RU2613184C2 - Вещества, обладающие ангиогенной активностью - Google Patents
Вещества, обладающие ангиогенной активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2613184C2 RU2613184C2 RU2013122696A RU2013122696A RU2613184C2 RU 2613184 C2 RU2613184 C2 RU 2613184C2 RU 2013122696 A RU2013122696 A RU 2013122696A RU 2013122696 A RU2013122696 A RU 2013122696A RU 2613184 C2 RU2613184 C2 RU 2613184C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- lysine
- bis
- compounds
- angiogenic activity
- Prior art date
Links
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 title abstract 2
- ANZPPBZQGPRLRE-NSHDSACASA-N NCCCCCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN Chemical compound NCCCCCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN ANZPPBZQGPRLRE-NSHDSACASA-N 0.000 claims abstract description 4
- WTRZRIQCZXPICK-VUTIHBPYSA-N NCCCCCCN.NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC([C@H](CCC(O)=O)NC(CCC(O)=O)=O)=O.NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC([C@H](CCC(O)=O)NC(CCC(O)=O)=O)=O Chemical compound NCCCCCCN.NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC([C@H](CCC(O)=O)NC(CCC(O)=O)=O)=O.NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC([C@H](CCC(O)=O)NC(CCC(O)=O)=O)=O WTRZRIQCZXPICK-VUTIHBPYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract 2
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- OKESCAWFAKRAQN-UWVGGRQHSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-6-aminohexanoyl]amino]pentanedioic acid Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OKESCAWFAKRAQN-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 33
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 abstract description 19
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 abstract description 19
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- -1 hexamethylenediamide bis-(N-acetyl-lysyl-glutamic acid) Chemical compound 0.000 abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 7
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 5
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 10
- 102100040908 Putative glycerol kinase 5 Human genes 0.000 description 8
- 101710111071 Putative glycerol kinase 5 Proteins 0.000 description 8
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 8
- 201000002818 limb ischemia Diseases 0.000 description 7
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 5
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 5
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 4
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 4
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000015916 branching morphogenesis of a tube Effects 0.000 description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 4
- 230000002253 anti-ischaemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 3
- 102000015533 trkA Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010064884 trkA Receptor Proteins 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- UBBFIIUSIUJRSE-NSHDSACASA-N NCCCCCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(N)=O)CCCCN Chemical compound NCCCCCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(N)=O)CCCCN UBBFIIUSIUJRSE-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000026341 positive regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- ITOVGHGLISCRPJ-UWVGGRQHSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-4-carboxy-2-(3-carboxypropanoylamino)butanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CCC(O)=O ITOVGHGLISCRPJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000002087 Endarteritis Diseases 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 101150111783 NTRK1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 101710189834 Transcription factor AP-2-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 206010003230 arteritis Diseases 0.000 description 1
- 229960000106 biosimilars Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008753 endothelial function Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000000215 hyperchromic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003699 striated muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- AWLILQARPMWUHA-UHFFFAOYSA-M thiopental sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC([S-])=NC1=O AWLILQARPMWUHA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/05—Dipeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области фармакологии и экспериментальной медицины и касается применения низкомолекулярных пептидных миметиков фактора роста нервов: гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина) - соединения ГК-2; гексаметилендиамида бис-(N-ацетил-лизил-глутаминовой кислоты) - соединения ГК-4; амида N-аминокапроил-глицил-лизина - соединения ГК-5; гексаметилендиамида бис-(N-аминокалроил-глицил-лизина) - соединения ГК-6, в качестве соединений, обладающих ангиогенной активностью. Группа изобретений обеспечивает создание новых высокоэффективных средств для стимуляции неоангиогенеза при различных ишемических процессах. 4 н.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается применения описанных ранее (Середенин С.Б., Гудашева Т.А. Патент РФ №2410392) низкомолекулярных пептидных миметиков фактора роста нервов: гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина) - соединения ГК-2; гексаметилендиамида ,бис-(N-ацетил-лизил-глутаминовой кислоты) - соединения ГК-4; амида N-аминокапроил-глицил-лизина - соединения ГК-5; гексаметилендиамида бис-(N-аминокапроил-глицил-лизина) -соединения ГК-6, в качестве соединений, обладающих ангиогенной активностью.
