RU2520087C2 - Лечение свиней с помощью антигена pcv2 - Google Patents
Лечение свиней с помощью антигена pcv2 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2520087C2 RU2520087C2 RU2009126728/10A RU2009126728A RU2520087C2 RU 2520087 C2 RU2520087 C2 RU 2520087C2 RU 2009126728/10 A RU2009126728/10 A RU 2009126728/10A RU 2009126728 A RU2009126728 A RU 2009126728A RU 2520087 C2 RU2520087 C2 RU 2520087C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pcv2
- animals
- antigen
- antibodies
- days
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 109
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 109
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 109
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 241000282887 Suidae Species 0.000 title description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 155
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 62
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 241001673669 Porcine circovirus 2 Species 0.000 claims abstract 22
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 claims description 47
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 36
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 32
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 claims description 17
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 claims description 17
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 13
- 241001661006 Pepper cryptic virus 2 Species 0.000 claims description 10
- 238000004904 shortening Methods 0.000 claims description 6
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 2
- 101000977023 Azospirillum brasilense Uncharacterized 17.8 kDa protein in nodG 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000961984 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 30.3 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000644901 Drosophila melanogaster Putative 115 kDa protein in type-1 retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 claims 1
- 101000747702 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000758599 Escherichia coli Uncharacterized 14.7 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000768930 Lactococcus lactis subsp. cremoris Uncharacterized protein in pepC 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000976302 Leptospira interrogans Uncharacterized protein in sph 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101000778886 Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Lai (strain 56601) Uncharacterized protein LA_2151 Proteins 0.000 claims 1
- 101000768804 Micromonospora olivasterospora Uncharacterized 10.9 kDa protein in fmrO 5'region Proteins 0.000 claims 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 101001121571 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000818098 Spirochaeta aurantia Uncharacterized protein in trpE 3'region Proteins 0.000 claims 1
- 101001026590 Streptomyces cinnamonensis Putative polyketide beta-ketoacyl synthase 2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000750896 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized protein Synpcc7942_2318 Proteins 0.000 claims 1
- 101000916321 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 149 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000760088 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 20.9 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 52
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002411 adverse Effects 0.000 abstract 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 93
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 73
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 43
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 26
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 23
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 21
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 18
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 17
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 15
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 15
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 15
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 11
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 11
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 10
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 241001533384 Circovirus Species 0.000 description 9
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 8
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 7
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- -1 for example Substances 0.000 description 6
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 5
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 4
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 4
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 4
- 241001148567 Lawsonia intracellularis Species 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 4
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 4
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 4
- 208000009326 ileitis Diseases 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 4
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 4
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 4
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 4
- XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecanoic acid Chemical class CC(C)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O XDOFQFKRPWOURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 3
- 206010023138 Jaundice neonatal Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 238000013388 immunohistochemistry analysis Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N squalane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 2-decanoyloxypropyl decanoate 2-octanoyloxypropyl octanoate Chemical compound C(CCCCCCC)(=O)OCC(C)OC(CCCCCCC)=O.C(=O)(CCCCCCCCC)OCC(C)OC(=O)CCCCCCCCC JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical compound CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000006346 Neonatal Jaundice Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001504982 Pepper cryptic virus 1 Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 238000003646 Spearman's rank correlation coefficient Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC([O-])=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 12-hydroxyoctadecanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)CCCCCCCCCCC(O)=O ULQISTXYYBZJSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxyoctadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)=O KIHBGTRZFAVZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC UMHYVXGZRGOICM-AUYXYSRISA-N 0.000 description 1
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 5-(piperidin-1-ylmethyl)-3-pyridin-3-yl-5,6-dihydro-2h-1,2,4-oxadiazine Chemical compound C1CCCCN1CC(N=1)CONC=1C1=CC=CN=C1 QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 206010027256 Meningitis streptococcal Diseases 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 101150099374 PCF2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037063 Thinness Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl] (4ar,5r,6as,6br,9s,10s,12ar)-10-[(2r,3r,4s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)CO[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](C)O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1OC(=O)[C@]12CCC(C)(C)CC1C1=CCC3[C@@]([C@@]1(C[C@H]2O)C)(C)CCC1[C@]3(C)CC[C@@H]([C@@]1(C)C=O)O[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO2)O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)C(=O)NCCCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@](O)(CO)[C@H]1O NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000017555 immunoglobulin mediated immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000020442 loss of weight Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N n-decene Natural products CCCCCCCCC=C AFFLGGQVNFXPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 150000002888 oleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229920005606 polypropylene copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 229940010310 propylene glycol dioleate Drugs 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 1
- WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N ricinelaidic acid Chemical compound CCCCCC[C@@H](O)C\C=C\CCCCCCCC(O)=O WBHHMMIMDMUBKC-XLNAKTSKSA-N 0.000 description 1
- FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N ricinoleic acid Natural products CCCCCCC(O[Si](C)(C)C)CC=CCCCCCCCC(=O)OC FEUQNCSVHBHROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 201000001739 streptococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/7036—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin having at least one amino group directly attached to the carbocyclic ring, e.g. streptomycin, gentamycin, amikacin, validamycin, fortimicins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, предусматривает однократное введение эффективного количества антигена PCV2 животным, нуждающимся в таком лечении или профилактическом лечении. При использовании заявленного способа отсутствует негативное взаимодействие материнских антител против PCV2 с антигеном PCV2, в связи с чем становится реальной вакцинация или лечение животных в возрасте до 3 недель. 17 з.п.ф-лы, 3 ил., 5 табл., 4 пр.
Description
Ссылка на родственную заявку
По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на патент США серийный номер 60/870311, поданной 15 декабря 2006 г., сущность и содержание которой включены в настоящее описание в качестве ссылки.
Перечень последовательностей
В настоящую заявку входит перечень последовательностей в бумажной и электронной версии, сущность и содержание которых включены в настоящее описание в качестве ссылки. Перечень последовательностей идентичен включенному в WO 06/072065.
Предпосылки создания изобретения
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, которая содержит антиген, представляющий собой цирковирус свиней типа 2 (PCV2), которая предназначена для предупреждения, уменьшения серьезности клинических признаков, уменьшения количества случаев инфекции и/или клинических признаков и лечения нескольких клинических проявлений у животных, имеющих специфические в отношении PCV2 антитела. Предпочтительно указанные специфические в отношении PCV2 антитела представляют собой антитела, полученные от матери.
Описание известного уровня техники
Цирковирус свиней типа 2 (PCV2) представляет собой небольшой (диаметром 17-22 нм) ДНКовый, не имеющий оболочки вирус с икосаэдральной структурой, который несет одноцепочечный циклический геном. Последовательность PCV2 примерно на 80% идентична последовательности цирковируса свиней типа 1 (PCV1). Однако в настоящее время установлено, что в отличие от PCV1, который, как правило, является невирулентным, заражение свиней PCV2 ассоциируется с рядом болезненных синдромов, которые в целом обозначают как ассоциированные с цирковирусом болезни свиней (PCVAD) (известные также как болезни свиней, связанные с цирковирусом (PCVD)) (Allan и др., IPVS Congress, 2006). Как правило, основным клиническим проявлением PCVAD считается синдром послеотъемного мультисистемного истощения (PCVD) (Harding и др., Swine Health Prod; 5, 1997, c.201-203; Kennedy и др., J Comp Pathol; 122, 2000, c.9-24). PCVD поражает свиней возрастом 5-18 недель. C клинической точки зрения PCVD характеризуется истощением, бледностью кожи, худосочностью, респираторным дистресс-синдромом, диареей, желтухой новорожденных и желтухой. У некоторых пораженных заболеванием свиней проявляется комбинация всех симптомов, в то время как у других свиней проявляются только один или два из указанных симптомов (Muirhead, Vet. Rec., 150, 2002, с.456). При вскрытии трупа выявляют также микроскопические и макроскопические повреждения многих тканей и органов, причем наиболее часто повреждения встречаются в лимфоидных органах (Allan и Ellis, J Vet. Diagn. Invest., 12, 2001, cc.3-14). Обнаружена выраженная корреляция между количеством нуклеиновой кислоты или антигеном PCV2 и серьезностью микроскопических лимфоидных повреждений. Уровни смертности у свиней, пораженных PCV2, могут достигать 80%. Помимо PCVD с PCV2 связаны несколько других инфекций, включая псевдобешенство, репродуктивно-респираторный синдром свиней (PRRS), болезнь Глассера, стрептококковый менингит, сальмонеллез, колибактериоз отъемышей, связанный с кормом гепатоз и гнойную плевропневмонию. Однако к настоящему времени отсутствуют исследования, подтверждающие, что все эти клинические симптомы действительно являются непосредственным результатом заражения PCV2. Кроме того, пока не известно, можно ли какие-либо указанные клинические симптомы эффективно снижать или излечивать с помощью действующих веществ, оказывающих непосредственное воздействие на PCV2.
Подходы к лечению вызываемых PCV2 инфекций, основанные на применении ДНК-вакцины, описаны в US 6703023. В WO 03/049703 описано получение живой химерной вакцины, содержащей каркас PCV-1, в которой ген каркаса PCV-1 заменен на иммуногенный ген патогенных штаммов PCV2. В WO 99/18214 описано несколько штаммов PCV2 и процедуры получения убитой вакцины против PVC2. Однако отсутствуют данные об их эффективности. Эффективная субъединичная вакцина на основе ORF-2 (открытой рамки считывания 2) описана в WO 06/072065 и WO 2007/028823. Любая из указанных вакцин предназначена для применения с целью вакцинации/лечения свиней или молодых свиней (свиней, не достигших половой зрелости) старше 3 недель. Ни для одной из указанных вакцин не указана возможность применения на молодых поросятах возрастом меньше 3 или 2 недель.
Установлено, что полученный от матери иммунитет обеспечивает определенную степень защиты от вызываемой PCV2 инфекции и клинических состояний, связанных с PCV2-инфекцией. Установлено, что указанная защита зависит от титра антител: как правило, более высокие титры обеспечивают защитное действие, а при более низких титрах оно отсутствует (McKeown и др., Clin. Diagn. Lab. Immunol., 12, 2005, c.1347-1351). Установлено, что среднее время полужизни антител у животных-отъемышей составляет 19,0 дней и окно распада связанных с пассивной иммунизацией антител к PCV2 в популяции является относительно широким (Opriessnig и др., J. Swine Health Prod. 12, 2004, c.186-191). Установлено, что при низких титрах распад антител к PCV2, присутствие которых у животных возрастом 10-12 дней связано с пассивной иммунизацией, происходит при достижении животными возраста примерно 4,9+1,2 недель, при средних титрах антитела распадаются при достижении возраста примерно 8,1+1,9 недель, а при высоких титрах антитела распадаются при достижении возраста примерно 11,1+2,5 недель (Opriessnig и др., 37-th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians (37-й Ежегодный съезд американской ассоциации по ветеринарии свиней), 2006 г.). Обнаружена тесная корреляция между снижением титров антител и появлением первых клинических признаков PCVAD, которые возникают у поросят в возрасте примерно 5-12 недель (Allan и др., Vet. Diagn. Investigation, 12, 2000, c.3-14). Кроме того, PCV2 был выделен также из лимфатических узлов новорожденных поросят (Hirai и др., Vet. Record, 148, 2001, cc.482-484), что свидетельствует о том, что даже более молодые поросята могут поражаться PCVAD в отсутствие титров защитных материнских антител. Выраженная корреляция между титром антител и защитным действием установлена в опыте, проведенном в полевых условиях в Испании: поросята, имеющие низкие титры антител в 7-недельном возрасте (средний титр антител 1:100, диапазон от 0 до 1:320), отличались существенно более высоким коэффициентом смертности в течение следующих 5 недель, чем животные с более высокими титрами антител (Rodriguez-Arrioja и др., Am. J Vet. Res. 63, 2002, c.354-357).
Присутствие полученных от матери антител не только может обеспечивать определенную степень защиты от вирусной инфекции, что, однако, является непрогнозируемым, но так же, как известно, влияет на эффективность иммунизации. Например, более высокие титры полученных от матери антител к классическому вирусу лихорадки свиней (CSFV) ингибируют как клеточный, так и гуморальный иммунный ответ на вакцину против CSFV, а при более низких титрах не обнаружено значительного воздействия (Suradhat и Damrongwatanapokin, Vet. Microbiol, 92, 2003, c.187-194). Кроме того, было высказано предположение, что живые вакцины против PCV2 должны работать более эффективно при их введении поросятам старше 7 или 8 недель, поскольку к этому времени материнские антитела в основном распадаются. На взаимодействие с материнскими антителами влияет тип вызываемого иммунного ответа (Th1 или Th2), который зависит (среди прочего) от типа вакцины, типа антигена, типа адъюванта, а также количества введенного антигена. Следовательно, можно предположить, что взаимодействие с материнскими антителами может быть различным для разных вакцин, даже если они защищают от одного и того же патогена. В целом, полученные от матери антитела к PCV2 могут обеспечивать определенную степень защиты от PCV2, но, с другой стороны, эти антитела могут влиять на эффективность любой вакцины против PCV2.
Защита животных путем активной иммунизации усложняется также тем обстоятельством, что а) время распада полученных от матери антител (MDA) варьируется от животного к животному и б) многие болезни возникают вскоре после распада антител. С учетом этой проблемы в нескольких стратегиях предусматривается применение двух режимов вакцинации путем впрыскивания для молодых животных: первую вакцинацию осуществляют на ранней стадии жизни для защиты животных с низкими титрами MDA. Считается, что эта первая вакцинация может не обладать эффективностью для животных с высокими титрами MDA из-за взаимодействия с антигеном вакцины. Для того чтобы осуществлять защиту также и этих животных, требуется вторая вакцинация, когда ожидается, что высокие титры MDA уже снизились. Этот тип схемы вакцинации применяют в случае вакцин для многих мелких животных (например, вакцин против парвовирусов кошек, гепатита кошек), вакцин для лошадей (например, вакцин против лошадиного гриппа) и вакцин для свиней (например, против Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis). Поскольку возникновение PCVAD у животных возрастом 5 недель или старше, вероятно, связано с распадом антител к PCV2, что, как известно, происходит у животных возрастом 4-11 недель, описаны некоторые основанные на применении вакцин подходы к защите от PCVAD, в которых применяют два режима вакцинации путем впрыскивания для того, чтобы избежать возможного взаимодействия с материнскими антителами.
В WO 2007/028823 описана вакцинация поросят, которые имеют полученные от матери антитела к PCV2, с использованием более 20 мкг антигена/дозу с помощью описанного режима двух вакцинаций путем впрыскивания. Начальную вакцинацию осуществляют в возрасте от 1 до 4 недель. Всех животных повторно вакцинируют через три недели после начальной вакцинации, когда полученные от матери антитела у животных с высокими титрами MDA в момент первой вакцинации должны снизиться или исчезнуть. Таким образом, пока отсутствует информация, касающаяся точного воздействия полученных от матери антител к PCV2 на степень защиты или взаимодействия. По этой причине рекомендовано не вакцинировать поросят возрастом до трех (3) недель с использованием по меньшей мере режима одной вакцинации путем впрыскивания. Вакцинация поросят возрастом менее 3 недель связана с некоторой степенью неопределенности касательно эффективности иммунизации. С другой стороны, поросята с более низкими титрами полученных от матери антител к PCV2, хотя к настоящему времени никому не известны точные значения указанных низких уровней, не имеют достаточной защиты от инфекции, вызываемой PCV2, в возрасте до 3 недель. Другими словами, стада, в которых животные имеют низкие титры MDA, если их не вакцинируют в возрасте до 3 недель, имеют постоянный риск заражения PCV2 из-за отсутствия достаточного иммунного статуса.
