RU2684713C2 - Химерный антигенный рецептор - Google Patents
Химерный антигенный рецептор Download PDFInfo
- Publication number
- RU2684713C2 RU2684713C2 RU2016117383A RU2016117383A RU2684713C2 RU 2684713 C2 RU2684713 C2 RU 2684713C2 RU 2016117383 A RU2016117383 A RU 2016117383A RU 2016117383 A RU2016117383 A RU 2016117383A RU 2684713 C2 RU2684713 C2 RU 2684713C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- osteosclerosis
- cells
- bcma
- cell
- car
- Prior art date
Links
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 137
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 119
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims abstract description 119
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 94
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract description 46
- 101000795167 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 102000001493 Cyclophilins Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108010068682 Cyclophilins Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims abstract description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 57
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 16
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 claims description 8
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 claims description 8
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 208000021161 Plasma cell disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 208000004346 Smoldering Multiple Myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000016025 Waldenstroem macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006569 extramedullary plasmacytoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000564 macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000010721 smoldering plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 201000000023 Osteosclerosis Diseases 0.000 claims 29
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- 108010065323 Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily Member 13 Proteins 0.000 description 63
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 20
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 11
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 9
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 7
- SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N acecarbromal Chemical compound CCC(Br)(CC)C(=O)NC(=O)NC(C)=O SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 6
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 6
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 6
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 102100036922 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Human genes 0.000 description 5
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 5
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 4
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 4
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 4
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 208000037914 B-cell disorder Diseases 0.000 description 3
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 3
- 101000801255 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Proteins 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 3
- 101710178300 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 208000031223 plasma cell leukemia Diseases 0.000 description 3
- 210000003720 plasmablast Anatomy 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 108010087967 type I signal peptidase Proteins 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000830600 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100024585 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13 Human genes 0.000 description 2
- 102100033726 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Human genes 0.000 description 2
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 208000008720 Bone Marrow Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 108091005941 EBFP Proteins 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000005250 Spontaneous Fractures Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006491 bone marrow cancer Diseases 0.000 description 1
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 1
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 208000025750 heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000046935 human TNFRSF17 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 210000000428 immunological synapse Anatomy 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000004160 naive b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 201000006576 solitary osseous plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
- A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
- A61K40/41—Vertebrate antigens
- A61K40/42—Cancer antigens
- A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K40/4214—Receptors for cytokines
- A61K40/4215—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Oncology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к химерным антигенным рецепторам (CAR), и может быть использовано в медицине для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией антигена созревания B-клеток (BCMA) и рецептора трансмембранного активатора, модулятора кальция и активатора лиганда циклофилина (TACI). Конструируют CAR, содержащий укороченный индуцирующий пролиферацию лиганд (APRIL), который связывается как с BCMA, так и с TACI; спейсерный домен; трансмембранный домен и внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен. Изобретение обеспечивает получение CAR, который эффективно связывает BCMA и TACI. 15 н. и 11 з.п. ф-лы, 16 ил., 9 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к химерному антигенному рецептору (CAR), который связывает антиген созревания B-клеток (BCMA). T-клетки, экспрессирующие такой CAR, полезны для лечения заболеваний плазматических клеток, таких как множественная миелома.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Множественная миелома
Множественная миелома (миелома) является злокачественной опухолью костного мозга, состоящей из плазматических клеток. Группы аномальных плазматических клеток накапливаются в костном мозге, где они препятствуют производству нормальных клеток крови. В США миелома является вторым наиболее распространенным гематологическим злокачественным новообразованием (после неходжкинской лимфомы) и составляет 13% от гематологических злокачественных новообразований и 1% от всех случаев заболевания раком. Заболевание является обременительным с точки зрения причиняемых страданий, а также медицинских расходов, поскольку оно вызывает патологические переломы, восприимчивость к инфекции, почечную недостаточность, а затем отказ костного мозга перед наступлением смерти.
В отличие от многих лимфом, миелома в настоящее время неизлечима. Стандартные химиотерапевтические средства, используемые для лечения лимфомы, в значительной степени неэффективны в случае миеломы. Кроме того, поскольку экспрессия CD20 утрачена в плазматических клетках, ритуксимаб невозможно использовать в случае этого заболевания. Новые средства, такие как бортезомиб и леналидомид, частично эффективны, но не способны приводить к долгосрочной ремиссии.
Таким образом, существует потребность в альтернативных средствах для лечения миеломы, имеющих повышенную эффективность и производящих более выраженные долговременные эффекты.
Химерные антигенные рецепторы (CAR)
Химерные антигенные рецепторы представляют собой белки, которые в их обычном формате добавляют специфичность моноклонального антитела (мАт) к эффекторной функции T-клеток. Их обычной формой является форма белка с трансмембранным доменом типа I, при этом узнающий антиген амино-конец, спейсер, трансмембранный домен, все связаны со сложным эндодоменом, который передает сигналы выживания и активации T-клеток (смотри фигуру 3).
В наиболее распространенной форме этих молекул используют одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFv), полученные из моноклональных антител, для узнавания целевого антигена. scFv слит через спейсер и трансмембранный домен с сигнальным эндодоменом. Такие молекулы приводят к активации T-клетки в ответ на узнавание scFv его мишени. Когда T-клетки экспрессируют такой CAR, они узнают и уничтожают клетки-мишени, экспрессирующие целевой антиген. Были разработаны несколько CAR против ассоциированных с опухолью антигенов, и подходы, заключающиеся в адоптивном переносе с использованием таких CAR-экспрессирующих T-клеток, в настоящее время проходят клинические испытания в качестве способа лечения различных форм рака. В статье Carpenter et al. (2013, Clin Cancer Res 19(8) 2048-60) описан CAR, который содержит scFv против антигена созревания B-клеток (BCMA).
BCMA представляет собой трансмембранный белок, который предпочтительно экспрессируется в зрелых лимфоцитах, то есть, B-клетках памяти, плазмабластах и плазматических клетках костного мозга. BCMA также экспрессируется на клетках множественной миеломы.
В статье Carpenter et al. показано, что T-клетки, трансдуцированные для экспрессии анти-BCMA CAR, способны специфически уничтожать миеломные клетки из плазмацитомы пациента с миеломой.
Хотя подходы с использованием CAR на основе анти-BCMA антител являются многообещающими, особого внимания в случае таргетирования данного антигена требует тот факт, что плотность BCMA на клетках миеломы крайне низка, в сравнении, например, с CD19 на клетках лимфомы. Таким образом, существует необходимость в повышении чувствительности процесса узнавания клетки-мишени T-клеткой с анти-BCMA CAR.
ОПИСАНИЕ ФИГУР
Фигура 1 - Лигандная специфичность и определение функции APRIL и BAFF
Фактор, активирующий B-клетки (BAFF, TNFSF13B), взаимодействует с рецептором BAFF (BAFF-R, TNFRSF13C), B-клеточным мембранным антигеном (BCMA, TNFRSF17), а также трансмембранным активатором, модулятором кальция и активатором лиганда циклофилина (TACI, TNFRSF13B), в то время как лиганд A, индуцирующий пролиферацию (APRIL, TNFSF13), взаимодействует с BCMA, TACI и протеогликанами. Активация BAFF-R влияет на выживаемость периферических B-клеток, в то время как BCMA может влиять на выживаемость плазматических клеток. Во взаимодействии APRIL с протеогликанами принимает участие амино-конец APRIL, содержащий кислый сульфатированный гликоль-саминогликан в виде боковой цепи.
Фигура 2 - Данные по экспрессии BCMA на миеломе
Клетки миеломы из образцов костного мозга от 39 пациентов с множественной миеломой выделяли отбором с помощью магнитных гранул с CD138+. Эти клетки окрашивали анти-BCMA моноклональным антителом J6MO, конъюгированным с PE (GSK). Число копий антигена подсчитывали с использованием гранул PE Quantibrite beads (Becton Dickenson) в соответствии с инструкциями производителя. Диаграмма типа «ящик с усами» числа копий антигена представлена наряду с указанным диапазоном, межквартильными и средними значениями. Авторы изобретения обнаружили, что диапазон составляет 348,7-4268,4 копий BCMA на клетку со средним значением 1181 и медианным значением 1084,9.
Фигура 3 - Стандартный дизайн химерного антигенного рецептора
Представлен типичный формат химерного антигенного рецептора. Они представляют собой трансмембранные белки типа I. Эктодомен узнает антиген. Он состоит из одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv) антитела, который присоединен к спейсерному домену. Тот, в свою очередь, связан с трансмембранным доменом, который заякоривает молекулу в мембране. И наконец, этот домен связан с эндодоменом, который передает внутриклеточные сигналы клетке. Он состоит из одного или более сигнальных доменов.
Фигура 4 -Дизайн разных CAR, созданных на основе APRIL.
Дизайн CAR, представленный на фигуре 3, модифицировали таким образом, что scFv был заменен модифицированной формой APRIL для функционирования в качестве антигенсвязывающего домена: APRIL был укорочен так, что протеогликан-связывающий амино-конец отсутствовал. Затем сигнальный пептид присоединяли к укороченному амино-концу APRIL для направления белка к клеточной поверхности. Было получено три CAR с таким связывающим доменом на основе APRIL: A. В первом CAR в качестве спейсерного домена использовали стеблевой домен CD8 человека. B. Во втором CAR качестве спейсерного домена использовали шарнирную область из IgG1. C. В третьем CAR в качестве спейсера использовали шарнирный, CH2 и CH3 домены человеческого IgG1, модифицированные pva/a мутациями, описанными в статье Hombach et al. (2010 Gene Ther. 17: 1206-1213), для уменьшения связывания Fc-рецептора (далее в настоящем документе называемый Fc-pvaa). Во всех CAR эти спейсеры были связаны с трансмембранным доменом CD28, а затем с состоящим из трех частей эндодоменом, содержащим слитый продукт CD28, OX40 и CD3-дзета эндодомена (Pule et al., Molecular therapy, 2005: Volume 12; Issue 5; Pages 933-41).
