RU2651776C2 - Биспецифические антитела против cd3*cd19 - Google Patents
Биспецифические антитела против cd3*cd19 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2651776C2 RU2651776C2 RU2015151459A RU2015151459A RU2651776C2 RU 2651776 C2 RU2651776 C2 RU 2651776C2 RU 2015151459 A RU2015151459 A RU 2015151459A RU 2015151459 A RU2015151459 A RU 2015151459A RU 2651776 C2 RU2651776 C2 RU 2651776C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- cell
- igg2
- antibodies
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 208000037914 B-cell disorder Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 abstract description 33
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 abstract description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 23
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 22
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 229960003008 blinatumomab Drugs 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 5
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 5
- 241000251737 Raja Species 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 5
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 5
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 3
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940101815 blincyto Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004736 B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032568 B-cell prolymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000023611 Burkitt leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000724252 Cucumber mosaic virus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000713275 Homo sapiens Solute carrier family 22 member 3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010052178 Lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000035416 Prolymphocytic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 101150058162 SGE1 gene Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 206010050283 Tumour ulceration Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000018805 childhood acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000011633 childhood acute lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000011649 lymphoblastic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N methyl cyclopropanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC1 PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 239000013631 noncovalent dimer Substances 0.000 description 1
- 210000000299 nuclear matrix Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к иммунологии, и может быть использована для получения рекомбинантного моноклонального биспецифического антитела против CD3*CD19. Рекомбинантное моноклональное биспецифическое антитело против CD3*CD19, включающее две соединенных дисульфидными связями цепи, каждая из которых состоит из следующих доменов: VL (CD3)-L1-VH(CD19)-L2-VL(CD19)-L3-VH(CD3)-H-CH2-CH3(IgG2), где VL (CD3) и VH(CD3) - вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD3, VL(CD19) и VH (CD 19) - вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD 19, СН2-СН3 (IgG2) - Fc последовательность IgG2, характеризующаяся последовательностью SEQ ID NO: 5, L1, L2, L3 - линкерные последовательности, состоящие из 5-15 аминокислот, Н - шарнирная область, характеризующаяся последовательностью SEQ ID NO: 9. Группа изобретений относится также к фармацевтической композиции, содержащей вышеуказанное антитело и фармацевтически приемлемые носители и/или разбавители, для лечения В-клеточных заболеваний или истощения В-клеток. Заявленная группа изобретений позволяет получить рекомбинантное моноклональное биспецифическое антитело против CD3*CD19 для лечения гематологических злокачественных заболеваний В-клеточной природы. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 табл., 7 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к биспецифическим антителам против CD3*CD19, обладающим увеличенным временем полужизни в организме.
Биспецифические антитела (БАТ) против CD3*CD19 в настоящее время разрабатываются преимущественно для лечения злокачественных заболеваний B-клеток или истощения В-клеток, в том числе: неходжкинской лимфомы (WO 2010037835, RU 2228202), B-клеточного лейкоза (RU 2008129080), детской острой лимфобластической лейкемии (WO 20100052013) и т.д.
Ряд завершенных и проводимых в настоящее время исследований (например, J Clin Oncol, 2011, 29: 2493-8; Cancer, 2010, 116: 5568-74; Science, 2008, 321: 974-7; BLINCYTO, AmGen Recearch GmbH (NCT00560794, NCT00274742, NCT01207388, NCT01209286, NCT01471782, NCT01466179, NCT01741792); AFM11, Affimed Therapeutics AG (NCT02106091)) дают все основания полагать, что лекарственные препараты на основе биспецифических антител против CD3*CD19 обещают стать более эффективными в лечении упомянутых выше заболеваний.
Повышенная эффективность объясняется тем, что БАТ выполняют функцию адаптеров, которые физически соединяют T-клетки с опухолевыми клетками и запускают мощный сигнальный каскад рецепторного комплекса T-клеток посредством связывания с инвариантным компонентом CD3 T-клеточного рецептора. При этом второй (целевой) антиген-специфичный фрагмент узнает CD19, т.е. БАТ может соединить T-клетку и раковую клетку за счет одновременного связывания с CD3 и антигеном-мишенью. В этом случае происходит активация и пролиферация T-клеток, образование цитолитического синапса с высвобождением цитотоксических гранул и секреция цитокинов. Направленный лизис раковых клеток включает в себя перфорацию мембраны клетки-мишени с участием перфорина и последующий апоптоз, индуцированный гранзимами. Следует отметить, что после связывания с T-клетками, БАТ распознают антигены на поверхности раковой клетки так же, как обычные моноспецифические антитела. Таким образом, удается перенаправить цитотоксическую функцию T-клеток против опухолевых клеток, причем активность БАТ наблюдается уже при относительно низких (пикомолярных) концентрациях. Связывание же БАТ только с T-клеткой в отсутствие клетки-мишени не вызывает T-клеточную активацию.
Примеры биспецифических антител, известных из уровня техники (Blood, (ASH Annual Meeting Abstracts), 2009, 114:840), свидетельствуют о том, что эффективная терапевтическая концентрация препаратов, полученных на основе использования мультивалентных антител, существенно ниже по сравнению с классическими антительными противораковыми препаратами. Это способствует хорошей переносимости, возможности осуществления длительных курсов лечения и уменьшению риска побочных эффектов. Кроме того, требуемый объем и стоимость производства биспецифических антител ниже. Поэтому создание таких антител позволит существенно сократить масштабы и расходы на производство препаратов на их основе и, что самое главное, сделать эти лекарства доступными для всех пациентов, нуждающихся в подобной терапии.