Кроме того, не описано, что такие вакцины обусловливают защитный иммунитет от заражения PCV2 или снижение, уменьшение серьезности, или исцеление любых клинических симптомов, ассоциированных с ними у молодых свиней, которые уже имеют антитела к PCV2, предпочтительно которые имеют материнские антитела к PCV2.
Краткое описание чертежей
На чертежах показано:
на фиг.1 - уровни титров антител к PCV2 к моменту вакцинации;
на фиг.2 - сравнение живой массы тела у вакцинированных животных с низкими (<1:100) и высокими (>1:1000) титрами антител к PCV2;
на фиг.3 - различие в массе тела у вакцинированных (IVP) животных по сравнению с контрольными обработанными плацебо животными (СР).
Описание изобретения
Настоящее изобретение позволяет решить присущие прототипам проблемы, и оно обеспечивает выраженный прогресс в данной области техники. Основным объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2. При создании изобретения непредсказуемо и неожиданно было установлено, что присутствие антител к PCV2, полученных от матери, не влияет на эффективность вакцины, содержащей антиген PCV2.
Понятие «вакцина» или «иммуногенная композиция» (оба понятия являются синонимами) в контексте настоящего описания относится к любой фармацевтической композиции, которая содержит антиген PCV2, при этом композицию можно применять для предупреждения или лечения ассоциированного с заражением PCV2 заболевания или состояния у животного. Предпочтительная иммуногенная композиция может индуцировать, стимулировать или повышать иммунный ответ на PCV2. Под это понятие подпадают как субъединичные иммуногенные композиции, описанные ниже, так и композиции, которые содержат убитые (полностью обезвреженные) или ослабленные и/или инактивированные PCV2.
Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, где иммуногенная композиция представляет собой субъединичную иммуногенную композицию, композицию, содержащую убитые (полностью обезвреженные) или ослабленные и/или инактивированные PCV2.
В контексте настоящего описания понятие «субъединичная иммуногенная композиция» относится к композиции, которая содержит по меньшей мере один иммуногенный полипептид или антиген, но не все антигены, выведенные или являющиеся гомологами антигена PCV2. Такая композиция практически свободна от интактного PCV2. Таким образом, «субъединичную иммуногенную композицию» получают по меньшей мере из частично очищенных или фракционированных (предпочтительно практически очищенных) иммуногенных полипептидов из PCV2, или их рекомбинантных аналогов. Субъединичная иммуногенная композиция может содержать субъединицу антигена или антигенов, представляющих интерес, которые практически свободны от других антигенов или полипептидов из PCV2, или являются фракционированными. Предпочтительная иммуногенная субъединичная композиция содержит белок ORF-2 PCV2, описанный ниже. Наиболее предпочтительными являются иммуногенные субъединичные композиции, которые содержат любой из антигенов PCV2, представленных в WO 06/072065, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.
Понятие «иммунный ответ» относится, но не ограничиваясь только этим, к формированию в хозяине клеточно- и/или антитело-опосредованного иммунного ответа на представляющую интерес композицию или вакцину. Как правило, «иммунный ответ» включает, но не ограничиваясь только ими, одну или несколько из следующих реакций: производство или активацию антител, В-клеток, Т-клеток-хелперов, Т-клеток-супрессоров и/или цитотоксических Т-клеток, специфически направленных на антиген или антигены, включенный(е) в представляющую интерес композицию или вакцину. Предпочтительно организм-хозяин должен вырабатывать либо терапевтический, либо защитный иммунологический (вторичный иммунный ответ) ответ так, чтобы повышалась устойчивость к новой инфекции и/или снижалась клиническая серьезность заболевания. Такое защитное действие можно выявлять либо по снижению уровня или серьезности, либо по отсутствию описанных выше симптомов, ассоциированных с заражением хозяина PCV2, замедлению появления вируса в крови (виремия), снижению персистентности вируса, снижению общей вирусной нагрузки и/или снижению вирусной экскреции.
Понятие «антиген» в контексте настоящего описания относится к аминокислотной последовательности, которая вызывает иммунологический ответ, описанный выше. Антиген в контексте настоящего описания включает полноразмерную последовательность любых белков PCV2, их аналогов или их иммуногенных фрагментов. Понятие «иммуногенный фрагмент» обозначает фрагмент белка, который содержит один или несколько эпитопов и в результате этого вызывает описанный выше иммунологический ответ. Такие фрагменты можно идентифицировать с помощью любого из многочисленных методов картирования эпитопов, хорошо известных в данной области (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, том 66, под ред. Glenn Е. Morris, изд-во Humana Press, Totowa, New Jersey, 1996). Например, линейные эпитопы можно выявлять, например, осуществляя конкурентный синтез большого количества пептидов на твердых подложках, где пептиды соответствуют фрагментам молекулы белка, и, подвергая пептиды взаимодействию с антителами, при этом пептиды остаются прикрепленными к подложкам. Такие методы известны в данной области и описаны, например в US 4708871; у Geysen и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 1984, c.3998-4002; Geysen и др., Molec. Immunol. 23, 1986, c.709-715. Аналогично этому, конформационные эпитопы легко можно идентифицировать путем определения пространственной конформации аминокислот, например, с помощью рентгеновской кристаллографии и 2-мерного ядерного магнитного резонанса (см., например, Epitope Mapping Protocols, выше).
Понятие включает также синтетические антигены, например полиэпитопы, фланкирующие эпитопы и другие, полученные рекомбинантными или синтетическими методами антигены (см., например, Bergmann и др., Eur. J. Immunol. 23, 1993, c.2777-2781; Bergmann и др., J. Immunol. 157, 1996, c.3242-3249; Suhrbier A., Immunol, и Cell Biol. 75, 1997, c.402-408; Gardner и др., 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, 28 июня - 3 июля 1998 г.).
Следующим объектом изобретения является иммуногенная композиция, как она определена в контексте настоящего описания, которая наиболее предпочтительно содержит полипептид или его фрагмент, экспрессируемый ORF-2 PCV2, ДНК ORF-2 PCV2 и белок, которые применяют согласно изобретению для приготовления композиций и с помощью способов, предлагаемых в изобретении, представляет собой высококонсервативный домен в изолятах PCV2 и поэтому согласно изобретению любая ORF-2 PCV2 должна быть эффективной в качестве источника ДНК ORF-2 PCV и/или полипептида. Предпочтительным белком ORF-2 PCV2 является белок, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:11 в настоящем описании и в WO 06/072065. Другим предпочтительным полипептидом ORF-2 PCV является полипептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:5 в настоящем описании и в WO 06/072065. Однако специалистам в данной области должно быть очевидно, что последовательность может варьироваться в пределах 6-10% в соответствии с понятием гомологии последовательностей и все еще сохранять антигенные характеристики, которые делают ее приемлемой для включения в иммуногенные композиции. Антигенные характеристики иммунологической композиции можно оценивать, например, путем экспериментов по контрольному заражению, описанных в примере 4 WO 06/072065. Кроме того, антигенные характеристики модифицированного антигена все еще сохраняются, когда модифицированный антиген обусловливает по меньшей мере 70%, предпочтительно 80%, более предпочтительно 90% защитного иммунитета по сравнению с белком ORF-2 PCV2, который кодируется полинуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в настоящем описании и в WO 06/072065.
Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, где антиген PCV2 представляет собой антигенный белок ORF-2 PCV2, который обусловливает по меньшей мере 70%, предпочтительно 80%, более предпочтительно 90% защитного иммунитета по сравнению с белком ORF-2 PCV2, который кодируется полинуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в настоящем описании и в WO 06/072065. Предпочтительно белок ORF-2 PCV2 имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:5 в настоящем описании и в WO 06/072065.
В некоторых вариантах иммуногенные участки белка ORF-2 PCV2 применяют в качестве антигенного компонента в иммуногенной композиции, содержащей антиген PCV2. Понятие «иммуногенный участок» в контексте настоящего описания относится к укороченным и/или имеющим замены формам или фрагментам белка и/или полинуклеотида ORF-2 PCV2 соответственно. Предпочтительно такие укороченные и/или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 6 смежных аминокислот из полноразмерного полипептида ORF-2. Более предпочтительно укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 15 и еще более предпочтительно по меньшей мере 19 смежных аминокислот из полноразмерного полипептида ОRF-2. PCV. Две предпочтительные в этом плане последовательности представлены в виде SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10 в настоящем описании и в WO 06/072065. Следует понимать также, что указанные последовательности могут представлять собой часть более крупных фрагментов или укороченных форм.
Как указано выше, предпочтительным является также любой полипептид ОRF-2 PCV2, который кодируется нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. Кроме того, как должно быть очевидно специалистам в данной области, эта последовательность может варьироваться в пределах 6-20% в соответствии с понятием гомологии последовательностей и все еще сохранять антигенные характеристики, которые делают ее приемлемой для включения в иммуногенные композиции. В некоторых вариантах укороченные или имеющие замены формы или фрагменты полипептида ORF-2 PVC2 применяют в качестве антигенного компонента в композиции. Предпочтительно такие укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов из полноразмерной нуклеотидной последовательности ORF-2 PVC2, например, SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. Более предпочтительно укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 30, более предпочтительно по меньшей мере 45 и еще более предпочтительно по меньшей мере 57 смежных нуклеотидов из полноразмерной нуклеотидной последовательности ORF-2 PVC2, например, SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.
Понятие «идентичность последовательностей», как известно в данной области, относится к родству между двумя или большим количеством полипептидных последовательностей или двумя или большим количеством полинуклеотидных последовательностей, а именно между референс-последовательностью и рассматриваемой последовательностью, подлежащей сравнению с референс-последовательностью. Идентичность последовательностей определяют путем сравнения данной последовательности с референс-последовательностью после оптимального выравнивания последовательностей для получения наиболее высокой степени сходства последовательностей, что определяют по совместимости между отрезками указанных последовательностей. После выравнивания идентичность последовательностей оценивают по находящимся в одинаковых положениях основаниям (по типу «положение с положением»), например, последовательности являются «идентичными» в определенном положении, если в этом положении нуклеотиды или аминокислотные остатки идентичны. Общее количество таких идентичных положений затем делят на общее количество нуклеотидов или остатков в референс-последовательности, получая % идентичности последовательностей. Идентичность последовательностей легко можно рассчитывать с помощью известных методов, включая, но не ограничиваясь только ими, описанные в: Computational Molecular Biology, под ред. Lesk A. N., изд-во Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, под ред. Smith D.W., изд-во, Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, часть I, под ред. Griffin A.M. и Griffin H. G., изд-во Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge G., изд-во Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, под ред. Gribskov M. и Devereux J., изд-во М. Stockton Press, New York, 1991; и Carillo H. и Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48, 1988, с.1073, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительные методы определения идентичности последовательностей созданы так, чтобы получать наибольшее соответствие между изучаемыми последовательностями. Методы определения идентичности последовательностей приведены в систему в доступных общественности компьютерных программах, которые позволяют определять идентичность последовательностей для рассматриваемых последовательностей. Примерами таких программ являются, но не ограничиваясь только ими, пакет программ GCG (Devereux J. и др., Nucleic Acids Research, 12(1), 1984, с.387), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul S. F. и др., J. Molec. Biol., 215, 1990, c.403-410).
Программа BLASTX является доступной общественности от фирмы NCBI и других источников (BLAST Manual, Altschul S. и др., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul S. F. и др., J. Molec. Biol., 215, 1990, c.403-410), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки). Эти программы позволяют осуществлять оптимальное выравнивание последовательностей с помощью принимаемых по умолчанию значений, таких как вес бреши, для того, что получать наиболее высокий уровень идентичности последовательностей для рассматриваемой последовательности и референс-последовательности. В качестве иллюстрации: когда упоминается полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого по меньшей мере на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% «идентична последовательности» нуклеотидной референс-последовательности, то подразумевается, что нуклеотидная последовательность данного полинуклеотида идентична референс-последовательности за исключением того, что данная полинуклеотидная последовательность может включать вплоть до 15, предпочтительно вплоть до 10, еще более предпочтительно вплоть до 5 точечных мутаций на каждые 100 нуклеотидов нуклеотидной референс-последовательности. Другими словами, для того, чтобы полинуклеотид имел нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% с нуклеотидной референс-последовательностью, вплоть до 15%, предпочтительно 10%, еще более предпочтительно 5% нуклеотидов в референс-последовательности можно изымать путем делеции или заменять на другой нуклеотид, или вплоть до 15% нуклеотидов, предпочтительно 10%, еще более предпочтительно 5% от общего количества нуклеотидов в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Эти мутации референс-последовательности могут иметь место на 5'- или 3'-конце нуклеотидной референс-последовательности или в любом положении между этими концами, либо находясь индивидуально среди нуклеотидов в референс-последовательности, либо в виде одной или нескольких смежных групп в референс-последовательности.
Аналогично этому под полипептидом, данная аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере, например на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% аминокислотной референс-последовательности, подразумевают, что рассматриваемая аминокислотная последовательность полипептида идентична референс-последовательности за исключением того, что рассматриваемая полипептидная последовательность может включать вплоть до 15, предпочтительно вплоть до 10, еще более предпочтительно вплоть до 5 аминокислотных замен на каждые 100 аминокислот аминокислотной референс-последовательности. Другими словами, для получения данной полипептидной последовательности, которая по меньшей мере на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% идентична последовательности аминокислотной референс-последовательности, вплоть до 15%, предпочтительно вплоть до 10%, еще более предпочтительно вплоть до 5% аминокислотных остатков в референс-последовательности можно изымать путем делеции или заменять на другую аминокислоту, или вплоть до 15% аминокислот, предпочтительно вплоть до 10%, еще более предпочтительно вплоть до 5% от общего количества аминокислотных остатков в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Эти изменения референс-последовательности могут иметь место на амино- или карбоксиконце аминокислотной референс-последовательности или в любом положении между этими концевыми положениями, либо находясь индивидуально среди остатков в референс-последовательности, либо в виде одной или нескольких смежных групп в референс-последовательности. Предпочтительно положения остатков, которые являются неидентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами. Однако консервативные замены не относят к совместимым при определении идентичности последовательностей.
Определение «гомологии последовательностей» в контексте настоящего описания относится к методу определения сходства двух последовательностей. Для определения гомологии последовательностей две или большее количество последовательностей подвергают оптимальному выравниванию и при необходимости интродуцируют бреши. В отличие от оценки идентичности последовательностей при определении гомологии последовательностей консервативные аминокислотные замены считают удовлетворяющими условиям гомологии. Другими словами, для того чтобы полипептид или полинуклеотид имел 95% гомологию последовательности с референс-последовательностью 85%, предпочтительно 90%, еще более предпочтительно 95% аминокислотных остатков или нуклеотидов в референс-последовательности должны соответствовать или содержать консервативную замену на другую аминокислоту или нуклеотид, или количество аминокислот или нуклеотидов, составляющее вплоть до 15%, предпочтительно вплоть до 10%, еще более предпочтительно вплоть до 5% от общего количества аминокислотных остатков или нуклеотидов, не включая консервативные замены, в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Предпочтительно гомологичная последовательность содержит по меньшей мере участок, состоящий из 50, еще более предпочтительно из 100, еще более предпочтительно из 250, еще более предпочтительно из 500 нуклеотидов.
