1 мм до приблизительно 50 мм. В отличие от общепринятых способов, двухмерное культивирование клеток (где клетки выращивают в контейнере, который предоставляет двухмерную поверхность), устройства, описанные в данном документе, вводят в сосуд, содержащий среду для клеточного роста. Например, устройства, описанные в данном документе, могут образовать часть системы для культивирования клеток, как описано ниже. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления устройства погружают в культуральную среду внутри подходящего контейнера. При предоставлении двухмерного роста клеток в монослоях устройства, описанные в данном документе, обеспечивают условия для регулируемого роста с целью получения урожая клеток, имеющих характеристики, ассоциируемые с клетками, выращенными в двухмерной окружающей среде.
[0009] Согласно различным вариантам осуществления, предоставлена система для культивирования клеток. Система может содержать контейнер и группу трехмерных корпусов. Каждый трехмерный корпус может содержать множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части каждого трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет максимальный параметр, колеблющийся от приблизительно 1 мм до приблизительно 50 мм.
[0010] Согласно различным вариантам осуществления, предоставлен способ культивирования клеток. Способ может включать выбор группы эукариотических клеток и введение эукариотических клеток в контакт по меньшей мере с одним трехмерным корпусом, при этом по меньшей мере один трехмерный корпус имеет множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части по меньшей мере одного трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет максимальный параметр, колеблющийся от приблизительно 1 мм до приблизительно 50 мм.
[0011] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлено устройство для культивирования клеток. Устройство может содержать трехмерный корпус, содержащий множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет отношение площади поверхности к объему между приблизительно 3 см2/см3 и приблизительно 1000 см2/см3.
[0012] Согласно различным вариантам осуществления, предоставлено устройство для культивирования клеток. Устройство может содержать трехмерный корпус, содержащий лист материала, образованного по существу со спиральной конфигурацией. Лист материала может содержать по меньшей мере две двухмерные поверхности, при этом двухмерные поверхности могут быть выполнены с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет отношение площади поверхности к объему между приблизительно 3 см2/см3 и приблизительно 1000 см2/см3.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0013] Фиг. 1А представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0014] Фиг. 1B представляет собой изображение в поперечном разрезе устройства Фиг. 1А.
[0015] Фиг. 2A представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток® согласно некоторым вариантам осуществления.
[0016] Фиг. 2B представляет собой вид сбоку в перспективе устройства Фиг. 2A.
[0017] Фиг. 2C представляет собой вид сверху устройства Фиг. 2A.
[0018] Фиг. 2D представляет собой изображение в поперечном разрезе устройства Фиг. 2A.
[0019] Фиг. 3A представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0020] Фиг. 3B представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0021] Фиг. 4A представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0022] Фиг. 4B представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0023] Фиг. 5 представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0024] Фиг. 6 представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0025] Фиг. 7 представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0026] Фиг. 8A представляет собой перспективное изображение устройства для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0027] Фиг. 8B представляет собой изображение в поперечном разрезе устройства Фиг. 8A.
[0028] Фиг. 9 представляет собой перспективное изображение системы для двухмерного культивирования клеток согласно некоторым вариантам осуществления.
[0029] Фиг. 10 представляет собой гистограмму, показывающую результаты культивирования клеток в колбах или при использовании двухмерных устройств для культивирования представленного раскрытия, как описано в примере 1.
[0030] Фиг. 11 представляет собой гистограмму, показывающую число удвоения популяции клеток, культивируемых в колбах или при использовании двухмерных устройств для культивирования представленного раскрытия, как описано в примере 1.
[0031] Фиг. 12 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с различными скоростями перемешивания среды (RPM), как описано в эксперименте 1.
[0032] Фиг. 13 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования, как описано в эксперименте 1.
[0033] Фиг. 14 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с различными покрытиями, как описано в эксперименте 1.
[0034] Фиг. 15 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с предварительным инкубированием культуральной среды, как описано в эксперименте 1.
[0035] Фиг. 16 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с различными покрытиями с плазменной обработкой поверхности устройств или без нее, как описано в эксперименте 1.
[0036] Фиг. 17 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую сравнение PDD (удвоение популяции в сутки) между колбами 175 см2 и 2D-носителями, как описано в эксперименте 3.
ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
[0037] Далее будет сделана подробная ссылка на некоторые иллюстративные варианты осуществления согласно представленному раскрытию, некоторые примеры которых проиллюстрированы на сопровождающих чертежах. Везде, где возможно, одинаковые ссылочные номера будут использоваться на всех чертежах для обозначения одинаковых или аналогичных деталей.
[0038] В данной заявке применение единственной формы включает множественную, если конкретно не утверждается иное. Также в данной заявке применение «или» означает «и/или», если не утверждается иное. Кроме того, применение термина «включая», а также других форм, например, «включает» и «включенный», не являются ограничивающим. Любой диапазон, описанный в данном документе, необходимо понимать как включение конечных точек и всех значений между конечными точками.
[0039] Устройства согласно изобретению обеспечивают возможность двухмерного роста эукариотических клеток. «Двухмерный рост» следует понимать как включение роста эукариотических клеток вдоль поверхности, при этом большая часть клеточного роста происходит в монослое. «Большая часть клеточного роста в монослое» подразумевает включение клеточного роста по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% клеток в монослое. «Двухмерный рост» может включать рост вдоль плоскости (т.е. плоских поверхностей) и/или рост вдоль поверхностей, имеющих некоторую степень искривления, как описано более подробно ниже. Таким образом, «двухмерную поверхность» следует понимать как включение поверхности, которая представляет собой плоскость и/или поверхность, которая имеет некоторое искривление. В дополнение, как используется в данном описании, фраза «трехмерный рост» относится к росту в условиях, которые сопоставимы с клеточным ростом на скаффолде, который обеспечивает возможность контакта клетки с клеткой в трех измерениях.
[0040] Для обеспечения двухмерного роста, устройства представленного раскрытия предусматривают высокие отношения площади поверхности к объему, обеспечивая за счет этого возможность роста больших количеств клеток в низких объемах, по сравнению с двухмерным ростом в колбах. Кроме того, устройства представленного раскрытия могут быть выполнены с возможностью облегчения извлечения клеток после вырастания и/или переноса клеток в другие среды для хранения, коммерческого использования (например, в качестве терапевтических средств), или для роста дополнительных клеток. Кроме того, устройства, описанные в данном документе, могут быть выполнены с возможностью обеспечения высококачественного клеточного роста, который по меньшей мере настолько же хорош, как рост, достигаемый при использовании стандартных систем культивирования клеток в показателях жизнеспособности, способности прикрепления клеток, и/или поддержания или регулирования других клеточных свойств.
[0041] Устройства представленного раскрытия могут быть использованы для культивирования множества различных типов эукариотических клеток. Устройства подходят для выращивания стволовых клеток, зависимых от культуральной подложки клеток, мезенхимальных клеток и прилипающих клеток. Как используется в данном описании, фраза «прилипающие клетки» относится к клеткам, которые зависят от культуральной подложки, т.е. требуют прикрепления к поверхности для того, чтобы расти in vitro. Подходящие прилипающие клетки могут включать мезенхимальные стромальные клетки, которые представляют собой гетерогенную популяцию клеток, полученных, например, из костного мозга, жировой ткани, плаценты и крови, и которые могут быть способны или не способны к дифференцированию на различные типы клеток (например, ретикулоэндотелиальные клетки, фибробласты, адипоциты, остеогенные клетки-предшественники) в зависимости от влияний различных биоактивных факторов.
[0042] Эффективный рост различных типов прилипающих клеток может сильно зависеть от окружающей среды или взаимодействий, испытываемых клетками в процессе роста. Например, прилипающие клетки самопроизвольно могут входить в контакт с другими прилипающими клетками. Если один монослой клеток самопроизвольно входит в контакт с другим монослоем клеток, два монослоя могут слипаться друг с другом. Подобное взаимодействие между монослоями различных устройств может приводить к прикреплению устройств друг к другу. Взаимодействие может быть опосредовано внеклеточной матрицей, секретируемой клетками. Вследствие того, что устройства, описанные в данном документе, могут ограничивать подобные нежелательные взаимодействия клеток с клетками, может быть в общем ограничено слипание или агрегирование. В дополнение, представленные устройства могут обеспечивать эффективную доставку питательных веществ, среды и газов через культуру для предоставления стабильной окружающей среды для роста монослоев прилипающих клеток и эффективного сбора клеток. Устройства также могут способствовать более согласованному росту клеток за счет ограничения субпопуляций клеток, которые растут в трехмерных условиях по сравнению с двухмерными условиями.
[0043] В одном аспекте устройства, описанные в данном документе, могут быть выполнены с возможностью ограничения контакта между поверхностями, выполненными для клеточного роста. В связи с этим, устройства могут быть в общем круглыми, закругленными или дугообразными для минимизации в общем контакта между поверхностями соседних устройств. Отдельные устройства могут быть выполнены с возможностью контакта с соседними устройствами на протяжении относительно небольшой площади. Подобный ограниченный контакт между устройствами может обеспечивать ростовые поверхности, которые подвергают растущие клетки относительно небольшим взаимодействиям с другими клетками, растущими на других устройствах. Множество устройств в единственном инкубационном сосуде таким образом может обеспечивать окружающую среду для более эффективного, регулируемого и стабильного роста для прилипающих клеток.
