RU2650865C1 - Набор реактивов для выделения днк - Google Patents
Набор реактивов для выделения днк Download PDFInfo
- Publication number
- RU2650865C1 RU2650865C1 RU2016146882A RU2016146882A RU2650865C1 RU 2650865 C1 RU2650865 C1 RU 2650865C1 RU 2016146882 A RU2016146882 A RU 2016146882A RU 2016146882 A RU2016146882 A RU 2016146882A RU 2650865 C1 RU2650865 C1 RU 2650865C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- concentration
- solution
- dna
- tris hydrochloride
- buffer
- Prior art date
Links
- 238000000746 purification Methods 0.000 title abstract 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 13
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 8
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 7
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N thiocyanic acid Chemical compound SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- BMYCCWYAFNPAQC-UHFFFAOYSA-N 2-[dodecyl(methyl)azaniumyl]acetate Chemical group CCCCCCCCCCCCN(C)CC(O)=O BMYCCWYAFNPAQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Предложен набор реактивов для выделения ДНК из биологических объектов. Набор включает лизирующий буферный раствор, промывочные буферные растворы №1 и №2, элюирующий буферный раствор. Лизирующий буферный раствор содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид, тритон и сорбент, в виде суспензии из магнитных микросфер в солевом растворе. Промывочный буфер №1 содержит гуанидин тиоцианат, трис гидрохлорид и этиловый спирт. Промывочный буфер №2 содержит трис гидрохлорид, хлорид натрия и этиловый спирт. Элюирующий раствор представляет собой деионизированную воду. Изобретение обеспечивает увеличение выхода ДНК. 1 пр.
Description
Изобретение относится к биохимии. Известен наиболее близкий набор реактивов для выделения ДНК [RU 2485178, С2, 20.06.2013], способ выделения ДНК из биологических объектов, заключающийся в том, что биологический объект измельчают и помещают в пробирку с лизирующим буферным раствором состава: 0,1 М Трис-HCl, 0,1 М ЭДТА, 0,1 М NaCl, 0,5% N-лаурилсаркозил Na и протеиназы K, рН 6-7, получают клеточный лизат, к лизату добавляют сорбент магнитных наночастиц, модифицированных хитозаном, перемешивают и инкубируют в течение 25-35 мин, пробирку помещают на магнитный штатив, разделяют смесь на фракции - сорбент, связанный с ДНК, и надосадочную жидкость, надосадок удаляют, а к осадку приливают элюирующий буферный раствор состава: 10 мМ Трис-HCl, рН 7,4; 100 мМ NaCl; 1 мМ ЭДТА, инкубируют, пробирки помещают на магнитный штатив, разделяют смесь на фракции - сорбент - осадок и надосадок - ДНК, растворенная в элюирующем буферном растворе, осадок удаляют, в надосадке остается ДНК-конечный продукт.
Известный набор реактивов для выделения ДНК имеет недостаток: маленький выход ДНК.
Задачей заявляемого набора для выделения ДНК является увеличение выхода ДНК.
В результате использования данного изобретения достигнут технический результат: увеличился выход ДНК до 5 раз, а именно от 200 до 500-1000 нг из 5 г исходного материала.
Технический результат достигается тем, что в качестве лизирующего буферного раствора набор содержит буфер для лизиса и связывания гуанидин тиоцианат формулы C2H6N4S-CH5N3·HSCN концентрацией 5 М, трис гидрохлорид формулы C4H11NO3·HCl концентрацией 20 мМ, тритон концентрацией 15%, в качестве промывочных растворов: промывочный буфер №1, содержащий гуанидин тиоцианат концентрацией 4 М, трис гидрохлорид концентрацией 25 мМ, этиловый спирт концентрацией 34%, в качестве сорбента - суспензию из магнитных микросфер со средним размером 1,26 мкм в солевом растворе 1 М NaCl и 0,05% NaN3, промывочный буфер №2, содержащий трис гидрохлорид концентрацией 5 мМ, натрия хлорид концентрацией 15 мМ и этиловый спирт концентрацией 80%, в качестве элюирующего раствора берут деионизированную воду.