Понятие «консервативная замена» относится к замене аминокислотного остатка или нуклеотида на другой аминокислотный остаток или нуклеотид, имеющий сходные характеристики или свойства, включая размер, гидрофобность и т.д., в результате чего общая функциональность не изменяется существенно.
Понятие «выделенный» означает «измененный человеком» относительно его встречающегося в естественных условиях состояния, т.е., если он встречается в природе, то его изменяют или удаляют из естественного окружения, или осуществляют и то, и другое. Например, полинуклеотид или полипептид, встречающийся в естественных условиях в живом организме, не является «выделенным», но этот же полинуклеотид или полипептид, отделенный от материала, с которым он существует совместно в его естественном состоянии, является «выделенным» согласно применяемому в описании понятию.
Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, где белок ORF-2 PCV2 представляет собой любой из указанных выше белков. Предпочтительно белок ORF-2 PCV2 представляет собой:
I) полипептид, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11 в настоящем описании или в WO 06/07065;
II) любой полипептид, который по меньшей мере на 80% гомологичен полипептиду, указанному в I),
III) любой иммуногенный фрагмент полипептидов, указанных в I) и/или II),
IV) иммуногенный фрагмент, указанный в III), который содержит по меньшей мере 10 смежных аминокислот, входящих в последовательности, представленные в SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10 или SEQ ID NO:11 в настоящем описании или в WO 06/072065,
V) полипептид, который кодируется ДНК, содержащей последовательность, представленную в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в настоящем описании или в WO 06/072065.
VI) любой полипептид, кодируемый полинуклеотидом, который по меньшей мере на 80% гомологичен полинуклеотиду, указанному в V),
VII) любой иммуногенный фрагмент полипептидов, которые кодируются полинуклеотидом, указанным в V) и/или VI),
VIII) иммуногенный фрагмент, указанный в VII), где полинуклеотид, кодирующий иммуногенный фрагмент, содержит по меньшей мере 30 смежных нуклеотидов, входящих в последовательности, которые представлены в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в настоящем описании или в WO 06/072065.
Предпочтительно любой из указанных иммуногенных фрагментов имеет иммуногенные характеристики белка ORF-2 PCV2, кодируемого последовательностями, которые представлены в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в настоящем описании или в WO 06/07065.
Таким образом, согласно следующему объекту изобретения белок ORF-2 PCV2 содержится в иммуногенной композиции с таким уровнем включения антигена, который является эффективным для индукции требуемого иммунного ответа, а именно для снижения количества случаев, уменьшения серьезности или предупреждения или снижения одного или нескольких клинических симптомов, являющихся результатом заражения PCV2 или ассоциированных с ним. Предпочтительно уровень включения белка ORF-2 PCV2 соответствует по меньшей мере 0,2 мкг антигена/мл конечной иммуногенной композиции (мкг/мл), более предпочтительно от примерно 0,2 до примерно 400 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,3 до примерно 200 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,35 до примерно 100 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,4 до примерно 50 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,45 до примерно 30 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 18 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,6 до примерно 15 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 0,75 до примерно 8 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 1,0 до примерно 6 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 1,3 до примерно 3,0 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 1,4 до примерно 2,5 мкг/мл, еще более предпочтительно от примерно 1,5 до примерно 2,0 мкг/мл и наиболее предпочтительно примерно 1,6 мкг/мл.
Согласно еще одному объекту изобретения уровень включения антигена ORF-2 PCV составляет по меньшей мере 0,2 мкг белка ORF-2 PCV2, описанного выше, на дозу конечной антигенной композиции (мкг/дозу), более предпочтительно от примерно 0,2 до примерно 400 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,3 до примерно 200 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,35 до примерно 100 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,4 до примерно 50 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,45 до примерно 30 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 18 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,6 до примерно 15 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,75 до примерно 8 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,0 до примерно 6 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,3 до примерно 3,0 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,4 до примерно 2,5 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,5 до примерно 2,0 мкг/дозу и наиболее предпочтительно примерно 1,6 мкг/дозу. При создании изобретения неожиданно было установлено, что уровень включения белка ORF-2 PCV2 (содержание антигена) из расчета 20 мкг/дозу, предпочтительно примерно от 0,5 до 18 мкг/дозу, может обусловливать иммунитет у молодых животных и/или у животных, позитивных в отношении антител к PCV2, в частности, которые являются позитивными в отношении полученных от матери антител. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят менее 20 мкг/дозу, предпочтительно примерно от 0,5 до 18 мкг/дозу антигена PCV2 или иммуногенной композиции, содержащей антиген PCV2. Указанный антиген PCV2 представляет собой любой из указанных в настоящем описании. Предпочтительно указанный антиген PCV2 представляет собой любой белок ORF-2 PCV2, предпочтительно любой белок ORF-2 PCV2, представленный в настоящем описании.
Полипептид ORF-2 PCV2, применяемый в иммуногенной композиции, предлагаемой в настоящем изобретении, можно получать любым путем, включая выделение и очистку ORF-2 PCV2, стандартный метод синтеза белков и метод рекомбинантной ДНК. Предпочтительные методы получения полипептида ORF-2 PCV2 представлены в WO 06/072065, сущность и содержание которой полностью включены в настоящее описание в качестве ссылки. В целом, метод состоит в следующем: заражают чувствительные клетки рекомбинантным вирусным вектором, который содержит кодирующие последовательности ДНК ORF-2 PCV2, экспрессируют полипептид ORF-2 PCV2 с помощью рекомбинантного вируса и выделяют экспрессируемый полипептид ORF-2 PCV2 из супернатанта путем фильтрации, и инактивируют общепринятым методом, предпочтительно используя бинарный этиленимин (БЭИ), который затем нейтрализуют для прекращения процесса инактивации.
Понятие «иммуногенная композиция» в контексте настоящего описания относится также к композиции, которая содержит I) любой белок ORF-2 PCV2, описанный выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, и II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, предпочтительно рекомбинантного бакуловируса. Кроме того, иммуногенная композиция может содержать I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей часть вирусного вектора, экспрессирующего белок ORF-2 PCV2, предпочтительно рекомбинантного бакуловируса, и III) часть супернатанта клеточной культуры.
Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, где антиген PCV2 представляет собой рекомбинантный ORF-2 PCV2, предпочтительно экспрессируемый в бакуловирусе ORF-2 PCV2. Предпочтительно рекомбинантные или экспрессируемые в бакуловирусе ORF-2 PCV2 имеют указанную выше последовательность.
Понятие «иммуногенная композиция» в контексте настоящего описания относится также к композиции, которая содержит I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, предпочтительно рекомбинантного бакуловируса, и III) часть клеточной культуры; где примерно 90% компонентов имеют размер менее 1 мкм.
Понятие «иммуногенная композиция» в контексте настоящего описания относится также к композиции, которая содержит I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, предпочтительно рекомбинантного бакуловируса, III) часть клеточной культуры, IV) инактивирующий агент, предназначенный для инактивации рекомбинантного вирусного вектора, предпочтительно БЭИ, где примерно 90% компонентов I)-III) имеют размер менее 1 мкм. Предпочтительно БЭИ присутствует в концентрациях, эффективных для инактивации бакуловируса, предпочтительно от 2 до примерно 8 мМ БЭИ, предпочтительно примерно 5 мМ БЭИ.
Понятие «иммуногенная композиция» в контексте настоящего описания относится также к композиции, которая содержит I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, III) часть клеточной культуры, IV) инактивирующий агент, предназначенный для инактивации рекомбинантного вирусного вектора, предпочтительно БЭИ, и V) нейтрализующий агент, предназначенный для прекращения инактивации, опосредуемой инактивирующим агентом, где примерно 90% компонентов I)-III) имеют размер менее 1 мкм. Предпочтительно, если инактивирующий агент представляет собой БЭИ, то указанная композиция содержит тиосульфат натрия в количествах, эквивалентных количеству БЭИ.
Полипептид включают в композицию, которую можно вводить животному, чувствительному к заражению PCV2. В предпочтительных вариантах в композицию можно включать дополнительные компоненты, известные специалистам в данной области (см. также Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-е изд., изд-во Mack Publ., Easton, 1990). Кроме того, в состав композиции могу входить один или несколько приемлемых для применения в ветеринарии носителей. В контексте настоящего описания понятие «приемлемый для применения в ветеринарии носитель» включает, но не ограничиваясь только ими, любые из перечисленных или все растворители, дисперсионные среды, материалы для нанесения покрытия, адъюванты, стабилизаторы, разбавители, консерванты, антибактериальные и противогрибковые агенты, агенты для придания изотоничности, замедляющие адсорбцию агенты и т.п. В предпочтительном варианте осуществления изобретения иммуногенная композиция содержит белок ORF-2 PCV2, описанный выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, который смешивают с адъювантом, предпочтительно карбополом, и физиологическим раствором.
Специалистам в данной области должно быть очевидно, что композиция, которую применяют согласно изобретению, может включать известные пригодные для инъекции физиологически приемлемые стерильные растворы. Для приготовления готового к применению раствора для парентеральной инъекции или инфузии широко используют водные изотонические растворы, такие, например, как физиологический раствор или соответствующие растворы белков плазмы. Кроме того, иммуногенные композиции и вакцины, предлагаемые в настоящем изобретении, могут включать разбавители, агенты для придания изотоничности, стабилизаторы или адъюванты. Разбавители могут представлять собой воду, физиологический раствор, декстрозу, этанол, глицерин и т.п. Агенты для придания изотоничности могут представлять собой среди прочего хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Стабилизаторы представляют собой среди прочего альбумин и соли щелочных металлов и этилендиаминтетрауксусной кислоты.
Понятие «адъюванты» в контексте настоящего описания может относиться к гидроксиду алюминия и фосфату алюминия, сапонинам, таким, например, как Quil A, QS-21 (фирма Cambridge Biotech Inc., Кэмбридж, шт.Массачусетс), GPI-0100 (фирма Galenica Pharmaceuticals, Inc., Бирмингем, шт.Алабама), эмульсии вода-в-масле, эмульсии масло-в-воде, эмульсии вода-в-масле-в-воде. Основой эмульсии может являться, в частности, легкое жидкое парафиновое масло (соответствующее Европейской фармакопеи); изопреноидное масло, такое как сквалан или сквален; масло, образовавшееся в результате олигомеризации алкенов, прежде всего изобутена или децена; эфиры кислот или спиртов, содержащие линейную алкильную группу, более конкретно растительные масла, этилолеат, ди(каприлат/капрат) пропиленгликоля, три(каприлат/капрат) глицерина или диолеат пропиленгликоля; эфиры разветвленных жирных кислот или спиртов, в частности, эфиры изостеариновой кислоты. Масла применяют в сочетании с эмульгаторами для получения эмульсии. Эмульгаторы предпочтительно представляют собой неионогенные поверхностно-активные вещества, прежде всего сложные эфиры сорбитана, маннида (например, безводный маннитолеат), гликоля, полиглицерина, пропиленгликоля и олеиновой, изостеариновой, рицинолеиновой или гидроксистеариновой кислоты, которые необязательно являются этоксилированными, и блок-сополимеры полиоксипропилена-полиоксиэтилена, в частности продукты типа Pluronic, прежде всего L121 (см. Hunter и др., The Theory and Practical Application of Adjuvants, под ред. Stewart-Tull D. E. S., изд-во John Wiley and Sons, NY, c.51-94, 1995 и Todd и др., Vaccine 15, 1997, c.564-570).
Например, можно применять SPT-эмульсию, описанную на с.147 в: «Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach», под ред. M. Powell и М. Newman, изд-во Plenum Press, 1995, и эмульсию MF59, описанную на с.183 в этой же публикации.
Другим примером адъюванта является соединение, выбранное из полимеров акриловой или метакриловой кислоты и сополимеров малеинового ангидрида и алкенильного производного. Предпочтительными адъювантами являются полимеры акриловой или метакриловой кислоты, прежде всего, сшитые с простыми полиалкениловыми эфирами сахаров или многоатомными спиртами. Эти соединения известны под названием карбомеры (Phameuropa, т.8, №. 2 июня 1996 г.). Специалистам в данной области в качестве ссылки можно предложить US 2909462, в котором описаны указанные акриловые полимеры, сшитые с полигидроксилированным соединением, которое имеет по меньшей мере 3 гидроксильные группы, предпочтительно не более 8, при этом атомы водорода по меньшей мере трех гидроксильных групп замещены ненасыщенными алифатическими радикалами, которые имеют по меньшей мере 2 атома углерода. Предпочтительными являются радикалы, которые содержат от 2 до 4 атомов углерода, например, винильные, аллильные и другие ненасыщенные группы ряда этилена. Ненасыщенные радикалы могут сами содержать другие заместители, такие как метил. Наиболее предпочтительными являются продукты, поступающие в продажу под названием карбопол (фирма BF Goodrich, шт.Огайо). Их сшивают с аллилсахарозой или аллилпентаэритритолом. Среди них прежде всего следует упомянуть карбопол 974Р, 934Р и 971P. Наиболее предпочтительным для применения является карбопол 971P. Наиболее предпочтительно применять карбопол, в частности можно применять карбопол 971P, предпочтительно в количествах от примерно 500 мкг до примерно 5 мг на дозу, еще более предпочтительно в количестве от примерно 750 мкг до примерно 2,5 мг на дозу и наиболее предпочтительно в количестве примерно 1 мг на дозу.
Также приемлемыми адъювантами среди прочего являются, но не ограничиваясь только ими, система RIBI-адъювантов (фирма Ribi Inc.), блок-сополимеры (фирма CytRx, Атланта, шт.Джорджия), SAF-M (фирма Chiron, Emeryville, шт.Калифорния), монофосфорил-липид А, адъювант на основе амина липида авридина, термолабильный энтеротоксин Е.coli (рекомбинантный или нет), токсин холеры, IMS 1314 или мурамил-дипептид.
Предпочтительно адъювант добавляют в количестве от примерно 100 мкг до примерно 10 мг на дозу. Еще более предпочтительно адъювант добавляют в количестве от примерно 100 мкг до примерно 10 мг на дозу. Еще более предпочтительно адъювант добавляют в количестве от примерно 500 мкг до примерно 5 мг на дозу. Еще более предпочтительно адъювант добавляют в количестве от примерно 750 мкг до примерно 2,5 мг на дозу. Наиболее предпочтительно адъювант добавляют в количестве примерно 1 мг на дозу.
Кроме того, композиция может включать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей. В контексте настоящего описания понятие «фармацевтически приемлемый носитель» включает любой из перечисленных или все растворители, дисперсионные среды, материалы для нанесения покрытия, стабилизаторы, разбавители, консерванты, антибактериальные и противогрибковые агенты, агенты для придания изотоничности, замедляющие адсорбцию агенты и т.п. Наиболее предпочтительно композиция, предлагаемая в изобретении, содержит белок ORF-2 PCV2, выделенный из супернатанта культивируемых in vitro клеток, где указанные клетки инфицируют рекомбинантным вирусным вектором, который содержит ДНК ORF-2 PCV2 и экспрессирует белок ORF-2 PCV2, и где указанную клеточную культуру обрабатывают от примерно 2 до примерно 8 мМ БЭИ, предпочтительно примерно 5 мМ БЭИ, для инактивации вирусного вектора и нейтрализующего агента, взятого в эквивалентной концентрации, предпочтительно раствором тиосульфат натрия в конечной концентрации от примерно 2 до примерно 8 мМ, предпочтительно примерно 5 мМ.