Фигура 5 - Аннотированные аминокислотные последовательности вышеуказанных трех APRIL-CAR
A: Представлена аннотированная аминокислотная последовательность APRIL-CAR со стеблевой областью CD8; B: Представлена аннотированная аминокислотная последовательность CAR на основе APRIL с шарнирной областью IgG1; C: Представлена аннотированная аминокислотная последовательность CAR на основе APRIL с Fc-pvaa.
Фигура 6- Экспрессия и связывание лиганда CAR на основе разных APRIL
A. Рецепторы совместно экспрессировали с маркерным геном укороченного CD34 в ретровирусном генном векторе. Экспрессия маркерного гена на трансдуцированных клетках является подтверждением трансдукции. B. T-клетки трансдуцировали CAR на основе APRIL со спейсером либо из стеблевой области CD8, шарнирной области IgG1, либо из Fc. Для тестирования того, могут ли эти рецепторы стабильно экспрессироваться на клеточной поверхности, T-клетки затем окрашивали анти-APRIL-биотин/стрептавидин APC и анти-CD34. Проводили проточно-цитометрический анализ. APRIL в равной степени обнаруживали на клеточной поверхности в трех CAR, это свидетельствовало о том, что они в равной степени стабильно экспрессировались. C. Затем определяли способность CAR узнавать TACI и BCMA. Трансдуцированные T-клетки окрашивали либо рекомбинантным BCMA, либо TACI, слитыми с Fc IgG2a мыши, наряду с вторичными антителами против иммуноглобулинов мыши, и анти-CD34. Все три формата рецептора продемонстрировали связывание как с BCMA, так и с TACI. Неожиданно было обнаружено, что связывание с BCMA, судя по всему, было сильнее, чем с TACI. Другим удивительным наблюдением было то, что, хотя все три CAR были в равной степени экспрессированы, CAR со стеблевой областью CD8 и шарнирной областью IgG1, похоже, лучше узнавали BCMA и TACI, чем CAR со спейсером Fc.
Фигура 7 - Функционирование различных конструктов CAR.
Проводили функциональные анализы трех разных CAR на основе APRIL. T-клетки периферической крови нормальных доноров либо не трансдуцировали (н/т), либо трансдуцировали для экспрессии разных CAR. Трансдукцию проводили с использованием супернатантов с одинаковыми титрами. Эти T-клетки затем истощали по CD56 для удаления неспецифической активности NK и использовали в качестве эффекторов. Клетки SupT1, либо не трансдуцированные (н/т), либо трансдуцированные для экспрессии BCMA или TACI, использовали в качестве мишеней. Представленные данные являются средними величинами и стандартным отклонением из 5 независимых экспериментов. A. Специфическое уничтожение экспрессирующих BCMA и TACI клеток T-клетками определяли в анализе высвобождения хрома. B. Также определяли высвобождение интерферона-γ. Мишени и эффекторы совместно культивировали в соотношении 1:1. Через 24 часа интерферон-γ в супернатанте анализировали методом ELISA. C. Также определяли пролиферацию/выживаемость T-клеток с CAR путем подсчета числа T-клеток с CAR в той же совместной культуре, инкубированной еще в течение 6 дней. Все 3 CAR демонстрировали прямые ответы против экспрессирующих BCMA и TACI мишеней. Ответы на BCMA были сильнее, чем на TACI.
Фигура 8 - Уничтожение клеток первичной миеломы T-клетками с APRIL-CAR
Поскольку большинство клеток первичной миеломы экспрессируют небольшое количество молекул BCMA на своей поверхности, проводили исследование того, происходит ли уничтожение клеток первичной миеломы, несмотря на экспрессию низкой плотности. Были выбраны три случая, представляющие диапазон экспрессии BCMA, описанный на фигуре 2: в первом случае отражающее экспрессию окрашивание было тусклым (ниже, чем в среднем); во втором случае экспрессия была промежуточной (примерно средняя экспрессия) и в третьем случае отражающее экспрессию окрашивание было ярким (выше, чем при средней экспрессии). Гистограмма окрашивания BCMA в зависимости от изотипического контроля для всех трех случаев представлена слева. В этом анализе тестировали только APRIL-CAR со стеблевой областью CD8 и шарнирной областью. Слева показана выживаемость в сравнении с исходным количеством клеток миеломы в день 3 и день 6 после совместного культивирования в соотношении 1:1 клеток миеломы и T-клеток с CAR. Ко дню 6 >95% клеток миеломы были уничтожены, включая те, которые имели тусклое окрашивание на экспрессию BCMA.
Фигура 9 -
Вектор, коэкспрессирующий CAR на основе APRIL с укороченным CD34
Линию клеток, экспрессирующих вектор, используемый для скрининга, инкубировали либо с BCMA-Fc, либо с TACI-Fc, и окрашивали как анти-CD34, так и анти-Fc человека мАт, конъюгированными с PE и FITC. Затем клетки изучали методом проточной цитометрии. Это показало типичную картину связывания BCMA и TACI относительно маркерного гена CD34.
Фигура 10A - Схематическая диаграмма, иллюстрирующая классический CAR
B: Дизайн разных созданных CAR на основе APRIL.
Сигнальный пептид был присоединен к укороченному амино-концу APRIL. Тот был слит с разными спейсерами: или шарнирной областью, CH2 и CH3 доменами IgG1 человека, модифицированными мутацией pvaa, как описано в статье Hombach et al. (2010 Gene Ther. 17: 1206-1213), для уменьшения связывания Fc-рецептора; или стеблевой областью CD8α человека; или шарнирной областью IgG1. Эти спейсеры были связаны с состоящим из трех частей эндодоменом, содержащим трансмембранный домен CD28, эндодомен OX40 и эндодомен CD3-дзета.
Фигура 11 -
Экспрессия разных CAR
Рецепторы совместно экспрессировали с усиленным синим флуоресцентным белком 2 (eBFP2), используя последовательность IRES. Первичные человеческие T-клетки трансдуцировали и окрашивали анти-APRIL-биотин/стрептавидин APC. Проводили проточно-цитометрический анализ. Сигнал eBFP2 показан против результатов обнаружения APRIL. Все три CAR стабильно экспрессированы (репрезентативный эксперимент из 3 независимых экспериментов, проведенных с использованием T-клеток 3 трех разных нормальных доноров).
Фигура 12 -- Анализ высвобождения хрома
Использовали T-клетки периферической крови нормальных доноров, либо не трансдуцированные (н/т), либо трансдуцированные для экспрессии CAR с разными спейсерами, в качестве эффекторов, и клетки SupT1, либо не трансдуцированные (н/т), либо трансдуцированные для экспрессии BCMA или TACI, в качестве мишеней. T-клетки были истощены по CD56 для уменьшения активности NK. Данный эксперимент является репрезентативным из трех независимых экспериментов и приведен в качестве примера. Кумулятивные данные по уничтожению приведены на фигуре 7A. Видно специфическое уничтожение экспрессирующих BCMA и TACI клеток T-клетками и отсутствие активности в отношении клеток, не являющихся мишенями.
Фигура 13 -
Высвобождение интерферона-гамма
Высвобождение интерферона-гамма при совместном культивировании в соотношении 1:1 эффекторов и мишеней измеряли методом ELISA. Конструкт со стеблевой областью CD8, судя по всему, обладал наибольшей специфичностью, в то время как конструкт с шарнирной областью, вызывающий наибольшее высвобождение интерферона, демонстрировал некоторую неспецифическую активность. Данный эксперимент является репрезентативным из 3 независимых экспериментов и приведен в качестве примера. Кумулятивные данные по высвобождению интерферона-гамма приведены на фигуре 7B.
Фигура 14 -- Примеры экспрессии BCMA на первичных миеломах
Показаны четыре примера образцов миеломы, окрашенных с помощью крысиных мАт Vicky1 против BCMA человека. На первой панели показано яркое окрашивание BCMA в образце от пациента с плазмоклеточным лейкозом (необычной, запущенной и агрессивной формой миеломы). Другие три случая являются клинически и морфологически типичными миеломами. Они демонстрируют обычно наблюдаемое промежуточное или тусклое окрашивание. Сверху наложено окрашивание изотипическим контролем (серый цвет). Эти данные являются примером кумулятивных данных по экспрессии BCMA, показанной на фигуре 2.
Фигура 15 -
Аминокислотная последовательность APRIL-CAR с эпитопным маркером V5.
A: dAPRIL-HCH2CH3pvaa-CD28OXZ
B: dAPRIL-CD8STK-CD28OXZ
C: dAPRIL-HNG-CD28OXZ.
Последовательности на данной фигуре отличаются от последовательностей на фигуре 5, имеющих другой сигнальный пептид и не имеющих маркера V5.
Фигура 16 -
Демонстрация
in vivo
функционирования T-клеток с APRIL-CAR
Шесть самок мышей NSG в возрасте 3 месяцев получали 1x107 клеток MM1.s.FLuc инъекцией в хвостовую вену. Биолюминесцентное изображение мышей получали в день 8 и день 13. После визуализации в день 13 четыре мыши получали 5×106 T-клеток с APRIL-CAR инъекцией в хвостовую вену. Визуализацию у мышей проводили в день 13 и день 18. Мыши, получавшие T-клетки с CAR, отмечены (*). Ремиссию миеломы можно наблюдать ко дню 18 у всех получавших лечение мышей, в то время как заболевание у не получавших лечение мышей прогрессировало.
СУЩНОСТЬ АСПЕКТОВ ИЗОБРЕТЕНИЯ
B-клеточный мембранный антиген (BCMA) представляет собой поверхностный белок, экспрессируемый почти на всех видах множественной миеломы (MM). В иных случаях BCMA экспрессируется только на плазматических клетках, таким образом, таргетирование данного антигена может подтверждать эффективность лечения миеломы. Однако при таргетировании этого антигена следует иметь в виду низкий уровень экспрессии BCMA (смотри фигуру 2).
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что, если использовать связывающий домен на основе лиганда A, индуцирующего пролиферацию (APRIL), а не связывающего BCMA антитела, в молекуле CAR-типа, то T-клетки, экспрессирующие такие CAR, обеспечивают очень эффективное уничтожение экспрессирующих BCMA клеток-мишеней, даже тех, которые отличаются низкими уровнями экспрессии.
