[go: up one dir, main page]

RU2669348C1 - Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells - Google Patents

Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells Download PDF

Info

Publication number
RU2669348C1
RU2669348C1 RU2017139785A RU2017139785A RU2669348C1 RU 2669348 C1 RU2669348 C1 RU 2669348C1 RU 2017139785 A RU2017139785 A RU 2017139785A RU 2017139785 A RU2017139785 A RU 2017139785A RU 2669348 C1 RU2669348 C1 RU 2669348C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ethyl
methyl
diaminohexanoate
cells
hydroxypyridinium
Prior art date
Application number
RU2017139785A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Михайловна Даниленко
Михаил Владимирович Покровский
Алла Сергеевна Котельникова
Татьяна Григорьевна Покровская
Анна Александровна Пересыпкина
Евгения Александровна Бесхмельницина
Владимир Иванович Якушев
Дарья Александровна Костина
София Яковлевна Скачилова
Елена Владимировна Шилова
Юрий Евгеньевич Бурда
Original Assignee
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") filed Critical Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority to RU2017139785A priority Critical patent/RU2669348C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2669348C1 publication Critical patent/RU2669348C1/en

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33Heterocyclic compounds
    • A61K31/395Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to medicine, in particular to experimental pharmacology. Method is proposed for inhibiting the nuclear factor kappa B in a cell culture comprising adding a bacterial lipopolysaccharide at a concentration of 1 mcg/ml to a freshly isolated standard ficoll density gradient test for mononuclear blood cells of Wistar rats, characterized in that 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate is then added to this mixture at a final concentration of 35 mcg/ml.
EFFECT: technical result consists in the expressed inhibition of the nuclear factor kappa B in the cell culture and in the favorable safety profile.
1 cl, 1 tbl

Description

Способ ингибирования нуклеарного фактора каппа В с использованием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата в культуре клетокMethod for inhibiting kappa B nuclear factor using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate in cell culture

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.The invention relates to medicine, in particular to experimental pharmacology.

По известным литературным источникам – нуклеарный фактор каппа В (NF-κB) на сегодняшний день является одной из перспективных мишеней для разработки инновационных лекарственных средств в рамках развития современной фармакологии и формирования концепции таргетной терапии [Test system for evaluation of the influence of the biological activity of substances on the signal system of NF-κB: focus on the derivatives of 3 hydroxypyridine / Skachilova S.Y., Ragulina V.A., Kostina D.A., Burda Y.E. // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. – 2017. – Vol. 3, №2. – Р. 50-56. doi: 10.18413/2313-8971-2017-3-2-50-56]. According to well-known literature, the nuclear factor kappa B (NF-κB) is today one of the promising targets for the development of innovative drugs in the development of modern pharmacology and the formation of the concept of targeted therapy [Test system for evaluation of the influence of the biological activity of substances on the signal system of NF-κB: focus on the derivatives of 3 hydroxypyridine / Skachilova SY, Ragulina VA, Kostina DA, Burda YE // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. - 2017 .-- Vol. 3, No. 2. - R. 50-56. doi: 10.18413 / 2313-8971-2017-3-2-50-56].