В настоящее время было разработано и получено довольно много биспецифических антител против CD3*CD19. Однако наиболее перспективные из них представляют собой одноцепочечные молекулы как таковые, или нековалентные димеры, состоящие из одноцепочечных молекул. Например, блинатомумаб (антитело формата BiTE).
Однако при производстве одноцепочечных антител могут образовываться гомо- и гетеродимеры, что приводит к усложнению процесса выделения и очистки таких антител. С другой стороны, возможен обратный процесс - нежелательная диссоциация димеров, как это было показано, например, в статье Glockshuber et al., Biochemistry, 1990, vol. 29:1362-1367. Чтобы избежать этого, были предложены антитела, стабилизированные дисульфидными связями (Cell Oncol. (2012), 35:423-434), что позволило повысить как стабильность антитела в растворе, так и терапевтическую эффективность в сравнении с одноцепочечным антителом.
Наиболее близкими по формату, предложенному в настоящем изобретении, являются одноцепочечные антитела, раскрытые в патенте US 6759518. Указанные антитела состоят из двух пар вариабельных доменов различных специфичностей (A и B), разделенных пептидом из 12-40 аминокислот и, необязательно, содержат дополнительный эффекторный домен, представляющий собой пролекарство, активирующее фермент.
Однако такие антитела сохраняют указанные выше недостатки одноцепочечных антител, а наличие достаточно длинного пептида создает дополнительные степени свободы для вариабельных доменов, и, тем самым, может приводить к образованию мультимеров, что нежелательно. Кроме того, патент не содержит никакой информации о возможности получения антител против CD3*CD19 указанного типа.
В настоящее время наиболее успешным антителом против CD3*CD19 является препарат блинатумомаб (Blincyto, MT103), поэтому именно это антитело было выбрано в качестве препарата сравнения. Блинатумомаб состоит из двух доменов: домена анти-CD19 scFv из гибридомы HD37 и домена анти-CD3 scFv из гибридомы OKT3. Для получения антитела фрагмент ДНК VLCD19-VHCD19-VHCD3-VLCD3 экспрессируют в DHFR-отрицательных СНО клетках (патент RU 2228202). Блинатумомаб, в сравнении с полноразмерными антителами, имеет относительно небольшую молекулярную массу (55 кДа против 155 кДа), из-за чего быстро элиминируется из кровотока. Поэтому для достижения стабильных концентраций препарата в крови используется непрерывное внутривенное введение препарата в течение 2-4 недель за один цикл (в режиме две недели - капельница, две недели - перерыв), что достаточно трудно переносимо для пациента.
Задачей настоящего изобретения было получение антител против CD3*CD19 с увеличенным временем полужизни в организме человека, повышенной биодоступностью при подкожном введении, обладающих при этом достаточной эффективностью для применения в качестве лекарственных средств.
Таким образом, техническим результатом настоящего изобретения является расширение арсенала биспецифических антител против CD3*CD19 за счет создания антител, обладающих одной или несколькими из указанных выше характеристик.
Работа коллектива авторов настоящего изобретения над улучшением фармакокинетических характеристик антител против CD3*CD19 привела к созданию новой конструкции антитела, представляющей собой биспецифическую двуцепочечную молекулу, каждая цепь которой содержит Fc-часть обычного IgG и четыре связывающих домена, соединенных линкерами и расположенных в следующем порядке от N-конца к C-концу (см. Фиг. 1): VL(CD3)-L1-VH(CD19)-L2-VL(CD19)-L3-VH(CD3)-H-CH2-CH3(IgG2), где
VL(CD3), VL(CD19), VH(CD3) и VH(CD19) представляют собой вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антител против CD3 и CD19 соответственно,
L1, L2, L3 - линкерные последовательности,
H - шарнирная область иммуноглобулина IgG2 и
CH2-CH3 (IgG2) - константная область Fc-домена иммуноглобулина IgG2. Две цепи соединены дисульфидными связями.
Обнаружилось, что такие биспецифические молекулы не только характеризуются увеличенным временем полужизни в организме в сравнении с антителом блинатомумаб (MT-103) за счет увеличенного размера самой молекулы, но также обладают усиленным цитотоксическим эффектом и неожиданно высокой биодоступностью при подкожном введении на уровне 60%. Последняя характеристика особенно важна, поскольку до настоящего времени, из-за малой биодоступности, препараты антител вводились преимущественно внутривенным путем, который более сложен и менее комфортен для пациента. Увеличенное время полувыведения, высокие эффективность и биодоступность при подкожном введении позволят уменьшить частоту введения препарата и увеличить удобство его применения.
В качестве линкеров могут быть использованы последовательности, состоящие из 5-15 аминокислот. Такая длина линкера, как подтвердили наши исследования, является наиболее оптимальной, так как позволяет вариабельным доменам антитела сохранять стабильную структуру и при этом достаточную подвижность. Полученные данные согласуются с результатами, представленными, например, в патентах RU 2228202 и US 6759518 для биспецифических одноцепочечных антител, где упоминается о длинах линкеров в 1-15 и 1-20 аминокислот, соответственно, при этом оптимальными считаются линкеры в 1-5 аминокислот.
