RU2509777C2 - Анти-mif антитела - Google Patents
Анти-mif антитела Download PDFInfo
- Publication number
- RU2509777C2 RU2509777C2 RU2010132647/10A RU2010132647A RU2509777C2 RU 2509777 C2 RU2509777 C2 RU 2509777C2 RU 2010132647/10 A RU2010132647/10 A RU 2010132647/10A RU 2010132647 A RU2010132647 A RU 2010132647A RU 2509777 C2 RU2509777 C2 RU 2509777C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- mif
- antibodies
- seq
- antigen binding
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 77
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 62
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 62
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 101000950847 Homo sapiens Macrophage migration inhibitory factor Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 101001011645 Homo sapiens Muellerian-inhibiting factor Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 102000057097 human MIF Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000008827 biological function Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 91
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 24
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 18
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 17
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 15
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 claims description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 11
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 10
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 claims description 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 9
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 8
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 7
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 7
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 6
- 102000034655 MIF Human genes 0.000 claims description 6
- 108060004872 MIF Proteins 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 claims description 6
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 4
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 claims description 4
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 claims description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 3
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 claims 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 abstract description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 abstract description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 abstract description 6
- 102000009073 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000013386 metal-inorganic framework Substances 0.000 description 124
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 28
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 108010008429 immunoglobulin-binding factors Proteins 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 7
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 7
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 4
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 3
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 3
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 101001074035 Homo sapiens Zinc finger protein GLI2 Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 3
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 3
- 102100035558 Zinc finger protein GLI2 Human genes 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 3
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 3
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 2
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 101150058224 MIF gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 2
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 2
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000009958 sewing Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001272720 Medialuna californiensis Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101001018878 Mus musculus Macrophage migration inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036940 Prostatic adenoma Diseases 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 206010001053 acute respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001740 anti-invasion Effects 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- -1 coatings Substances 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000000585 glomerular basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000003244 pro-oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 239000006176 redox buffer Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 238000012106 screening analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000011706 wistar kyoto rat Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hematology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено моноклональное антитело и его антиген-связывающие части, которые специфически связывают C-концевую или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF). Анти-MIF антитело и его антиген-связывающая часть дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF человека. Также описаны выделенная тяжелая и легкая цепь иммуноглобулинов, полученных из анти-MIF антител, и молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие иммуноглобулины. Кроме того, раскрыт способ идентификации анти-MIF антител, фармацевтические композиции, содержащие эти антитела, и способ применения этих антител и композиций для лечения заболеваний, связанных с MIF. 9 н. и 13 з.п. ф-лы, 10 ил., 16 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к моноклональным антителам и их антиген-связывающим частям, которые специфически связывают С-концевую часть или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF). Эти анти-MIF антитела и их антиген-связывающие части дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF человека. Изобретение также относится к выделенным тяжелым и легким цепям иммуноглобулинов, полученных из анти-MIF антител, и молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим такие иммуноглобулины. Настоящее изобретение также относится к способу идентификации анти-MIF антител, фармацевтическим композициям, содержащим эти антитела, и способу применения этих антител и композиций для лечения заболеваний, связанных с MIF.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Фактор ингибирования миграции макрофагов (MIF) представляет собой цитокин, первоначально выделенный благодаря своей способности ингибировать случайную миграцию макрофагов in vitro (Bloom et al. Science 1966, 153, 80-2; David et al. PNAS 1966, 56, 72-7). Хотя MIF был известен с 1966 года, его точная функция в большинстве клеток не была известна, но, по-видимому, MIF является ключевым регулятором, функционирующим в начале каскада врожденного и приобретенного иммунного ответа.
кДНК MIF человека была клонирована в 1989 году (Weiser et al., PNAS 1989, 86, 7522-6), а местоположение его гена было картировано на 22 хромосоме. Продуктом гена MIF является аминокислотный белок с молекулярной массой 12,5 кД. Белок является высоко консервативным: гомология по последовательности между MIF человека, мыши, крысы и быка составляет 90-96%. Однако с другими белками MIF не имеет существенной гомологии. Трехмерная структура MIF не похожа на структуру любого другого цитокина или гипофизарного гормона. Белок кристаллизуется в виде тримера из идентичных субъединиц. Каждый мономер содержит две антипараллельные альфа-спирали, которые упакованы против четырех параллельных бета-слоев. Мономер имеет два дополнительных бета-слоя, которые взаимодействуют с бета-слоями прилегающих субъединиц, образуя границу между мономерами. Три бета-слоя расположены так, что они образуют бочку, включающую доступный для растворителей канал, проходящий через центр белка вдоль молекулярной оси симметрии третьего порядка (Sun et al. PNAS 1996, 93, 5191-5196).