[0044] В некоторых вариантах осуществления устройства, описанных в данном документе, могут иметь в общем круглое поперечное сечение. Например, наружная форма устройств может быть сферической, цилиндрической и с другими в общем закругленными объемами. Подобные устройства могут обеспечивать площади контакта менее чем приблизительно 10% относительно суммарной наружной площади поверхности устройства. В других вариантах осуществления площадь контакта может составлять менее чем приблизительно 5%, 2% или 1% суммарной площади поверхности. Также могут быть использованы другие формы, если может быть существенно минимизирован контакт между соседними устройствами.
[0045] Способы клеточного роста, описанные в данном документе, также могут быть выполнены с возможностью применения с устройствами, описанными в данном документе. С данными устройствами могут быть использованы сосуды, выполненные с возможностью в общем сопротивления клеточному прикреплению. Например, могут быть использованы сосуды, образованные из стекла или пластмассы или с покрытием из них, которые, как известно, ограничивают клеточную адгезию. Подобные сосуды могут стимулировать подходящий рост монослоев прилипающих клеток на устройствах, описанных в данном документе. Подобные сосуды также могут ограничивать возможные нежелательные клеточные взаимодействия, которые могут приводить к непреднамеренным слипаниям клеток с клетками, как описано выше.
[0046] Согласно различным вариантам осуществления предоставлены устройства для культивирования клеток. Устройства могут содержать трехмерный корпус, содержащий множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей. В некоторых вариантах осуществления множество двухмерных поверхностей могут поддерживать или не поддерживать однослойный рост эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей. «Множество» двухмерных поверхностей означает «более чем одну» двухмерную поверхность и включает по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восемь, по меньшей мере девять или по меньшей мере десять двухмерных поверхностей. Также предусматривается более чем десять двухмерных поверхностей, например, 50, 100, 500 или более поверхностей. Следует понимать, что «большая часть площади поверхности» включает по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 99% площади поверхности. В различных вариантах осуществления, устройства имеют максимальный параметр, который меньше чем приблизительно 50 мм и/или отношение площади поверхности к объему между приблизительно 3 см2/см3 и приблизительно 1000 см2/см3. Следует понимать, что «максимальный параметр» включает наибольшую наружную высоту, ширину, длину, пространственную диагональ, расстояние между вершинами, поперечный диаметр, диаметр, пролет в поперечном сечении или любой другой наибольший наружный пространственный размер трехмерного корпуса.
[0047] Устройства культивирования клеток согласно изобретению могут иметь ряд различных форм и конфигураций, могут быть образованы из любых из ряда подходящих материалов и могут содержать множество обработок и/или покрытий поверхностей для облегчения клеточного роста. Фиг. 1A-8B иллюстрируют устройства культивирования клеток согласно различным вариантам осуществления, которые описаны более подробно ниже. В дополнение, Фиг. 9 иллюстрирует приведенную для примера систему культивирования клеток, содержащую контейнер и группу устройств культивирования клеток. Необходимо принимать во внимание, что устройства и системы, показанные на фигурах и описанные ниже, являются иллюстративными, и различные признаки из различных вариантов осуществления, описанных в данном документе, могут быть объединены или взаимозаменены.
[0048] Фиг. 1А представляет собой перспективное изображение устройства 10 для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления; а Фиг. 1B представляет собой изображение в поперечном разрезе устройства 10 Фиг. 1A. Как показано, устройство 10 содержит множество двухмерных поверхностей 12, продолжающихся от внешней части устройства 10 в направлении внутренней части устройства 10. Как показано, поверхности образованы группой ребер 14, которые разделены промежутками с образованием отверстий 16, размеры которых могут обеспечивать возможность прохождения клеток и культуральной среды в процессе использования. Устройство 10 также может содержать одну или более боковых плоскостей, продолжающихся от центральной оси устройства 10 и проходящих в общем перпендикулярно ребрам 14.
[0049] В некоторых вариантах осуществления наружный диаметр устройства 10 может колебаться от приблизительно 1 мм до приблизительно 50 мм. В других вариантах осуществления, наружный диаметр может колебаться от приблизительно 2 мм до приблизительно 20 мм и от приблизительно 4 мм до приблизительно 10 мм. В зависимости от общего размера устройства 10, ребра 14 и отверстия 16 могут иметь различные размеры. Например, толщина ребер 14 может колебаться от приблизительно 0,1 мм до приблизительно 2 мм и от приблизительно 0,2 мм до приблизительно 1 мм. В частности, ребра 14 могут быть приблизительно 0,5 мм, приблизительно 0,6 мм или приблизительно 0,7 мм в толщину. Отверстия 16 могут колебаться по ширине от приблизительно 0,01 мм до приблизительно 1 мм и от приблизительно 0,1 мм до приблизительно 0,5 мм. В частности, отверстия 16 могут быть приблизительно 0,3 мм, приблизительно 0,4 мм, или приблизительно 0,5 мм по ширине.
[0050] В варианте осуществления, показанном на Фиг. 1A-1B, ребра 14 по существу плоские и продолжаются параллельно друг другу от центра устройства к периферии устройства. Однако, ребра могут включать множество конфигураций. Например, Фиг. 2A-2D иллюстрируют устройство 20, имеющее множество двухмерных поверхностей 22, образованных ребрами 24 в различных конфигурациях. Фиг. 2A представляет собой перспективное изображение устройства 20 для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления; Фиг. 2B представляет собой вид сбоку в перспективе устройства Фиг. 2A; Фиг. 2C представляет собой вид сверху устройства Фиг. 2A; а Фиг. 2D представляет собой изображение устройства Фиг. 2A в поперечном разрезе. Устройство 20 Фиг. 2A-2D аналогично устройству 10 Фиг. 1А-1B, но форма ребер 24 устройства 20 подобрана таким образом, чтобы образовать отверстия 26, которые расположены по окружности устройства 20. Отверстия 26 могут быть в общем клинообразными. Ребра 24 могут продолжаться в общем радиально от центральной оси устройства 20 к периферийной поверхности устройства 20. Устройство 20 также может содержать одну или более боковых плоскостей, продолжающихся от центральной оси устройства 20 и продолжающихся в общем перпендикулярно ребрам 24. Кроме того, устройство 20 содержит отверстие 36, проходящее через центр устройства и образующее дополнительные поверхности 32, которые могут поддерживать однослойный рост эукариотических клеток.
[0051] Как описано выше для устройства 10, параметры устройства 20 могут иметь различные размеры. Например, наружный диаметр устройства 20 может колебаться от приблизительно 1 мм до приблизительно 50 мм. В других вариантах осуществления, наружный диаметр может колебаться от приблизительно 2 мм до приблизительно 20 мм и от приблизительно 4 мм до приблизительно 10 мм. В зависимости от общего размера устройства 20, ребра 24 и отверстия 26 могут иметь различные размеры. Например, толщина ребер 24 может колебаться от приблизительно 0,1 мм до приблизительно 2 мм и от приблизительно 0,2 мм до приблизительно 1 мм. В частности, ребра 24 могут быть приблизительно 0,5 мм, приблизительно 0,6 мм или приблизительно 0,7 мм в толщину. Как показано на Фиг. 2A-2C, отверстия 26 могут колебаться по ширине от минимальной ширины в общем расположенной вокруг центральной оси, проходящей через устройство 20 или отверстие 36, до максимальной ширины в общем расположенной вокруг периферии устройства 20. минимальная ширина отверстий 26 может колебаться от приблизительно 0,01 мм до приблизительно 1 мм и от приблизительно 0,1 мм до приблизительно 0,5 мм. Конкретно, минимальная ширина отверстий 26 может быть приблизительно 0,3 мм, приблизительно 0,4 мм или приблизительно 0,5 мм. В дополнение, диаметр отверстия 36 может колебаться от приблизительно 0,1 мм до приблизительно 5 мм и от приблизительно 0,5 мм до приблизительно 2 мм. Более точно, отверстие 36 может иметь диаметр, составляющий приблизительно 0,8 мм, приблизительно 1 мм или приблизительно 1,2 мм.
[0052] Как показано, устройства 10, 20 по существу сферические и имеют диаметр 18, который образует наибольшие размер устройств. Устройства, описанные в данном документе, могут иметь множество различных форм и конфигураций при условии, что устройства обеспечивают двухмерные поверхности для прикрепления и однослойного роста по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей 12, 22.
[0053] Устройства культивирования клеток представленного раскрытия могут включать множество форм и конфигураций. Например, хотя устройства, описанные выше относительно Фиг. 1A-2D, по существу сферические, могут быть использованы другие подходящие формы. Например, Фиг. 3A-3B представляют собой перспективные изображения устройств 10', 20' для двухмерного культивирования клеток. Устройства 10', 20' аналогичны устройствам 10, 20 Фиг. 1A-2D за исключением того, что устройства 10', 20' имеют по существу яйцевидные формы, но аналогичным образом обеспечивают множество двухмерных поверхностей 12,' 22', образованных ребрами 14', 24' или отверстиями 36'. Кроме того, могут быть использованы другие подходящие формы, включая другие многогранные и/или неправильные многогранные формы.
[0054] Как обсуждалось выше, устройства представленного раскрытия могут включать множество двухмерных поверхностей, выполненных с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей. В некоторых вариантах осуществления, множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста по существу по всей их площади поверхности. Например, Фиг. 4A-4B представляют собой перспективные изображения устройств для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления, которые выполнены с возможностью поддержки однослойного роста по существу по всей их площади поверхности. Устройства 10'', 20'' Фиг. 4A-4B аналогичны другим устройствам, описанным выше и содержат поверхности 12', 22', образованные ребрами 14', 24'. Однако, устройства 10'', 20'' имеют отверстия 16', 26' с поверхностями 12', 22', которые образуют плавные изгибы вдоль всех их площадей, устраняя или уменьшая за счет этого области острого искривления, где может происходить трехмерный рост. Например, как показано, устройства 10'', 20'' имеют плавно изогнутые нижние поверхности 40, 42, в отличие от более острых изгибов, как проиллюстрировано относительно устройств Фиг. 1А-2D.