Предпочтительно, чтобы аминокислоты, входящие в состав линкерной последовательности предложенных антител, выбирались из глицина, серина или аланина, или включали триплеты, составленные из указанных аминокислот. Предпочтительно, чтобы линкеры имели следующую структуру:
L1: (XXS)k, где k=2-3,
L2: (XXS)n, где n=4-5,
L3: (XXS)m, где m=2-3,
X=G, А.
Наиболее предпочтительно:
L1: GGSGGS,
L2: GGSGGSGGSGGSGGS,
L3: GGSGGS.
Настоящее изобретение также решает задачу конструирования плазмидной ДНК, содержащей последовательность биспецифического антитела предложенного формата, например, антитела GNR-047 против CD3*CD19, подходящей для экспрессии в клетках млекопитающих.
Поставленная задача решается за счет конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pRA1451 размером 11308 п.о., кодирующей антитело GNR-047, а также подбора оптимальных условий производственного процесса, позволяющих получать антитела в клетках млекопитающих со стабильно высоким выходом, достаточным для промышленного производства.
Еще одним объектом изобретения является фармацевтическая композиция, в качестве активного компонента содержащая эффективное количество антитела против CD3*CD19, предложенного формата, предпочтительно, антитела GNR-047, а также применение такого антитела или фармацевтической композиции для лечения B-клеточных заболеваний, истощения В-клеток или замедления развития патологических состояний, ассоциированных с B-клеточными нарушениями. Предпочтительно, композиция содержит 10-100 мкг антитела.
Фармацевтические композиции по изобретению могут также включать необходимые компоненты, обычно используемые в фармацевтической химии, такие как буфер, поверхностно-активное вещество, стабилизатор и другие фармацевтически приемлемые добавки, растворители и наполнители.
Наиболее предпочтительным является использование следующих компонентов: натрий-фосфатный буфер, полисорбат 80 в качестве поверхностно-активного вещества, маннит - в качестве изотонического агента и гистидин - в качестве стабилизатора.
Фармацевтические композиции по изобретению, предназначенные для парентерального введения, дополнительно могут включать изотонические агенты, например, различные сахара, а также дополнительные стабилизаторы, например, аминокислоты, такие как аргинин, глицин, метионин, а также фармакологически совместимые консерванты и прочие целевые добавки, как это показано, например, в «Handbook of Pharmaceutical Excipients» (2ʺd ed. London: The Pharmaceutical Press; 1994).
Фармацевтические композиции по изобретению также могут быть получены в лиофилизированной форме, и в этом случае дополнительно включать фармацевтически приемлемые растворители и разбавители, например воду, физиологический раствор и другие обычно применяемые растворители.
Указанные эксципиенты могут использоваться в комбинации с другими активными ингредиентами (например, противораковыми или противовоспалительными средствами) при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов.
Дозировка фармацевтических композиций по изобретению у пациентов может корректироваться в зависимости от веса, возраста, пола больного и наличия сопутствующих заболеваний.
Механизм действия предложенного антитела против CD3*CD19 аналогичен таковому, описанному для анти-CD3/анти-CD19 антитела - препарата блинатумомаб (MT103); и заключается в активации мультиспецифичного T-клеточного цитологического ответа против CD19+ клеток лимфомы. Поэтому фармацевтические композиции на основе антител предложенного формата против CD3*CD19, например на основе антитела GNR-047, согласно настоящему изобретению могут применяться для лечения всех гематологических раковых заболеваний (лимфом и лейкозов) B-клеточной природы, например, таких как B-клеточные опухоли из предшественников В-лимфоцитов, в том числе: B-лимфобластная лимфома/B-клеточный острый лимфобластный лейкоз из клеток-предшественников; B-клеточные опухоли из периферических (зрелых) B-лимфоцитов, в том числе: B-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз/лимфома из малых лимфоцитов (лимфоцитарная лимфома); B-клеточный пролимфоцитарный лейкоз; лимфоплазмоцитарная лимфома; селезеночная лимфома маргинальной зоны; волосатоклеточный лейкоз; плазмоклеточная миелома/плазмоцитома; экстранодальная B-клеточная лимфома маргинальной зоны MALT-типа; нодальная B-клеточная лимфома маргинальной зоны; фолликулярная лимфома; лимфома из клеток мантийной зоны; диффузная B-крупноклеточная лимфома; медиастинальная диффузная B-крупноклеточная лимфома; первичная экссудативная лимфома; лимфома/лейкоз Беркитта, а также для лечения аутоиммунных заболеваний, вызванных патологической регуляцией B-клеток, таких как ревматоидный артрит, системная красная волчанка, гломерулонефрит, рассеянный склероз и миастения гравис.
Описание фигур
Фиг. 1. Схематическое представление конструкции антитела GNR-047.
Фиг. 2. Схема конструирования экспрессионного вектора.
Фиг. 3. Карта экспрессионного вектора pRA1451.
Фиг. 4. Анализ способности препарата GNR-047 и MT-103 связывать нативный рецептор CD3 на клеточной линии Jurkat и рецептор CD19 на клеточной линии Raji.
Фиг. 5а. Исследование фармакокинетических характеристик GNR-047 при внутривенном введении в дозировке 0,5 мг/кг.
Фиг. 5б. Исследование фармакокинетических характеристик MT-103 при внутривенном введении в дозировке 0,5 мг/кг.
