RU2699029C1 - Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке - Google Patents
Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке Download PDFInfo
- Publication number
- RU2699029C1 RU2699029C1 RU2018143623A RU2018143623A RU2699029C1 RU 2699029 C1 RU2699029 C1 RU 2699029C1 RU 2018143623 A RU2018143623 A RU 2018143623A RU 2018143623 A RU2018143623 A RU 2018143623A RU 2699029 C1 RU2699029 C1 RU 2699029C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- stem cells
- cells
- mesenchymal stem
- matrix
- tissue
- Prior art date
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 17
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 title claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 10
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000000589 cicatrix Anatomy 0.000 abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 9
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 9
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 5
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 5
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 5
- YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N sodium;(2s,3s,4s,5r,6r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(2s,3s,4r,5r,6r)-6-[(2r,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2- Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 YWIVKILSMZOHHF-QJZPQSOGSA-N 0.000 description 5
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001448 anionic polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002301 glucosamine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000000754 myometrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000518 rheometry Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000110 selective laser sintering Methods 0.000 description 1
- 150000003377 silicon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000030968 tissue homeostasis Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/44—Vessels; Vascular smooth muscle cells; Endothelial cells; Endothelial progenitor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для улучшения состояния рубца на матке. Для этого вводят мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Указанные клетки наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты в конечной концентрации 1,5*106/мл. Затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя. Изобретение обеспечивает стимуляцию регенерации рубца на матке. 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, биотехнологии, регенеративной медицине, фармакологии и может быть использовано при создании клеточного продукта, используемых в тканевой инженерии при пластике или замещении дефектов тканей организма с обеспечением стимуляции их регенерации.
В настоящее время в связи с увеличивающимся объемом разработок клеточных препаратов, особое значение приобретает разработка скаффолдов (матриц) для клеточных культур, которая будет обеспечивать фиксацию клеток в месте нанесения, и создавать благоприятные условия для клеточной адгезии, транспортировки питательных веществ, кислорода, и продуктов обмена.
Определенными условиями для матрицы является ее биосовместимость и замещение регенерирующими тканями, которые будут сохранять функциональную структуру требуемой ткани и нетоксичность.
Известно много различных видов матриц, которые пытаются использовать в клеточной трансплантологии. Они подразделяются на матрицы с использованием фрагментов биологических тканей и синтетические скаффолды (Ларионов П.М., Терещенко В.П., Кирилова И.А. МЕТОДЫ СОЗДАНИЯ МАТРИЦ-НОСИТЕЛЕЙ ДЛЯ ТКАНЕВЫХ ЭКВИВАЛЕНТОВ КОСТНОЙ ТКАНИ // Успехи современного естествознания. - 2015. - №9-1. - С. 117-121; Uemura Т., Dong Y., Wang Y. et al. Transplantation of cultured bone cells using combinations of scaffolds and culture techniques. Biomaterials 2003; 24: 2277-86; Фомина Г.А., Масгутов Р.Ф., Штырлин В.Г. и др. Гидрогелевый матрикс на основе биосовместимых карбомеров для восполнения дефектов нервной ткани. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2007; II (4): 63-7; Бухарова Т.Б., Антонов Е.Н., Попов В.К. и др. Биосовместимость тканеинженерных конструкций на основе пористых полилактидных носителей, полученных методом селективного лазерного спекания, и мультипотентных стромальных клеток костного мозга; Клеточные технологии в биологии и медицине 2010; 1: 40-6; Мелихова B.C., Сабурина И.Н., Орлов А.А. и др. Моделирование функционального остеогенеза с использованием биодеградируемого матрикса и аутогенных стромальных клеток подкожной жировой ткани. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2009; IV (1): 59-68; Бармашева А.А., Шарутина И.А., Николаенко Н.С. и др. Культивирование стромальных клеток костного мозга крысы на коллагене I типа разного происхождения. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия 2009; IV (4): 41-7; КОЛЛАГЕН-ХИТОЗАНОВАЯ МАТРИЦА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В КЛЕТКИ НЕЙРОНАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ. МАРКЕРНЫЙ АНАЛИЗ // Фундаментальные исследования. - 2012. - №1. - С. 18-23; Волков А.В. Краткий обзор коммерчески доступных клеточных продуктов для восстановления кожных покровов. Гены и клетки. - 2006; 1 (4): 62-65).