NF-κB является одним из факторов транскрипции. Повышенный интерес к изучению биологической роли данной сигнальной системы и вкладе её в развитие сердечно-сосудистых, онкологических и аутоиммунных заболеваний очевиден [Role of nuclear factor-κB activation in acute ischaemia-reperfusion injury in myocardium / A. Kis, D.M. Yellon, G.F. Baxter // British Journal of Pharmacology. – 2003. – 138(5). – P. 894-900, doi:10.1038/sj.bjp.0705108; Nuclear factor kappa B: important transcription factor and therapeutic target. Lee JI, Burckart GJ. J Clin Pharmacol. 1998 Nov;38(11):981-93]. Целый ряд стимулов (провоспалительные цитокины: фактор некроза опухоли α, интерлейкин 1β; лиганд CD40 и др.), запускают канонический и неканонический пути активации сигнального пути NF-κB, что повышает экспрессию генов, регулирующих синтез цитокинов и хемокинов, пролиферацию и дифференцировку клеток, ангиогенез, иммунные реакции и апоптоз [Nuclear factor kappa B as a potential target for pharmacological correction endothelium-associated pathology / V.A. Ragulina, D.A. Kostina, A.P. Dovgan, Y.E. Burda, S.V. Nadezhdin // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. – 2017. – Vol. 3, №1 – P. 114-124. DOI: 10.18413/2500-235X-2017-3-1-114-124].NF-κB is one of the transcription factors. An increased interest in studying the biological role of this signaling system and its contribution to the development of cardiovascular, oncological and autoimmune diseases is evident [Role of nuclear factor-κB activation in acute ischaemia-reperfusion injury in myocardium / A. Kis, D.M. Yellon, G.F. Baxter // British Journal of Pharmacology. - 2003 .-- 138 (5). - P. 894-900, doi: 10.1038 / sj.bjp.0705108; Nuclear factor kappa B: important transcription factor and therapeutic target. Lee JI, Burckart GJ. J Clin Pharmacol. 1998 Nov; 38 (11): 981-93]. A number of stimuli (pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor α, interleukin 1β; CD40 ligand, etc.) trigger the canonical and noncanonical activation pathways of the NF-κB signaling pathway, which increases the expression of genes that regulate the synthesis of cytokines and chemokines, cell proliferation and differentiation, angiogenesis, immune responses, and apoptosis [Nuclear factor kappa B as a potential target for pharmacological correction endothelium-associated pathology / VA Ragulina, D.A. Kostina, A.P. Dovgan, Y.E. Burda, S.V. Nadezhdin // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. - 2017 .-- Vol. 3, No. 1 - P. 114-124. DOI: 10.18413 / 2500-235X-2017-3-1-114-124].

Потенциальными кандидатами, снижающими активность данного транскрипционного фактора являются производные 3-оксипиридина. В связи с вышесказанным следует отметить актуальность изучения 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата в качестве ингибитора NF-κB in vitro с оценкой активности p65 субъединицы в мононуклеарных клетках (МНК) крови крыс линии Wistar, стимулированных бактериальным липополисахаридом.Potential candidates that reduce the activity of this transcription factor are 3-hydroxypyridine derivatives. In connection with the foregoing, the relevance of the study of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate as an inhibitor of NF-κB in vitro with the assessment of the activity of p65 subunit in mononuclear cells (MNCs) of blood of Wistar rats should be noted. stimulated by bacterial lipopolysaccharide.

Известен способ ингибирования NF-κB композициями тритерпенов (патент на изобретение RU 2288706, публ. 10.12.2006). Сущность его заключается в ингибировании воспаления путем обеспечения клетки монотерпеновыми композициями, которые ингибируют фактор NF-κB. Композиция может включать дополнительные химические функциональные агенты. Технический результат - повышение эффективности лечения воспалительных состояний, в частности предраковых. A known method of inhibiting NF-κB compositions of triterpenes (patent for invention RU 2288706, publ. 10.12.2006). Its essence is to inhibit inflammation by providing cells with monoterpene compositions that inhibit NF-κB factor. The composition may include additional chemical functional agents. The technical result is an increase in the effectiveness of the treatment of inflammatory conditions, in particular precancerous.

Основным недостатком способа является то, что применяемые терапевтические дозы монотерпеновых/тритерпеновых соединений могут привести к значительным побочным эффектам или к другим неблагоприятным реакциям. У субъектов с далеко зашедшим заболеванием может наблюдаться определенная степень побочных эффектов при применении терапевтических доз монотерпеновых/тритерпеновых соединений.The main disadvantage of this method is that the therapeutic doses of monoterpene / triterpene compounds used can lead to significant side effects or other adverse reactions. In subjects with advanced disease, a certain degree of side effects may be observed with therapeutic doses of monoterpene / triterpene compounds.