Фиг. 6а. Исследование фармакокинетических характеристик GNR-047 при подкожном введении в дозировке 2,0 мг/кг.
Фиг. 6б. Исследование фармакокинетических характеристик MT-103 при подкожном введении в дозировке 2,0 мг/кг.
Фиг. 7. Изменение среднего объема опухоли в процессе исследования
Описание последовательностей
SEQ ID №1 - аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи анти-CD3 антитела,
SEQ ID №2 - аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи анти-CD3 антитела,
SEQ ID №3 - аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи анти-CD19 антитела,
SEQ ID №4 - аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи анти-CD19 антитела,
SEQ ID №5 - аминокислотная последовательность константного домена CH2 CH3 IgG2,
SEQ ID №6 - предпочтительная аминокислотная последовательность линкера L1,
SEQ ID №7 - предпочтительная аминокислотная последовательность линкера L2,
SEQ ID №8 - предпочтительная аминокислотная последовательность линкера L3,
SEQ ID №9 - аминокислотная последовательность шарнирной области H,
SEQ ID №10 - аминокислотная последовательность антитела GNR-047.
Изобретение иллюстрируется приведенными ниже примерами.
Пример 1. Получение антитела против CD3*CD19
Конструирование рекомбинантных плазмидных ДНК
Для клонирования были выбраны коммерчески доступный вектор фирмы Selexis, содержащий генетический элемент SGE1, способствующий усилению экспрессии в результате непосредственной близости целевого трансгена с высокоактивным ядерным транскрипционным комплексом.
Ген GNR-047 был сконструирован в результате отжига перекрывающихся химически синтезированных олигонуклеотидов. Последовательность целевого гена GNR-047 была клонирована в коммерчески доступный вектор pUC19, в результате чего был получен вектор pAPG_GNR047, который использовали для дальнейшей работы. После обработки вектора pAPG_GNR047 эндодезоксирибонуклеазами рестрикции HindIII, XbaI (New Ingland Biolabs), образующими липкие концы, выделяли фрагмент размером 2235 п.о., который затем лигировали с линеаризованным по сайтам HindIII и XbaI экспрессионным вектором pST101. Полученная плазмида pRA1451 была верифицирована рестрикционным картированием. Схема конструирования экспрессионного вектора pRA1451 приведена на Фиг. 2.
После этого проводили последовательную двойную трансфекцию с последующей селекцией по резистентности к пуромицину с использованием стандартных методов.
Полученная плазмида pRA1451, кодирующая полипептид GNR-047, характеризуется следующими признаками:
- состоит из 11308 и.о.,
- имеет молекулярную массу 6.99 МДа,
- кодирует полипептид биспецифического антитела против CD3*CD19, GNR-047,
- обеспечивает устойчивость клеток млекопитающих, трансфицированных указанной плазмидой, к пуромицину;
- содержит следующие элементы:
- CMVe/EF1a pro - энхансер вируса CMV и промотор транскрипции гена фактора элонгации альфа,
- BGH pA - сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста,
- sv40 enh - энхансер вируса SV40,
- SGE 1 - элемент прикрепления к ядерному матриксу,
- Amp - ген β-лактамазы,
- sv40 pro - промотор вируса SV40,
- puro - ген устойчивости к пуромицину,
- pA - синтетический сигнал полиаденилирования.
- содержит уникальные участки узнавания следующих эндонуклеаз рестрикции: AccI (6490 п.о.), AgeI (460 п.о.), ApaI (995 п.о.), BmgBI (3270 п.о.), BsmI (7269 п.о.), EcoRV (6457 п.о.), HindIII (1590 п.о.), NotI (11146 п.о.), PfoI (11021 п.о.), Pm1I (5699 п.о.), SpeI (4622 п.о.), SwaI (6466 п.о.), Tth111I (10585 п.о.).
Генетическая конструкция экспрессионного вектора приведена на фиг. 3.
Трансфекцию проводили с использованием коммерчески доступного штамма CHO-M (Selexis). Выбор линии клеток-продуцентов обусловлен необходимостью формирования оптимального профиля гликозилирования при синтезе человеческих белков, а также их стабильностью, безопасностью и возможностью применения суспензионных условий культивирования данной линии клеток, что является важнейшими параметрами для производства терапевтических антител.
Культивирование проводилось в режиме fed-batch с использованием питательной среды BalanCD CHO Growth A (Irvine Scientific) и нутриентной добавки CellBoost 3 (HyClone) в течение 10 суток при температуре 37°C, 5% CO2 в газовой фазе инкубатора. После культивирования культуральная жидкость осветлялась центрифугированием и передавалась на выделение.
Для выделения и очистки целевого продукта была разработана схема, включающая аффинную стадию с использованием сорбента на основе протеина A (с выходом продукта свыше 90%) и катионообменную хроматографию на сорбенте высокого разрешения, обеспечивающую эффективное разделение целевой формы белка и его олигомерных форм (выход целевой фракции более 80%). В результате были получены биспецифические антитела в количествах, достаточных для исследования их фармакокинетических и фармакодинамических свойств.
Пример 2. Фармацевтическая композиция на основе антитела против CD3*CD19.
Для проведения экспериментов на животных использовали фармацевтическую композицию следующего состава: 0,7 мг/мл антитела GNR-047, 150 мМ хлорид натрия, 1,8% маннитол, 20 мМ фосфат натрия, 0,01% полисорбат 80.