[0055] В различных вариантах осуществления специфическое искривление и конфигурация множества двухмерных поверхностей могут быть модифицированы, например, для предоставления более больших площадей поверхности и/или для регулирования клеточного роста. Например, Фиг. 5 представляет собой перспективное изображение устройства 50 для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления. Устройство 50 содержит ребра 54, которые продолжаются от периферии устройства 50 в направлении внутренней части устройства с образованием отверстий 56 и множества двухмерных поверхностей 52 для однослойного роста. Как показано, ребра 54 и поверхности 52 являются изогнутыми. Изогнутая форма поверхностей 52 может дополнительно увеличивать площадь поверхности множества двухмерных поверхностей 52, по сравнению с плоскими поверхностями, обеспечивая за счет этого дополнительную площадь для прикрепления клеток и однослойного роста.
[0056] Фиг. 6 представляет собой перспективное изображение устройства 60 для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления. Как показано, устройство 60 содержит ребра 64, продолжающиеся от внутренней части устройства 60 в направлении периферии устройства 60. Ребра 64 могут включать спиральную конфигурацию, которая продолжается по меньшей мере частично вдоль диаметра устройства 60 с образованием по меньшей мере двух двухмерных поверхностям 62, 62' для двухмерного роста эукариотических клеток. Как показано, ребра продолжаются от участка 68 сердечника в направлении периферии устройства 60.
[0057] В каждом из вариантов осуществления, описанных выше, множество двухмерных поверхностей продолжаются от внутренней части сердечника. Однако, согласно другим вариантам осуществления, поверхности могут продолжаться внутрь в пределах направления в сторону центрального сердечника. Например, Фиг. 7 иллюстрирует еще одно устройство 70, согласно некоторым вариантам осуществления. Устройство 70 содержит по меньшей мере один лист материала в виде по существу спиралеобразной стенки 74 с отверстием 76, и имеющий по меньшей мере первую поверхность 72 и вторую поверхность 72', выполненные с возможностью обеспечения двухмерного роста эукариотических клеток. Однако необходимо принимать во внимание, что могут быть использованы другие формы, и нет необходимости, чтобы устройство 70 представляло собой непрерывную спираль, но может содержать другие конфигурации.
[0058] Также предполагается, что устройство 90 может содержать один или более отсоединяемых составных элементов, как показано на Фиг. 8A, 8B. Например, устройство 90 может содержать один или более отсоединяемых дисков 92. Каждый диск 92 может содержать один или более коннекторов 94, выполненных с возможностью соединения с другим структурным элементом устройства 90. В связи с этим, множество дисков 92 могут быть соединены вместе с образованием узла 96. Узел 96 может содержать любое количество дисков 92 или коннекторов различных форм или размеров, включая варианты осуществления, показанные выше на Фиг. 1-7.
[0059] Диск 92 может иметь любую форму и может содержать соединение с внутренней резьбой (не показано), выполненное с возможностью соединения с коннектором 94. Соединение между диском 92 и коннектором 94 может быть постоянным или отсоединяемым. В других вариантах осуществления, множество дисков 92 могут быть соединены с единственным коннектором 94, выполненным с возможностью приема множества дисков 92 и сохранения подходящего расстояния между множеством дисков 92.
[0060] Различные устройства культивирования клеток, описанные выше, могут быть образованы с множеством форм. Тогда как многие варианты осуществления изображают устройства закругленными, устройства также могут быть кубическими, прямоугольными или являться комбинацией линейных и дугообразных форм. Кроме того, с данными устройствами могут быть использованы дополнительные стабилизирующие, соединительные или другие структурные детали. Например, нитевидный элемент может соединять множество устройств вместе, адгезионный элемент может соединять устройство со стенкой инкубационного сосуда или плавающий элемент может обеспечивать устройству возможность оставаться на плаву в текучей среде для ограничения непреднамеренного контакта клеток с другими поверхностями. Подобные элементы могут повышать манипулирование при использовании ручной или автоматизированной технологий. Например, магнитный материал может быть включен в устройства для помощи на стадиях сбора и обработки. Устройства также могут быть выполнены с возможностью непрерывного воздействия текучей среды для инкубирования или для прерывистого воздействия текучей среды.
[0061] Устройства культивирования клеток, описанные в данном документе, могут быть изготовлены при использовании множества различных подходящих материалов. В целом, устройства могут быть изготовлены за счет использования материалов, которые имеют широкий диапазон признаков, выбранных для предоставления возможности культивирования клеток для фармацевтических целей. В различных вариантах осуществления материалы могут относиться к утвержденному 6 классу USP (VI классу Фармакопейной Конвенции США), могут противостоять высоким температурам и способны выдерживать автоклавную обработку, поддаются плазменной обработке или обработке коронным разрядом для улучшения прикрепления клеток, могут противостоять широкому диапазону pH, не выделяют вредные вещества в процессе клеточного роста и/или могут подвергаться ферментативным и физическим нагрузкам при извлечении клеток без деградирования или оставления нежелательных остатков в продукте. В дополнение, материал, использованный для получения любых устройств, описанных в данном документе, может быть сплошным или иметь полую или пористую внутреннюю часть. Кроме того, устройства, описанные в данном документе, могут быть изготовлены из одного куска материала или из двух или более деталей, которые прикрепляют друг другу (например, посредством химического или физического связывания). Материал может быть жестким или гибким по требованию варианта применения.
[0062] материал, используемый для получения любых устройств культивирования клеток, описанных в данном документе, может включать металлы (например, титан), оксиды металлов (например, титановые оксидные пленки), стекло, борсиликат, углеродные волокна, керамику, биодеградируемые материалы (например, коллаген, желатин, PEG, гидрогели) и/или полимеры. Подходящие полимеры могут включать полиамиды, например, GRILAMID® TR 55 (EMS-grivory); поликарбонаты, например, LEXAN® (Sabic) и Makrololon® (Bayer); полисульфонаты, например, RADEL® PPSU (Solvay) и UDEL® PSU (Solvay); полиэфиры, например TRITAN® (Polion) и PBT®HX312C; полиацетали, например, CELON® (Ticana) и поливинилхлорид.
[0063] В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере часть устройств может быть образована при использовании полистиролого полимера. Полистирол может быть дополнительно модифицирован при использовании коронного разряда, газовой плазмы (роллерных флаконов и культуральных пробирок) или других аналогичных способов. Данные способы могут генерировать высокоэнергетические ионы кислорода, которые прививают на цепи полистирола на поверхности, так что когда среду добавляют, поверхность становится гидрофильной и отрицательно заряженной (Hudis, 1974; Amstein и Hartman, 1975; Ramsey с соавт., 1984). Кроме того, любые устройства могут быть по меньшей мере частично изготовлены из комбинаций материалов. Материалы устройств могут иметь дополнительное покрытие или быть обработаны для поддержки прикрепления клеток. Подобное покрытие и/или предварительная обработка могут включать использование коллагена I, коллагена IV, желатина, поли-d-лизина, фибронектина, ламинина, aмина и карбоксила.
[0064] В некоторых вариантах осуществления материалы, использованные для изготовления устройств, выбирают таким образом, чтобы обеспечить возможность непосредственного прикрепления эукариотических клеток. Устройства, описанные в данном документе, могут быть изготовлены при использовании множества подходящих способов изготовления. Например, в некоторых вариантах осуществления устройства могут быть изготовлены посредством инжекционного формования при использовании, например, одного или более полимерных материалов.
[0065] В дополнение, свойства материалов и искривление на протяжении большей части или всей площади поверхности двухмерных поверхностей могут быть выбраны для регулирования некоторых биологических свойств. Например, материал может быть выбран, чтобы иметь некоторые упругие модули и искривление для получения желательных биологических свойств. Например, подходящие упругие модули могут быть между приблизительно 0,1-100 кПа.
[0066] В различных вариантах осуществления устройства имеют размер, выбранный для облегчения сбора (например, посредством фильтрации, вычерпывания, удаления среды), и минимизации объема пустот между устройствами. Например, трехмерные корпуса могут иметь максимальный параметр между приблизительно 1 мм и 50 мм, между приблизительно 1 мм и 20 мм или между приблизительно 2 мм и 10 мм. В некоторых вариантах осуществления, устройства сферические и имеют максимальный диаметр, который составляет между приблизительно l мм и 50 мм, между приблизительно 1 мм и 20 мм или между приблизительно 2 мм и 10 мм.
[0067] В некоторых вариантах осуществления устройства выполнены с возможностью предотвращения повреждения или извлечения клеток из двухмерных поверхностей в процессе культивирования. Например, как показано на Фиг. 1A-8B, устройства могут содержать отверстия 16, 26, 16', 26' и 76, а двухмерные поверхности расположены внутри отверстий. В различных вариантах осуществления множество двухмерных поверхностей отделены друг от друга расстоянием, выбранным для предотвращения контакта объектов, примыкающих к трехмерному корпусу, с клетками, растущими на множестве двухмерных поверхностей. Конкретно, отверстия 16, 26, 16', 26' или 76 могут иметь такие размеры, что двухмерные поверхности не будут входить в контакт с соседними устройствами внутри системы культивирования и/или не будут входить в контакт со стенкой контейнера или культурального сосуда. В связи с этим, однослойный рост клеток вдоль двухмерных поверхностей не будет нарушаться за счет механического контакта. Кроме того, двухмерные поверхности могут быть разнесены достаточно далеко друг от друга для предотвращения контакта между клетками на соседних поверхностях.
