RU2687498C2 - Экстракт водорослей для использования в качестве иммуномодулирующего агента - Google Patents
Экстракт водорослей для использования в качестве иммуномодулирующего агента Download PDFInfo
- Publication number
- RU2687498C2 RU2687498C2 RU2016119154A RU2016119154A RU2687498C2 RU 2687498 C2 RU2687498 C2 RU 2687498C2 RU 2016119154 A RU2016119154 A RU 2016119154A RU 2016119154 A RU2016119154 A RU 2016119154A RU 2687498 C2 RU2687498 C2 RU 2687498C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- algae extract
- algae
- ulva
- present
- extract
- Prior art date
Links
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 title claims abstract description 176
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 176
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title description 4
- 241000196252 Ulva Species 0.000 claims abstract description 121
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 38
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 34
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 34
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 34
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 27
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 25
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000004576 sand Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 10
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 27
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N Xylose Natural products O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 26
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 25
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 16
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 16
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 15
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 claims description 15
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 12
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 10
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 9
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 8
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 7
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 6
- 102100036848 C-C motif chemokine 20 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000713099 Homo sapiens C-C motif chemokine 20 Proteins 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 4
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 4
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 claims description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 2
- 208000009663 Acute Necrotizing Pancreatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 claims description 2
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 2
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005753 Circoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 241001112695 Clostridiales Species 0.000 claims description 2
- 201000000297 Erysipelas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 claims description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 2
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058096 Pancreatic necrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008071 Parvoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 206010057343 Parvovirus infection Diseases 0.000 claims description 2
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 claims description 2
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 claims description 2
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 claims description 2
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003836 bluetongue Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003512 furunculosis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000002197 Ehlers-Danlos syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 abstract 3
- 241001474374 Blennius Species 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 9
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 9
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 9
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 108091058560 IL8 Proteins 0.000 description 8
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000969443 Ulva ohnoi Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- -1 for example Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Substances C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-IGMARMGPSA-N Carbon-12 Chemical compound [12C] OKTJSMMVPCPJKN-IGMARMGPSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N N,O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide Chemical compound C[Si](C)(C)O\C(C(F)(F)F)=N\[Si](C)(C)C XCOBLONWWXQEBS-KPKJPENVSA-N 0.000 description 2
- 102000000536 PPAR gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010016731 PPAR gamma Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000949231 Sylon Species 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 241000196251 Ulva arasakii Species 0.000 description 2
- 241001648253 Ulva scandinavica Species 0.000 description 2
- 241000196247 Ulvales Species 0.000 description 2
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 2
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 2
- 208000005562 infectious bovine rhinotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- ZXSQEZNORDWBGZ-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydropyrrolo[2,3-b]pyridin-2-one Chemical compound C1=CN=C2NC(=O)CC2=C1 ZXSQEZNORDWBGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRQDDZWMEGEOOO-UHFFFAOYSA-N 2-trimethylsilylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)[Si](C)(C)C HRQDDZWMEGEOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000517753 Acanthophora Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000217270 Cornucopiae Species 0.000 description 1
- 241001362614 Crassa Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000199616 Lingulata Species 0.000 description 1
- 241001059271 Micrococca Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241001243785 Myriotrema Species 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- 241001398042 Serica Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000867810 Tetragona Species 0.000 description 1
- 241001601363 Ulva armoricana Species 0.000 description 1
- 241000240004 Ulva beytensis Species 0.000 description 1
- 241000406704 Ulva clathrata Species 0.000 description 1
- 241000894477 Ulva compressa Species 0.000 description 1
- 241000951301 Ulva curvata Species 0.000 description 1
- 241000919790 Ulva erecta Species 0.000 description 1
- 241000158200 Ulva fasciata Species 0.000 description 1
- 241001648251 Ulva fenestrata Species 0.000 description 1
- 241001648259 Ulva flexuosa Species 0.000 description 1
- 241001046503 Ulva gigantea Species 0.000 description 1
- 241000196245 Ulva intestinalis Species 0.000 description 1
- 241001627288 Ulva laetevirens Species 0.000 description 1
- 241000893983 Ulva linza Species 0.000 description 1
- 241000662729 Ulva lobata Species 0.000 description 1
- 241000920698 Ulva reticulata Species 0.000 description 1
- 241001277525 Ulva rigida Species 0.000 description 1
- 241001046504 Ulva rotundata Species 0.000 description 1
- 241000920696 Ulva spinulosa Species 0.000 description 1
- 241000662732 Ulva stenophylla Species 0.000 description 1
- 241000341880 Ulva stipitata Species 0.000 description 1
- 241001358228 Ulva sublittoralis Species 0.000 description 1
- 241001648248 Ulva taeniata Species 0.000 description 1
- 241000256035 Ulva torta Species 0.000 description 1
- 241000196246 Ulvaceae Species 0.000 description 1
- 241000317854 Uncinata Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactopyranuronic acid Natural products OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O AEMOLEFTQBMNLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229910052729 chemical element Inorganic materials 0.000 description 1
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000003653 coastal water Substances 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical group C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical group 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000006140 methanolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910001958 silver carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L silver carbonate Substances [Ag].[O-]C([O-])=O LKZMBDSASOBTPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/02—Algae
- A61K36/05—Chlorophycota or chlorophyta (green algae), e.g. Chlorella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55583—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/13—Preparation or pretreatment of starting material involving cleaning, e.g. washing or peeling
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/15—Preparation or pretreatment of starting material involving mechanical treatment, e.g. chopping up, cutting or grinding
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту водорослей рода ульва для модуляции иммунной реакции человека или животного. Экстракт водорослей рода ульва содержит сульфатированные и не сульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа, для модуляции иммунной реакции человека или животного. Экстракт водорослей рода ульва получен способом, в котором: a) водоросли промываются и очищаются от песка; b) указанные водоросли измельчаются; c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы; d) указанная жидкая фаза осветляется; e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше и f) отфильтрованный сок, полученный на стадии e), концентрируется, а затем сушится; для его использования для модулирования иммунной реакции человека или животного. Вышеописанный экстракт эффективно модулирует иммунную реакцию человека или животного. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 16 ил., 6 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой отосится изобретение
Настоящее изобретение относится к экстракту водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, для его применения с целью модуляции иммунной реакции у человека или животного, в частности, для стимулирования иммунной реакции по отношению к инфекциям. Оно также относится к не-терапевтическому применению экстракта зеленых водорослей типа Ulva для модуляции иммунной реакции человека или животного.
Уровень техники
Модуляция иммунной реакции представляет собой важную линию лечения для множества заболеваний. На самом деле, важно, например, улучшить иммунную реакцию у пациентов, страдающих от инфекций.
Стимулирование иммунной реакции, кроме того, представляет собой механизм важный во многих отношениях. Например, известно, что материнское молоко обогащено IgA, антителами, которые делают возможной защиту новорожденного против определенного ряда инфекций. Интестинальные клетки, в частности эпителиальные клетки кишечника, экспонируются для различных патогенов, против которых продуцируются антитела. Затем эти антитела будут мигрировать по всей молочной железе, и они будут находиться в материнском молоке, обеспечивая тем самым защиту младенца. Всегда существует необходимость в идентификации новых веществ, способных стимулировать эту иммунную реакцию. В частности, эпителиальные клетки кишечника представляют собой предпочтительный активный центр, на котором могут действовать иммуностимулирующие вещества, вводимые перорально. Кроме того, существует необходимость в идентификации новых веществ, способных повысить реакцию на вакцинацию посредством стимулирования иммунной реакции, в частности, посредством их введения, дополнительного к вакцинации. Виды ульва (Ulvales, Chlorophyta) представляют собой распространенные водоросли, находящиеся в приливной зоне или в береговой полосе, затопляемой приливом. Они колонизируют твердые подложки, закрепляясь с помощью диска прикрепления, но определенные виды могут также образовывать свободно живущие дрейфующие формы. Ulvae представляют собой быстро растущие и легко приспосабливающиеся водоросли по отношению к пространству и поглощению питательных веществ. Их рост, в частности, наблюдается в столбе воде в заболоченных прибрежных водах и лагунах, где Ulva sp.распространяются как «зеленый прилив» (Fletcher, 1996). Результатом этого часто является массовое продуцирование и выбросы, производящие вредные газы во время их аккумуляции (Morand and Briand, 1996). До настоящего времени, эта биомасса имела очень низкую практическую пользу, и средства для ее использования, за исключением компоста (Maze et al. 1993, Cuomo et al. 1995), производства метана (Briand и Morand, 1997), потребления в пищу людьми (Perez, 1997) или в качестве основы для бумаги (Nicolucci and Monegato 1993), могут дать возможность для использования их специфических свойств.
Раскрытие изобретения
Авторы настоящего изобретения неожиданно показали, что экстракт водорослей рода ульва, в частности, экстракт зеленых водорослей типа Ulva, имеет иммуномодулирующие свойства.
Таким образом, настоящее изобретение относится к экстракту водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, содержащему сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа, для их использования с целью модуляции иммунной реакции человека или животного.
Оно также относится к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, содержащих сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа, для модуляции иммунной реакции человека или животного.