Известно зависящее от концентрации влияние (R)- и (S)-флурбипрофена на активацию фактора транскрипции NF-κВ в RAW-клетках (патент на изобретение RU 2250103, публ. 20.04.2005). Анализ гельудерживания показывает, что липополисахарид (ЛПС) (1 мкг/мл) приводит к активации NF-κВ (комплекс р50/р65 NF-κВ). Микромолярные концентрации (R)-флурбипрофена были в состоянии ингибировать эту индуцированную ЛПС активацию NF-κВ.The concentration-dependent effect of (R) - and (S) -flurbiprofen on the activation of the transcription factor NF-κB in RAW cells is known (Patent RU 2250103, publ. 04/20/2005). Gel retention analysis shows that lipopolysaccharide (LPS) (1 μg / ml) leads to activation of NF-κB (p50 / p65 complex NF-κB). Micromolar concentrations of (R) -flurbiprofen were able to inhibit this LPS-induced activation of NF-κB.

Изобретение относится к области фармации, а именно к применению (R)-энантиомеров арилпропионовых кислот. Сущность изобретения - применение названных кислот для получения лекарственных средств, которые ингибируют каскад активации NF-κB. На основе их создана композиция. Технический результат - использование для лечения заболеваний, на которые может терапевтически положительно воздействовать ингибирование образования NF-κB. The invention relates to the field of pharmacy, and in particular to the use of (R) -enantiomers of arylpropionic acids. The essence of the invention is the use of these acids to obtain drugs that inhibit the activation cascade of NF-κB. Based on them, a composition was created. The technical result is the use for the treatment of diseases that can be therapeutically positively affected by the inhibition of the formation of NF-κB.

Недостатком данного изобретения является то, что арилпропионовые кислоты и их производные обладают рядом побочных эффектов при их применении, а именно тошнота, анорексия, метеоризм, запор, изжога, диарея, НПВС-гастропатия, вплоть до эрозивно-язвенных поражений ЖКТ.The disadvantage of this invention is that arylpropionic acids and their derivatives have a number of side effects when used, namely nausea, anorexia, flatulence, constipation, heartburn, diarrhea, NSAID gastropathy, up to erosive and ulcerative lesions of the gastrointestinal tract.

Наиболее близким к заявленному решению является способ ингибирования NF-κB с использованием производных 3-оксипиридина (Test system for evaluation of the influence of the biological activity of substances on the signal system of NF-κB: focus on the derivatives of 3hydroxypyridine / Skachilova S.Y., Ragulina V.A., Kostina D.A., Burda Y.E. // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. – 2017. – Vol. 3, №2. – Р. 50-56), включающий добавление бактериального липополисахарида в концентрации 1 мкг/мл к свежевыделенным по стандартной методике на градиенте плотности фиколла МНК крови крыс Wistar, затем добавление к данной смеси исследуемого фармакологического агента, растворенного в фосфатно-солевом буфере, в соответствующей конечной концентрации, отличающийся тем, что в качестве фармакологического агента используют мексидол, этоксидол, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния глутаминат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния аспарагинат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния 4-аминобензоат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния никотинат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния N-ацетиламиногексаноат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния N-ацетиламиноацетат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния N-ацетиламиноглутаминат, 3-гидрокси-2-этил-6-метилпиридиния ацетилсалицилат, бета-гидроксиникотиноилгидразон 2-метил-3-гидрокси-4-формил-5-оксиметилпиридина дигидрохлорид. Наибольшей ингибирующей способностью на ЛПС-индуцированную экспрессию p65 NF-κB в МНК обладали мексидол, этоксидол и бета-гидроксиникотиноилгидразон 2-метил-3-гидрокси-4-формил-5-оксиметилпиридина дигидрохлорид.Closest to the claimed solution is a method of inhibiting NF-κB using 3-hydroxypyridine derivatives (Test system for evaluation of the influence of the biological activity of substances on the signal system of NF-κB: focus on the derivatives of 3hydroxypyridine / Skachilova SY, Ragulina VA, Kostina DA, Burda YE // Research result: pharmacology and clinical pharmacology. - 2017. - Vol. 3, No. 2. - P. 50-56), including the addition of bacterial lipopolysaccharide at a concentration of 1 μg / ml to freshly isolated the standard method on a density gradient of ficoll MNCs of blood of Wistar rats, then adding the studied pharmacological agent to this mixture, p dissolved in phosphate-buffered saline, in the corresponding final concentration, characterized in that mexidol, ethoxidol, 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium glutamate, 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium asparaginate are used as a pharmacological agent 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium 4-aminobenzoate, 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium nicotinate, 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium N-acetylaminohexanoate, 3-hydroxy-2- ethyl 6-methylpyridinium N-acetylaminoacetate, 3-hydroxy-2-ethyl-6-methylpyridinium N-acetylaminoglutaminate, 3-hydroxy-2-ethyl-6 -methylpyridinium acetylsalicylate, beta-hydroxynicotinoylhydrazone 2-methyl-3-hydroxy-4-formyl-5-hydroxymethylpyridine dihydrochloride. Mexidol, ethoxidol and beta-hydroxynicotinoylhydrazone 2-methyl-3-hydroxy-4-formyl-5-hydroxymethylpyridine dihydrochloride had the highest inhibitory ability on LPS-induced expression of p65 NF-κB in MNCs.

