RU2514662C2 - Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro - Google Patents
Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2514662C2 RU2514662C2 RU2012134188/10A RU2012134188A RU2514662C2 RU 2514662 C2 RU2514662 C2 RU 2514662C2 RU 2012134188/10 A RU2012134188/10 A RU 2012134188/10A RU 2012134188 A RU2012134188 A RU 2012134188A RU 2514662 C2 RU2514662 C2 RU 2514662C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasminogen
- bacteria
- activation
- arginine
- protamine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 title abstract description 16
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 title abstract description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 title abstract description 7
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 11
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 claims description 10
- 230000033885 plasminogen activation Effects 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 7
- 101000605403 Homo sapiens Plasminogen Proteins 0.000 claims description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract 2
- 238000000151 deposition Methods 0.000 abstract 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract 2
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 abstract 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 10
- 108010088842 Fibrinolysin Proteins 0.000 description 9
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 8
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 3
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 101150093139 ompT gene Proteins 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 101150013341 pla gene Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 1
- 241001117074 Yersinia pestis KIM10+ Species 0.000 description 1
- 230000003616 anti-epidemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается способа определения активации плазминогена бактериями. Способ включает внесение протамина сульфата в подготовленный супернатант, инкубацию полученной смеси, осаждение клеток центрифугированием, инкубацию супернатанта с протамин сульфатом, осаждение белка и регистрацию активации плазминогена бактериями по количеству отщепившегося аргинина, содержание которого определяют методом Сакагуши по окрашиванию проб в красный цвет. Изобретение позволяет проводить регистрацию явления активации плазминогена бактериями в условиях in vitro с помощью протамина. 4 табл., 4 пр.
Description
Предлагаемое изобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении прикладных и фундаментальных исследований, связанных с изучением тонких механизмов патогенеза, инвазии, бактериемии и диссеминации микроорганизмов.
Известно, что ряд микробных патогенов использует систему плазминоген/плазмин человека для преодоления тканевых барьеров во время так называемых бактериальных метастазов(1). Они экспрессируют на своей поверхности рецепторы для фиксации и последующей активации плазминогена под влиянием урокиназы (uАР) и тканевого активатора плазминогена (tAP) хозяина, другие для этого используют собственные протеазы, входящие в семейство омптинов. Таким образом, активация плазминогена в плазмин существенно усиливает патогенетические возможности возбудителя за счет усиления его деструктивного потенциала, направленная на слом врожденных защитных сил чувствительного хозяина. Поэтому актуальным является удобный и безопасный способ детекции активации плазминогена тем или иным возбудителем.
Известен способ активации плазминогена клетками Yersinia pestis KIM D34 по Haiko J. (2), заключающийся в том, что для регистрации активности плазмина используют хромогенный субстрат Val-Leu-Lys-p-нитроанилин дигидрохлорида (S-2251), который добавляют в инкубационную смесь. Образование плазмина регистрируют при помощи специального ридера для планшетов при 405 нм.
Однако известный синтетический хромогенный субстрат характеризуется нестабильностью при хранении, длительностью процесса (т.к. инкубация порой составляет 24 часа), дороговизной реагентов и требует специальной аппаратуры.
За прототип выбран способ определения плазминогена хромогенным субстратом (см. А.П. Мамот, А.И. Мамаев, З.С. Барназа и др. «Метод определения плазминогена отечественным хромогенным субстратом и его диагностическое значение», журнал Клиническая лабораторная диагностика, №3, 2000 г., стр.21-23) (3), заключающийся в том, что к 0,5 мл суспензии бактерий в физиологическом растворе (109 кл/мл) добавляют 15 мкг человеческого плазминогена и 30 мкл хромогенного субстрата For-Ala-Phe-Lys-pNa. HBr в количестве 4 мкг/мл в конечном объеме 540 мкл, затем инкубируют при 37°С в течение 0,5-24 часов, расщепление субстрата плазмином регистрируют при 405 нм по отщепившемуся pNa и выражают в цифрах экстинкции ΔA405=t1-t0, в результате гидролиза субстрата образуется окрашенное вещество, подтверждающее присутствие плазмина.