В частности, настоящее изобретение относится к экстракту водорослей, к его применению, как определено выше, или к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей, как определено выше, где полисахариды содержат маннозу и/или арабинозу, преимущественно, маннозу. Еще более конкретно, указанные полисахариды содержат, по меньшей мере, 0,005% маннозы и/или, по меньшей мере, 0,005% арабинозы, по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, преимущественно, по меньшей мере, 0,005% маннозы. Еще более конкретно, указанные полисахариды содержат маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,005 до 0,5%, например, от 0,005 до 0,20% или от 0,15 до 0,5% и/или арабинозу в количестве, находящемся в пределах от 0,005 до 0,5% по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, преимущественно, маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,005 до 0,5%, например, от 0,005 до 0,20% или от 0,15 до 0,5% по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
Кроме того, более конкретно, настоящее изобретение относится к экстракту водорослей для его применения, как определено выше, или к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей, как определено выше, где указанные полисахариды дополнительно содержат:
- галактозу и/или
- глюкозу; и/или
- рамнозу; и/или
- ксилозу; и/или
- глюкуроновую кислоту.
Более конкретно, указанные полисахариды содержат:
- от 0,05 до 0,5% галактозы и/или
- от 0,005 до 0,5% глюкозы, в частности, от 0,005 до 0,05% или от 0,05 до 0,5%; и/или;
- от 2 до 15% рамнозы; и/или
- от 0,1 до 1% ксилозы; и/или
- от 1 до 7% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом. Настоящее изобретение также относится к экстракту водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, которые могут быть получены с помощью способа приготовления, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше; и
f) отфильтрованный сок, полученный на стадии е), концентрируется, а затем сушится;
для его использования с целью модуляции иммунной реакции человека или животного.
Оно также относится к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, которые могут быть получены с помощью способа приготовления, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше; и
f) отфильтрованный сок, полученный на стадии e), концентрируется, а затем сушится; для модуляции иммунной реакции человека или животного.
В частности, настоящее изобретение относится к экстракту водорослей, к его использованию, как рассмотрено выше, или к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей, как показано выше, для стимулирования иммунной реакции человека или животного, в частности, в иммунной системе кишечника. В рамках настоящего изобретения, под «иммуномодулирующими» свойствами или под предоставлением возможности «модуляции иммунной реакции» понимаются значения, обычно приписываемые этим терминам и хорошо известные специалистам в данной области, в частности, это любое свойство, дающее возможность стимулирования или замедления иммунных реакций организма человека или организма животного.
В частности, экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением или не-терапевтического использования экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением дает возможность индуцирования экспрессии молекул адгезии и хемокинов, а именно, IL8 и/или IL-1α и/или IL1-β и/или IL6 и/или TNF-α и/или CCL20.
Таким образом, экстракт водорослей, как определено в рамках настоящего изобретения, является пригодным для использования при лечении и/или предотвращении инфекционных патологий, в частности, инфекционных патологий свиней, выбранных из: парвовирусной инфекции, Erysipelas Rhusiopathia, инфекционного ринита, гриппа, цирковирусной инфекции свиней, микоплазмы и колибактериоза; инфекционных патологий птиц, выбранных из: болезни Марека, болезни Ньюкасла, инфекционного бронхита, болезни Гумборо, оспы кур, микоплазмы, инфекционной анемии птиц, инфекционного ларинготрахеита, EDS (аденовирусной инфекции птиц) и птичьего гриппа; инфекционных патологий крупного рогатого скота, выбранных из: BVD (вирусных диарей крупного рогатого скота), энзоотической бронхопневмонии, IBR (инфекционного бычьего ринотрахеита), заболевания вирусного герпеса, клостридиального заболевания, колибактериоза, блутанга, короновирусного заболевания, ротавирусного заболевания и ринотрахеита; и инфекционных патологий разводимых и выращиваемых рыб и других водных животных и растений, выбранных из: гематопоэтического некроза, вибриоза, фурункулеза, инфекционного некроза поджелудочной железы и инфекционной анемии.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к экстракту водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, к его использованию при лечении и/или предотвращении инфекционной патологии, такой как рассмотрено выше.
В частности, экстракт водорослей, как определено в рамках настоящего изобретения, является пригодным для использования в рамках вакцинопрофилактики, в качестве дополнения к вакцинации.
Более конкретно, настоящее изобретение относится к экстракту водорослей, к его использованию, как показано выше, где экстракт водорослей используется в фармацевтической композиции для перорального введения.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей для его использования, как показано выше, применяется в фармацевтической композиции парентеральным способом.
Настоящее изобретение также относится к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей, как показано выше, где экстракт водорослей используется в качестве пищевой добавки для перорального введения.
Экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, в явном виде описан в заявке на патент FR 1261909.
Как показано выше, экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, относится к экстракту водорослей рода ульва, в частности, к экстракту зеленых водорослей типа Ulva, содержащему сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа. Более конкретно, экстракт водорослей содержит сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер меньше чем 40, 30, 20 или 15 кДа. Еще более конкретно, сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды экстракта водорослей имеют размер равный или меньший чем 15 кДа.
В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, содержит сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер равен или меньше чем 50 кДа, за исключением сульфатированных и несульфатированных полианионных полисахаридов, у которых размер больше чем 50 кДа.
В соответствии с другим вариантом осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, содержит сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 15 кДа, за исключением сульфатированных и несульфатированных полианионных полисахаридов, у которых размер больше чем 15 кДа.
Дальтон (Да) представляет собой единицу массы, определенную как равная одной двенадцатой от массы атома углерода 12, массы, которая будет затем находиться посредством оценки для смеси нескольких изотопов (в основном углерода 12 и углерода 13, соответственно, имеющих 6 и 7 нейтронов, в дополнение к 6 протонам любого атома углерода). Дальтон с очень хорошей точностью представляет собой массу атома водорода, точное значение составляет 1,00794 аем (атомная единица массы). Килодальтон (кДа) равен 1000 Да.
В рамках настоящего изобретения, массы, рассмотренные в кДа, определяются с помощью любого способа, обычно используемого специалистом в данной области; в частности, массы сульфатированных и несульфатированных полианионных полисахаридов экстрактов водорослей могут различаться с помощью ультрафильтрации на мембранах, делающих возможной только фильтрацию молекул определенных размеров.
В частности, и как сказано ранее, полисахариды экстракта водорослей, описанные в рамках настоящего изобретения, содержат маннозу и/или арабинозу, предпочтительно, маннозу. Более конкретно, указанные полисахариды содержат, по меньшей мере, 0,005% маннозы и/или, по меньшей мере, 0,005% арабинозы, по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, а именно, по меньшей мере, 0,01% маннозы и/или, по меньшей мере, 0,01% арабинозы. Еще более конкретно, указанные полисахариды содержат маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,50%, например, от 0,01 до 0,20% или от 0,20 до 0,5%, и/или арабинозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,5% по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, а именно, маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,03 до 0,45%, например, от 0,03 до 0,15% или от 0,15 до 0,45%, и/или арабинозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,2%.
Преимущественно, указанные полисахариды содержат маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,50%, например, от 0,01 до 0,20% или от 0,20 до 0,5%, а именно, маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,03 до 0,45%, например, от 0,03 до 0,15% или от 0,15 до 0,45%.
Конкретно, и как отмечено ранее, указанные полисахариды дополнительно содержат:
- галактозу и/или
- глюкозу; и/или
- рамнозу; и/или
- ксилозу; и/или
- глюкуроновую кислоту.
Еще более конкретно, указанные полисахариды содержат:
- от 0,05 до 0,5% галактозы, а именно, от 0,1 до 0,4%; и/или
- от 0,005 до 0,5% глюкозы, в частности, от 0,005 до 0,05%, а именно, от 0,01 до 0,03% или от 0,05 до 0,5%; в %; и/или
- от 2 до 15% рамнозы, а именно, от 5 до 10%; и/или
- от 0,1 до 1% ксилозы, а именно, от 0,3 до 0,7%; и/или
- от 1 до 7% глюкуроновой кислоты, а именно, от 1 до 5%;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
Таким образом, можно отметить, например, экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, содержащий:
- маннозу и/или
- арабинозу; и/или
- галактозу; и/или
- глюкозу; и/или
- рамнозу; и/или
- ксилозу; и/или
- глюкуроновую кислоту.
