RU2680090C1 - 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул - Google Patents
2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул Download PDFInfo
- Publication number
- RU2680090C1 RU2680090C1 RU2017143419A RU2017143419A RU2680090C1 RU 2680090 C1 RU2680090 C1 RU 2680090C1 RU 2017143419 A RU2017143419 A RU 2017143419A RU 2017143419 A RU2017143419 A RU 2017143419A RU 2680090 C1 RU2680090 C1 RU 2680090C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- fluorescent
- formula
- derivatives
- compounds
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 47
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 claims abstract description 7
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract 2
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- -1 benzoyloxytrifluoroborate Chemical compound 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- MFFMQGGZCLEMCI-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethyl-1h-pyrrole Chemical compound CC1=CNC(C)=C1 MFFMQGGZCLEMCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PAPNRQCYSFBWDI-UHFFFAOYSA-N DMP Natural products CC1=CC=C(C)N1 PAPNRQCYSFBWDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 11
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 abstract description 7
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical group [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloro-5,5-dimethylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound CC1(C)N(Cl)C(=O)N(Cl)C1=O KEQGZUUPPQEDPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N chlorosulfonic acid Substances OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 4
- WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N boron trifluoride Chemical compound FB(F)F WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000003233 pyrroles Chemical class 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- OBTZDIRUQWFRFZ-UHFFFAOYSA-N 2-(5-methylfuran-2-yl)-n-(4-methylphenyl)quinoline-4-carboxamide Chemical compound O1C(C)=CC=C1C1=CC(C(=O)NC=2C=CC(C)=CC=2)=C(C=CC=C2)C2=N1 OBTZDIRUQWFRFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910015900 BF3 Inorganic materials 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 150000008040 ionic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 Chemical compound COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIWILGQIZHDAQG-UHFFFAOYSA-N NC1=C(C(=O)NCC2=CC=C(C=C2)OCC(F)(F)F)C=C(C(=N1)N)N1N=C(N=C1)C1(CC1)C(F)(F)F Chemical compound NC1=C(C(=O)NCC2=CC=C(C=C2)OCC(F)(F)F)C=C(C(=N1)N)N1N=C(N=C1)C1(CC1)C(F)(F)F FIWILGQIZHDAQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LGRFSURHDFAFJT-UHFFFAOYSA-N Phthalic anhydride Natural products C1=CC=C2C(=O)OC(=O)C2=C1 LGRFSURHDFAFJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- JHIWVOJDXOSYLW-UHFFFAOYSA-N butyl 2,2-difluorocyclopropane-1-carboxylate Chemical compound CCCCOC(=O)C1CC1(F)F JHIWVOJDXOSYLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IITFYNDIDPCBJL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-diethylethanamine;ethyl acetate Chemical compound ClCCl.CCOC(C)=O.CCN(CC)CC IITFYNDIDPCBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 238000001226 reprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
- C07F5/02—Boron compounds
- C07F5/022—Boron compounds without C-boron linkages
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к солям соединения формулы I с щелочными металлами, замещающими атомы водорода в обеих сульфогруппах 
, где R означает N-оксисукцинимидильную группу
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области органической химии, в частности сульфированным производным бордипиррометена, способам их получения, к указанным соединениям для применения в качестве флуоресцентных меток белковых молекул, в том числе при производстве меченых антител, применяемых в иммунофлуоресцентном анализе для диагностики инфекционных заболеваний.
Уровень техники
В литературе имеется описание производных бордипиррометена [1] и способов их получения.
Известен способ получения различных производных бордипиррометена формулы (I) реакцией замещенных пирролов с ацилхлоридами или ангидридами. Вначале проводят конденсацию замещенных пирролов с ацилхлоридом или ангидридом в органическом растворителе, затем, не выделяя получившийся продукт, обрабатывают этиламином и комплексом трифторида бора с диэтиловым эфиром [1], после чего выделяют продукт в виде молекулярных кристаллических или аморфных соединений, имеющих в своем составе один атом бора и являющихся цвиттер-ионами (положительно заряженный атом азота и отрицательно заряженный атом бора) (I).
I R1- R8 - H, алкильные, арильные и иные заместители
Известен способ получения производных бордипиррометена формулы (I) реакцией замещенных пирролов с альдегидами. Вначале проводят конденсацию замещенных пирролов с альдегидом в органическом растворителе, затем обрабатывают смесь окислителем, после чего, не выделяя получившийся продукт, обрабатывают этиламином и комплексом трифторида бора с диэтиловым эфиром [1]. Продукт выделяют в виде молекулярных кристаллических или аморфных соединений, имеющих в своем составе один атом бора и являющихся цвиттер-ионами (положительно заряженный атом бора и отрицательно заряженный атом азота) (I).
Известен способ получения дисульфопроизводных бордипиррометена (II) сульфированием соединений формулы (I), где R2, R6=H, при том что в состав соединения (I) входит не более 1 атома бора, хлорсульфоновой кислотой и последующей нейтрализацией реакционной смеси основанием [2-9].
II
Известный способ сульфирования соединений формулы (I) не позволяет получать соединения (III) или его солей щелочных металлов по сульфогруппам, если R является гидроксильной группой (IIIa)
III
IIIa, 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота
Известен патент на химически реакционноспособные соединения формулы I, где R - Н, Hal, алкил, арил, циклоалкил, алкиларил, ацил и сульфогруппа [10]. Патент не упоминает соединение IIIa или IIIa, кроме того формула изобретения патента описывает в качестве заместителя в 8-м положении иные заместители кроме H. Таким образом, патент [10] не описывает соединение IIIa или его предшественник IV, не имеющий в своем составе сульфогрупп.