Недостатком данного решения является то, что наблюдаемая ингибирующая активность in vitro в отношении сигнального пути NF-κB мексидола, этоксидола и бета-гидроксиникотиноилгидразон 2-метил-3-гидрокси-4-формил-5-оксиметилпиридина дигидрохлорида не достигает целевых значений и более чем в 3,5 раза отличается от значений интактных крыс.The disadvantage of this solution is that the observed in vitro inhibitory activity with respect to the NF-κB signal pathway of mexidol, ethoxidol and beta-hydroxynicotinoylhydrazone 2-methyl-3-hydroxy-4-formyl-5-hydroxymethylpyridine dihydrochloride does not reach the target values and more than in 3.5 times different from intact rats.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является эффективный способ ингибирования NF-κB с использованием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата, подтверждаемый результатами оценки активности p65 субъединицы в МНК крови крыс Wistar, стимулированных бактериальным липополисахаридом, обладающий более благоприятным профилем безопасности по сравнению с рассмотренными аналогами и более высокой ингибирующей активностью NF-κB по сравнению с прототипом.The technical result of the present invention is an effective method of inhibiting NF-κB using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate, confirmed by the results of evaluating the activity of the p65 subunit in WNCR blood rats stimulated with bacterial lipopolysaccharide, having more a favorable safety profile compared with the considered analogues and a higher inhibitory activity of NF-κB compared to the prototype.

Задачей предлагаемого изобретения является создание эффективного способа ингибирования нуклеарного фактора каппа В с использованием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата в культуре мононуклеарных клеток крови крыс Wistar.The objective of the invention is the creation of an effective method of inhibiting the nuclear factor of kappa B using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate in a culture of mononuclear blood cells of rats Wistar.

Поставленная задача достигается тем, что предложен способ ингибирования нуклеарного фактора каппа В с использованием 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата в культуре клеток, включающий добавление бактериального липополисахарида в концентрации 1 мкг/мл к свежевыделенным по стандартной методике на градиенте плотности фиколла МНК крови крыс Wistar, затем добавление к данной смеси исследуемого фармакологического агента, растворенного в фосфатно-солевом буфере, в соответствующей конечной концентрации, отличающийся тем, что в качестве фармакологического агента используют 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноат. This object is achieved by the fact that the proposed method of inhibiting the nuclear factor of kappa B using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate in cell culture, comprising adding bacterial lipopolysaccharide at a concentration of 1 μg / ml to freshly isolated the standard method on the density gradient of Ficoll MNCs of blood of Wistar rats, then adding to this mixture the studied pharmacological agent dissolved in phosphate-saline buffer, in the corresponding final concentration, characterized in that 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate is used as a pharmacological agent.