[0068] В различных вариантах осуществления устройства культивирования клеток согласно изобретению могут быть выполнены с возможностью предоставления желательного отношения площади поверхности к объему. Например, отношение площади поверхности к объему любых устройств культивирования клеток, описанных в данном документе, может быть между приблизительно 3 см2/см3 и 30 см2/см3, между приблизительно 5 см2/см3 и 20 см2/см3, или между приблизительно 10 см2/см3 и 15 см2/см3. В других вариантах осуществления, отношение площади поверхности к объему может колебаться вплоть до приблизительно 50, 100, 200, 500 или 1000 см2/см3.
[0069] В различных вариантах осуществления устройства, раскрытые в данном описании, дополнительно могут быть покрыты одним или более покрытиями. Подходящие покрытия могут быть выбраны для регулирования прикрепления клеток или изменений в биологии клеток. Подходящие покрытия могут включать, например, пептиды, белки, углеводы, нуклеиновую кислоту, липиды, полисахариды, глюкозоаминогликаны, протеогликаны, гормоны, молекулы внеклеточного матрикса, молекулы клеточной адгезии, природные полимеры, ферменты, антитела, антигены, полинуклеотиды, факторы роста, синтетические полимеры, полилизин, лекарственные средства и/или другие молекулы или их комбинации или фрагменты.
[0070] Кроме того, в различных вариантах осуществления поверхности устройств, описанных в данном документе, могут быть обработаны или изменены иным образом для регулирования прикрепления клеток и или других биологических свойств. Варианты обработки поверхностей включают химическую обработку, плазменную обработку и/или обработку коронным разрядом. Кроме того, в различных вариантах осуществления, материалы могут обрабатываться для введения функциональных групп в или на материал, включая группы, содержащие углеводороды, кислород, азот. В дополнение, в различных вариантах осуществления, материал может быть получен или изменен, чтобы иметь текстуру для облегчения прикрепления клеток или регулирования других свойств клеток. Например, в некоторых вариантах осуществления, материалы, используемые для изготовления устройств культивирования клеток, имеют шероховатость в нанометровом или микрометровом масштабе, что облегчает прикрепление клеток и/или регулирует другие свойства клеток.
[0071] Согласно различным вариантам осуществления, предоставлена система для культивирования клеток. Система может содержать контейнер и группу трехмерных корпусов. Трехмерные корпусы могут содержать множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии каждого трехмерного корпуса в направлении внутренней части каждого трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей.
[0072] Фиг. 9 представляет собой перспективное изображение системы 100 для двухмерного культивирования клеток, согласно некоторым вариантам осуществления. Как показано, система 100 содержит контейнер 110 и одно или более устройств 110 культивирования клеток, которые могут быть помещены внутрь контейнера 100 наряду со средой 120 и/или другими материалами для обеспечения двухмерного роста клеток на поверхности контейнера 110.
[0073] Как показано, контейнер 100 содержит обычную колбу для культивирования клеток, имеющую отверстие 130 для введения клеток, устройств 110 культивирования клеток, среды и/или других материалов. Однако, необходимо учитывать, что могут быть выбраны другие контейнеры. Например, контейнер может быть значительно больше, например, выбран с возможностью содержания дюжин, сотен, тысяч, сотен тысяч или миллионов устройств культивирования клеток. Специальные размер и конфигурация могут быть выбраны на основании количества клеток, которые должны быть выращены, и/или других критериев, например, потребности в интегрированных системах для регулирования условий культивирования, например, температуры, pH, уровней окружающего газа и т.д.
[0074] В различных вариантах осуществления, система может содержать биореактор-контейнер, например, реактор с уплотненным слоем, реактор на флюидизированном топливе или суспензионный реактор. Например, система может содержать одно или более устройств для предоставления возможности двухмерного роста, которые затем могут быть помещены в контейнер биореактора. Примеры подобных биореакторов включают, но без ограничения, поршневой проточный биореактор, биореактор с непрерывно перемешиваемым резервуаром, биореактор с неподвижным слоем (биореактор с уплотненным слоем) и биореактор с псевдоожиженным слоем.
[0075] Примером подходящего биореактора является биореактор Celligen (New Brunswick Scientific), который допускает распространение прилипающих клеток в регулируемых условиях (например, уровни pH, температуры и кислороды) и с постоянной перфузией среды для клеточного роста. Кроме того, можно проводить мониторинг клеточных культур на уровни концентрации глюкозы, лактата, глютамина, глютамата и аммония. Скорость потребления глюкозы и скорость образования лактата прилипающих клеток обеспечивают возможность измерения скорости клеточного роста и определения времени сбора.
[0076] Другие трехмерные биореакторы, которые могут быть использованы, включают, но без ограничения, биореактор с непрерывно перемешиваемым резервуаром, где культуральная среда непрерывно подается в биореактор, а использованная среда непрерывно отсасывается для поддержания постоянного во времени стационарного состояния внутри биореактора. Биореактор с перемешиваемым резервуаром может использоваться с псевдоожиженным слоем (взвешенными носителями) или с корзиной с волокнистым слоем (которая выпускается, например, компанией New Brunswick Scientific Co., Edison, N.J), биореактор со стационарным слоем, биореактор с воздушным подъемом, где воздух обычно подается в нижнюю часть центральной вытяжной трубки, проходя вверх с образованием пузырьков и выпуская выходной газ на верхушке колонны, биореактор с полиактивными пенами [как описано в публикации Wendt, D. С соавт., Biotechnol Bioeng 84: 205-214, (2003)], пористыми каркасами в биореакторе с перфузией в радиальном потоке [как описано в публикации Itagawa с соавт., Biotechnology and Bioengineering 93(5): 947-954 (2006)], биореактор радиального потока с каркасом или носителями, половолоконный биореактор и микроносители. Другие биореакторы, которые могут использоваться с описанными сейчас устройствами, описаны в патентах США №№ 6277151, 6197575, 6139578, 6132463, 5902741 и 5629186.
[0077] Представленное раскрытие также предоставляет способы культивирования клеток при использовании любых устройств или систем, обсуждавшихся в данном документе. Согласно различным вариантам осуществления, способ может включать выбор группы эукариотических клеток и введение эукариотических клеток в контакт по меньшей мере с одним трехмерным корпусом, при этом по меньшей мере один трехмерный корпус имеет множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части по меньшей мере одного трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей. В различных вариантах осуществления, устройства имеют максимальный параметр, который меньше чем приблизительно 50 мм и/или отношение площади поверхности к объему между приблизительно 3 см2/см3 и приблизительно 1000 см2/см3.
[0078] В дополнение, необходимо принимать во внимание, что различные стадии обработки могут выполняться для регулирования или усиления прикрепления и роста клеток. Например, клетки могут вводиться в контакт с трехмерными корпусами за счет помещения клеток и корпусов наряду с культуральной средой внутрь контейнера или культурального сосуда. Кроме того, клетки и/или среда могут быть перемешаны или подготовлены иным образом для перемещения, например, за счет вращения контейнера, взбалтывания культуральной среды (например, за счет встряхивания), и подачи потока текучей среды в контейнер и из него.
[0079] Неограничивающие примеры основных сред, используемых при культивировании при использовании с устройствами и системами, описанными в данном документе, включают минимальную эссенциальную среду Игла, ADC-1, LPM (бычья сыворотка, лишенная альбумина), F10 (HAM), F12 (HAM), DCCM1, DCCM2, RPMI 1640, среда BGJ (в модификации Fitton-Jackson и без нее), основная среда Игла (BME с добавлением основной соли Игла), модифицированная по Дульбекко среда Игла (DMEM без сыворотки), Yamane, IMEM-20, модифицированная по Глазгов среда Игла (GMEM), среда Leibovitz L-15, среда McCoy 5A, среда M199 (M199E- с основной солью Ирла), среда M199 (M199H- с основной солью Хенка), минимальная эссенциальная среда Игла (MEM-E- с основной солью Ирла), минимальная эссенциальная среда Игла (MEM-H- с основной солью Хенка) и минимальная эссенциальная среда Игла (MEM-NAA с незаменимыми аминокислотами), среди многочисленных других, включая среду 199, CMRL 1415, CMRL 1969, CMRL 1066, NCTC 135, MB 75261, MAB 8713, DM 145, Williams G, Neuman & Tytell, Higuchi, MCDB 301, MCDB 202, MCDB 501, MCDB 401, MCDB 411, MDBC 153. Предпочтительной средой для использования в изобретении является DMEM. Эти и другие полезные среды выпускаются, среди прочих, компаниями GIBCO, Grand Island, N.Y., USA, and Biological Industries, Bet Haemek, Israel. Ряд указанных сред обобщен в публикациях Methods in Enzymology, Volume LVIII, "Cell Culture", pp.62-72, edited by William B. Jakoby, and Ira H. Pastan, опубликованных в Academic Press, Inc.
[0080] В среду может добавляться сыворотка, такая как фетальная сыворотка коров, или людей, или других видов, и, необязательно или в качестве альтернативы, факторы роста, витамины (например, аскорбиновой кислоты), цитокины, соли (например, B-глицерофосфат), стероиды (например, дексаметазон) и гормоны, например гормон роста, эритропоэтин, тромбропоэтин, интерлейкин 3, интерлейкин 6, интерлейкин 7, фактор, стимулирующий колонии макрофагов, c-набор лиганда/фактора стволовых клеток, лиганд остеопротегерина, инсулин, подобный инсулину фактор роста, эпидермальный фактор роста, фактор роста фибробластов, фактор роста нервов, цилиарный нейротропный фактор, фактор роста, полученный из тромбоцитов, и костный морфогенетический белок в концентрациях на уровнях от пикрограммов/мл до миллиграммов/мл.
