RU2522816C1 - Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей - Google Patents
Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2522816C1 RU2522816C1 RU2013105782/10A RU2013105782A RU2522816C1 RU 2522816 C1 RU2522816 C1 RU 2522816C1 RU 2013105782/10 A RU2013105782/10 A RU 2013105782/10A RU 2013105782 A RU2013105782 A RU 2013105782A RU 2522816 C1 RU2522816 C1 RU 2522816C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- composition
- soft tissue
- cell
- amniotic fluid
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 230000007547 defect Effects 0.000 title claims abstract description 37
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 title claims abstract description 30
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 title claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 73
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims abstract description 21
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims abstract description 18
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102100033420 Keratin, type I cytoskeletal 19 Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 101000998011 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 19 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 9
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 5
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 abstract description 3
- 208000027205 Congenital disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 abstract description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 abstract 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 20
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 7
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010066302 Keratin-19 Proteins 0.000 description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000007847 structural defect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 210000005081 epithelial layer Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 102000004008 5'-Nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- -1 CD 105 Proteins 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101100008047 Caenorhabditis elegans cut-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 1
- 206010056340 Diabetic ulcer Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 108010036395 Endoglin Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010040925 Skin striae Diseases 0.000 description 1
- 206010040954 Skin wrinkling Diseases 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001776 amniocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003064 carboxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N disodium;3,7-dioxido-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3,5,7-tetraborabicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound [Na+].[Na+].O1B([O-])OB2OB([O-])OB1O2 UQGFMSUEHSUPRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007849 functional defect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 229930013032 isoflavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000003817 isoflavonoid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000012891 isoflavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N levan Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@](CO)(CO[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@](O)(CO)O2)O)O1 AIHDCSAXVMAMJH-GFBKWZILSA-N 0.000 description 1
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000000694 mesotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000013155 positive regulation of cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000035409 positive regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложена композиция, содержащая стволовые клетки из амниотической жидкости человека с фенотипом CD73+/CD90+/CD105+/CK19+, питательную среду, эритропоэтин, эпидермальный фактор роста и коллаген, взятые в эффективном количестве. Изобретение позволяет повысить пролиферативный потенциал и жизнеспособность клеток, обеспечив одновременно цитопротекторный эффект в отношении клеток трансплантата и стимуляцию миграции и пролиферации собственных клеток пациента, а также существенно снизить концентрацию инъецируемых клеток и активизировать васкуляризацию и регенерацию в месте дефекта и может быть использовано в терапии для устранения врожденных и приобретенных дефектов мягких тканей, возникающих в результате травм, после удаления опухолей, врожденных заболеваний, возрастных изменений или иных повреждений. 2 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и регенеративной медицины, в частности к биомедицинским клеточным продуктам, и может быть использовано для устранения врожденных и приобретенных дефектов мягких тканей, возникающих в результате травм, после удаления опухолей, врожденных заболеваний, возрастных изменений или иных повреждений.
Основной проблемой при восстановлении структурной и функциональной целости поврежденных мягких тканей является дефицит ткани для трансплантации, опасность отторжения и некроза, а также недостаточный регенеративный потенциал и низкая активность собственных клеточных элементов данного типа тканей у пациентов.
Известные средства для клеточной терапии дефектов мягких тканей в подавляющем большинстве направлены на коррекцию возрастных изменений кожи (морщины, стрии, рубцы). Они позволяют лишь временно улучшить состояние кожи, поскольку не приводят к количественному увеличению у пациента собственных жизнеспособных и функционирующих фибробластов и других мезенхимальных клеток в зоне лечения. Средства для клеточно-заместительной терапии, которые способны замещать значительную потерю мягких тканей, например восполнять обширные посттравматические или послеоперационные дефекты, на сегодняшний день практически отсутствуют.
Сдерживающим фактором в получении эффективных средств для регенерации мягких тканей является высокая уязвимость клеточных компонентов и маловыраженный регенеративный эффект. Помимо этого, не решена проблема значимой стимуляции васкуляризации после трансплантации клеточного продукта и его защиты от неблагоприятных воздействий раневого микроокружения (протеаз, ишемии, неорганизованного внеклеточного матрикса), приводящих к преждевременной гибели клеточного компонента и сокращению времени терапевтического действия на раневой процесс.