Условия очистки GNR-047 на последней хроматографической стадии процесса подобраны таким образом, что целевой белок элюируется с сорбента в виде концентрированной субстанции, содержащей все требуемые компоненты финальной формуляции. Таким образом, для приготовления готовой лекарственной формы раствор антитела с концентрацией около 5 мг/мл (концентрированный раствор, полученный в Примере 1 после хроматографической очистки) разбавляли до требуемой концентрации 0,7 мг/мл с использованием буфера готовой лекарственной формы при перемешивании. Полученный раствор подвергали стерилизующей фильтрации с использованием фильтра с диаметром пор 0,22 мкм и разливали в стерильные флаконы для хранения композиции и последующих экспериментов.
Для получения лиофилизированной композиции, раствор, содержащий антитело GNR-047 в буфере готовой формы (150 мМ хлорид натрия, 1,8% маннитол, 20 мМ фосфат натрия, 0,01% полисорбат 80), подвергали лиофилизации при стандартных условиях, включающих стадию замораживания и вакуумного обезвоживания. При этом хлорид натрия и маннит, использовали в качестве кристаллизующихся компонентов, наличие которых позволяет сформировать таблетку, а маннит также играл роль стабилизатора при лиофилизации. Полученный лиофильный препарат хранили при 4С в герметичных флаконах.
В качестве растворителя для восстановления лиофилизированной композиции использовали воду для инъекций. Для восстановления препарата к флакону, содержащему 17 мг лиофилизированной композиции антитела, при комнатной температуре добавляли 0,5 мл растворителя и осторожно перемешивали покачиванием до полного растворения. В качестве растворителя также может выступать бактериостатическая вода для инъекций, растворение в которой позволяет многократно использовать препарат в течение 7 дней.
Пример 3. Изучение биологической активности
Биологическую активность полученного антитела оценивали путем определения констант связывания в конкурентном анализе на клетках линии Раджи CD3-/CD19+ (Raji, ATCC® CCL-86) и Джуркат CD3+/CD19- (Jurkat, ATCC® TIB-152) из коллекции ATCC.
В качестве препарата сравнения использовали антитело MT-103 (блинатомумаб). После инкубации с целевыми молекулами в последовательных 10-кратных разведениях от 100 нМ до 0,1 нМ, к клеткам добавляли конкурирующее антитело (HD37 или ОКТ3) в концентрации 6 нМ. Клетки промывали натрий-фосфатным буферным раствором с pH 7,0 и прокрашивали anti-Human-FITS антителами. Прокрашенные клетки анализировали на FACS Calibur.
Результаты связывания приведены в Таблице 1 и на Фиг. 4.
Из таблицы видно, что антитело GNR-047 связывается, как с CD3, так и с CD19, причем в обоих случаях более эффективно, чем препарат сравнения MT103. Такие низкие, в сравнении с препаратом сравнения, значения IC50 могут объясняться наличием 2x валентностей для каждой специфичности (CD3 и CD19).
Пример 4. Сравнение фармакокинетических характеристик при внутривенном и подкожном введении
В виду того, что препарат GNR-047 показал улучшенные фармакокинетические характеристики при внутривенном введении по сравнению с MT103, целесообразным являлось определение фармакокинетических параметров при более удобном подкожном введении, при котором GNR-047 будет пролонгировано высвобождаться из депо в кровоток.
Для проведения эксперимента использовались крысы линии Sprague Dawley (Питомник лабораторных животных «Пущино» филиала Института биорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук) массой около 400 г, 3 крысы на группу.
Каждой крысе вводили исследуемое антитело GNR-047 или MT-103 внутривенно в дозировке 0,5 мг/кг или подкожно в дозировке 2,0 мг/кг. Образцы крови отбирали через определенные промежутки времени после инъекции, начиная с 5 мин, и определяли концентрации препаратов в плазме крови при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).
Полученные результаты представлены в таблице 2 и на Фиг. 5 и 6.
Где,
T1/2 - необходимое для снижения концентрации лекарственного препарата в плазме крови на 50% в результате элиминации; Cmax - наивысшее значение концентрации лекарственного препарата в плазме крови; AUC(0-t) - площадь, ограниченная фармакокинетической кривой и осью абсцисс во временном интервале с момента введения лекарственного препарата до момента отбора последней пробы крови; AUC(0-inf) - площадь, ограниченная фармакокинетической кривой и осью абсцисс, экстраполированная во времени с момента введения лекарственного препарата до бесконечности; 
- часть дозы лекарственного препарата (в %), достигшая системного кровотока после внесосудистого введения.
В результате было показано значительное увеличение времени полувыведения (T1/2) и экспозиция (AUC(0-inf) - площадь под фармакокинетической кривой) препарата GNR-047 в сравнении с препаратом MT103, при сохранении максимальной пиковой концентрации (Cmax) при внутривенном введении.
При подкожном введении крысам абсолютная биодоступность препарата GNR-047 составила порядка 60%, в то время как MT-103 показал очень низкую биодоступность - 6% (см. Фиг. 6б).
Пример 5. Сравнение противоопухолевой активности GNR-047 и MT 103 на модели опухолевого ксенотрансплантата клеток линии Raji (Раджи) у мышей NOD/SCID при реконституции МКПК человека.