Изобретение относится к разделу Экспериментальная медицина и в дальнейшем может быть использовано для создания новых оригинальных высокоэффективных лекарственных средств для стимуляции неоангиогенеза при различных ишемических процессах.
Основной областью применения ангиогенных лекарственных средств является ишемическая болезнь сердца, в том числе острый инфаркт миокарда, и хроническая ишемия нижних конечностей, особенно в тех случаях, когда применение хирургических методов лечения, в частности эндоваскулярной реваскуляризации, и/или невозможно, и/или недостаточно эффективно, и/или сопряжено с риском развития тяжелых осложнений, а также в неврологии и травматологии. Например, количество такого рода пациентов среди больных ишемической болезнью сердца согласно данным различных источников, колеблется в пределах 30-45% (Cao Y. Discov. Med., 2010, 9(46): 179-184; Mitsos S. et al. Angogenesis, 2012, 15(1):1-22 и др.), а у больных, страдающих хроническим облитерирующим эндартериитом, из-за невозможности проведения полномасштабного хирургического вмешательства ампутация проводится более чем в 25% случаях, летальность же при этой патологии составляет 20-25% (Smith L. Nurs. Times, 2012, 108(43):12-14; Ouma G.O. et al. 2012, 17(3):174-192 и др.).
Теоретические подходы, обосновывающие целесообразность фармакологической стимуляции ангиогенеза, были сформулированы в конце XX века, а само направление получило название «терапевтический ангиогенез» или «биологическое шунтирование» (Isner J.M. Clin. Immunol. Immunopathol., 1996, 80(3 Pt2):S82-91). В настоящее время под термином «терапевтический ангиогенез» понимают стимуляцию ангиогенеза при помощи лекарственных средств, преимущественно биоподобных препаратов, обладающих способностью улучшать перфузию ишемизированных тканей с помощью усиления естественных, но недостаточных в критических ситуациях, процессов неоваскуляризации тканей, т.е. стимулировать рост и ветвление (арборизацию) кровеносных сосудов и/или модулировать функции эндотелия (Mima Y. et al. PLoS One, 2012, 7(4):e35199; Chu H., Wang Y. Ther. Deliv., 2012, 3(6):693-714). Наиболее перспективным в этом плане представляется разработка и внедрение в клиническую практику экзогенных аналогов эндогенных факторов роста и/или химических соединений, обладающих способностью активировать факторы роста, а также использование генетически модифицированных прогениторных клеток (Парфенова Е.В., Ткачук В.А. Кардиологический вестник, 2007, т.II (XIV), №2, С.5-14; Semeraro F. et al. chit. Vasc. PharmacoL, 2011, 9(5):629-646; Machalinska A. et al. Klin. Oczna, 2012, 114(1):63-67; Fariha M.M. et al. J. Cell. Mol. Med., 2013).
Одним из возможных подходов к решению этой проблемы является использование для стимуляции неоангиогенеза низкомолекулярных пептидных миметиков первой (соединения ГК-4, ГК-5, ГК-6) и четвертой (соединение ГК-2) петель фактора роста нервов (NGF).