Более конкретно, можно отметить, например, экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, содержащий:
- от 0,01 до 0,50% маннозы, например, от 0,01 до 0,20%, а именно, от 0,03 до 0,15% или от 0,20 до 0,5%; и/или
- от 0,01 до 0,5% арабинозы, а именно, от 0,01 до 0,2%; и/или
- от 0,05 до 0,5% галактозы, а именно, от 0,1 до 0,4%; и/или
- от 0,005 до 0,5% глюкозы, в частности, от 0,005 до 0,05%, а именно, от 0,01 до 0,03%, или от 0,05 до 0,5% и/или
- от 2 до 15% рамнозы, а именно, от 5 до 10%; и/или
- от 0,1 до 1% ксилозы, а именно, от 0,3 до 0,7%; и/или
- от 1 до 7% глюкуроновой кислоты, а именно, от 1 до 5%;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
Еще более конкретно, можно, например, отметить экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, содержащий:
- 0,09% маннозы и/или
- 0,1% арабинозы; и/или
- 0,3% галактозы; и/или
- 0,02% глюкозы; и/или
- 8,1% рамнозы; и/или
- 0,5% ксилозы; и/или
- 2,6% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
Также можно, например, указать экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, содержащий:
- 0,3% маннозы и/или
- 0,2% галактозы; и/или
- 0,4% глюкозы; и/или
- 7,9% рамнозы; и/или
- 0,5% ксилозы; и/или
- 4,9% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, где экстракт водорослей содержит:
- маннозу и/или
- арабинозу; и/или
- галактозу; и/или
- глюкозу; и/или
- рамнозу; и/или
- ксилозу; и/или
- глюкуроновую кислоту, а более конкретно:
- от 0,01 до 0,50% маннозы, например, от 0,01 до 0,20%, а именно, от 0,03 до 0,15% или от 0,20 до 0,5% и/или
- от 0,01 до 0,5% арабинозы, а именно, от 0,01 до 0,2%; и/или
- от 0,05 до 0,5% галактозы, а именно, от 0,1 до 0,4%; и/или
- от 0,005 до 0,5% глюкозы, в частности, от 0,005 до 0,05%, а именно, от 0,01 до 0,03%, или от 0,05 до 0,5%; и/или
- от 2 до 15% рамнозы, а именно, от 5 до 10%; и/или
- от 0,1 to 1% ксилозы, а именно, от 0,3 до 0,7%; и/или
- от 1 до 7% глюкуроновой кислоты, а именно, от 1 до 5%;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, и еще более конкретно, содержащий:
- 0,09% маннозы и/или
- 0,1% арабинозы; и/или
- 0,3% галактозы; и/или
- 0,02% глюкозы; и/или
- 8,1% рамнозы; и/или
- 0,5% ксилозы; и/или
- 2,6% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом, или содержащий:
- 0,3% маннозы; и/или
- 0,2% галактозы; и/или
- 0,4% глюкозы; и/или
- 7,9% рамнозы; и/или
- 0,5% ксилозы; и/или
- 4,9% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом. Как показано выше, экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения, представляет собой экстракт водорослей рода ульва, в частности, экстракт зеленых водорослей типа Ulva, который может быть получен с помощью способа приготовления, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше; и отфильтрованный сок, полученный на стадии e), концентрируется, а затем сушится. В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей содержит:
от 10 до 50% углерода; от 1 до 10% водорода; от 1 до 5% азота; от 20 до 50% кислорода и от 1 до 15% серы; в процентах массовых от сухого материала экстракта водорослей в целом.
Еще более конкретно, экстракт водорослей содержит: от 15 до 30% углерода; от 3 до 6% водорода; от 1 до 3% азота; от 25 до 40% кислорода и от 2,5 до 10% серы; в процентах массовых от сухого материала экстракта водорослей в целом. В соответствии с друг вариантом осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей содержит: от 10 до 50% углерода; от 1 до 10% водорода; от 0,5 до 5% азота; от 20 до 60% кислорода и от 1 до 15% серы; в процентах массовых от сухого материала экстракта водорослей в целом. Другие химические элементы, присутствующие в сухом материале экстракта, в явном виде представлены минералами (Ca, K, Na, Mr, Al, Cl, I, P, Fe, и тому подобное).
Более конкретно, экстракт водорослей, как описано в рамках настоящего изобретения отличается спектром 'Н ЯМР, показанным на Фиг. 1.
Этот спектр 1Н ЯМР регистрируется при 298 K на спектрометре Bruker Advance 500, снабженном 5-мм инверсным криогенным датчиком TCI (датчик тройного резонанса) 1H/13C/15N. Перед анализом, образцы растворяют в 99,97% атомов D2O. Химические сдвиги выражаются в м.д. по отношению к внешнему стандарту (триметилсилилпропионовой кислоте). Не осуществляют подавления сигнала HOD.
В соответствии с одним из вариантов осуществления настоящего изобретения, экстракт водорослей, содержащий, в частности, сульфатированные и несульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа, может быть получен с помощью способа приготовления, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше и
f) отфильтрованный сок, полученный на стадии е), концентрируется, а затем сушится.
В частности, для применения способа, как показано в рамках настоящего изобретения, на стадии а) последнего, водоросли промывают пресной водой.
Они могут очищаться от песка с помощью любых средств, доступных специалисту в данной области.
Затем указанные водоросли измельчают, а именно, посредством измельчительного устройства, такого, например, как очистительная машина или резак.
Впоследствии, твердая фаза измельченного материала, пульпа, отделяется от ее жидкой фазы, сока, посредством прессования измельченного материала, например, посредством ленточного пресса или фильтр-пресса, или посредством центрифугирования.
Под «соком», подразумевается сок цитоплазмы, который содержит париетальную структуру двойной структуры клеток водорослей.
Затем полученную жидкую фазу осветляют, например, с помощью пластинчатого осветлителя с или посредством центрифугирования, декантирования или фильтрования (например, с помощью мешка или пластин).
Затем полученный сок подвергают ультрафильтрации.
В соответствии с одним из вариантов осуществления применения способа, как показано в рамках настоящего изобретения, ультрафильтрацию осуществляют на мембране 50 кДа или меньше, а именно, на мембране 40, 30, 20 или 15 кДа. Более конкретно, мембрана может представлять собой мембрану 15 кДа или меньше.
Эта мембрана может, например, представлять собой керамическую мембрану или органическую мембрану. Более конкретно, мембрана представляет собой керамическую мембрану.
Полученный отфильтрованный сок может затем концентрироваться, например, с помощью обратного осмоса, выпаривания или преципитации, а затем сушиться, например, с помощью сушки вымораживанием или атомизации.
Необязательно, полученный экстракт может затем опять измельчаться с получением гомогенного порошка в терминах размеров зерен.
В соответствии с одним из этих аспектов, способ частично проводят/осуществляют при комнатной температуре. Под комнатной температурой подразумевается температура, находящаяся в пределах между 5 и 25°С.
В соответствии с другим аспектом из этих аспектов, способ частично имеет место при температуре, находящейся в пределах между 4 и 10°С, это делается для устранения развития микробов.
В соответствии с одним из вариантов осуществления для применения способа, как показано в рамках настоящего изобретения, экстракт водорослей, полученный на стадии f) рассмотренного выше способа, очищается, например, посредством ультрафильтрации, в частности, на кассете для ультрафильтрации, а именно, для удаления минеральной части.
В соответствии с другим из этих аспектов, экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением получают с помощью способа, как описано ранее.
Этот способ отличается от большинства способов, описанных в литературе, благодаря отсутствию стадии, включающей преципитацию экстракта водорослей. Он отличается от предыдущих способов экстракции также отсутствием использования растворителей, в частности, органических растворителей, что представляет собой главное преимущество с экологической точки зрения.
Под «зелеными водорослями типа Ulva» подразумеваются зеленые водоросли, сгруппированные в роде Ulva, из семейства Ulvaceae, рода ульва. Можно рассмотреть в явном виде следующие виды и подвиды: Ulva acanthophora, Ulva anandii, Ulva angusta, Ulva arasakii, Ulva armoricana, Ulva atroviridis, Ulva attenuata, Ulva beytensis, Ulva bifrons, Ulva brevistipitata, Ulva bulbosa, Ulva burmanica, Ulva byssoides, Ulva californica, Ulva chaetomorphoides, Ulva clathrata, Ulva coccinea, Ulva compressa, Ulva conglobata, Ulva cornucopiae, Ulva cornuta, Ulva covelongensis, Ulva crassa, Ulva erassimembrana, Ulva curvata, Ulva dactylifera, Ulva denticulata, Ulva elegans, Ulva elminthoides, Ulva enteromorpha, Ulva erecta, Ulva expansa, Ulva fasciata, Ulva fenestrata, Ulva flexuosa, Ulva gelatinosa, Ulva geminoidea, Ulva gigantea, Ulva grandis, Ulva hendayensis, Ulva hookeriana, Ulva hopkirkii, Ulva indica, Ulva intestinalis, Ulva intestinaloides, Ulva intricata, Ulva intybacea, Ulva javanica, Ulva kylinii, Ulva lactuca, Ulva lactucaefolia, Ulva laetevirens, Ulva laingii, Ulva linearis, Ulva lingulata, Ulva linkiana, Ulva linza, Ulva lippii, Ulva litoralis, Ulva littorea, Ulva lobata, Ulva lubrica, Ulva marginata, Ulva micrococca, Ulva myriotrema, Ulva neapolitana, Ulva nematoidea, Ulva ohnoi, Ulva olivacea, Ulva olivaceum, Ulva pacifica, Ulva papenfussii, Ulva paradoxa, Ulva parva, Ulva parvula, Ulva patengensis, Ulva percursa, Ulva pertusa, Ulva phyllosa, Ulva popenguinensis, Ulva porrifolia, Ulva procera, Ulva profunda, Ulva prolifera, Ulva pseudocurvata, Ulva pseudolinza, Ulva pulchra, Ulva purpurascens, Ulva quilonensis, Ulva radiata, Ulva ralfsii, Ulva ranunculata, Ulva reticulata, Ulva rhacodes, Ulva rigida, Ulva rotundata, Ulva rubens, Ulva saifullahii, Ulva scagelii, Ulva scandinavica, Ulva sericea, Ulva serrata, Ulva simplex, Ulva sorensenii, Ulva spinulosa, Ulva stenophylla, Ulva stipitata, Ulva sublittoralis, Ulva subulata, Ulva taeniata, Ulva tenera, Ulva tetragona, Ulva torta, Ulva tuberosa, Ulva umbilicata, Ulva uncialis, Ulva uncinata, Ulva usneoides, Ulva utricularis, Ulva utriculosa, Ulva uvoides, Ulva ventricosa.