Цель исследования заключалась в сравнении эффективности препаратов GNR-047 и MT103 у мышей NOD/SCID (Taconic, Дания) при нескольких уровнях дозы, на модели ксенотрансплантата опухолевых клеток линии Раджи с одновременной инъекций мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) человека иммунодефицитным мышам NOD/SCID.
Клетки линии Раджи (лимфома Беркитта человека) предварительно смешивали с МКПК человека и инокулировали подкожно с последующим внутривенным или подкожным введением исследуемых препаратов. Для этого девяти экспериментальным группам иммунодефицитных мышей NOD/SCID (9 животных на группу) подкожно вводили или клетки линии Раджи лимфомы Буркитта человека, или суспензию предварительно смешанных клеток линии Раджи и МКПК человека. По три животных из каждой группы получали МКПК человека от одного из трех отдельных здоровых доноров (когорты 1,2 и 3). Через 2 часа после инокуляции клеток животным внутривенно или подкожно вводили, или НФБ (натрий-фосфатный буферный раствор), или исследуемые препараты GNR-047 или MT 103 в различных дозах. Вводимый объем составлял 200 мкл. Во всех группах в течение 45 дней (дни с 3 по 48) оценивали объем опухоли.
Вводимые растворы готовили путем разведения раствора (композиции) GNR-047, полученного в Примере 2 (0,7 мг/мл), или MT103 (0,52 мкг/мл) в 0,9% физиологическом растворе до получения концентрации 5 мкг/мл (доза 1 мкг) или 0,5 мкг/мл (доза 0,1 мкг). Экспериментальные группы описаны в таблице 3.
У экспериментальных животных определяли следующие показатели: выживаемость, масса тела, объем опухоли, масса опухоли.
Массу тела определяли в день 0 и в последующем регистрировали три раза в неделю до дня 48. Объем опухоли контролировали 3 раза в неделю со дня 3 до окончания исследования путем измерения большого и малого диаметра опухоли штанген-циркулем. На основании диаметров вычисляли объем опухоли, используя следующую формулу:
Объем = (малый диаметр)2 × большой диаметр × 0,5
В контрольной группе 1, получавшей НФБ (только клетки линии Раджи), до завершения исследования выжили 11% животных. Выживаемость у животных группы 2, получавших клетки линии Раджи и МКПК человека, не изменилась. В обеих группах смертность была обусловлена исключительно эвтаназией по этическим соображениям (вследствие большого объема опухоли).
Введение GNR-047 и MT 103 повысило выживаемость в группах 3-9, что отражено в таблице 4, причем при большей дозе исследуемый препарат оказался более эффективным, чем препарат сравнения:
Критерии выведения экспериментальных животных из исследования: объем опухоли >10% массы тела; изъязвление опухоли; снижение массы тела >20%.
Рост опухоли значительно ингибировался или подавлялся во всех исследуемых группах, получавших GNR-047 или MT 103 (группы 3-9) по сравнению с контрольной группой 2, получавшей НФБ. При этом во всех исследуемых группах, получавших GNR-047 или MT 103, ингибирование роста опухоли оказалось статистически значимым (p≤0,05).
В таблице 5 приведены размеры опухоли для групп 1, 2, 4, 8 и 9, а соответствующие сравнительные графики, позволяющие оценить размер опухоли при внутривенном и подкожном введении (для групп 4, 8 и 9), приведены на Фиг. 7.
Claims (17)
1. Рекомбинантное моноклональное биспецифическое антитело против CD3*CD19, включающее две соединенных дисульфидными связями цепи, каждая из которых состоит из следующих доменов: VL (CD3)-L1-VH(CD19)-L2-VL(CD19)-L3-VH(CD3)-H-CH2-CH3(IgG2), где
VL (CD3) и VH(CD3) - вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD3,
VL(CD19) и VH (CD 19) - вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD 19,
СН2-СН3 (IgG2) - Fc последовательность IgG2, характеризующаяся последовательностью SEQ ID NO: 5,
L1, L2, L3 - линкерные последовательности, состоящие из 5-15 аминокислот, Н - шарнирная область, характеризующаяся последовательностью SEQ ID NO: 9.
2. Антитело по п. 1, где линкеры выбраны из следующих последовательностей: L1:(XXS)k, где k=2-3, L2:(XXS)n, где n=4-5, L3:(XXS)m, где m=2-3, X=G, а Н:ERKCCVECPPCP.
3. Антитело по п. 2, где L1, L2, L3 характеризуются соответственно последовательностями SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8.
4. Антитело по п. 1, где вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD3, VL(CD3) и VH(CD3), характеризуются последовательностями SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, и вариабельные домены легкой и тяжелой цепей антитела против CD19, VL(CD19) и VH(CD19), характеризуются последовательностями SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4.
5. Антитело по п. 1, представляющее собой антитело, характеризующееся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 10.
6. Антитело по п. 5, где время полужизни составляет около 40-65 ч.
7. Применение антитела по любому из пп. 1-6 для лечения В-клеточных заболеваний или истощения В-клеток.
8. Фармацевтическая композиция для лечения В-клеточных заболеваний или истощения В-клеток, содержащая антитело по любому из пп. 1-6 в эффективном количестве.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, содержащая 10-100 мкг антитела против CD3*CD19 и фармацевтически приемлемые носители и/или разбавители.