Не желая быть связанными теорией, авторы настоящего изобретения предполагают, что это происходит в результате того, что связыванию BCMA с APRIL присуща трехкратная симметрия. Это означает, что в каждом взаимодействии CAR и BCMA принимают участие 3 CAR, сближая 3 эндодомена на поверхности T-клетки. Поскольку T-клеточная активация запускается за счет тесного сближения сигнальных эндодоменов в иммунологическом синапсе, дизайн CAR по настоящему изобретению является высокочувствительным и специфическим. Поскольку BCMA экспрессируется с очень низкой плотностью на клетках первичной миеломы (смотри фигуры 2 и 7), такой дизайн рецептора особенно подходит для данной мишени.
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к химерному антигенному рецептору (CAR), содержащему:
(i) связывающий антиген созревания B-клеток (BCMA) домен, который содержит по меньшей мере часть индуцирующего пролиферацию лиганда (APRIL);
(ii) спейсерный домен
(iii) трансмембранный домен; и
(iv) внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
BCMA-связывающий домен может содержать укороченный APRIL, который содержит сайт связывания BCMA, но лишен амино-концевой части APRIL, ответственной за связывание протеогликанов. Такая молекула может содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No. 14. Альтернативно, молекула может содержать вариант данной последовательности, имеющий по меньшей мере на 80% идентичную последовательность, который связывает BCMA.
Трансмембранный и внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен могут содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No. 7, или ее вариант, имеющий по меньшей мере на 80% идентичную последовательность.
BCMA-связывающий домен и трансмембранный домен могут быть связаны спейсером. Спейсер может представлять собой одно из следующего: спейсер из IgG1; шарнирную область IgG1; или стеблевую область CD8 человека.
CAR по первому аспекту изобретения может содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No. 1, 2, 3, 4, 5 или 6, либо ее вариант, который имеет по меньшей мере на 80% идентичную последовательность, но сохраняет способность i) связывать BCMA и ii) индуцировать T-клеточную сигнализацию.
CAR по первому аспекту изобретения может связываться с BCMA в виде тримера.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к нуклеотидной последовательности, кодирующей CAR по любому из предшествующих пунктов.
Нуклеотидная последовательность может содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No 15, 16, 17, 18, 19 или 20, либо ее вариант, имеющий по меньшей мере на 80% идентичную последовательность.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к вектору, содержащему нуклеотидную последовательность по второму аспекту изобретения.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к T-клетке или NK-клетке, экспрессирующей CAR по первому аспекту изобретения.
В пятом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения T-клетки или NK-клетки по четвертому аспекту изобретения, включающему этап введения нуклеиновой кислоты по второму аспекту изобретения в T-клетку или NK-клетку.
В шестом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вектор по третьему аспекту изобретения или T-клетку/NK-клетку по четвертому аспекту изобретения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания плазматических клеток, включающему этап введения субъекту вектора по третьему аспекту изобретения или T-клетки/NK-клетки по четвертому аспекту изобретения.
Заболевание плазматических клеток может быть выбрано из плазмацитомы, плазмоклеточного лейкоза, множественной миеломы, макроглобулинемии, амилоидоза, макроглобулинемии Вальденстрема, солитарной костной плазмацитомы, экстрамедуллярной плазмацитомы, остеосклеротической миеломы, болезни тяжелых цепей, моноклональной гаммопатии неопределенного значения и тлеющей множественной миеломы.
Заболевание плазматических клеток может представлять собой множественную миелому.
В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к вектору по третьему аспекту изобретения или T-клетке/NK-клетке по четвертому аспекту изобретения для использования в лечении заболевания плазматических клеток.
В девятом аспекте настоящее изобретение относится к применению вектора по третьему аспекту изобретения или T-клетки/NK-клетки по четвертому аспекту изобретения в производстве лекарственного средства для лечения заболевания плазматических клеток.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ (CAR)
Химерные антигенные рецепторы (CAR), также известные как химерные T-клеточные рецепторы, искусственные T-клеточные рецепторы и химерные иммунорецепторы, представляют собой сконструированные рецепторы, которые придают произвольную специфичность иммунной эффекторной клетке. В классическом CAR (фигура 3) специфичность моноклонального антитела придана T-клетке или NK-клетке. Кодирующие CAR нуклеиновые кислоты можно вводить в T-клетки или NK-клетки с использованием, например, ретровирусных векторов. Таким образом может быть получено большое число специфичных для раковой опухоли T-клеток или NK-клеток для адоптивного клеточного переноса. Начальные клинические исследования такого подхода показали эффективность при некоторых формах рака, в основном при таргетировании пан-B-клеточного антигена CD19 для лечения В-клеточных злокачественных новообразований.
Связывающий целевой антиген домен CAR обычно слит через спейсер и трансмембранный домен с сигнальным эндодоменом. Когда CAR связывает целевой антиген, это приводит к передаче активирующего сигнала T-клетке, на которой он экспрессирован.
CAR по настоящему изобретению содержит:
(i) связывающий антиген созревания B-клеток (BCMA) домен, содержащий по меньшей мере часть индуцирующего пролиферацию лиганда (APRIL), который обсуждается более подробно ниже;
(ii) спейсер
(iii) трансмембранный домен; и
(iv) внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
CAR по настоящему изобретению может содержать одну из следующих аминокислотных последовательностей:
SEQ ID No. 1 (dAPRIL-HCH2CH3pvaa-CD28OXZ)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID No. 2 (dAPRIL-CD8STK-CD28OXZ)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID No. 3 (dAPRIL-HNG-CD28OXZ)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPAEPKSPDKTHTCPPCPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID No. 4 (dAPRIL-HCH2CH3pvaa-CD28OXZ)
MGTSLLCWMALCLLGADHADGKPIPNPLLGLDSTSGGGGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID No. 5 (dAPRIL-CD8STK-CD28OXZ)
MGTSLLCWMALCLLGADHADGKPIPNPLLGLDSTSGGGGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID No. 6 (dAPRIL-HNG-CD28OXZ)
MGTSLLCWMALCLLGADHADGKPIPNPLLGLDSTSGGGGSVLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKLSGGGSDPAEPKSPDKTHTCPPCPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR.
Молекула по изобретению может содержать вариант последовательности, обозначенной SEQ ID No. 1, 2, 3, 4, 5 или 6, имеющий по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичную последовательность, при условии, что эта вариантная последовательность представляет собой молекулу, определенную в первом аспекте изобретения, то есть, CAR, который содержит:
(i) BCMA-связывающий домен;
(ii) спейсерный домен
(iii) трансмембранный домен; и
(iv) внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
Процент идентичности между двумя полипептидными последовательностями можно легко определять с помощью программы, такой как BLAST, которая находится в свободном доступе на вебсайте http://blast.ncbi.nlm.nih.gov.
ТРАНСМЕМБРАННЫЙ ДОМЕН
Трансмембранный домен представляет собой последовательность CAR, которая пронизывает мембрану. Он может содержать гидрофобную альфа-спираль. Трансмембранный домен может быть получен из CD28, что придает хорошую стабильность рецептору. Трансмембранный домен может быть получен из любого трансмембранного белка типа I. Трансмембранный домен может представлять собой синтетическую последовательность, которая, согласно предсказаниям, образует гидрофобную спираль.
ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ T-КЛЕТОЧНЫЙ СИГНАЛЬНЫЙ ДОМЕН (ЭНДОДОМЕН)
Эндодомен представляет собой передающую сигнал часть CAR. После узнавания антигена рецепторы группируются и сигнал передается клетке. Наиболее часто используемый компонент эндодомена представляет собой эндодомен CD3-дзета, который содержит 3 ITAM. Он передает сигнал активации T-клетке после связывания антигена. CD3-дзета может не обеспечивать надлежащий сигнал активации и могут быть необходимы дополнительные костимулирующие сигналы. Например, химерные CD28 и OX40 можно использовать вместе с CD3-дзета для передачи сигнала пролиферации/выживания, или все три можно использовать вместе (Pule et al., Molecular therapy, 2005: Volume 12; Issue 5; Pages 933-41). Эндодомен CAR также может быть получен из других сигнальных доменов, либо отдельно, либо в сочетании, полученных из сигнальных белков, встречающихся в природе или искусственных, сконструированных специалистами в данной области, таким образом, чтобы CAR передавал надлежащий сигнал для эффективного терапевтического действия CAR.
Эндодомен CAR по настоящему изобретению может содержать эндодомен CD28, а также OX40 и CD3-дзета эндодомен.
Трансмембранный и внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен (эндодомен) CAR по настоящему изобретению могут содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No. 7 или ее вариант, имеющий по меньшей мере на 80% идентичную последовательность.
SEQ ID No. 7
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKIRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
Вариантная последовательность может иметь по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с SEQ ID No. 7, при условии, что последовательность создает эффективный трансмембранный домен и эффективный внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
СИГНАЛЬНЫЙ ПЕПТИД
CAR по настоящему изобретению может содержать сигнальный пептид, так что, когда CAR экспрессируется внутри клетки, такой как T-клетка, формирующийся белок направляется в эндоплазматический ретикулум и затем к клеточной поверхности, где он экспрессируется.
Ядро сигнального пептида может содержать длинный гидрофобный аминокислотный участок, имеющий тенденцию к образованию одиночной альфа-спирали. Сигнальный пептид может начинаться с короткого положительного заряженного аминокислотного участка, который помогает обеспечивать правильную топологию полипептида в процессе транслокации. На конце сигнального пептида, как правило, существует аминокислотный участок, который узнается и расщепляется сигнальной пептидазой. Сигнальная пептидаза может расщеплять пептид либо в процессе, либо после завершения транслокации, с образованием свободного сигнального пептида и зрелого белка. Свободные сигнальные пептиды затем расщепляются особыми протеазами.
Сигнальный пептид может находиться на амино-конце молекулы.