Было опубликовано, что секрецию MIF макрофагами индуцируют очень низкие концентрации глюкокортикоидов (Calandra et al. Nature 1995, 377, 68-71). Однако как провоспалительный цитокин MIF также противодействует эффектам (является контр-регулятором) глюкокортикоидов и стимулирует секрецию других цитокинов, таких как фактор некроза опухолей TNF-α и интерлейкин IL-1β (Baugh et al. Crit Care Med 2002, 30, S27-35), что позволяет предположить его участие в патогенезе воспалительных и иммунных заболеваний. MIF также напрямую ассоциирован с ростом лимфомы, меланомы и рака толстой кишки (Nishihira et al. J Interferon Cytokine Res. 2000, 20:751-62).
MIF является медиатором многих патологических состояний, и, поэтому, ассоциирован с множеством заболеваний, включая воспалительное заболевание кишечника (IBD), ревматоидный артрит (RA), синдром острой дыхательной недостаточности (ARDS), астму, гломерулонефрит, IgA-нефропатию, рак, инфаркт миокарда (MI) и сепсис.
Против рекомбинантного MIF человека были получены поликлональные и моноклональные анти-MIF антитела (Shimizu et al., FEBS Lett. 1996, 381, 199-202; Kawaguchi et al., J. Leukoc. Biol. 1986, 39, 223-232; и Weiser et al., Cell. Immunol. 1985, 90, 167-78).
В терапии было предложено использовать анти-MIF антитела для ингибирования высвобождения TNF-α. Было опубликовано, что группа Calandra et al. (J. Inflamm. 1995. 47, 39-51) использовала антитела к MIF для защиты животных от септического шока, экспериментально вызванного грам-положительными и грам-отрицательными бактериями. Было предложено использовать анти-MIF антитела в качестве терапевтического средства для модулирования продукции цитокинов при септическом шоке и других воспалительных заболеваниях.
В патенте США № 6645493 раскрыты моноклональные анти-MIF антитела, полученные из клеток гибридомы, которые нейтрализуют биологическую активность MIF. На животной модели можно показать, что эти мышиные анти-MIF антитела обладают полезным эффектом при лечении эндотоксинового шока. Некоторые из описанных антител к MIF (III. D.9, XIV.14.3 и XIV.15.5) использовались в настоящем изобретении для сравнительных экспериментов.
В US 2003/0235584 раскрыты способы получения высокоаффинных антител к MIF с использованием животных, у которых проведен гомозиготный нокаут гена MIF.
В 1994 г. группой Galat et al. был описан фактор, ингибирующий гликозилирование (GIF) (Eur. J. Biochem. 1994, 224, 417-21). В настоящий момент известно, что MIF и GIF идентичны. Группой Watarai et al. (PNAS 2000, 97, 13251-6) были описаны поликлональные антитела, связывающие различные эпитопы GIF, для идентификации биохимической природы пост-трансляционной модификации GIF в клетках Ts. Группой Watarai et al. (PNAS 2000, 97, 13251-6) было опубликовано, что GIF присутствует в различных конформационных изоформах in vitro. Один тип изомера возникает в результате химической модификации единственного остатка цистеина. Химическая модификация приводит к конформационным изменениям в белке GIF и меняет его биологическую функцию.
Принимая во внимание сложную роль MIF в различных заболеваниях, весьма желательно выяснить функции эпитоп-специфичных антител к MIF и их применение в терапии. Таким образом, для лечения заболеваний и состояний, опосредованных MIF, необходимы эпитоп-специфичные анти-MIF антитела, которые ингибируют биологическую функцию MIF человека.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к антителам и их антиген-связывающим частям, которые специфично связывают С-концевую или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF).