Пункт 2 формулы патента [10] упоминает карбоксильную группу, как одну из активных групп, способных формировать химическую связь с лигандом, а пункт 1 формулы патента [10] упоминает, что любая из активных групп по зависимым пунктам формулы должна получаться химической модификацией красителей из п. 1 формулы патента [10], уже имеющих готовое бордипиррометеновое ядро.
Предлагаемый способ получения красителя вводит карбоксильную группу в состав вещества сразу на стадии синтеза бордипиррометенового ядра в положение 8, таким образом патент [10] не описывает способ получения соединения IIIa.
Известен способ получения соединения формулы IV, где карбоксильная группа вводится в состав вещества на стадии синтеза бордипиррометенового ядра [11]. Сульфирование получаемого известным способом соединения IV не позволяет получать соединение IIIa.
IV
Реальных веществ, синтезированных с сульфогруппами в положении 2 и 6 невелико [1]; это указывает на тот факт, что далеко не каждый продукт с сульфозаместителями в положении 2 и 6 может быть получен сульфированием бордпиррометенов. Таким образом известное по патенту [10] применение веществ, несущих активированных группы, где R=SO3H, во флуоресцентных приложениях не включает в себя автоматически применение соединения IIIa с активированной группой, о достоверном существовании которого к моменту подачи патента не было известно.
Раскрытие сущности изобретения
Задачей изобретения является получение 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойной кислоты (соединение IIIa), а также ее производных с N-оксисукцимидильными группами, отличающимися возможностью применения для флуоресцентного мечения белков (канал флуоресцеина, 490-520 нм), отличающимися растворимостью в воде, более высоким квантовым выходом, более высоким коэффициентом экстинкции, по сравнению с флуоресцеином и с известными красителями формулы (I), например BODIPY FL, используемых для канала флуоресцеина.
Техническим результатом является возможность получения водорастворимого флуоресцентного красителя IIIa с более высоким выходом и чистотой, чем это возможно с использованием приемов, известных из уровня техники, достижение у данного флуоресцентного красителя лучшей растворимости в воде, более высокого квантового выхода, и более высокого коэффициента экстинкции по сравнению с аналогами, а также применение его производных с N-оксисукцимидильными группами как более ярких, чем известно из уровня техники, а стало быть требующих меньшего расхода, флуоресцентых меток белковых молекул.
Особенностью получения сульфированных производных бордипиррометена из хлорсульфоновой кислоты и исходного бордипиррометена является то, что, по сравнению с большим объемом литературы по производным бордипиррометена, таких реакций немного. В [1] отмечается, что число подобных реакций невелико. То есть, способ получения сульфированных производных бордипиррометена известен из уровня техники, однако имеются лишь немногочисленные данные о производных бордипиррометена, которые действительно успешно поддаются сульфированию, поэтому изобретательскую задачу представляет собой как подбор последовательностей реакций, приводящих к продукту реакции, так и подбор исходного соединения, которое в принципе успешно поддается сульфированию. Для каждого конкретного производного бордипиррометена нет возможности предсказать, какие условия будут оптимальными для сульфирования, и приведет ли оно к целевому продукту.
Предлагаются новые соединения формулы III, предпочтительно R означает гидроксил (соединение IIIa) или N-оксисуцинмидил или 
.
Предлагаются соли щелочных металлов соединения формулы III по сульфогруппам, щелочные металлы предпочтительно Na и K.
Предлагается способ получения соединения формулы IIIa и его солей щелочных металлов, отличающийся тем, что в качестве исходного соединения для сульфирования применяется 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен-8-ил)-бензоилокситрифторборат, триэтиламмониевая соль - соединение формулы (V).
V
Предлагается применение соединений формулы III как флуоресцентных красителей с растворимостью в воде, квантовым выходом, и коэффициентом экстинкции более высокими, чем это известно из уровня техники, - для использования в качестве флуоресцентных меток белковых молекул.
Сущность способа получения соединения формулы IIIa в том, что на первой стадии из о-фталевого ангидрида, 2,4-диметилпиррола, триэтиламина и эфирата трифторида бора получают ионное соединение формулы V.
В известном способе синтеза сульфированных бордипиррметенов [2-9] в реакцию сульфирования вводят хлорсульфоновую кислоту и соединения, которые являются молекулярными кристаллическими или аморфными веществами, имеющими в своем составе один атом бора и являющихся цвиттер-ионами. В предлагаемом способе в реакцию сульфирования вводят ионное соединение формулы V (соль с триэтиламином), содержащее в своем составе два атома бора.
Преимуществом описанного способа является то, что сульфирование хлорсульфоновой кислотой, по аналогии с описанными в литературе способами сульфирования, приводит к осмолению продукта.
Осуществление изобретения
Соединение V
Ацетонитрил продували аргоном в течение 10 минут в круглодонной колбе, затем в атмосфере аргона добавляли 2,4-диметилпиррол (3,8 г; 40 ммоль), фталевый ангидрид (2,96 г; 20 ммоль) и эфират трифторида бора (6,3 г; 44 ммоль). Смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 6 часов, затем охлаждали до 0оС и добавляли эфират трифторида бора (22,7 г; 160 ммоль). Смесь перемешивали в течение 10 минут при данной температуре, затем добавляли триэтиламин (22 г; 220 ммоль) и смесь при постоянном перемешивании оставляли при комнатной температуре на ночь. Затем смесь выливали в воду (400 мл), перемешивали в течение 2 часов и разбавляли дихлорметаном (200 мл). Органическую фазу отделяли и воду экстрагировали дихлорметаном (3×50 мл). Органическую фазу высушивали над сульфатом натрия, растворители выпаривали в вакууме. Продукт очищали колоночной хроматографией (элюент дихлорметан-этилацетат-триэтиламин 300:100:1), получая на выходе темное масло, которое кристаллизовалось при перемешивании в смеси этилацетата (3 мл) и метил-трет-бутилового эфира (5 мл). Выход продукта в виде оранжевого порошка составил 1,6 г (15%). Структура продукта (рисунок 1) подтверждена методом ЯМР-спектроскопии, рентгеноструктурного анализа.