Недостатком прототипа является сложность и длительность процесса исследования, тем более что сам синтез коммерческого препарата For-Ala-Phe-Lys-pNa. HBr представляет собой трудоемкий многостадийный процесс, включающий 7 стадий.
Кроме того, регистрация способности протеазы белков наружной мембраны возбудителей особо опасных инфекций активировать плазминоген путем расщепления хромогенных субстратов представляется сложным из-за особенностей работы с особо опасными инфекциями.
Технической задачей предлагаемого изобретения является разработка простого и более эффективного по времени и стоимости способа регистрации явления активации плазминогена бактериями особо опасных инфекций в условиях in vitro в максимально безопасных для экспериментатора условиях.
Поставленная задача достигается тем, что в известном способе определения активации плазминогена у бактерий в условиях in vitro, включающем реакцию взаимодействия плазмина с пептидным субстратом, в качестве последнего используют протамин сульфат, который вносят в количестве 100 мкл в подготовленный супернатант, который готовят в виде смеси: к 0,49 мл 0,2М фосфатного буфера, рН 8.0, добавляют 0,5 мл суспензии бактерий в физиологическом растворе (5×109 кл/мл) и 15 мкг человеческого плазминогена в конечном объеме 1 мл, затем полученную взвесь инкубируют в течение 1 часа при 37°С и осаждают центрифугированием при 11000 об/мин в течение 5 минут, после этого пробы инкубируют 2 часа при 37°С, затем белок в пробах осаждают добавлением 1 мл 20% ТХУ, помещают в ледяную баню и регистрируют активацию плазминогена бактериями по количеству отщепившегося аргинина, содержание которого определяют методом Сакагуши по окрашиванию проб в красный цвет, чем ярче окраска, тем большее количество отщепившегося аргинина, и соответственно выше активность исследуемого штамма.
Способ осуществляется следующим образом. Для подтверждения работы способа были использованы штаммы микроорганизмов V. cholerae (5879, 17259, 17779, 17625); Y. pestis (EV, TRU, ЖВR); F.tularensis (Schu, 543, novicidae, 1510) и штаммы бактерий E. coli (QD5003, QD5003 pRD13) из коллекции Ростовского-на-Дону противочумного института.
Предварительно готовят суспензию бактерий по оптическому стандарту мутности в концентрации (5×109кл/мл), которые обеззараживают добавлением мертиолата натрия (1:10000).
Затем для проведения реакции готовят инкубационную смесь, для этого к 0,49 мл 0,2М фосфатного буфера, рН 8.0, добавляют 0,5 мл суспензии бактерий в физиологическом растворе (5×109 кл/мл) и 15 мкг человеческого плазминогена в конечном объеме 1 мл. В первую контрольную пробирку вместо суспензии клеток вносят физиологический раствор (контроль плазминогена), во вторую вносят физиологический раствор вместо бактериальной суспензии и плазминогена (контроль протамина). Инкубацию ведут 1 час при 37°С, после чего клетки осаждают центрифугированием (11000 об/мин, биофуга Heareus) в течение 5 минут. Супернатант переносят в чистую пробирку. В опытные и контрольные пробы вносят по 100 мкл протамина, что соответствует 10 мг/мл упомянутого субстрата.
После этого пробы инкубируют 2 часа при 37°С. Затем белок осаждают добавлением 1 мл 20% ТХУ, чем достигается дополнительное обеззараживание содержимого пробы. Осветленный центрифугированием супернатант переносят в стеклянные пробирки, которые помещают в ледяную баню и используют для определения содержания аргинина методом Сакагуши (4).
Количество отщепленного активированным плазминогеном аргинина определяют по калибровочной кривой, которую строят с использованием в качестве стандарта препарата солянокислого аргинина. Активность выражают в мкг аргинина, отщепленного от протамина плазмином, образовавшимся вследствие активации плазминогена клетками исследуемого микроорганизма за 1 час инкубации при 37°С.