В настоящее время накоплен достаточно убедительный литературный материал, свидетельствующий о том, что фактор роста нервов, помимо ЦНС, синтезируется и экскретируется эндотелиальными и гладкомышечными клетками сосудов, а на их клеточной мембране представлены специфические для NGF TrkA рецепторы (Meloni M. et al. Circ. Res., 2010, 106(7):1275-1284; Saygili E. et al. J. Mol. Cell. Cardiol., 2010, 49(1):79-87 и др.), посредством взаимодействия с которыми NGF реализует свои ангиогенные эффекты. NGF-опосредованная активация TrkA рецепторов, расположенных на клеточных мембранах эндотелиальных и гладкомышечных клеток сосудов, влечет за собой активацию PI3K-Akt, Ras-MAPK и PLCγ1-IP3 внутриклеточных сигнальных путей, инициирующих неоангиогенез (Caporali A., Emanueli С., 2009, 80: 279-308 и др.). Этот феномен описан как для нормальных, так и патологически измененных тканей. В эндотелиальных клетках сосудов конечным этапом NGF-опосредованной активации TrkA рецепторов является активация матриксной металлопротеиназы-2 (ММР-2), относящейся к семейству цинкозависимых эндопротеиназ. Опосредованная NGF активация ММР-2, в свою очередь, инициирует активацию фактора транскрипции генов АР-2 (Park M.-J. et al. J. Biol. Chem., 2007, 282(42): 30485-30496), который транслоцируется в ядро клетки, где запускает каскад реакций, стимулирующих пролиферацию, миграцию и инвазию эндотелиальных клеток. Помимо этого имеются данные о том, что этот процесс может быть инициирован и посредством активации NGF фактора роста эндотелия сосудов - VEGF-A (Lazarovici P. et al. Endothelium, 2006, 13(1):51-59). В гладкомышечных клетках сосудов активация Ras-MAPK-сигнального пути влечет за собой активацию металлопротеиназы-9 (ММР-9), которая, в отличие от ММР-2, активирует лишь процессы миграции и инвазии клеток (Lucchesi P.A. et al. Circulation, 2004, 110:3587-3593). Миграция гладкомышечных клеток сосудов может быть инициирована и путем NGF-опосредованной активации PI3K-Akt и PLCγ1-IРЗ внутриклеточных сигнальных каскадов (Kraemer R. et al. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 1999,19:1041-1050).
В результате многолетних фундаментальных исследований в НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН синтезирован ряд низкомолекулярных пептидных миметиков NGF, обладающих свойствами агонистов (соединения ГК-2, ГК-4, ГК-5, ГК-6) TrkA рецепторов (Гудашева Т.А. с соавт. Доклады Академии Наук, 2010, 434(4): 549-551) и выявлена их ангиогенная активность.
Следующие примеры иллюстрируют ангиогенную активность гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина) - соединения ГК-2; гексаметилендиамида бис-(N-ацетил-лизил-глутаминовой кислоты) - соединения ГК-4; амида N-аминокапроил-глицил-лизина - соединения ГК-5; гексаметилендиамида бис-(N-аминокапроил-глицил-лизина) - соединения ГК-6.
Пример 1. Влияние соединений ГК-2, ГК-4, ГК-5, ГК-6 на длину капилляров в ишемизированной конечности у крыс.
Опыты проводили на беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Животных рандомизировали на 5 групп: 1-я (n=23) - контрольная и 2-я - n=15, 3-я - n=8, 4-я - n=10 и 5-я - n=14, получавшие соединения ГК-2, ГК-4, ГК-5 и ГК-6 соответственно. Ишемию задних конечностей у анестезированных крыс (тиопентал натрия, 50 мг/кг, в/б) вызывали путем одномоментной резекции участка бедренной артерии, после чего рану послойно ушивали. Изучаемые соединения (1 мг/кг) вводили внутрибрюшинно в течение 14 дней от момента резекции бедренной артерии. Первую инъекцию осуществляли через 1 ч после окончания операции. Контрольным животным по аналогичной схеме внутрибрюшинно вводили 0,3 мл физиологического раствора. Через сутки после последней инъекции животных забивали и извлекали икроножную мышцу из ишемизированной конечности. Для визуализации капилляров использовали 1%-ный раствор синьки Эванса, который вводили за 5 мин до забоя животных. При помощи световой микроскопии оценивали суммарную длину капилляров в 1 мм2 ишемизированной ткани, что позволяло судить об интенсивности роста сосудов под влиянием изучаемых соединений. Значимость различий определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа с дальнейшей обработкой методом множественных сравнений по Даннету.
Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что изучаемые соединения в той или иной проявляют ангиогенную активность (табл.1). Так, например, у животных, получавших соединение ГК-6, суммарная длина капиллярного русла была на 32% больше, чем в контроле (р=0,008). Наибольшую ангиогенную активность проявляло соединение ГК-2: у животных, получавших это соединение, показатель суммарной длины капилляров был более чем на 50% выше, чем у контрольных животных - соответственно 21024±1344 и 13607±715 мкм/мм2 (р<0,001).
Таким образом, приведенные результаты скрининговых исследований свидетельствуют о том, что рассматриваемые соединения в той или иной мере стимулируют ангиогенез. При этом наибольшей ангиогенной активностью обладает соединение ГК-2.
Пример 2. Ангиогенная и противоишемическая активности низкомолекулярного пептидного миметика NGF - соединения ГК-2.
Опыты проводили на беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Животных рандомизировали на 2 группы: контрольную (n=18) и основную (n=17). В этой серии экспериментов, выполненных на модели ишемии задних конечностей крыс (протокол эксперимента аналогичен таковому, изложенному в примере 1), оценивали не только ангиогенные, но и противоишемические эффекты соединения ГК-2. Для этой цели изучали влияние соединения ГК-2 на интенсивность васкуляризации и некробиотических процессов, протекающих в ишемизированной икроножной мышце. Для оценки интенсивности некробиотических процессов, протекающих в ишемизированной икроножной мышце, использовали световую микроскопию, для чего мышцу фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина, при помощи замораживающего микротома изготовляли срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивали гематоксилин-эозином по стандартной методике. Для визуализации капилляров использовали синьку Эванса. Для каждого поля зрения рассчитывали суммарную длину сосудов и их количество в 1 мм2. О степени васкуляризации судили по величине индекса васкуляризации, за который принимали произведение длины капилляров и их количества в 1 мм2 ищемизированной ткани. Статистическую значимость изменений, вызываемых соединением ГК-2, определяли с помощью критерия Манна-Уитни. Значимость различий между сериями экспериментов определяли с помощью критерия точной вероятности Фишера.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что у животных, получавших соединение ГК-2, суммарная длина капиллярного русла статистически значимо больше (р<0,003), чем у контрольных животных - 19531(16085÷24511) и 14420(10901÷17404) мкм/мм2 соответственно (фиг.1. Влияние соединения ГК-2 (в/б, 1 мг/кг/сут, 14 дней) на суммарную длину сосудов в 1 мм ткани в условиях ишемии задней конечности крысы). Количество сосудов в 1 мм2 ишемизированной ткани у животных, получавших соединение ГК-2, также было больше (р<0,001): 71(71÷78) и 53(50÷57) соответственно (фиг.2. Влияние соединения ГК-2 (в/б, 1 мг/кг/сут, 14 дней) на количество сосудов в 1 мм2 ткани в условиях ишемии задней конечности крысы). Математический анализ полученных результатов свидетельствует о том, что интенсивность васкуляризации ишемизированной ткани у животных, получавших соединение ГК-2, практически в 2 раза выше, чем в контроле - 27794(25218÷35941) и 14725(9030÷19630) соответственно (р<0,001).