Таким образом, экстракт водорослей для его применения в соответствии с настоящим изобретением может использоваться в ветеринарных применениях и содержаться в лекарственной или фармацевтической композиции, для модуляции иммунной реакции человека или животного, в частности, для стимулирования иммунной реакции человека или животного, а более конкретно, для предотвращения и/или лечения инфекционной патологии, такой как рассмотрено выше, еще более конкретно, в рамках вакцинальной профилактики, в качестве дополнения к вакцинации.
Таким образом, настоящее изобретение также относится к экстракту водорослей для его использования, как рассмотрено ранее, где экстракт водорослей содержится в фармацевтической композиции или в лекарственном средстве.
He-терапевтическое использование экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением может предназначаться, относительно его целевых применений, для человека или животного, например, посредством пищевых добавок с задачей относительно здоровья без каких-либо вторичных воздействий для модуляции иммунной реакции человека или животного, в частности, для стимулирования иммунной реакции человека или животного.
Таким образом, настоящее изобретение также относится к не-терапевтическому использованию экстракта водорослей, как рассмотрено ранее, где экстракт водорослей содержится в пищевой композиции.
В частности, пищевая композиция является пригодной для использования в качестве дополнения к вакцинации.
Фармацевтически приемлемые наполнители, используемые для приготовления лекарственной или фармацевтической композиции, содержащей экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, выбираются, в соответствии с фармацевтической формой и желаемым способом введения, из обычных наполнителей, которые известны специалистам в данной области.
В настоящем изобретении - для перорального, сублингвального, подкожного, внутримышечного, внутривенного, наружного, местного, внутритрахеального, интраназального, трансдермального или ректального введения, в смеси с обычными фармацевтическими наполнителями, животным и человеку для модуляции иммунной реакции, в частности, для предотвращения и/или лечения от инфекционных патологий, как рассмотрено выше.
Пригодные для введения формы включают пероральные формы, такие как таблетки, мягкие и твердые желатиновые капсулы, порошки, гранулы и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные, буккальные, внутритрахеальные, внутриглазные, интраназальные формы введения, введение посредством ингаляции, местные, парентеральные формы введения, такие как трансдермальные, подкожные, внутримышечные или внутривенные формы введения, ректальные формы введения и импланты. Для местного применения можно использовать экстракты водорослей с целью их применения в соответствии с настоящим изобретением в кремах, гелях, помадах или примочках.
Когда приготавливают твердую композицию в форме таблеток, главный активный ингредиент может смешиваться с фармацевтическим носителем, таким как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, аравийская камедь или что-либо подобное.
Таблетки могут также снабжаться покрытием из сахарозы, производного целлюлозы или других пригодных для использования материалов, или, кроме того, они могут обрабатываться таким образом, что они имеют пролонгированную или замедленную активность и высвобождают непрерывно заданное количество активного ингредиента.
Препарат в виде желатиновых капсул может, например, быть получен посредством смешивания активного ингредиента с разбавителем и посредством выливания полученной смеси в мягкие или твердые желатиновые капсулы.
В одном из конкретных вариантов осуществления, экстракт водорослей, лекарственное средство или фармацевтическая композиция для ее использования в соответствии с настоящим изобретением предназначается для перорального введения. В другом варианте осуществления, экстракт водорослей, лекарственное средство или фармацевтическая композиция для ее использования в соответствии с настоящим изобретением предназначается для парентерального введения.
Лекарственные средства или фармацевтические композиции, содержащие экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением, могут также находиться в жидкой форме, например, как растворы, эмульсии, суспензии или сиропы, а именно, в форме, адаптированной, например, для перорального или интраназального введения. Пригодные для использования жидкие субстраты могут, например, представлять собой воду, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси, в различных пропорциях, в воде.
Препарат в виде сиропа или эликсира или для введения в виде капель может также содержать активный ингредиент вместе с акалорическим подсластителем, например, метилпарабен и пропилпарабен в качестве антисептиков, а также агент, обеспечивающий вкус, и соответствующий подкрашивающий агент.
Порошки или гранулы, диспергируемые в воде, могут, например, содержать активный ингредиент, смешанный с диспергирующими или смачивающими агентами, или суспендирующими агентами, подобными поливинилпирролидону, а также с подсластителями или агентами для корректировки вкуса.
Как правило, в рамках настоящего изобретения, ежедневная доза экстракта водорослей будет представлять собой самую низкую эффективную дозу экстракта водорослей, способную оказывать иммуностимулирующее воздействие.
Под "эффективной дозой", подразумевается любое количество композиции, которое делает возможным наблюдение видимого воздействия, в настоящем документе - иммуностимулирующего воздействия.
В соответствии с одним из своих аспектов, экстракт водорослей для его использования в соответствии с настоящим изобретением используется в композиции, как рассмотрено выше, для введения людям при дозе, находящейся в пределах между 0,1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 0,5 и 60 мг/кг, например, в пределах между 1 и 20 мг/кг или между 5 и 30 мг/кг, или при дозе для животных, находящейся в пределах между 1 и 200 мг/кг, более конкретно, в пределах между 1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 2 и 45 мг/кг или между 10 и 60 мг/кг.
В соответствии с другим аспектом, в рамках не-терапевтического использования экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, последний может использоваться в пищевой композиции.
Под «пищевой композицией» подразумевается, например, любой тип лечебного питания, пищевых продуктов, таких как йогурт или напиток, а именно, молочный напиток, любой тип сырого материала, добавки или технологического вспомогательного материала, в форме премиксов, либо лекарственных, либо нет, предназначенных для введения в продукты питания, любой тип основных или вспомогательных продуктов питания, предназначенных для людей или животных.
В соответствии с одним из этих аспектов, в рамках не-терапевтического использования экстракта водорослей в пищевой композиции, последний используется для введения людям при дозе, находящейся в пределах между 0,1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 0,5 и 60 мг/кг, например, в пределах между 1 и 20 мг/кг, или в пределах между 5 и 30 мг/кг, или при дозе для животных, находящейся в пределах между 1 и 200 мг/кг, более конкретно, в пределах между 1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 2 и 45 мг/кг или между 10 и 60 мг/кг.
Настоящее изобретение, в соответствии с другим его аспектом, также относится к способу модуляции иммунной реакции человека или животного, в частности, для стимулирования иммунной реакции у человека или животного, который включает введение человеку или животному эффективной дозы экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением.
Более конкретно, способ в соответствии с настоящим изобретением стимулирует иммунную реакцию у человека или животного, в частности, в иммунной системе кишечника.
Еще более конкретно, способ в соответствии с настоящим изобретением индуцирует экспрессию молекул адгезии и хемокинов, а именно, IL8 и/или IL-1α и/или IL1-β и/или IL6 и/или TNF-α и/или CCL20.
Экстракт водорослей, вводимый в рамках способа в соответствии с настоящим изобретением, может содержаться в лекарственном средстве, фармацевтической композиции или пищевой композиции, как рассмотрено выше.
Он может вводиться в соответствии с рассмотренными выше способами введения.
В соответствии с одним из вариантов осуществления, для применения способа в соответствии с настоящим изобретением, экстракт водорослей в соответствии с настоящим изобретением вводится в фармацевтической композиции.
В частности, указанный способ является пригодным для использования при предотвращении и/или лечении инфекционной патологии, такой как рассмотрено выше.
В соответствии с другим вариантом осуществления, для применения способа в соответствии с настоящим изобретением, экстракт водорослей в соответствии с настоящим изобретением вводится в пищевую композицию.
В частности, настоящее изобретение также относится к способу, как рассмотрено выше, который включает введение человеку или животному эффективной дозы экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением в течение периода от 3 до 30 дней, в частности, от 10 до 20 дней или от 3 до 10 дней, при дозе для людей, находящейся в пределах между 0,1 и 100 мг/кг, более конкретно, в пределах между 0,5 и 60 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 1 и 20 мг/кг или между 5 и 30 мг/кг, или при дозе для животных, находящейся в пределах между 1 и 200 мг/кг, более конкретно, в пределах между 1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 2 и 45 мг/кг или между 10 и 60 мг/кг.
В соответствии с одним из вариантов осуществления, для применения способа в соответствии с настоящим изобретением, в конце рассмотренного выше периода времени, введение экстракта водорослей может быть возобновлено в течение эквивалентного периода.