Кроме того, способ сопровождается окрашиванием проб в красный цвет, чем ярче окраска, тем выше содержание аргинина и следовательно выше активность исследуемого штамма.
Пример №1.
В качестве исследуемых штаммов использовали культуры V. cholerae 5879, 17259 (изолированные от больных и несущие интактный ген ompT, детерминирующий плазминогенактивирующую способность штаммов) и 17625, 17779 (выделенные из проб воды и лишенные интактного гена ompT в результате мутационных событий).
Как видно из таблицы 1, штаммы холерных вибрионов, полученные из клинического материала, обладали способностью активировать плазминоген человека в условиях in vitro, на что указывают высокие показатели содержания аргинина и окрашивание проб, тогда как штаммы, выделенные из проб воды, такой способностью не обладали.
Пример №2.
Для изучения были взяты экспериментальные штаммы Е. coli QD5003, E. coli QD5003pRD13 (с плазмидой несущий ген активатора плазминогена pla+ Yersinia pestis).
Как следует из таблицы 2, штаммы кишечной палочки обладали плазминогенактивирующей способностью, причем у штамма, трансформированного плазмидой pRD13 с геном рlа из чумного микроба, активность была в 2 раза выше, чем у исходного в связи с суммацией активностей двух генов.
Пример №3.
В качестве исследуемых использовали штаммы возбудителя туляремии - Francisella tularensis Schu, 543 (вирулентные штаммы), 1510 и F. novicidae (авирулентные штаммы) (табл.3).
Из данных таблицы 3 можно заключить, что вирулентные штаммы обладали высокой способностью активировать плазминоген, тогда как непатогенные для человека варианты - сниженной.
Пример №4.
В качестве исследуемых штаммов использовали культуры возбудителя чумы - Yersinia pestis EV (pla+, вакцинный штамм), TRU, ЖВК (Δpla, авирулентные штаммы) (табл.4).
Из данных таблицы 4 видно, что штамм, несущий ген pla, обладает высокой способностью активировать плазминоген, тогда как штаммы, не содержащие в своем геноме pla, данной активностью не обладали.
Из примеров 1-4 следует, что заявленный способ позволяет характеризовать бактерии по плазминогенактивирующей способности, не уступая при этом методу, изложенному в ближайшем аналоге, с соблюдением правил противоэпидемической защиты экспериментатора.
Таким образом, регистрацию активации плазминогена бактериями осуществляют с использованием в качестве субстрата протамин сульфата, на 60% состоящего из остатков аргинина, связи между которыми расщепляет плазмин.
Использование предлагаемого изобретения позволяет с помощью протамина простым, не требующим дорогостоящих реагентов и оборудования, а также эффективным по времени (в течение 4-х часов), безопасным для экспериментатора условиях проводить регистрацию явления активации плазминогена бактериями в условиях in vitro.
В дальнейшем предложенный способ может быть использован при изучении патогенеза холеры, туляремии и др. инфекций, а также при разработке и характеристике вакцинных препаратов из возбудителей особо опасных инфекций на основе белков наружной мембраны и пузырьков из них.
Источники информации
1. Lahteenmaki К., Edelman S., Korhonen Т.К. Bacterial metastasis: the host plasminogen system in bacterial invasion // Trends in Microbiology. - 1984 - Vol.13. - N2. - P.79-85.
2. Haiko J., Suomalainen M., Ojala Т., Lahteemaki K., Korhonen Т.К., Breaking barriers - attack on innate immune defence by omptin surface proteases ofenterobactsrial pathogens. // Innate Immunity 2009. - Vol.15. - №2. - р.67-80.
3. Момот А.П., Мамаев А.Н., Баркаган З.С., Неведрова О.Е., Макаров В.А., Воюшина Т.Л., Ерин Д.М. Метод определения плазминогена с отечественным хромогенным субстратом и его диагностическое значение. // Клиническая лабораторная диагностика., 2000, №3, с.21-24.