Объясняется технический результат тем, найденные в результате экспериментов реактивы и их концентрации оказались оптимальными для максимального выхода ДНК. Кроме того, эти реактивы более доступны и дешевле, чем набор реактивов, использованный в прототипе.
Пример использования заявляемого набора реактивов.
Выделение ДНК проводится из 100 мкл контрольного образца.
1. Внести по 100 мкл образца в 1,5 или 2 мл пробирки.
2. Внести в эти же пробирки по 500 мкл буфера для лизиса и связывания ДНК, перемешать на вортексе.
3. Инкубировать пробирки при 60°С в течение 15 минут.
4. Внести по 10 мкл суспензии магнитных частиц. Перемешать пипетированием.
5. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, перемешивать во время инкубирования 2-3 раза на вортексе.
6. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенке пробирок (2 минуты) и удалить супернатант.
7. Внести в пробирки по 350 мкл промывочного буфера №1, ресуспендировать магнитные частицы в растворе.
8. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок и удалить супернатант.
9. Внести в пробирки по 350 мкл хорошо перемешанного промывочного буфера №2, перемешать на вортексе.
10. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок и удалить супернатант.
11. Повторить пункты 9 и 10.
12. Поместить пробирки с приоткрытыми крышками в термостат и инкубировать при 60°С в течение 10 минут для просушки и удаления остаточного этанола.
13. Внести в пробирки по 50 мкл элюирующего буфера. Ресуспендировать частицы на вортексе.
14. Инкубировать при 60°С в течение 10 минут, во время инкубирования перемешать 2-3 раза на вортексе.
15. Поместить пробирки в магнитный штатив, подождать, пока частицы полностью соберутся на стенках пробирок.
16. Перенести супернатант, содержащий выделенную ДНК, в новую пробирку.
Таким образом, предлагаемый набор реактивов пригоден для эффективного выделения ДНК из исходного биологического материала.
Claims (1)
- Набор реактивов для выделения ДНК из биологических объектов, включающий лизирующий буферный раствор, промывочные буферные растворы №1 и №2, сорбент - магнитные частицы, элюирующий буферный раствор, отличающийся тем, что в качестве лизирующего буферного раствора используют раствор, содержащий гуанидин тиоцианат формулы C2H6N4S-CH5N3·HSCN концентрацией 5 М, трис гидрохлорид формулы C4H11NO3·HCl концентрацией 20 мМ, тритон концентрацией 15%, в качестве сорбента - суспензию из магнитных микросфер со средним размером 1,26 мкм в солевом растворе 1 М NaCl и 0,05% NaN3, в качестве промывочных растворов - промывочный буфер №1, содержащий гуанидин тиоцианат концентрацией 4 М, трис гидрохлорид концентрацией 25 мМ, этиловый спирт концентрацией 34%, промывочный буфер №2, содержащий трис гидрохлорид концентрацией 5 мМ, хлорид натрия концентрацией 15 мМ и этиловый спирт концентрацией 80%, а в качестве элюирующего раствора берут деионизированную воду.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016146882A RU2650865C1 (ru) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | Набор реактивов для выделения днк |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016146882A RU2650865C1 (ru) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | Набор реактивов для выделения днк |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2650865C1 true RU2650865C1 (ru) | 2018-04-17 |
Family
ID=61976634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016146882A RU2650865C1 (ru) | 2016-11-29 | 2016-11-29 | Набор реактивов для выделения днк |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2650865C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2751244C1 (ru) * | 2020-09-30 | 2021-07-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
| RU2753768C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-08-23 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение «Российский Научный Центр Радиологии И Хирургических Технологий Имени Академика А.М. Гранова» Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Набор для выделения ДНК |
| RU2829656C1 (ru) * | 2024-07-05 | 2024-11-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Институт биологии южных морей имени А.О. Ковалевского РАН" (ФИЦ ИнБЮМ) | Способ выделения тотальной днк бактерий из образцов почвы, способ оценки бактериального состава почв посредством метагеномного секвенирования и наборы для осуществления способов |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2116795C1 (ru) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Набор для выделения днк |