Основным преимуществом предлагаемого способа является то, что введение нового производного 3-оксипиридина, 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата, в исследуемой in vitro концентрации, 35 мкг/мл, приводит к выраженному ингибированию NF-κB в культуре клеток, что подтверждается результатами оценки активности p65 субъединицы в МНК крови крыс Wistar, стимулированных бактериальным липополисахаридом. Помимо этого, предлагаемый способ обладает более благоприятным профилем безопасности по сравнению с рассмотренными аналогами и более высокой ингибирующей активностью NF-κB по сравнению с прототипом.The main advantage of the proposed method is that the introduction of a new derivative of 3-hydroxypyridine, 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate, in an in vitro test concentration of 35 μg / ml, leads to pronounced inhibition of NF -κB in a cell culture, as evidenced by the results of evaluating the activity of the p65 subunit in WNar rat MNCs stimulated with bacterial lipopolysaccharide. In addition, the proposed method has a more favorable safety profile compared with the considered analogues and a higher inhibitory activity of NF-κB compared to the prototype.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 2-ЭТИЛ-6-МЕТИЛ-3-ГИДРОКСИПИРИДИНИЯ L-2,6-ДИАМИНОГЕКСАНОАТАMETHOD FOR PRODUCING 2-Ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate

В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником, загружают 30 мл этилового спирта. При перемешивании добавляют 2,74 г (0,02 м) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина. После растворения добавляют постепенно 3,92 г (0,02 м) L-2,6-диаминогексановой кислоты. Массу нагревают до 75 °C, выдерживают при этой температуре в течение 1 часа, полученный раствор фильтруют. От фильтрата отгоняют растворитель, приливают к остатку 15 мл ацетонитрила, кристаллизуют при +5 °C в течение 8-10 часов. Кристаллы отделяют фильтрацией, сушат в вакууме при 35-40 °C, получают 5,4 г гигроскопичного мелкокристаллического вещества, растворимого в воде. C14H25N3O3 In a three-necked flask equipped with a stirrer, thermometer and reflux condenser, 30 ml of ethanol are charged. 2.74 g (0.02 m) of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine are added with stirring. After dissolution, 3.92 g (0.02 m) of L-2,6-diaminohexanoic acid is added gradually. The mass is heated to 75 ° C, maintained at this temperature for 1 hour, the resulting solution is filtered. The solvent is distilled off from the filtrate, 15 ml of acetonitrile are added to the residue, and crystallized at +5 ° C for 8-10 hours. The crystals are separated by filtration, dried in vacuo at 35-40 ° C, and 5.4 g of a hygroscopic finely crystalline substance soluble in water are obtained. C 14 H 25 N 3 O 3

Найдено, % : C 59,21; H 8,94; N 14,79Found,%: C 59.21; H 8.94; N 14.79

Вычислено, % : C 59,34; H 8,89; N 14,83; O 16,94Calculated,%: C 59.34; H 8.89; N, 14.83; O 16.94

ИК-спектр, ν см-1: 3495 (OH); 3370, 3285 (NH2); 2560 (N+); 1645, 1610 (C=C); 1287 (CH2)IR spectrum, ν cm -1 : 3495 (OH); 3370, 3285 (NH 2 ); 2560 (N +); 1645, 1610 (C = C); 1287 (CH 2 )

УФ-спектр, нм: 231, 296 (0,001% раствор в воде)UV spectrum, nm: 231, 296 (0.001% solution in water)

ТСХ: система бензол-ацетон (2-3), пластины Merck, Rf – 0,43TLC: benzene-acetone system (2-3), Merck, Rf plates - 0.43