Рассасывающиеся силикагели известны из уровня техники. Так, например, в немецкой заявке на патент DE 19609551 С1 (C08L 83/00; D01D 5/00; D01F 9/08; D01F 9/20) описаны биологически расщепляющиеся и рассасывающиеся волокна. Подобные волокна могут быть изготовлены с помощью зольгель технологии, в соответствии с которой из прядильной массы вытягивают нити, при необходимости подвергаемые последующей сушке. Прядильная масса содержит одно или несколько частично или полностью гидролитически конденсированных соединений кремния, образующихся в результате гидролитической конденсации мономеров общей формулы SiX4. Недостаток предлагаемых в цитируемой заявке волокон состоит в том, что их испытание на цитотоксичность при расщеплении, осуществляемом непосредственно по завершении процесса прядения, не приводит к оптимальным результатам, в связи с чем указанные волокна следует считать в определенной степени цитотоксичными. Подобная токсичность волокон, проявляющаяся при их применении в медицине или медицинской технике, например, в сфере заживления ран, как правило, является нежелательной. Кроме того, предлагаемый в цитируемой заявке способ изготовления волокон страдает недостатком, состоящим в том, что смесь, образующаяся на стадии гидролитической конденсации после удаления растворителя, является многофазной, и для удаления твердого вещества приходится осуществлять ее фильтрование. Помимо этого вследствие образования твердой фазы и необходимости фильтрования теряют значительную часть пригодного для прядения золя. В соответствии с предлагаемым в цитируемой заявке способом не удается также надежно предотвращать происходящее во время созревания образование довольно значительного количества твердой фазы, прежде всего гелеобразование. Подобное образование твердой фазы обусловливает дополнительное сокращение количества пригодной для прядения зольмассы.
Основной недостаток натуральных матриц является непредсказуемая резорбция и нежелательная защитная реакция макрофагов, что существенно замедляет образование новой ткани. Также аллогенные и ксеногенные трансплантаты несут с собой иммунологический и инфекционный риск.
Недостатком синтетических матриц чаще всего является их плохая биосовместимость, токсичность и отсутствие питательной среды для культуры помещенных на нее клеток.
Целью нашего изобретения является создание более эффективного способа использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке за счет использования матрицы с клеточной культурой, которая будет представлять собой синтетический комплекс со свойствами биологически совместимой матрицы. Скаффолд будет отвечать необходимым условиям, а именно, отсутствие токсичности, возможность адгезии, пролиферации и дифференцировки помещенных клеток и резорбция обычными биологическими путями.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека, перед применением наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл, и затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя.
В качестве клеточной культуры были взяты мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Данный вид клеток является оптимальным клеточным источником, ввиду своих свойств. Это плюрипотентность и способность дифференцироваться в клетки мезенхимального ряда, а так же видимый иммунофенотипический профиль МСК, позволяющий избегать отторжения иммунной системой хозяина.
В качестве скоффолда был взят гидрогель на основе натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроната натрия.
Натрий карбоксиметилцеллюлоза (КМЦ) является анионным водорастворимым полимером, полученным из целлюлозы и обладает следующими функциями и свойствами: действует в качестве связующего вещества, стабилизатора, защитного коллоида и вещества, контролирующего реологию или поток. Вещество физиологически инертно и является анионным полиэлектролитом. Растворы всех типов КМЦ демонстрируют псевдопластичные свойства.
Гиалуронат натрия - это полисахарид, состоящий из дисахаридных повторяющихся цепей. Является производным от глюкозамина несульфированного, который входит в состав эпителиальной, соединительной и нервной ткани и является главным элементом матрикса клетки.
Он создает физиологическую среду для деления и дифференциации клеток, участвует в создание оптимальных условий для нормального клеточного и тканевого гомеостаза, обеспечивает выведение продуктов жизнедеятельности, транспортировку питательных веществ.
Также гиалуронат натрия обладает следующими свойствами: участвует в синтезе коллагена и эластина, выполняет пластическую функцию, способствует понижению показателей эндогенной интоксикации, способствует предотвращению образования рубцовой ткани и равномерному заполнению дефектов новообразовавшейся тканью.
Изобретение поясняется фиг. 1 и 2. На фиг. 1 показана область рубца группы, где МСК вводились на растворе NaCl 0,9% (физиологический раствор).
На рисунке А мы видим выраженное преобладание соединительной ткани (1) над мышечной тканью (2). Отмечается слабая инвазия миоцитов в область рубца. Большинство сосудов (3) (рисунок В) тонкие, с несостоятельной стенкой. Пласты мышечной ткани (рисунок С) разделены грубыми, толстыми соединительнотканными септами (4).
На фиг. 2 показано состояние области рубца после введения в нее МСК на гелевой матрице, что позволило им воздействовать именно в месте нанесения. На рисунке D, мы видим преобладание мышечной ткани (2) над соединительной (1). Область характеризуется высокой степенью инвазии миоцитов. Много толстых сосудов (3) (рисунок Е) с полноценной мышечной стенкой. Соединительнотканные септы (4) тонкие (рисунок F).