Изобретение дополнительно относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим эти антитела или их антиген-связывающие части, а также к векторам, включающим такую нуклеиновую кислоту, и к клеткам-хозяевам, включающим такой вектор, а также к способам рекомбинантного получения полипептидов, кодируемых молекулами нуклеиновых кислот.
Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим анти-MIF антитело или его антиген-связывающую часть. Фармацевтическая композиция может также содержать фармацевтически приемлемый носитель или другие терапевтические средства.
Изобретение также относится к применению анти-MIF антитела или его антиген-связывающей части в изготовлении лекарственного средства для лечения иммунологических заболеваний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения.
Изобретение дополнительно относится к анти-MIF антителу или его антиген-связывающей части для применения в лечении иммунологических заболеваний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения.
Изобретение также относится к способам лечения ряда иммунологических заболеваний и состояний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения, с помощью эффективного количества анти-MIF антитела или его антиген-связывающей части.
Изобретение также относится к способам диагностики. Анти-MIF антитело или его антиген-связывающую часть можно использовать для детекции MIF в биологическом образце.
Изобретение дополнительно относится к способу идентификации анти-MIF антитела, способного ингибировать активный MIF и вызывать полезный эффект в животной модели.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг.1 показана аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи анти-MIF антитела человека по изобретению.
На Фиг.2 показана аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи анти-MIF антитела человека по изобретению.
На Фиг.3 показана ДНК-последовательность и ее трансляция вариабельной области легкой цепи анти-MIF антител человека по изобретению.
На Фиг.4 показана ДНК-последовательность и ее трансляция вариабельной области тяжелой цепи анти-MIF антител человека по изобретению.
На Фиг.5 показано конкурентное связывание мышиного антитела III. D.9 относительно контрольного антитела (C3) и анти-MIF антитела, Bax94. При увеличении количества антитела Вах94 можно наблюдать явную конкуренцию.
На Фиг.6 показано, что антитело Вах94 (точечная линия) и антитело Вах152 (пунктирная линя) увеличивают выживаемость и задерживают время смерти в животной модели перитонита по сравнению с контрольным антителом (С3).
На Фиг.7 показано дифференциальное связывание антитела Вах94 с активным и неактивным MIF. Антитело Вах94 связывает активный MIF в прямом ELISA, при этом не связывая неактивный MIF.
На Фиг.8 приведена таблица, в которой обобщены in vitro свойства анти-MIF антител.
На Фиг.9 показаны проапоптотические эффекты анти-MIF антител на клетки. Показана активность клеточной каспазы-3 (эффекторной каспазы) после обработки клеток РС-3 антителами. Анализ проводили в трех повторах, и данные представлены в виде среднего значения ± SD (стандартное отклонение).
На Фиг.10 показан анти-инвазивные эффекты анти-MIF антител. Исследовали инвазию клеток рака простаты PC-3 через поры покрытых матригелем вкладышей Transwell™. Подсчитывали число проникших клеток в видимом поле (микроскопа при 400-кратном увеличении). Данные представлены в виде среднего ± SD из 3-10 подсчетов клеток в видимом поле, а также показаны значимые различия.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Определения и общие методики
Если в настоящем документе не указано иное, то научные и технические термины, используемые применительно к настоящему изобретению, будут иметь значение, обычно понимаемое средними специалистами в данной области. Обычно описанными в настоящем документе номенклатурами, используемыми применительно к культивированию клеток и тканей, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики и химии белка и нуклеиновых кислот (а также используемыми методиками) являются хорошо известные и обычно применяемые в данной области. Способы и методики по настоящему изобретению обычно проводят стандартными способами, хорошо известными в данной области и описанными в ряде общих и более конкретных источниках, на которые даны ссылки и которые описаны в настоящей спецификации, если не указано иное. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992); и Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990); которые включены в настоящее описание путем ссылки.
«MIF» или «фактор ингибирования миграции макрофагов» относится к белку, который известен как ключевой медиатор в иммунном и воспалительном ответе, особенно в качестве конт-регулятора действия глюкокортикоидов. MIF включает MIF млекопитающих, в частности, MIF человека (первичный номер доступа в базе данных Swiss-Prot: P14174), у которого мономерная форма кодирована в виде 115-аминокислотного белка, а продуцируется в виде 114-аминокислотного белка вследствие отщепления первого метионина. «MIF» также включает «GIF» (фактор, ингибирующий гликозилирование) и другие формы MIF, такие как слитые белки MIF. Нумерация аминокислот MIF начинается с N-концевого метионина (аминокислота 1) и заканчивается С-концевым аланином (аминокислота 115).