В соответствии с одним из его аспектов, настоящее изобретение также относится к способу, как рассмотрено выше, который включает:
a) приготовление экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением с помощью следующего способа:
- промывки и очистки водорослей от песка;
- измельчения указанных водорослей;
- отделения твердой фазы измельченного материала от его жидкой фазы;
- осветления указанной жидкой фазы;
- ультрафильтрации сока, полученного на предыдущей стадии, на мембране 50 кДа или меньше, например, 15 кДа или меньше; и
- концентрирования, а затем сушки отфильтрованного сока, полученного на предыдущей стадии; необязательно, с последующей стадией ультрафильтрации, например, на кассете для ультрафильтрации; и
b) введение человеку или животному эффективной дозы экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, конкретно, в течение периода от 3 до 30 дней, более конкретно, от 10 до 20 дней или от 3 до 10 дней, при дозе для людей, находящейся в пределах между 0,1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, в пределах между 0,5 и 60 мг/кг, например, между 1 и 20 мг/кг или между 5 и 30 мг/кг, или при дозе для животных, находящейся в пределах между 1 и 200 мг/кг, более конкретно, в пределах между 1 и 100 мг/кг, еще более конкретно, между 2 и 45 мг/кг или между 10 и 60 мг/кг.
Настоящее изобретение будут иллюстрироваться более подробно с помощью фигур и примеров, ниже, которые не ограничивают его рамки.
Краткое описание фигур
Фиг. 1: спектр 1Н ЯМР экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг. 2: Хроматограмма, полученная для экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, разделенного на двух колонках Shodex 802 и 803.
Фиг. 3: Хроматограмма, полученная после анализа триметилсилилированных производных образца экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением с помощью газовой хроматографии. Здесь Ara: арабиноза; Gal: галактоза; Glc: глюкоза; Xyl: ксилоза; Man: манноза; Rha: рамноза, GlcA: глюкуроновая кислота.
Фиг. 4: Оценка максимальной нетоксичной дозы экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг. 5: Оценка максимальной нетоксичной дозы экстракта водорослей ЕА2 в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг. 6: Оценка максимальной нетоксичной дозы экстракта водорослей EA3 в соответствии с настоящим изобретением.
Фиг. 7: Воздействие экстрактов водорослей ЕА1, ЕА2 и ЕА3 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию IL8 (измерение с помощью qPCR).
Фиг. 8: Воздействие экстракта водорослей ЕА1, ЕА2 и ЕА3 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию TNF-α (измерено с помощью qPCR).
Фиг.9: Воздействие экстракта водорослей ЕА1, ЕА2 и ЕА3 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию CCL20 (измерено с помощью qPCR).
Фиг. 10: Воздействие экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию IL6 (измерение с помощью qPCR).
Фиг. 11: Воздействие экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию IL1α (измерено с помощью qPCR).
Фиг. 12: Воздействие экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию IL1β (измерено с помощью qPCR).
Фиг. 13: Воздействие экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию PPARγ (измерено с помощью qPCR).
Фиг. 14: Воздействие экстракта водорослей ЕА1 в соответствии с настоящим изобретением на экспрессию IL12p35 (измерено с помощью qPCR).
Фиг. 15: Воздействие экстрактов водорослей ЕА1 и ЕА3 в соответствии с настоящим изобретением, измеренное с помощью ELIS А на экспрессию TNF-α.
Фиг. 16: Воздействие экстрактов водорослей ЕА1 и ЕА3 в соответствии с настоящим изобретением, измеренное с помощью ELISA на экспрессию IL-8.
Примеры
Пример 1: Приготовление экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением
Одну тонну свежих сырых зеленых водорослей типа Ulva промывают свежей водой, и очищают от песка посредством устройства для промывки водорослей.
Если не утверждается иного, стадии способа осуществляются при комнатной температуре.
Водоросли (1 тонна осушенных водорослей с 8% сухого материала) затем измельчается в виде мелкодисперсных частиц посредством промышленной очистительной машины (марка Inotec тип "I175CDI-75D"). Под «мелкодисперсными частицами» подразумеваются частиц, у которых размер находится в пределах между 50 и 1000 нм, с двумя популяциями, первой, для которой размеры находятся в пределах в пределах между 50 и 200 нм, и второй, у которой размеры находятся в пределах в пределах между 600 и 1000 нм.
Затем измельченный материал прессуется с помощью промышленного ленточного пресса марки Flottweg типа "В FRU 800 HK" при скорости потока примерно 1 тонна/час.
Эта стадия делает возможным отделение твердой фазы (пульпы) от жидкой фазы (сока). Выход полученного сока составляет 75%.
Затем 750 кг полученного сырого сока осветляется посредством пластинчатого осветлителя марки Flottweg типа "АС 2000".
При этом получается 710 кг прозрачного сока с 3,10% сухого материала (выход по массе от 95 до 98%) и крем (2-5% масс).
Впоследствии, прозрачный сок подвергается ультрафильтрации на керамической мембране (Tami Industries) 15 кДа.
При этом получаются пермеат и ретентат. Пермеат собирают до тех пор, пока не будет получено 640 кг отфильтрованного сока (выход 91% объем) 2,2% сухого материала.
Затем отфильтрованный сок (пермеат) сушат посредством сушки вымораживанием, после концентрирования с помощью выпаривания.
Концентрирование осуществляют на испарителе с одинарным действием (EVA 1000, Pignat) со следующими параметрами: принудительное рециркулирование, скорость потока подачи 10 л/час, давление водяного пара 1 бар, давление вакуума 0,3 бар и температура испарения 90°С.
Первая концентрация достигается при скорости потока выпариваемой воды 8 л/час, и градус плотности Брикса повышается от 5,5 (соответствует концентрации сухого материала 4,5%) до 14,7. Затем этот раствор концентрируется второй раз при скорости потока выпариваемой воды 5-6 л/час и Вх повышается до 34. Концентрация сухого материала раствора, как определено, составляет 38,4%.
Затем осуществляется сушка вымораживанием посредством устройства Bioblock scientific (модель CHRIST alpha 1-4 LSC) при температуре вымораживания -80°С, которая также представляет собой минимальную температуру во время этой стадии.
Затем полученный порошок измельчается с помощью планетарного измельчительного устройства MiniMill марки Philips. Продукт вводится в измельчительные чашки (10 г продукта в каждую измельчительную чашку с 4 шарами из диоксида циркония). Все вместе приводится во вращение в течение 15 минут при скорости 10.
При этом получают 14 кг порошка экстракта водорослей.
Пример 2: Определение размера сульфатированных и несульфатированных полианионных полисахаридов экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением согласно GPC (гель-проникающей хроматографии)
Экстракт водорослей в соответствии с настоящим изобретением, и приготовленный в соответствии с Примером 1, подвергается ультрафильтрации на мембране 1000 Да и растворяется в воде при концентрации 0,5 г/л. Затем его инжектируют в две колонки Shodex 802 и 803, расположенные последовательно (рабочая область колонки 802: 4⋅103 Да, а колонки 803: 1,7⋅105 Да). Используемый элюент представляет собой нитрат натрия 0,1 М с азидом натрия 0,2% при скорости потока 0,5 мл/мин. Детектирование осуществляют посредством рефрактометра Wyatt и детектора рассеяния света под 18 углами Wyatt. dn/dc считается равной 0,150 мл/г.
Хроматограмма, детектируемая с помощью рефрактометра, показана на Фиг. 2.
Получают средний размер полисахаридов экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением равный 4,4 кДа.
Пример 3: Определение композиции экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением
Экстракт водорослей в соответствии с настоящим изобретением и приготовленный в соответствии с Примером 1 очищают посредством фронтальной ультрафильтрации на ячейках Amicon, работающих с перемешиванием. Используют мембрану из регенерированной целлюлозы с порогом отсечения 1000 Да. 572,1 мг образца экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением растворяют в 150 мл сверхчистой воды milli-Q. Используют пять литров воды для удаления всех молекул с массой меньше чем 1000 Да. Ретентат сушат вымораживанием. Взвешивают 117 мг образца. Следовательно, выход ультрафильтрации составляет 20,5% (масс/масс). Осуществляют следующие анализы на образцах после ультрафильтрации.
Отношение моносахаридов составляющих полисахариды экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, определяют в соответствии с методом Kamerling (Kamerling et al., 1975) модифицированным Montreuil (Montreuil et al., 1986). Идентификация и дозировка моносахаридов требуют гидролиза посредством метанолиза полимера для того, чтобы получить только мономеры. Затем гликозидные остатки триметилсилилируются, чтобы сделать их летучими. Таким образом, они идентифицируются и анализируются с помощью газовой хроматографии в форме О-триметилсилилированных метилгликозидов.
Используют следующие реагенты:
- Метанольный раствор/HCl 3 н (Supelco);
- Карбонат серебра;
- Мио-инозитол;
- Пиридин;
- Реагент Sylon ВFT (BSTFA + TMCS 99:1) (Supelco); и
- Дихлорметан.
Рабочая процедура является следующей: 400 мкг экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, приготовленного, как рассмотрено выше, и 50 мкг мио-инозитола помещают в сухую баню в присутствии 500 мкл 3 н смеси хлористоводородная кислота/метанол (Supelco) в течение 4 часов при 100°С. После охлаждения до комнатной температуры, метанолизат нейтрализуют с помощью карбоната серебра. Образцы центрифугируют в течение 15 минут при 3000 об/мин, и супернатант выпаривают в струе азота. Затем соединения растворяют в 80 мкл пиридина и инкубируют в течение 25 минут при 80°С вместе с 80 мкл Sylon (BSTFA: TMCS, 99:1, Supelco). После осторожного выпаривания избытка реагентов в струе азота, триметилсилилированные метилгликозиды отбирают в 500 мкл дихлорметана, а затем инжектируют в газовый хроматограф (инжектирование in-column, детектор FID: ионизация в пламени). Газ носитель представляет собой азот. Колонка типа HP-5MS (30 м, внутренний диаметр 0,25 мм) является неполярной. Программа повышения температуры является следующей: поддерживают 120°С в течение 1 минуты, а затем градиент 1,5°С/мин до 180°С, затем градиент 2°С/мин до 200°С.