CAR по изобретению может иметь общую формулу:
Сигнальный пептид - BCMA-связывающий домен - спейсерный домен - трансмембранный домен - внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
Сигнальный пептид может содержать SEQ ID No. 8 или 9, или их вариант, имеющий 5, 4, 3, 2 или 1 аминокислотные мутации (вставки, замены или добавления), при условии, что сигнальный пептид продолжает функционировать, обеспечивая экспрессию CAR на клеточной поверхности.
SEQ ID No. 8: MGTSLLCWMALCLLGADHADG
SEQ ID No. 9: METDTLLLWVLLLWVPGSTG
Сигнальный пептид с последовательностью SEQ ID No. 8 и SEQ ID No 9 является компактным и высокоэффективным. Согласно предсказаниям, он обеспечивает примерно 95% расщепление после концевого остатка глицина, делая возможным эффективное отделение с помощью сигнальной пептидазы.
СПЕЙСЕР
CAR по настоящему изобретению может содержать последовательность спейсера для связывания BCMA-связывающего домена с трансмембранным доменом и пространственного разделения BCMA-связывающего домена и эндодомена. Гибкий спейсер позволяет BCMA-связывающему домену ориентироваться в разных направлениях, делая возможным связывание BCMA.
Последовательность спейсера может, например, представлять собой Fc-область IgG1, шарнирную область IgG1 или стеблевую область CD8. Альтернативно, линкер может содержать альтернативную линкерную последовательность, которая имеет сходную длину и/или характер расположения доменов, что и Fc-область IgG1, шарнирная область IgG1 или стеблевая область CD8.
Спейсер может быть коротким спейсером, например, спейсером, который содержит менее 100, менее 80, менее 60 или менее 45 аминокислот. Спейсер может представлять собой или содержать шарнирную область IgG1 или стеблевую область CD8, либо их модифицированные варианты.
Спейсер из IgG1 человека можно изменять для удаления Fc-связывающих фрагментов.
Примеры аминокислотных последовательностей для этих спейсеров приведены ниже:
SEQ ID No. 10 (шарнир-CH2CH3 из IgG1 человека)
AEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKD
SEQ ID No. 11 (стеблевая область CD8 человека):
TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDI
SEQ ID No. 12 (шарнирная область IgG1 человека):
AEPKSPDKTHTCPPCPKDPK
B-КЛЕТОЧНЫЙ МЕМБРАННЫЙ АНТИГЕН (BCMA)
CAR по первому аспекту изобретения содержит домен, который связывает BCMA.
BCMA, также известный как TNFRSF17, представляет собой специфический поверхностный антиген плазматических клеток, который экспрессируется исключительно на гемопоэтических клетках B-клеточной линии дифференцировки или дендритных клетках. Он является членом семейства рецепторов TNF. BCMA не экспрессируется на наивных B-клетках, но его экспрессия повышается в процессе дифференциации B-клеток в плазмабласты, и он сильно экспрессирован на B-клетках памяти, плазмабластах и плазматических клетках костного мозга. BCMA также экспрессируется на большинстве клеток первичной миеломы. В отличие от других мишеней CAR, таких как CD19, BCMA экспрессируется с низкой плотностью (фигура 2).
BCMA действует в сети взаимосвязанных лигандов и рецепторов, что схематично представлено на фигуре 1. Два других рецептора TNF имеют общие лиганды APRIL и BAFF с BCMA - TACI (TNFRSF13B), который присутствует на активированных T-клетках и всех B-клетках, и BAFF-R (TNFRSF13C), который преимущественно экспрессируется на B-лимфоцитах. Клетки множественной миеломы в некоторых случаях экспрессируют TACI и в большинстве случаев BCMA, но никогда BAFF-R.
APRIL
BCMA-связывающий домен CAR по изобретению содержит по меньшей мере часть индуцирующего пролиферацию лиганда (APRIL). APRIL также известен как TNFSF13.
Последовательность дикого типа APRIL доступна на UNIPROT/O75888 и приведена ниже (SEQ ID No. 13). Он не является классическим секретируемым белком в том, что у него нет сигнального пептида. Он имеет сайт расщепления фурином «KQKKQK» (подчеркнут в SEQ ID No. 13). Амино-конец участвует в связывании протеогликанов.
BCMA-связывающий домен может содержать BCMA-связывающий сайт из APRIL. BCMA-связывающий домен может содержать фрагмент APRIL, который содержит BCMA-связывающий сайт.
BCMA-связывающий домен может содержать укороченный APRIL, который лишен амино-концевого фрагмента молекулы. Укороченный APRIL может сохранять способность к связыванию BCMA и TACI, но утрачивает способность к связыванию протеогликанов. Укороченный APRIL может расщепляться на сайте расщепления фурином или сразу за ним. Укороченный APRIL может быть лишен амино-концевых 116 аминокислот из молекулы APRIL дикого типа с последовательностью SEQ ID No. 13. Укороченный APRIL может содержать последовательность, обозначенную SEQ ID No. 14 (которая соответствует части SEQ ID No. 13, выделенной жирным шрифтом), или ее вариант. Он соответствует части молекулы, которая необходима для связывания BCMA и TACI.
SEQ ID No. 13
SEQ ID No. 14
VLHLVPINATSKDDSDVTEVMWQPALRRGRGLQAQGYGVRIQDAGVYLLYSQVLFQDVTFTMGQVVSREGQGRQETLFRCIRSMPSHPDRAYNSCYSAGVFHLHQGDILSVIIPRARAKLNLSPHGTFLGFVKL
CAR по настоящему изобретению может содержать вариант укороченной молекулы APRIL, обозначенной SEQ ID No. 14, который по меньшей мере на 80% идентичен по аминокислотной последовательности и который обладает такой же или улучшенной способностью к связыванию BCMA. Вариантная последовательность может иметь по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99% идентичности последовательности с SEQ ID No. 14.
НУКЛЕОТИДНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ
Второй аспект изобретения относится к нуклеотидной последовательности, кодирующей CAR по первому аспекту изобретения.
Нуклеотидная последовательность может представлять собой или содержать одну из следующих последовательностей:
SEQ ID No. 15 (dAPRIL-HCH2CH3pvaa-CD28OXZ)
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGCAGCACCGGCAGCGTGCTCCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCGCCGAGCCCAAATCTCCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTCCCGTGGCCGGCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCGCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAACCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAAAAAGATCCCAAATTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA
SEQ ID No. 16 (dAPRIL-CD8STK-CD28OXZ)
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGCAGCACCGGCAGCGTGCTCCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA
SEQ ID No. 17 (dAPRIL-HNG-CD28OXZ)
ATGGAGACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGCAGCACCGGCAGCGTGCTCCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCGCCGAGCCCAAATCTCCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAAAAGATCCCAAATTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA
SEQ ID No. 18 (dAPRIL-HCH2CH3pvaa-CD28OXZ)
ATGGGCACCTCCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGAGCCGACCACGCCGACGGCAAGCCCATTCCCAACCCCCTGCTGGGCCTGGACTCCACCTCTGGCGGAGGCGGCAGCGTGCTGCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCGCCGAGCCCAAATCTCCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTCCCGTGGCCGGCCCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCGCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAACCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAAAAAGATCCCAAATTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA
SEQ ID No. 19 (dAPRIL-CD8STK-CD28OXZ)
ATGGGCACCTCCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGAGCCGACCACGCCGACGGCAAGCCCATTCCCAACCCCCTGCTGGGCCTGGACTCCACCTCTGGCGGAGGCGGCAGCGTGCTGCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA
SEQ ID No. 20 (dAPRIL-HNG-CD28OXZ)
ATGGGCACCTCCCTGCTGTGCTGGATGGCCCTGTGCCTGCTGGGAGCCGACCACGCCGACGGCAAGCCCATTCCCAACCCCCTGCTGGGCCTGGACTCCACCTCTGGCGGAGGCGGCAGCGTGCTGCACCTGGTGCCCATCAACGCCACCAGCAAGGACGACTCTGATGTGACCGAGGTGATGTGGCAGCCAGCCCTGAGACGGGGCAGAGGCCTGCAGGCCCAGGGCTACGGCGTGAGAATCCAGGACGCTGGCGTGTACCTGCTGTACTCCCAGGTGCTGTTCCAGGACGTGACCTTCACAATGGGCCAGGTGGTGAGCCGGGAGGGCCAGGGCAGACAGGAGACCCTGTTCCGGTGCATCCGGAGCATGCCCAGCCACCCCGACAGAGCCTACAACAGCTGCTACAGCGCTGGCGTGTTTCACCTGCACCAGGGCGACATCCTGAGCGTGATCATCCCCAGAGCCAGAGCCAAGCTGAACCTGTCCCCCCACGGCACCTTTCTGGGCTTCGTGAAGCTGTCTGGAGGCGGCTCGGATCCCGCCGAGCCCAAATCTCCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAAAAGATCCCAAATTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCCAGGGACCAGAGGCTGCCCCCCGATGCCCACAAGCCCCCTGGGGGAGGCAGTTTCCGGACCCCCATCCAAGAGGAGCAGGCCGACGCCCACTCCACCCTGGCCAAGATCAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCTCCTCGCTAA.
Нуклеотидная последовательность может кодировать ту же аминокислотную последовательность, что и последовательность, закодированная SEQ ID No. 15, 16, 17, 18 19 или 20, но может представлять собой другую нуклеотидную последовательность, вследствие вырожденности генетического кода. Нуклеотидная последовательность может иметь по меньшей мере 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичности с последовательностью, обозначенной SEQ ID No. 15, 16, 17, 18 19 или 20, при условии, что она кодирует CAR, определенный в первом аспекте изобретения.
ВЕКТОР
Настоящее изобретение также относится к вектору, содержащему нуклеотидную последовательность по настоящему изобретению. Такой вектор можно использовать для введения нуклеотидной последовательности в клетку-хозяина таким образом, что она экспрессирует и продуцирует молекулу по первому аспекту изобретения.
Вектор может, например, представлять собой плазмиду или синтетическую мРНК, или вирусный вектор, такой как ретровирусный вектор или лентивирусный вектор.