Термин «активный MIF» относится к природным конформационным изоформам MIF, которые важны вследствие своих биологических функций. Активный MIF включает изоформы, которые находятся на поверхности клеток (таких как ТНР1 и т.п.). Активный MIF также включает изоформы MIF, встречающиеся в сыворотке млекопитающих после бактериальной инфекции.
«Антитело» относится к интактному антителу и антиген-связывающей части, которая конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание. В общем, см. Fundamental Immunology, Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)) (включенную путем ссылки). Термин «антитело» включает полученные генно-инженерными способами формы, такие как химерные или гуманизированные антитела.
Термин «антиген-связывающая часть» антитела относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связывать антиген (например, MIF). Антиген-связывающие части могут быть получены с помощью методик рекомбинантных ДНК или ферментативного или химического расщепления интактных антител. Антиген-связывающие части включают Fab, Fab', F(ab')2, Fv и определяющую комплементарность область (CDR), одноцепочечные антитела (scFv), химерные антитела, диатела и полипептиды, которые содержат, по меньшей мере, часть антитела, достаточный для специфического связывания антигена с полипептидом. Начиная с N-конца и до С-конца оба зрелых вариабельных домена легкой и тяжелой цепей содержат области FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Распределение аминокислот по доменам дано в соответствии с определениями, изложенными в Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), Chothia et. al. J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987), или Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989). Антитело или его антиген-связывающая часть может быть модифицировано или связано с другой функциональной молекулой (например, другим пептидом или белком). Например, антитело или его антиген-связывающая часть может быть функционально связано с одной или несколькими молекулами, такими как другое антитело (примером является антитело с двойной специфичностью или диатело), или детектируемым агентом, цитотоксическим агентом, фармацевтическим агентом и/или линкерной молекулой.
Термин «антитело человека» относится к антителу, в котором последовательности вариабельных и константных доменов являются последовательностями человека. Термин охватывает антитела с последовательностями, полученными из генов человека, но которые были изменены, например, для уменьшения возможной иммуногенности, увеличения аффинности, удаления цистеинов, которые могут вызывать нежелательный фолдинг белков, и т.д. Термин охватывает такие антитела, полученные рекомбинантным способом в клетках организмов отличных от человека, которые могут давать не типичное для клеток человека гликозилирование.
Термин «гуманизированное антитело» относится к иммуноглобулинам, цепям иммуноглобулинов или их фрагментам (таким как Fv, Fab, Fab', F(ab')2, или другие антиген-связывающие части антител), которые содержат последовательности из иммуноглобулинов организмов, отличных от человека.
Термин «химерное антитело» относится к антителу, которое содержит области антител одного или нескольких различных биологических видов.
Термин «выделенное антитело» или «выделенная его антиген-связывающая часть» относится к антителу или его антиген-связывающей части, которые были идентифицированы и выделены из источника получения антител, такого как библиотека фагового дисплея или В-клеточный репертуар.
Термин «KD» относится к константе равновесия диссоциации Fab-части конкретного антитела с соответствующим антигеном.
Термины «центральная области» и «С-концевая область» MIF относятся к области MIF человека, включающей аминокислоты 35-68 и 86-115, соответственно.
Термин «эпитоп» включает любую белковую детерминанту, способную специфически связывать иммуноглобулин или фрагмент антитела. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как экспонированные аминокислоты, аминосахара или другие углеводные боковые цепи, и обычно имеют определенные трехмерные структурные характеристики, а также определенные характеристики заряда.
Термин «вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной переносить другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор представляет собой плазмиду, т.е. кольцевую двухцепочечную петлю ДНК, в которую можно лигировать дополнительные фрагменты ДНК.
Термин «клетка-хозяин» относится к клеточной линии, способной продуцировать рекомбинантный белок после введения экспрессионного вектора. Термин «рекомбинантная клеточная линия» относится к клеточной линии, в которую введен рекомбинантный экспрессионный вектор. Следует понимать, что «рекомбинантная клеточная линия» означает не только конкретную используемую клеточную линию, но также и потомство такой клеточной линии. Поскольку в последующих поколениях могут возникнуть некоторые модификации вследствие либо мутации, либо влияния внешней среды, такое потомство в реальности может быть неидентично родительской клетке, но все равно включено в объем термина «рекомбинантная клеточная линия», используемого в настоящем описании.
Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому и всем растворителям, дисперсионным средам, оболочкам, антибактериальным и противогрибковым агентам, изотоническим и задерживающим абсорбцию агентам, и т.п., которые являются физиологически совместимыми.
Анти-MIF антитела
В одном варианте осуществления изобретение относится к выделенным моноклональным антителам или их антиген-связывающим частям, которые специфически связывают С-концевую или центральную области MIF человека и дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF. В некоторых вариантах осуществления изобретения моноклональными антителами является моноклональные антитела человека. В других вариантах осуществления изобретения моноклональными антителами являются гуманизированные моноклональные антитела.
В некоторых вариантах осуществления изобретения легкая цепь анти-MIF антитела содержит аминокислотную последовательность, которая тождественна аминокислотной последовательности VL антитела Bax8 (SEQ ID NO: 1), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 2), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 3), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 4), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 5), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 6), или аминокислотной последовательности, которая имеет 85%, предпочтительно, 90% гомологии по последовательности с указанными аминокислотными последовательностями. В некоторых вариантах осуществления изобретения легкая цепь содержит аминокислотную последовательность от начала CDR1 до конца CDR3 любого одного из указанных антител. В некоторых вариантах осуществления изобретения легкая цепь анти-MIF антитела содержит, по меньшей мере, CDR1, CDR2 или CDR3 легкой цепи аминокислотных последовательностей, показанных на Фиг.1.
В некоторых вариантах осуществления изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность вариабельного домена (VH) антитела Bax8 (SEQ ID NO: 7), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 8), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 9), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 10), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 12), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 12), или аминокислотной последовательности, которая имеет 85%, предпочтительно, 90% гомологии по последовательности с указанными аминокислотными последовательностями. В некоторых вариантах осуществления изобретения тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность от начала CDR1 до конца CDR3 любого одного из указанных антител. В некоторых вариантах осуществления изобретения тяжелая цепь анти-MIF антитела содержит, по меньшей мере, CDR1, CDR2 или CDR3 тяжелой цепи аминокислотных последовательностей, показанных на Фиг.2.
Класс и подкласс анти-MIF антител
Анти-MIF антитело по изобретению представляет собой выделенное моноклональное антитело. Анти-MIF антитело может быть молекулой IgG, IgM, IgE, IgA или IgD. В других вариантах осуществления изобретения анти-MIF антитело является IgG и представляет собой подкласс IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. В других вариантах осуществления изобретения антитело принадлежит к подклассу либо IgG1, либо IgG4. В других вариантах осуществления изобретения антитело принадлежит к подклассу IgG4. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело IgG4 имеет единственную мутацию, меняющую серин (серин 228, по схеме нумерации Kabat) на пролин. Соответственно, субпоследовательность CPSC в Fc-области IgG4 становится СРРС, которая соответствует последовательности в IgG1 (Angal et al. Mol. Immunol. 1993, 30, 105-108).
Эпитопы MIF, узнаваемые анти-MIF антителами
В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к анти-MIF антителам или их антиген-связывающим частям, специфически связывающим области 35-68-й или 86-115-й аминокислот MIF человека, соответственно, предпочтительно, анти-MIF антитела специфически связывают области от 50-й до 68-й или от 86-й до 102-й аминокислоты, соответственно, и ингибируют биологическую функцию MIF человека.
В других вариантах осуществления изобретение относится к анти-MIF антителам, которые специфически связывают активный MIF и дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF. В некоторых вариантах осуществления изобретения активный MIF является мембраносвязанным.
Неожиданно оказалось, что в изучении связывания с MIF человека анти-MIF антитела по изобретению способны конкурировать с анти-MIF антителом III.D.9. Конкуренцию с III.D.9 можно определить, как описано в примере 5.
Аффинность связывания анти-MIF антител с MIF человека
Изобретение относится к анти-MIF антителам или их антиген-связывающим частям, которые связывают MIF человека с KD 5×10-7 M или меньше. В других вариантах осуществления изобретения антитела связывают MIF человека с KD 5×10-8 M или меньше, 5×10-9 M или меньше или 5×10-10 M или меньше.