Настоящее изобретение относится также к иммуногенной композиции, которая содержит I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, III) часть клеточной культуры, IV) инактивирующий агент, предназначенный для инактивации рекомбинантного вирусного вектора (предпочтительно БЭИ), и V) нейтрализующий агент, предназначенный для прекращения инактивации, опосредуемой инактивирующим агентом, предпочтительно тиосульфат натрия в количествах, эквивалентных количеству БЭИ; и VI) приемлемый адъювант, предпочтительно карбопол 971 в указанных выше количествах; где примерно 90% компонентов I)-III) имеют размер менее 1 мкм. Согласно еще одному объекту изобретения указанная иммуногенная композиция содержит также фармацевтически приемлемую соль, предпочтительно фосфат, в физиологически приемлемых концентрациях. Предпочтительно значение рН указанной иммуногенной композиции доводят до физиологического значения рН, т.е. примерно от 6,5 до 7,5.
В контексте настоящего описания иммуногенная композиция представляет собой также композицию, которая содержит в одном мл: I) по меньшей мере 1,6 мкг белка ORF-2 PCV2, описанного выше, предпочтительно менее 20 мкг, II) по меньшей мере часть бакуловируса, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, III) часть клеточной культуры, IV) примерно от 2 до 8 мМ БЭИ, V) тиосульфат натрия в количествах, эквивалентных количеству БЭИ, и VI) примерно 1 мг карбопола 971, и VII) фосфат в физиологически приемлемой концентрации; где примерно 90% компонентов I)-III) имеют размер менее 1 мкм, и значение рН указанной иммуногенной композиции доведено примерно до 6,5-7,5.
Иммуногенные композиции могут содержать также один или несколько других иммуномодулирующих агентов, таких, например, как интерлейкины, интерфероны или другие цитокины. Иммуногенные композиции могут содержать также гентамицин и мертиолат. Хотя специалист в данной области легко может определить количества и концентрации адъювантов и добавок, которые можно применять в контексте настоящего изобретения, в настоящем изобретении предложены композиции, содержащие от примерно 50 до примерно 2000 мкг адъюванта и предпочтительно примерно 250 мкг/мл дозы композиции вакцины. Так, иммуногенная композиция, предлагаемая в изобретении, представляет собой также композицию, которая содержит от примерно 1 до примерно 60 мкг/мл антибиотиков и более предпочтительно менее примерно 30 мкг/мл антибиотиков.
В контексте настоящего описания иммуногенная композиция представляет собой также композицию, которая содержит I) любой из белков ORF-2 PCV2, описанных выше, предпочтительно в указанных выше концентрациях, II) по меньшей мере часть вирусного вектора, экспрессирующего указанный белок ORF-2 PCV2, III) часть клеточной культуры, IV) инактивирующий агент, предназначенный для инактивации рекомбинантного вирусного вектора, предпочтительно БЭИ, и V) нейтрализующий агент, предназначенный для прекращения инактивации, опосредуемой инактивирующим агентом, предпочтительно тиосульфат натрия в количествах, эквивалентных количеству БЭИ; VI) приемлемый адъювант, предпочтительно карбопол 971 в указанных выше количествах; VII) соляной буфер в фармацевтически приемлемой концентрации, предпочтительно фосфат, и VIII) противомикробное действующее вещество; где примерно 90% компонентов 1)-Ш) имеют размер менее 1 мкм. Понятие «иммуногенная композиция, которую можно применять согласно изобретению», относится также к Ingelvac® CircoFLEX™ (фирма Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc, St Joseph, шт.Миссури, США), CircoVac® (фирма Merial SAS, Лион, Франция), CircoVent (фирма Intervet Inc., Millsboro, шт.Делавэр, США) или Suvaxyn PCV-2 One Dose® (фирма Fort Dodge Animal Health, Канзас-Сити, шт.Канзас, США).
Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют полученные от матери антитела к PCV2, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, где иммуногенная композиция представляет собой CircoFLEX®, CircoVac®, CircoVent или Suvaxyn PCV-2 One Dose®. Наиболее предпочтительно иммуногенная композиция представляет собой Ingelvac® CircoFLEX™, и/или антиген PCV2 представляет собой ORF-2 PCV2, предпочтительно, экспрессируемый в бакуловирусе белок ORF-2 PCV2, наиболее предпочтительно включенный в Ingelvac® CircoFLEX™.
Для изучения возможного взаимодействия антигена PCV2 с материнским антителом проводили опыт, в котором определяли титры антитела у подопытных животных в момент вакцинации, и затем животных разделяли на группы с низким, средним или высоким титром антител: геометрические средние значения титров <1:100 рассматривались как низкие титры, титры от 1:100 до 1:1000 рассматривались как средние титры, а титры >1:1000 рассматривались как высокие титры антител. Эта схема группировки животных соответствует схеме, которую применяли в полевом опыте, проведенном в Канаде, в котором титры антител 1:80 рассматривались как низкие, титры антител 1:640 как средние, а титры антител >1:1280 как высокие (Larochelle и др., Can. J. Vet. Res.; 67, 2003, c.114-120). Для того чтобы проанализировать влияние низких, средних и высоких титров антител в момент вакцинации на виремию, вакцинированных и обработанных плацебо животных сравнивали в отношении начала, окончания, продолжительности виремии, количества дней, в которые были получены положительные образцы, и вирусной нагрузки. При создании изобретения неожиданно было установлено, что присутствие антител к PCV2, в частности полученных от матери антител, не оказывало существенного влияния на какой-либо из указанных параметров. Другими словами, при создании изобретения неожиданно было установлено, что эффективность антигена PCV2 в отношении предупреждения или лечения заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2 у животных, не зависела от присутствия в день вакцинации антител к PCV2, предпочтительно от титра антител PCV2 вплоть до 1:100, предпочтительно превышающего 1:100, еще более предпочтительно превышающего 1:250, еще более предпочтительно превышающего 1:500, еще более предпочтительно 1:640; еще более предпочтительно превышающего 1:750, наиболее предпочтительно превышающего 1:1000. Это явление продемонстрировано в эксперименте с использованием одной вакцинации путем впрыскивания, т.е. когда антиген PCV2 вводили только один раз и без какой-либо последующей обработки антигеном PCV2.
Методы выявления и количественной оценки антител к PCV2 хорошо известны в данной области. Например, выявление и количественную оценку антител к PCV2 можно осуществлять с помощью метода непрямой иммунофлуоресценции, описанного у Magar и др., Can. J. Vet Res.; 64, 2000, c.184-186 или у Magar и др., J. Comp. Pathol.; 123, 2000, c.258-269. Другие методы количественной оценки антител к PCV2 описаны у Opriessnig и др., 37-th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians (37-й Ежегодный съезд американской ассоциации по ветеринарии свиней), 2006 г.). Кроме того, в примере 2 описан также непрямой иммунофлуоресцентный анализ, который может применять специалист в данной области. В случае спорных результатов и при любых сомнениях следует иметь в виду, что указанные в настоящем описании титры антител к PCV2 относятся к титрам, которые установлены/могут быть установлены с помощью анализа, описанного в примере 2.
Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, прежде всего полученные от матери антитела, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в терапевтически эффективном количестве антиген PCV2, предпочтительно из расчета менее 20 мкг/дозу, где у животного выявлен титр антител к PCV2 вплоть до 1:100, предпочтительно превышающий 1:100, еще более предпочтительно превышающий 1:250, еще более предпочтительно превышающий 1:500, еще более предпочтительно 1:640, еще более предпочтительно превышающий 1:750, наиболее предпочтительно превышающий 1:1000. Предпочтительно указанный титр антител к PCV2 определяют и оценивают количественно с помощью специфического иммунного анализа антител к PCV2, предпочтительно анализа, описанного в примере 2. Более предпочтительно указанные антитела к PCV2 представляют собой полученные от матери антитела. Наиболее предпочтительно антиген PCV2 вводят, только один раз, предпочтительно в дозе менее 20 мкг/дозу.
Поросята, которые имеют лишь низкие титры (<1:100) или средние титры (<1:1000) полученных от матери антител к PCV2, не защищены в достаточной степени от заражения PCV2, которое происходит в возрасте менее 3 недель. Поэтому требуется вакцинация на очень ранней стадии жизни. Благодаря ранее не предсказанным и неожиданным результатам, полученным при создании настоящего изобретения, и демонстрирующим отсутствие взаимосвязи между антителами к PCV2 и антигеном PCV2, вакцинация/обработка животных возрастом менее 3 недель, становится реально возможной. Кроме того, при создании изобретения неожиданно было установлено, что титры антител к PCV2, превышающие 1:1000, не оказывали влияния на эффективность вакцины против PCV2 вне зависимости от величины существующего начального титра антител. Например, вакцинация имеющих высокие титры животных (титр антител к PCV2 >1:1000) приводила к укороченной на 9,5 дня продолжительности виремии, на 11,9 дня более раннему окончанию виремии, на 1,9 дня уменьшению количества дней, в которые были получены положительные в отношении виремии образцы, и к примерно двукратному снижению суммы геномных эквивалентов/мл по сравнению с невакцинированным контрольными животными. При сравнении вакцинированных животных с «высокими», «средними» и «низкими» титрами не обнаружено существенной разницы в различных параметрах связанной с PCV2 виремии. Эти результаты свидетельствуют также о том, что в присутствии высоких титров антител к PCV2 антиген PCV2, примененный для вакцинации, еще может существенно снижать виремию в крови (окончание виремии, продолжительность виремии, вирусная нагрузка). В свете этих данных не обнаружено никаких различий в живой массе тела при сравнении животных в вакцинированных группах, имеющих низкие и высокие титры. Кроме того, у вакцинированных животных с высоким титром (>1:1000) антител к PCV2 в момент вакцинации/обработки обнаружен также существенно больший вес тела после начала виремии по сравнению с обработанными плацебо животными с начальными высокими титрами (см. фиг.3). Следовательно, возможна вакцинация/обработка животных возрастом 1 день или старше антигеном PCV2. Однако вакцинацию следует осуществлять в течение первых 8, предпочтительно первых 7 недель жизни. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, предпочтительно в возрасте 1 день или старше, но не старше 8 недель, вводят в эффективном количестве антиген PCV2. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения требуется менее 20 мкг антигена PCV2/дозу для придания иммунитета такому животному. Согласно более предпочтительному варианту осуществления изобретения антиген PCV2, предпочтительно в количестве менее 20 мкг/дозу, вводят только один раз животному, которое нуждается в таком лечении.
Таким образом, следующим более общим объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2.
Понятие «молодое животное» в контексте настоящего описания относится к животному возрастом от 1 до 22 дней. Предпочтительно под понятием молодое животное подразумевают животное возрастом от 1 до 20 дней. Более предпочтительно под понятием молодое животное подразумевают животное возрастом от 1 до 15 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 дня до 14 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 12 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 10 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 8 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 7 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 6 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 5 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 4 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 3 дней, еще более предпочтительно возрастом от 1 до 2 дней, наиболее предпочтительно животное возрастом 1 день. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, заключающийся в том, что вводят в эффективном количестве антиген PCV2 животному, которое нуждается в таком лечении, возрастом 1-22 дня, предпочтительно возрастом 1-20 дней, более предпочтительно возрастом 1-15 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-14 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-12 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-10 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-8 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-7 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-6 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-15 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-4 дня, еще более предпочтительно возрастом 1-3 дня, еще более предпочтительно возрастом 1 или 2 дня, наиболее предпочтительно возрастом 1 день. Например, установлено, что вакцинация/обработка, которую проводят в возрасте от 19 до 22 дней, является высокоэффективной вакцинацией. Кроме того, установлено, что вакцинация/обработка, которую проводят в возрасте от 12 до 18 дней, предпочтительно от 12 до 14 дней, также является очень эффективной в отношении снижения клинических симптомов, ассоциированных с заражением PCV2, снижения общей вирусной нагрузки, снижения продолжительности виремии, замедления начала виремии, прироста массы. Кроме того, установлено также, что вакцинация, которую проводят в возрасте 1 неделя, является также очень эффективной в отношении снижения клинических симптомов, ассоциированных с заражением PCV2, снижения общей вирусной нагрузки, снижения продолжительности виремии, замедления начала виремии, прироста массы. Предпочтительно для придания иммунитета указанным молодым животным требуется менее 20 мкг антигена PCV2/дозу. Таким образом, согласно более предпочтительному варианту осуществления изобретения антиген PCV2 вводят предпочтительно в количестве менее 20 мкг только один раз указанному молодому животному, которое нуждается в таком лечении.
Из-за повсеместного распространения PCV2 в полевых условиях большая часть молодых поросят является серопозитивной в отношении PCV2. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, которые имеют антитела к PCV2 в день вакцинации, заключающийся в том, что животному возрастом 1-22 дня, предпочтительно возрастом 1-20 дней, более предпочтительно возрастом 1-15 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-14 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-12 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-10 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-8 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-7 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-6 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-5 дней, еще более предпочтительно возрастом 1-4 дня, еще более предпочтительно возрастом 1-3 дня, еще более предпочтительно возрастом 1 или 2 дня, наиболее предпочтительно возрастом 1 день, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2. Предпочтительно указанное молодое животное в день вакцинации/обработки имеет выявляемый титр антител к PCV2 вплоть до 1:100, предпочтительно превышающий 1:100, еще более предпочтительно превышающий 1:250, еще более предпочтительно превышающий 1:500, еще более предпочтительно 1:640, еще более предпочтительно превышающий 1:750, наиболее предпочтительно превышающий 1:1000. Предпочтительно для придания иммунитета указанным молодым животным требуется менее 20 мкг антигена PCV2/дозу. Таким образом, согласно более предпочтительному варианту осуществления изобретения антиген PCV2 вводят предпочтительно в количестве менее 20 мкг только один раз указанному молодому животному, которое нуждается в таком лечении.
Как описано выше, вакцинация/лечение молодых животных антигеном PCV2 приводит к укорочению фазы виремии по сравнению с невакцинированными контрольными животными. Среднее укорочение времени составляет 9,5 дня по сравнению с невакцинированными контрольными животными этого же вида. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является также способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, заключающийся в том, что вводят в эффективном количестве антиген PCV2 животному, которое нуждается в таком лечении, при этом лечение или профилактика приводит к укорочению фазы виремии на 5 или более дней, предпочтительно на 6 или более дней, еще более предпочтительно на 7 или более дней, еще более предпочтительно на 8 или более дней, еще более предпочтительно на 9 дней, еще более предпочтительно на 10 дней, еще более предпочтительно на 12 дней, еще более предпочтительно на 14 дней, наиболее предпочтительно более чем на 16 дней, по сравнению с животными этого же вида из необработанной контрольной группы. В некоторых случаях фаза виремии укорачивается более чем на 20 дней. В целом, вакцинация молодых поросят приводит к снижению потери прироста веса, укорочению продолжительности виремии, более раннему окончанию виремии и пониженной вирусной нагрузке. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является также способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, заключающийся в том, что животному, которое нуждается в таком лечении, вводят в эффективном количестве антиген PCV2, при этом лечение или профилактика заражения PCV2 приводит к улучшению по сравнению с животными этих же видов из необработанной контрольной группы параметра эффективности, выбранного из группы, включающей снижение потери прироста массы, укорочение продолжительности виремии, более раннее окончание виремии, понижение вирусной нагрузки или их комбинации. Предпочтительно требуется менее 20 мкг антигена PCV2/дозу для повышения указанного выше параметра эффективности вакцины. Кроме того, для достижения повышения указанного выше параметра эффективности вакцины требуется только одно введение одной дозы.
Понятие «эффективное количество» в контексте настоящего описания означает, но не ограничиваясь только указанным, количество антигена, которое вызывает или может вызывать иммунный ответ у животного, которому вводят антиген PCV2 в эффективной дозе. Предпочтительно эффективное количество означает количество антигена, при использовании которого продолжительность иммунитета (DOI) составляет примерно 10 недель, предпочтительно DOI составляет по меньшей мере 12 недель, более предпочтительно DOI составляет по меньшей мере 15 недель, наиболее предпочтительно DOI составляет по меньшей мере 20 недель.
Эффективное количество зависит от ингредиентов вакцины и схемы введения. Как правило, когда в комбинированной вакцине применяют препарат инактивированного вируса или модифицированного живого вируса, то вакцину применяют в количестве, соответствующем от примерно 102,0 до примерно 109,0 TCID50 на дозу, предпочтительно от примерно 103,0 до примерно 108,0 TCID50 на дозу, более предпочтительно от примерно 104,0 до примерно 108,0 TCID50 на дозу. В частности, когда в вакцинах применяют модифицированный живой PCV2, то рекомендованная для введению чувствительному животному доза составляет предпочтительно от примерно 103,0 TCID50 (средняя цитопатогенная доза, инфицирующая 50% клеток)/дозу до примерно 106,0 TCID50/дозу и более предпочтительно от примерно 104,0 TCID50/дозу до примерно 105.0 TCID50/дозу. В целом, количество антигена должно составлять от примерно 0,2 до 5000 мкг и от 102,0 до 109,0 TCID50, предпочтительно от 103,0 до 106,0 TCID50, более предпочтительно от 104,0 до 105,0 TCID50, при применении очищенного антигена.
Субъединичные вакцины, как правило, вводят с уровнем включения антигена, составляющим по меньшей мере 0,2 мкг антигена на дозу, предпочтительно от примерно 0,2 до примерно 400 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,3 до примерно 200 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,35 до примерно 100 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,4 до примерно 50 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,45 до примерно 30 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 18 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,6 до примерно 16 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 0,75 до примерно 8 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,0 до примерно 6 мкг/дозу, еще более предпочтительно от примерно 1,3 до примерно 3,0 мкг/дозу.
При создании изобретения неожиданно было установлено, что профилактическое применение описанных выше иммуногенных композиций является эффективным в отношении снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, предпочтительно у молодых животных и/или у животных, имеющих пассивный иммунитет к PCV2 в день обработки. В частности, установлено, что профилактическое применение описанных выше иммуногенных композиций, и в частности композиции, содержащей антиген ORF-2 PCV2, обладают эффективностью в отношении снижения лимфаденопатии, лимфоидного истощения и/или многоядерных/гигантских гистоцитов у животных, зараженных PCV2 и имеющих полученные от матери антитела к PCV-2, в день обработки/вакцинации. Кроме того, описано профилактическое применение иммуногенных композиций, предлагаемых в изобретении, и прежде всего композиций, которые содержат антиген ORF-2 PCV2, обладающих эффективностью в отношении уменьшения таких показателей, как (1) интерстициальная пневмония, сопровождающаяся интерглобулярным отеком, (2) бледность кожи или желтуха новорожденных, (3) пятнистая атрофия печени, (4) язва желудка, (5) нефрит и (6) репродуктивные нарушения, такие, например, как выкидыш, мертворождение, высыхание плода в матке и т.д., (7) Pia-подобные повреждения, как правило, ассоциированные с заражением Lawsonia intracellularis (илеит), (8) лимфаденопатия, (9) лимфоидное истощение и/или (10) уровень многоядерных/гигантских гистоцитов, (11) синдром свиного дерматита и нефропатии (PDNS), (12) ассоциированная с PCVAD смертность, (13) ассоциированная с PCVAD потеря массы, (14) относительная вариабельность роста, (15) относительная частота появления «карликовых» животных, (16) относительное совместное заражение комплексом возбудителей репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV). Указанная иммуногенная композиция обладает эффективностью также в отношении повышения экономической важности параметров роста, таких как время до убоя, масса мясной туши, относительное содержание тощей массы. Таким образом, понятие «клинические симптомы» в контексте настоящего описания означают, но не ограничиваясь только ими, (1) интерстициальную пневмонию, сопровождающуюся интерглобулярным отеком, (2) бледность кожи или желтуху новорожденных, (3) пятнистую атрофию печени, (4) язву желудка, (5) нефрит и (6) репродуктивные нарушения, такие, например, как выкидыш, мертворождение, высыхание плода в матке и т.д., (7) Pia-подобные повреждения, как правило, ассоциированные с заражением Lawsonia intracellularis (илеит), (8) лимфаденопатию, (9) лимфоидное истощение и/или (10) уровень многоядерных/гигантских гистоцитов, (11) синдром свиного дерматита и нефропатии (PDNS), (12) ассоциированную с PCVAD смертность, (13) ассоциированную с PCVAD потерю массы, (14) относительную вариабельность роста, (15) относительную частоту появления «карликовых» животных, (16) относительное совместное заражение комплексом возбудителей репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV). Кроме того, антигенная композиция, представленная в настоящем описании, снижает общую нагрузку цирковируса, включая более позднее начало, укороченную продолжительность и более ранее окончание виремии, а понижение вирусной нагрузка и ее иммуносупрессорного действия на молодых животных, в частности имеющих антитела к PCV2 в день вакцинации, приводит к более высокому уровню общей устойчивости к заболеванию и снижению случаев ассоциированных с PCV2 заболеваний и симптомов.
Таким образом, еще одним объектом изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных и/или у животных, которые имеют антитела к PCV2, заключающийся в том, что вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2, животному, которое нуждается в таком лечении, где клинические симптомы выбирают из группы, включающей: (1) интерстициальную пневмонию, сопровождающуюся интерглобулярным отеком, (2) бледность кожи или желтуху новорожденных, (3) пятнистую атрофию печени, (4) язву желудка, (5) нефрит и (6) репродуктивные нарушения, такие, например, как выкидыш, мертворождение, высыхание плода в матке и т.д., (7) Pia-подобные повреждения, как правило, ассоциированные с заражением Lawsonia intracellularis (илеит), (8) лимфаденопатию, (9) лимфоидное истощение и/или (10) уровень многоядерных/гигантских гистоцитов, (11) синдром свиного дерматита и нефропатии (PDNS), (12) ассоциированную с PCVAD смертность, (13) ассоциированную с PCVAD потерю массы, (14) относительную вариабельность роста, (15) относительную частоту появления «карликовых» животных, (16) относительное совместное заражение комплексом возбудителей репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV). Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных, заключающийся в том, что вводят в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2, животному, которое нуждается в таком лечении, где клинические симптомы выбирают из группы, включающей: (1) интерстициальную пневмонию, сопровождающуюся интерглобулярным отеком, (2) бледность кожи или желтуху новорожденных, (3) пятнистую атрофию печени, (4) язву желудка, (5) нефрит и (6) репродуктивные нарушения, такие, например, как выкидыш, мертворождение, высыхание плода в матке и т.д., (7) Pia-подобные повреждения, как правило, ассоциированные с заражением Lawsonia intracellularis (илеит), (8) лимфаденопатию, (9) лимфоидное истощение и/или (10) уровень многоядерных/гигантских гистоцитов, (11) синдром свиного дерматита и нефропатии (PDNS), (12) ассоциированную с PCVAD смертность, (13) ассоциированную с PCVAD потерю массы, (14) относительную вариабельность роста, (15) относительную частоту появления «карликовых» животных, (16) относительное совместное заражение комплексом возбудителей репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV).
Композицию, предлагаемую в изобретении, можно вводить орально, внутрикожно, внутритрахеально или внутривлагалищно. Предпочтительно композицию следует вводить внутримышечно или интраназально, наиболее предпочтительно внутримышечно. Может оказаться предпочтительным вводить описанные выше фармацевтические композиции в организм животного внутривенно или путем инъекции непосредственно в ткани-мишени. Для системного введения предпочтительными являются внутривенный, внутрисосудистый, внутримышечный, интраназальный, внутриартериальный, внутрибрюшинный, оральный или внутриоболочечный пути введения. Более локальное введение можно осуществлять подкожно, интрадермально, внутрикожно, внутрисердечно, внутридольково, интрамедуллярно, внутрилегочно или непосредственно в ткань, подлежащую обработке, или в близлежащую область (соединительная, костная, мышечная, нервная, эпителиальная ткань). В зависимости от требуемой продолжительности и эффективности лечения композиции, предлагаемые в изобретении, можно вводить один или несколько раз, а также периодически, например, с интервалом один день в течение нескольких дней, недель или месяцев или с использованием различных доз.
Предпочтительно одну дозу описанной выше иммуногенной композиции вводят внутримышечно индивидууму, нуждающемуся в этом. Еще одним объектом изобретения является антиген PCV2 или иммуногенная композиция, содержащая любой описанный выше антиген PCV2, которую фасуют в пузырьки и вводят из расчета один (1) мл на дозу. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является иммуногенная композиция объемом 1 мл, которая содержит описанный выше антиген PCV-2, предназначенная для лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у молодых животных путем введения в эффективном количестве антигена PCV2 или иммуногенной композиции, содержащей антиген PCV2, животному, которое нуждается в таком лечении. Таким образом, еще одним объектом настоящего изобретения является также иммуногенная композиция объемом 1 мл, которая содержит описанный выше антиген PCV-2, предназначенная для лечения или профилактики заражения PCV2 или снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2, у животных, которые имеют антитела к PCV2, путем введения в эффективном количестве антигена PCV2 или иммуногенной композиции, содержащей антиген PCV2, животному, которое нуждается в таком лечении.
Таким образом, еще одним объектом изобретения является по меньшей мере одно дополнительное введение одной дозы иммуногенной композиции, описанной выше, животному, которое нуждается в этом, где второе или любое дополнительное введение осуществляют по меньшей мере через 14 дней после первого или любого другого предыдущего введения. Предпочтительно иммуногенную композицию вводят в сочетании с агентом, стимулирующим иммунитет. Предпочтительно указанный агент, стимулирующий иммунитет, вводят по меньшей мере дважды. Предпочтительно между первым и вторым или любым следующим введением агента, стимулирующего иммунитет, должно пройти по меньшей мере 3 дня, более предпочтительно по меньшей мере 5 дней, еще более предпочтительно по меньшей мере 7 дней. Предпочтительно агент, стимулирующий иммунитет, вводят по меньшей мере через 10 дней, предпочтительно 15 дней, еще более предпочтительно 20 дней, еще более предпочтительно по меньшей мере 22 дня, после первоначального введения иммуногенной композиции, предлагаемой в изобретении. Предпочтительным агентом, стимулирующим иммунитет, является, например, гемоцианин лимфы улитки (KLH), предпочтительно эмульгированный с неполным адъювантом Фрейнда (KLH/ICFA). Однако, как должно быть очевидно, можно применять любой другой агент, стимулирующий иммунитет, известный специалисту в данной области. Понятие «агент, стимулирующий иммунитет» в контексте настоящего описания относится к любому агенту, который может «запускать» иммунный ответ, предпочтительно без инициации или повышения специфического иммунного ответа, например, иммунного ответа на специфический патоген. Кроме того, принято вводить агент, стимулирующий иммунитет, в приемлемой дозе.
Понятие «животное» в контексте настоящего описания включает свинью, молодую (не достигшую половой зрелости) свинью или поросенка.
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения
Ниже в примерах представлены предпочтительные материалы и процедуры, применяемые в настоящем изобретении. Хотя при воплощении на практике и проверке настоящего изобретения можно применять любые методы и материалы, аналогичные или эквивалентные представленным в настоящем описании, ниже описаны предпочтительные методы, устройства и материалы. Однако следует понимать, что эти примеры даны только с целью иллюстрации и не направлены на ограничение общего объема изобретения.
Пример 1
Получение антигена ORF-2 PCV2
Начальные культуры клеток линии SF+, взятые из хранящейся в жидком азоте культуры, выращивали в среде Excell 420 (фирма JRH Biosciences, Inc., Ленекса, шт.Канзас) в суспензии в стерильных вращающихся колбах при постоянном перемешивании. Культуры выращивали во вращающихся колбах объемом от 100 до 250 мл, содержащих от 25 до 150 мл бессывороточной среды Excell 420. Когда клетки размножились до клеточной плотности 1,0-8,0×106 клеток/мл, их разделяли, перенося в новые сосуды, используя плотность посева 0,5-1,5×106 клеток/мл. Следующие размножающие культуры выращивали во вращающихся колбах объемом вплоть до 36 л или биореакторах из нержавеющей стали объемом вплоть до 300 л в течение 2-7 дней при 25-29°С.
После посева колбы инкубировали при 27°С в течение 4 ч. Затем в каждую колбу вносили рекомбинантный бакуловирус, содержащий ген ORF-2 PCV2 (SEQ ID NO:4). Рекомбинантный бакуловирус, содержащий ген ORF-2 PCV2, создавали согласно методу, описанному в WO 06/072065. После внесения бакуловируса колбы инкубировали при 27±2°С в течение 7 дней и при этом перемешивали при 100 об/мин в течение этого времени. Колбы закрывали вентиляционными крышками, пропускающими воздушных поток.
После инкубации полученный супернатант собирали, фильтровали для удаления клеточного дебриса и инактивировали. Для инактивации супернатанта его температуру доводили до 37±2°С и к супернатанту добавляли бинарный этиленимин (БЭИ) до конечной концентрации 5 мМ. Последующее перемешивание образца продолжали в течение 72-96 ч. Добавляли 1,0 М раствор тиосульфата натрия до конечной минимальной концентрации 5 мМ для нейтрализации любых остаточных количеств БЭИ. После инактивации ORF-2 PCV2 забуферивали фосфатным буфером и добавляли карбопол до примерно 0,5-2,5 мг/дозу. Конечная доза содержала примерно 16 мкг антигена ORF-2 PCV2.
Пример 2
Иммуноанализ антител к PCV-2
Клетки линии PK15 (например, АТСС CCL-33) или VIDO R1, описанные в WO 02/07721, высевали в 96-луночный планшет (примерно 20000-60000 клеток на лунку). Клетки заражали изолятом PCV2, когда конфлюэнтность монослоев достигала примерно 65-85%. Зараженные клетки инкубировали в течение 48 ч. Среду удаляли и лунки отмывали дважды ЗФР. Буфер для отмывки отбрасывали и клетки обрабатывали холодным фиксатором, представляющем собой смесь 50/50 метанол/ацетон (~100 мкл/лунку) в течение примерно 15 мин при температуре примерно -20°С. Фиксатор отбрасывали и планшеты сушили на воздухе. Готовили серийные разведения свиной сыворотки в ЗФР, добавляли в планшеты и инкубировали, давая антителам, если они присутствовали в образцах сыворотки, связываться, в течение примерно 1 ч при 36,5±1°С. Кроме того, параллельно оценивали серийные разведения, положительные в отношении антител к PCV2, и отрицательные контрольные образцы (образцы, представляющие собой положительный контроль и отрицательный контроль). Затем планшеты отмывали трижды ЗФР. ЗФР отбрасывали. Затем планшеты окрашивали поступающим в продажу козьим антисвиным антителом, конъюгированным с ФИТЦ, разведенным в соотношении 1:100 в ЗФР, и инкубировали в течение примерно 1 ч при 36,5±1°С, что давало возможность выявлять антитела, связанные с зараженными клетками. После завершения инкубации микропланшеты изымали из инкубатора, конъюгат отбрасывали и планшеты отмывали дважды ЗФР. Планшеты оценивали с помощью УФ-микроскопа и индивидуальные лунки обозначали как позитивные или негативные. Для оценки тест-системы использовали образцы, представляющие собой положительный контроль и отрицательный контроль. Если результаты, полученные для контролей, находились в ожидаемых пределах, то результаты опыта принимались как приемлемые с позиций метода оценки параметров. Титры сывороточных антител рассчитывали на основе наибольшего разведения, при котором наблюдалась специфическая IFA (метод непрямой иммунофлуоресценции)-реактивность, и определяли количество позитивных лунок для каждого разведения или рассчитывали конечное значение TCID50 с помощью соответствующей формулы Рида-Менча.