Согласно данным световой микроскопии у контрольных животных основу ткани составляет некробиотически измененная мышца с участками восковидного некроза. Саркоплазма ярко окрашена, гомогенна, поперечная исчерченность отсутствует (фиг. 3а. Морфологическая картина задней икроножной мышцы крысы (х 10)). Отмечается большое количество воспалительных инфильтратов. Ядра поперечно-полосатых мышц мелкие, гиперхромные или отсутствуют. Сосуды полнокровны, околососудистый отек хорошо выражен, капилляры извитые, мелкие, тонкие, плохо различимы. Таким образом, в результате удаления участка бедренной артерии в икроножной мышце наблюдаются выраженные некротические и некробиотические изменения, сопровождающиеся воспалительной реакцией и расстройством кровообращения. У животных, получавших соединение ГК-2, микроскопическая картина икроножной мышцы существенно отличается от таковой в контроле - интенсивность альтеративных процессов в мышце этих крыс менее выражена, количество и размер участков восковидного некроза значимо меньше, чем у контрольных крыс. Площадь воспалительных инфильтратов незначительна. В отличие от контрольных животных эндомизий сосудов четко выражен. Поперечная исчерченность скелетной мускулатуры сохранена. Капиллярная сеть хорошо различима, капилляры идут прямо и располагаются вдоль мышечных волокон (фиг.3б).
Таким образом, пример свидетельствует о том, что соединение ГК-2 проявляет не только выраженную ангиогенную, но и противоишемическую активность, которая, по всей видимости, связана со способностью соединения стимулировать неоангиогенез в поврежденной икроножной мышце.
Пример 3. Влияние соединения ГК-2 на формирование трубчатых структур (тубулогенез) в культуре клеток эндотелия человека HUVEC.
Оценку ангиогенной активности соединения ГК-2 в экспериментах in vitro проводили на культуре изолированных клеток эндотелия человека HUVEC. Такой подход обусловлен тем, что согласно литературным данным образование трубчатых структур (тубулогенез) является начальной стадией ангиогенеза. В начестве эталона использовали NGF.
Клетки эндотелия рассаживали в среде ДМЕМ, содержащую 20 мМ Hepes, 2 мМ L-глутамина, гепарин (5 Ед/мл), ECGF (20 мкг/мл), 10% FBS с плотностью 3,5 тыс. на 96-луночные планшеты, покрытые полилизином. ГК-2 (10-6 М) и NGF (10-9 М) вносили через 30 мин после рассеивания клеток на планшеты и затем каждые 48 ч (всего 3 внесения). После чего для оценки влияния соединения ГК-2 и NGF на формирование трубчатых структур эндотелиальные клетки фотографировали с использованием фотокамеры Canon инвертированного микроскопа Nikon Eclipse TS-100F. Для обсчета тубулогенеза использовали программу ImageJ. Измеряли длину микротрубочек в 5 полях зрения каждой лунки.
Полученные результаты обобщены в таблице 2, из которых следует, что длина микротрубочек в культуре клеток эндотелия, в которую вносили соединение ГК-2, статистически значимо (р<0,001) больше, чем в контроле и сравнима с таковой при внесении NGF.
Таким образом, результаты экспериментов in vitro свидетельствуют о том, что ГК-2 подобно NGF активирует тубулогенез - начальную стадию ангиогенеза.
Описание чертежей
Фиг.1. Влияние соединения ГК-2 (в/б, 1 мг/кг/сут, 14 дней) на суммарную длину сосудов в 1 мм2 ткани в условиях ишемии задней конечности крысы.
По оси ординат - длина сосудов в мкм/мм. По оси абсцисс - группы животных.
Из фиг. 1 видно, что у животных, получавших соединение ГК-2, суммарная длина сосудов в 1 мм ткани ишемизированной конечности статистически значимо больше (Р=0,003), чем в контроле.
Фиг.2. Влияние соединения ГК-2 (в/б, 1 мг/кг/сут, 14 дней) на количество сосудов в 1 мм2 ткани в условиях ишемии задней конечности крысы.
По оси ординат - количество сосудов в 1 мм. По оси абсцисс - группы животных.
Из фиг. 2 видно, что у животных, получавших соединение ГК-2, количество сосудов в 1 мм2 ткани ишемизированной конечности статистически значимо больше (Р<0,001), чем в контроле.