10. Применение фармацевтической композиции по пп. 8 и 9 для лечения В-клеточных заболеваний или истощения В-клеток.
11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что антитело по пп. 1-6 или фармацевтическая композиция по пп. 8 и 9 предназначены для подкожного введения.
12. Способ лечения В-клеточных заболеваний или истощения В-клеток, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективной дозы антитела по любому из пп. 1-6 или фармацевтической композиции по пп. 8 и 9.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что антитело вводят подкожно.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015151459A RU2651776C2 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
| EA201890805A EA036905B1 (ru) | 2015-12-01 | 2016-11-29 | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
| PCT/RU2016/000827 WO2017095267A1 (ru) | 2015-12-01 | 2016-11-29 | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015151459A RU2651776C2 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015151459A RU2015151459A (ru) | 2017-06-06 |
| RU2651776C2 true RU2651776C2 (ru) | 2018-04-23 |
Family
ID=58797475
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015151459A RU2651776C2 (ru) | 2015-12-01 | 2015-12-01 | Биспецифические антитела против cd3*cd19 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA036905B1 (ru) |
| RU (1) | RU2651776C2 (ru) |
| WO (1) | WO2017095267A1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021034227A1 (ru) | 2019-08-21 | 2021-02-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный Биотехнологический Центр "Генериум" | Определяющие комплементарность участки для связывания cd3 и содержащая их биспецифическая антигенсвязывающая молекула |
| US11707533B2 (en) | 2019-09-04 | 2023-07-25 | Legochem Biosciences, Inc. | Antibody-drug conjugate comprising antibody against human ROR1 and use for the same |
| RU2806333C2 (ru) * | 2018-05-09 | 2023-10-31 | Легокем Байосайенсиз, Инк. | Композиции и способы, относящиеся к конъюгатам лекарственных средств с антителами против cd19 |
| US11827703B2 (en) | 2018-05-09 | 2023-11-28 | Legochem Biosciences, Inc. | Compositions and methods related to anti-CD19 antibody drug conjugates |
| US11975076B2 (en) | 2015-11-25 | 2024-05-07 | Legochem Biosciences, Inc. | Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto |
| US12215155B2 (en) | 2020-06-19 | 2025-02-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibodies binding to CD3 and CD19 |
| US12398124B2 (en) | 2017-03-29 | 2025-08-26 | Ligachem Biosciences Inc. | Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7489407B2 (ja) | 2019-05-21 | 2024-05-23 | ノバルティス アーゲー | Ｃｄ１９結合分子及びその使用 |
| CN112010982B (zh) * | 2020-08-31 | 2023-06-27 | 重庆金迈博生物科技有限公司 | 一种抗gpc3/cd3双特异性抗体及其应用 |
| SI4284512T1 (sl) | 2021-01-28 | 2025-06-30 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Sestavki in postopki za zdravljenje sindroma sproščanja citokinov |
| JP2024537288A (ja) * | 2021-10-15 | 2024-10-10 | アムジェン リサーチ （ミュニック） ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | Ｃｄ１９結合ｔ細胞誘引抗体の皮下投与 |
| EP4507790A1 (en) | 2022-04-11 | 2025-02-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for universal tumor cell killing |
| CN120857940A (zh) | 2023-02-17 | 2025-10-28 | 瑞泽恩制药公司 | 对cd3/taa双特异性抗体有反应的诱导型nk细胞 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1293514A1 (en) * | 2001-09-14 | 2003-03-19 | Affimed Therapeutics AG | Multimeric single chain tandem Fv-antibodies |
| RU2228202C2 (ru) * | 1998-04-21 | 2004-05-10 | Микромет Аг | Cd19xcd3-специфические полипептиды и их применение |
| WO2010052014A1 (en) * | 2008-11-07 | 2010-05-14 | Micromet Ag | Treatment of acute lymphoblastic leukemia |
| RU2548746C2 (ru) * | 2009-10-27 | 2015-04-20 | Эмджен Рисерч (Мьюник), ГмбХ | Режим дозирования для введения биспецифичного антитела cd19×cd3 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI573802B (zh) * | 2007-03-06 | 2017-03-11 | 安美基公司 | 變異之活動素受體多肽及其用途 |
| CA2831572C (en) * | 2011-05-02 | 2019-11-26 | Immunomedics, Inc. | Ultrafiltration concentration of allotype selected antibodies for small-volume administration |
-
2015
- 2015-12-01 RU RU2015151459A patent/RU2651776C2/ru active
-
2016
- 2016-11-29 WO PCT/RU2016/000827 patent/WO2017095267A1/ru not_active Ceased