Вектор может быть способен трансфицировать или трансдуцировать эффекторную клетку.
КЛЕТКА-ХОЗЯИН
Изобретение также относится к клетке-хозяину, содержащей нуклеиновую кислоту по изобретению. Клетка-хозяин может быть способна экспрессировать CAR по первому аспекту изобретения.
Клетка-хозяин может быть человеческой T-клеткой или человеческой NK-клеткой.
T-клетку, способную экспрессировать CAR по изобретению, можно получать путем трансдукции или трансфекции T-клетки кодирующей CAR нуклеиновой кислотой.
T-клетка может представлять собой ex vivo T-клетку. T-клетка может быть из образца мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК). T-клетки можно активировать и/или размножать перед трансдукцией кодирующей CAR нуклеиновой кислотой, например, путем обработки анти-CD3 моноклональным антителом.
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей вектор или экспрессирующую CAR T-клетку по изобретению в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом и, необязательно, одним или более другими фармацевтически активными полипептидами и/или соединениями. Такой препарат, например, может быть в форме, подходящей для внутривенной инфузии.
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ
T-клетки, экспрессирующие молекулу CAR по настоящему изобретению, способны к уничтожению раковых клеток, таких как клетки множественной миеломы. Экспрессирующие CAR T-клетки можно создавать ex vivo или из собственной периферической крови пациента (1я сторона), или в контексте трансплантата гемопоэтических стволовых клеток из периферической крови донора (2я сторона), или из периферической крови от не связанного донора (3я сторона). Альтернативно, T-клетки с CAR можно получать путем ex-vivo дифференциации индуцируемых клеток-предшественников или эмбриональных клеток-предшественников T-клеток. В этих случаях T-клетки с CAR получают путем введения ДНК или РНК, кодирующей CAR, одним из многих методов, включая трансдукцию вирусным вектором, трансфекцию ДНК или РНК.
T-клетки, экспрессирующие молекулу CAR по настоящему изобретению, можно использовать для лечения онкологического заболевания, в частности, заболевания плазматических клеток или B-клеточного заболевания, связанного с повышенной экспрессией BCMA.
Заболевания плазматических клеток включают плазмацитому, плазмоклеточный лейкоз, множественную миелому, макроглобулинемию, амилоидоз, макроглобулинемию Вальденстрема, солитарную костную плазмацитому, экстрамедуллярную плазмацитому, остеосклеротическую миелому (синдром POEMS) и болезни тяжелых цепей, а также клинически неоднозначную моноклональную гаммопатию неопределенного значения/тлеющую множественную миелому.
Заболевание может представлять собой множественную миелому.
Примерами B-клеточных заболеваний, которые связаны с повышенными уровнями экспрессии BCMA, являются ХЛЛ (хронический лимфоцитарный лейкоз) и неходжкинская лимфома (НХЛ). Биспецифические связывающие агенты по изобретению можно также использовать для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка (СКВ), рассеянный склероз (РС) и ревматоидный артрит (РА).
Способ по настоящему изобретению можно использовать для лечения онкологического заболевания, в частности, заболевания плазматических клеток или B-клеточного заболевания, связанного с повышенной экспрессией BCMA.
Способ лечения заболевания относится к терапевтическому применению вектора или T-клетки по изобретению. В этом отношении, вектор или T-клетку можно вводить субъекту, имеющему заболевание или состояние, с целью уменьшения, ослабления или облегчения по меньшей мере одного симптома, ассоциированного с заболеванием, и/или замедления, ослабления или блокирования прогрессирования заболевания. Способ по изобретению может вызывать или стимулировать опосредованное T-клетками уничтожение экспрессирующих BCMA клеток, таких как плазматические клетки.
Далее изобретение будет дополнительно описано с помощью примеров, которые призваны облегчать специалисту в данной области применение на практике изобретения и не должны никоим образом ограничивать объем изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
- Характеризация BCMA как мишени для миеломы
Клетки первичной миеломы выделяли, выполняя иммуномагнитную селекцию на CD138 на свежих образцах костного мозга от пациентов с множественной миеломой, имеющих болезнь в явной форме. Эти клетки окрашивали специфическим для BCMA мАт J6MO (GSK), конъюгированным с PE. В то же время получали стандарты гранул с известным числом сайтов связывания, используя набор PE Quantibrite bead kit (Becton Dickenson) в соответствии с инструкциями производителя. Число копий BCMA на клетках миеломы можно получать, проводя корреляцию средней интенсивности флуоресценции от клеток миеломы со стандартной кривой, полученной с помощью гранул. Было установлено, что диапазон числа копий BCMA на поверхности клеток миеломы является низким: 348,7-4268,4 копий BCMA на клетку, со средним значением 1181 и медианным значением 1084,9 (фигура 2). Это гораздо меньше, чем, например, в случае CD19 и GD2, классических мишеней для CAR. Наличие экспрессии BCMA на клетках первичной миеломы также подтверждали с помощью антитела Vicky-1 (Abcam Ab17323), примеры чего приведены на фигуре 14.
Пример 2
- Дизайн и конструирование CAR на основе APRIL.
APRIL в его естественной форме представляет собой секретируемый белок типа II. Для использования APRIL в качестве связывающего BCMA домена CAR необходимо превратить этот секретируемый белок типа II в связанный с мембраной белок типа I, и чтобы данный белок был стабильным и сохранял способность к связыванию BCMA в этой форме. Для получения молекул-кандидатов крайний амино-конец APRIL делетировали для устранения связывания с протеогликанами. Затем добавляли сигнальный пептид для направления формирующегося белка в эндоплазматический ретикулум и, таким образом, на клеточную поверхность. Кроме того, поскольку характер используемого спейсера может изменять функционирование CAR, тестировали три разных спейсерных домена: получали CAR на основе APRIL, содержащий (i) спейсер из IgG1 человека, измененный для удаления Fc-связывающих фрагментов; (ii) стеблевую область CD8 и (iii) отдельную шарнирную область IgG1 (рисунок на фигуре 4 и аминокислотные последовательности на фигуре 5, а также аминокислотные последовательности на фигуре 19, которые отличаются от последовательностей на фигуре 5 тем, что имеют другой сигнальный пептид и эпитопный маркер V5). Эти CAR были экспрессированы в бицистронном ретровирусном векторе (фигура 6A) так, чтобы с удобного маркерного гена мог совместно экспрессироваться маркерный белок - укороченный CD34.
Пример 3 - Экспрессия и функционирование CAR на основе APRIL.
Целью данного исследования была проверка того, будут ли CAR на основе APRIL, которые были сконструированы, экспрессироваться на клеточной поверхности, и будет ли APRIL сворачиваться, образуя нативный белок. T-клетки трансдуцировали этими разными конструктами CAR, окрашивали с использованием коммерчески доступного анти-APRIL мАт, наряду с окрашиванием на маркерный ген, и анализировали методом проточной цитометрии. Результаты данного эксперимента приведены на фигуре 6B, где построен график связывания APRIL в зависимости от флуоресценции маркерного гена. Эти данные показывают, что в этом формате CAR на основе APRIL экспрессируются на клеточной поверхности и APRIL сворачивается в достаточной степени, чтобы быть узнанным анти-APRIL мАт.
Затем определяли, способен ли APRIL в этом формате узнавать BCMA и TACI. Рекомбинантные BCMA и TACI получали в виде слитых белков с Fc из IgG2a мыши. Эти рекомбинантные белки инкубировали с трансдуцированными T-клетками. После этого клетки промывали и окрашивали антителом против иммуноглобулинов мыши, конъюгированным с флуорофором, а также антителом для обнаружения маркерного гена, конъюгированным с другим флуорофором. Клетки анализировали методом проточной цитометрии, и результаты представлены на фигуре 6C. Разные CAR были способны связывать как BCMA, так и TACI. Удивительно, но CAR были в большей степени способны к связыванию BCMA, чем TACI. Кроме того, неожиданно, что CAR со спейсером из стеблевой области CD8 или шарнирной области IgG1 были в большей степени способны к связыванию BCMA и TACI, чем CAR со спейсером из Fc.
Пример 4
- Химерные антигенные рецепторы на основе APRIL активны против экспрессирующих BCMA клеток
T-клетки от нормальных доноров трансдуцировали разными APRIL-CAR и тестировали против клеток SupT1 либо дикого типа, либо сконструированных для экспрессии BCMA и TACI. Для определения функции использовали несколько анализов. Проводили классический анализ с высвобождением хрома. Вкратце, клетки-мишени (клетки SupT1) метили 51Cr и смешивали с эффекторами (трансдуцированными T-клетками) в разных соотношениях. Лизис клеток-мишеней определяли путем подсчета 51Cr в супернатанте совместной культуры (на фигуре 6A представлены кумулятивные данные, иллюстративные данные из одного анализа с разными соотношениями эффекторы:мишени приведены на фигуре 12).
Кроме того, супернатант от T-клеток, культивированных в соотношении 1:1 с клетками SupT1, анализировали методом ELISA на интерферон-гамма (на фигуре 6B представлены кумулятивные данные, иллюстративные данные из одного анализа представлены на фигуре 13). Также проводили измерение размножения T-клеток после одной недели совместного культивирования с клетками SupT1 (фигура 6C). T-клетки подсчитывали методом проточной цитометрии с калибровкой по гранулам для подсчета. Эти экспериментальные данные показали, что CAR на основе APRIL способны уничтожать экспрессирующие BCMA мишени. Кроме того, эти данные показали, что CAR на основе стеблевой области CD8 или шарнирной области IgG1 более эффективны, чем CAR на основе Fc-pvaa.