Figure 00000001
Figure 00000001

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА PHARMACOLOGICAL PROPERTIES

2-ЭТИЛ-6-МЕТИЛ-3-ГИДРОКСИПИРИДИНИЯ L-2,6-ДИАМИНОГЕКСАНОАТА2-Ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate

При изучении ингибирующей активности в отношении NF-κB были исследованы 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноат и мексидол (препарат сравнения), которые добавляли к свежевыделенным по стандартной методике на градиенте плотности фиколла (ρ = 1,077, «Панэко», Россия) МНК крови крыс линии Wistar. Исследуемая in vitro концентрация каждого препарата составляет 35 мкг/мл.When studying the inhibitory activity against NF-κB, 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate and mexidol (reference preparation) were studied, which were added to the freshly isolated by the standard method on a density gradient of ficoll (ρ = 1,077, "Paneko", Russia) MNCs of blood of the Wistar rats The in vitro concentration studied for each preparation is 35 μg / ml.

В каждой экспериментальной группе 6 крыс, 3 самца и 3 самки. Для исследования взяты крысы без внешних признаков заболевания, прошедшие карантинный режим, массой 225-275 г.In each experimental group, 6 rats, 3 males and 3 females. For the study, rats were taken without external signs of the disease, which passed the quarantine regime, weighing 225-275 g.

Исследование активности NF-κB проводили в 2 мл пробирках типа Eppendorf (Gen Follower, Китай), куда вносили 1 мл суспензии МНК крови крыс, 1×106 клеток в 1 мл среды RPMI-1640 («Панэко», Россия) с 5% сыворотки эмбрионов коров (HiClone, США), затем добавляли бактериальный липополисахарид («Пирогенал», ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, Россия) в концентрации 1 мкг/мл, затем добавляли исследуемый препарат, растворенный в фосфатно-солевом буфере, в соответствующей конечной концентрации. Клетки инкубировали в течение 30 мин при 37°С на шейкере, после чего центрифугировали 5 мин при 200g, надосадочную жидкость удаляли, осадок МНК исследовали на активность p65 субъединицы NF-κB в строгом соответствии с инструкцией к набору NFkB p65 TotalMultispecies InstantOne™ ELISA Kit (Invitrogen / Thermo Fisher Scientific, cat. 85-86081-11).The study of the activity of NF-κB was carried out in 2 ml Eppendorf tubes (Gen Follower, China), where 1 ml of a suspension of rat blood MNC, 1 × 106 cells in 1 ml of RPMI-1640 medium (Paneko, Russia) with 5% serum was added cow embryos (HiClone, USA), then added bacterial lipopolysaccharide (Pyrogenal, NII Gamalei State Research Institute of Nuclear Medicine, Russia) at a concentration of 1 μg / ml, then the test drug dissolved in phosphate-buffered saline was added in the appropriate final concentration. Cells were incubated for 30 min at 37 ° C on a shaker, then centrifuged for 5 min at 200 g, the supernatant was removed, the MNC sediment was examined for p65 subunit activity of NF-κB in strict accordance with the instructions for the NFkB p65 TotalMultispecies InstantOne ™ ELISA Kit ( Invitrogen / Thermo Fisher Scientific, cat. 85-86081-11).

МНК крови крыс в количестве 1×106 лизировали в 1 мл лизирующего буфера, входящего в состав набора, супернатант вносили в лунки 96-луночного планшета из указанного ИФА набора. После нескольких этапов продукты сэндвич-реакции определяли на микропланшетном ридере Multiskan FC (Thermo Fisher, Германия) при 450 нм. Rat blood MNCs in the amount of 1 × 106 were lysed in 1 ml of the lysis buffer included in the kit; the supernatant was added to the wells of a 96-well plate from the indicated ELISA kit. After several steps, the products of the sandwich reaction were determined on a Multiskan FC microplate reader (Thermo Fisher, Germany) at 450 nm.

