RU2647414C2 - Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism - Google Patents
Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism Download PDFInfo
- Publication number
- RU2647414C2 RU2647414C2 RU2016129771A RU2016129771A RU2647414C2 RU 2647414 C2 RU2647414 C2 RU 2647414C2 RU 2016129771 A RU2016129771 A RU 2016129771A RU 2016129771 A RU2016129771 A RU 2016129771A RU 2647414 C2 RU2647414 C2 RU 2647414C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- burn
- serum
- antigen
- toxemia
- protein
- Prior art date
Links
- 206010004053 Bacterial toxaemia Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 208000013222 Toxemia Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 53
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 41
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 14
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 12
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 238000009434 installation Methods 0.000 claims description 3
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 abstract description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 abstract description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 abstract description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 3
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 abstract description 3
- -1 plasma Substances 0.000 abstract description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 5
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 5
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 5
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 4
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 4
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 2
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002052 anaphylactic effect Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 229940031955 anhydrous lanolin Drugs 0.000 description 1
- 230000000941 anti-staphylcoccal effect Effects 0.000 description 1
- 108010045599 antistaphylococcal gamma globulin Proteins 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002278 reconstructive surgery Methods 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к лечению ожоговой токсемии.The invention relates to medicine and veterinary medicine, namely to the treatment of burn toxemia.
Известен способ профилактики острой ожоговой токсемии путем некроэктомии ожогового струпа (см. кн. В.И. Петрова и Ю.Б. Сладкова «Хирургия лучевых поражений кожи». - Л., 1973; Н.Е. Повстяной «Восстановительная хирургия ожогов»., М., 1973).A known method for the prevention of acute burn toxemia by necroectomy of a burn scab (see Prince V.I. Petrova and Yu.B. Sladkov, "Surgery of radiation injuries of the skin." - L., 1973; N.E. Povstyany "Reconstructive surgery of burns." , M., 1973).
Известен также способ предупреждения ожоговой токсемии с немедленной ауто- или ксенолпластикой (см. кн. А.А. Лимберга «Планирование операций на поверхности тела.» - Л., 1963).There is also a method of preventing burn toxemia with immediate auto- or xenoloplasty (see Prince A. A. Limberg, "Planning of operations on the surface of the body." - L., 1963).
Недостатком способов является их слабая дезинтоксикационная эффективность, поскольку оперативное вмешательство не обеспечивает нейтрализации ожоговых токсинов, циркулирующих в крови, лимфе, органах и тканях пораженных животных, т.к. через 2-3 суток после нанесения ожога наступает значительная антигенемия (токсемия) крови, ведущая к ожоговой токсемии, с последующим нарушением гомеостаза, метаболизма и развития токсико-инфекции.The disadvantage of these methods is their weak detoxification effectiveness, since surgical intervention does not neutralize burn toxins circulating in the blood, lymph, organs and tissues of affected animals, because 2-3 days after applying the burn, significant antigenemia (toxemia) of blood occurs, leading to burn toxemia, followed by a violation of homeostasis, metabolism and the development of toxic infection.
Известен также способ дезинтоксикации очаговой токсемии путем переливания крови, плазмы, альбумина, протеина, раствора Рингера (см. ст. Д.Е. Пекарского «Концепция патогенеза и принципы терапии острой ожоговой токсемии. - Клиническая хирургия. - 1978. - №3. - С. 320).There is also a method of detoxification of focal toxemia by transfusion of blood, plasma, albumin, protein, Ringer's solution (see article D.E. Pekarsky "The concept of pathogenesis and principles of treatment of acute burn toxemia. - Clinical surgery. - 1978. - No. 3. - S. 320).
Недостатком способа является ежедневное в течение недели переливание крови или их заменителей, что трудновыполнимо как для исполнителя, так и для пациента; кроме того, малодоступность и дороговизна переливаемого субстрата.The disadvantage of this method is daily for a week transfusion of blood or blood substitutes, which is difficult for both the performer and the patient; in addition, the inaccessibility and high cost of the transfused substrate.
Известен также способ дезинтоксикации ожоговой токсемии путем введения антистафилококкового гамма-глобулина, антистафилококковой и синегнойной плазмы (см ст. «Ожоги». БМЭ, 1981. Т. 17. - С. 231).There is also a method of detoxification of burn toxemia by the introduction of antistaphylococcal gamma globulin, antistaphylococcal and Pseudomonas plasma (see art. "Burns". BME, 1981. T. 17. - S. 231).
Недостатком способа является слабая токсиннейтрализирующая способность используемых препаратов, поскольку они, ингибируя развитие стафилококковой инфекции, не обладают свойством нейтрализовать ожоговые антигены и термотоксины.The disadvantage of this method is the weak toxin-neutralizing ability of the drugs used, since they, inhibiting the development of staphylococcal infections, do not have the ability to neutralize burn antigens and thermotoxins.
Между тем из источников информации известно, что в патогенезе термического поражения ключевую роль играют токсические продукты тканевого распада - ожоговые антигены, приобретающие свойства термотоксинов (см. ст. Н.А. Федорова и др. «Экспериментальные исследования по ожоговому антигену» в кн.: Актуальные вопросы иммунологии. - М., 1964.), обуславливающих развитие в организме патологической аутоиммунной (противотканевой иммунной) цитотоксической реакции, ведущей к посттермической гибели клеток. Наводнение обожженного организма продуктами тканевой дезинтеграции приводит, с одной стороны, к снижению количества нормальных противотканевых антител (НПТА) и, с другой - в отдаленный период к ожоговой болезни - синтезу противоожоговых противотканевых антител.Meanwhile, from sources of information it is known that toxic tissue decay products — burn antigens acquiring the properties of thermotoxins — play a key role in the pathogenesis of thermal damage (see article by N. A. Fedorov et al. “Experimental studies of burn antigen” in the book: Actual issues of immunology. - M., 1964.), causing the development in the body of a pathological autoimmune (anti-tissue immune) cytotoxic reaction leading to post-thermal cell death. Flooding a burnt organism with tissue disintegration products leads, on the one hand, to a decrease in the amount of normal anti-tissue antibodies (NPTAs) and, on the other hand, to a distant period to a burn disease — the synthesis of anti-burn anti-tissue antibodies.
Следовательно, введение в организм обожженных животных аутоантителсодержащей крови, сывороток, плазмы, лимфы, обогащенных как нормальными, так и гипериммунными антителами, может обладать противоожоговой дезинтоксикационной активностью путем нейтрализации аутоантигенов, термотоксинов, токсичных продуктов распада клеток и тканей.Therefore, the introduction into the body of burnt animals of autoantibody-containing blood, serum, plasma, lymph, enriched with both normal and hyperimmune antibodies, can have anti-burn detoxification activity by neutralizing autoantigens, thermotoxins, and toxic decomposition products of cells and tissues.
Учитывая, что антисыворотки, полученные от гипериммунизированных специфическими антигенами животных, обладают более выраженными лечебно-профилактическими свойствами, представляется перспективным получение и использование антисывороток от гипериммунизированных ожоговым антигеном животных - доноров сывороток.Considering that antisera obtained from animals hyperimmunized with specific antigens have more pronounced therapeutic and prophylactic properties, it seems promising to obtain and use antisera from animals serum donor hyperimmunized with burn antigen.
Поэтому в качестве концептуального положения терапии ожоговой токсемии нами выбран принцип получения и применения противоожоговых антитоксических антител путем гипериммунизации животных-доноров тканевыми антигенами, полученными от больных ожоговой болезнью животных.Therefore, as a conceptual concept for the treatment of burn toxemia, we have chosen the principle of obtaining and using anti-burn anti-toxic antibodies by hyperimmunization of animal donors with tissue antigens obtained from animals with burn disease.
Задачей изобретения является повышение эффективности способа лечения острой ожоговой токсемии за счет применения гипериммунной противоожоговой антитоксической сыворотки, приводящей к увеличению антитоксической активности и уменьшению ее лечебной дозы в 2 раза.The objective of the invention is to increase the effectiveness of the method of treatment of acute burn toxemia through the use of hyperimmune anti-burn antitoxic serum, leading to an increase in antitoxic activity and a decrease in its therapeutic dose by 2 times.
Поставленная задача решается за счет введения в организм биологически активного препарата - гипериммунной противоожоговой антитоксической сыворотки млекопитающих, которую вводят подкожно, 3-кратно через 24, 48 и 112 час после ожоговой травмы, в дозе 100-125 мг/кг - взрослым животным. Гипериммунную противоожоговую антитоксическую сыворотку млекопитающих для лечения острой ожоговой токсемии получают путем предварительного получения ожогового антигена, полученного водным экстрагированием гомогенатов печени, взятых у убитых в период токсемии на 8-9 сут ожоговой болезни животных, выделения белковой фракции антигена путем его дробного центрифугирования в течение 15 мин при 10000 об/мин в присутствии насыщенных растворов сульфата аммония 25-30%-ного насыщения для одной фракции и 30-33 5-ного насыщения - для другой, их последующего диализа против дистиллированной воды, затем полученные фракции объединяют, определяют белок и стандартизируют его до концентрации 5 мг/мл, далее полученный ожоговый антиген с неполным адъювантом Фрейнда в соотношении 1:1 используют для гипериммунизации животных (кроликов, овец, свиней, коров и лошадей), проводят 7-9 кратное подкожное и внутривенное введение в дозе 18,7-22,2 мг по белку полученного антигена с 2-3-дневным интервалом, при этом на 7 сутки после последней инъекции антигена берут кровь у доноров, а через 18 часов отделяют сыворотку, определяют титр антител и содержание белка, доводят его до концентрации 25-30 мг/мл, затем сыворотку подвергают радиационной стерилизации путем облучения гамма-лучами в дозе 20-25 кГр с помощью гамма-установки и 3-кратно (через 24, 48 и 112 часов после ожоговой травмы) вводят полученную гипериммунную противоожоговую антитоксическую сыворотку молодым животным в дозе 100-125 мг/кг и взрослым - 150-190 мг/кг живой массы тела.The problem is solved by introducing into the body a biologically active drug - hyperimmune anti-burn antitoxic serum of mammals, which is administered subcutaneously, 3 times 24, 48 and 112 hours after a burn injury, at a dose of 100-125 mg / kg for adult animals. The mammalian hyperimmune anti-burn antitoxic serum for the treatment of acute burn toxemia is obtained by preliminary obtaining the burn antigen obtained by aqueous extraction of liver homogenates taken from animals killed during the toxemia for 8-9 days, isolating the protein fraction of the antigen by fractional centrifugation for 15 minutes at 10,000 rpm in the presence of saturated solutions of ammonium sulfate of 25-30% saturation for one fraction and 30-33 5th saturation for another, their subsequent o dialysis against distilled water, then the obtained fractions are combined, the protein is determined and standardized to a concentration of 5 mg / ml, then the resulting burn antigen with Freund's incomplete adjuvant in a 1: 1 ratio is used for hyperimmunization of animals (rabbits, sheep, pigs, cows and horses ), spend 7-9 times subcutaneous and intravenous administration at a dose of 18.7-22.2 mg per protein of the resulting antigen with a 2-3-day interval, while on the 7th day after the last injection of antigen, blood is taken from donors, and after 18 hours separate serum, opr divide the antibody titer and protein content, bring it to a concentration of 25-30 mg / ml, then the serum is subjected to radiation sterilization by irradiation with gamma rays at a dose of 20-25 kGy using a gamma installation and 3 times (after 24, 48 and 112 hours after a burn injury), the resulting hyperimmune anti-burn antitoxic serum is administered to young animals at a dose of 100-125 mg / kg and adults - 150-190 mg / kg of body weight.
Такая технология получения сыворотки приводит к увеличению выхода целевого продукта, позволяет получить как гетерологичные, так и гомологичные, а также универсальные сыворотки (например сыворотки лошади), которые используют как в ветеринарной так и в медицинской практике, позволяет повысить эффективность лечения, уменьшить лечебную дозу в 2 раза.Such a technology for producing serum leads to an increase in the yield of the target product, allows you to get both heterologous and homologous, as well as universal serum (for example, horse serum), which are used both in veterinary and medical practice, can increase the effectiveness of treatment, reduce the therapeutic dose in 2 times.
Важным преимуществом используемой технологии является возможность многократно и длительно использовать крупных млекопитающих (например лошадей), которые используются в качестве продуцентов в вакцинном и сывороточном производстве как ветеринарных, так и медицинских лечебных препаратов.An important advantage of the technology used is the ability to repeatedly and for a long time use large mammals (for example horses), which are used as producers in the vaccine and serum production of both veterinary and medical medicines.
Использование стационарных гамма-установок с надежной защитой обеспечивают также радиационную безопасность технологического персонала по получению сыворотки.The use of stationary gamma installations with reliable protection also ensures the radiation safety of technological personnel for the production of serum.
Технологический процесс получения противоожоговой сыворотки осуществляется следующим образом.The technological process for obtaining anti-burn serum is as follows.
На первом этапе проводят работу по изоляции и очистке тканевых аутоантигенов (ожоговых антигенов) из органов и тканей обожженных животных.At the first stage, work is carried out to isolate and purify tissue autoantigens (burn antigens) from the organs and tissues of burnt animals.
Моделирование термического ожога проводят путем приложения раскаленного металлического предмета (пластинки размером 5×2 см) на выстриженный участок кожи, например на спинной части туловища или боковой поверхности тела животного (белых крыс, кроликов), создавая ожог III степени (приложение раскаленной пластинки в течение 3 сек с охватом 10% поверхности тела). Через 8-9 дней после нанесения ожога (в период максимального развития ожоговой токсемии), животных убивают и извлекают печень, почки, лимфатические узлы, струпы коагулированной ткани кожи, затем их отмывают от крови физиологическим раствором, измельчают ножницами, смешивают с тем же раствором в соотношении 1:4 и гомогенизируют в скоростном микроизмельчителе, для полноты экстракции рН гомогената доводят до 8,6-8,9 путем добавления раствора NaOH. Гомогенат тканей центрифугируют 15 мин при 10000 об/мин; супернатант после удаления центри-фугата дробно фракционируют насыщенным раствором сульфата аммония в диапазоне 25-30%-ного (белково-полисахаридного) и 30-33%-ного насыщения (белковая фракция антигена).Thermal burn modeling is carried out by applying a hot metal object (5 × 2 cm plate) to a clipped skin, for example, on the dorsal part of the body or the side surface of the animal’s body (white rats, rabbits), creating a III degree burn (application of a hot plate for 3 sec with a coverage of 10% of the body surface). 8-9 days after the burn (during the period of maximum development of burn toxemia), animals are killed and the liver, kidneys, lymph nodes, scabs of coagulated skin tissue are killed, then they are washed from the blood with saline, crushed with scissors, mixed with the same solution in 1: 4 ratio and homogenized in a high-speed micronizer, to complete the extraction, the pH of the homogenate was adjusted to 8.6-8.9 by adding a NaOH solution. The tissue homogenate is centrifuged for 15 minutes at 10,000 rpm; the supernatant after centrifugate removal is fractionally fractionated with a saturated solution of ammonium sulfate in the range of 25-30% (protein-polysaccharide) and 30-33% saturation (protein fraction of the antigen).
Полученные фракции диализуют против дистиллированной воды. Полученные порции объединяют и определяют белок по Лоури.The resulting fractions are dialyzed against distilled water. The resulting portions are combined and the protein determined by Lowry.
Токсичность определяют на белых мышах при внутрибрюшинном введении антигена, ЛД50 расчитывают по И.А. Ашмарину. Антигенную активность полученных фракций оценивают в РПК (реакции потребления комплемента) по А.А. Иванову (см. ст. «Модификация реакции комплемента для количественного определения аутоантигенов. Лабор. дело, 1968, №10, с. 611).Toxicity is determined on white mice with intraperitoneal administration of antigen, LD 50 calculated by I.A. Ashmarin. The antigenic activity of the obtained fractions is evaluated in the PKK (complement consumption reaction) according to A.A. Ivanov (see article "Modification of the complement reaction for the quantitative determination of autoantigens. Labor. Business, 1968, No. 10, p. 611).
Путем титрования в РПК устанавливают, что максимум специфического антигена находится во фракции, в которой количество белка составляет 90,5%, а титр антигена в РПК составляет 1:64.By titration in the PKK, it is established that the maximum of the specific antigen is in the fraction in which the amount of protein is 90.5% and the antigen titer in the PKK is 1:64.
Полученный вышеописанным способом очищенный антиген стандартизируют путем разведения фракции в стерильном физиологическом растворе в концентрации 5 мг/мл, разливают по 1 см3 в ампулы и лиофилизируют. Высушенный антиген хранят в холодильнике при температуре (4±2)°С.The purified antigen obtained by the above method is standardized by diluting the fraction in sterile physiological saline at a concentration of 5 mg / ml, pour 1 cm 3 into ampoules and lyophilize. The dried antigen is stored in a refrigerator at a temperature of (4 ± 2) ° C.
На следующем (2-м) этапе проводят гипериммунизацию кроликов тканевыми антигенами из органов обожженных животных.At the next (2nd) stage, hyperimmunization of rabbits is carried out with tissue antigens from organs of burnt animals.
Для получения гипериммунной противоожоговой антисыворотки в качестве доноров используют кроликов или баранов. В качестве антигена используют изолированные из печени, селезенки, лимфатических узлов, струпов кожи обожженных животных и очищенные фракции гомогенатов.To obtain a hyperimmune anti-burn antiserum, rabbits or sheep are used as donors. As antigen, isolated from the liver, spleen, lymph nodes, scabs of the skin of burnt animals and purified fractions of homogenates are used.
В качестве адъюванта используют стерильные: безводный ланолин, вазелиновое масло и антиген в соотношении 1:1:1 (неполный адъювант Фрейнда). Смесь антигена с неполным адъювантом Фрейнда готовят перед иммунизацией с подогревом до 37°С.As an adjuvant, sterile ones are used: anhydrous lanolin, liquid paraffin and antigen in a ratio of 1: 1: 1 (Freund's incomplete adjuvant). A mixture of antigen with incomplete Freund's adjuvant is prepared before immunization with heating to 37 ° C.
Приготовленную смесь (тканевой препарат с неполным адъювантом Фрейнда) вводят кроликам в область внутренней поверхности бедра 7-9-кратно с интервалом между введениями 2-3 дня. Первое, третье, седьмое и девятое введение антигена проводят внутрибрюшинно; второе, четвертое, пятое и шестое - подкожно. Животным в течение 24 дней делают 8-9 инъекций, причем 2 из них (2-ая и 6-ая) - в сочетании с неполным адъювантом Фрейнда. На весь цикл иммунизации используется 150-200 мг белка.The prepared mixture (a tissue preparation with incomplete Freund's adjuvant) is administered to rabbits in the area of the inner thigh 7-9-fold with an interval between administrations of 2-3 days. The first, third, seventh and ninth administration of antigen is carried out intraperitoneally; the second, fourth, fifth and sixth are subcutaneous. The animals are given 8-9 injections within 24 days, and 2 of them (2nd and 6th) are combined with Freund's incomplete adjuvant. 150-200 mg of protein is used for the entire immunization cycle.
В третьей стадии получают сыворотки крови от гипериммунизированных животных.In the third stage, serum is obtained from hyperimmunized animals.
Для получения сывороток у животных забор крови проводят на 7 сутки (на 31-е сутки после начала иммунизации) после последней инъекции антигена. Кровь от каждого животного собирают в отдельный стеклянный цилиндр ГОСТ 18770-74 и выдерживают 30 мин при температуре 37°С, затем сгусток крови отделяют от стенок сосуда и помещают на 18 часов в холодильник при температуре 4°С.To obtain serum in animals, blood sampling is carried out on the 7th day (on the 31st day after the start of immunization) after the last injection of antigen. Blood from each animal is collected in a separate glass cylinder GOST 18770-74 and incubated for 30 min at a temperature of 37 ° C, then the blood clot is separated from the walls of the vessel and placed for 18 hours in a refrigerator at 4 ° C.
Через 18 часов отделяют сыворотку общепринятым методом (см. кн. «Руководство по вакцинному и сывороточному делу». Под ред. П.П. Бургасова. - М.: Медицина, 1978. - 439 с.), определяют в ней титр РПК (см. «Лабор. дело, 1968, №10, с.611), и содержание белка биуретовым методом (см. кн. «Экспериментальная иммунохимия». Под ред. Н.В. Холчева. - М.: Медицина, 1968. - С. 665), доводят его содержание стерильным физиологическим раствором до концентрации 25-30 мг/мл, затем подвергают стерилизующей фильтрации, разливают во флаконы и хранят в холодильнике при температуре 4-6°С.After 18 hours, the serum is separated by the conventional method (see the book “A Guide to the Vaccine and Serum Cases.” Edited by P.P. Burgasov. - M .: Medicine, 1978. - 439 pp.), Determine the titer of RPK ( see "Labor. Case, 1968, No. 10, p. 611), and protein content using the biuret method (see the book." Experimental Immunochemistry. Edited by N.V. Kholchev. - M .: Medicine, 1968. - S. 665), its contents are adjusted with sterile saline to a concentration of 25-30 mg / ml, then subjected to sterilizing filtration, poured into bottles and stored in a refrigerator at a temperature of 4-6 ° C.
Способ терапии ожоговой токсемии организма иллюстрируется следующими примерами.The method of treatment of burn toxemia of the body is illustrated by the following examples.
Пример 1. Определение оптимального источника ожогового антигена для иммунизации животных Example 1. Determination of the optimal source of burn antigen for immunization of animals
В качестве доноров антигенного материала использовали белых крыс средней живой массой 180-200 г., которых подвергли ожоговой травме I, II и III степени тяжести путем приложения раскаленной металлической пластинки на 1, 2 и 3 сек на выбритый участок кожи, создавая 10%-ное поражение поверхности тела. Через 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 дней после нанесения термической травмы, животных убивали, извлекали: печень, почки, селезенку, лимфатические узлы, струпья коагулированной ткани и готовили антигены по вышеописанной технологии.White rats with an average live weight of 180-200 g were used as donors of antigenic material. They were burned with severity I, II, and III severity by applying a hot metal plate for 1, 2, and 3 sec to a shaved skin area, creating a 10% damage to the surface of the body. After 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 days after the application of thermal injury, the animals were killed and removed: liver, kidneys, spleen, lymph nodes, scabs of coagulated tissue and antigens were prepared according to the above technology.
Полученные антигены вводили подкожно интактным белым крысам однократно по 20 мг/животное и в динамике (через 7, 10 и 14 дней) брали пробы крови для определения титра антител. Серологическую активность испытуемых антигенных материалов оценивали по титру антител в РПК тест-системе. Установлено, что антисыворотки, полученные на 14 день после введения печеночного антигена от обожженных животных на 8-9 день после нанесения ожоговой травмы, обладали более высокой серологической активностью (титр антител в РПК до 1:64) по сравнению с таковой от животных, получавших антигены из почек, селезенки, лимфатических узлов и струпа коагулированной ткани, титры которых колебались в пределах от 1:8 до 1:32.The resulting antigens were administered subcutaneously to intact white rats once at 20 mg / animal and blood samples were taken in dynamics (after 7, 10 and 14 days) to determine the antibody titer. Serological activity of the tested antigenic materials was evaluated by the titer of antibodies in the PKK test system. It was found that antisera obtained on the 14th day after the administration of the hepatic antigen from burnt animals on the 8th-9th day after the application of the burn injury had a higher serological activity (antibody titer in the PKK up to 1:64) compared with that of the animals treated with antigens from kidneys, spleen, lymph nodes and a scab of coagulated tissue, the titers of which ranged from 1: 8 to 1:32.
Поэтому в дальнейшем для иммунизации доноров с целью получения гипериммунных противоожоговых лечебных сывороток использовали антиген, полученный из печени обожженных животных на 8-9 день после нанесения термической травмы.Therefore, in the future, for the immunization of donors in order to obtain hyperimmune anti-burn treatment sera, an antigen obtained from the liver of burnt animals on the 8th-9th day after the application of thermal injury was used.
Пример 2. Определение оптимальной схемы гипериммунизации животных ожоговым антигеном Example 2. Determination of the optimal scheme of hyperimmunization of animals with a burn antigen
Для этой цели ожоговый антиген вводили по различным схемам, предполагающим: I-я - 3-5 - кратное введение антигена с интервалом между введениями 1-2 дня; II-я - 6-8 кратное введение препарата с интервалом 3-4 дня; III-я - 7-9 - кратное введение препарата с интервалом 2-3 дня; IV-я - 8-10 - кратное введение с интервалом 4-5 дней, меняя при этом как дозу вводимого антигена (16,6; 17,7; 18,7; 19,1; 19,7; 20,1; 20,7; 21,7; 22,1; 22,2; 22,7; 23,1 мг белка), место введения (только подкожное, только внутрибрюшинное, сочетанное: подкожно-брюшинное), так и сроки взятия крови - на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 и 9 сутки после последней инъекции антигена.For this purpose, the burn antigen was administered according to various schemes, suggesting: I — 3-5 times administration of the antigen with an interval between administrations of 1-2 days; II-I - 6-8 times the introduction of the drug with an interval of 3-4 days; III-I - 7-9 - multiple administration of the drug with an interval of 2-3 days; IV-I - 8-10 - multiple administration with an interval of 4-5 days, while changing the dose of the administered antigen (16.6; 17.7; 18.7; 19.1; 19.7; 20.1; 20 , 7; 21.7; 22.1; 22.2; 22.7; 23.1 mg of protein), the injection site (only subcutaneous, only intraperitoneal, combined: subcutaneous-peritoneal), and the timing of taking blood - 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, and 9 days after the last injection of antigen.
Результаты серологического анализа сывороток крови на содержание противоожоговых антител в РПК-тест-системе показали, что наиболее высокую активность (титр 1:126) имели сыворотки, полученные при иммунизации по III-й схеме, предполагающей 7-9 кратное с интервалом между введениями 2-3 дня введения антигена в дозе 18,7-22,2 мг белка (150-200 мг на весь цикл), взятие крови на 7 сутки после последней инъекции антигена.The results of a serological analysis of blood serum for the content of anti-burn antibodies in the RPK test system showed that the highest activity (titer 1: 126) had serum obtained by immunization according to the III-th scheme, suggesting 7-9 times with an interval between administrations of 2- 3 days of administration of antigen at a dose of 18.7-22.2 mg of protein (150-200 mg for the entire cycle), blood collection on the 7th day after the last injection of antigen.
Как показали опыты, ни повышение или снижение кратности, дозы, интервала, места введения антигена и срока взятия крови после последней инъекции антигена не обеспечивали достаточно высокой иммунологической активности гипериммунных сывороток - титры антител в РПК при этом колебались в пределах 1:8-1:32.As experiments have shown, neither an increase or decrease in the multiplicity, dose, interval, place of administration of the antigen, and the period of blood collection after the last injection of antigen did not provide a sufficiently high immunological activity of hyperimmune sera - the antibody titers in the PKK ranged from 1: 8-1: 32 .
Пример 3. Определение безвредности гомологичных и гетерологичных сывороток Example 3. Determination of the harmlessness of homologous and heterologous sera
Для оценки биологической активности сывороток в зависимости от их гомологичности и гетерологичности, опыты проводили на двух видах животных: кроликах (гомологичные животные, от которых получена противоожоговая сыворотка) и на овцах (гетерологичные животные). Для этого кроликам и овцам после термической ожоговой травмы III-й степени подкожно вводили противоожоговую сыворотку в дозах 50, 100, 125, 150, 200, 250, 300 мг/кг одно -, двух - и трехкратно с интервалом 24, 48, 72 часа; 48, 72, 96 часов; 24, 48 и 126 часов.To evaluate the biological activity of sera depending on their homology and heterology, experiments were performed on two types of animals: rabbits (homologous animals from which anti-burn serum was obtained) and sheep (heterologous animals). For this, rabbits and sheep after a thermal burn injury of the third degree were subcutaneously injected with anti-burn serum at doses of 50, 100, 125, 150, 200, 250, 300 mg / kg once, twice and three times with an interval of 24, 48, 72 hours ; 48, 72, 96 hours; 24, 48 and 126 hours.
Безвредность полученной сыворотки определяли по появлению или отсутствию анафилактической реакции (одышка, беспокойство, повышение температуры тела, шок), а оптимальную лечебную дозу - по степени модификации ожоговой болезни. Установлено, что хотя испытуемый препарат в дозах от 100 до 300 мг/кг оказывал благоприятное воздействие на течение ожоговой болезни, при 3-кратном введении с интервалом 24, 48 и 126 часов после нанесения ожога, однако овцы, которым вводили гетерологичную (кроличью) сыворотку, переносили такую операцию тяжело (появление одышки, беспокойства, повышение температуры тела). Полученные данные свидетельствуют о необходимости снижения анафилактогенности гетерологичных сывороток.The safety of the obtained serum was determined by the appearance or absence of an anaphylactic reaction (shortness of breath, anxiety, fever, shock), and the optimal therapeutic dose was determined by the degree of modification of the burn disease. It was found that although the test drug in doses from 100 to 300 mg / kg had a beneficial effect on the course of a burn disease, with a 3-fold administration with an interval of 24, 48 and 126 hours after applying the burn, however, sheep who were injected with heterologous (rabbit) serum , suffered such an operation difficult (shortness of breath, anxiety, fever). The data obtained indicate the need to reduce the anaphylactogenicity of heterologous sera.
Пример 4 Example 4
Для нейтрализации видовой специфичности сывороток полученных от кроликов, сыворотки подвергали радиационной обработке в стерилизующих дозах (5, 10, 15, 20 и 25 кГр). Степень нейтрализации видовой специфичности сывороток после облучения проверяли на гетерологичных животных (овцы, свиньи, крупный рогатый скот, лошади) путем одно -, двух -, и трехкратного подкожного введения кроличьих сывороток в терапевтических дозах (150-200 мг/кг по белку). Степень безвредности и нейтрализации гетерологичности облученных сывороток оценивали по наличию или отсутствию побочных реакций на введение препарата. Установлено, что все животные, которым вводили облученную сыворотку, оставались здоровыми в течение 10 сут без проявления побочных реакций, что свидетельствует об отсутствии анафилактогенности гетерологичных сывороток.To neutralize the species specificity of the sera obtained from rabbits, the sera were subjected to radiation treatment in sterilizing doses (5, 10, 15, 20 and 25 kGy). The degree of neutralization of the species specificity of the sera after irradiation was checked on heterologous animals (sheep, pigs, cattle, horses) by single, double, and triple subcutaneous administration of rabbit sera in therapeutic doses (150-200 mg / kg protein). The degree of harmlessness and neutralization of the heterology of the irradiated sera was evaluated by the presence or absence of adverse reactions to the administration of the drug. It was found that all animals that were injected with irradiated serum remained healthy for 10 days without the appearance of adverse reactions, which indicates the absence of anaphylactogenicity of heterologous sera.
Пример 5. Проверка стерильности облученных сывороток Example 5. Checking the sterility of irradiated sera
Для оценки радиостерилизующей эффективности γ-лучей, облученные в дозах 5, 10, 15, 20 и 25 кГр сыворотки высевали на жидкие (МПБ) и твердые (МПА) питательные среды по 1 мл пробы из каждой серии сывороток. Посевы термостатировали в течение 7 суток, ведя наблюдение за ними и регистрируя появление колоний на МПА и рост культур микроорганизмов на МПБ по помутнению среды.To assess the radio-sterilizing effectiveness of gamma rays irradiated at doses of 5, 10, 15, 20 and 25 kGy, serum was plated on liquid (MPB) and solid (MPA) nutrient media, 1 ml of sample from each serum series. Crops were thermostated for 7 days, monitoring them and registering the appearance of colonies on MPA and the growth of cultures of microorganisms on MPB to cloud the environment.
Установлено, что в посевах с пробами из облученных в дозах 15, 20 и 25 кГр, роста не отмечено, что свидетельствует о стерильности облученных сывороток. Следовательно, облучение гипериммунных сывороток γ-лучами в дозах 20-25 кГр ведет не только к нейтрализации антивидовых антител, анти-комплементарности, но и, одновременно, оказывает стерилизующий эффект, что позволяет избежать сложную длительную стерилизующую фильтрацию сывороток через асбестовые или миллипоровые пластины-фильтры, на которых сорбируются иммуноглобулины (антитела, белки), что ведет к потере активности сывороток.It was found that in crops with samples from irradiated doses of 15, 20 and 25 kGy, no growth was noted, which indicates the sterility of the irradiated sera. Therefore, irradiation of hyperimmune sera with γ-rays in doses of 20-25 kGy not only leads to the neutralization of antispecies antibodies, anti-complementarity, but also has a sterilizing effect, which avoids complicated long-term sterilizing filtering of sera through asbestos or millipore filter plates on which immunoglobulins (antibodies, proteins) are adsorbed, which leads to a loss of serum activity.
Пример 6 Example 6
Для изучения влияния облучения на антитоксическую активность противоожоговой гипериммунной сыворотки, опыты проводили на 10 больных ожоговой болезнью III-й степени тяжести белых крысах. У животных в период ожоговой токсемии (8-9 сут после нанесения термического ожога) брали пробы крови из хвостовой вены, получали сыворотку и в ней определяли содержание ожогового токсина (антигена) в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ). Для сопоставительного анализа активности сывороток в иммунохимической тест-системе использовали 2 варианта антительного бентонитового диагностикума (АТБД): сенсибилизированные необлученной противоожоговой сывороткой микрочастицы бентонита (НАТБД) и сенсибилизированные облученной в стерилизующих дозах (20-25 кГр) противоожоговой сывороткой микрочастицы бентонита (ОАТБД). Постановку РБФ и учет ее результатов проводили по разработанной P.P. Гайнуллиным технологии (см. автореферат «Разработка бентонитового диагностикума для индикации радиоиндуцированных токсических соединений. Казань, 2009, 23 с.).To study the effect of radiation on the antitoxic activity of anti-burn hyperimmune serum, experiments were performed on 10 patients with a burn disease of the III degree of severity of white rats. In animals during the period of burn toxemia (8–9 days after thermal burn), blood samples were taken from the tail vein, serum was obtained, and the content of burn toxin (antigen) in the bentonite flocculation (RBF) reaction was determined in it. For a comparative analysis of the activity of sera in the immunochemical test system, 2 variants of antibody bentonite diagnosticum (ATBD) were used: microparticles of bentonite (NATBD) sensitized with unirradiated anti-burn serum and antiturn microparticles of anti-burn AT microparticles (20-25 kGy) irradiated in sterilizing doses. The RBF statement and its results were taken into account according to the developed P.P. Gainullin technology (see abstract "Development of bentonite diagnosticum for indicating radio-induced toxic compounds. Kazan, 2009, 23 pp.).
Результаты параллельных иммунохимических исследований проб сывороток крови больных ожоговой болезнью белых крыс показали, что нейтрализация ожогового токсина (антигена) в исследуемых сыворотках происходит при использовании нативной (необлученной) противоожоговой сыворотки при разведениях сыворотки 1:32-1:64, а при использовании препарата на основе облученной (радиостерилизованной) противоожоговой сыворотки - 1:16-1:32, т.е. облученная противоожоговая сыворотка оказалась более активной по сравнению с необлученной, поскольку для нейтрализации ожоговой токсемии потребовалось в 2 раза меньше антитоксической (противоожоговой) гипериммунной сыворотки.The results of parallel immunochemical studies of blood serum samples of patients with burn disease of white rats showed that the neutralization of burn toxin (antigen) in the studied sera occurs when using native (non-irradiated) anti-burn serum with serum dilutions of 1: 32-1: 64, and when using a drug based on irradiated (radio-sterilized) anti-burn serum - 1: 16-1: 32, i.e. irradiated anti-burn serum was more active than non-irradiated, since it took 2 times less antitoxic (anti-burn) hyperimmune serum to neutralize burn toxemia.
Пример 7 Example 7
Для оценки дезинтоксикационной эффективности противоожоговой гипериммунной сыворотки, опыты проводили на 12 половозрелых овцах породы «Прекос» со средней живой массой 37 кг, которых подвергали термической ожоговой травме путем приложения раскаленной металлической пластинки на выстриженный участок кожи боковой поверхности тела, моделируя III-ю степень ожоговой болезни с поражением 10% поверхности тела. Животным 1-й группы (3 овцы) 3-кратно с интервалом 24, 48 и 112 часов подкожно вводили нативную (необлученную) противоожоговую гипериммунную сыворотку в дозе 200-250 мг/кг живой массы; овцам 2-й группы в аналогичных условиях вводили облученную в дозе 20 кГр противоожоговую сыворотку в дозе 200-250 мг/кг; животным 3-й группы в аналогичных условиях вводили облученную сыворотку в дозе 150-190 мг/кг; овцам 4-й группы вводили плазму крови по 20 мл по 2 раза в день в течение недели после нанесения ожоговой травмы (известный способ).To assess the detoxification effectiveness of anti-burn hyperimmune serum, experiments were performed on 12 sexually mature Prekos sheep with an average live weight of 37 kg, which were subjected to thermal burn injury by applying a hot metal plate to a clipped skin on the lateral surface of the body, simulating the third degree of burn disease with damage to 10% of the surface of the body. Animals of the 1st group (3 sheep) 3 times with an interval of 24, 48 and 112 hours were subcutaneously injected with native (non-irradiated) anti-burn hyperimmune serum at a dose of 200-250 mg / kg body weight; group 2 sheep under similar conditions were injected with a dose of 200-250 mg / kg of anti-burn serum irradiated in a dose of 20 kGy; animals of the 3rd group under similar conditions were injected with irradiated serum at a dose of 150-190 mg / kg; sheep of the 4th group were injected with blood plasma of 20 ml 2 times a day for a week after applying a burn injury (known method).
На 9-е сутки после нанесения термического ожога (период максимальной ожоговой токсемии) у всех животных брали пробы крови и в сыворотках определяли содержание ожогового антигена (термотоксина) в РБФ-тест-системе и по клинике леченных испытуемыми сыворотками больных ожоговой болезнью овец.On the 9th day after the thermal burn (the period of maximum burn toxemia), blood samples were taken from all animals and the content of burn antigen (thermotoxin) was determined in the RBF test system and in the clinic of sheep treated with test sera from the test sera.
Результаты иммунологических исследований в РБФ-тест-системе по модификации ожогового антигена (термотоксина) в сыворотке крови овец представлены в таблице.The results of immunological studies in the RBF test system for the modification of burn antigen (thermotoxin) in sheep serum are presented in the table.
Из данных таблицы видно, что использование гипериммунных противоожоговых сывороток оказывало детоксицирующее действие на организм обожженных животных, снижая содержание термотоксина в крови на 1,36 раза (1-я группа), 1,66 (2-я группа), 1,69 (3-я группа) и в 1,15 раза (4-ая группа), по сравнению с таковым обожженных и нелеченных животных. При этом установлено, что применение противоожоговой гипериммунной сыворотки обеспечивает более выраженный детоксицирующий эффект, снижая концентрацию термотоксина в крови в 1,36 раза (Р<0,005) против 1,15 раза в 4-й группе (известный способ дезинтоксикации).The table shows that the use of hyperimmune anti-burn sera had a detoxifying effect on the body of burnt animals, reducing the content of thermotoxin in the blood by 1.36 times (1st group), 1.66 (2nd group), 1.69 (3 group) and 1.15 times (group 4), compared with that of burnt and untreated animals. It was found that the use of anti-burn hyperimmune serum provides a more pronounced detoxifying effect, reducing the concentration of thermotoxin in the blood by 1.36 times (P <0.005) versus 1.15 times in the 4th group (known method of detoxification).
Использование гипериммунной противоожоговой сыворотки оказывает на обожженный организм специфический лечебный эффект, основанный на нейтрализации ожоговых и тканевых токсинов, термоиндуцированных и термомодифицированных антигенов, аутоантигенов и других агрессивных метаболитов (детоксицирующий эффект), облучение противоожоговой сыворотки γ-лучами в дозах 20-25 кГр оказывает стерилизующий эффект, обеспечивая исключение из технологического цикла получения сывороточного препарата сложной, длительной и не всегда надежной в микробиологическом отношении операции - фильтрации через дорогие и труднодоступные миллипоровые фильтры. Наиболее важными изменениями в свойствах облученной сыворотки являются: увеличение антитоксической активности (что позволяет уменьшить ее лечебную дозу в 2 раза), увеличение антикомплементарности (снижение активности комплемента, индуцированной ожоговой травмой) и, самое главное - снижение анафилоктогенности, создающей серьезную проблему при использовании с лечебной целью гетерологичных сывороток, т.е. нейтрализация гетерологичных антигенов и антител, являющихся индукторами анафилоктогенного эффекта при применении гетерологичных лечебных сывороток.The use of hyperimmune anti-burn serum has a specific therapeutic effect on the burned body, based on the neutralization of burn and tissue toxins, thermally induced and thermally modified antigens, autoantigens and other aggressive metabolites (detoxifying effect), irradiation of anti-burn serum with γ-rays in doses of 20-25 kGy has , providing an exception from the technological cycle of obtaining a whey preparation complex, long and not always reliable in microbiol cal respect operations - filtration through expensive and difficult millipore filters. The most important changes in the properties of irradiated serum are: an increase in antitoxic activity (which allows to reduce its therapeutic dose by 2 times), an increase in anticomplementarity (a decrease in complement activity induced by burn injury) and, most importantly, a decrease in anaphylactogenicity, which creates a serious problem when used with therapeutic target heterologous sera, i.e. neutralization of heterologous antigens and antibodies, which are the inducers of anaphylactogenic effect when using heterologous therapeutic sera.
Таким образом, из приведенных примеров видно, что использование изобретения позволяет повысить дезинтоксикационный эффект, предупреждая развитие ожоговой токсемии, не прибегая к систематическому, многократному переливанию крови, плазмы, кровезаменителей, альбумина, протеина, которые не устраняют главной причины ожоговой токсемии - циркулирующих в крови термотоксинов и ожоговых антигенов.Thus, it can be seen from the above examples that the use of the invention improves the detoxification effect, preventing the development of burn toxemia, without resorting to a systematic, multiple transfusion of blood, plasma, blood substitutes, albumin, protein, which do not eliminate the main cause of burn toxemia - thermotoxins circulating in the blood and burn antigens.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016129771A RU2647414C2 (en) | 2016-07-20 | 2016-07-20 | Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016129771A RU2647414C2 (en) | 2016-07-20 | 2016-07-20 | Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016129771A RU2016129771A (en) | 2018-01-25 |
| RU2647414C2 true RU2647414C2 (en) | 2018-03-15 |
Family
ID=61024128
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016129771A RU2647414C2 (en) | 2016-07-20 | 2016-07-20 | Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2647414C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807236C1 (en) * | 2022-07-27 | 2023-11-13 | Государственное бюджетное учреждение Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе | Method for correction of metabolic acidosis in acute period of burn disease |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113777305A (en) * | 2020-06-09 | 2021-12-10 | 首都医科大学附属北京世纪坛医院 | Application of urine mono-ADP-ribosyltransferase and its polypeptide fragments in burns |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2103023C1 (en) * | 1995-01-11 | 1998-01-27 | Алексей Вячеславович Ковалев | Method for local conservative treatment of burn intoxication |
-
2016
- 2016-07-20 RU RU2016129771A patent/RU2647414C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2103023C1 (en) * | 1995-01-11 | 1998-01-27 | Алексей Вячеславович Ковалев | Method for local conservative treatment of burn intoxication |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| NURKHANOV BM., [The comparative efficacy of a new hydrogel enterosorbent in the detoxification therapy of combined radiation-thermal lesions].[Article in Russian] Patol Fiziol Eksp Ter. 1990 Jul-Aug;(4):16-8. * |
| TAN XD., et al., [Effects of early administration of imipenem on subeshcar and plasma TNF-alpha in rabbits with severe burns].[Article in Chinese] Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. 2004 Dec;24(12):1444-6. * |
| WANG SB., et al., [Changes in the plasma levels of endotoxin in severe burn patients under the treatment of antibiotics].[Article in Chinese] Zhonghua Shao Shang Za Zhi. 2008 Apr;24(2):87-9. * |
| WANG SB., et al., [Changes in the plasma levels of endotoxin in severe burn patients under the treatment of antibiotics].[Article in Chinese] Zhonghua Shao Shang Za Zhi. 2008 Apr;24(2):87-9. TAN XD., et al., [Effects of early administration of imipenem on subeshcar and plasma TNF-alpha in rabbits with severe burns].[Article in Chinese] Di Yi Jun Yi Da Xue Xue Bao. 2004 Dec;24(12):1444-6. NURKHANOV BM., [The comparative efficacy of a new hydrogel enterosorbent in the detoxification therapy of combined radiation-thermal lesions].[Article in Russian] Patol Fiziol Eksp Ter. 1990 Jul-Aug;(4):16-8. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2807236C1 (en) * | 2022-07-27 | 2023-11-13 | Государственное бюджетное учреждение Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе | Method for correction of metabolic acidosis in acute period of burn disease |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016129771A (en) | 2018-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2548115B2 (en) | Passive immunization of mammals with avian antibodies | |
| US4082734A (en) | Production of intravenously applicable native human immune globulin having a normal half-life | |
| AU2010319047A1 (en) | Therapeutic agent for psoriasis or atopic dermatitis | |
| Appleton et al. | Characterization of the immune mediator of rapid expulsion of Trichinella spiralis in suckling rats | |
| US5641492A (en) | Vaccine and serum for endotoxin associated disease immunization and treatment, detoxified endotoxin, and bacterial mutant | |
| Tanwar et al. | Production and preclinical assessment of camelid immunoglobulins against Echis sochureki venom from desert of Rajasthan, India | |
| RU2647414C2 (en) | Method for treatment of acute burn toxemia of organism and method for production of preparation for treatment of acute burntoxemia of organism | |
| CN101012279A (en) | Vitelline antibody for resisting king cobra poison and its preparing method and use | |
| RU2130318C1 (en) | Preparation containing immunoglobulin against abol fever from horse blood serum and liquid abol immunoglobulin | |
| Yu et al. | The immunogenicity of the C fragment of tetanus neurotoxin in production of tetanus antitoxin | |
| Selim et al. | Development of IgY antibodies for control of tetanus | |
| ff Edward | Immunization against louping-ill. Immunization of man | |
| RU2647369C2 (en) | Method for treatment of acute burn toxemia of the body and methods for obtaining anti-burn serum of convalescent animals for treatment of burn toxemia of the body | |
| RU2661028C2 (en) | Pharmaceutical composition for passive rabies immunization, pharmaceutical kit, pharmaceutical kit application method | |
| Van den Ende et al. | Experiments with the soluble antigen of rabies in suckling mouse brains | |
| TWI511743B (en) | Antiserum, neutralizing antibody, and pharmaceutical composition containing the same | |
| RU2169572C2 (en) | Method for treating and producing preparation to treat radiation injuries in organism | |
| Mori et al. | Venom and antivenom of the redback spider (Latrodectus hasseltii) in Japan. Part II. Experimental production of equine antivenom against the redback spider | |
| Ptak et al. | Alloantibody-induced cytotoxicity of macrophages | |
| SHARMA et al. | PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST INDIAN PAPER WASP ROPALIDIA MARGINATA VENOM TOXINS AND THEIR EFFICACY IN THE REVERSAL OF TOXIC EFFECTS | |
| RU2063767C1 (en) | Donor for preparing specific sera and serum preparations for carnivorous plague immunoprophylaxis and immunotherapy | |
| RU2306954C1 (en) | Method of preparing hyperimmune serum against colibacteriosis (escherichiosis), salmonellosis, and klebsiellosis in calves, young pigs, and lambs | |
| JPS58500443A (en) | Method for obtaining interferon and interferon complexes with antibacterial and antitoxic substances | |
| Yadav et al. | PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AGAINST INDIAN CATTLE TICK RHIPICEPHALUS MICROPLUS SALIVA TOXINS AND ITS EFFICACY IN REVERSAL OF TOXIC EFFECTS IN ALBINO MICE | |
| US11129857B2 (en) | Antivenom compositions and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180721 |