Пример 5
- CAR на основе APRIL способны уничтожать клетки первичной миеломы
Приведенные выше данные являются обнадеживающими, поскольку они демонстрируют, что, в принципе, возможно создавать CAR на основе APRIL. Однако, поскольку большинство клеток первичной миеломы экспрессируют небольшое количество молекул BCMA на своей поверхности, было изучено, будут ли такие CAR на основе APRIL вызывать уничтожение клеток первичной миеломы, особенно в случае экспрессии низкой плотности. Были выбраны три случая, представляющие диапазон экспрессии BCMA, описанный на фигуре 2: в первом случае отражающее экспрессию окрашивание было тусклым (ниже, чем в среднем); во втором случае экспрессия была промежуточной (примерно средняя экспрессия) и в третьем случае отражающее экспрессию окрашивание было ярким (выше, чем при средней экспрессии). Слева на фигуре 8 представлена гистограмма окрашивания BCMA в зависимости от изотипического контроля во всех трех случаях для иллюстрации экспрессии BCMA. Поскольку при сравнении CAR на основе APRIL с разными спейсерами было установлено, что CAR со спейсером из стеблевой области CD8 и спейсером из шарнирной области IgG1 были более эффективны, чем CAR со спейсером из Fc-pvaa, в данном анализе тестировали только APRIL-CAR со стеблевой областью CD8 и шарнирной областью IgG1. Слева показана выживаемость в сравнении с исходным количеством клеток миеломы в день 3 и день 6 после совместного культивирования в соотношении 1:1 клеток миеломы и T-клеток с CAR. Ко дню 6 >95% клеток миеломы были уничтожены, включая те, которые имели тусклое окрашивание на экспрессию BCMA. Слабо экспрессирующие BCMA клетки миеломы могут являться мишенью для APRIL-CAR, хотя и с более медленными темпами уничтожения, чем экспрессирующие на более высоком уровне клетки.
Пример 6
- Секретируемый и укороченный APRIL, слитый со спейсером из Fc, узнает BCMA и TACI
Для изучения того, сможет ли укороченный APRIL в формате CAR (то есть, слитый с трансмембранным доменом и заякоренный в клеточной мембране) связывать BCMA и TACI, был сконструирован базовый CAR в рамке считывания с геном самоотщепляющегося пептида 2A вируса ящура с укороченным CD34, в качестве удобного маркерного гена. Была получена стабильная линия клеток SUPT1, экспрессирующих этот конструкт. Также были получены секретируемые укороченные BCMA и TACI, слитые с Fc-доменом Ig человека (и других видов, не показано), и продуцирован рекомбинантный белок. Показано, что как BCMA-Fc, так и TACI-Fc связывают сконструированные клетки линии SUPT1. Установлено, что только клетки, экспрессирующие маркерный ген CD34, связывают BCMA-Fc и TACI-Fc (фигура 9).
Пример 7
- Химерные антигенные рецепторы на основе APRIL стабильно экспрессируются на поверхности T-клеток
Спейсерный домен CAR может изменять чувствительность и специфичность. Были получены три варианта CAR на основе APRIL с тремя спейсерными доменами: (i) спейсером из IgG1 человека, измененным для удаления Fc-связывающих фрагментов; (ii) стеблевой областью CD8 и (iii) отдельной шарнирной областью IgG1 (фигура 10B). Первичные человеческие T-клетки трансдуцировали этими тремя разными CAR и окрашивали с использованием коммерчески доступного анти-APRIL мАт (фигура 11).
Пример 8
- Химерные антигенные рецепторы на основе APRIL активны против клеток, экспрессирующих родственную мишень
T-клетки от нормальных доноров трансдуцировали разными APRIL-CAR и тестировали против клеток SupT1 либо дикого типа, либо сконструированных для экспрессии BCMA и TACI. Для определения функции использовали несколько анализов. Проводили классический анализ с высвобождением хрома. Вкратце, клетки-мишени (клетки SupT1) метили 51Cr и смешивали с эффекторами (трансдуцированными T-клетками) в разных соотношениях. Лизис клеток-мишеней определяли путем подсчета 51Cr в супернатанте совместной культуры (фигура 12).
Кроме того, супернатант от T-клеток, культивированных в соотношении 1:1 с клетками SupT1, анализировали методом ELISA на интерферон-гамма (фигура 13).
Также проводили измерение размножения T-клеток после одной недели совместного культивирования с клетками SupT1. T-клетки подсчитывали методом проточной цитометрии с калибровкой по гранулам для подсчета. Первоначальные данные (не показано), судя по всему, свидетельствовали о том, что конструкт на основе стеблевой области CD8 приводил к большей пролиферации T-клеток, чем другие конструкты.
Пример 9 -
Демонстрация
in vivo
функционирования T-клеток с APRIL-CAR
Для демонстрации функционирования T-клеток с APRIL-CAR in vivo T-клетки с APRIL-CAR тестировали в человеческой/мышиной химерной модели. MM1.s (ATCC CRL-2974) является линией клеток миеломы человека, которые экспрессируют промежуточные количества BCMA. Авторы изобретения генетически изменили эту линию клеток для экспрессии люциферазы светляков, чтобы получить линию клеток MM1.s.FLuc.
Мыши NOD scid гамма (NSG: NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ) являются мышами с глубоко подавленным иммунитетом, которым можно трансплантировать разные линии клеток человека и лимфоциты периферической крови человека. Самкам мышей NSG в возрасте трех месяцев вводили 1×107 клеток MM1.s.FLuc инъекцией в хвостовую вену без какого-либо подготовительного воздействия. Трансплантаты определяли путем серийной биолюминесцентной визуализации (фигура 16). Стабильные и увеличивающиеся интрамедуллярные трансплантаты наблюдали у всех мышей. В день 13 5×106 T-клеток с CAR на основе APRIL-HNG-CD28OXZ вводили мышам инъекцией в хвостовую вену. Проводили серийную биолюминесцентную визуализацию, которая показала быстрое уменьшение количества MM1.s (фигура 16) у всех получавших лечение мышей до полной ремиссии. Этот ответ на терапию CAR подтверждали методами проточной цитометрии и иммуногистохимии.
Все публикации, упомянутые в вышеприведенном описании, включены в настоящий документ посредством ссылки. Различные модификации и вариации описанных способов и системы по изобретению будут очевидны для специалистов в данной области без отклонения от объема и сущности изобретения. При том, что изобретение было описано в связи с конкретными предпочтительными вариантами осуществления, следует понимать, что заявленное изобретение не должно быть чрезмерно ограничено такими конкретными вариантами осуществления. Действительно, различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые очевидны для специалистов в области молекулярной биологии, клеточной иммунологии или родственных областях, должны входить в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (30)
1. Химерный антигенный рецептор (CAR), который связывает антиген созревания B-клеток (BCMA) и рецептор трансмембранного активатора, модулятора кальция и активатора лиганда циклофилина (TACI) и содержит:
(i) укороченный индуцирующий пролиферацию лиганд (APRIL) с SEQ ID NO:14, который связывается как с BCMA, так и с TACI;
(ii) спейсерный домен; и
(iii) трансмембранный домен; и
(iv) внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен.
2. CAR по п. 1, в котором укороченный APRIL лишен амино-концевой части APRIL, ответственной за связывание протеогликанов.
3. CAR по п. 2, содержащий последовательность SEQ ID NO:14.
4. CAR по любому из предшествующих пунктов, в котором трансмембранный и внутриклеточный T-клеточный сигнальный домен содержат последовательность SEQ ID NО:7.
5. CAR по любому из пп. 1-3, в котором спейсер содержит одно из следующего: спейсер IgG1 человека; шарнирную область IgG1 или стеблевую область CD8.
6. CAR по п. 5, в котором спейсер содержит стеблевую область CD8.
7. CAR по любому из пп. 1-3, содержащий последовательность SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5 или 6.
8. Нуклеиновая кислота, кодирующая CAR по любому из предшествующих пунктов.
9. Нуклеиновая кислота по п. 8, содержащая последовательность SEQ ID NО:15, 16, 17, 18, 19 или 20.
10. Вектор экспрессии, который содержит нуклеиновую кислоту по п. 8 или 9.
11. T-клетка, которая экспрессирует CAR по любому из пп. 1-7 и которая получена путем введения вектора экспрессии по п. 10 в Т-клетку.
12. Способ получения T-клетки по п. 11, который включает стадию введения вектора экспрессии по п. 10 в T-клетку.
13. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI, которая содержит эффективное количество T-клеток по п. 11 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
14. Способ лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI, который включает стадию введения субъекту эффективного количества T-клетки по п. 11.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что заболевание плазматических клеток выбрано из плазмацитомы, плазмоклеточного лейкоза, множественной миеломы, макроглобулинемии, амилоидоза, макроглобулинемии Вальденстрема, солитарной костной плазмацитомы, экстрамедуллярной плазмацитомы, остеосклеротической миеломы, болезни тяжелых цепей, моноклональной гаммопатии неопределенного значения и тлеющей множественной миеломы.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что заболевание плазматических клеток представляет собой множественную миелому.
17. Применение T-клетки по п. 11 для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI.
18. Применение T-клетки по п. 11 в производстве лекарственного средства для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI.
19. NK-клетка, которая экспрессирует CAR по любому из пп. 1-7 и которая получена путем введения вектора экспрессии по п. 10 в NK-клетку.
20. Способ получения NK-клетки по п. 19, который включает стадию введения вектора экспрессии по п. 10 в NK-клетку.
21. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI, которая содержит эффективное количество NK-клеток по п. 19 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
22. Способ лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI, который включает стадию введения субъекту эффективного количества NK-клетки по п. 19.
23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что заболевание плазматических клеток выбрано из плазмацитомы, плазмоклеточного лейкоза, множественной миеломы, макроглобулинемии, амилоидоза, макроглобулинемии Вальденстрема, солитарной костной плазмацитомы, экстрамедуллярной плазмацитомы, остеосклеротической миеломы, болезни тяжелых цепей, моноклональной гаммопатии неопределенного значения и тлеющей множественной миеломы.
24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что заболевание плазматических клеток представляет собой множественную миелому.
25. Применение NK-клетки по п. 19 для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI.