Для упрощения расчетов относительного влияния исследуемых веществ были выбраны единицы оптической плотности, непосредственно получаемые с микропланшетного ридера, округленные до 2-го знака после запятой. Статистическую обработку результатов проводили в программе MS Excel 2013 с модулем Attestatv.13 с применением метода непараметрической статистики – критерия Крускала-Уоллиса, т.к. распределение активности p65 субъединицы NF-κB в клетках не являлось нормальным.To simplify the calculations of the relative influence of the studied substances, we selected units of optical density directly obtained from the microplate reader, rounded to the 2nd decimal place. Statistical processing of the results was carried out in MS Excel 2013 with the Attestatv.13 module using the nonparametric statistics method - the Kruskal-Wallis test, because the distribution of p65 activity of the NF-κB subunit in cells was not normal.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯEXAMPLE OF SPECIFIC PERFORMANCE

Результаты оценки ингибирующей NF-κB активности исследуемых препаратов представлены в табл. 1 (Медианы – Ме и 1, 3 квартили – Q1; Q3).The results of the evaluation of the inhibitory NF-κB activity of the studied drugs are presented in table. 1 (Medians - Me and 1, 3 quartiles - Q1; Q3).

Figure 00000002
Figure 00000002

Как видно из табл. 1, наибольшей ингибирующей способностью на ЛПС-индуцированную экспрессию p65 NF-κB в МНК крови крыс Wistar в исследуемых концентрациях обладает 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноат. Ингибирующая активность NF-κB 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноата выше на 34,6%, чем у препарата сравнения мексидола, в конечной концентрации 35 мкг/мл при индуцированной ЛПС активации NF-κВ.As can be seen from the table. 1, 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate possesses the highest inhibitory ability for LPS-induced expression of p65 NF-κB in the blood MNCs of Wistar rats. The inhibitory activity of NF-κB 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate is higher by 34.6% than that of the mexidol comparison drug at a final concentration of 35 μg / ml with LPS-induced NF-κB activation .

Claims (1)

Способ ингибирования нуклеарного фактора каппа В в культуре клеток, включающий добавление бактериального липополисахарида в концентрации 1 мкг/мл к свежевыделенным по стандартной методике на градиенте плотности фиколла мононуклеарным клеткам крови крыс Wistar, отличающийся тем, что к данной смеси затем добавляют 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-2,6-диаминогексаноат в конечной концентрации 35 мкг/мл. A method of inhibiting kappa B nuclear factor in a cell culture, comprising adding 1 μg / ml bacterial lipopolysaccharide to freshly isolated Wistar rat mononuclear blood cells of the rat ficoll according to the standard method, characterized in that 2-ethyl-6- is then added to this mixture methyl 3-hydroxypyridinium L-2,6-diaminohexanoate at a final concentration of 35 μg / ml.
RU2017139785A 2017-11-15 2017-11-15 Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells RU2669348C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017139785A RU2669348C1 (en) 2017-11-15 2017-11-15 Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017139785A RU2669348C1 (en) 2017-11-15 2017-11-15 Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2669348C1 true RU2669348C1 (en) 2018-10-10

Family

ID=63798247

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017139785A RU2669348C1 (en) 2017-11-15 2017-11-15 Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2669348C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002024679A1 (en) * 2000-09-22 2002-03-28 Bayer Aktiengesellschaft PYRIDINE DERIVATIVES WITH IKB-KINASE (IKK-β) INHIBITING ACTIVITY
EA020033B1 (en) * 2012-03-11 2014-08-29 Ооо "Эн.Си.Фарм" Solid dosage form having neuroprotective, antiamnesic, antioxidant, antihypoxic and anti-ischemic activity (variants)
CN106467546A (en) * 2015-08-22 2017-03-01 陕西合成药业股份有限公司 Clopidogrel derivant and its production and use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002024679A1 (en) * 2000-09-22 2002-03-28 Bayer Aktiengesellschaft PYRIDINE DERIVATIVES WITH IKB-KINASE (IKK-β) INHIBITING ACTIVITY
EA020033B1 (en) * 2012-03-11 2014-08-29 Ооо "Эн.Си.Фарм" Solid dosage form having neuroprotective, antiamnesic, antioxidant, antihypoxic and anti-ischemic activity (variants)
CN106467546A (en) * 2015-08-22 2017-03-01 陕西合成药业股份有限公司 Clopidogrel derivant and its production and use