Известна композиция филлера для мягких тканей, предназначенная для облегчения или лечения повреждения кожи вследствие механических или физиологических причин, которая содержит от 1×107 до 8×107 клеток/мл аутологичных клеток дермального происхождения и от 10 до 100 мг/мл коллагена в качестве эффективного ингредиента (Патент RU 2396084, A61K 35/36, опубл. 10.08.2010).
Недостатком известной композиции является невысокий пролиферативный потенциал клеток дермального происхождения, клетки быстро разрушаются и гибнут в местах инъекций и, кроме того, не индуцируют васкуляризацию, необходимую для формирования соединительной ткани при повреждениях. Вследствие этого данная композиция обеспечивает лишь временный косметический эффект и не предназначена для восполнения обширных дефектов мягких тканей посттравматического, послеоперационного или иного характера.
Известна композиция для мезотерапии, содержащая смесь аллогенных фибробластов, полученных из пуповины новорожденного, и аутологичных фибробластов из кожи собственно пациента в соотношении 1:1 в количестве 1-5 млн клеток в 5 мл (Патент RU 2308957, A61K 35/36, опубл. 27.10.2007).
Недостатком известной композиции является непродолжительность ее терапевтического действия, а также невозможность регенерации обширных дефектов тканей. Это связано с тем, что композиция представлена в форме суспензии для инъекций, которая быстро распределяется в тканях и инактивируется под воздействием факторов иммунной системы, протеаз и других неблагоприятных агентов. Кроме того, композиция не способна стимулировать васкуляризацию, необходимую для формирования мягких тканей при повреждениях.
Известен биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, представляющий собой суспензию клеток аутологичной культуры фибробластов в 0,9% растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-3,0×106 в 1 мл биотрансплантата, интегрированных на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице в растворе фармацевтически приемлемого биосовместимого биодеградируемого препарата гиалуроновой кислоты, при этом объемное соотношение аутологичной культуры фибробластов, бесклеточной матрицы и препарата гиалуроновой кислоты составляет 4:1:1 соответственно, а в качестве фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой бесклеточной матрицы используют препарат «Сайметра», представляющий собой переработанную донорскую кожу человека, лишенную клеток и структурных иммуноспецифических белков, основу которого составляет коллаген и эластин, представленный в виде инъекционной формы (Патент RU 2428996, A61K 35/36, опубл. 20.09.2011).
Достоинством известного биотрансплантата является способность корректировать дефекты мягких тканей, универсальные для соединительной ткани всех органов, а также повышение жизнеспособности инъецируемых клеток и обеспечение их длительного сохранения в поврежденной ткани. Однако данный биотрансплантат не обеспечивает должной васкуляризации и содержит клетки с невысоким регенеративным потенциалом. Использование в биотрансплантате собственных клеток пациента делает затруднительным его применение в случае обширных дефектов мягких тканей.
Б патенте RU 2273458 описан клеточный продукт для коррекции дефектов мягких тканей лица и шеи, представляющий собой аутожировой трансплантат, полученный в результате липосакции и содержащий клетки жировой ткани (адипоциты), с добавлением в него фермента супероксид-дисмутазы в концентрации 0,01-0,1 мас.% (Патент RU2273458, A61B 17/00, опубл. 10.04.2006).
Недостатками известной композиций является то, что она не обеспечивает стимуляцию васкуляризации и не поддерживает длительное терапевтическое воздействие. В ней не предусмотрены компоненты, защищающие композицию от неблагоприятного воздействия раневого окружения. Кроме того, в ней отсутствует носитель, поддерживающий жизнеспособность клеточного компонента, а используемые клетки (адипоциты) обладают невысокими регенеративными способностями.
Известна также фармацевтическая композиция для лечения ран на коже и мягких тканях нижней конечности у больного диабетом, содержащая в водном растворе фактор эпидермального роста (EGF) в количестве от 10 до 1000 микрограмм EGF на миллилитр и дополнительно содержащая, по крайней мере, один представитель из группы, состоящей из фибронектина, О-рафинозы, левана и полиэтиленимина (PEI) в количестве от 10 микрограмм до 500 микрограмм на миллилитр, а также один природный изофлавоноид в количестве от 20 до 1000 микрограмм на миллилитр (Патент RU 2289424, A61K 38/18, опубл. 20.12.2006).
Недостатком известной композиции является неустойчивость и ограниченность терапевтического эффекта из-за неэффективной доставки и быстрого разрушения фактора эпидермального роста в зоне дефекта, что диктует необходимость его использования в высоких дозах. Наносимый на рану эпидермальный фактор роста контактирует, в основном, с омертвевшими или вяло регенерирующими тканями диабетической язвы и протеазами, находящимися в ране. Это обуславливает его быстрое разрушение и отсутствие стимуляции здоровых тканей. Кроме того, известная композиция не обеспечивает регенерацию обширных структурных дефектов мягкой ткани и предназначена для лечения только диабетической стопы.
Известна композиция для заживления раны в случае механических или патологических повреждений или ожогов, содержащая эритропоэтин (ЭПО) и по меньшей мере один гелеобразующий полисахарид, поддающийся разбуханию, в концентрации 0,4-4% мас./мас, выбранный из группы, состоящей из: гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозы, карбоксиэтилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, которая может быть получена путем смешивания ЭПО в лиофилизированной или суспендированной форме с предварительно разбухшим полисахаридом, имеющим вязкость менее 5000 мПа·с, и инициации полного разбухания, где полностью разбухший полисахарид имеет вязкость 20000-60000 мПа·с, и ЭПО присутствует в концентрации 100-500 МЕ/г гелеобразной композиции, где указанное смешивание ЭПО достигается путем диффузии ЭПО в геле в течение по меньшей мере 24 ч (Патент RU2465003, А61К 38/18, опубл. 27.10.2012).
Недостатком известной композиции является невозможность коррекции обширных структурных дефектов соединительной ткани, длительность лечения и вялость заживления раны, поскольку терапевтическое действие не сопровождается стимуляцией клеточной пролиферации и миграцией. Композиция не содержит живых клеток, и регенерация может идти только за счет собственных клеточных резервов организма.
Наиболее близким аналогом является фармацевтическая композиция, содержащая в мезенхимные стволовые клетки с фенотипом CD13+/CD29+/CD44+, выделенные из амниотической жидкости человека, и культуральную питательную среду (заявка US 2012/0141399, A61K 8/98, опубл. 07.06.2012).
Однако ближайший аналог не обеспечивает длительность и стабильность терапевтического эффекта, поскольку композиция представляет собой суспензию для инъекций, которая быстро распределяется в тканях и инактивируется под воздействием факторов иммунной системы, протеаз и других неблагоприятных агентов. Кроме того, недостатком ближайшего аналога является невозможность коррекции обширных трехмерных дефектов ткани, поскольку композиция не обеспечивает активизацию васкуляризации в месте дефекта.
Задачей изобретения является создание универсальной композиции на основе стволовых клеток человека, пригодной для коррекции структурно-функциональных дефектов мягких тканей любых размеров и локализации, с улучшенным приживлением и длительными сроками хранения, способной стимулировать васкуляризацию и регенерацию в области дефекта, и тем самым обеспечивающей устойчиво высокий терапевтический эффект.
Технический результат изобретения заключается в повышении пролиферативного потенциала и жизнеспособности клеток композиции, снижении концентрации инъецируемых клеток, активизации васкуляризации и регенерации в месте дефекта.
Технический результат изобретения достигается за счет качественного и количественного состава компонентов, представляющих собой композицию взаимодополняющих по направленности действия, существенно усиливающих пролиферацию и жизнеспособность клеток и стимулирующих васкуляризацию и регенерацию в области дефекта.
Сущность изобретения заключается в следующем: композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей содержит стволовые клетки из амниотической жидкости человека в культуральной среде и отличается тем, что дополнительно содержит коллаген, эритропоэтин (ЭПО) и эпидермальный фактор роста (ЭФР), а из клеток амниотической жидкости она содержит стволовые клетки фенотипа CD73+/CD90+/CD105+/CK19+ при следующей соотношении компонентов в 1 мл:
| Суспензия стволовых клеток | |
| амниотической жидкости человека | 5×104-5×105 клеток |
| Питательная среда | 0,01-0,3 мл |
| Эритропоэтин | 100-500 ME |
| Эпидермальный фактор роста | 5-20 нг |
| Коллаген | Остальное до 1 мл |
Амниотическая жидкость считается в настоящее время оптимальным источником получения нескольких типов клеток, среди которых: мезенхимные стволовые клетки, эпителиоциты и другие популяции амниоцитов. Однако стволовые клетки амниотической жидкости гетерогенны по происхождению и культуральным характеристикам и не все способны поддерживать стволовой статус и жизнеспособность в культуре в течение достаточного времени (Rennie К., Gruslin A., Hengstschlager М., Pei D., Cai J., Nikaido Т., Bani-Yaghoub M. Application of amniotic membrane and fluid in stem cell biology and regenerative medicine. Stem Cells Int. 2012; 2012:721538. doi: 10.1155/2012/721538. Epub 2012 Oct 10).
Изобретательский уровень настоящего изобретения обеспечивается тем, что из стволовых клеток амниотической жидкости была выделена уникальная популяция клеток, одновременно экспрессирующая маркеры мезенхимных стволовых клеток: CD73 (5' -нуклеотидаза), CD90 (Thy-1), CD 105 (Эндоглин) и маркер эпителия - цитокератин-19(СК-19), которая в присутствии коллагена, ЭПО и ЭФР достоверно способна индуцировать быструю эндотелиализацию и васкуляризацию, приводя в результате к регенерации мягких тканей и образованию новых капилляров в области поврежденной ткани. Сочетание коллагена, ЭПО и ЭФР в составе клеточной композиции позволило увеличить ее эффективность, обеспечив одновременно цитопротекторный эффект в отношении клеток трансплантата и стимуляцию регенерации тканей в ране.
Композицию для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей применяют путем инъекций в поврежденные ткани или нанесением на поврежденную ткань. Заявленный состав композиции позволяет обеспечить эффективную дозу при более низких концентрациях инъецируемых клеток и факторов роста для индуцирования нового местного кровоснабжения в области дефекта и поддержания быстрого реконструирования ткани.
Композиция по изобретению может быть использована для наращивания мягкой ткани в целях исправления или коррекции врожденных аномалий, приобретенных дефектов или косметических дефектов вне зависимости от локализации дефектов или изменений.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение композиции для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей.
Технология получения композиции по изобретению состоит из следующих основных этапов: получение популяции стволовых клеток, культивирование клеток в питательной среде, смешивание всех компонентов композиции с последующей расфасовкой готового продукта.
Получение популяции стволовых клеток (СК) из амниотической жидкости.
Клетки выделяют из амниотической жидкости центрифугированием (10 мин, 1100 об/мин) и культивируют в среде α-МЕМ (Gibco) с добавлением 15% ES-FBS (HyClone), 1% глутамина (Invitrogen), 18% Chang В и 2% Chang С (Irvine Scientific), 1% пенициллина/стрептомицина (Sigma) при 37°С в атмосфере, содержащей 5% CO2. Пассирование проводят 1:3 на 2-3 сут, когда клетки достигают монослоя.
Выявление маркеров и идентификация клеток.
Полученные клетки идентифицируют по морфологическим характеристикам и иммунофенотипу.
Анализ клеток проводят следующим образом.
Морфологический анализ.
Морфологические характеристики СК амниотической жидкости оценивают визуально с помощью фазовоконтрастного микроскопа (Olympus, СКХ31).
Иммунофенотипический анализ.
Экспрессию поверхностных антигенов клеток АЖ (7 пассаж) оценивают на проточном цитофлуориметре (Becton Dickinson FACSCalibur). Клетки трипсинизируют и окрашивают связанными с флуоресцеин изито-ционатом (FITC) или фикоэритрином (РЕ) антителами против CD73, CD90, CD 105, цитокератина 19 (BD Pharmingen или Millipore или Abcam) или неконъюгированные антитела против тех же антигенов со вторыми антителами Alexa Fluor 488 (Molecular Probes). Контролем служат FITC-или РЕ-связанные иммуноглобулины тех же изотипов и/или пробы без первых антител.
По результатам морфологического анализа выявлена однородная по фенотипу клеточная популяция. Стволовые клетки амниотической жидкости представляют собой вытянутые фибробластоподобные клетки. Проточная цитофлуориметрия показала, что 92-99% клеток положительны по маркерам CD73, CD90, CD 105 и цитокератину 19 (т.е. культура обладает уникальными свойствами стволовых клеток амниотической жидкости).
Для внесения в композицию клеток используется среда ДМЕМ с предварительно внесенными в нее факторами роста ЭФР и ЭПО - далее среда ДМЕМ ФР. Для приготовления среды ДМЕМ ФР в стандартную среду ДМЕМ с глутамином вносят ЭФР и ЭПО в конечной концентрации 80 нг/мл и 800 ME соответственно. ДМЕМ ФР может храниться в холодильной камере при +4°C не более 7 суток.
Коллагеновый гель «Коллост» поставляется производителем в стерильном виде в шприцах.
За 1 час до начала приготовления композиции шприцы с коллагеновым гелем помещают в термостат при 37°C для расплавления. После этого в стерильных условиях гель выдавливают из шприцов в необходимом количестве (3/4 от конечного объема композиции) в стеклянные или пластиковые флаконы и смешивают с суспензией клеток.
Для внесения в композицию допускаются только клетки, прошедшие тестирование на отсутствие инфекционных агентов и с нормальным кариотипом.
Клетки СК амниотической жидкости снимают с культурального флакона обычным способом, при помощи смеси растворов трипсина и Версена (1:1). Концентрацию и общее количество подсчитывают при помощи камеры Горяева, клетки отмывают от остатков трипсина центрифугированием и ресуспендируют в среде ДМЕМ ФР объемом, составляющим 1/4 от конечного объема композиции, и содержащей МСКэ в концентрации 8×105 кл/мл. Полученную суспензию смешивают с расплавленным коллагеновым гелем. Затем композицию помещают при температуре +22°C на 1 час для застывания геля.
В результате получают композицию следующего состава:
| Суспензия стволовых клеток | |
| амниотической жидкости человека | 2×105 клеток |
| Питательная среда | 0,25 мл |
| Эритропоэтин | 200 ME |
| Эпидермальный фактор роста | 20 нг |
| Коллаген | 0,75 мл |
Пример 2. Оценка пролиферативного потенциала композиции для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей.
Композицию, полученную по примеру 1, заливают культуральной средой и через 18 ч добавляют 10 мкМ предшественника синтеза ДНК BrdU (Sigma, США). Контролем служат клетки, культивированные на пластике.
Фиксацию осуществляют через 24 ч после добавления BrdU. Клетки, культивированные на пластике, снимают 0,25% трипсином/EDTA(Gibco, Invitrogen), далее коллагеновый гель растворяют коллагеназой I типа (Sigma), после чего клетки дважды отмывают PBS и фиксируют ледяным 70° этанолом в течение 30 мин.
Затем к суспензии добавляют равный объем 4N HCl и инкубируют еще 30 мин при комнатной температуре. После этого клетки осаждают центрифугированием (5 мин, 1500 об/мин) и ресуспендируют в 0,1М тетраборате натрия (рН 8,5) для нейтрализации кислоты. Затем клетки снова центрифугируют (5 мин, 1500 об/мин), ресуспендируют в 70°° этаноле и хранят при -20°C до окрашивания. Окрашивание проводят мышиными антителами против BrdU (Millipore) с последующим выявлением вторичными антителами к мышиным иммуноглобулинам, конъюгированными с флуорохромом Alexa 488 (Molecular Probes).
Подсчет окрашенных (пролиферирующих) клеток проводят с помощью флуоресцентного микроскопа (Olympus, СКХ31).
При подсчете доли клеток, включивших BrdU (синтезирующих ДНК), было выявлено, что в композиции доля таких клеток достоверно выше, чем в контроле (24,5±4% - в контроле и 38+5% в композиции).
Таким образом, пролиферативный потенциал клеток амниотической жидкости в составе композиции достоверно увеличивается по сравнению с контролем.
Пример 3. Оценка жизнеспособности клеток в составе композиции для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей.
Для определения жизнеспособности клеток используют метод TUNEL. Композицию получают по примеру 1 и заливают культуральной средой. В качестве контроля используют клетки, культивированные на пластике. Затем индуцируют апоптоз 300 мМ перекисью водорода в течение 30 минут. После этого клетки изолируют из композиции с помощью коллагеназы, фиксируют 4%-ным раствором параформальдегида, пермеабилизовывают протеиназой К.
Далее клетки инкубируют с 3%-ным раствором перекиси водорода для ингибирования эндогенной пероксидазной активности, затем с антителами (TdT Ensyme, Br-dUTP) в течение часа при 37°С во влажной камере, после чего промывают и наносят вторые антитела (Anti-BrdU-Biotin mAb), инкубируют в течение часа в темноте.
Окраску визуализируют с помощью диаминобензидина (DAB). Подсчет окрашенных (апоптотических) клеток проводят с помощью фазово-контрастного микроскопа (Olympus, СКХ31).
При подсчете доли апоптотических клеток в культуре стволовых клеток амниотической жидкости было выявлено, что в композиции этот показатель меньше, чем в контроле примерно на 30% (0,981±0,08% - в контроле и 0,6013%±0,06% в композиции).
Таким образом, жизнеспособность клеток амниотической жидкости в составе композиции достоверно увеличивается по сравнению с контролем.
Пример 4. Оценка эффективности композиции при репарации дефектов мягких тканей и васкуляризации.
В эксперименте in vivo изучалось влияние полученной по примеру 1 композиции на раневое заживление при ее введении в искусственно вызванный дефект мягких тканей - резаную рану. В качестве контроля используют раствор ЭПО и ЭФР в физиологическом растворе в концентрации 200 ME и 20 нг/мл соответственно и чистый коллаген без добавок.
Эксперимент проводят на 4-х группах животных (лабораторных мышах): одной опытной и трех контрольных группах по 20 животных в каждой группе. У животных всех исследуемых групп создают искусственный дефект - резаную рану. Для этого под эфирным наркозом мышам выбривают участок кожи на спине, обрабатывают 700 спиртом и вырезают лоскут стандартного размера в среднем 10×10 мм до глубоких слоев фасции.
В рану вводят: биофармацевтическую композицию (опытная группа), коллаген (контрольная группа 1), раствор ЭПО и ЭФР (контрольная группа 2) или оставляют раны без лечения (контрольная группа 3).
Проводят измерение размеров раны (длина и ширина) сразу после нанесения и затем каждый день в течение 14 дней. Изменения площади ран выражают в процентах от начальной.
На 3, 7, 10 и 14 день лечения забивают по пять случайно взятых животных из каждой группы.
Биопсии раны фиксируют в забуференном 10%-ном формалине, заключают в парафин и делают срезы на микротоме толщиной 5-7 мкм. Срезы окрашивают гематоксилин-эозином. Полученные препараты (по три от каждого животного) анализируют под прямым световым микроскопом и фотографируют с помощью цифровой фотокамеры. Составляют описание препаратов слепым методом (оператор не знает параметров животного). Для определения плотности сосудов срезы окрашивают антителами против маркеров эндотелия. Результаты исследования представлены в табл.1 и табл.2
| Таблица 1 | ||||||
| Оценка динамики раневого заживления по площади раны | ||||||
| Лечение | Количество животных в группе | Площадь раны (в %) | ||||
| До лечения | 3 день лечения | 7 день лечения | 10 день лечения | 14 день лечения | ||
| Контрольная | ||||||
| группа 1 (Коллаген) | 20 | 100 | 92±6% | 60±7% | 33±4% | 8±5% |
| Контрольная группа 2 (ЭПО+ЭФР) | 20 | 100 | 92±5% | 65±4% | 35±4% | 8±3% |
| Контрольная группа 3 (без лечения) | ||||||
| 20 | 100 | 90±5% | 70±7% | 35±6% | 7±3% | |
| Опытная группа | 20 | 100 | 75±4% | 435% | 24±4% | 2,5±3% |
| Таблица 2 | |||
| Оценка динамики раневого заживления по количеству образованных сосудов | |||
| Лечение | Число сосудов на 1 мм среза | ||
| 3 день лечения | 7 день лечения | 14 день лечения | |
| Контрольная группа 1 (коллаген) | 27,5±0,2 | 38,3±0,4 | 35,4±0,4 |
| Контрольная группа 2 (ЭПО+ЭФР) | 31,1±0,5 | 52,2±0,8 | 39,1±0,1 |
| Контрольная группа 2 (без лечения) | 28,9±0,8 | 39,0±0,2 | 35,8±0,3 |
| Опытная группа | 37,5±0,4 | 62,8±0,2 | 50,0±0,1 |
Как видно из табл.1 и табл.2, показатели раневого заживления (сокращение площади раны; формирование сосудов) значительно улучшены по сравнению с контрольными группами животных, не получавших лечение композицией.
Гистологическое исследование дефекта мягких тканей показало, что при лечении дефектов мягкой ткани композицией по изобретению раньше происходит формирование, созревание и фиброзирование грануляционной ткани, нормализация клеточного состава зоны дефекта, а также происходит стимулирование образования новой системы кровеносных сосудов.
На основании анализа гистологических препаратов и данных табл.1 и табл.2 можно заключить, что трансплантация биофармацевтической композиции значительно ускоряет заживление дефекта, приводит к ускорению формирования зрелой стромы и стимулирует васкуляризацию.
Эффект ускорения заживления хорошо выражен начиная с ранних сроков ранозаживления, что, вероятно, связано с эффективной стимуляцией собственной регенерации, ускоренным формированием грануляционной ткани, образование новых капилляров и кровеносных сосудов и созданием условий для миграции эпителиального пласта. К 10 суткам на гистологических препаратах отмечается формирование эпителиального пласта. Отмечается интенсивный рост сосудов, на краях дефекта наблюдается формирование придатков кожи.
Таким образом, биофармацевтическая композиция, полученная по настоящему изобретению, может быть использована для лечения дефектов мягких тканей.
Claims (1)
- Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей, содержащая стволовые клетки из амниотической жидкости человека в питательной среде, отличающаяся тем, что дополнительно содержит коллаген, эритропоэтин и эпидермальный фактор роста, а в качестве клеток амниотической жидкости она содержит стволовые клетки фенотипа CD73+/CD90+/CD105+/CK19+ при следующем содержании компонентов в 1 мл:
Суспензия стволовых клеток фенотипа CD73+/CD90+/CD105+/CK19+ амниотической жидкости человека 5×104-5×105 клеток Питательная среда 0,01-0,3 мл Эритропоэтин 100-500 ME Эпидермальный фактор роста 5-20 нг Коллаген Остальное до 1 мл
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105782/10A RU2522816C1 (ru) | 2013-02-12 | 2013-02-12 | Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013105782/10A RU2522816C1 (ru) | 2013-02-12 | 2013-02-12 | Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2522816C1 true RU2522816C1 (ru) | 2014-07-20 |
Family
ID=51217497
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013105782/10A RU2522816C1 (ru) | 2013-02-12 | 2013-02-12 | Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2522816C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080131966A1 (en) * | 2001-02-14 | 2008-06-05 | Hariri Robert J | Renovation and repopulation of decellularized tissues and cadaveric organs by stem cells |
| US20080131410A1 (en) * | 2002-02-13 | 2008-06-05 | Hariri Robert J | Placental stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells |
| RU2392314C2 (ru) * | 2003-12-30 | 2010-06-20 | Аугустинус БАДЕР | Способ регенерации ткани |
| EP2359877A1 (en) * | 2010-02-11 | 2011-08-24 | Universidad de Salamanca | Bicompatible vascularising and cicatrizing drug-delivery matrix |
| RU2468818C2 (ru) * | 2007-09-11 | 2012-12-10 | ВТОРОЙ Уилльям Г. ФРЕЙ | Способы, фармацевтические композиции и изделия для введения терапевтических клеток в центральную нервную систему животного |
-
2013
- 2013-02-12 RU RU2013105782/10A patent/RU2522816C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080131966A1 (en) * | 2001-02-14 | 2008-06-05 | Hariri Robert J | Renovation and repopulation of decellularized tissues and cadaveric organs by stem cells |
| US20080131410A1 (en) * | 2002-02-13 | 2008-06-05 | Hariri Robert J | Placental stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells |
| RU2392314C2 (ru) * | 2003-12-30 | 2010-06-20 | Аугустинус БАДЕР | Способ регенерации ткани |
| RU2468818C2 (ru) * | 2007-09-11 | 2012-12-10 | ВТОРОЙ Уилльям Г. ФРЕЙ | Способы, фармацевтические композиции и изделия для введения терапевтических клеток в центральную нервную систему животного |
| EP2359877A1 (en) * | 2010-02-11 | 2011-08-24 | Universidad de Salamanca | Bicompatible vascularising and cicatrizing drug-delivery matrix |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhou et al. | A human umbilical cord mesenchymal stem cell‐conditioned medium/chitosan/collagen/β‐glycerophosphate thermosensitive hydrogel promotes burn injury healing in mice | |
| ES3009590T3 (en) | Mesenchymal stem cells-hydrogel-biodegradable or mesenchymal stem cells-hydrogel-non-degradable support composition for skin regeneration or wound healing | |
| Chou et al. | Supercritical carbon dioxide-decellularized porcine acellular dermal matrix combined with autologous adipose-derived stem cells: its role in accelerated diabetic wound healing | |
| Salah et al. | Development of decellularized amniotic membrane as a bioscaffold for bone marrow-derived mesenchymal stem cells: ultrastructural study | |
| ES2677945T3 (es) | Producción de tejidos artificiales mediante ingeniería tisular utilizando biomateriales de fibrina y agarosa | |
| Shuai et al. | Sodium alginate hydrogel integrated with type III collagen and mesenchymal stem cell to promote endometrium regeneration and fertility restoration | |
| JP2014520844A (ja) | コラーゲン、ヒアルロン酸誘導体及び哺乳類の臍帯由来幹細胞を含む軟骨細胞治療剤 | |
| US20120027732A1 (en) | Thermoreversible collagen | |
| US11260077B2 (en) | Process for obtaining a sprinkling compound of microvascular endothelial skin cells and mesenchymal stem cells and method of application for tissue regeneration | |
| CN104055795B (zh) | 一种可注射植入剂及其制备方法 | |
| Yao et al. | Chitosan-based thermosensitive composite hydrogel enhances the therapeutic efficacy of human umbilical cord MSC in TBI rat model | |
| Cheng et al. | Influence of human platelet lysate on extracellular matrix deposition and cellular characteristics in adipose-derived stem cell sheets | |
| US20120115222A1 (en) | Composition and method for maintenance, differentiation, and proliferation of stem cells | |
| JP6918003B2 (ja) | 創傷治癒のための幹細胞 | |
| Naasani et al. | Decellularized human amniotic membrane associated with adipose derived mesenchymal stromal cells as a bioscaffold: physical, histological and molecular analysis | |
| Deng et al. | Exosomes from umbilical cord-derived mesenchymal stem cells combined with gelatin methacryloyl inhibit vein graft restenosis by enhancing endothelial functions | |
| CN113924132A (zh) | 用于伤口护理的新型多糖基水凝胶支架 | |
| WO2013025763A2 (en) | Tissue engineering using injectable, oxidized alginate hydrogels | |
| Chen et al. | Injectable and biofunctionalized fibrin hydrogels co-embedded with stem cells induce hair follicle genesis | |
| CN114269362A (zh) | 促进血管生成的方法 | |
| US20030202965A1 (en) | Methods and compositions for the preparation of cell transplants | |
| Lin et al. | Intrauterine injection of bioengineered hydrogel loaded exosomes derived from HUCM stem cells and spermidine prominently augments the pregnancy rate in thin endometrium rats | |
| JP2018534353A (ja) | 感染の防御を提供する軟組織増大のための組成物 | |
| RU2522816C1 (ru) | Композиция для клеточно-заместительной терапии дефектов мягких тканей | |
| US20160129045A1 (en) | Composition for wound-healing comprising adult stem cells and elastin-like polypeptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160213 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20161120 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180213 |