Каждый моносахарид идентифицируют посредством сравнения его времени удерживания по отношению к внутреннему стандарту, со временами удерживания чистых моносахаридов, обрабатываемых при таких же условиях. Коэффициент отклика вычисляется для каждого моносахарида по отношению к внутреннему стандарту для определения пропорции каждого моносахарида в полисахаридах экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением. Полученные результаты показаны в Таблице 1, ниже, и на Фиг. 3.
Пример 4: Оценка активности экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением относительно его иммуномодуляционной активности
Воздействия экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением исследуются на дифференцированных эпителиальных клетках свиньи IPEC-1.
Интестинальные эпителиальные клетки свиньи (Intestinal Porcine Epithelial Cell-1, IPEC-1) представляют собой спонтанно трансформированные еюнальные клетки поросенка.
Сначала определяют оптимальное количество клеток IPEC-1, которые должны осаждаться в лунках планшета Р6 для достижения конфлюентности через 3 дня. Доза 0,2⋅105 клетки/см2 удерживается как представляющая собой эту оптимальную дозу.
Затем исследуется максимальная нетоксичная доза экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением для определения максимальной дозы, которая не ингибирует пролиферации клеток для клеток IPEC-1.
Приготавливают два экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением в соответствии с примером 1 (обозначенные как ЕА1 и ЕА2, соответственно).
Третий экстракт водорослей ЕА3 также приготавливают в соответствии с примером
1, но он приготавливается в качестве субъекта последующей стадии очистки.
Для очистки, экстракт ЕА3 подвергается ультрафильтрации на минимальной кассете PALL с порогом отсечки 1 кДа. Затем этот экстракт сушат вымораживанием.
Все три экстракта растворяют в 28 мл полной среды DMEM/F12. Затем приготавливают 50 мл 1% раствора, то есть 0,5 г экстракта отбирают в 50 мл. Затем осуществляют стерилизацию посредством фильтрования на 0,2 мкм мембране.
Затем осуществляют разбавления в 50-мл пробирках Falcon для исследования различных концентраций экстракта водорослей, как показано в таблице 2, ниже.
Затем приготавливают клетки, следуя следующей процедуре:
1. приготовление 28 мл суспензии клеток при 0,07⋅106 клеток/мл для каждой дозы, которая должна исследоваться, то есть 1,96⋅106 клеток/доза,
2. трипсинизация,
3. промывка клеток PBS без какого-либо Ca-Mg,
4. осаждение ATV Trypsin (2 мл/Т175 или 0,4 мл/лунку Р6) для диссоциации и отсоединения клеток,
5. инкубирование в течение 5 минут при 37°С,
6. отбирают в среду для культивирования,
7. счет с помощью трипана голубого,
8. приготовление 6 15-мл пробирок Falcon с 2,23 мл,
9. центрифугирование и
10. извлечение осадка клеток из каждой пробирки в 28 мл каждого раствора экстракта для исследования и перенос в 50-мл пробирку Falcon.
Культивирование осуществляют посредством осаждения 3 мл/лунка каждой суспензии на планшеты, а затем инкубирования при 37°С в течение 24, 48 и 72 час. Таблица 3 приводит содержимое различных лунок.
Затем культуры наблюдают и необязательно делают фотографии.
Содержимое ячеек собирают и считают в соответствии со следующей процедурой:
1. берут планшет 6 лунками,
2. удаляют супернатант,
3. промывают 1 мл PBS без Ca-Mg,
4. осаждают 0,4 мл/лунка ATV Trypsin,
5. инкубируют в течение 5 мин при 37°С до отсоединения клеток,
6. добавляют 0,6 мл среды для культивирования,
7. хорошо перемешивают и
8. используют трипан голубой при 0,4%, (50 мкл клеток + 50 мкл 0,4% трипана голубого), а затем считают клетки на гемоцитометре от Malassez на 100 прямоугольниках в целом.
Результаты фигур 4-6 показывают, что максимальная нетоксичная доза составляет 0,1% для ЕА1 и ЕА2 и 0,5% для ЕА3.
Стимулирование дифференцированных клеток IPEC-1 с помощью экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением ЕА1, ЕА2 и ЕА3 исследуется в течение 4 час при 37°С (примерно 10 дней после достижения конфлюентности) при D15.
Три дозы (MD (максимальная доза), MD/10, MD/100) исследуют в сравнении с бактериальным LPS (положительный контроль) и со средой дифференциации (отрицательный контроль). Растворы экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением ЕА1, ЕА2 и ЕА3, полученные с помощью способа, указанного в примере 1 приготавливают с помощью 0,1% полной DMEM/F12. Для этого, 0,02 г отбирают в 20 мл и осуществляют стерилизацию посредством фильтрования на мембране 0,2 мкм. Затем осуществляют последовательные разбавления, как показано в таблице 4, ниже.
Количество экстрактов водорослей на клетку показано в таблице 5, ниже.
Затем приготавливают раствор в LPS (SIGMA 0111:В4) (доза: 50 нг/105 клеток).
Осаждают 200 нг LPS/лунка при объеме 2 мл. Таблица 6, ниже, показывает различные приготовленные концентрации.
На планшетах осаждают 2 мл среды, которую необходимо исследовать, на каждом фильтре, и 3 мл под ним. Все вместе инкубируют затем в течение 4 час при 37°С при 5% CO2.
Затем обработанные клетки IPEC-1 собирают для анализа в соответствии со следующей процедурой:
1. лунки промывают два-три раза 1 мл воды с физиологическим буферным раствором,
2. клетки извлекают в 350 мкл буфера RA1 (набор Macherey-Nagel) и
3. осуществляют перенос в пробирки Eppendorf, пронумерованные от 1 до 15.
Затем экстрагируют РНК в соответствии с инструкциями поставщика набора Macherey-Nagel NucleoSpin RNA II, Ref 740955.250, Batch 1211/004. Затем полученные РНК транскрибируют в ДНК посредством обратной транскрипции в соответствии со следующей процедурой:
1. для каждого образца, вычисляют объем, который необходимо отбирать для обработки 1 мкг,
2. осаждают этот объем в каждой лунке полоски, выложенной на охлаждаемый блок,
3. добавляют необходимый объем воды QSP, 9 мкл,
4. добавляют 1,3 мкл Anchored Oligo dT_ праймера 100 мкМ Sample 3154325 Eurogentec,
5. инкубируют в течение 10 минут при 65°С на GeneAmp PCR System 9700 (USER Khalid),
6. в течение инкубирования приготавливают смесь в конической пробирке 1,5 мл (для одного образца) на льду:
i. 4 мкл буфера 5Х
ii. 2 мкл dNTP 20 мМ (Eurogentec)
iii. 1,9 мкл воды milliQ
iv. в последний момент добавляют 0,8 мкл ферментов MuMLV, 25 ед./мкл (МЕ-0125-400) (Eurogentec)
7. на каждый образец добавляют 8,7 мкл смеси до конечного объема 20 мкл,
8. выкладывают полоску на охлаждаемый блок,
9. инкубируют в течение 90 минут при 37°С для полимеризации и 5 минут при 93°С для дезактивации фермента в конце реакции на GeneAmp PCR System 9700, и
10. замораживают при -20°С в боксе DNA(1)MO.
Затем образцы анализируют с помощью qPCR (односторонние тесты ANOVA, различия исследуют с помощью непараметрических критериев Дюннета).
Исследуют воздействие экстракта ЕА1 на экспрессию IL8, TNF-α, CCL20, IL6, IL1-α, IL1-β, PPARγ и IL12p35.
Исследуют воздействие экстрактов ЕА2 и ЕА3 на экспрессию IL8, TNF-α и CCL20. Результаты показаны на Фигурах 7-14.
Они показывают рост экспрессии mRNA различных исследуемых цитокинов.
Иммуностимулирующая активность экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением также оценивается посредством исследования стимулирования факторов иммунитета с помощью ELISA на дифференцированных клетках IPEC-1.
Два используемых коммерческих набора представляют собой набор Kit Duo CXCL8/IL8 свиньи (ref: DY535) и набор Kit Duo TNF-α свиньи (ref: DY690B), поставляемые R&D Systems. Оба набора следуют одинаковой процедуре с использованием иммобилизованного антитела, антитела и системы детектирования и стандартных белков, специфичных к каждому интерлейкину.
Культивирование и инкубирование клеток вместе с экстрактами ЕА1 и ЕА3 для продуцирования цитокинов
Клетки IPEC-1 (0,25×105 клеток/см) культивируют на вставках для культивирования в течение 3 дней до тех пор, пока не будет получена конфлюентность клеток. Затем, фетальная сыворотка теленка заменяется дексаметазоном при 10-7М для дифференцирования клеток в течение периода в пределах между 10 и 14 днями. Три лунки с культурами инкубируют в течение 24 час при 37°С в присутствии экстрактов ЕА1 и ЕА3. Контроли состоят из культур клеток без экстрактов водорослей. Супернатанты культур выше и ниже вставок собирают и хранят при -80°С в пробирке Eppendorf до их анализа.