Заявляемая матрица была апробирована на 40 лабораторных самках альбиноса серых крыс породы Wistar, массой тела 200-230 г.
Для введения животным использовали мезенхимные стволовые клетки периваскулярного пространства пупочного канатика человека. Образцы (фрагмент пуповины 5-10 см) использовали в экспериментах только после получения подписанного информированного согласия родителей ребенка. Клетки выделяли согласно методике, описанной ранее, в условиях сертифицированного чистого помещения с соблюдением процедур контроля качества - подтверждением кариотипа, иммунофенотипа, отсутствия инфекций, генетической идентификацией методом STR-типирования (Айзенштадт и др., 2018 - 2018 Характеристики мезенхимных стромальных клеток пупочного канатика человека при длительном культивировании in vitro. Айзенштадт А.А., Сказина М.А., Котелевская Е.А., Елсукова Л.В., Золина Т.Л., Пономарцев Н.В., Галактионов Н.К., Галембо И.А., Иволгин Д.А., Масленникова И.И., Енукашвили Н.И. Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, том 10, №1, с. 11-19; 2017 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КУЛЬТУРЫ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ИЗ ПЕРИВАСКУЛЯРНОГО ПРОСТРАНСТВА ВЕНЫ ПУПОЧНОГО КАНАТИКА Авторы: Багаева В.В., Айзенштадт А.А., Александрова Л.В., Енукашвили Н.И., Адылов Ш.Ф., Золина Т.Л., Урусова М.Е. патент РФ №2620981). Клетки культивировали без использования материалов животного происхождения. В день эксперимента клетки снимали с подложки, обрабатывая раствором трипсина (0,25%) с добавлением ЭДТА до 0,02%, затем отмывали от остатков трипсина и ресуспендировали в физиологическом растворе или в геле из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл. Каждому животному вводили 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя
Модель: травма неизмененной мышцы матки, нанесенная скальпелем. После в шов на левом роге матки у 20 крыс вводилась культура МСК на физиологическом растворе, другим 20 животным в шов на матке инъецировались МСК на основе геля с натрием гиалуроната и натрием карбоксиметилцеллюлозы, рана на правом роге матки во всех 40 случаях дополнительному воздействию не подвергалась и являлась контрольной для дальнейшего сравнения сформированных рубцов. Выведение из эксперимента проводилось на 14-е сутки после операции.
На фиг. 1, рисунок А, мы видим выраженное преобладание соединительной ткани (1) над мышечной тканью (2). Отмечается слабая инвазия миоцитов в область рубца. Большинство сосудов (3) (рисунок В) тонкие, с несостоятельной стенкой. Пласты мышечной ткани (рисунок С) разделены грубыми, толстыми соединительнотканными септами (4).
На фиг. 2 показано состояние области рубца после введения в нее МСК на гелевой матрице, что позволило им воздействовать именно в месте нанесения. На рисунке D, мы видим преобладание мышечной ткани (2) над соединительной (1). Область характеризуется высокой степенью инвазии миоцитов. Много толстых сосудов (3) (рисунок Е) с полноценной мышечной стенкой. Соединительнотканные септы (4) тонкие (рисунок F).
Оценка результатов исследования проводилась с помощью разработанной шкалы гистологических изменений, которая оценивала степень восстановления поврежденных миоцитов, а именно, учитывала соотношение мышечной и соединительной ткани в области рубца, толщину фиброзных септ, степень инвазии миоцитов в область рубца, количество сосудов, а также толщину сосудистой стенки и калибр сосудов.
Сравнительная характеристика матриц, на которую были нанесены МСК, показала большую эффективность воздействия клеточной культуры при использовании геля на основе натрия гиалуроната и натрия карбоксиметилцеллюлозы. Предположительно это связано с более плотной структурой и адгезивными свойствами геля, который позволил клеткам воздействовать именно в той области, на которую они были нанесены.