- 2016-11-29 EA EA201890805A patent/EA036905B1/ru unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2228202C2 (ru) * | 1998-04-21 | 2004-05-10 | Микромет Аг | Cd19xcd3-специфические полипептиды и их применение |
| EP1293514A1 (en) * | 2001-09-14 | 2003-03-19 | Affimed Therapeutics AG | Multimeric single chain tandem Fv-antibodies |
| WO2010052014A1 (en) * | 2008-11-07 | 2010-05-14 | Micromet Ag | Treatment of acute lymphoblastic leukemia |
| RU2548746C2 (ru) * | 2009-10-27 | 2015-04-20 | Эмджен Рисерч (Мьюник), ГмбХ | Режим дозирования для введения биспецифичного антитела cd19×cd3 |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11975076B2 (en) | 2015-11-25 | 2024-05-07 | Legochem Biosciences, Inc. | Antibody-drug conjugates comprising branched linkers and methods related thereto |
| US12398124B2 (en) | 2017-03-29 | 2025-08-26 | Ligachem Biosciences Inc. | Pyrrolobenzodiazepine dimer prodrug and ligand-linker conjugate compound of the same |
| RU2806333C2 (ru) * | 2018-05-09 | 2023-10-31 | Легокем Байосайенсиз, Инк. | Композиции и способы, относящиеся к конъюгатам лекарственных средств с антителами против cd19 |
| US11827703B2 (en) | 2018-05-09 | 2023-11-28 | Legochem Biosciences, Inc. | Compositions and methods related to anti-CD19 antibody drug conjugates |
| RU2832669C2 (ru) * | 2018-12-21 | 2024-12-27 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела, связывающиеся с cd3 |
| RU2852152C1 (ru) * | 2018-12-21 | 2025-12-04 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела, связывающиеся с cd3 |
| RU2810924C2 (ru) * | 2018-12-21 | 2024-01-09 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела, связывающиеся с cd3 |
| EP4036115A4 (en) * | 2019-08-21 | 2023-11-08 | Joint-Stock Company "Generium" | COMPLEMENTARITY-DETERMINING REGIONS FOR BINDING CD3 AND BISPECIFIC ANTIGEN-BINDING MOLECULE CONTAINING SAID CDR |
| WO2021034227A1 (ru) | 2019-08-21 | 2021-02-25 | Общество с ограниченной ответственностью "Международный Биотехнологический Центр "Генериум" | Определяющие комплементарность участки для связывания cd3 и содержащая их биспецифическая антигенсвязывающая молекула |
| US11707533B2 (en) | 2019-09-04 | 2023-07-25 | Legochem Biosciences, Inc. | Antibody-drug conjugate comprising antibody against human ROR1 and use for the same |
| US12215155B2 (en) | 2020-06-19 | 2025-02-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibodies binding to CD3 and CD19 |
| RU2844750C1 (ru) * | 2020-06-19 | 2025-08-05 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Антитела, связывающиеся с cd3 и cd19 |
| RU2839153C2 (ru) * | 2021-11-19 | 2025-04-28 | УХАНЬ АйЗиАй БАЙОФАРМА КО., ЛТД. | Биспецифическое антитело и его применение |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA036905B1 (ru) | 2021-01-13 |
| EA201890805A1 (ru) | 2018-08-31 |
| RU2015151459A (ru) | 2017-06-06 |
| WO2017095267A1 (ru) | 2017-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2651776C2 (ru) | Биспецифические антитела против cd3*cd19 | |
| JP7014843B2 (ja) | キメラ抗原受容体及びその使用方法 | |
| KR102787591B1 (ko) | Nkg2d 수용체를 표적화하는 항체 가변 도메인 | |
| JP7111855B2 (ja) | ヘテロダイマーＦｃ融合サイトカインおよびそれを含む医薬組成物 | |
| KR102609197B1 (ko) | 인터류킨 15 단백질 복합체 및 그의 용도 | |
| JP6794348B2 (ja) | ヒト化抗ｏｘ４０抗体及びその使用 | |
| JP7231553B2 (ja) | Ｔｇｆ－ｂ－受容体外部ドメイン融合分子及びその使用 | |
| JP6484634B2 (ja) | Ｉｌ−１５ヘテロ二量体タンパク質及びその用途 | |
| JP2023166409A (ja) | Ｎｋｇ２ｄ、ｃｄ１６および腫瘍関連抗原に結合するタンパク質 | |
| CN113166220A (zh) | 创新细胞因子前药 | |
| UA129980C2 (uk) | Конструкція на основі антитіл для зв'язування cldn18.2 і cd3 | |
| JP2022544771A (ja) | 優先的にｉｌ－２ｒアルファに結合するｉｌ－２融合タンパク質 | |
| WO2018233574A1 (zh) | 一种抗pd-l1人源化纳米抗体及其应用 | |
| KR20200051789A (ko) | Nkg2d, cd16, 및 c-유형 렉틴-유사 분자-1 (cll-1)에 결합하는 단백질 | |
| JP2020529832A (ja) | ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαおよび抗原結合ドメインを含む標的化ヘテロダイマーＦｃ融合タンパク質 | |
| JP2019533449A (ja) | 多量体ｉｌ−１５に基づく分子 | |
| KR20190115469A (ko) | Bcma, nkg2d 및 cd16에 결합하는 단백질 | |
| KR20200010428A (ko) | Nkg2d, cd16, 및 ror1 또는 ror2에 결합하는 단백질 | |
| KR20200010430A (ko) | Nkg2d, cd16 및 종양-연관 항원에 결합하는 단백질 | |
| TW201326214A (zh) | Ｂｃｍａ及ｃｄ３結合分子 | |
| KR20200033302A (ko) | Nkg2d, cd16 및 flt3에 결합하는 단백질 | |
| US10683358B2 (en) | Human TNFRSF25 antibody | |
| CA3058427C (en) | Alt-803 in combination with anti-cd38 antibody for cancer therapies | |
| JP2022532812A (ja) | 抗ｉｌ１ｒａｐ抗体組成物 | |
| KR20190120770A (ko) | Psma, nkg2d 및 cd16에 결합하는 단백질 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20220228 |