Рисунок 1
Таблица 1
Таблица 2
Таблица 3
Таблица 4
Таблица 5
Данные о кристаллическом строении и детализация структуры соединения V:
Кристаллические данные для соединения V, C26H34B2F5N3O2, (M=537,18): моноклинная, пространственная группа P21/n. Размеры элементарной ячейки: a=10,8302(8) Å, b=38,269(3) Å, c=13,8846(11) Å, β=108,844(2), V (Объем)=5446,1(7) Å3, Z=8, T (температура)=120 K, μ(MoKα) (коэффициент поглощения)=0,105 мм-1, Dcalc (вычисленная плотность)=1,310 г/см3, Собранные/единственные отражения: 53766/11398, диапазон угла тэта для сбора данных: 2,128 ≤ 2Θ ≤ 52,744.. Конечные показатели R: R1=0,0541 (I>2σ(I)), wR2=0,1053.
Спектр ЯМР 1H соединения V (d6-DMSO, δ, м.д., J, Гц): 1,24 (9H, т, CH3CH2); 1,45 (6H, с, 1,7-CH3); 2,48 (6H, с, 3,5-CH3); 3,05 (6H, CH3CH2NH+); 6,11 (2H, 2,6-CH=), 7,44-8,02 (4H, м, -CH- бензольного кольца)
Синтез соединения IIIa, натриевая соль
Раствор соединения V (0,2 г; 0,426 ммоль) в дихлорметане (3 мл) охлаждали до -50°C. Затем в течение 1 минуты добавляли раствор хлорсульфокислоты в дихлорметане, смесь перемешивали при данной температуре в течение 20 минут и давали смеси нагреться до комнатной температуры в течение 2 часов. При этом образовывался осадок. Жидкость с осадка удаляли декантацией, осадок промывали дихлорметаном (2×3 мл), затем добавляли гидрокарбонат натрия (1 г; 11,3 ммоль), с последующим добавлением воды (5 мл). Смесь перемешивали в течение 20 минут и выпаривали досуха; перед выпариванием добавляли этанол и толуол, чтобы избежать образования пены. При этом получался оранжевый остаток, который хроматографировали на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь дихлорметан - метанол (1:1); остаток растворяли в элюенте и органические соли отфильтровывали. Целевой продукт высушивали, получая в результате оранжевый порошок. Вещество перемешивали со смесью тетрагидрофурана и этилацетата в соотношении 1:1 объемом 3 мл. Выход составил 115 мг (47%). Структура продукта подтверждена методом ЯМР-спектроскопии.
Спектр ЯМР 1H соединения II (d6-DMSO, δ, м.д., J, Гц): 1,52 (6H, с, 1,7-CH3); 2,65 (6H, с, 3,5-CH3); 7,2-8,1 (4H, м, -CH- бензольного кольца)
Полученное соединение IIIa, натриевая соль обладает следующими свойствами:
- соединение является флуоресцентным красителем.
- соединение характеризуется водорастворимостью 27 мг/мл. Данная характеристика имеет высокое значение для применения, учитывая, что соединение I как флуоресцентный краситель предназначается для мечения белковых объектов в водной среде.
- спектр флуоресценции соединения находится в том же диапазоне, что и спектр широко используемого в лабораторной практике флуоресцеина, благодаря чему с веществом можно работать на приборах, имеющих фиксированные длины волн возбуждения/излучения, рассчитанные на флуоресцеиновые красители (рисунки 2 и 3).
- соединение имеет высокий квантовый выход в воде (0,96), что позволяет надежно отсекать фоновый сигнал возбуждающего излучения. Данное значение выше, чем квантовые выходы для известных соединений наиболее близких по составу и функциональности, максимальное значение квантового выхода в любом растворителе для которых составляет, 0,73 для соединения IV [11], 0,49 для соединения VI [9].
Рисунок 2
Рисунок 3
VI
- коэффициент экстинкции вещества в воде составил 8,6×104 л×моль-1×см-1, что примерно на 7% выше коэффициента экстинкции соединений IV и VI, известных из уровня техники [9, 11]. Таким образом, характеристики соединения IIIa исключительно точно соответствуют потребностям исследований в области биохимии и молекулярной биологии.
Пример
Применение соединения III
в качестве флуоресцентной метки белковых молекул
Вещество IIIa превращали посредством реакции с O-(N-сукцинимидил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборатом в N-гидроксисукцинимидное производное VII и это производное вводили в реакцию с бычьим альбумином.
VII
Спектр ЯМР 1H соединения VII (d6-DMSO, δ, м.д., J, Гц): 1,42 (6H, с, 1,7-CH3); 2,51 (6H, с, 3,5-CH3); 2,83 (4H, т, -CH2-CH2-), 7,62-8,41 (4H, м, -CH- бензольного кольца)
Белки содержат аминогруппы, соответственно их модификация часто проводится посредством активированных эфиров. Скорость и полнота протекания реакции активированных эфиров с аминогруппами существенно зависит от pH среды. При низких значениях pH происходит протонирование аминогрупп, в результате чего и термодинамика, и кинетика реакции неудовлетворительны. При высоких значениях на реакцию влияет уже процесс гидролиза активированного эфира. Поэтому оптимальное значение pH в данном случае 8.3-8.5.
В качестве растворителя для модификации бычьего альбумина использовали воду в смеси с диметилсульфоксидом (ДМСО).