[0081] После вырастания клеток при использовании устройств и систем, описанных в данном документе, клетки могут быть собраны с помощью множества различных путей. Например, клетки могут быть собраны посредством промывания подходящей средой и/или посредством сбора, основанного на вибрации, как описано ниже.
[0082] Кроме того, допускается добавление дополнительных компонентов к культуральной среде. Такие компоненты могут представлять собой антибиотики, противогрибковые средства, альбумин, аминокислоты и другие компоненты, известные в области культивирования клеток.
ПРИМЕР 1
[0083] Оценивали пригодность культивирования клеток при использовании различных носителей, которые описаны в данном документе. Свежие или замороженные клетки PD051010 p.3/2 культивировали с полной DMEM в инкубаторе с увлажнением. Клетки выращивали в полученных методом литья под давлением носителях, изготовленных из различных полимерных материалов, или колбах, как определено ниже. Материал, форму и конфигурацию, обработки поверхности и текстуру поверхность варьировали, как описано подробно ниже и/или указано на фигурах. Измеряли скорость роста и эффективность прикрепления клеток при использовании различных носителей, и результаты обобщены ниже.
[0084] Фиг. 10 представляет собой гистограмму, показывающую результаты культивирования клеток в 175 см2 колбах или при использовании двухмерных устройств для культивирования представленного раскрытия. Фиг. 11 представляет собой гистограмму, показывающую число удвоения популяции клеток, культивируемых в 175 см2 колбах или при использовании двухмерных устройств для культивирования представленного раскрытия. Результаты, показанные на Фиг. 10-11, основаны на культивировании свежих клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из LEXAN® методом литья под давлением с гладкой текстурой поверхности и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 1A-1B. Как показано на фигурах, количество полученных клеток и число удвоения клеток были аналогичными при использовании устройств культивирования клеток вместо колб.
[0085] Фиг. 12 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования. Результаты, показанные на Фиг. 12, основаны на культивировании замороженных клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из LEXAN® методом литья под давлением, с шероховатой текстурой поверхности и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 1A-1B. Фиг. 13 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования. Результаты, показанные на Фиг. 13, основаны на культивировании замороженных клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из GRILAMID® методом литья под давлением с шероховатой текстурой поверхности и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 1A-1B.
[0086] Фиг. 14 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с различными покрытиями. Результаты, показанные на Фиг. 14, основаны на культивировании замороженных клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из LEXAN® или GRILAMID® методом литья под давлением (как показано на фигуре) с плавной текстурой поверхности и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 2A-2D. Кроме того, как показано, Фиг. 14 демонстрирует влияние обработки поверхности при использовании белков питательной среды и/или полилизина на носителях LEXAN® или GRILAMID®. Как показано, обработка полилизина и обработка белков питательной среды в общем увеличивала эффективность крепления клеток.
[0087] Фиг. 15 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с покрытием. Результаты, показанные на Фиг. 15, основаны на культивировании замороженных клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из GRILAMID® методом литья под давлением с шероховатой поверхностью, которую предварительно инкубировали с белками питательной среды и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 1A-1B.
[0088] Фиг. 16 представляет собой гистограмму, иллюстрирующую эффективность крепления клеток для клеток, выращенных при использовании двухмерных устройств для культивирования с различными покрытиями с плазменной обработкой поверхности устройств или без нее. Результаты, показанные на Фиг. 16, основаны на культивировании замороженных клеток PD051010 p.3/2 при использовании устройств культивирования клеток, образованных из LEXAN® или GRILAMID® методом литья под давлением (как показано на фигуре) с плавной текстурой поверхности и наличием конфигурации, как показано на Фиг. 2A-2D. Кроме того, как показано, Фиг. 16 демонстрирует влияние обработки поверхности при использовании белков питательной среды и/или плазменной обработки носителей LEXAN® или GRILAMID®. Как показано, плазменная обработка и обработка белков питательная среда в общем повышала эффективность крепления клеток.
ПРИМЕР 2
[0089] В данном эксперименте клетки, выращенные на двухмерных устройствах для культивирования, собирали при использовании основанного на вибрации способа сбора, как описано в PCT/IB2012/000933, поданной 15 апреля 2012 года. Двухмерные устройства для культивирования изготавливали за счет суспендирования 220 устройств в минимальной эссенциальной среде Игла, модифицированной по способу Дульбекко («DMEM») и посева в них прилипающих стромальных клеток, полученных из человеческой плаценты в концентрации, равной 3000 клеток на см. Устройства инкубировали в течение ночи с мягким перемешиванием для предоставления возможности прикрепления клеток к устройствам. После инкубирования в течение ночи 90-100 засеянных устройств переносили в 250 мл вращающуюся колбу, содержащую 150 мл полной DMEM и инкубировали три дня при 37°C и 5% CО2.
[0090] После трехдневного роста клетки собирали из устройств за счет вибрации следующим образом. Вращающиеся колбы и трубки извлекали из инкубатора, и десять устройств для культивирования извлекали для окрашивания клеток. Эффективность сбора определяли посредством окрашивания клеток и подсчета клеток. Культуральную среду выбрасывали и оставшиеся устройства промывали дважды PBS и помещали в контейнер, наполненный 800 мл предварительно нагретого раствора TrypLE. Затем устройства немедленно подвергали вибрации в течение 5 секунд при 5 Гц, 5 минут при 1 Гц и 30 секунд при 5 Гц (все с амплитудой, равной 25 мм). После вибрации дополнительные десять устройств извлекали для окрашивания клеток. К оставшимся устройствам добавляли 200 мл FBS, и среду переносили в 2500 мл бутылки для центрифугирования. Клетки центрифугировали при 1200 об./мин в течение 10 минут при 4°C, сгусток клеток повторно суспендировали и проводили подсчет клеток.
[0091] Было показано, что сбор посредством вибрации является эффективным средством извлечения клеток из данных устройств, при этом извлекали 7,8×106 клеток. Посредством вытеснения красителя трипанового синего было показано, что клетки имеют жизнеспособность 95%.
ПРИМЕР 3
[0092] В еще одном эксперименте мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки плаценты (PD020112), жировые (PLA25) и костного мозга (BM122) высевали в 175 см2 колбы, 0,5×106 клеток/колбу, в полную питательную среду DMEM (DMEM As22320 номер по каталогу 041-96417A GIBCO, 10% FBS номер по каталогу S0115 BIOCHROM, 1% L-Глютамина номер по каталогу G7513 SIGMA). Клетки инкубировали в инкубаторе с увлажнением при 37°C в течение 4 дней. Каждый тип клеток собирали при использовании TrypLE (GIBCO номер по каталогу 12563-029). Затем каждый тип клеток высевали как в колбы 175 см2, так и на 2D носители, в полную DMEM, в двух повторениях. Далее, 0,5×106 клеток высевали в колбы, и 1×106 клетки высевали на 90 2D носителей, в 20 мл флаконах. Колбы инкубировали в инкубаторе при 37°C. Флаконы с 2D носителями вращали в течение 24 часов для прикрепления, а затем переносили в 250 мл вращающуюся колбу с корзиной. Вращающиеся колбы помещали на устройство для перемешивания в инкубаторе при 37°C еще на 3 дня, при скорости встряхивания 40 об./мин. После суммарной продолжительности роста, равной 4 дня, клетки собирали из колб и из 2D носителей с помощью TrypLE и подсчитывали с помощью устройства для подсчета клеток Casy.
[0093] Фиг. 17 показывает гистограмму сравнения PDD (удвоение популяции в сутки) между 175 см2 колбами и 2D носителями, рассчитанные PDD показывают сравнимые скорости роста клеток Плаценты, костного мозга и жировых между 2D носителями и колбами.
Claims (77)
1. Устройство для культивирования клеток, содержащее:
по существу сферический трехмерный корпус, содержащий множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом трехмерный корпус имеет:
(a) максимальный пространственный размер в диапазоне от 1 мм до 50 мм; или
(b) отношение площади поверхности к объему между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3.
2. Устройство по п. 1, в котором множество двухмерных поверхностей:
(a) содержит множество ребер, продолжающихся от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса;
(b) содержит множество ребер, продолжающихся по существу параллельно друг другу от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса;
(c) (i) имеют изогнутую форму и/или содержат по меньшей мере одно спиралеобразное ребро, продолжающееся от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса; или
(ii) являются по существу плоскими на протяжении по меньшей мере части их площади поверхности; и/или
(d) содержат множество ребер, продолжающихся от центрального сердечника в направлении периферии трехмерного корпуса.
3. Устройство по п. 1, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит материал, выбранный по меньшей мере из одного из металлов, стекла, борсиликата, углеродных волокон, керамики, коллагена, желатина, гидрогелей и полимеров.
4. Устройство по п. 1, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит по меньшей мере один полимер, необязательно при этом полимер:
(a) выбран из полиамида, поликарбоната, полисульфоната, полиэфира, полиацеталя и поливинилхлорида;
(b) представляет собой полиамид или
(c) поликарбонат.
5. Устройство по п. 1, при этом множество двухмерных поверхностей дополнительно содержит по меньшей мере одно покрытие, выбранное для облегчения прикрепления и роста эукариотических клеток, необязательно при этом по меньшей мере одно покрытие выбирают из белка и полилизина.
6. Устройство по п. 1, при этом множество двухмерных поверхностей подвергают плазменной обработке поверхности.
7. Устройство по п. 1, при этом множество двухмерных поверхностей содержат модуль упругости и искривление, выбранное для облегчения роста эукариотических клеток.
8. Устройство по п. 1, при этом эукариотические клетки содержат по меньшей мере одно из: стволовых клеток, зависимых от культуральной подложки клеток, мезенхимальных клеток и стромальных клеток.
9. Устройство по п. 1, при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3, необязательно при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 10 см2/см3 и 15 см2/см3.
10. Устройство по п. 1, при этом трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер между 2 мм и 10 мм, необязательно максимальным пространственным размером является диаметр.
11. Система культивирования клеток, содержащая:
контейнер; и
группу по существу сферических трехмерных корпусов, помещенных в контейнер, при этом каждый трехмерный корпус содержит:
множество двухмерных поверхностей, продолжающихся внутрь от периферии трехмерного корпуса в направлении внутренней части каждого трехмерного корпуса, при этом множество двухмерных поверхностей выполнено с возможностью поддержки однослойного роста эукариотических клеток по меньшей мере на большей части или всей площади поверхности множества двухмерных поверхностей, и при этом каждый трехмерный корпус имеет:
(a) максимальный пространственный размер в диапазоне от 1 мм до 50 мм; или
(b) отношение площади поверхности к объему между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3.
12. Система по п. 11, в которой трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер между 1 мм и 20 мм.
13. Система по п. 11, в которой множество двухмерных поверхностей:
(a) содержит множество ребер, продолжающихся от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса;
(b) содержит множество ребер, продолжающихся по существу параллельно друг другу от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса;
(c) (i) имеет изогнутую форму и/или содержит по меньшей мере одно спиралеобразное ребро, продолжающееся от внутренней части трехмерного корпуса в направлении периферии трехмерного корпуса; или
(ii) является по существу плоскими на протяжении по меньшей мере части их площади поверхности; и/или
(d) содержит множество ребер, продолжающихся от центрального сердечника в направлении периферии трехмерного корпуса.
14. Система по п. 11, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит материал, выбранный по меньшей мере из одного из металлов, стекла, борсиликата, углеродных волокон, керамики, коллагена, желатина, гидрогелей и полимеров.
15. Система по п. 11, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит по меньшей мере один полимер, не обязательно при этом полимер:
(a) выбран из полиамида, поликарбоната, полисульфоната, полиэфира, полиацеталя и поливинилхлорида;
(b) представляет собой полиамид или
(c) поликарбонат.
16. Система по п. 11, при этом множество двухмерных поверхностей дополнительно содержит по меньшей мере одно покрытие, выбранное для облегчения прикрепления и роста эукариотических клеток, необязательно при этом по меньшей мере одно покрытие выбирают из белка и полилизина.
17. Система по п. 11, при этом множество двухмерных поверхностей подвергают плазменной обработке поверхности.
18. Система по п. 11, при этом множество двухмерных поверхностей содержит модуль упругости и искривление, выбранное для облегчения роста эукариотических клеток.
19. Система по п. 11, при этом эукариотические клетки содержат по меньшей мере одно из: стволовых клеток, зависимых от культуральной подложки клеток, мезенхимальных клеток и стромальных клеток.
20. Система по п. 11, при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3, необязательно при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 10 см2/см3 и 15 см2/см3.
21. Система по п. 13, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит материал, выбранный по меньшей мере из одного из металлов, стекла, борсиликата, углеродных волокон, керамики, коллагена, желатина, гидрогелей и полимеров.
22. Система по п. 13, при этом материал, образующий множество двухмерных поверхностей, содержит по меньшей мере один полимер, необязательно при этом полимер:
(а) выбран из полиамида, поликарбоната, полисульфоната, полиэфира, полиацеталя и поливинилхлорида;
(b) представляет собой полиамид или
(c) поликарбонат.
23. Система по п. 13, при этом множество двухмерных поверхностей дополнительно содержит по меньшей мере одно покрытие, выбранное для облегчения прикрепления и роста эукариотических клеток, необязательно при этом по меньшей мере одно покрытие выбирают из белка и полилизина.
24. Система по п. 13, при этом множество двухмерных поверхностей подвергают плазменной обработке поверхности.
25. Система по п. 13, при этом множество двухмерных поверхностей содержит модуль упругости и искривление, выбранное для облегчения роста эукариотических клеток.
26. Система по п. 13, при этом эукариотические клетки содержат по меньшей мере одно из: стволовых клеток, зависимых от культуральной подложки клеток, мезенхимальных клеток и стромальных клеток.
27. Система по п. 13, при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 3 см2/см3 и 1000 см2/см3, необязательно при этом отношение площади поверхности множества двухмерных поверхностей к объему трехмерного корпуса составляет между 10 см2/см3 и 15 см2/см3.
28. Система по п. 13, при этом трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер между приблизительно 2 мм и 10 мм, необязательно максимальным пространственным размером является диаметр.
29. Система по п. 11, при этом трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер между приблизительно 2 мм и 10 мм, необязательно максимальным пространственным размером является диаметр.
30. Система по п. 13, в которой трехмерный корпус имеет максимальный пространственный размер между 1 мм и 20 мм.
31. Способ культивирования клеток, включающий:
выбор группы эукариотических клеток; и
введение эукариотических клеток в контакт с по меньшей мере одним трехмерным корпусом по п. 1 или 11, в присутствии среды.
32. Способ по п. 31, в котором введение эукариотических клеток в контакт по меньшей мере с одним трехмерным корпусом включает:
(a) размещение клеток и по меньшей мере одного трехмерного корпуса в контейнере;
(b) дополнительно включает подачу культуральной среды в клетки; и/или
(c) дополнительно включает вызов передвижения по меньшей мере одного трехмерного корпуса, необязательно при этом вызов передвижения включает:
(i) вращение или встряхивание контейнера, в котором содержится по меньшей мере один трехмерный корпус; или
(ii) обеспечение протекания среды в контейнер, в котором содержится указанный по меньшей мере один трехмерный корпус.
33. Способ по п. 31, в котором указанный по меньшей мере один трехмерный корпус погружен в культуральную среду внутри подходящего контейнера, который выполнен с возможностью препятствования клеточной адгезии.
34. Способ культивирования клеток, включающий:
выбор группы эукариотических клеток; и
введение эукариотических клеток в контакт с по меньшей мере одним трехмерным корпусом по п. 2 или 13, в присутствии среды.
35. Способ по п. 34, в котором введение эукариотических клеток в контакт по меньшей мере с одним трехмерным корпусом включает:
(a) размещение клеток и по меньшей мере одного трехмерного корпуса в контейнере;
(b) дополнительно включает подачу культуральной среды в клетки; и/или
(c) дополнительно включает вызов передвижения по меньшей мере одного трехмерного корпуса, необязательно при этом вызов передвижения включает:
(i) вращение или встряхивание контейнера, в котором содержится по меньшей мере один трехмерный корпус; или
(ii) обеспечение протекания среды в контейнер, в котором содержится указанный по меньшей мере один трехмерный корпус.
36. Способ по п. 34, в котором указанный по меньшей мере один трехмерный корпус погружен в культуральную среду внутри подходящего контейнера, который выполнен с возможностью препятствования клеточной адгезии.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261697445P | 2012-09-06 | 2012-09-06 | |
| US61/697,445 | 2012-09-06 | ||
| PCT/IB2013/058184 WO2014037862A1 (en) | 2012-09-06 | 2013-08-31 | Devices and methods for culture of cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015107737A RU2015107737A (ru) | 2016-11-10 |
| RU2615179C2 true RU2615179C2 (ru) | 2017-04-04 |
Family
ID=49382554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015107737A RU2615179C2 (ru) | 2012-09-06 | 2013-08-31 | Устройства и способы культивирования клеток |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9512393B2 (ru) |
| EP (2) | EP2902478A1 (ru) |
| JP (1) | JP5931293B2 (ru) |
| KR (1) | KR101678796B1 (ru) |
| CN (2) | CN104619830B (ru) |
| AU (1) | AU2013311288B2 (ru) |
| BR (1) | BR112015004635A2 (ru) |
| CA (1) | CA2882108C (ru) |
| CY (1) | CY1116097T1 (ru) |
| DK (1) | DK2739720T3 (ru) |
| ES (1) | ES2529501T3 (ru) |
| HK (1) | HK1213592A1 (ru) |
| HR (1) | HRP20150149T1 (ru) |
| IL (1) | IL237527A0 (ru) |
| ME (1) | ME02052B (ru) |
| MX (1) | MX357469B (ru) |
| PL (1) | PL2739720T3 (ru) |
| PT (1) | PT2739720E (ru) |
| RS (1) | RS53886B1 (ru) |
| RU (1) | RU2615179C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201500816XA (ru) |
| SI (1) | SI2739720T1 (ru) |
| SM (1) | SMT201500055B (ru) |
| WO (1) | WO2014037862A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2812173C2 (ru) * | 2017-12-20 | 2024-01-24 | Филип Моррис Продактс С.А. | Усовершенствованное устройство для культивирования клеток |
Families Citing this family (46)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20100075924A (ko) | 2007-09-19 | 2010-07-05 | 플루리스템 리미티드 | 지방 또는 태반 조직 유래의 부착 세포 및 이의 치료 용도 |
| BRPI0909541A2 (pt) | 2008-05-27 | 2016-10-11 | Pluristem Ltd | ''método para tratamento de doenças inflamatórias do cólon'' |
| RU2539786C2 (ru) | 2008-09-02 | 2015-01-27 | Плуристем Лтд. | Выращенные в прикрепленной к субстрату культуре клетки из ткани плаценты и их использование при лечении |
| EP2977445B1 (en) | 2009-11-30 | 2018-07-25 | Pluristem Ltd. | Adherent cells from placenta and use of same in disease treatment |
| WO2011147967A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Georg Duda | Skeletal muscle regeneration using mesenchymal stem cells |
| EP2625264B1 (en) | 2010-10-08 | 2022-12-07 | Terumo BCT, Inc. | Methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system with control conditions |
| WO2012127320A1 (en) | 2011-03-22 | 2012-09-27 | Pluristem Ltd. | Methods for treating radiation or chemical injury |
| KR101910685B1 (ko) | 2011-04-15 | 2018-10-22 | 플루리스템 리미티드 | 세포 수집 방법 및 시스템 |
| US9950014B2 (en) | 2012-09-04 | 2018-04-24 | Pluristem Ltd. | Methods for prevention and treatment of preeclampsia |
| KR101359268B1 (ko) * | 2012-12-06 | 2014-02-11 | 고려대학교 산학협력단 | 바이오 필름 모니터링 장치 |
| EP3068866B1 (en) | 2013-11-16 | 2018-04-25 | Terumo BCT, Inc. | Expanding cells in a bioreactor |
| WO2015132729A1 (en) | 2014-03-04 | 2015-09-11 | Pluristem Ltd. | Systems and methods for growing and harvesting cells |
| WO2015148704A1 (en) | 2014-03-25 | 2015-10-01 | Terumo Bct, Inc. | Passive replacement of media |
| US20160090569A1 (en) | 2014-09-26 | 2016-03-31 | Terumo Bct, Inc. | Scheduled Feed |
| WO2016098061A1 (en) | 2014-12-18 | 2016-06-23 | Pluristem Ltd. | Methods and compositions for treating and preventing muscle wasting disorders |
| FR3032974B1 (fr) * | 2015-02-19 | 2023-01-13 | Commissariat Energie Atomique | Dispositif de manipulation de cellules biologiques au moyen d'un support vibrant |
| US20180015125A1 (en) | 2015-03-23 | 2018-01-18 | Pluristem Ltd. | Use of adherent stromal cells for enhancing hematopoiesis in a subject in need thereof |
| WO2017004592A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Terumo Bct, Inc. | Cell growth with mechanical stimuli |
| RU2614260C1 (ru) * | 2016-01-28 | 2017-03-24 | Общество с ограниченной ответственностью фирмы "Имтек" | Двухслойная, плоская, прозрачная подложка гидрогеля для длительного культивирования клеток |
| US20210205370A1 (en) | 2016-02-18 | 2021-07-08 | Pluristem Ltd. | Methods and compositions for treating cancers and neoplasms |
| CN105524832B (zh) | 2016-02-26 | 2018-03-30 | 广州洁特生物过滤股份有限公司 | 细胞培养装置及方法 |
| AU2017261267B2 (en) | 2016-05-05 | 2023-01-05 | Southwest Research Institute | Three-dimensional bioreactor for cell expansion and related applications |
| WO2017205667A1 (en) | 2016-05-25 | 2017-11-30 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
| US11104874B2 (en) | 2016-06-07 | 2021-08-31 | Terumo Bct, Inc. | Coating a bioreactor |
| US11685883B2 (en) | 2016-06-07 | 2023-06-27 | Terumo Bct, Inc. | Methods and systems for coating a cell growth surface |
| WO2018044699A1 (en) | 2016-08-27 | 2018-03-08 | 3D Biotek, Llc | Bioreactor |
| CN110612344B (zh) | 2017-03-31 | 2023-09-12 | 泰尔茂比司特公司 | 细胞扩增 |
| US12234441B2 (en) | 2017-03-31 | 2025-02-25 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
| US11624046B2 (en) | 2017-03-31 | 2023-04-11 | Terumo Bct, Inc. | Cell expansion |
| WO2018198012A1 (en) | 2017-04-24 | 2018-11-01 | Pluristem Ltd. | Methods and compositions for treating neurological disorders |
| IL260253A (en) | 2017-07-03 | 2019-01-31 | Pluristem Ltd | Methods and compounds for removing adherent cells |
| US11149244B2 (en) | 2018-04-04 | 2021-10-19 | Southwest Research Institute | Three-dimensional bioreactor for T-cell activation and expansion for immunotherapy |
| FR3081168B1 (fr) * | 2018-05-21 | 2022-03-11 | Univ Bordeaux | Systeme de culture cellulaire en bioreacteur |
| SG11202102986XA (en) | 2018-09-24 | 2021-04-29 | Southwest Res Inst | Three-dimensional bioreactors |
| WO2020081740A1 (en) | 2018-10-17 | 2020-04-23 | Northwestern University | Tissue culture platform having multiple well chambers fluidically coupled via microfluidic channels and selector valves |
| US20220046883A1 (en) * | 2019-04-28 | 2022-02-17 | Pluristem Ltd. | Methods and Compositions for Producing Cannabinoids |
| WO2020223556A1 (en) * | 2019-04-30 | 2020-11-05 | Pbs Biotech, Inc. | Macrocarriers for cell growth in bioreactors |
| DE102019007167A1 (de) * | 2019-10-15 | 2021-04-15 | Hochschule Kaiserslautern | Emerser Bioreaktor |
| EP4164706A1 (en) | 2019-12-04 | 2023-04-19 | Centre Hospitalier Universitaire Vaudois (CHUV) | Device and process for tissue-engineering and regenerative medicine |
| US11492580B2 (en) | 2020-05-12 | 2022-11-08 | Southwest Research Institute | Method using a three-dimensional bioprocessor |
| WO2022204315A1 (en) | 2021-03-23 | 2022-09-29 | Terumo Bct, Inc. | Cell capture and expansion |
| CN115678780A (zh) * | 2021-07-23 | 2023-02-03 | 天信和(苏州)生物科技有限公司 | 一种用于培养细胞的载体和生物反应器 |
| US12209689B2 (en) | 2022-02-28 | 2025-01-28 | Terumo Kabushiki Kaisha | Multiple-tube pinch valve assembly |
| USD1099116S1 (en) | 2022-09-01 | 2025-10-21 | Terumo Bct, Inc. | Display screen or portion thereof with a graphical user interface for displaying cell culture process steps and measurements of an associated bioreactor device |
| WO2025072491A1 (en) * | 2023-09-26 | 2025-04-03 | Hatchless Inc. | Bioprocessing system for de novo tissue generation and applications thereof |
| WO2025076586A1 (en) * | 2023-10-09 | 2025-04-17 | Hydgene Renewables Pty Ltd | Generator system |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5010013A (en) * | 1987-12-09 | 1991-04-23 | In Vitro Scientific Products, Inc. | Roller bottle for tissue culture growth |
| US20050221485A1 (en) * | 2002-07-30 | 2005-10-06 | Augustinus Bader | Method and device for culturing cells |
| RU2396342C1 (ru) * | 2008-12-25 | 2010-08-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный университет | Способ получения трехмерных матриц для тканеподобных структур из клеток животного происхождения |
| WO2012005580A1 (en) * | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Universiteit Twente | High troughput multiwell system for culturing 3d tissue constructs in-vitro or in-vivo, method for producing said multiwell sytem and methods for preparing 3d tissue constructs from cells using said multiwell system |
Family Cites Families (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4144126A (en) | 1975-05-21 | 1979-03-13 | Beecham Group Limited | Cell culture method |
| CA1221045A (en) | 1983-02-04 | 1987-04-28 | Bjorn K. Lydersen | Cell culture apparatus and process using an immobilized cell composite |
| US5902741A (en) | 1986-04-18 | 1999-05-11 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional cartilage cultures |
| CN2040101U (zh) * | 1988-12-30 | 1989-06-28 | 北京星火新技术研究所 | 高效细胞培养转瓶 |
| JPH0564579A (ja) * | 1991-09-06 | 1993-03-19 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 細胞培養用具およびその表面加工方法 |
| US5512474A (en) | 1992-05-29 | 1996-04-30 | Bsi Corporation | Cell culture support containing a cell adhesion factor and a positively-charged molecule |