| EA201290612A1 (ru) * | 2010-01-07 | 2013-02-28 | Бигтек Прайвит Лимитед | Способ выделения нуклеиновой кислоты и набор для этого |
| RU2485178C2 (ru) * | 2011-07-12 | 2013-06-20 | Олег Евгеньевич Аникеев | Способ выделения днк |
| RU2539030C1 (ru) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Набор для выделения днк |
-
2016
- 2016-11-29 RU RU2016146882A patent/RU2650865C1/ru active IP Right Revival
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2116795C1 (ru) * | 1996-07-10 | 1998-08-10 | Владимир Иванович Евтушенко | Набор для выделения днк |
| EA201290612A1 (ru) * | 2010-01-07 | 2013-02-28 | Бигтек Прайвит Лимитед | Способ выделения нуклеиновой кислоты и набор для этого |
| RU2485178C2 (ru) * | 2011-07-12 | 2013-06-20 | Олег Евгеньевич Аникеев | Способ выделения днк |
| RU2539030C1 (ru) * | 2013-11-11 | 2015-01-10 | ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ "РОССИЙСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАДИОЛОГИИ И ХИРУРГИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ" МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ /ФГБУ "РНЦРХТ" Минздрава России/ | Набор для выделения днк |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2751244C1 (ru) * | 2020-09-30 | 2021-07-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
| WO2022071833A1 (ru) * | 2020-09-30 | 2022-04-07 | Федеральное Бюджетное Учреждение Науки "Центральный Научно-Исследовательский Институт Эпидемиологии" Федеральной Службы По Надзору В Сфере Защиты Прав Потребителей И Благополучия Человека | Способ экстракции нуклеиновых кислот из ногтевых пластин |
| RU2753768C1 (ru) * | 2020-12-11 | 2021-08-23 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение «Российский Научный Центр Радиологии И Хирургических Технологий Имени Академика А.М. Гранова» Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Набор для выделения ДНК |
| RU2832884C1 (ru) * | 2024-04-04 | 2025-01-09 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью" Федерального медико-биологического агентства | Способ выделения целевых фрагментов ДНК из многокомпонентной смеси |
| RU2829656C1 (ru) * | 2024-07-05 | 2024-11-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Институт биологии южных морей имени А.О. Ковалевского РАН" (ФИЦ ИнБЮМ) | Способ выделения тотальной днк бактерий из образцов почвы, способ оценки бактериального состава почв посредством метагеномного секвенирования и наборы для осуществления способов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101878304B (zh) | 用于从单个样品中分离基因组dna、rna和蛋白质的方法 | |
| JP5325448B2 (ja) | 固相を用いての核酸分子の単離および精製 | |
| US7923551B2 (en) | Method of purifying RNA using kosmotropic salt | |
| US7319021B2 (en) | Cell lysis composition, methods of use, apparatus and kit | |
| BRPI0500474B1 (pt) | Métodos para isolar e para adsorção de um ácido nucléico a partir de uma amostra biológica | |
| JP2009039137A (ja) | 選択的な核酸の単離方法および組成物 | |
| US10364428B2 (en) | Methods and kits for post-IVT RNA purification | |
| KR20060064619A (ko) | 샘플 제조 방법 및 장치 | |
| RU2650865C1 (ru) | Набор реактивов для выделения днк | |
| EP3215620B1 (en) | Chaotrope- and volatile-free method for purifying nucleic acids from plasma | |
| ES2904624T3 (es) | Método para aislar ácido nucleico altamente puro con partículas magnéticas | |
| RU2539030C1 (ru) | Набор для выделения днк | |
| US7803935B2 (en) | Nucleic acid adsorption under low-salt conditions | |
| JP2023527475A (ja) | 核酸抽出方法及び用途 | |
| ES2665280T3 (es) | Métodos para la extracción y purificación de componentes de muestras biológicas | |
| US8030479B2 (en) | Method of separating small RNA molecules using kosmotropic salt | |
| RU2018127652A (ru) | Система очистки нуклеиновой кислоты с использованием одного буферного раствора для промывания и элюирования | |
| US20150140595A1 (en) | Formulations for the synthesis of paramagnetic particles and methods that utilize the particles for biochemical applications | |
| HK1125112B (en) | Adsorption of nucleic acids to solid phases under low-salt conditions | |
| HK1125672B (en) | Isolation and purification of nucleic acid molecules with a solid phase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191130 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20210304 |