Активированный эфир для модификации брали в 8-кратном избытке по отношению к модифицируемым аминогруппам. Это экспериментально подобранное число для достижения мечения в среднем по одной группе на макромолекулу.
Концентрация белка при мечении составляла 1 мг на мл. Активированный эфир растворяли в чистом ДМСО (1/10 объема реакционной смеси).
Бычий альбумин растворяли в буфере pH 8.3 (объем - 9/10 реакционной смеси). Для изготовления буфера использовали 0.1 М раствор бикарбоната натрия (NaHCO3).
Раствор активированного эфира в ДМСО прибавляли к раствору белка в буфере и тщательно перемешивали, после чего держали реакционную смесь при 0°С в течение 4 часов. Конъюгаты очищали с помощью переосаждения ацетоном.
Эффективность конъюгации красителей с бычьим альбумином оценивалась следующим образом. Поскольку в белке присутствует большое количество аминогрупп, то конъюгация протекает случайным образом, и выделить индивидуальное вещество после конъюгации не представляется возможным. Поэтому эффективность конъюгации оценивают, сравнивая поглощение красителя при 500 нм (длина волны поглощения сдвинулась по сравнению с красителем до конъюгации) и белка при 280 нм, учитывая, что коэффициенты экстинкции белка и красителя на данной длине волны известны (около 8,6×104 л × моль-1×см-1 и 4,3×104 л × моль-1×см-1 соответственно). Пример такого спектра приведен на рисунке 4. Анализ спектров для красителей показал, что эффективность модификации составила 1-1,2 молекулы красителя в среднем на молекулу белка.
Список литературы
1. Loudet A., Burgess K. Chem. Rev. 2007, 107, 4891-4932
2. Shah, M.; Thangaraj, K.; Soong, M.-L.; Wolford, L. T.; Boyer, J. H.; Politzer, I. R.; Pavlopoulos, T. G. Heteroat. Chem. 1990, 1, 389.
3. Wories, H. J.; Koek, J. H.; Lodder, G.; Lugtenburg, J.; Fokkens, R.; Driessen, O.; Mohn, G. R. Recl. TraV. Chim. Pays-Bas 1985, 104, 288.
4. Morgan, L. R.; Boyer, J. H. Boron difluoride compounds useful in photodynamic therapy and production of laser light. U.S. Patent 5446157, 1995.
5. Morgan, L. R.; Boyer, J. H. Heterocyclic compounds and their use in photodynamic therapy. WO Patent 9419355, February 18, 1994.
6. Urano, T.; Nagasaka, H.; Tsuchiyama, M.; Ide, H. Photopolymerizable composition. U.S. Patent 5498641, April 7, 1994.
7. Boyer, J. H.; Morgan, L. R. Preparation of difluoroboradiaza-s-indacene compounds and methods for using them. U.S. Patent 5189029, 1993.
8. Boyer, J. H.; Morgan, L. R. Fluorescent chemical compositions useful as laser dyes and photodynamic therapy agents, and methods for their use. U.S. Patent 361936, 1990
9. Li L., Han J., Nguyen B., and Burgess K. J. Org. Chem. 2008, 73, 1963-1970
10. Haugland R.P., Kang H.C., Chemically reactive dipyrrometheneboron difluoride dyes, US Patent 4774339 A, 1988
11. Wang D., Fan J., Gao X., Wang B., Sun S., Peng X., J. Org. Chem. 2009, 74, 7675–7683
| Таблица 1. Дробные атомные координаты (×104) and эквивалентные изотропные параметры атомного смещения (Å2×103) для соединения V, Ueq, определяемые как 1/3 от следа ортогонализованного тензора UIJ. | ||||
| Атом | x | y | z | U(eq) |
| F1 | 5030,5(15) | 4658,9(4) | 4325,1(11) | 30,3(4) |
| F2 | 4358,0(15) | 4101,0(4) | 3944,1(12) | 30,0(4) |
| F4 | 9768,1(15) | 5442,0(4) | 3205,1(12) | 32,2(4) |
| F7 | 8570,4(18) | 5667,7(4) | 1681,1(13) | 44,4(5) |
| F10 | 10702,2(18) | 5524,6(5) | 1976,3(14) | 51,4(5) |
| O1 | 9220,1(18) | 5079,2(5) | 1736,3(14) | 27,8(5) |