Дозировка IL8 и TNF-α с помощью ELISA
Иммобилизованные антитела (анти IL-8 или анти TNF-α от мышей), разбавленные до 1/180 в PBS, иммобилизуют в количестве 100 мкл/лунка в течение ночи при комнатной температуре. Осуществляют три операции отмывки для удаления несвязанных антител с помощью 400 мкл/лунка PBS, содержащего 0,05% Tween (промывочного буфера). Затем осуществляют стадию насыщения для блокирования сайтов неспецифичного связывания и тем самым устранения связывания белков, которые должны исследоваться, с пластиком. Для этого добавляют 300 мкл/лунка буфера PBS, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Планшеты инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре, а затем промывают три раза 400 мкл/лунка промывочного буфера. Стандартные белки (рекомбинантный IL8 и TNF-α) разбавляют наполовину в буфере PBS, содержащем 1% BSA, для получения концентраций порядка 4000, 2000, 1000, 500, 250, 125 пг/мл. Объем 100 мкл чистого супернатанта и образца стандартного белка осаждают на одну лунку, а затем инкубируют в течение 2 часов при комнатной температуре. После стадии трех промывок с помощью 400 мкл/лунка буфера, планшеты инкубируют в присутствии 100 мкл/лунка идентифицирующих антител, связанных с биотином, разбавленных до 1/180 с помощью буфера для разбавления, содержащего 2% декомплементизированной сыворотки козы. После инкубирования в течение 2 часов при комнатной температуре, планшеты промывают три раза промывочным буфером, а затем инкубируют вместе со 100 мкл конъюгата Streptavidin-HRP в течение 20 минут при комнатной температуре, не на свету. После трех промывок промывочным буфером, лунки инкубируют вместе со 100 мкл субстрата (объем/объем реагента А и В) в течение 20 минут при комнатной температуре в темноте. Реакция HRP-субстрата прекращается с помощью 50 мкл/лунка стоп-реагента, и осуществляют считывание данных относительно OD (оптической плотности) на 450 нм с помощью считывающего устройства для ELISA Labsystems Multiskan RC. Результаты показаны на фигурах 15 и 16.
Они показывают рост экспрессии белков для различных исследуемых цитокинов.
Выводы
Введение экстракта водорослей в соответствии с настоящим изобретением, следовательно, демонстрирует иммуностимулирующее действие продукта.
Claims (40)
1. Экстракт водорослей рода ульва, содержащий сульфатированные и не сульфатированные полианионные полисахариды, у которых размер является равным или меньшим чем 50 кДа, для модуляции иммунной реакции человека или животного.
2. Экстракт водорослей по п. 1, где указанные полисахариды содержат маннозу и/или арабинозу.
3. Экстракт ворослей по п. 2, где указанные полисахариды содержат по меньшей мере 0,005% маннозы и/или по меньшей мере 0,005% арабинозы по массе по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
4. Экстракт по п. 3, где указанные полисахариды содержат маннозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,50%, и/или арабинозу в количестве, находящемся в пределах от 0,01 до 0,5% по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
5. Экстракт водорослей по п. 1, где указанные полисахариды дополнительно содержат:
- галактозу;
- глюкозу;
- рамнозу;
- ксилозу и
- глюкуроновую кислоту.
6. Экстракт водорослей по п. 5, где указанные полисахариды содержат:
- от 0,05 до 0,5% галактозы;
- от 0,005 до 0,5% глюкозы;
- от 2 до 15% рамнозы;
- от 0,1 до 1% ксилозы и
- от 1 до 7% глюкуроновой кислоты;
по массе, по отношению к массе сухого материала экстракта водорослей в целом.
7. Экстракт водорослей рода ульва, полученный способом, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше и
f) отфильтрованный сок, полученный на стадии e), концентрируется, а затем сушится; для его использования для модулирования иммунной реакции человека или животного.
8. Экстракт водорослей по п. 1 для стимулирования иммунной реакции человека или животного.
9. Экстракт водорослей по п. 1, где экстракт водорослей индуцирует экспрессию молекул адгезии и хемокинов, а именно IL-8, и/или IL-1α, и/или IL1-β, и/или IL-6, и/или TNF-α, и/или CCL20.
10. Экстракт водорослей по п. 1 в качестве дополнения к вакцинации.
11. Экстракт водорослей по п. 1, где модуляция иммунной системы применяется в лечении и/или предотвращении инфекционных патологий свиней, выбранных из: парвовирусной инфекции, Erysipelas Rhusiopathia, инфекционного ринита, гриппа, цирковирусной инфекции свиней, микоплазмы и колибактериоза; инфекционных патологий птиц, выбранных из: болезни Марека, болезни Ньюкасла, инфекционного бронхита, болезни Гумборо, оспы кур, микоплазмы, инфекционной анемии птиц, инфекционного ларинготрахеита, EDS и птичьего гриппа; инфекционных патологий крупного рогатого скота, выбранных из: BVD (вирусных диарей крупного рогатого скота), энзоотической бронхопневмонии, IBR, заболевания вирусного герпеса, клостридиального заболевания, колибактериоза, блутанга, короновирусного заболевания, ротавирусного заболевания и ринотрахеита; и инфекционных патологий разводимых и выращиваемых рыб и других водных животных и растений, выбранных из: гематопоэтического некроза, вибриоза, фурункулеза, инфекционного некроза поджелудочной железы и инфекционной анемии.
12. Экстракт водорослей по п. 1, где экстракт водорослей содержится в фармацевтической композиции.
13. Экстракт водорослей по п. 2, где экстракт водорослей вводится при дозе для людей, находящейся в пределах между 0,1 и 100 мг/кг, или при дозе для животных, находящейся в пределах между 1 и 200 мг/кг.
14. Экстракт водорослей по п. 1, где сульфатированные и не сульфатированные полианионные полисахариды имеют размер, равный или меньший чем 15 кДа.
15. Экстракт водорослей по п. 1, где указанный экстракт водорослей может быть получен с помощью способа приготовления, в котором:
a) водоросли промываются и очищаются от песка;
b) указанные водоросли измельчаются;
c) твердая фаза измельченного материала отделяется от его жидкой фазы;
d) указанная жидкая фаза осветляется;
e) сок, полученный на стадии d), подвергается ультрафильтрации на мембране 50 кДа или меньше и
f) отфильтрованный сок, полученный на стадии e), концентрируется, а затем сушится.
16. Экстракт водорослей по 7, где сок, полученный на стадии d) способа приготовления, подвергается ультрафильтрации на мембране 15 кДа или меньше.