4. Gilboe D.D., Williams J.N. Evaluation of the Sakagushi reaction for quantitative determination of arginine. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1956 - Vol.91. - №4. - р.535-536.
| Таблица 1 | |||
| № | Штамм V. cholerae | Протамин | Хромогенный субстрат |
| мкгАрг/109м.к/час | ОП405, A405=t1-t0 (за 24 ч) | ||
| 1. | 5879 | 48,0 | 0,19 |
| 2. | 17259 | 22,0 | 0,153 |
| 3. | 17779 | 0 | 0 |
| 4. | 17625 | 0 | 0 |
| Таблица 2 | |||
| № | Штамм E. coli | Протамин | Хромогенный субстрат |
| мкгАрг/109м.к/час | ОП405, A405=t1-t0 (за 24 ч) | ||
| 1. | QD5003 | 9,22 | 0,378 |
| 2. | QD5003 pRD13 | 19,83 | 0,512 |
| Таблица 3 | |||
| № | Штамм F. Tularensis | Протамин | Хромогенный субстрат |
| мкгАрг/10м9.к/час | ОП405, А405=t1-t0 (за 24 ч) | ||
| 1. | Schu | 10,0 | 0,137 |
| 2. | 543 | 5,6 | 0,128 |
| 3. | novicidae | 2,6 | 0,155 |
| 4. | 1510 | 1,55 | 0,277 |
| Таблица 4 | |||
| № | Штамм Y. pestis | Протамин | Хромогенный субстрат |
| мкгАрг/109м.к/час | ОП405, А405=t1-t0 (за 24 ч) | ||
| 1. | EV | 155,19 | 0,149 |
| 2. | TRU | 0,78 | 0 |
| 3. | ЖВR | 0 | 0 |
Claims (1)
- Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro, включающий реакцию взаимодействия плазмина с пептидным субстратом, отличающийся тем, что в качестве субстрата используют протамин сульфат, который вносят в количестве 100 мкл в подготовленный супернатант, последний готовят в виде смеси: 0,49 мл 0,2 М фосфатного буфера, рН 8,0, добавляют 0,5 мл суспензии бактерий в физиологическом растворе (5×109 кл/мл) и 15 мкг человеческого плазминогена в конечном объеме 1 мл, затем полученную смесь инкубируют в течение одного часа при 37°С и клетки осаждают центрифугированием при 11000 об/мин в течение 5 мин, после этого супернатант с протамин сульфатом инкубируют 2 часа при 37 °С, белок осаждают добавлением 1 мл 20% ТХУ, помещают в ледяную баню, активацию плазминогена бактериями регистрируют по количеству отщепившегося аргинина, содержание которого определяют методом Сакагуши по окрашиванию проб в красный цвет, чем ярче окраска, тем выше содержание аргинина.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012134188/10A RU2514662C2 (ru) | 2012-08-09 | 2012-08-09 | Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012134188/10A RU2514662C2 (ru) | 2012-08-09 | 2012-08-09 | Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012134188A RU2012134188A (ru) | 2014-02-20 |
| RU2514662C2 true RU2514662C2 (ru) | 2014-04-27 |
Family
ID=50113829
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012134188/10A RU2514662C2 (ru) | 2012-08-09 | 2012-08-09 | Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2514662C2 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5231006A (en) * | 1986-10-16 | 1993-07-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Method for the determination of plasminogen |
| RU2252421C1 (ru) * | 2003-10-23 | 2005-05-20 | Айсина Роза Бакировна | Способ определения тканевого активатора плазминогена |
-
2012
- 2012-08-09 RU RU2012134188/10A patent/RU2514662C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5231006A (en) * | 1986-10-16 | 1993-07-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Method for the determination of plasminogen |
| RU2252421C1 (ru) * | 2003-10-23 | 2005-05-20 | Айсина Роза Бакировна | Способ определения тканевого активатора плазминогена |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HAIKO J et all, Invited review: Breaking barriers-attack on innate immune defences by omptin surface proteases of enterobacterial pathogens, Innate Immun., 2009 Apr, Vol. 15, No. 2, p. 67-80, abstract * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012134188A (ru) | 2014-02-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| De Bernardis et al. | Evidence that members of the secretory aspartyl proteinase gene family, in particular SAP2, are virulence factors for Candida vaginitis | |