| O2 | 7534,6(17) | 4993,8(5) | 2321,0(14) | 24,7(5) |
| N1 | 4514(2) | 4472,0(5) | 2579,7(17) | 20,8(5) |
| N2 | 6505(2) | 4259,9(5) | 3912,8(16) | 20,3(5) |
| C1 | 7049(3) | 4155,4(8) | 5777(2) | 32,2(8) |
| C2 | 3297(3) | 4590,3(7) | 2088(2) | 25,8(7) |
| C3 | 3148(3) | 4637,5(7) | 1057(2) | 27,6(7) |
| C4 | 4298(3) | 4545,0(7) | 896(2) | 22,1(7) |
| C5 | 5175(3) | 4442,5(7) | 1863(2) | 19,9(6) |
| C6 | 6471(3) | 4336,7(6) | 2167(2) | 18,4(6) |
| C7 | 7139(3) | 4243,3(6) | 3176(2) | 18,1(6) |
| C8 | 8428(3) | 4122,5(7) | 3658(2) | 22,2(7) |
| C9 | 8548(3) | 4070,7(7) | 4668(2) | 24,9(7) |
| C10 | 7366(3) | 4156,9(7) | 4812(2) | 24,9(7) |
| C12 | 2318(3) | 4654,9(8) | 2616(2) | 38,3(8) |
| C13 | 4525(3) | 4552,6(7) | -113(2) | 26,4(7) |
| C14 | 7150(3) | 4308,0(7) | 1388(2) | 19,4(6) |
| C15 | 7992(3) | 4566,0(7) | 1234(2) | 19,3(7) |
| C16 | 8566(3) | 4515,3(7) | 483(2) | 27,2(7) |
| C17 | 8334(3) | 4217,6(8) | -109(2) | 32,4(8) |
| C18 | 7514(3) | 3962,1(8) | 48(2) | 30,4(8) |
| C19 | 6936(3) | 4008,3(7) | 792(2) | 24,3(7) |
| C20 | 8224(3) | 4901,7(7) | 1818(2) | 19,9(7) |
| C21 | 9486(3) | 4052,5(8) | 3204(2) | 32,3(8) |
| B1 | 5079(3) | 4372,7(8) | 3717(3) | 23,2(8) |
| B2 | 9568(4) | 5438,4(9) | 2167(3) | 28,3(9) |
| N3 | 7191(2) | 5516,7(6) | 3662,2(17) | 21,7(6) |
| C23 | 7338(3) | 5892,6(7) | 3394(2) | 27,5(7) |
| C24 | 6991(3) | 6154,8(7) | 4084(2) | 40,1(9) |
| C25 | 5816(3) | 5414,5(8) | 3573(2) | 28,1(7) |
| C26 | 4859(3) | 5470,4(8) | 2526(2) | 33,2(8) |
| C27 | 8129(3) | 5428,4(7) | 4701(2) | 27,2(7) |
| C28 | 8235(3) | 5039,4(7) | 4911(2) | 34,8(8) |
| Таблица 2. Параметры анизотропного смещения (Å2×103) для соединения V. Формула для фактора анизотропного смещения выглядит следующим образом: -2π2[h2a*2U11+2hka*b*U12+…]. | ||||||
| Атом | U11 | U22 | U33 | U23 | U13 | U12 |
| F1 | 37,7(11) | 28,9(10) | 25,7(10) | -3,2(8) | 12,3(8) | 2,1(8) |
| F2 | 29,3(10) | 27,7(9) | 36,7(10) | 4,3(8) | 15,8(8) | -3,9(8) |
| F4 | 34,4(10) | 35,4(10) | 24,4(10) | 0,3(8) | 6,1(8) | -3,4(8) |
| F7 | 59,9(13) | 23,1(10) | 38,1(11) | 6,3(8) | -0,8(10) | 1,2(9) |
| F10 | 56,6(13) | 50,6(12) | 59,1(13) | -15(1) | 35,6(11) | -29,2(10) |
| O1 | 26,6(12) | 23,6(11) | 37,6(13) | -2,6(10) | 16,5(10) | -5,4(10) |
| O2 | 27,8(12) | 23,1(11) | 26,5(12) | -3,4(9) | 13,2(10) | -1,3(9) |
| N1 | 19,9(13) | 21,5(13) | 22,5(14) | 1,3(11) | 9,2(11) | 0,7(11) |
| N2 | 24,3(14) | 19,4(13) | 16,8(13) | 1,4(10) | 6,0(12) | -2,0(11) |
| C1 | 37,0(19) | 36,9(19) | 23,4(18) | 5,4(15) | 10,8(16) | -0,8(16) |
| C2 | 24,2(18) | 23,4(17) | 30,1(19) | 0,4(14) | 9,3(15) | 2,1(14) |
| C3 | 24,7(18) | 26,5(17) | 28,2(19) | 5,4(14) | 3,9(15) | 2,3(14) |
| C4 | 24,7(17) | 14,9(15) | 26,1(18) | -0,7(13) | 7,5(14) | -2,2(13) |
| C5 | 23,7(17) | 18,6(15) | 17,5(16) | -2,6(13) | 6,9(14) | -2,3(13) |
| C6 | 25,4(17) | 9,4(14) | 20,1(17) | -4,2(12) | 7,0(14) | -6,3(13) |
| C7 | 22,0(16) | 15,0(15) | 16,0(16) | -0,7(12) | 4,4(14) | -2,8(13) |
| C8 | 22,3(17) | 17,0(15) | 27,0(18) | 0,4(13) | 7,7(14) | -4,2(13) |
| C9 | 22,4(17) | 22,2(16) | 24,9(18) | 5,8(13) | 0,2(14) | -0,7(14) |
| C10 | 30,0(18) | 21,8(17) | 20,9(18) | 2,0(13) | 5,5(15) | -5,8(14) |
| C12 | 31,9(19) | 46(2) | 40(2) | 3,6(17) | 16,5(17) | 6,7(16) |
| C13 | 27,8(18) | 31,2(18) | 18,0(17) | 0,6(14) | 4,5(14) | 0,8(14) |
| C14 | 19,6(16) | 18,9(15) | 18,0(16) | 2,0(13) | 3,5(13) | 4,1(13) |
| C15 | 19,6(16) | 19,1(15) | 19,1(16) | 2,1(13) | 6,2(13) | 4,0(13) |