17. Экстракт водорослей по п. 7, где экстракт водорослей, полученный на стадии f) способа приготовления, очищается, а именно посредством ультрафильтрации.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1361293A FR3013222B1 (fr) | 2013-11-18 | 2013-11-18 | Extrait d'algues pour son utilisation en tant qu'agent immunomodulateur |
| FR1361293 | 2013-11-18 | ||
| PCT/EP2014/074937 WO2015071497A1 (fr) | 2013-11-18 | 2014-11-18 | Extrait d'algues pour son utilisation en tant qu'agent immunomodulateur |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016119154A RU2016119154A (ru) | 2017-11-22 |
| RU2016119154A3 RU2016119154A3 (ru) | 2018-05-24 |
| RU2687498C2 true RU2687498C2 (ru) | 2019-05-14 |
Family
ID=49876917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016119154A RU2687498C2 (ru) | 2013-11-18 | 2014-11-18 | Экстракт водорослей для использования в качестве иммуномодулирующего агента |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10912805B2 (ru) |
| EP (1) | EP3071212B1 (ru) |
| JP (1) | JP6644002B2 (ru) |
| CN (1) | CN105873596A (ru) |
| BR (1) | BR112016011157B1 (ru) |
| DK (1) | DK3071212T3 (ru) |
| ES (1) | ES2790678T3 (ru) |
| FR (1) | FR3013222B1 (ru) |
| HU (1) | HUE048949T2 (ru) |
| MX (1) | MX374365B (ru) |
| RU (1) | RU2687498C2 (ru) |
| WO (1) | WO2015071497A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR3056911B1 (fr) * | 2016-10-03 | 2019-07-19 | Ys Lab | Composition aqueuse derivee d’eau de mer et d’algues marines |
| FR3057770B1 (fr) * | 2016-10-21 | 2019-07-19 | Seprosys | Utilisation d'un extrait d'ulve comme agent cosmetique anti-age |
| KR101833667B1 (ko) * | 2017-02-14 | 2018-03-12 | 주식회사씨에스텍 | 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 관절연골 보호 또는 치료용 약학적 조성물 |
| FR3075644B1 (fr) * | 2017-12-27 | 2020-08-28 | Oreal | Oligosaccharides sulfates et leurs utilisations cosmetiques |
| CN108440681A (zh) * | 2018-05-15 | 2018-08-24 | 中国海洋大学 | 一种绿藻硫酸多糖及其作为益生元在提高肠道有益菌增殖中的应用 |
| FR3087338B1 (fr) * | 2018-10-22 | 2020-10-09 | Amadeite | Extrait d'algues pour son utilisation pour le traitement ou la prevention de l'immunosuppression post-traumatique |
| RU2738719C1 (ru) * | 2020-03-26 | 2020-12-15 | Владислав Николаевич Ласкавый | Средство для лечения коронавирусных, ретровирусных инфекций и гепатита с |
| CN111904975B (zh) * | 2020-09-04 | 2021-05-11 | 佛山蓝强生物科技有限公司 | 一种藻类多糖组合物及其制备方法和应用 |
| JP7774205B2 (ja) * | 2020-12-15 | 2025-11-21 | 株式会社フュチュール・インターナショナル | 海藻類及びその抽出物による口腔用、鼻孔用又は咽喉用の衛生用品 |
| WO2022130732A1 (ja) * | 2020-12-15 | 2022-06-23 | 正一 中村 | 海藻類及びその抽出物による口腔用、鼻孔用又は咽喉用の衛生用品 |
| CN113476601B (zh) * | 2021-08-24 | 2022-05-20 | 知佰幸细胞库(浙江)有限公司 | 干细胞细胞因子联合海藻多糖制备的药物或化妆品 |
| GB2614530B (en) | 2021-12-23 | 2024-12-11 | Element Six Tech Ltd | Diamond sensor |
| CN114376233A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-04-22 | 青岛海大生物集团股份有限公司 | 一种具有增强免疫功能的浒苔多糖保健食品及制备方法 |
| JP2024112294A (ja) * | 2023-02-07 | 2024-08-20 | 株式会社微生物化学研究所 | ワクチン |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040208893A1 (en) * | 2002-12-16 | 2004-10-21 | Daniels Bruce Alan | Seaweed extract composition for treatment of diabetes and diabetic complications |
| KR20100088251A (ko) * | 2009-01-30 | 2010-08-09 | 강원대학교산학협력단 | 면역활성이 증진된 구멍갈파래 추출물의 제조방법 |
| WO2010115149A1 (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-07 | Desert Lake Technologies, Llc | Compositions and methods for reducing inflammation |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1261909A (fr) | 1960-04-06 | 1961-05-26 | Dba Sa | Essuie-glace |
| WO2004103280A2 (en) | 2003-05-14 | 2004-12-02 | Endomatrix, Inc. | Seaweed extract composition for treatment of diabetes and diabetic complications |
| US20050196410A1 (en) * | 2004-03-05 | 2005-09-08 | Daniels Bruce A. | Seaweed extract composition for treatment of inflammation |
| CN102742907A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-10-24 | 集美大学 | 一种海藻石莼饮品及其制备方法 |
| FR2998176B1 (fr) * | 2012-11-16 | 2015-01-16 | Univ Blaise Pascal Clermont Ii | Composition de polysaccharide sulfate |
-
2013
- 2013-11-18 FR FR1361293A patent/FR3013222B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-11-18 CN CN201480063147.3A patent/CN105873596A/zh active Pending
- 2014-11-18 US US15/037,300 patent/US10912805B2/en active Active
- 2014-11-18 HU HUE14799180A patent/HUE048949T2/hu unknown
- 2014-11-18 EP EP14799180.6A patent/EP3071212B1/fr active Active
- 2014-11-18 RU RU2016119154A patent/RU2687498C2/ru active
- 2014-11-18 WO PCT/EP2014/074937 patent/WO2015071497A1/fr not_active Ceased
- 2014-11-18 ES ES14799180T patent/ES2790678T3/es active Active
- 2014-11-18 BR BR112016011157-5A patent/BR112016011157B1/pt active IP Right Grant
- 2014-11-18 DK DK14799180.6T patent/DK3071212T3/da active
- 2014-11-18 JP JP2016553737A patent/JP6644002B2/ja active Active
- 2014-11-18 MX MX2016006189A patent/MX374365B/es active IP Right Grant
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040208893A1 (en) * | 2002-12-16 | 2004-10-21 | Daniels Bruce Alan | Seaweed extract composition for treatment of diabetes and diabetic complications |
| KR20100088251A (ko) * | 2009-01-30 | 2010-08-09 | 강원대학교산학협력단 | 면역활성이 증진된 구멍갈파래 추출물의 제조방법 |
| WO2010115149A1 (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-07 | Desert Lake Technologies, Llc | Compositions and methods for reducing inflammation |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| HUIMIN QI et al., Antioxidant activity of different molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Kjellm (Chlorophyta) //Journal of applied phycology, 2005, vol.17, issue 6, pp.527-534. * |
| HUIMIN QI et al., Antioxidant activity of different molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Kjellm (Chlorophyta) //Journal of applied phycology, 2005, vol.17, issue 6, pp.527-534. R.CASTRO et all// Stimulation of turbot phagocytes by Ulva rigida C. Agardh polysaccharides //Aquaculture, vol.254, issues 1-4, 2006, p.9-20. * |
| R.CASTRO et all// Stimulation of turbot phagocytes by Ulva rigida C. Agardh polysaccharides //Aquaculture, vol.254, issues 1-4, 2006, p.9-20. * |
| С.П. КРЫЖАНОВСКИЙ и др. Биологическая активность сульфатированных полисахаридов из морских водорослей //Атеросклероз, научно-практический журнал, т.9, N 1, 2013, стр.77-92. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2016006189A (es) | 2016-10-28 |
| DK3071212T3 (da) | 2020-06-08 |
| BR112016011157B1 (pt) | 2021-01-05 |
| JP6644002B2 (ja) | 2020-02-12 |
| JP2016539184A (ja) | 2016-12-15 |
| FR3013222B1 (fr) | 2016-09-30 |
| CN105873596A (zh) | 2016-08-17 |
| EP3071212A1 (fr) | 2016-09-28 |
| EP3071212B1 (fr) | 2020-04-15 |
| MX374365B (es) | 2025-03-06 |
| RU2016119154A (ru) | 2017-11-22 |
| US20160287648A1 (en) | 2016-10-06 |
| WO2015071497A1 (fr) | 2015-05-21 |
| HUE048949T2 (hu) | 2020-09-28 |
| FR3013222A1 (fr) | 2015-05-22 |
| US10912805B2 (en) | 2021-02-09 |
| RU2016119154A3 (ru) | 2018-05-24 |
| ES2790678T3 (es) | 2020-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2687498C2 (ru) | Экстракт водорослей для использования в качестве иммуномодулирующего агента | |
| CN104825479B (zh) | 淫羊藿次苷类化合物、其制备方法，及其在促进人细胞产生γ-干扰素作用和在疾病治疗中的应用 | |
| US11273189B2 (en) | Lactobacillus plantarum TCI378 and its uses in losing fat and improving gastrointestinal functions | |
| US11633443B2 (en) | Algal extract comprising sulphated and non-sulphated polyanionic polysaccharides and uses thereof | |
| JP2002204687A (ja) | β−１．３−１．６グルカン（アウレオバシジウム培養液）の医療、保健、福祉、食品および各種産業分野での応用 | |
| Yamanaka et al. | Royal sun medicinal mushroom, Agaricus brasiliensis Ka21 (higher Basidiomycetes), as a functional food in humans | |
| WO2023284848A1 (zh) | 一种高蔗果三糖含量低聚果糖及其应用 | |
| JP6038486B2 (ja) | 台湾グリーンプロポリス抽出物を含む薬剤および栄養補給剤 | |
| Dillasamola et al. | immunostimulating study of active agent fraction from Sungkai (Peronema canescens Jack.) leaf from SARS-COV-2 virus antigen exposure to NK and CD8+ T cells | |
| Wang et al. | Effect of Echinacea purpurea (L.) Moench and its extracts on the immunization outcome of avian influenza vaccine in broilers | |
| KR100613625B1 (ko) | 면역기능 향상을 위한 약제학적 조성물 및 복령 추출물 | |
| TWI619507B (zh) | 治療或預防過敏性疾病的有效成分 | |
| JP2003146888A (ja) | 炎症性腸疾患予防治療剤 | |
| JP2009149572A (ja) | ソバスプラウトの溶媒抽出物およびその組成物 | |
| KR20050006533A (ko) | 해조류로부터 항암 및 면역활성 추출물을 추출하는 방법 | |
| RU2657819C1 (ru) | Средство, обладающее иммуномодулирующей активностью | |
| CN106619694A (zh) | 菊粉山药多糖组合物在制备具有调节肠道内菌群功效的保健食品中的用途 | |
| House et al. | Comparison of the hallucinogenic indole alkaloids ibogaine and harmaline for potential immunomodulatory activity | |
| CN102170890B (zh) | 抗禽流感病毒剂及含有抗禽流感病毒剂的产品 | |
| KR20030069910A (ko) | 암치료제 | |
| CN105878234B (zh) | 白术内酯ⅰ在制备增强免疫功能的药物及保健品中的应用 | |
| CN110559321A (zh) | 一种灵肽口服液及其制备方法 | |
| CN120615985A (zh) | 一种改善肠道健康的马奶粉及其制备工艺 | |
| JP2002193828A (ja) | 活性型インターロイキン１２産生誘導剤および免疫賦活剤 | |
| KR20100095280A (ko) | 함초 추출물을 함유한 면역 증강 활성 약학 조성물 |