Фиг.3. Морфологическая картина задней икроножной мышцы крысы (х 10).
Верхняя панель - контроль (а), нижняя - ГК-2 (в/б, 1 мг/кг/сут, 14 дней) (б).
ЗВ - зона воспаления, НМВ - некротизированные мышечные волокна; MB - мышечные волокна, ФС - фрагмент сосуда; К - капилляры.
| Таблица 1 | |||||
| Влияние соединений ГК-2, ГК-4, ГК-5, ГК-6 (1 мг/кг, в/б) на плотность сосудистого русла в ишемизированной мышце крыс (арифметические средние, их стандартные ошибки и 95% доверительные интервалы). | |||||
| Показатель | Соединения | ||||
| Контроль, n=23 | ГК-2, n=15 | ГК-4, n=8 | ГК-5 n=10 | ГК-6, n=14 | |
| Плотность сосудистого русла, мкм/мм2 | 13607±715 12123÷15091 | 21024±1344 18142÷23906 Р<0,001 | 14363±812 10443÷15284 р≈0,822 | 15201±1411 11216÷16002 р≈0,057 | 17937±1185 15376÷20497 p≈0,008 |
| Таблица 2 | |||
| Влияние соединения ГК-2 (10-6) и NGF(10-9 M) на формирование микротрубочек в культуре изолированных клеток эндотелия человека-HUVEC (указаны медианы, нижний и верхний квартили). | |||
| Показатель | Экспериментальные группы | ||
| Контроль, n=92 | NGF, n=78 | ГК-2, n=54 | |
| Суммарная длина микротрубочек, мкм | 20 | 36 | 38 |
| 14÷29 | 26÷49 | 27÷53 | |
| p<0,001 | |||
| P<0,001 | |||
Claims (4)
1. Применение гексаметилендиамида бис-(N-моносукцинил-глутамил-лизина) в качестве средства, обладающего ангиогенной активностью.
2. Применение гексаметилендиамида бис-(N-ацетил-лизил-глутаминовой кислоты) в качестве средства, обладающего ангиогенной активностью.
3. Применение амида N-аминокапроил-глицил-лизина в качестве средства, обладающего ангиогенной активностью.
4. Применение гексаметилендиамида бис-(N-аминокапроил-глицил-лизина) в качестве средства, обладающего ангиогенной активностью.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013122696A RU2613184C2 (ru) | 2013-05-17 | 2013-05-17 | Вещества, обладающие ангиогенной активностью |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013122696A RU2613184C2 (ru) | 2013-05-17 | 2013-05-17 | Вещества, обладающие ангиогенной активностью |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013122696A RU2013122696A (ru) | 2014-11-27 |
| RU2613184C2 true RU2613184C2 (ru) | 2017-03-15 |
Family
ID=53381155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013122696A RU2613184C2 (ru) | 2013-05-17 | 2013-05-17 | Вещества, обладающие ангиогенной активностью |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2613184C2 (ru) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107032975B (zh) * | 2016-02-03 | 2022-06-28 | 大鹏药品工业株式会社 | 一种高纯度环己烯酮长链醇的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004046169A2 (en) * | 2002-11-18 | 2004-06-03 | The Johns Hopkins University | Activation of peptide prodrugs by hk2 |
| RU2363488C1 (ru) * | 2007-11-26 | 2009-08-10 | Закрытое акционерное общество "Эксесс Байосаинс" | Фармацевтическая композиция на основе пептида, регулирующего нарушения ангиогенеза, и способ ее применения |
| RU2410392C2 (ru) * | 2009-02-16 | 2011-01-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова РАМН | Дипептидные миметики нейротрофинов ngf и bdnf |
-
2013
- 2013-05-17 RU RU2013122696A patent/RU2613184C2/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004046169A2 (en) * | 2002-11-18 | 2004-06-03 | The Johns Hopkins University | Activation of peptide prodrugs by hk2 |
| RU2363488C1 (ru) * | 2007-11-26 | 2009-08-10 | Закрытое акционерное общество "Эксесс Байосаинс" | Фармацевтическая композиция на основе пептида, регулирующего нарушения ангиогенеза, и способ ее применения |