| US5629186A (en) * | 1994-04-28 | 1997-05-13 | Lockheed Martin Corporation | Porous matrix and method of its production |
| US6132463A (en) | 1995-05-19 | 2000-10-17 | Etex Corporation | Cell seeding of ceramic compositions |
| GB9625301D0 (en) | 1996-12-05 | 1997-01-22 | Smith & Nephew | Cell-culture system |
| ATE227338T1 (de) | 1998-03-18 | 2002-11-15 | Massachusetts Inst Technology | Vaskularisierte perfundierte anordnungen für mikrogewebe und mikroorgane |
| GB2338243A (en) | 1998-06-11 | 1999-12-15 | Nicholas George Maroudas | Macro carrier for cell culture |
| JP4222658B2 (ja) * | 1998-06-23 | 2009-02-12 | テルモ株式会社 | 細胞支持基材、培養装置および液体処理装置 |
| JP4523169B2 (ja) | 1999-02-04 | 2010-08-11 | プルリステム リミテッド | 造血幹細胞および／または前駆細胞を維持および増加するための方法および装置 |
| US6676675B2 (en) * | 2000-04-19 | 2004-01-13 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Patterned substrates and methods for nerve regeneration |
| US20040067585A1 (en) | 2002-10-07 | 2004-04-08 | Yu-Chi Wang | Cell cultivation surface and method of making the same |
| WO2004056976A2 (en) | 2002-12-23 | 2004-07-08 | Fuji Photo Film B.V. | Process for coating cell-culture support |
| DE10335130A1 (de) * | 2003-07-31 | 2005-02-24 | Blue Membranes Gmbh | Immobilisierung von Katalysatoren auf porösen Körpern auf Kohlenstoffbasis |
| WO2005044972A2 (en) * | 2003-11-06 | 2005-05-19 | Nunc A/S | A three-dimensional carrier for culturing microbiological material |
| JP2006136212A (ja) * | 2004-11-10 | 2006-06-01 | Olympus Corp | 細胞培養用担体 |
| US20110293583A1 (en) | 2006-03-23 | 2011-12-01 | Pluristem Ltd. | Methods for cell expansion and uses of cells and conditioned media produced thereby for therapy |
| US20110171182A1 (en) | 2006-03-23 | 2011-07-14 | Pluristem Ltd. | Methods for cell expansion and uses of cells and conditioned media produced thereby for therapy |
| BRPI0709349A2 (pt) | 2006-03-23 | 2011-07-12 | Pluristem Ltd | métodos para expansão celular e usos de células e de meios condicionados produzidos através deles para terapia |
| JP4853637B2 (ja) * | 2006-08-08 | 2012-01-11 | Ｋｉｓｃｏ株式会社 | 細胞培養用基材およびその製造方法 |
| CN100540647C (zh) * | 2006-10-27 | 2009-09-16 | 浙江大学 | 槽形多孔板动物细胞中空纤维反应器及其用途 |
| CN101245313A (zh) * | 2007-02-13 | 2008-08-20 | 刘青 | 三维细胞培养插入件、其制造方法、成套用具及用途 |
| CN101646764A (zh) * | 2007-02-28 | 2010-02-10 | 金文申有限公司 | 高表面积培养系统 |
| US8557583B2 (en) | 2007-03-15 | 2013-10-15 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | Cell culture support and manufacture thereof |
| JP2008237088A (ja) * | 2007-03-27 | 2008-10-09 | Kawamura Inst Of Chem Res | 細胞培養基材及び細胞培養方法 |
| WO2008143149A1 (ja) | 2007-05-11 | 2008-11-27 | Dai Nippon Printing Co., Ltd. | 寸法が保持された細胞シート、その製造方法、及びそのための細胞培養担体 |
| WO2009020781A1 (en) * | 2007-08-03 | 2009-02-12 | Invitrogen Corporation | Cell culture processing devices and methods |
| KR20100075924A (ko) | 2007-09-19 | 2010-07-05 | 플루리스템 리미티드 | 지방 또는 태반 조직 유래의 부착 세포 및 이의 치료 용도 |
| BRPI0909541A2 (pt) | 2008-05-27 | 2016-10-11 | Pluristem Ltd | ''método para tratamento de doenças inflamatórias do cólon'' |
| IT1392820B1 (it) * | 2008-08-06 | 2012-03-23 | Dominici | Dispositivo per la coltura di cellule |
| RU2539786C2 (ru) | 2008-09-02 | 2015-01-27 | Плуристем Лтд. | Выращенные в прикрепленной к субстрату культуре клетки из ткани плаценты и их использование при лечении |
| US20110256108A1 (en) | 2008-09-02 | 2011-10-20 | Moran Meiron | Methods of selection of cells for transplantation |
| US9096827B2 (en) | 2008-09-02 | 2015-08-04 | Pluristem Ltd. | Adherent cells from placenta tissue and use thereof in therapy |
| WO2010048417A2 (en) | 2008-10-22 | 2010-04-29 | Biovest International, Inc. | Perfusion bioreactors, cell culture systems, and methods for production of cells and cell-derived products |
| WO2010088916A2 (en) | 2009-02-05 | 2010-08-12 | Origo Biotech Aps | Curved polyhedrons |
| CN101693877A (zh) * | 2009-08-04 | 2010-04-14 | 上海圣纳堡生物科技开发有限公司 | 立体细胞培养载体 |
| EP2977445B1 (en) | 2009-11-30 | 2018-07-25 | Pluristem Ltd. | Adherent cells from placenta and use of same in disease treatment |
| PL3378930T3 (pl) * | 2009-12-16 | 2020-05-18 | Vivabiocell Spa | Rusztowanie dla wzrostu tkanki in vivo |
| EP2561066B1 (en) | 2010-04-23 | 2016-03-30 | Pluristem Ltd. | Adherent stromal cells derived from plancentas of multiple donors and uses thereof |
| WO2011147967A1 (en) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Georg Duda | Skeletal muscle regeneration using mesenchymal stem cells |
| US20120156777A1 (en) * | 2010-12-16 | 2012-06-21 | General Electric Company | Cell carrier, associated methods for making cell carrier and culturing cells using the same |
| US20140017209A1 (en) | 2011-03-22 | 2014-01-16 | Pluristem Ltd. | Methods for treating radiation or chemical injury |
| KR101910685B1 (ko) | 2011-04-15 | 2018-10-22 | 플루리스템 리미티드 | 세포 수집 방법 및 시스템 |
| US9950014B2 (en) | 2012-09-04 | 2018-04-24 | Pluristem Ltd. | Methods for prevention and treatment of preeclampsia |
| KR102074024B1 (ko) | 2012-10-31 | 2020-02-05 | 플루리스템 리미티드 | 생물학적 물질을 해동하기 위한 방법 및 장치 |
-
2013
- 2013-08-31 EP EP14197892.4A patent/EP2902478A1/en not_active Withdrawn
- 2013-08-31 CN CN201380046460.1A patent/CN104619830B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-08-31 DK DK13777343.8T patent/DK2739720T3/en active
- 2013-08-31 ME MEP-2015-19A patent/ME02052B/me unknown
- 2013-08-31 US US14/426,265 patent/US9512393B2/en active Active
- 2013-08-31 BR BR112015004635A patent/BR112015004635A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-08-31 EP EP13777343.8A patent/EP2739720B1/en not_active Revoked
- 2013-08-31 KR KR1020157005123A patent/KR101678796B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2013-08-31 HR HRP20150149TT patent/HRP20150149T1/hr unknown
- 2013-08-31 CA CA2882108A patent/CA2882108C/en not_active Expired - Fee Related
- 2013-08-31 ES ES13777343.8T patent/ES2529501T3/es active Active
- 2013-08-31 SI SI201330020T patent/SI2739720T1/sl unknown
- 2013-08-31 PT PT137773438T patent/PT2739720E/pt unknown
- 2013-08-31 PL PL13777343T patent/PL2739720T3/pl unknown
- 2013-08-31 JP JP2015530528A patent/JP5931293B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2013-08-31 RU RU2015107737A patent/RU2615179C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-08-31 WO PCT/IB2013/058184 patent/WO2014037862A1/en not_active Ceased
- 2013-08-31 SG SG11201500816XA patent/SG11201500816XA/en unknown
- 2013-08-31 CN CN201510900322.6A patent/CN105385596A/zh active Pending
- 2013-08-31 RS RS20150091A patent/RS53886B1/sr unknown
- 2013-08-31 AU AU2013311288A patent/AU2013311288B2/en not_active Ceased
- 2013-08-31 MX MX2015002819A patent/MX357469B/es active IP Right Grant
-
2014
- 2014-08-28 HK HK16101428.2A patent/HK1213592A1/en unknown
-
2015
- 2015-02-09 CY CY20151100126T patent/CY1116097T1/el unknown
- 2015-03-03 IL IL237527A patent/IL237527A0/en active IP Right Grant
- 2015-03-09 SM SM201500055T patent/SMT201500055B/xx unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5010013A (en) * | 1987-12-09 | 1991-04-23 | In Vitro Scientific Products, Inc. | Roller bottle for tissue culture growth |
| US20050221485A1 (en) * | 2002-07-30 | 2005-10-06 | Augustinus Bader | Method and device for culturing cells |
| RU2396342C1 (ru) * | 2008-12-25 | 2010-08-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный университет | Способ получения трехмерных матриц для тканеподобных структур из клеток животного происхождения |
| WO2012005580A1 (en) * | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Universiteit Twente | High troughput multiwell system for culturing 3d tissue constructs in-vitro or in-vivo, method for producing said multiwell sytem and methods for preparing 3d tissue constructs from cells using said multiwell system |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2812173C2 (ru) * | 2017-12-20 | 2024-01-24 | Филип Моррис Продактс С.А. | Усовершенствованное устройство для культивирования клеток |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2615179C2 (ru) | Устройства и способы культивирования клеток | |
| CN106459925B (zh) | 培养方法和细胞团 | |
| CN107267442A (zh) | 微载体上的多能干细胞培养 | |
| WO2008152640A2 (en) | Three dimensional biocompatible scaffolds for ex-vivo expansion and transplantation of stem cells | |
| JP2014060991A (ja) | 多孔質中空糸の内腔を用いる幹細胞の培養方法 | |
| EP4148115B1 (en) | Flow rate optimizing in a cell cultivation apparatus | |
| KR20220166825A (ko) | 바이러스 벡터 생산을 위한 3차원 생물 반응기 | |
| HK1195332B (en) | Devices and methods for culture of cells | |
| HK1210494B (en) | Devices and methods for culture of cells | |
| WO2023036909A1 (en) | Cell culture apparatus, methods for cell cultivation by using the same, cell culture incubator comprising the same, and uses of the cell culture apparatus | |
| EP3098304A1 (en) | Hybrid cell detachment-free cell expansion system for adherent cell culturing and related proceeding protocol | |
| AU2022210821A1 (en) | Method of changing culture medium of a culture using spinfilters | |
| US20080113400A1 (en) | Methods and Devices for Culturing Stem Cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200901 |