Claims (1)
- Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке, отличающийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки, полученные из периваскулярного пространства пупочного канатика человека, перед применением наносят на матрицу на основе геля из натрия карбоксиметилцеллюлозы и гиалуроновой кислоты конечной концентрации 1,5*106/мл и затем матрицу размещают в области рубца в дозе 300 тыс. клеток в 250 мкл раствора-носителя.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2699029C1 true RU2699029C1 (ru) | 2019-09-03 |
Family
ID=67851753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018143623A RU2699029C1 (ru) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2699029C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2781150C1 (ru) * | 2021-11-02 | 2022-10-06 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Способ активизации тканевой регенерации и заживления послеоперационной раны на матке при кесаревом сечении |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133623C1 (ru) * | 1996-05-21 | 1999-07-27 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ профилактики эндометрита после кесарева сечения |
| US20110256186A1 (en) * | 2008-10-10 | 2011-10-20 | Histocell, S.L. | biomaterial based on wharton's jelly from the human umbilical cord |
| WO2015193737A1 (en) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | Igenomix S.L. | Stem cell therapy in endometrial pathologies |
| RU2620981C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-05-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Способ получения культуры мезенхимных стволовых клеток человека из периваскулярного пространства вены пупочного канатика |
-
2018
- 2018-12-10 RU RU2018143623A patent/RU2699029C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2133623C1 (ru) * | 1996-05-21 | 1999-07-27 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ профилактики эндометрита после кесарева сечения |
| US20110256186A1 (en) * | 2008-10-10 | 2011-10-20 | Histocell, S.L. | biomaterial based on wharton's jelly from the human umbilical cord |
| WO2015193737A1 (en) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | Igenomix S.L. | Stem cell therapy in endometrial pathologies |
| RU2620981C2 (ru) * | 2015-11-18 | 2017-05-30 | Общество с ограниченной ответственностью "Покровский банк стволовых клеток" | Способ получения культуры мезенхимных стволовых клеток человека из периваскулярного пространства вены пупочного канатика |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DAZHI FAN et al., Umbilical cord mesenchyme stem cell local intramuscular injection for treatment of uterine niche, Medicine (Baltimore), 2017, Nov; 96(44): e8480. PMID: 29095305. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2781150C1 (ru) * | 2021-11-02 | 2022-10-06 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Способ активизации тканевой регенерации и заживления послеоперационной раны на матке при кесаревом сечении |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yang et al. | Recombinant human collagen/chitosan-based soft hydrogels as biomaterials for soft tissue engineering | |
| AU2019218711B2 (en) | Cross-linked hyaluronic acids and combinations with PRP/BMC | |
| CA2956075C (en) | Modified alginates for anti-fibrotic materials and applications | |
| EP1456357B1 (en) | Pluripotent embryonic-like stem cells derived from teeth and uses thereof | |
| US7601525B2 (en) | Alginate gel scaffold having a plurality of continuous parallel microtubular copper capillaries | |
| CN103877617B (zh) | 可注射蚕丝素蛋白-海藻酸盐双交联水凝胶及其制备方法和使用方法 | |
| JP6633628B2 (ja) | 口腔粘膜を再生するためのバイオマテリアル足場材料 | |
| SG185279A1 (en) | Method for preparing porous scaffold for tissue engineering, cell culture and cell delivery | |
| Wu et al. | Recombinant human collagen I/carboxymethyl chitosan hydrogel loaded with long-term released hUCMSCs derived exosomes promotes skin wound repair | |
| Ding et al. | Zinc-mineralized diatom biosilica/hydroxybutyl chitosan composite hydrogel for diabetic chronic wound healing | |
| US20100158982A1 (en) | Sheet for guiding regeneration of mesenchymal tissue and production method thereof | |
| Liu et al. | High-strength double-network silk fibroin based hydrogel loaded with Icariin and BMSCs to inhibit osteoclasts and promote osteogenic differentiation to enhance bone repair | |
| WO2024120364A1 (zh) | 一种水凝胶复合物及其应用 | |
| RU2483756C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОДЕГРАДИРУЕМОГО КОМПОЗИТНОГО МАТРИКСА НА ОСНОВЕ РЕГЕНЕРИРОВАННОГО ФИБРОИНА ШЕЛКА Bombyx mori И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ | |
| RU2530622C2 (ru) | Биотрансплантат для восстановления объема костной ткани при дегенеративных заболеваниях и травматических пвореждениях костей и способ его получения | |
| RU2699029C1 (ru) | Способ использования мезенхимальных стволовых клеток для улучшения состояния рубца на матке | |
| US20120003176A1 (en) | Hydrogel-forming composition comprising natural and synthetic segments | |
| TWI839378B (zh) | 交聯玻尿酸及與prp/bmc的組合 | |
| CN113559324B (zh) | 纳米复配液在软骨细胞自体修复及再生医学美学中的应用 | |
| CN115770326B (zh) | 用于关节腔内软骨修复再生的凝胶体系及其制备方法和用途 | |
| Priddy-Arrington et al. | Placental-Derived Mesenchymal Stem Cell Encapsulated Chitosan-Genipin Injectable Hydrogels for Osteogenic Repair | |
| CN118681070A (zh) | 一种引导骨组织再生膜及其制备方法与应用 | |
| CN117599253A (zh) | 一种用于骨缺损再生的氨基酸水凝胶/无定形磷酸钙复合材料及其制备方法 | |
| CN117357701A (zh) | 一种促成骨生物膜及其制备方法、应用 | |
| CN119499169A (zh) | 一种含富血小板血浆外泌体水凝胶及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201211 |