Пример 3
Эффективность ORF-2 PCV2 (Ingelvac® CircoFLEX™) в отношении молодых животных, имеющих низкий или высокий титр антител к PCV2
Для изучения возможного взаимодействия вакцины с материнским антителом проводили опыт, в котором титры антител у всех подопытных животных определяли в момент вакцинации, после чего животных группировали по признаку низкого, среднего или высокого титра антител: геометрические средние значения титров <1:100 рассматривались как низкие титры, титры от 1:100 до 1:1000 рассматривались как средние титры, а титры >1:1000 рассматривались как высокие титры антител.
Схема опыта
Для опыта использовали примерно 500 животных. Этих подопытных животных сбалансировано и поровну разделяли на две обрабатываемые группы в зависимости от начального веса тела и принадлежности к определенному приплоду. Всем животные в возрасте 20 дней вводили одну дозу (1 мл) вакцины против PCV2 (Investigational Veterinary Product (исследуемый ветеринарный продукт), IVP) или одну дозу (1 мл) плацебо, содержащего супернатант клеточной культуры с адъювантом (Control Product (контрольный продукт), СР) путем внутримышечной инъекции с правую сторону шеи. Подопытных животных исследовали до конца периода откорма.
Отбирали образцы крови всех животных и затем анализировали с помощью IFAT (метод непрямой иммунофлуоресценции) для определения титров антител в момент вакцинации. Затем определяли корреляцию начальных титров антител и прироста массы. Кроме того, в зависимости от начальных титров антител животных группировали в три класса (низкие, средние и высокие начальные титры антител)) и животных, имеющих «высокий титр», из обеих обрабатываемых групп затем сравнивали в отношении возможных различий в отношении прироста массы и виремии.
Результаты
Начальные титры антител
В момент проведения вакцинации большинство животных имели либо средние титры антител (на уровне от 1:100 до 1:1000), либо высокие титры антител (на уровне >1:1000). Только примерно у 13% животных обнаружены низкие титры антител (на уровне <1:100). Поскольку в момент начала опыта заражение PCV2 отсутствовало, можно предположить, что титры антител в день 0 опыта получены от матери. Никаких существенных различий титров антител в день опыта 0 не обнаружено между двумя обрабатываемыми группами. Данные о количестве животных (в процентах), относящихся к каждому классу титров, представлены на фиг.1.
Корреляция между титрами антител в момент вакцинации и виремией в крови
Для решения вопроса о том, оказывали ли воздействия высокие титра антител (>1:1000) в момент вакцинации виремию, сравнивали вакцинированных и обработанных плацебо животных с высокими титрами антител в отношении начала, конца, продолжительности виремии, количества дней, в которые были получены положительные (в отношении виремии) образцы, и вирусной нагрузки.
В таблице 1 обобщено сравнение параметров виремии у имеющих «высокие титры животных» в обеих обрабатываемых группах.
| Таблица 1 | |||||
| Сравнение параметров виремии у имеющих «высокие титры животных» в обеих обрабатываемых группах | |||||
| Оцениваемый параметр | Обрабатываемая группа | Количество поросят | Среднее значение | Медиана | Р |
| Начало виремии | СР | 38 | 111,90 дня | 113,00 дней | 0,7843 |
| IVP | 36 | 109,50 дня | 113,00 дней | ns | |
| CP-IVP | 2,4 дня | ||||
| Продолжитель- ность виремии |
СР | 38 | 27,00 дней | 27,50 дня | <0,0001 |
| IVP | 36 | 17,50 дня | 6,50 дня | *** | |
| CP-IVP | 9,50 дня | ||||
| Конец виремии | СР | 38 | 138,90 дня | 141,00 день | 0,0033 |
| IVP | 36 | 127,00 дней | 122,50 дня | ** | |
| CP-IVP | 11,9 дня | ||||
| Кол-во дней получения положительных образцов | СР | 39 | 3,70 дня | 3,00 дня | 0,0082 |
| IVP | 47 | 1,80 дня | 1,00 день | ** | |
| CP-IVP | 1,9 дня | ||||
| Среднее значение суммы gE (log 10) | СР | 39 | 18,79gE | 17,21 gE | <0,0001 |
| IVP | 47 | 9,12 gE | 5,38 gE | *** | |
| CP-IVP | 9,67 gE | ||||
| gE: сумма геномных эквивалентов на мл | |||||
| Р: p-значение согласно критерию Уилкоксона-Манна-Уитни для сравнения между группами; | |||||
| ns: не достоверно, p>0,05; ** достоверно, p<0,01; *** достоверно, p<0,001 | |||||
По сравнению с обработанными плацебо животными, имеющими высокий титр, у вакцинированных животных с высоким титром продолжительность виремии оказалась короче на 9,5 дня, конец виремии наступал раньше на 11,9 дня, на 1,9 дня снижалось количество дней получения положительных в отношении виремии образцов и примерно 2 раза снизилась сумма геномных эквивалентов/мл в процессе опыта. Эти результаты свидетельствуют о том, что IVP даже в присутствии высоких титров материнских антител все еще может существенно снижать виремию в крови (конец виремии, продолжительность виремии, вирусная нагрузка).
Корреляция между титрами антител в момент вакцинации и приростом массы
Далее был изучен вопрос о том, может ли начальный титр антител оказывать какое-либо воздействие на прирост массы в процессе опыта. В таблице 2 представлены данные о корреляции между начальным титром антител и приростом массы в различные моменты времени, для оценки которых применяли коэффициент ранговой корреляции Спирмана и p-значение.
Обнаружена статистически значимая отрицательная корреляция между титром антител и приростом массы в обеих обрабатываемых группах при оценке в период 0-7 недели опыта, что свидетельствует об отрицательном воздействии высоких титров материнских антител на прирост массы на фазе выращивания. Не обнаружено никаких статистически значимых различий между начальным титром антител и приростом массы в другие изученные различные интервалы времени. Таким образом, можно сделать заключение о том, что величина титра материнских антител не оказывает влияние на прирост массы, начиная с возраста 10 недель (неделя 7 опыта), ни у вакцинированных, ни у обработанных плацебо животных.
| Таблица 2 | |||||
| Корреляция между титром антител к PCV2 в момент вакцинации и приростом массы тела в процессе опыта | |||||
| Корреляция между титром антител в момент вакцинации и приростом массы | |||||
| Недели опыта 0-7 | Недели опыта 7-12 | Недели опыта 12-17 | Недели опыта 17-22 | ||
| r | -0,09623 | 0,03501 | -0,00521 | -0,02774 | |
| СР | P | 0,0086 ** | 0,3425 ns | 0,8884 ns | 0,4617ns |
| n | 744 | 737 | 728 | 706 | |
| r | -0,09748 | 0,04309 | -0,00954 | 0,02694 | |
| IVP | P | 0,0077 ** | 0,2440 ns | 0,7974 ns | 0,4710ns |
| n | 746 | 733 | 727 | 718 | |
| r: коэффициент ранговой корреляции Спирмана | |||||
| P: p-значения критерия при r=0: ns: не достоверно, p>0,05; | |||||
| Корреляция между титром антител в момент вакцинации и приростом массы | ||||
| Недели опыта 0-7 | Недели опыта 7-12 | Недели опыта 12-17 | Недели опыта 17-22 | |
| ** достоверно, p<0,01 | ||||
| n: количество животных | ||||
С этими данными согласуются полученные результаты об отсутствии различий в живой массе тела при сравнении животных, имеющих низкие и высокие титры, в вакцинированной группе. На фиг.2 показано, что масса тела после начала виремии (недели 17 и 22 опыта) практически не зависела от начального титра антител (фиг.2).
Кроме того, у вакцинированных животных с высоким титром антител в момент вакцинации (>1:1000) обнаружена также существенно более высокая масса тела в начале виремии по сравнению с обработанными плацебо животными с начальными высокими титрами антител. Как видно из фиг.3, масса тела (LSMean) в неделю 17 и неделю 22 опыта оказалась действительно существенно выше у вакцинированных «животных с высокими титрами» (неделя 17 опыта: 1,55 кг, p=0,0328; неделя 22 опыта: 3,06 кг, p=0,0007), чем у обработанных плацебо «животных с высокими титрами». В сочетании эти данные свидетельствуют об отсутствии взаимосвязи между IVP и титром антител в момент вакцинации.
Заключение
Для изучения возможного воздействия материнских антител оценивали корреляцию начальных титров антител с двумя параметрами эффективности, такими как виремия в крови и живая масса тела. По сравнению с обработанными плацебо «животными с высокими титрами» обнаружены следующие статистически значимые различия с вакцинированными «животными с высокими титрами»:
- снижение потери прироста массы
- более короткая продолжительность виремии и более ранний конец виремии,
- более низкая вирусная нагрузка.
Пример 4
Эффективность ORF-2 PCV2 (Ingelvac® CircoFLEX™) для молодых животных, имеющих антитела к PCV2, в отношении лимфоидного истощения, лимфоидного воспаления и лимфоидной иммуноногистохимии (ИГХ)
Целью этого проводимого вслепую с использованием в качестве контрольного заражения вакцинации опыта была оценка возраста, в котором у поросят, вакцинированных вакциной свиного цирковируса типа 2, содержащей убитый бакуловирусный вектор, развивается иммунитет в присутствии полученных от матери антител к свиному цирковирусу типа 2 (PCV2). После контрольного заражения анализировали три основных параметра. Эти три параметра представляли собой лимфоидное истощение, лимфоидное воспаление и результаты лимфоидного иммуноногистохимического анализа (ИГХ). Для демонстрации развития иммунитета в присутствии полученных от матери антител к PCV2 у выращенных в стандартных условиях поросят, вакцинированных вакциной против PCV2 в возрасте 3 недели или 8 недель, должны быть обнаружены статистически значимые различия (p<0,05) в лимфоидном истощении, лимфоидном воспалении и результатах лимфоидного ИГХ по сравнению с поросятами возрастом 3 недели, которых подвергали контрольному заражению контрольным продуктом.
Схема опыта
Сто двадцать (120) выращенных в стандартных условиях поросят возрастом 21 день в день 0 (Д0) разделяли абсолютно произвольно на 5 обрабатываемых групп. В Д0 брали образцы крови всех поросят, при этом:
- животных в группе 1а обрабатывали исследуемым ветеринарным продуктом (IVP; референс-вакцина против PCV2) в возрасте 3 недели,
- животных в группе 16 обрабатывали исследуемым ветеринарным продуктом (IVP; референс-вакцина против PCV2) в возрасте 8 недель
- животных в группе 2 обрабатывали контрольным продуктом (СР) в возрасте 3 недели.
Поросят обследовали в отношении клинических симптомов после вакцинации, начиная с Д1 до Д59. Кроме того, брали образцы крови перед контрольным заражением в Д14, Д28, Д42, Д56 и Д63. Обобщение данных для PCV2-группы, касающихся геометрических средних серологических титров (GMT), полученных перед контрольным заражением, приведены в таблице 3.
| Таблица 3 | ||||||
| Данные для PCV2-группы, касающиеся геометрических средних серологических титров, полученные перед контрольным заражением | ||||||
| Группа - вариант обработки | PCV2-серологический статус - GMT | |||||
| Д0 | Д14 | Д28 | Д42 | Д56 | Д63 | |
| Группа 1а, введение IVP в возрасте 3 недели | 556,5 | 252,8 | 142,0 | 56,2 | 32,0 | 51,3 |
| Группа 1б, введение IVP в возрасте 8 недель | 476,2 | 308,2 | 151,6 | 36,2 | 29,3 | 48,3 |
| Группа 2, введение СР в возрасте 3 недели | 513,8 | 310,7 | 134,3 | 36,9 | 16,9 | 24,5 |
Всем остальным поросятам вводили по 2,0 мл гемоцианина лимфы улитки (KLH), эмульгированного в неполном адъюванте Фрейнда (ICFA), IM (внутримышечно) в Д60 (день после контрольного заражения (ДПК) - 3) и Д66 (ДПК 3). В день Д63 (ДПК 0) остальным поросятам вводили по 1,0 мл материала для контрольного заражения PCV2, полученного из Ветеринарной диагностической лаборатории Университета штата Айова (Iowa State University Veterinary Diagnostic Laboratory) (ISUVDL) (4,75 log10 TCID50/мл) IM, и 1,0 мл такого же материала IN (интраназально). В день контрольного заражения и периодически после контрольного заражения определяли массу тела, ректальную температуру, проводили клиническое обследование, брали образцы крови и мазки из носа. При аутопсии каждого поросенка определяли макроскопические повреждения и получали образцы легкого и лимфоидной ткани. Ткань легкого и лимфоидную ткань оценивали в ISUVDL с помощью микроскопа в отношении повреждений и в отношении антигена PCV2 с помощью ИГХ-анализа. Общее описание фазы опыта, включающей контрольное заражение, представлено ниже в таблице 4.
| Таблица 4 | |||||
| Фаза опыта, включающая контрольное заражение | |||||
| Группа - вариант обработки | Кол-во | KLH/ ICFA в Д60 (ДПК 3) |
Контрольное заражение PCV2 в Д63 (ДПК 0) | KLH/ ICFA в D66 (ДПК 3) | День проведения аутопсии |
| Группа 1а, введение IVP в возрасте 3 недели | 20 | Да | Да | Да | Д87 (ДПК 24) или Д88 (ДПК 25) |
| Группа 1б, введение IVP в возрасте 8 недель | 21 | Да | Да | Да | Д87 (ДПК 24) или Д88 (ДПК 25) |
| Группа 2, введение СР в возрасте 3 недели | 20 | Да | Да | Да | Д87 (ДПК 24) или Д88 (ДПК 25) |
В Д86 средние геометрические значения титров составляли 906,6, 2447,1 и 2014,9 соответственно.