| C16 | 31,6(19) | 22,1(17) | 31,5(19) | 3,3(14) | 15,5(16) | 1,2(14) |
| C17 | 42(2) | 32,2(19) | 31(2) | -3,3(15) | 22,8(17) | 4,4(16) |
| C18 | 40(2) | 26,6(18) | 25,3(18) | -5,0(14) | 12,0(16) | 0,5(15) |
| C19 | 27,2(17) | 23,4(17) | 22,1(17) | -1,1(13) | 7,9(14) | -2,1(14) |
| C20 | 21,9(17) | 19,3(16) | 17,3(17) | 5,7(13) | 4,5(14) | 2,9(13) |
| C21 | 25,4(18) | 36,6(19) | 31,6(19) | 3,3(15) | 4,8(15) | 4,3(15) |
| B1 | 30(2) | 19,2(18) | 23(2) | 2,2(15) | 11,4(17) | 0,2(16) |
| B2 | 36(2) | 23(2) | 29(2) | 0,3(17) | 13,7(19) | -7,6(18) |
| N3 | 27,1(15) | 18,9(13) | 20,1(14) | 0,4(11) | 9,1(12) | -0,5(11) |
| C23 | 35,2(19) | 17,7(16) | 29,5(18) | 3,7(14) | 10,1(15) | -3,0(14) |
| C24 | 61(2) | 23,0(18) | 32(2) | -2,5(15) | 9,2(18) | 3,7(17) |
| C25 | 27,1(18) | 29,5(18) | 27,9(18) | 1,0(14) | 9,2(15) | -4,1(14) |
| C26 | 31,2(19) | 32,8(19) | 33(2) | 0,9(15) | 6,9(16) | -0,5(15) |
| C27 | 30,6(18) | 28,9(17) | 19,4(17) | 3,5(14) | 4,4(14) | -0,5(15) |
| C28 | 40(2) | 27,1(18) | 31(2) | 6,6(15) | 3,9(16) | 6,1(16) |
| Таблица 3. Длины связей в соединении V | ||
| Атом | Атом | Длина/Å |
| F1 | B1 | 1,394(3) |
| F2 | B1 | 1,396(3) |
| F4 | B2 | 1,386(4) |
| F7 | B2 | 1,387(4) |
| F10 | B2 | 1,377(4) |
| O1 | C20 | 1,310(3) |
| O1 | B2 | 1,498(4) |
| O2 | C20 | 1,227(3) |
| N1 | C2 | 1,352(3) |
| N1 | C5 | 1,406(3) |
| N1 | B1 | 1,545(4) |
| N2 | C7 | 1,405(3) |
| N2 | C10 | 1,353(3) |
| N2 | B1 | 1,541(4) |
| C1 | C10 | 1,487(4) |
| C2 | C3 | 1,400(4) |
| C2 | C12 | 1,492(4) |
| C3 | C4 | 1,381(4) |
| C4 | C5 | 1,427(4) |
| C4 | C13 | 1,498(4) |
| C5 | C6 | 1,389(4) |
| C6 | C7 | 1,399(3) |
| C6 | C14 | 1,495(4) |
| C7 | C8 | 1,417(4) |
| C8 | C9 | 1,381(4) |
| C8 | C21 | 1,500(4) |
| C9 | C10 | 1,396(4) |
| C14 | C15 | 1,407(4) |
| C14 | C19 | 1,389(4) |
| C15 | C16 | 1,390(4) |
| C15 | C20 | 1,497(4) |
| C16 | C17 | 1,379(4) |
| C17 | C18 | 1,385(4) |
| C18 | C19 | 1,381(4) |
| Таблица 4. Валентные углы в соединении V | |||
| Атом | Атом | Атом | Угол |
| C20 | O1 | B2 | 123,3(2) |
| C2 | N1 | C5 | 107,8(2) |
| C2 | N1 | B1 | 126,7(2) |
| C5 | N1 | B1 | 125,4(2) |
| C7 | N2 | B1 | 125,6(2) |
| C10 | N2 | C7 | 107,7(2) |
| C10 | N2 | B1 | 126,7(2) |
| N1 | C2 | C3 | 109,3(2) |
| N1 | C2 | C12 | 122,7(3) |
| C3 | C2 | C12 | 128,0(3) |
| C4 | C3 | C2 | 108,7(3) |
| C3 | C4 | C5 | 106,2(2) |
| C3 | C4 | C13 | 125,1(3) |
| C5 | C4 | C13 | 128,6(3) |
| N1 | C5 | C4 | 107,9(2) |
| C6 | C5 | N1 | 120,2(2) |
| C6 | C5 | C4 | 131,8(3) |
| C5 | C6 | C7 | 121,6(2) |
| C5 | C6 | C14 | 119,1(2) |
| C7 | C6 | C14 | 119,3(2) |
| N2 | C7 | C8 | 108,0(2) |
| C6 | C7 | N2 | 120,1(2) |
| C6 | C7 | C8 | 131,9(3) |
| C7 | C8 | C21 | 129,1(3) |
| C9 | C8 | C7 | 106,3(2) |
| C9 | C8 | C21 | 124,6(3) |
| C8 | C9 | C10 | 108,7(2) |
| N2 | C10 | C1 | 122,7(3) |
| N2 | C10 | C9 | 109,1(2) |
| C9 | C10 | C1 | 128,1(3) |
| C15 | C14 | C6 | 123,6(2) |
| C19 | C14 | C6 | 117,7(2) |
| C19 | C14 | C15 | 118,7(3) |
| C14 | C15 | C20 | 121,6(2) |
| C16 | C15 | C14 | 119,1(2) |
| C16 | C15 | C20 | 119,3(2) |
| C17 | C16 | C15 | 121,5(3) |
| C16 | C17 | C18 | 119,5(3) |
| C19 | C18 | C17 | 119,7(3) |
| C18 | C19 | C14 | 121,5(3) |
| O1 | C20 | C15 | 113,4(2) |
| O2 | C20 | O1 | 124,7(2) |
| O2 | C20 | C15 | 121,9(2) |
| F1 | B1 | F2 | 108,4(2) |
| F1 | B1 | N1 | 110,2(2) |
| F1 | B1 | N2 | 110,2(2) |
| F2 | B1 | N1 | 110,4(2) |
| F2 | B1 | N2 | 110,7(2) |
| N2 | B1 | N1 | 107,0(2) |