26. Применение NK-клетки по п. 19 в производстве лекарственного средства для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией BCMA и TACI.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1317929.6 | 2013-10-10 | ||
| GBGB1317929.6A GB201317929D0 (en) | 2013-10-10 | 2013-10-10 | Chimeric antigen receptor |
| PCT/GB2014/053058 WO2015052538A1 (en) | 2013-10-10 | 2014-10-10 | Chimeric antigen receptor |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019102382A Division RU2019102382A (ru) | 2013-10-10 | 2014-10-10 | Химерный антигенный рецептор |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016117383A RU2016117383A (ru) | 2017-11-15 |
| RU2016117383A3 RU2016117383A3 (ru) | 2018-05-22 |
| RU2684713C2 true RU2684713C2 (ru) | 2019-04-11 |
Family
ID=49679854
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016117383A RU2684713C2 (ru) | 2013-10-10 | 2014-10-10 | Химерный антигенный рецептор |
| RU2019102382A RU2019102382A (ru) | 2013-10-10 | 2014-10-10 | Химерный антигенный рецептор |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019102382A RU2019102382A (ru) | 2013-10-10 | 2014-10-10 | Химерный антигенный рецептор |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US10160794B2 (ru) |
| EP (1) | EP3055326B1 (ru) |
| JP (2) | JP6632073B2 (ru) |
| KR (1) | KR20160067177A (ru) |
| CN (1) | CN105658671B (ru) |
| AU (1) | AU2014333564B2 (ru) |
| BR (1) | BR112016007805A2 (ru) |
| CA (1) | CA2926560A1 (ru) |
| CL (1) | CL2016000734A1 (ru) |
| ES (1) | ES2918626T3 (ru) |
| GB (1) | GB201317929D0 (ru) |
| IL (1) | IL244784A0 (ru) |
| MX (1) | MX2016004362A (ru) |
| RU (2) | RU2684713C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201602414SA (ru) |
| WO (1) | WO2015052538A1 (ru) |
Families Citing this family (67)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201317928D0 (en) * | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Molecule |
| GB201317929D0 (en) * | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| CN106414502A (zh) | 2014-02-27 | 2017-02-15 | Ucl商务股份有限公司 | April变体 |
| US11385233B2 (en) | 2015-03-05 | 2022-07-12 | Autolus Limited | Methods of depleting malignant T-cells |
| US11982673B2 (en) | 2014-03-05 | 2024-05-14 | Autolus Limited | Methods |
| GB201403972D0 (en) | 2014-03-06 | 2014-04-23 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| AU2015248956B2 (en) * | 2014-04-14 | 2020-06-25 | Cellectis | BCMA (CD269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
| KR102329836B1 (ko) | 2015-01-26 | 2021-11-19 | 셀렉티스 | 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS) |
| RU2706582C2 (ru) | 2015-04-13 | 2019-11-19 | Пфайзер Инк. | Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на антиген созревания B-клеток |
| GB201507111D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic acid construct |
| GB201507115D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic Acid Construct |
| GB201507108D0 (en) * | 2015-04-27 | 2015-06-10 | Ucl Business Plc | Nucleic acid construct |
| IL303905A (en) | 2015-05-18 | 2023-08-01 | Tcr2 Therapeutics Inc | Compositions and methods for TCR programming using fusion proteins |
| MA42895A (fr) * | 2015-07-15 | 2018-05-23 | Juno Therapeutics Inc | Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive |
| CA2992797A1 (en) | 2015-08-03 | 2017-02-09 | Engmab Sarl | Monoclonal antibodies against bcma |
| CN105384825B (zh) * | 2015-08-11 | 2018-06-01 | 南京传奇生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用 |
| WO2017130223A2 (en) | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Virocan Therapeutics Pvt. Ltd. | A chimeric antigen receptor specific to b-cell maturation antigen, a recombinant expression vector and a method thereof |
| ES2904880T3 (es) | 2016-05-20 | 2022-04-06 | Lilly Co Eli | Terapia combinada con inhibidores de Notch y de PD-1 o PD-L1 |
| CN109641012A (zh) | 2016-06-07 | 2019-04-16 | 马克思-德布鲁克-分子医学中心亥姆霍兹联合会 | 与bcma结合的嵌合抗原受体和car-t细胞 |
| JP7109789B2 (ja) | 2016-08-02 | 2022-08-01 | ティーシーアール２ セラピューティクス インク． | 融合タンパク質を使用したｔｃｒの再プログラム化のための組成物及び方法 |
| ES2875959T3 (es) | 2016-10-07 | 2021-11-11 | Tcr2 Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para reprogramación de receptores de linfocitos T mediante el uso de proteínas de fusión |
| CN110167964B (zh) | 2016-11-02 | 2023-12-01 | 百时美施贵宝公司 | 组合用于治疗多发性骨髓瘤的针对bcma和cd3的双特异性抗体和免疫药物 |
| JP2019535262A (ja) * | 2016-11-11 | 2019-12-12 | オートラス リミテッド | キメラ抗原受容体 |
| AU2017363311A1 (en) | 2016-11-22 | 2019-06-13 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for TCR reprogramming using fusion proteins |
| US12269859B2 (en) | 2016-12-02 | 2025-04-08 | Angeles Therapeutics, Inc. | Synthetic immune receptors and methods of use thereof |
| CA3048648A1 (en) * | 2017-01-10 | 2018-07-19 | The General Hospital Corporation | T cells expressing a chimeric antigen receptor |
| MX2019009552A (es) * | 2017-02-17 | 2019-10-02 | Hutchinson Fred Cancer Res | Terapias de combinacion para el tratamiento de canceres relacionados con el antigeno de maduracion de celulas b (bcma) y trastornos autoinmunitarios. |
| GB201709508D0 (en) * | 2017-06-15 | 2017-08-02 | Autolus Ltd | Chimeric antigen receptor |
| WO2019025800A1 (en) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | Autolus Limited | CELLS EXPRESSING A CHIMERIC ANTIGENIC RECEPTOR OR A MANIPULATED TCR AND COMPRISING A SELECTIVELY EXPRESSED SELECTIVE NUCLEOTIDE SEQUENCE |
| GB201716728D0 (en) | 2017-10-12 | 2017-11-29 | Autolus Ltd | Cell |
| WO2019089982A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Juno Therapeutics, Inc. | Method of assessing activity of recombinant antigen receptors |
| PL3703750T3 (pl) | 2017-11-01 | 2025-04-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Chimeryczne receptory antygenowe specyficzne dla antygenu dojrzewania komórek b i kodujące polinukleotydy |
| CA3080395A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination of a cell therapy and a gamma secretase inhibitor |
| CN109971715A (zh) * | 2017-12-28 | 2019-07-05 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种扩增特异性car-t细胞的培养方法 |
| WO2019140127A2 (en) * | 2018-01-10 | 2019-07-18 | The General Hospital Corporation | Immune cells expressing a chimeric antigen receptor |
| US11026975B2 (en) * | 2018-02-01 | 2021-06-08 | Nanjing Iaso Biotherapeutics Co., Ltd. | Chimeric antigen receptor (CAR) binding to BCMA, and uses thereof |
| WO2019180724A1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. | Genetically reprogrammed tregs expressing membrane-bound il-10 |
| GB201807693D0 (en) | 2018-05-11 | 2018-06-27 | Autolus Ltd | Cell |
| CN118459594A (zh) | 2018-06-01 | 2024-08-09 | 诺华股份有限公司 | 针对bcma的结合分子及其用途 |
| EP3806871A4 (en) | 2018-06-12 | 2022-02-23 | The Regents of the University of California | SINGLE-CHAIN BISPECIFIC CHEMICAL ANTIGEN RECEPTORS FOR THE TREATMENT OF CANCER |
| TWI838389B (zh) | 2018-07-19 | 2024-04-11 | 美商再生元醫藥公司 | 雙特異性抗-BCMAｘ抗-CD3抗體及其用途 |
| ES3012752T3 (en) | 2018-09-27 | 2025-04-10 | Autolus Ltd | Chimeric antigen receptor |
| PE20211058A1 (es) | 2018-11-01 | 2021-06-07 | Juno Therapeutics Inc | Receptores de antigenos quimericos especificos para el miembro d del grupo 5 de la clase c del receptor acoplado a proteina g (gprc5d) |
| CA3117419A1 (en) | 2018-11-01 | 2020-05-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen |
| GB201904160D0 (en) | 2019-03-26 | 2019-05-08 | Autolus Ltd | Cell |
| US20220056407A1 (en) | 2018-12-14 | 2022-02-24 | Autolus Limited | Cell |
| EP3927352A4 (en) * | 2019-02-21 | 2023-06-14 | Arbele Limited | ARTIFICIAL IMMUNOSURVEILLANCE CHEMICAL ANTIGEN RECEPTORS (AI-CAR) AND CELLS EXPRESSING THEM |
| GB201903237D0 (en) | 2019-03-08 | 2019-04-24 | Autolus Ltd | Method |
| WO2020183131A1 (en) | 2019-03-08 | 2020-09-17 | Autolus Limited | Compositions and methods comprising engineered chimeric antigen receptor and modulator of car |
| WO2020191346A1 (en) | 2019-03-21 | 2020-09-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Combination of il-4/il-13 pathway inhibitors and plasma cell ablation for treating allergy |
| AU2020245329A1 (en) * | 2019-03-26 | 2021-10-28 | Gavish-Galilee Bio Applications Ltd. | Genetically reprogrammed Tregs expressing CARs |
| GB201904971D0 (en) | 2019-04-08 | 2019-05-22 | Autolus Ltd | Cell |
| GB201906202D0 (en) | 2019-05-02 | 2019-06-19 | Autolus Ltd | Cell |
| CA3139346A1 (en) | 2019-05-07 | 2020-11-12 | Gracell Biotechnologies (Shanghai) Co., Ltd. | Engineered immune cell targeting bcma and use thereof |
| CN113784733B (zh) | 2019-05-07 | 2024-09-06 | 亘喜生物科技（上海）有限公司 | 靶向bcma的工程化免疫细胞及其用途 |
| JP7489407B2 (ja) | 2019-05-21 | 2024-05-23 | ノバルティス アーゲー | Ｃｄ１９結合分子及びその使用 |
| CN110592015A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-20 | 中国科学院西双版纳热带植物园 | 一种诱导增强cik细胞的滇重楼多糖组合物及其应用 |