| RU2410392C2 (ru) * | 2009-02-16 | 2011-01-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова РАМН | Дипептидные миметики нейротрофинов ngf и bdnf |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| В.А.КРАЙНЕВ и др. Оригинальный дипептидный миметик фактора роста нервов ГК-2 ограничивает проявление геморрагического инсульта у крыс. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2012, т.154, N11, стр.598-601. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013122696A (ru) | 2014-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gelain et al. | Slow and sustained release of active cytokines from self-assembling peptide scaffolds | |
| De Winter et al. | Injury-induced class 3 semaphorin expression in the rat spinal cord | |
| Hata et al. | RGMa inhibition promotes axonal growth and recovery after spinal cord injury | |
| Lebrun-Julien et al. | Inhibition of p75NTR in glia potentiates TrkA-mediated survival of injured retinal ganglion cells | |
| ES2392596T3 (es) | Neurregulina en el tratamiento de enfermedades cardiacas | |
| Marmiroli et al. | The glutamatergic neurotransmission in the central nervous system | |
| Sang et al. | A self-assembling nanomaterial reduces acute brain injury and enhances functional recovery in a rat model of intracerebral hemorrhage | |
| JP4971149B2 (ja) | Ｔｄｆ関連化合物およびその類似体 | |
| Zou et al. | Kirenol inhibits RANKL-induced osteoclastogenesis and prevents ovariectomized-induced osteoporosis via suppressing the Ca2+-NFATc1 and Cav-1 signaling pathways | |
| Khan et al. | Fibulin-2 is essential for angiotensin II-induced myocardial fibrosis mediated by transforming growth factor (TGF)-β | |
| San Antonio et al. | A key role for the integrin α2β1 in experimental and developmental angiogenesis | |
| Fang et al. | P2X7R suppression promotes glioma growth through epidermal growth factor receptor signal pathway | |
| Wei et al. | Hydroxysafflor yellow A promotes neovascularization and cardiac function recovery through HO-1/VEGF-A/SDF-1α cascade | |
| Zhang et al. | Induction-and conditioning-protocol dependent involvement of NR2B-containing NMDA receptors in synaptic potentiation and contextual fear memory in the hippocampal CA1 region of rats | |
| Chen et al. | Administration of sonic hedgehog protein induces angiogenesis and has therapeutic effects after stroke in rats | |
| Francki et al. | Angiogenic properties of human placenta-derived adherent cells and efficacy in hindlimb ischemia | |
| Lei et al. | Brain recovery mediated by toll-like receptor 4 in rats after intracerebral hemorrhage | |
| Schuster et al. | Distinct anti-inflammatory properties of alpha1-antitrypsin and corticosteroids reveal unique underlying mechanisms of action | |
| Smith et al. | Enhanced neuron growth and electrical activity by a supramolecular netrin-1 mimetic nanofiber | |
| Calì et al. | CXCR4-mediated glutamate exocytosis from astrocytes | |
| Cao et al. | Soluble receptor for advanced glycation end-products promotes angiogenesis through activation of STAT3 in myocardial ischemia/reperfusion injury | |
| Song et al. | Hemokinins modulate endothelium function and promote angiogenesis through neurokinin-1 receptor | |
| Schweigreiter et al. | Nogo in the injured spinal cord | |
| Frederick et al. | Neuroimmune signaling at the brain borders | |
| US20060040253A1 (en) | Use of Smad3 inhibitor in the treatment of fibrosis dependent on epithelial to mesenchymal transition as in the eye and kidney |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |