[go: up one dir, main page]

RU2644305C1 - Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment - Google Patents

Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment Download PDF

Info

Publication number
RU2644305C1
RU2644305C1 RU2017101902A RU2017101902A RU2644305C1 RU 2644305 C1 RU2644305 C1 RU 2644305C1 RU 2017101902 A RU2017101902 A RU 2017101902A RU 2017101902 A RU2017101902 A RU 2017101902A RU 2644305 C1 RU2644305 C1 RU 2644305C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
liver
hepatocytolysis
experiment
under conditions
per
Prior art date
Application number
RU2017101902A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Игорь Юрьевич Цымбалюк
Александр Михайлович Мануйлов
Александр Александрович Басов
Константин Андреевич Попов
Фатима Умаровна Хубиева
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России
Игорь Юрьевич Цымбалюк
Александр Михайлович Мануйлов
Александр Александрович Басов
Константин Андреевич Попов
Фатима Умаровна Хубиева
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, Игорь Юрьевич Цымбалюк, Александр Михайлович Мануйлов, Александр Александрович Басов, Константин Андреевич Попов, Фатима Умаровна Хубиева filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России
Priority to RU2017101902A priority Critical patent/RU2644305C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2644305C1 publication Critical patent/RU2644305C1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • GPHYSICS
    • G09EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
    • G09BEDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
    • G09B23/00Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
    • G09B23/28Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely, to experimental surgery, and can be used to reduce hepatocytolysis under conditions of temporary liver exclusion from the blood circulation. To do this, the ischemically-reperfusion damage of the liver is modeled on the rat by clamping the hepatic-duodenal ligament for 15 minutes. At that, in order to reduce hepatocytolysis after laparotomy, intraperitoneal administration of sodium dichloroacetate diluted in 0.5 ml of 0.9 % sodium chloride solution is carried out at a dosage of 300 mg per 1 kg of body weight of the animal.
EFFECT: method allows to achieve reduction of hepatocytolysis due to the activation of aerobic respiration enzyme systems in the cell, helps to increase the obtained data reliability by minimizing the possibility of influencing the result by organism own stress-protection systems.
1 cl, 1 tbl, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для снижения гепатоцитолиза в условиях временного выключения печени из кровообращения.The invention relates to medicine, namely to experimental surgery, and can be used to reduce hepatocytolysis in conditions of temporary shutdown of the liver from blood circulation.

Заболевания печени являются одними из самых распространенных в мире, зачастую требующими хирургической коррекции [Вишневский В.А. Операции на печени / В.А. Вишневский, В.А. Кубышкин, А.В. Чжао, Р.З. Икрамов. - М., 2003. - 155 с.], методы которой, так или иначе, приводят к региональной ишемии с последующей реперфузионной травмой органа. Одной из ключевых мишеней при этом является митохондрия, дисфункция которой наблюдается как при редуцировании кровотока, так и при его восстановлении. В условиях гипоксии ферментные системы клеточного дыхания являются потенциальной точкой коррекции. В связи с этим представляет интерес использование митохондриального цитопротектора дихлорацетата натрия, стимулирующего активность пируватдегидрогеназного комплекса [Knoechel T.R., Tucker A.D., Robinson С.М., Phillips С., Taylor W., Bungay P.J., Kasten S.A., Roche Т.Е., Brown D.G. Regulatory roles of the N-terminal domain based on crystal structures of human pyruvate dehydrogenase kinase 2 containing physiological and synthetic ligands // Biochemistry. - 2006. - Vol. 45. - P. 402-415].Liver diseases are one of the most common in the world, often requiring surgical correction [Vishnevsky V.A. Surgery on the liver / V.A. Vishnevsky, V.A. Kubyshkin, A.V. Zhao, R.Z. Ikramov. - M., 2003. - 155 p.], The methods of which, one way or another, lead to regional ischemia with subsequent reperfusion injury of the organ. One of the key targets in this case is mitochondria, the dysfunction of which is observed both during the reduction of blood flow and during its restoration. Under conditions of hypoxia, enzymatic systems of cellular respiration are a potential correction point. In this regard, it is of interest to use the mitochondrial cytoprotector of sodium dichloroacetate, stimulating the activity of the pyruvate dehydrogenase complex [Knoechel TR, Tucker AD, Robinson S. M., Phillips C., Taylor W., Bungay PJ, Kasten SA, Roche T.E., Brown Dg Regulatory roles of the N-terminal domain based on crystal structures of human pyruvate dehydrogenase kinase 2 containing physiological and synthetic ligands // Biochemistry. - 2006. - Vol. 45. - P. 402-415].

Известен способ коррекции ишемического поражения печени в условиях ее обескровливания, суть которого заключается во внутривенном медленном введении экспериментальному животному (собаке) 5 мг 1% раствора серотонина адипината на 20 мл физиологического раствора до и после пережатия печеночно-двенадцатиперстной связки на 30 минут [Горпинич А.Б., Симоненков А.П., Копаев О.В., Горелик С.Г., Новомлинец В.В., Лунева Н.В., Должиков А.А., Привалова И.Л. Способ коррекции ишемического поражения печени в условиях ее обескровливания // Патент на изобретение №2134576 от 11.03.998]. Серотонина адипинат - гемостатическое средство, влияющее на эндогенную вазомоторику. Указанный способ предусматривает оценку степени гепатоцеллюлярного повреждения на основании морфологических изменений в печени.A known method for the correction of ischemic damage to the liver in conditions of bloodlessness, the essence of which is the slow intravenous administration of 5 mg of a 1% solution of serotonin adipinate per 20 ml of physiological saline solution before and after compressing the hepatoduodenal ligament for 30 minutes [Gorpinich A. B., Simonenkov A.P., Kopaev O.V., Gorelik S.G., Novomlinets V.V., Luneva N.V., Dolzhikov A.A., Privalova I.L. A method for the correction of ischemic damage to the liver under conditions of its exsanguination // Patent for the invention No. 2134576 of 03/11/998]. Serotonin adipate is a hemostatic agent that affects endogenous vasomotor. The specified method involves assessing the degree of hepatocellular damage based on morphological changes in the liver.

Известно, что в условиях ишемии-реперфузии печени в нарушениях микроциркуляции большую роль играют тромбоциты. В терминальных артериолах и постсинусоидальных венулах наблюдается роллинг и адгезия тромбоцитов, связанная с увеличением тромбиновой активности и выходом тромбоцитов из системной циркуляции [Khandoga A., Biberthaler P., Messmer K. et al. // Microvasc. Res. - 2003. - Vol. 65. - №2. - P. 71-77].It is known that under conditions of ischemia-reperfusion of the liver, platelets play an important role in microcirculation disorders. In terminal arterioles and postsinusoidal venules, platelet rolling and adhesion are observed, associated with an increase in thrombin activity and the release of platelets from the systemic circulation [Khandoga A., Biberthaler P., Messmer K. et al. // Microvasc. Res. - 2003. - Vol. 65. - No. 2. - P. 71-77].

Таким образом, недостатком способа является то, что в условиях венозного полнокровия в системе воротной вены и нарушений системной гемодинамики, вызванных временной окклюзией печеночно-двенадцатиперстной связки, использование серотонина адипината, стимулирующего агрегацию и адгезию тромбоцитов [Регистр лекарственных средств России РЛС 2008. - М., «РЛС-2008», 2007. - С. 800-801], может способствовать образованию тромбоцитарных тромбов.Thus, the disadvantage of this method is that under conditions of venous congestion in the portal vein system and systemic hemodynamics disturbances caused by temporary occlusion of the hepatoduodenal ligament, the use of adipinate serotonin, which stimulates platelet aggregation and adhesion [Russian Medicines Radar Register 2008. - M. , "Radar-2008", 2007. - S. 800-801], can contribute to the formation of platelet thrombi.

Наиболее близким аналогом является способ коррекции ишемических нарушений, возникших в результате реперфузионной травмы печени, путем введения внутрибрюшинно препарата L-норвалина за 30 минут до начала ишемии в дозе 10 мг/кг с последующим повторным введением такой же дозировки препарата сразу же по окончании ишемии печени в сочетании с дистантным ишемическим прекондиционированием [Лопатин Д.В., Покровский М.В., Локтионов А.Л., Конопля А.И., Денисюк Т.А., Цепелева С.А. Способ коррекции ишемических нарушений, возникших в результате реперфузионной травмы печени // Патент на изобретение №2479872 от 11.01.2012]. Данный способ позволяет достичь снижения гепатоцитолиза, однако не лишен ряда недостатков:The closest analogue is a method for correcting ischemic disorders resulting from reperfusion injury to the liver by administering an intraperitoneal preparation of L-norvaline 30 minutes before the onset of ischemia at a dose of 10 mg / kg, followed by repeated administration of the same dosage of the drug immediately after the end of liver ischemia in combination with distant ischemic preconditioning [Lopatin D.V., Pokrovsky M.V., Loktionov A.L., Konoplya A.I., Denisyuk T.A., Tsepeleva S.A. A method for the correction of ischemic disorders resulting from reperfusion injury to the liver // Patent for the invention No. 2479872 from 01/11/2012]. This method allows to reduce hepatocytolysis, however, it is not without a number of disadvantages:

1. Использование дистантного ишемического прекондиционирования, эффект которого реализуется посредством эндогенных систем стресс-протекции за счет собственных гуморальных, нейрогенных и внутриклеточных адаптационных механизмов организма [Лихванцев В.В., Мороз В.В., Гребенчиков О.А., Гороховатский Ю.И., Заржецкий Ю.В., Тимошин С.С., Левиков Д.И., Шайбакова В.Л. Ишемическое и фармакологическое прекондиционирование // Общая реаниматология. - 2012. - Т. VIII. - №1. - С. 61-66], что снижает достоверность получаемых результатов. Также применение этого метода несет потенциальную опасность ишемических эпизодов для патологически измененных тканей [Sommer С. Ischemic preconditioning: postischemic structural changes in the brain // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2008. - Vol. 67. - P. 85-92]. Кроме того, самостоятельное введение L-норвалина в аналогичной дозировке - 10 мг/кг - не приводило к выраженной коррекции гепатоцеллюлярного повреждения [Лопатин Д.В., Алехин С.А., Покровский М.В., Назаренко П.М., Трошин В.П., Колмыков Д.И., Иванова Л.В., Шапошников А.А., Жилякова Е.Т., Луценко В.Д., Сперанский С.Л., Куликовский В.Ф., Олейник Н.В., Сухотерин И.В. Коррекция ишемических и реперфузионных повреждений печени при хирургических вмешательствах с использованием метода дистантного прекондиционирования и фармакологической защиты L-норвалином // Кубанский научный медицинский вестник. - 2012. - №4 (133). - С. 171-175].1. The use of distant ischemic preconditioning, the effect of which is realized through endogenous stress protection systems due to intrinsic humoral, neurogenic, and intracellular adaptation mechanisms of the body [Likhvantsev VV, Moroz VV, Grebenchikov OA, Gorokhovatsky Yu.I. ., Zarzhetsky Yu.V., Timoshin S.S., Levikov D.I., Shaibakova V.L. Ischemic and pharmacological preconditioning // General resuscitation. - 2012 .-- T. VIII. - No. 1. - S. 61-66], which reduces the reliability of the results. The application of this method also carries the potential danger of ischemic episodes for pathologically altered tissues [Sommer C. Ischemic preconditioning: postischemic structural changes in the brain // J. Neuropathol. Exp. Neurol. - 2008 .-- Vol. 67. - P. 85-92]. In addition, self-administration of L-norvaline at a similar dosage of 10 mg / kg did not lead to a pronounced correction of hepatocellular damage [Lopatin D.V., Alekhin S.A., Pokrovsky M.V., Nazarenko P.M., Troshin V.P., Kolmykov D.I., Ivanova L.V., Shaposhnikov A.A., Zhilyakova E.T., Lutsenko V.D., Speransky S.L., Kulikovsky V.F., Oleinik N. V., Sukhoterin I.V. Correction of ischemic and reperfusion damage to the liver during surgical interventions using the method of distant preconditioning and pharmacological protection with L-norvaline // Kuban Scientific Medical Bulletin. - 2012. - No. 4 (133). - S. 171-175].

2. Технологическая сложность, обусловленная дополнительным применением метода дистантного ишемического прекондиционирования и необходимостью повторного введения препарата.2. Technological complexity due to the additional use of the method of distant ischemic preconditioning and the need for repeated administration of the drug.

3. Получение результата через 24 часа после проведения эксперимента, что в данной ситуации в большей степени отражает активацию собственных адаптационных резервов организма, чем действие самого препарата, таким образом также снижая достоверность получаемых результатов.3. Obtaining the result 24 hours after the experiment, which in this situation reflects to a greater extent the activation of the body's own adaptive reserves than the effect of the drug itself, thus also reducing the reliability of the results.

Задачи изобретения: сокращение времени эксперимента за счет исключения применения дистантного ишемического прекондиционирования, снижение трудоемкости, повышение достоверности.Objectives of the invention: reducing the time of the experiment by eliminating the use of distant ischemic preconditioning, reducing the complexity, increasing reliability.

Техническим результатом изобретения является способ снижения гепатоцитолиза в условиях частичной сосудистой изоляции печени в эксперименте, включающий использование ингибитора киназы пируватдегидрогеназы - дихлорацетата натрия - в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного, разведенного в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия.The technical result of the invention is a method of reducing hepatocytolysis in conditions of partial vascular isolation of the liver in an experiment, including the use of a kinase inhibitor of pyruvate dehydrogenase - sodium dichloroacetate - in a dosage of 300 mg per 1 kg of animal body weight, diluted in 0.5 ml of 0.9% sodium chloride solution.

Фармакологическое действие дихлорацетата натрия обусловлено тем, что он в присутствии АДФ вызывает изменения в активном центре второй изоформы киназы пируватдегидрогеназы, что приводит к ее неконкурентному ингибированию и последующей активации мультиферментного пируватдегидрогеназного комплекса (МПДК) [Stacpoole P.W., Kurtz T.L., Han Z., Langaee Т. Role of dichloroacetate in the treatment of genetic mitochondrial diseases // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2008. - Vol. 60. - №13-14. - P. 1478-1487]. Прямое увеличение активности МПДК и частичное торможение окисления длинноцепочечных жирных кислот в митохондриях в результате увеличения концентрации малонил-КоА, которое сопровождается усилением окисления пирувата, оказывает цитопротективный эффект при ишемии различных органов и тканей. Дихлорацетат натрия восстанавливает функциональную связь между гликолизом и окислительным декарбоксилированием пирувата в митохондриях, нейтрализует закисление цитоплазмы, оптимизирует расход кислорода в условиях ишемии, что важно, поскольку окисление глюкозы в митохондриях требует на 10-12% меньше кислорода, чем окисление жирных кислот при синтезе такого же количества АТФ. При этом полностью образование лактата не подавляется, что необходимо для регенерации окисленных коферментов и протекания анаэробного гликолиза. Однако содержание восстановленных коферментов существенно возрастает, что поддерживает функционирование антиоксидантной системы в условиях интенсификации образования свободных радикалов в момент реперфузии и обеспечивает быстрое восстановление энергетического метаболизма [Мануйлов A.M., Попов К.А., Цымбалюк И.Ю., Литвинова М.Г., Хубиева Ф.У. Биологическая активность дихлорацетата натрия: концепции и механизмы (обзор литературы) // Кубанский научный медицинский вестник. - 2016. - №6 (161). - С. 157-165].The pharmacological effect of sodium dichloroacetate is due to the fact that in the presence of ADP it causes changes in the active center of the second isoform of the pyruvate dehydrogenase kinase isoform, which leads to its non-competitive inhibition and subsequent activation of the multienzyme pyruvate dehydrogenase complex (MPDC) [Stacpoole PW, Kurtz TL, Han Z, Han Z., Han Z. Role of dichloroacetate in the treatment of genetic mitochondrial diseases // Advanced Drug Delivery Reviews. - 2008 .-- Vol. 60. - No. 13-14. - P. 1478-1487]. A direct increase in MPDC activity and partial inhibition of the oxidation of long chain fatty acids in mitochondria as a result of an increase in the concentration of malonyl-CoA, which is accompanied by an increase in the oxidation of pyruvate, has a cytoprotective effect in ischemia of various organs and tissues. Sodium dichloroacetate restores the functional relationship between glycolysis and oxidative decarboxylation of pyruvate in mitochondria, neutralizes cytoplasmic acidification, optimizes oxygen consumption under ischemic conditions, which is important since glucose oxidation in mitochondria requires 10-12% less oxygen than fatty acid oxidation in the synthesis of the same the amount of ATP. In this case, the formation of lactate is not completely suppressed, which is necessary for the regeneration of oxidized coenzymes and the course of anaerobic glycolysis. However, the content of reduced coenzymes increases significantly, which supports the functioning of the antioxidant system under conditions of intensification of the formation of free radicals at the time of reperfusion and provides a quick restoration of energy metabolism [Manuylov AM, Popov KA, Tsymbalyuk I.Yu., Litvinova MG, Khubieva F.U. The biological activity of sodium dichloroacetate: concepts and mechanisms (literature review) // Kuban Scientific Medical Bulletin. - 2016. - No. 6 (161). - S. 157-165].

Способ позволяет достичь снижения гепатоцитолиза за счет активации ферментных систем аэробного дыхания в клетке; обеспечивает уменьшение трудоемкости и сокращение времени эксперимента за счет исключения применения дистантного ишемического прекондиционирования; способствует повышению достоверности получаемых данных за счет минимизации возможности влияния на получаемый результат собственных систем стресс-протекции организма.The method allows to achieve a reduction in hepatocytolysis due to the activation of enzymatic systems of aerobic respiration in the cell; provides a decrease in labor input and a reduction in the experiment time by eliminating the use of distant ischemic preconditioning; It helps to increase the reliability of the obtained data by minimizing the possibility of influencing the result of our own systems of stress protection of the body.

Сущностью способа является то, что снижение гепатоцитолиза вызывают путем интраперитонеального введения животному дихлорацетата натрия, разведенного в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного.The essence of the method is that a decrease in hepatocytolysis is caused by intraperitoneal administration of sodium dichloroacetate diluted in 0.5 ml of 0.9% sodium chloride solution to the animal at a dosage of 300 mg per 1 kg of animal body weight.

Исследование выполнено на 60 крысах-самцах, разделенных на три группы:The study was performed on 60 male rats, divided into three groups:

1) интактные (n=20) - псевдооперированные крысы;1) intact (n = 20) - pseudo-operated rats;

2) ишемически-реперфузионное повреждение (n=20) - выполнялась лапаротомия, выделение и пережатие печеночно-двенадцатиперстной связки на 15 минут;2) ischemic-reperfusion injury (n = 20) - performed laparotomy, isolation and clamping of the hepatoduodenal ligament for 15 minutes;

3) цитопротекция дихлорацетатом натрия (n=20) - выполнялась лапаротомия, введение интраперитонеально дихлорацетата натрия по предложенному способу, выделение и пережатие печеночно-двенадцатиперстной связки на 15 минут.3) cytoprotection with sodium dichloroacetate (n = 20) - a laparotomy was performed, intraperitoneally sodium dichloroacetate was introduced according to the proposed method, and the hepatoduodenal ligament was secreted and clamped for 15 minutes.

Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.

Эксперименты проводят на крысах массой 200-230 г. Все манипуляции выполняют под общим обезболиванием Золетилом в дозе 15 мг на 1 кг внутримышечно. Производят лапаротомию и интраперитонеально вводят дихлорацетат натрия в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного, разведенный в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, затем сосудистый зажим типа "Бульдог" накладывают на печеночно-двенадцатиперстную связку на 15 минут. После окончания моделирования частичной сосудистой изоляции печени через 15 минут реперфузии производят забор крови животных из каудальной полой вены для последующего определения в плазме уровней аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT), лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Исследования выполняют на спектрофотометре "UNICO-2800" (США) с использованием коммерческих наборов реактивов фирмы «Витал Девелопмент Корпорэйшн» (Санкт-Петербург, Россия). Количественный анализ показателей АЛТ, ACT и ЛДГ производят кинетическим фотометрическим методом при длине волны 340 нм, температуре инкубации 25°C и длине оптического пути 10 мм. Для определения активностей АЛТ и ACT в пробирку вносят 500 мкл рабочего реагента и 50 мкл образца, ЛДГ - 500 мкл рабочего реагента и 10 мкл образца соответственно. Пробы тщательно перемешивают, инкубируют 60 секунд, измеряют оптическую плотность и повторяют измерение 3 раза: через 1, 2 и 3 минуты. Расчеты производят следующим образом. Вычисляют среднее изменение оптической плотности за 1 минуту (ΔЕ/мин), далее определяют активность АЛТ, ACT и ЛДГ в плазме крови (А) в Ед./л по формуле: A=ΔE/мин×F, где F - фактор для расчета, значение которого при длине волны 340 нм составляет для АЛТ и ACT - 1746, а для ЛДГ - 8095 соответственно.The experiments are carried out on rats weighing 200-230 g. All manipulations are performed under general anesthesia with Zoetil at a dose of 15 mg per 1 kg intramuscularly. A laparotomy is performed and sodium dichloroacetate is administered intraperitoneally at a dose of 300 mg per 1 kg of animal body weight, diluted in 0.5 ml of 0.9% sodium chloride solution, then the bulldog type vascular clamp is placed on the hepatoduodenal ligament for 15 minutes. After the simulation of partial vascular isolation of the liver is completed after 15 minutes of reperfusion, blood is collected from the caudal vena cava for subsequent determination of plasma levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (ACT), lactate dehydrogenase (LDH). The studies are performed on a UNICO-2800 spectrophotometer (USA) using commercial reagent kits from Vital Development Corporation (St. Petersburg, Russia). Quantitative analysis of ALT, ACT, and LDH parameters is performed by the kinetic photometric method at a wavelength of 340 nm, an incubation temperature of 25 ° C, and an optical path length of 10 mm. To determine the activities of ALT and ACT, 500 μl of the working reagent and 50 μl of the sample are added to the tube, LDH - 500 μl of the working reagent and 10 μl of the sample, respectively. Samples are thoroughly mixed, incubated for 60 seconds, the absorbance is measured and the measurement is repeated 3 times: after 1, 2 and 3 minutes. The calculations are as follows. Calculate the average change in optical density in 1 minute (ΔE / min), then determine the activity of ALT, ACT and LDH in blood plasma (A) in units / l by the formula: A = ΔE / min × F, where F is the factor for calculation whose value at a wavelength of 340 nm is 1746 for ALT and ACT, and 8095 for LDH, respectively.

При статистической обработке данных рассчитывают среднее значение, величину стандартного отклонения. При сравнении используют метод сравнения гипотез по критерию Манна-Уитни. Различия считают достоверными при p<0,05.When statistical data processing is calculated, the average value, the standard deviation. When comparing using the method of comparing hypotheses by the Mann-Whitney criterion. Differences are considered significant at p <0.05.

Степень развития гепатоцитолиза оценивают по разности активностей АЛТ, ACT и ЛДГ плазмы крови животных. Активность АЛТ у животных, перенесших ишемически-реперфузионное повреждение печени, превышала показатели интактной группы в 4,6 раз. Активность ACT у животных, перенесших ишемически-реперфузионное повреждение печени, превышала показатели интактной группы в 2,8 раза. Активность ЛДГ у животных, перенесших ишемически-реперфузионное повреждение печени, превышала показатели интактной группы в 13,2 раза.The degree of development of hepatocytolysis is assessed by the difference in the activities of ALT, ACT and LDH in the blood plasma of animals. ALT activity in animals that underwent ischemic reperfusion injury to the liver exceeded the intact group 4.6 times. ACT activity in animals undergoing ischemic-reperfusion liver damage exceeded the intact group 2.8 times. LDH activity in animals that underwent ischemic reperfusion injury to the liver exceeded the indices of the intact group by 13.2 times.

В группе, животным которой вводили дихлорацетат натрия в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного, отмечалось достоверное снижение показателей, характеризующих гепатоцитолиз. Так, активность АЛТ уменьшилась в 2,03 раза в сравнении с группой с ишемически-реперфузионным повреждением, ACT - в 1,65 раза и ЛДГ - в 3,18 раз соответственно (см. таблицу).In the group whose animals were injected with sodium dichloroacetate at a dosage of 300 mg per 1 kg of animal body weight, a significant decrease in the parameters characterizing hepatocytolysis was noted. So, ALT activity decreased 2.03 times compared with the group with ischemic reperfusion injury, ACT - 1.65 times and LDH - 3.18 times, respectively (see table).

Figure 00000001
Figure 00000001

Примечание: 1 - p<0,05 - в сравнении с интактными, 2 - p<0,05 - в сравнении с ишемически-реперфузионным повреждением.Note: 1 - p <0.05 - in comparison with intact, 2 - p <0.05 - in comparison with ischemic reperfusion injury.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать снижение гепатоцитолиза в условиях частичной сосудистой изоляции печени при интраперитонеальном введении дихлорацетата натрия в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного.Thus, the results obtained indicate a decrease in hepatocytolysis in conditions of partial vascular isolation of the liver with intraperitoneal administration of sodium dichloroacetate in a dosage of 300 mg per 1 kg of animal body weight.

Примеры конкретного выполненияCase Studies

Пример №1. Крыса 24. Операция 05.09.2016 г.Example No. 1. Rat 24. Operation 05.09.2016

В операционной учебно-производственного отдела (вивария) ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России под общим обезболиванием Золетилом (15 мг на 1 кг внутримышечно) выполнена лапаротомия, выделение и пережатие сосудистым зажимом типа «Бульдог» печеночно-двенадцатиперстной связки на 15 минут. После 15-минутного периода реперфузии произведен забор крови из каудальной полой вены для определения активностей в плазме АЛТ, ACT, ЛДГ. Животное выведено из эксперимента.In the operating training and production department (vivarium) of the FSBEI HE KubGMU of the Ministry of Health of Russia, under general anesthesia with Zoetil (15 mg per 1 kg intramuscularly), a laparotomy was performed, the liver and duodenum ligament was clamped and clamped with a vascular clamp for 15 minutes. After a 15-minute period of reperfusion, blood was taken from the caudal vena cava to determine plasma activities of ALT, ACT, LDH. The animal is removed from the experiment.

Результаты биохимических исследований: АЛТ - 106,36 Ед./л, ACT - 132,21 Ед./л, ЛДГ - 1902,45 Ед./л. Полученные результаты указывают на достоверное повреждение клеток печени, сопровождающееся гепатоцитолизом.Results of biochemical studies: ALT - 106.36 U / L, ACT - 132.21 U / L, LDH - 1902.45 U / L. The results indicate a significant damage to the liver cells, accompanied by hepatocytolysis.

Пример №2. Крыса 38. Операция 14.09.2016 г.Example No. 2. Rat 38. Operation September 14, 2016

В операционной учебно-производственного отдела (вивария) ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России под общим обезболиванием Золетилом в дозировке 15 мг на 1 кг внутримышечно выполнена лапаротомия, выделена и пережата сосудистым зажимом типа «Бульдог» на 15 минут печеночно-двенадцатиперстная связка. По окончании 15-минутного периода реперфузии произведен забор крови из каудальной полой вены для определения активностей в плазме АЛТ, ACT и ЛДГ. Животное выведено из эксперимента.In the operating training and production department (vivarium) of the FSBEI HE KubGMU of the Ministry of Health of Russia under general anesthesia with Zoetil at a dose of 15 mg per 1 kg, a laparotomy was performed intramuscularly, the liver-duodenal ligament was clamped and pinched by a vascular clamp of the Bulldog type for 15 minutes. At the end of the 15-minute reperfusion period, blood was drawn from the caudal vena cava to determine plasma ALT, ACT, and LDH activities. The animal is removed from the experiment.

Результаты биохимических исследований: АЛТ - 108,23 Ед./л, ACT - 130,47 Ед./л, ЛДГ - 1952,64 Ед./л. Полученные результаты указывают на достоверное повреждение клеток печени, сопровождающееся гепатоцитолизом.Results of biochemical studies: ALT - 108.23 U / L, ACT - 130.47 U / L, LDH - 1952.64 U / L. The results indicate a significant damage to the liver cells, accompanied by hepatocytolysis.

Пример №3. Крыса 43. Операция 23.09.2016 г.Example No. 3. Rat 43. Operation September 23, 2016

В операционной учебно-производственного отдела (вивария) ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России под общим обезболиванием Золетилом (15 мг на 1 кг внутримышечно) выполнена лапаротомия, интраперитонеально введен дихлорацетат натрия в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного, разведенный в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, выделена и пережата сосудистым зажимом типа «Бульдог» печеночно-двенадцатиперстная связка на 15 минут. После 15-минутного периода реперфузии произведен забор крови из каудальной полой вены для определения в плазме активностей АЛТ, ACT, ЛДГ. Животное выведено из эксперимента.In the operating training and production department (vivarium) of the FSBEI HE Kuban State Medical University under the general anesthesia with Zoletil (15 mg per 1 kg intramuscularly), a laparotomy was performed, 300 ml per 1 kg of animal body weight diluted in 0.5 ml of sodium dichloroacetate was introduced intraperitoneally, diluted in 0.5 ml 0.9% solution of sodium chloride, isolated and pinched by a vascular clamp type "Bulldog" hepatoduodenal ligament for 15 minutes. After a 15-minute period of reperfusion, blood was taken from the caudal vena cava to determine the plasma activities of ALT, ACT, LDH. The animal is removed from the experiment.

Результаты биохимических исследований: АЛТ - 52,23 Ед./л, ACT - 81,07 Ед./л, ЛДГ - 605,78 Ед./л. Полученные результаты указывают на достоверное уменьшение повреждения клеток печени на фоне введения дихлорацетата натрия, сопровождающееся снижением гепатоцитолиза.The results of biochemical studies: ALT - 52.23 U / L, ACT - 81.07 U / L, LDH - 605.78 U / L. The results indicate a significant decrease in liver cell damage during administration of sodium dichloroacetate, accompanied by a decrease in hepatocytolysis.

Пример №4. Крыса 56. Операция 20.10.2016 г.Example No. 4. Rat 56. Operation October 20, 2016

В операционной учебно-производственного отдела (вивария) ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России под общим обезболиванием Золетилом (15 мг на 1 кг внутримышечно) выполнена лапаротомия, интраперитонеально введен дихлорацетат натрия в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного, разведенный в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, выделена и пережата сосудистым зажимом типа «Бульдог» печеночно-двенадцатиперстная связка на 15 минут. По окончании 15-минутного периода реперфузии произведен забор крови из каудальной полой вены для определения в плазме активностей АЛТ, ACT и ЛДГ. Животное выведено из эксперимента.In the operating training and production department (vivarium) of the FSBEI HE Kuban State Medical University under the general anesthesia with Zoletil (15 mg per 1 kg intramuscularly), a laparotomy was performed, 300 ml per 1 kg of animal body weight diluted in 0.5 ml of sodium dichloroacetate was introduced intraperitoneally, diluted in 0.5 ml 0.9% solution of sodium chloride, isolated and pinched by a vascular clamp type "Bulldog" hepatoduodenal ligament for 15 minutes. At the end of the 15-minute reperfusion period, blood was taken from the caudal vena cava to determine the plasma activities of ALT, ACT and LDH. The animal is removed from the experiment.

Результаты биохимических исследований: АЛТ - 53,84 Ед./л, ACT - 79,23 Ед./л, ЛДГ - 614,25 Ед./л. Полученные результаты указывают на достоверное уменьшение повреждения клеток печени на фоне введения дихлорацетата натрия, сопровождающееся снижением гепатоцитолиза.Results of biochemical studies: ALT - 53.84 U / L, ACT - 79.23 U / L, LDH - 614.25 U / L. The results indicate a significant decrease in liver cell damage during administration of sodium dichloroacetate, accompanied by a decrease in hepatocytolysis.

Предлагаемый способ позволяет:The proposed method allows you to:

- снизить гепатоцитолиз в условиях частичной сосудистой изоляции печени;- reduce hepatocytolysis in conditions of partial vascular isolation of the liver;

- уменьшить трудоемкость и время проведения исследования путем сокращения экспериментальных этапов (за счет отсутствия дополнительного применения метода дистантного ишемического прекондиционирования).- reduce the complexity and time of the study by reducing the experimental stages (due to the lack of additional application of the method of distant ischemic preconditioning).

Таким образом, способ является менее трудоемким и позволяет достичь снижения гепатоцитолиза за счет активации дихлорацетатом натрия ферментных систем аэробного дыхания в клетке.Thus, the method is less time-consuming and allows to achieve a decrease in hepatocytolysis due to the activation of sodium dichloroacetate enzyme systems of aerobic respiration in the cell.

Работа выполнена при поддержке государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации (от 28.01.2015 г., ч. 1, раздел 1) «Осуществление прикладных научных исследований, в том числе проведение доклинических исследований лекарственных средств и клинических исследований лекарственных препаратов».This work was supported by the state assignment of the Ministry of Health of the Russian Federation (of January 28, 2015, part 1, section 1) “Implementation of applied research, including preclinical studies of drugs and clinical trials of drugs”.

Claims (1)

Способ снижения гепатоцитолиза в условиях частичной сосудистой изоляции печени в эксперименте, включающий моделирование на крысах ишемически-реперфузионного повреждения печени путем пережатия печеночно-двенадцатиперстной связки на 15 минут и введение препарата, отличающийся тем, что снижение гепатоцитолиза вызывают путем интраперитонеального введения животному после лапаротомии дихлорацетата натрия, разведенного в 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия, в дозировке 300 мг на 1 кг массы тела животного.A method of reducing hepatocytolysis in conditions of partial vascular isolation of the liver in an experiment, including modeling on rats of ischemic reperfusion damage to the liver by compressing the hepatoduodenal ligament for 15 minutes and administering the drug, characterized in that the reduction of hepatocytolysis is caused by intraperitoneal administration of dichloracetamide to the animal after laparotomy diluted in 0.5 ml of a 0.9% sodium chloride solution, at a dosage of 300 mg per 1 kg of animal body weight.
RU2017101902A 2017-01-20 2017-01-20 Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment RU2644305C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017101902A RU2644305C1 (en) 2017-01-20 2017-01-20 Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017101902A RU2644305C1 (en) 2017-01-20 2017-01-20 Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2644305C1 true RU2644305C1 (en) 2018-02-08

Family

ID=61173849

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017101902A RU2644305C1 (en) 2017-01-20 2017-01-20 Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2644305C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116370447A (en) * 2023-05-23 2023-07-04 重庆医科大学 Application of sodium dichloroacetate in prevention of acute liver injury

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5587397A (en) * 1995-06-08 1996-12-24 Cypros Pharmaceutical Corporation Reduction of elevated blood lactate using twice-daily dichloroacetate
EP1708692B1 (en) * 2004-01-16 2010-07-07 The Governors Of The University Of Alberta Dichloroacetate in combination with an inotrope for cardioprotection
RU2479872C1 (en) * 2012-01-11 2013-04-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for correction of ischemic disorders caused by reperfusion liver injury
RU2540466C2 (en) * 2012-11-20 2015-02-10 Общество с ограниченной ответственностью "УНИФАРМ" (ООО "УНИФАРМ") Antioxidant and membrane stabilising agent

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5587397A (en) * 1995-06-08 1996-12-24 Cypros Pharmaceutical Corporation Reduction of elevated blood lactate using twice-daily dichloroacetate
EP1708692B1 (en) * 2004-01-16 2010-07-07 The Governors Of The University Of Alberta Dichloroacetate in combination with an inotrope for cardioprotection
RU2479872C1 (en) * 2012-01-11 2013-04-20 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Method for correction of ischemic disorders caused by reperfusion liver injury
RU2540466C2 (en) * 2012-11-20 2015-02-10 Общество с ограниченной ответственностью "УНИФАРМ" (ООО "УНИФАРМ") Antioxidant and membrane stabilising agent

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIMLICH RV et al. Effects of various doses of sodium dichloroacetate on hyperlactatemia in fed ischemic rats. Ann Emerg Med. 1989 Nov;18(11):1162-71. *
ZHUANG Z et al. Abate Cytochrome C induced apoptosome to protect donor liver against ischemia reperfusion injury on rat liver transplantation model. Am J Transl Res. 2016 Apr 15;8(4):1738-47. *
МАНУЙЛОВ A.M. и др. Биологическая активность дихлорацетата натрия: концепции и механизмы (обзор литературы). Кубанский научный медицинский вестник, 2016, N6 (161), с. 157-165. *
МАНУЙЛОВ A.M. и др. Биологическая активность дихлорацетата натрия: концепции и механизмы (обзор литературы). Кубанский научный медицинский вестник, 2016, N6 (161), с. 157-165. ZHUANG Z et al. Abate Cytochrome C induced apoptosome to protect donor liver against ischemia reperfusion injury on rat liver transplantation model. Am J Transl Res. 2016 Apr 15;8(4):1738-47. DIMLICH RV et al. Effects of various doses of sodium dichloroacetate on hyperlactatemia in fed ischemic rats. Ann Emerg Med. 1989 Nov;18(11):1162-71. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116370447A (en) * 2023-05-23 2023-07-04 重庆医科大学 Application of sodium dichloroacetate in prevention of acute liver injury

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Liao et al. The ACE2/Ang (1–7)/MasR axis as an emerging target for antihypertensive peptides
Razak et al. Multifarious beneficial effect of nonessential amino acid, glycine: a review
Kothari et al. Free radicals: their beneficial and detrimental effects on sperm function
Burton et al. Hypoxia-reoxygenation; a potential source of placental oxidative stress in normal pregnancy and preeclampsia
Wang et al. RIP3-deficience attenuates potassium oxonate-induced hyperuricemia and kidney injury
Koustova et al. Ketone and pyruvate Ringer's solutions decrease pulmonary apoptosis in a rat model of severe hemorrhagic shock and resuscitation
Jun et al. Ethyl pyruvate is renoprotective against ischemia-reperfusion injury under hyperglycemia
Hu et al. Disrupted eNOS activity and expression account for vasodilator dysfunction in different stage of sepsis
Liu et al. Nrf2/HO-1 blocks TXNIP/NLRP3 interaction via elimination of ROS in oxygen-glucose deprivation-induced neuronal necroptosis
RU2644305C1 (en) Method of hepatocytolisis reducing under conditions of liver partial vascular insulation in the experiment
Tedesco et al. Therapeutic administration of nitric oxide synthase inhibitors reverses hyperalgesia but not inflammation in a rat model of polyarthritis
Thompson et al. Increased collagen deposition in the heart of chronically hypoxic ovine fetuses
Li et al. Treadmill training improves neural function recovery in rats with spinal cord injury via JAK2/STAT3 signaling pathway and attenuating apoptosis
EP3137099B1 (en) Dnase for use in treating vaso-occlusive crisis
JP2025041961A (en) Removal of senescent cells by reducing ammonia
Bilecová-Rabajdová et al. Analysis of changes in pro (Gadd153) and anti apoptotic (Grp78) gene expression after ischemic-reperfusion injury of the small intestine
RU2469710C1 (en) Method of correction of antioxidant activity of liquid part of blood of newborn calves with iron deficiency anemia
RU2506078C1 (en) Antioxidant, stress and neuroprotective pharmacological agent sodium comenate
ES2898362T3 (en) Ovothiols for the treatment of chronic low-grade systemic inflammation (CLGSI) and related diseases
Tu et al. Triiodothyronine enhances cardiac contractility in septic rats and probably through Akt-Caspase9 pathway to reduce septic-induced cardiomyocyte apoptosis
Azevedo et al. Hyperbaric oxygen on the healing of ischemic colonic anastomosis-an experimental study in rats
RU2467722C1 (en) Method for prevention of gestosis and its complications in cows and heifers
Мотов et al. Anti-inflammatory and analgesic activity of an inducible NO synthase inhibitor in an experiment
Solin et al. Effects of Dynorphin A (1-13) on Lipid Peroxidation and the Activity of Antioxidant Enzymes in Immobilization Stress of Different Durations
Martínez de Marañón Peris Study of mitochondrial dynamics and function and autophagy and their relationship with cardiovascular complications in type 2 diabetes

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190121