| WO2022133169A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Century Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptor systems with adaptable receptor specificity |
| WO2024031091A2 (en) | 2022-08-05 | 2024-02-08 | Juno Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma |
| WO2025076113A1 (en) | 2023-10-05 | 2025-04-10 | Capstan Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids with conserved spacing and lipid nanoparticles |
| US20250127728A1 (en) | 2023-10-05 | 2025-04-24 | Capstan Therapeutics, Inc. | Constrained Ionizable Cationic Lipids and Lipid Nanoparticles |
| WO2025160324A2 (en) | 2024-01-26 | 2025-07-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for using plasma cell depleting agents and/or b cell depleting agents to suppress host anti-aav antibody response and enable aav transduction and re-dosing |
| US20250242018A1 (en) | 2024-01-26 | 2025-07-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Combination immunosuppression for inhibiting an immune response and enabling immunogen administration and re-administration |
| US20250276092A1 (en) | 2024-03-01 | 2025-09-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for re-dosing aav using anti-cd40 antagonistic antibody to suppress host anti-aav antibody response |
| GB202403564D0 (en) | 2024-03-12 | 2024-04-24 | Autolus Ltd | Method |
| WO2025217452A1 (en) | 2024-04-11 | 2025-10-16 | Capstan Therapeutics, Inc. | Constrained ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles |
| WO2025217454A2 (en) | 2024-04-11 | 2025-10-16 | Capstan Therapeutics, Inc. | Ionizable cationic lipids and lipid nanoparticles |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002018620A2 (en) * | 2000-08-15 | 2002-03-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Neutrokine-alpha and neutrokine-alpha splice variant |
| EA200200427A1 (ru) * | 1999-10-06 | 2002-12-26 | Байоджен, Инк. | Рецептор april (bcma) и его применения |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1027431A2 (en) * | 1997-09-12 | 2000-08-16 | Apotech R&D S.A. | April- a novel protein with growth effects |
| DE60122337T2 (de) * | 2000-04-27 | 2007-08-16 | Biogen Idec Ma Inc., Cambridge | Verwendung von taci als antitumormittel |
| EP2301971A1 (en) * | 2001-02-20 | 2011-03-30 | ZymoGenetics, L.L.C. | Antibodies that bind both BCMA and TACI |
| CN103536916B (zh) * | 2002-04-09 | 2016-08-17 | 比奥根Ma公司 | 用于治疗tweak相关病症的方法 |
| WO2004027026A2 (en) * | 2002-09-19 | 2004-04-01 | Biogen Idec Ma Inc. | Improved methods for preparing highly active april ligand polypeptides |
| US7947805B2 (en) * | 2004-12-23 | 2011-05-24 | Merck Serono S.A. | BCMA polypeptides and uses thereof |
| AT503861B1 (de) | 2006-07-05 | 2008-06-15 | F Star Biotech Forsch & Entw | Verfahren zur manipulation von t-zell-rezeptoren |
| US20100105136A1 (en) | 2006-10-09 | 2010-04-29 | The General Hospital Corporation | Chimeric t-cell receptors and t-cells targeting egfrviii on tumors |
| TWI679212B (zh) | 2011-11-15 | 2019-12-11 | 美商安進股份有限公司 | 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子 |
| KR102086874B1 (ko) | 2012-04-11 | 2020-03-10 | 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 | B-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체 |
| CN103145849B (zh) * | 2013-02-18 | 2014-06-11 | 冯振卿 | 嵌合抗原受体及其用途 |
| GB201317929D0 (en) * | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| CN106414502A (zh) | 2014-02-27 | 2017-02-15 | Ucl商务股份有限公司 | April变体 |
| JP2019535262A (ja) | 2016-11-11 | 2019-12-12 | オートラス リミテッド | キメラ抗原受容体 |
| GB201709508D0 (en) | 2017-06-15 | 2017-08-02 | Autolus Ltd | Chimeric antigen receptor |
| WO2019140127A2 (en) * | 2018-01-10 | 2019-07-18 | The General Hospital Corporation | Immune cells expressing a chimeric antigen receptor |
-
2013
- 2013-10-10 GB GBGB1317929.6A patent/GB201317929D0/en not_active Ceased
-
2014
- 2014-10-10 RU RU2016117383A patent/RU2684713C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-10-10 ES ES14784368T patent/ES2918626T3/es active Active
- 2014-10-10 BR BR112016007805A patent/BR112016007805A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-10-10 EP EP14784368.4A patent/EP3055326B1/en active Active
- 2014-10-10 KR KR1020167012121A patent/KR20160067177A/ko not_active Withdrawn
- 2014-10-10 WO PCT/GB2014/053058 patent/WO2015052538A1/en not_active Ceased
- 2014-10-10 CA CA2926560A patent/CA2926560A1/en not_active Abandoned
- 2014-10-10 US US15/028,064 patent/US10160794B2/en active Active
- 2014-10-10 SG SG11201602414SA patent/SG11201602414SA/en unknown
- 2014-10-10 JP JP2016521314A patent/JP6632073B2/ja active Active
- 2014-10-10 AU AU2014333564A patent/AU2014333564B2/en not_active Ceased
- 2014-10-10 CN CN201480055657.6A patent/CN105658671B/zh active Active
- 2014-10-10 MX MX2016004362A patent/MX2016004362A/es unknown
- 2014-10-10 RU RU2019102382A patent/RU2019102382A/ru not_active Application Discontinuation
-
2016
- 2016-03-28 IL IL244784A patent/IL244784A0/en unknown
- 2016-03-30 CL CL2016000734A patent/CL2016000734A1/es unknown
-
2018
- 2018-10-17 US US16/162,747 patent/US10919951B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-10 JP JP2019002499A patent/JP2019052190A/ja not_active Withdrawn
-
2020
- 2020-10-22 US US17/077,782 patent/US20210101959A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-05-22 US US18/321,400 patent/US20240076352A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA200200427A1 (ru) * | 1999-10-06 | 2002-12-26 | Байоджен, Инк. | Рецептор april (bcma) и его применения |
| WO2002018620A2 (en) * | 2000-08-15 | 2002-03-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Neutrokine-alpha and neutrokine-alpha splice variant |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BEITINJANEH A.M. ET AL. Durable responses after donor lymphocyte infusion for patients with residual multiple myeloma following non-myeloablative allogeneic stem cell transplant, Leuk. Lymphoma, 2012, v.53, n.8, p.1525-1529. * |
| CARPENTER R.O. ET AL. B-cell maturation antigen is a promising target for adoptive T-cell therapy of multiple myeloma, Clin. Cancer Res., 2013, v.19, n.8, p.2048-2060. * |
| CARPENTER R.O. ET AL. B-cell maturation antigen is a promising target for adoptive T-cell therapy of multiple myeloma, Clin. Cancer Res., 2013, v.19, n.8, p.2048-2060. KIMBERLEY F.C. ET AL. The design and characterization of receptor-selective APRIL variants, J. Biol. Chem., 2012, v.287, n.44, p.37434-37446. BEITINJANEH A.M. ET AL. Durable responses after donor lymphocyte infusion for patients with residual multiple myeloma following non-myeloablative allogeneic stem cell transplant, Leuk. Lymphoma, 2012, v.53, n.8, p.1525-1529. INGOLD K. ET AL. Identification of proteoglycans as the APRIL-specific binding partners, J. Exp. Med., 2005, v.201, n.9, p.1375-1383. * |
| INGOLD K. ET AL. Identification of proteoglycans as the APRIL-specific binding partners, J. Exp. Med., 2005, v.201, n.9, p.1375-1383. * |
| KIMBERLEY F.C. ET AL. The design and characterization of receptor-selective APRIL variants, J. Biol. Chem., 2012, v.287, n.44, p.37434-37446. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CL2016000734A1 (es) | 2017-05-19 |
| CA2926560A1 (en) | 2015-04-16 |
| RU2016117383A3 (ru) | 2018-05-22 |
| RU2016117383A (ru) | 2017-11-15 |
| CN105658671A (zh) | 2016-06-08 |
| CN105658671B (zh) | 2021-08-27 |
| EP3055326A1 (en) | 2016-08-17 |
| RU2019102382A (ru) | 2019-02-22 |
| AU2014333564B2 (en) | 2018-09-27 |
| BR112016007805A2 (pt) | 2017-12-05 |
| KR20160067177A (ko) | 2016-06-13 |
| SG11201602414SA (en) | 2016-04-28 |
| US10919951B2 (en) | 2021-02-16 |
| US10160794B2 (en) | 2018-12-25 |
| JP6632073B2 (ja) | 2020-01-15 |
| EP3055326B1 (en) | 2022-04-20 |
| US20210101959A1 (en) | 2021-04-08 |
| JP2016538830A (ja) | 2016-12-15 |
| US20240076352A1 (en) | 2024-03-07 |
| WO2015052538A1 (en) | 2015-04-16 |
| US20160237139A1 (en) | 2016-08-18 |
| MX2016004362A (es) | 2016-10-13 |
| ES2918626T3 (es) | 2022-07-19 |
| GB201317929D0 (en) | 2013-11-27 |
| IL244784A0 (en) | 2016-04-21 |
| JP2019052190A (ja) | 2019-04-04 |
| AU2014333564A1 (en) | 2016-04-28 |
| HK1222186A1 (en) | 2017-06-23 |
| US20190100571A1 (en) | 2019-04-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2684713C2 (ru) | Химерный антигенный рецептор | |
| JP6707496B2 (ja) | Ａｐｒｉｌバリアント | |
| RU2731638C2 (ru) | Сигнальная система | |
| CN105848673B (zh) | 细胞 | |
| JP6557657B2 (ja) | 分子 | |
| CA3002774A1 (en) | Programmable universal cell receptors and methods of using the same | |
| US20240139314A1 (en) | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof | |
| RU2810092C2 (ru) | Химерный антигенный рецептор | |
| HK1222186B (en) | Chimeric antigen receptor | |
| JP2025526383A (ja) | 阻害性キメラ受容体アーキテクチャ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201011 |