| F4 | B2 | F7 | 109,6(3) |
| F4 | B2 | O1 | 111,0(2) |
| F7 | B2 | O1 | 109,3(3) |
| F10 | B2 | F4 | 110,4(3) |
| F10 | B2 | F7 | 111,0(3) |
| F10 | B2 | O1 | 105,5(2) |
| Таблица 5. Торсионные углы для соединения V | ||||
| A | B | C | D | Угол˚ |
| N1 | C2 | C3 | C4 | 0,3(3) |
| N1 | C5 | C6 | C7 | 2,6(4) |
| N1 | C5 | C6 | C14 | -179,9(2) |
| N2 | C7 | C8 | C9 | -0,3(3) |
| N2 | C7 | C8 | C21 | 178,5(3) |
| C2 | N1 | C5 | C4 | -0,7(3) |
| C2 | N1 | C5 | C6 | 177,9(2) |
| C2 | N1 | B1 | F1 | -59,2(4) |
| C2 | N1 | B1 | F2 | 60,5(4) |
| C2 | N1 | B1 | N2 | -179,0(2) |
| C2 | C3 | C4 | C5 | -0,7(3) |
| C2 | C3 | C4 | C13 | 178,8(3) |
| C3 | C4 | C5 | N1 | 0,8(3) |
| C3 | C4 | C5 | C6 | -177,5(3) |
| C4 | C5 | C6 | C7 | -179,3(3) |
| C4 | C5 | C6 | C14 | -1,8(4) |
| C5 | N1 | C2 | C3 | 0,3(3) |
| C5 | N1 | C2 | C12 | -179,7(3) |
| C5 | N1 | B1 | F1 | 123,2(3) |
| C5 | N1 | B1 | F2 | -117,1(3) |
| C5 | N1 | B1 | N2 | 3,4(4) |
| C5 | C6 | C7 | N2 | -0,9(4) |
| C5 | C6 | C7 | C8 | 178,5(3) |
| C5 | C6 | C14 | C15 | 99,6(3) |
| C5 | C6 | C14 | C19 | -80,8(3) |
| C6 | C7 | C8 | C9 | -179,8(3) |
| C6 | C7 | C8 | C21 | -0,9(5) |
| C6 | C14 | C15 | C16 | -179,5(3) |
| C6 | C14 | C15 | C20 | -2,9(4) |
| C6 | C14 | C19 | C18 | 179,4(3) |
| C7 | N2 | C10 | C1 | 177,4(2) |
| C7 | N2 | C10 | C9 | -0,5(3) |
| C7 | N2 | B1 | F1 | -121,5(3) |
| C7 | N2 | B1 | F2 | 118,7(3) |
| C7 | N2 | B1 | N1 | -1,6(3) |
| C7 | C6 | C14 | C15 | -82,9(3) |
| C7 | C6 | C14 | C19 | 96,7(3) |
| C7 | C8 | C9 | C10 | 0,0(3) |
| C8 | C9 | C10 | N2 | 0,3(3) |
| C8 | C9 | C10 | C1 | -177,5(3) |
| C10 | N2 | C7 | C6 | -179,9(2) |
| C10 | N2 | C7 | C8 | 0,5(3) |
| C10 | N2 | B1 | F1 | 59,1(3) |
| C10 | N2 | B1 | F2 | -60,7(4) |
| C10 | N2 | B1 | N1 | 179,0(2) |
| C12 | C2 | C3 | C4 | -179,8(3) |
| C13 | C4 | C5 | N1 | -178,7(2) |
| C13 | C4 | C5 | C6 | 3,0(5) |
| C14 | C6 | C7 | N2 | -178,3(2) |
| C14 | C6 | C7 | C8 | 1,1(4) |
| C14 | C15 | C16 | C17 | -0,3(4) |
| C14 | C15 | C20 | O1 | 166,9(2) |
| C14 | C15 | C20 | O2 | -12,9(4) |
| C15 | C14 | C19 | C18 | -1,0(4) |
| C15 | C16 | C17 | C18 | -0,2(4) |
| C16 | C15 | C20 | O1 | -16,5(4) |
| C16 | C15 | C20 | O2 | 163,7(3) |
| C16 | C17 | C18 | C19 | 0,1(4) |
| C17 | C18 | C19 | C14 | 0,5(4) |
| C19 | C14 | C15 | C16 | 0,9(4) |
| C19 | C14 | C15 | C20 | 177,5(2) |
| C20 | O1 | B2 | F4 | 56,9(4) |
| C20 | O1 | B2 | F7 | -64,1(3) |
| C20 | O1 | B2 | F10 | 176,5(2) |
| C20 | C15 | C16 | C17 | -177,0(3) |
| C21 | C8 | C9 | C10 | -178,9(3) |
| B1 | N1 | C2 | C3 | -177,7(2) |
| B1 | N1 | C2 | C12 | 2,4(4) |
| B1 | N1 | C5 | C4 | 177,3(2) |
| B1 | N1 | C5 | C6 | -4,2(4) |
| B1 | N2 | C7 | C6 | 0,5(4) |
| B1 | N2 | C7 | C8 | -179,0(2) |
| B1 | N2 | C10 | C1 | -3,1(4) |
| B1 | N2 | C10 | C9 | 179,0(2) |
| B2 | O1 | C20 | O2 | -6,3(4) |
| B2 | O1 | C20 | C15 | 173,9(2) |
Claims (6)
1. Соли соединения формулы I с щелочными металлами, замещающими атомы водорода в обеих сульфогруппах
где R означает N-оксисукцинимидильную группу
2. Способ получения солей по п. 1, включающий получение (из о-фталевого ангидрида, 2,4-диметилпиррола, триэтиламина и эфирата трифторида бора) 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензоилокситрифторборат, триэтиламмониевой соли, которую затем вводят в реакцию сульфирования с последующим добавлением гидрокарбоната щелочного металла, после чего проводят реакцию с O-(N-сукцинимидил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборатом.