Результаты
После осуществления контрольного заражения PCV2 в Д63 и последующей аутопсии для группы 1а обнаружено статистически значимое снижение доли поросят, позитивных в отношении лимфоидного истощения (p=0,0084), снижение доли поросят, позитивных в отношении лимфоидного воспаления (р=0,0079), и снижение доли поросят, ИГХ-позитивных в отношении лимфоидной ткани (р=0,0031), во всех случаях при сравнении с группой 2. После контрольного заражения PCV2 для группы 1б обнаружено статистически значимое снижение доли поросят, позитивных в отношении лимфоидного истощения (р=0,0148), снижение доли поросят, позитивных в отношении лимфоидного воспаления (р=0,0036), и снижение доли поросят, ИГХ-позитивных в отношении лимфоидной ткани (р=0,0013). Обобщение первичных параметров эффективности, полученных в группах 1а, 1б и 2, представлено в таблице 5.
| Таблица 5 | ||||
| Обобщение первичных параметров эффективности, полученных в группах 1а, 1б и 2 | ||||
| Группа-вариант обработки | PCV2-серологический статус в день 0 | Лимфоидное истощение (+/всего) | Лимфоидное воспаление (+/всего) | Лимфоидная ткань по данным ИГХ (+/всего) |
| Группа 1а, введение IVP в возрасте 3 недели | Серопозитивный | 1/20 (5%) *р=0,0084 | 3/20 (15%) *р=0,0079 | 3/20 (15%) *р=0,0031 |
| Группа 1б, введение IVP в возрасте 8 недель | Серопозитивный | 2/21 (9,5%) *р=0,0148 | 3/21 (14,3%) *р=0,0036 | 3/21 (14,3%) *р=0,0013 |
| Группа 2, введение СР в возрасте 3 недели | Серопозитивный | 9/20 (45%) | 12/20 (60%) | 13/20 (65%) |
| * p-значение относительно группы 2 - точный критерий Фишера | ||||
Обнаружено существенное различие между группами 1а и 1б относительно группы 2 при сравнении результатов микроскопического обследования легочного воспаления (p≤0,0407), но не выявлено существенного различия между этими группами при сравнении позитивной в отношении PCV2 легочной ткани при ИГХ-анализе (p≥0,2317). Не обнаружено существенного различия между группами 1а и 1б относительно группы 2 при сравнении клинических симптомов после вакцинации, ADG (средний суточный прирост массы), клинических признаков после контрольного заражения, гипертермии, носовых выделений PCV2, % общего легочного балла и лимфаденопатии.
Таким образом, животные группы 1а, вакцинированные в возрасте 3 недель и имеющие величину GMT 556,6 в момент вакцинации, оказались в значительной степени защищенными от лимфоидного истощения, лимфоидного воспаления и от того, чтобы их лимфоидная ткань оказалась позитивной в отношении антигена PCV2 по данным ИГХ-анализа, по сравнению с группой 2. Животные группы 1б, вакцинированные в возрасте 8 недель и имеющие величину GMT 151,6 за 1 неделю до вакцинации, оказались в значительной степени защищенными от лимфоидного истощения, лимфоидного воспаления и от того, чтобы их лимфоидная ткань оказалась позитивной в отношении антигена PCV2 по данным ИГХ-анализа, по сравнению с группой 2. Поросята, имеющие полученные от матери антитела к PCV2, оказались защищенными от ассоциированной с цирковирусом болезни свиней (PCVAD), когда их вакцинировали в возрасте 3 недель.
Claims (18)
1. Способ лечения или профилактики
а) заражения PCV2; или
б) снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2,
у животных, которые имеют антитела к PCV2, включающий введение только один раз животному, которое нуждается в таком лечении или профилактическом лечении, эффективного количества антигена PCV2.
а) заражения PCV2; или
б) снижения клинических симптомов, вызываемых или ассоциированных с заражением PCV2,
у животных, которые имеют антитела к PCV2, включающий введение только один раз животному, которое нуждается в таком лечении или профилактическом лечении, эффективного количества антигена PCV2.
2. Способ по п.1, в котором эти антитела к PCV2 представляют собой материнские антитела.
3. Способ по п.1, в котором животные имеют титр антител к PCV-2, превышающий 1:100, по данным PCV-специфического иммунного анализа.
4. Способ по п.1, в котором животные имеют титр антител к PCV-2, превышающий 1:1000, по данным PCV-специфического иммунного анализа.
5. Способ по п.1, в котором обработанные животные имеют указанный титр антител к PCV2 в момент введения антигена PCV2.
6. Способ по п.1, в котором антиген PCV2 вводят животным возрастом 7 дней или более старшего возраста.
7. Способ по п.1, в котором антиген PCV2 вводят животным возрастом 14 дней или более старшего возраста.
8. Способ по п.1, в котором антиген PCV2 вводят животным возрастом не более 7 недель.
9. Способ по п.1, в котором лечение или профилактика приводит к укорочению фазы виремии на 5 или более дней по сравнению с животными этих же видов из необработанной контрольной группы.
10. Способ по п.1, в котором антиген PCV2 представляет собой полипептид, гомологичный по меньшей мере на 80% ОРС-2 PCV2.
11. Способ по п.1, в котором антиген PCV-2 представляет собой рекомбинантный бакуловирус, экспрессирующий ОРС-2 PCV2.
12. Способ по п.11, в котором антиген PCV2 представляет собой Ingelvac® CircoFLEX™.
13. Способ по п.1, в котором животному, которое нуждается в таком лечении, вводят антиген PCV2 в количестве от 0,5 до 18 мкг/дозу.
14. Способ по п.1, в котором животному, которое нуждается в таком лечении, вводят только одну дозу антигена PCV2.
15. Способ по п.1, в котором лечение или профилактика заражения PCV2 приводит к улучшению по сравнению с животными этих же видов из необработанной контрольной группы параметров эффективности вакцины, выбранных из группы, состоящей из уменьшения потери прироста массы, укорочения продолжительности виремии, более раннего прекращения виремии, более низкой вирусной нагрузки или их комбинации.
16. Способ по п.1, в котором животное представляет собой свинью.
17. Способ по п.1, в котором указанное животное находится в возрасте 1-22 дня.
18. Способ по любому из пп.1-17, в котором указанный PCV-2 антиген является рекомбинантным протеином ORF-2 PCV2.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US87031106P | 2006-12-15 | 2006-12-15 | |
| US60/870,311 | 2006-12-15 | ||
| PCT/US2007/087628 WO2008076915A2 (en) | 2006-12-15 | 2007-12-14 | Treatment of pigs with pcv2 antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009126728A RU2009126728A (ru) | 2011-01-20 |
| RU2520087C2 true RU2520087C2 (ru) | 2014-06-20 |
Family
ID=39537011
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009126728/10A RU2520087C2 (ru) | 2006-12-15 | 2007-12-14 | Лечение свиней с помощью антигена pcv2 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US8865183B2 (ru) |
| EP (3) | EP2481420B1 (ru) |
| JP (1) | JP5200223B2 (ru) |
| KR (1) | KR101619730B1 (ru) |
| CN (2) | CN101558169B (ru) |
| AR (1) | AR064363A1 (ru) |
| AU (1) | AU2007333857B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0721083A2 (ru) |
| CA (1) | CA2670836C (ru) |
| CL (1) | CL2007003648A1 (ru) |
| DK (2) | DK2094872T4 (ru) |
| ES (2) | ES2726777T3 (ru) |
| HU (2) | HUE044410T2 (ru) |
| MX (1) | MX2009006066A (ru) |
| PL (2) | PL2094872T5 (ru) |
| PT (2) | PT2481420T (ru) |
| RU (1) | RU2520087C2 (ru) |
| TW (1) | TWI466682B (ru) |
| UA (1) | UA103298C2 (ru) |
| WO (1) | WO2008076915A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200903299B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723022C2 (ru) * | 2015-02-04 | 2020-06-08 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для применения против субклинической инфекции lawsonia у свиней |
Families Citing this family (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SI1833992T1 (sl) | 2004-12-30 | 2015-06-30 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 imunogeni sestavki in postopki proizvodnje takšnih sestavkov |
| UA95602C2 (ru) | 2004-12-30 | 2011-08-25 | Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. | Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции |
| US7833707B2 (en) | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| US8834891B2 (en) | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| EP3320919B1 (en) | 2005-12-29 | 2020-05-27 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| DK2371383T3 (en) | 2005-12-29 | 2015-11-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Use of a PCV2 immunogenic composition for reduction of clinical symptoms in pigs |
| US20100136060A1 (en) * | 2006-11-22 | 2010-06-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of reducing porcine circovirus-associated disease outbreaks |
| EP2859900A1 (en) | 2006-12-11 | 2015-04-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| AU2007333857B2 (en) | 2006-12-15 | 2014-05-15 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Treatment of pigs with PCV2 antigen |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| EP1958644A1 (en) | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| GB0712160D0 (en) * | 2007-06-22 | 2007-08-01 | Univ Ghent | Methods and compositions in the treatment of procine circoviral infection |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| CA2712006A1 (en) | 2008-01-23 | 2009-10-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| CA2804604C (en) | 2010-07-08 | 2023-10-03 | United Biomedical, Inc. | Designer peptide-based pcv2 vaccine |
| UA114503C2 (uk) * | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
| CN105246505A (zh) * | 2013-04-30 | 2016-01-13 | 勃林格殷格翰动物保健公司 | PCV2a亚型(PCV2a)的ORF2蛋白用于交叉保护中的用途 |
| DK2994162T3 (en) | 2013-05-08 | 2021-06-21 | Pharmgate Biologics Inc | Vaccine for pcv2 og mycoplasma |
| US20140348874A1 (en) * | 2013-05-22 | 2014-11-27 | Boehringer Ingelheim Espana, S.A. | Method for the reduction of pcv-2 in a herd of swine |
| EP3035958B1 (en) | 2013-08-23 | 2022-10-26 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Porcine circovirus type 2 (pcv2) subunit vaccine |
| RU2662685C2 (ru) * | 2013-09-25 | 2018-07-26 | Зоэтис Сервисиз Ллс | Pcv2b дивергентная вакцинная композиция и способы её применения |
| KR20220083861A (ko) * | 2013-10-02 | 2022-06-20 | 베링거 인겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인크. | Ｐｃｖ2 ｏｒｆ2 단백질 변이체 및 이로 이루어진 바이러스 유사 입자 |
| CN110354258A (zh) * | 2013-12-03 | 2019-10-22 | 英特维特国际股份有限公司 | 抗猪圆环病毒2型的疫苗 |
| WO2015082457A1 (en) | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Intervet International B.V. | Vaccine against lawsonia intracellularis and porcine circovirus 2 |
| US10555994B2 (en) | 2015-03-30 | 2020-02-11 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | PCV2 ORF2 carrier platform |
| WO2017113050A1 (zh) * | 2015-12-28 | 2017-07-06 | 财团法人农业科技研究院 | 猪圆环病毒2型的外鞘蛋白质的制备方法及含该外鞘蛋白质的医药组合物 |
| RU2018137034A (ru) | 2016-03-23 | 2020-04-23 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Комбинированная вакцина против вируса pcv2 и инфекции mycoplasma hyopneumoniae |
| US11654191B2 (en) | 2016-03-23 | 2023-05-23 | Intervet Inc. | Vaccine for intradermal application against PCV2 and PRRS virus infection |
| JP2019509302A (ja) | 2016-03-23 | 2019-04-04 | インターベット インターナショナル ベー． フェー． | アルブミンを含むｐｃｖ２及びｐｒｒｓウイルス感染症に対する混合ワクチン |
| CA3058281A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-10-18 | Intervet International B.V. | Vaccines containing swine pathogens for associated non-mixed use |
| BR112020002006A2 (pt) | 2017-08-03 | 2020-08-11 | Intervet International B.V. | vacina compreendendo uma proteína orf2 de pcv2 de genótipo 2b |
| CN108795863A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 广西大学 | 体外感染猪圆环病毒2型建立猪肺泡巨噬细胞炎症模型的方法 |
| JP2021527073A (ja) * | 2018-06-11 | 2021-10-11 | セヴァ サンテ アニマレＣｅｖａ Ｓａｎｔｅ Ａｎｉｍａｌｅ | ブタサーコウイルスに対するワクチン接種 |
| KR102288367B1 (ko) * | 2018-11-15 | 2021-08-11 | 주식회사 바이오앱 | 식물체에서 바이러스-유사 입자를 발현하는 재조합 벡터 및 이를 이용한 써코바이러스-유사 입자를 포함하는 백신 조성물의 제조방법 |
| PH12021552477A1 (en) | 2019-04-04 | 2022-07-18 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Porcine circovirus type 3 (pcv3) vaccines, and production and uses thereof |
| US20220323567A1 (en) | 2019-09-12 | 2022-10-13 | Intervet Inc. | Combination vaccine for intradermal administration |
| CN115427072A (zh) | 2020-04-20 | 2022-12-02 | 英特维特国际股份有限公司 | 预防性治疗猪的疫苗组合 |
| AU2021311726A1 (en) | 2020-07-24 | 2023-02-09 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Combination porcine vaccine |
| WO2022090357A1 (en) | 2020-10-29 | 2022-05-05 | Intervet International B.V. | Combination vaccine for protecting swine against various disorders |
| CN112725291B (zh) * | 2020-12-30 | 2023-07-04 | 西北农林科技大学 | 一种gas样基序突变的pcv2毒株及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001016330A2 (en) * | 1999-08-31 | 2001-03-08 | Merial | Prevention of affections associated with porcine circovirus-2 |
| WO2001096377A2 (en) * | 2000-06-15 | 2001-12-20 | Purdue Research Foundation | Vaccine for congenital tremors in pigs |
| WO2003049703A2 (en) * | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious dna clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
| WO2006132605A2 (en) * | 2005-06-07 | 2006-12-14 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Porcine circovirus type 2 vaccines |
Family Cites Families (91)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2909462A (en) | 1955-12-08 | 1959-10-20 | Bristol Myers Co | Acrylic acid polymer laxative compositions |
| US4708871A (en) | 1983-03-08 | 1987-11-24 | Commonwealth Serum Laboratories Commission | Antigenically active amino acid sequences |
| US5069901A (en) | 1988-02-03 | 1991-12-03 | Jones Elaine V | Preparation of a recombinant subunit vaccine against pseudorabies infection |
| DE69027112T2 (de) | 1989-01-23 | 1997-01-09 | Auspharm International Ltd 4Th | Impfstoffzusammensetzung |
| US5155037A (en) | 1989-08-04 | 1992-10-13 | The Texas A&M University System | Insect signal sequences useful to improve the efficiency of processing and secretion of foreign genes in insect systems |
| US5202430A (en) * | 1990-01-16 | 1993-04-13 | University Of Tennessee | Transmissible gastroenteritis virus genes |
| AU657907B2 (en) | 1990-05-29 | 1995-03-30 | Wyeth Holdings Corporation | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| US5565205A (en) | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
| GB9023111D0 (en) * | 1990-10-24 | 1990-12-05 | Wellcome Found | Expression system |
| EP0555366B1 (en) * | 1990-11-01 | 2000-06-28 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Bacterial attenuation method and vaccine |
| MX9204885A (es) | 1991-08-26 | 1994-05-31 | Boehringer Animal Health Inc | Composicion de vacuna que comprende virus del sindrome de infertilidad y respiratorio de los cerdos. |
| US6042830A (en) | 1992-08-05 | 2000-03-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Viral agent associated with mystery swine disease |