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MENCK K. et al. Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated culture bags. Journal of visualized experiments. September 2014; 91; e51554 pp.1-5. *
SCACHILOVA SY. et al. Test system for the influence of the biological activity of substances on the signal system of NF-kB: focus on the derivatives of 3-hydroxypyridine. Research results: Pharmacology and Clinical Pharmacology. 2017, том 3, выпуск N2, c.50-56. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Olivera et al. Inhibition of the NF-κB signaling pathway by the curcumin analog, 3, 5-Bis (2-pyridinylmethylidene)-4-piperidone (EF31): Anti-inflammatory and anti-cancer properties
CA2996186A1 (en) Aldehyde conjugates and uses thereof
CA3054809A1 (en) Uses of pyrimidopyrimidinones as sik inhibitors
TW201033182A (en) Tetrahydrotriazine compounds for treating diseases associated with AMPK activity
AU2019204363A1 (en) Icariin derivatives
KR102054401B1 (en) 1,2-diacylglycerol compound, method for preparing the same and immunomodulating agent including the same as active ingredient
RU2669348C1 (en) Method for inhibiting nuclear kappa b factor with using 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxipiridinium l-2,6-diaminohexanoate in culture of cells
EP3785715B1 (en) Pharmaceutical composition comprising ibrutinib for use in the prevention or treatment of alzheimer's disease
CN110251518A (en) Application of 1,2,4-triazole heterocyclic compound in the preparation of drugs for the prevention or treatment of central system-related diseases
KR102206745B1 (en) Therapeutic agent for treating neurological disorders comprising anthocyanin and GABAB receptor agonist
KR101789446B1 (en) PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING ATOPIC DERMATITIS COMPRISING FRACTION OF Cyperus rotundus EXTRACT
SK50062012A3 (en) Quercetin derivatives, pharmaceutical compositions comprising them and their use
RU2674443C1 (en) Method for inhibiting nuclear factor kappa b with use of 5-hydroxynicotinate 3-(2,2,2-trimethylhydrazinium) potassium propionate in cell culture
KR102644045B1 (en) Novel small molecule compounds
EP3006030A1 (en) Composition comprising (s)-(-)-benproperine for preventing or treating cancer
KR20120047345A (en) A composition for preventing or treating diseases mediated by il-6 comprising a compound for inhibiting il-6 activity or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient
RU2675693C1 (en) Method of inhibiting kappa nuclear factor with the use of potassium 5-hydroxynicotinate in a cell culture
AU2019218153B2 (en) Therapeutic drug for neurodegenerative disease and application thereof
KR20120047513A (en) CALCONE DERIVATIVES HAVING INHIBITORY EFFECT ON NF-κB ACTIVATION
CN107473978B (en) A kind of curcumin derivative and its preparation method and application
RU2466136C1 (en) N-[3-oxo-lupano-28-yl]-piperidine - agent having anti-tumour, anti-metastatic, anti-inflammatory and cytoprotective activity
CN114478464B (en) Inflammatory corpuscle selective inhibitor and synthetic method and application thereof
KR101996390B1 (en) Composition for immunopotentiating containing aminoquinoline-based compound, composition for promoting development into regulatory T cell, and method using the same
RU2448115C1 (en) Hydrogenated betulonic acid and amides thereof as triterpene anti-tumour agents
CN104557496B (en) Single carbonyl complex, composition and the application in medicine is prepared

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190605

Effective date: 20190605

QB4A Licence on use of patent

Free format text: SUB-LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190619

Effective date: 20190619