3. Применение солей по п. 1 для флуоресцентного мечения белковых молекул.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017143419A RU2680090C1 (ru) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017143419A RU2680090C1 (ru) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2680090C1 true RU2680090C1 (ru) | 2019-02-15 |
Family
ID=65442434
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017143419A RU2680090C1 (ru) | 2017-12-12 | 2017-12-12 | 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2680090C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20220281899A1 (en) * | 2019-11-21 | 2022-09-08 | Fujifilm Corporation | Compound and fluorescently labeled biological substance using the same |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5189029A (en) * | 1990-04-23 | 1993-02-23 | Bo-Dekk Ventures, Ltd. | Indacene compounds and methods for using the same |
| RU2296333C2 (ru) * | 2001-07-02 | 2007-03-27 | Арктик Диагностикс Ой | Красители на основе дифторида дипиррометенбора с двухфотонным поглощением и их применение |
| WO2012083509A1 (zh) * | 2010-12-20 | 2012-06-28 | 大连理工大学 | 一类氟化硼络合二吡咯甲川染料、制备方法及其应用 |
-
2017
- 2017-12-12 RU RU2017143419A patent/RU2680090C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5189029A (en) * | 1990-04-23 | 1993-02-23 | Bo-Dekk Ventures, Ltd. | Indacene compounds and methods for using the same |
| RU2296333C2 (ru) * | 2001-07-02 | 2007-03-27 | Арктик Диагностикс Ой | Красители на основе дифторида дипиррометенбора с двухфотонным поглощением и их применение |
| WO2012083509A1 (zh) * | 2010-12-20 | 2012-06-28 | 大连理工大学 | 一类氟化硼络合二吡咯甲川染料、制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHAUHAN P. et al, Novel bodipy - Cellulose nanohybrids for the production of singlet oxygen, RSC Advances, 2016, v. 6, no. 38, p. 32070-32073. * |
| LI L. et al, Syntheses and Spectral Properties of Functionalized, Water-Soluble BODIPY Derivatives, J. Org. Chem., 2008, v. 73, p. 1963-1970. * |
| LI L. et al, Syntheses and Spectral Properties of Functionalized, Water-Soluble BODIPY Derivatives, J. Org. Chem., 2008, v. 73, p. 1963-1970. WANG D. et al, Carboxyl BODIPY Dyes from Bicarboxylic Anhydrides: One-Pot Preparation, Spectral Properties, Photostability, and Biolabeling, J. Org. Chem., 2009, v. 74, p. 7675-7683. * |
| WANG D. et al, Carboxyl BODIPY Dyes from Bicarboxylic Anhydrides: One-Pot Preparation, Spectral Properties, Photostability, and Biolabeling, J. Org. Chem., 2009, v. 74, p. 7675-7683. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20220281899A1 (en) * | 2019-11-21 | 2022-09-08 | Fujifilm Corporation | Compound and fluorescently labeled biological substance using the same |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xu et al. | A novel “Turn-On” fluorescent probe for F− detection in aqueous solution and its application in live-cell imaging | |
| JP6349091B2 (ja) | 超解像蛍光イメージング用プローブ | |
| CN109400609B (zh) | 用于标记SNAP-tag的蛋白标签荧光探针 | |
| JP7344982B2 (ja) | 化合物及びこれを用いた蛍光標識生体物質 | |
| CN102061103A (zh) | 一类氟化硼络合二吡咯甲川染料、制备方法及其应用 | |
| CN104745177A (zh) | 一种具有蛋白标签定位的光激活荧光探针及其制备方法和应用 | |
| JP5228190B2 (ja) | パーオキシナイトライト蛍光プローブ | |
| CN108504130B (zh) | 一种花菁类荧光染料及其合成方法 | |
| JP5090731B2 (ja) | 蛍光プローブ | |
| CN110092773A (zh) | 一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN103342698B (zh) | 一种非荧光共振能量转移的双荧光团比率荧光分子探针的应用 | |
| CN108314636B (zh) | 一种多芳基硫振荡发光材料及其制备方法和应用 | |
| CN107286186A (zh) | 硫化氢荧光探针及其制备方法和应用 | |
| RU2680090C1 (ru) | 2-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-2,6-дисульфо-4-боро-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)-бензойная кислота и ее производные, способ их получения и их применение для флуоресцентного мечения белковых молекул | |
| US20040054195A1 (en) | Xanthene derivatives | |
| CN107843578A (zh) | 一种基于香豆素铜离子配合物的荧光探针，制备方法及其在选择性识别焦磷酸盐中的应用 | |
| CN105331358B (zh) | 一种基于双罗丹明的Sn4+荧光探针分子及其制备方法与应用 | |
| CN105295060A (zh) | 一类基于比率荧光检测汞离子的金属-有机骨架材料 | |
| JP5292570B2 (ja) | 新規マレイミド誘導体 | |
| CN111533761B (zh) | 一类具有细胞器或蛋白质靶向功能的比率型pH探针及应用 | |
| CN114315784A (zh) | 一种组氨酸标签荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN102634224B (zh) | 一类4位n取代的蒽吡啶酮荧光染料、其制备方法及应用 | |
| JP7479667B2 (ja) | スルホニルアニリン骨格を有する化合物若しくはその塩、又はそれらを有する有機蛍光材料 | |
| EP2758391A1 (fr) | Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, et leur procédé de préparation. | |
| KR101125058B1 (ko) | 물질 표지용 화합물 및 그 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191213 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20201103 |