| US5580557A (en) * | 1991-10-09 | 1996-12-03 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Live, avirulent salmonella choleraesuis vaccine used for inducing an immune response in animals |
| US5338543A (en) | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
| SI0968722T1 (sl) * | 1994-05-10 | 2007-10-31 | Wyeth Corp | Izboljĺ ano, modificirano ĺ˝ivo cepivo proti brsv |
| US5885823A (en) * | 1995-06-05 | 1999-03-23 | Nobl Laboratories, Inc. | Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents |
| AU4070597A (en) | 1996-08-16 | 1998-03-06 | The Texas A & M University System | Modifying insect cell gylcosylation pathways with baculovirus expression vectors |
| PT835930E (pt) * | 1996-10-09 | 2001-06-29 | Akzo Nobel Nv | Estirpes europeias de vacina do virus do sindroma reprodutivo e respiratorio porcino (prrsv) |
| US6391314B1 (en) * | 1997-10-03 | 2002-05-21 | Merial | Porcine circoviruses vaccines diagnostic reagents |
| US20060029617A1 (en) * | 1997-10-03 | 2006-02-09 | Charreyre Catherine E | Porcine circovirus and Helicobacter combination vaccines and methods of use |
| FR2781159B1 (fr) | 1998-07-06 | 2000-10-06 | Merial Sas | Vaccin circovirus et parvovirus porcin |
| US7211379B2 (en) * | 1997-10-03 | 2007-05-01 | Merial Sas | Prevention of myocarditis, abortion and intrauterine infection associated with porcine circovirus-2 |
| UA78180C2 (ru) * | 1997-10-03 | 2007-03-15 | Меріаль | Кольцевой вирус свиньи, вакцины и диагностические реагенты |
| US7192594B2 (en) * | 1997-10-03 | 2007-03-20 | Merial Limited | Postweaning multisystemic wasting syndrome and porcine circovirus from pigs |
| US20040062775A1 (en) * | 1997-12-05 | 2004-04-01 | Agence Francaise De Securite Sanitaire Des Aliments | Circovirus sequences associated with piglet weight loss disease (PWD) |
| FR2772047B1 (fr) * | 1997-12-05 | 2004-04-09 | Ct Nat D Etudes Veterinaires E | Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection |
| JP3795751B2 (ja) * | 1997-12-11 | 2006-07-12 | ユニバーシティ オブ サスカッチェワン | ブタからの離乳後多全身系消耗症候群ウイルス |
| WO1999045956A1 (en) * | 1998-03-13 | 1999-09-16 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Vaccines against circovirus infections |
| US6294176B1 (en) * | 1998-07-10 | 2001-09-25 | Schering-Plough Veterinary Corp. | Recombinant raccoonpox virus and uses thereof as a vaccine in mammalian and avian species |
| EP1050584B1 (en) | 1998-11-19 | 2006-10-18 | Azwell Inc. | Recombinant lysophosphatidic acid phosphatase |
| FR2789695B1 (fr) * | 1999-02-11 | 2003-03-07 | Merial Sas | Vecteurs et vaccins viraux a base d'adenovirus porcins recombines et replicatifs |
| WO2000072065A1 (en) | 1999-05-21 | 2000-11-30 | Nanovation Technologies, Inc. | Oval resonator device |
| US6497883B1 (en) * | 1999-06-10 | 2002-12-24 | Merial | Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine |
| US6943152B1 (en) * | 1999-06-10 | 2005-09-13 | Merial | DNA vaccine-PCV |
| WO2001017556A1 (fr) | 1999-09-07 | 2001-03-15 | Shionogi & Co., Ltd. | Préparations vaccinales administrables par les muqueuses |
| US6656478B1 (en) | 1999-11-12 | 2003-12-02 | Samuel D. Charles | Cross-protective salmonella vaccines |
| ATE385808T1 (de) | 1999-12-21 | 2008-03-15 | Merial Sas | Mindestens ein cryptosporidium parvum-antigen und mindestens ein antigen eines anderen darmkrankheitserregers enthaltende zusammensetzungen und impfstoffe |
| US6808900B2 (en) * | 2000-06-15 | 2004-10-26 | Manitoba, University Of | Cryptosporidium parvum antigens, antibodies thereto and diagnostic and therapeutic compositions thereof |
| PT1303265E (pt) | 2000-07-20 | 2007-10-09 | Lauras As | ''utilização de inibidores da cox-2 como imuno-estimulantes, no tratamento do vih ou da sida'' |
| US7018638B2 (en) * | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| MY129765A (en) | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| JP2002247979A (ja) | 2001-02-23 | 2002-09-03 | Nippon Biologicals Inc | マレック病ワクチンおよびその製造方法 |
| CA2442135C (en) | 2001-03-27 | 2008-08-19 | University Of Saskatchewan | Methods to culture circovirus |
| US20030096377A1 (en) | 2001-06-28 | 2003-05-22 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Differential PCR-RFLP assay for detecting and distinguishing between nonpathogenic PCV-1 and pathogenic PCV-2 |
| KR20040030785A (ko) * | 2001-07-02 | 2004-04-09 | 화이자 프로덕츠 인크. | 마이코플라즈마 하이오뉴모니애로의 1회 투여량 예방접종 |
| US7361352B2 (en) * | 2001-08-15 | 2008-04-22 | Acambis, Inc. | Influenza immunogen and vaccine |
| US7279166B2 (en) * | 2001-12-12 | 2007-10-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
| US6841364B2 (en) * | 2002-01-22 | 2005-01-11 | Protatek International, Inc. | Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof |
| WO2003068163A2 (en) | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Novavax, Inc. | Optimization of gene sequences of chimeric virus-like particles for expression in insect cells |
| AU2003220240A1 (en) | 2002-03-13 | 2003-09-29 | Biophysica, Inc. | Boswellin compositions enhanced with 3-beta-acety1-11-keto-beta-boswellic acid (akba), industrial manufacture and their uses |
| US20030215455A1 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-20 | Bailey Reynolds | Vaccine stabilizer and method of use |
| AU2002951692A0 (en) | 2002-09-23 | 2002-10-17 | Vital Biotech (Hong Kong) Limited | Improvements in or relating to vaccines |
| US7408636B2 (en) | 2002-10-31 | 2008-08-05 | Chemimage Corporation | Method and apparatus for dark field chemical imaging |
| HUE026171T2 (en) | 2003-02-03 | 2016-05-30 | Cerebus Biologicals Inc | A method for treating, preventing and detecting Helicobacter infection |
| US7563449B2 (en) | 2003-04-21 | 2009-07-21 | Pfizer Inc, | Methods for reducing cattle reproductive diseases |
| CN1458167A (zh) | 2003-06-02 | 2003-11-26 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 截短表达的猪圆环病毒ⅱ型衣壳蛋白抗原及其应用 |
| US7335361B2 (en) * | 2003-06-09 | 2008-02-26 | Animal Technology Institute Taiwan | Fusion antigen used as vaccine |
| JP2006528647A (ja) | 2003-07-24 | 2006-12-21 | メリアル リミテッド | 新規ワクチン製剤 |
| UA87665C2 (ru) * | 2003-07-25 | 2009-08-10 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Авирулентный изолят lawsonia intracellularis европейского происхождения, вакцина для иммунизации животных, применение заявленного авирулентного изолята как вакцины, способ получения вакцины, способ культивирования lawsonia intracellularis, способ диагностики пролиферативной энтеропатии свиней и способ получения антисыворотки к lawsonia intracellularis |
| FR2861731B1 (fr) * | 2003-10-30 | 2006-02-24 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelle proteine de fixation du phosphate, compositions pharmaceutiques la contenant et ses utilisations |
| CN1942204A (zh) | 2004-04-26 | 2007-04-04 | 株式会社中央疫苗研究所 | 用于猪呼吸病的灭活混合疫苗及其制备方法 |
| CN1579553A (zh) * | 2004-05-18 | 2005-02-16 | 浙江大学 | Ii型猪圆环病毒核酸疫苗的制备方法及其应用 |
| KR100478845B1 (ko) | 2004-06-22 | 2005-03-24 | 채찬희 | 돼지 이유자돈 전신성 소모성 증후군 예방 및 치료용 생물학적 조성물 |
| US20060286124A1 (en) | 2004-06-30 | 2006-12-21 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Vaccine compositions and methods of treating coronavirus infection |
| US7700285B1 (en) * | 2005-12-29 | 2010-04-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| US7833707B2 (en) * | 2004-12-30 | 2010-11-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2 |
| ATE462445T1 (de) * | 2005-01-13 | 2010-04-15 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Prrs-impfstoffe |
| US7300785B2 (en) * | 2005-02-03 | 2007-11-27 | Universiteit Ghent | Culturing circular ssDNA viruses for the production of vaccines |
| US8834891B2 (en) * | 2005-03-14 | 2014-09-16 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis |
| MX2007012786A (es) * | 2005-04-13 | 2008-01-11 | Merial Ltd | Ensayo para produccion de circovirus porcino. |
| US7691368B2 (en) * | 2005-04-15 | 2010-04-06 | Merial Limited | Vaccine formulations |
| CN1769434A (zh) * | 2005-08-30 | 2006-05-10 | 广东省农业科学院兽医研究所 | 一种猪圆环病毒2型重组腺病毒及其构建方法和应用 |
| DK1926496T3 (da) * | 2005-09-09 | 2013-09-30 | Intervet Int Bv | PCV-2-vaccine |
| DK2371383T3 (en) * | 2005-12-29 | 2015-11-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Use of a PCV2 immunogenic composition for reduction of clinical symptoms in pigs |
| EP3320919B1 (en) * | 2005-12-29 | 2020-05-27 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions |
| US20100136060A1 (en) * | 2006-11-22 | 2010-06-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods of reducing porcine circovirus-associated disease outbreaks |
| EP2859900A1 (en) * | 2006-12-11 | 2015-04-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections |
| AU2007333857B2 (en) | 2006-12-15 | 2014-05-15 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Treatment of pigs with PCV2 antigen |
| EP1941903A1 (en) | 2007-01-03 | 2008-07-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prophylaxis and treatment of PRDC |
| EP1958644A1 (en) * | 2007-02-13 | 2008-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Prevention and treatment of sub-clinical pcvd |
| GB0712160D0 (en) * | 2007-06-22 | 2007-08-01 | Univ Ghent | Methods and compositions in the treatment of procine circoviral infection |
| WO2009002380A2 (en) * | 2007-06-26 | 2008-12-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Isolation of anti-desmoglein 1 antibodies by phage display of pemphigus foliaceus autoantibodies |
| US20090017064A1 (en) | 2007-07-10 | 2009-01-15 | Wyeth | Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus |
| US7829274B2 (en) | 2007-09-04 | 2010-11-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen |
| WO2009103037A1 (en) | 2008-02-15 | 2009-08-20 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Methods and compositions for reducing the impact of enteric diseases |
| US8444989B1 (en) | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
| AR078253A1 (es) | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| HRP20200258T1 (hr) | 2010-03-16 | 2020-09-04 | Virginia Tech Intellectual Properties Inc | Živo atenuirano himerno cjepivo protiv svinjskog cirkovirusa |
| US9580474B2 (en) | 2010-09-08 | 2017-02-28 | The Johns Hopkins University | Polyionic papilloma virus-like particle (VLP) vaccines |
| CN103122352B (zh) | 2012-09-27 | 2015-02-11 | 华中农业大学 | 一种猪圆环病毒2型重组杆状病毒及制备方法和应用 |
| US10555994B2 (en) | 2015-03-30 | 2020-02-11 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | PCV2 ORF2 carrier platform |
-
2007
- 2007-12-14 AU AU2007333857A patent/AU2007333857B2/en active Active
- 2007-12-14 EP EP12155194.9A patent/EP2481420B1/en active Active
- 2007-12-14 PL PL07869309T patent/PL2094872T5/pl unknown
- 2007-12-14 BR BRPI0721083-3A patent/BRPI0721083A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2007-12-14 PT PT12155194T patent/PT2481420T/pt unknown
- 2007-12-14 WO PCT/US2007/087628 patent/WO2008076915A2/en not_active Ceased
- 2007-12-14 PL PL12155194T patent/PL2481420T3/pl unknown
- 2007-12-14 TW TW96148111A patent/TWI466682B/zh not_active IP Right Cessation
- 2007-12-14 RU RU2009126728/10A patent/RU2520087C2/ru active
- 2007-12-14 MX MX2009006066A patent/MX2009006066A/es active IP Right Grant
- 2007-12-14 CA CA2670836A patent/CA2670836C/en active Active
- 2007-12-14 EP EP18205622.6A patent/EP3466442A1/en active Pending
- 2007-12-14 CL CL200703648A patent/CL2007003648A1/es unknown
- 2007-12-14 DK DK07869309.0T patent/DK2094872T4/da active
- 2007-12-14 ES ES12155194T patent/ES2726777T3/es active Active
- 2007-12-14 CN CN200780046246.0A patent/CN101558169B/zh active Active
- 2007-12-14 DK DK12155194.9T patent/DK2481420T3/da active
- 2007-12-14 PT PT78693090T patent/PT2094872T/pt unknown
- 2007-12-14 HU HUE12155194 patent/HUE044410T2/hu unknown
- 2007-12-14 JP JP2009541620A patent/JP5200223B2/ja active Active
- 2007-12-14 US US12/519,135 patent/US8865183B2/en active Active
- 2007-12-14 AR ARP070105633A patent/AR064363A1/es unknown
- 2007-12-14 KR KR1020097014100A patent/KR101619730B1/ko active Active
- 2007-12-14 UA UAA200907134A patent/UA103298C2/ru unknown
- 2007-12-14 CN CN201710546405.9A patent/CN107412761A/zh active Pending
- 2007-12-14 ES ES07869309T patent/ES2625460T5/es active Active
- 2007-12-14 EP EP07869309.0A patent/EP2094872B2/en active Active
- 2007-12-14 HU HUE07869309A patent/HUE033130T2/en unknown
-
2009
- 2009-05-13 ZA ZA200903299A patent/ZA200903299B/xx unknown
-
2014
- 2014-09-10 US US14/483,097 patent/US9517260B2/en active Active
-
2016
- 2016-11-04 US US15/344,265 patent/US10010603B2/en active Active
-
2018
- 2018-05-15 US US15/980,286 patent/US10780156B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001016330A2 (en) * | 1999-08-31 | 2001-03-08 | Merial | Prevention of affections associated with porcine circovirus-2 |
| WO2001096377A2 (en) * | 2000-06-15 | 2001-12-20 | Purdue Research Foundation | Vaccine for congenital tremors in pigs |
| WO2003049703A2 (en) * | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious dna clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
| WO2006132605A2 (en) * | 2005-06-07 | 2006-12-14 | Temasek Life Sciences Laboratory Limited | Porcine circovirus type 2 vaccines |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BLANCHARD P. et al., Protection of swine against post-weaning multisystemic washing syndrome (PMWS) by porcine circovirus type 2 (PCV2) proteins, Vaccine, 2003, Nov, (abstract). FENAUX M. et al, A chimeric porcine circovirus (PCV) with the immunogenic capsid gene of the pathogenic PCV type 2 (PCV2) cloned into the genomic backbone of the nonpathogenic PCV1 induces protective immunity against PCV2 infection in pigs, J Virol, 2004, June (abstract) * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723022C2 (ru) * | 2015-02-04 | 2020-06-08 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для применения против субклинической инфекции lawsonia у свиней |
| US10751405B2 (en) | 2015-02-04 | 2020-08-25 | Intervet Inc. | Vaccine for use against subclinical Lawsonia infection in a pig |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2520087C2 (ru) | Лечение свиней с помощью антигена pcv2 | |
| RU2522849C2 (ru) | Лечение prdc у молодых свиней | |
| RU2520759C2 (ru) | Предупреждение и лечение субклинической формы болезней, вызываемых цирковирусом свиней (pcvd) | |
| JP5739602B2 (ja) | ブタの臨床症状の緩和のためのｐｃｖ２免疫原性組成物の使用 | |
| CN105451765A (zh) | 猪圆环病毒2型(pcv2)亚单位疫苗 | |
| JP2014065741A (ja) | ブタのｐｒｄｃの治療 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20191108 |