| Kline et al. | Gram‐positive uropathogens, polymicrobial urinary tract infection, and the emerging microbiota of the urinary tract | |
| Kuntaman et al. | Prevalence of methicillin resistant Staphylococcus aureus from nose and throat of patients on admission to medical wards of DR Soetomo Hospital, Surabaya, Indonesia | |
| Cattelan et al. | Hyperbiofilm formation by Bordetella pertussis strains correlates with enhanced virulence traits | |
| JP5535942B2 (ja) | 試験試料中の黄色ブドウ球菌の有無を検出するための方法および媒体 | |
| Atalay et al. | Investigation of possible virulence factors in Candida strains isolated from blood cultures | |
| Haas et al. | Characterization of DNase activity and gene in Streptococcus suis and evidence for a role as virulence factor | |
| Xu et al. | Unusual features and molecular pathways of Staphylococcus aureus L-form bacteria | |
| JP5475278B2 (ja) | 細胞内酵素放出前の細胞外酵素不活性化を用いたサンプル中の細胞識別 | |
| Peacock | Staphylococcus aureus | |
| Bereta et al. | Identification of a new genetic variant (G231N, E232T, N235D) of peptidylarginine deiminase from P. gingivalis in advanced periodontitis | |
| Braga-Silva et al. | Trailing end-point phenotype antibiotic-sensitive strains of Candida albicans produce different amounts of aspartyl peptidases | |
| RU2514662C2 (ru) | Способ определения активации плазминогена бактериями в условиях in vitro | |
| US8546103B2 (en) | Method for detecting the presence or absence of pathogenic Staphylococci in a test sample, including test mixture with micro particles | |
| Xue et al. | Lack of the delta subunit of RNA polymerase increases virulence related traits of Streptococcus mutans | |
| Sobieh et al. | Estimating the expression levels of genes controlling biofilm formation and evaluating the effects of different conditions on biofilm formation and secreted aspartic proteinase activity in Candida albicans and Saccharomyces cerevisiae: a comparative study | |
| Kholodkov et al. | Effect of Bacillus cereus hemolysin II on hepatocyte cells | |
| Arzumanian et al. | Communities of skin propionic bacteria: cultivation and antifungal antagonistic activity | |
| Ali et al. | Hydrolytic enzymes as probable virulence factors For Aspergillus ochraceus Fm90 in Aspergillosis | |
| Dawoud et al. | Impact of sub-inhibitory antibiotic concentrations on biofilm formation among nosocomial isolates of Enterococcus species | |
| Nikitushkin et al. | Effect of secreted Rpf protein on intracellular contacts in Micrococcus luteus and Mycobacterium smegmatis cultures | |
| Taha et al. | Detection of extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) in clinical isolates of Klebsiella pneumoniae using the ESBL NDP test and flow cytometric assay in comparison to the standard disc diffusion | |
| RU2822353C1 (ru) | Способ генотипирования B.pertussis из клинических образцов на основе вложенной ПЦР | |
| Chouhan et al. | Episymbiotic Saccharibacteria suppresses epithelial immunoactivation through Type IV pili and TLR2 dependent endocytosis | |
| RU2787047C1 (ru) | ПЛАЗМИДНЫЙ ВЕКТОР pESB ДЛЯ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ NEISSERIA GONORRHOEAE К БЕТА-ЛАКТАМНЫМ АНТИБИОТИКАМ И СПОСОБ ЕГО КОНСТРУИРОВАНИЯ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170810 |