Аффинность связывания анти-MIF антител или их антиген-связывающих частей с MIF человека можно определить способами, известными в данной области. Например, аффинность связывания можно измерить с помощью поверхностного плазменного резонанса (BIACORE). В примере 10 приведен способ определения констант аффинности анти-MIF антител с помощью методики BIACORE.
В некоторых вариантах осуществления изобретение дополнительно относится к анти-MIF антителам или их антиген-связывающим частям, которые связывают активный MIF с KD меньше 500 нМ и дополнительно ингибируют биологическую функцию MIF человека. В некоторых вариантах осуществления изобретения анти-MIF антитела или их антиген-связывающие части связывают активный MIF с KD меньше 50 нМ.
Получение анти-MIF антител
Анти-MIF антитела или их антиген-связывающие части по настоящему изобретению можно получить многими способами, известными специалисту в данной области, такими как скрининг библиотек фагового дисплея или фрагментов антител. Можно использовать различные форматы библиотек фагового дисплея, например, библиотеки scFv- или Fab-фрагментов и т.п. Скрининг библиотеки фагового дисплея проводят для поиска фрагментов антител с желаемой аффинностью к некоторым эпитопам, и генетический материал выделяют из соответствующего клона. В последовательных раундах создания и скрининга библиотек можно выделить фрагмент антитела с увеличенной аффинностью по сравнению с аффинностью исходно выделенного фрагмента антитела. Аффинность идентифицированного анти-MIF фрагмента можно дополнительно повысить с помощью созревания аффинности.
Нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяева и рекомбинантные способы изготовления анти-MIF антител
Изобретение дополнительно относится к молекулам нуклеиновых кислот, кодирующим анти-MIF антитела или их антиген-связывающие части по настоящему изобретению, а также к векторам, включающим такую нуклеиновую кислоту, и к клеткам-хозяевам, содержащим такой вектор, а также к способам рекомбинантного получения полипептида, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты.
В некоторых вариантах осуществления изобретения ДНК-последовательность, кодирующая VL-область анти-MIF антитела, включает нуклеотидную последовательность, которая тождественна последовательности VL антитела Bax8 (SEQ ID NO: 13), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 14), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 15), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 16), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 17), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 18), показанных на Фиг.3, или последовательности, которая имеет 85%, предпочтительно, 90% гомологии по последовательности с любой из указанных нуклеотидных последовательностей.
В некоторых вариантах осуществления изобретения ДНК-последовательность, кодирующая VH-область анти-MIF антитела, включает нуклеотидную последовательность, которая тождественна последовательности VH антитела Bax8 (SEQ ID NO: 19), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 20), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 21), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 22), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 23), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 24), показанных на Фиг.4, или последовательности, которая имеет 85%, предпочтительно, 90% гомологии по последовательности с любой из указанных нуклеотидных последовательностей.
Получение анти-MIF антител по настоящему изобретению включает любой способ получения рекомбинантной ДНК с помощью генной инженерии, например, посредством обратной транскрипции РНК и/или амплификации ДНК и клонирования в экспрессионный вектор.
В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор является вирусным вектором, в котором дополнительные сегменты ДНК можно лигировать в вирусный геном. В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор способен к автономной репликации в клетке-хозяине, в которую он введен (например, бактериальные векторы, имеющие бактериальную точку инициации репликации, или эписомальные векторы млекопитающих). В других вариантах осуществления изобретения вектор (например, неэписомальные векторы млекопитающих) может встраиваться в геном клетки-хозяина после введения в клетку-хозяина, и, таким образом, может реплицироваться вместе с геномом хозяина. Более того, некоторые векторы способны направлять экспрессию генов, с которыми они функционально связаны. Такие векторы именуются в настоящем описании как «рекомбинантные экспрессионные векторы» (или просто, «экспрессионные векторы»).
Анти-MIF антитела можно получить с помощью обычных экспрессионных векторов, таких как бактериальные векторы (например, pBR322 и его производные) или эукариотические векторы. Эти последовательности, кодирующие антитело, могут быть представлены с регуляторными последовательностями, которые регулируют репликацию, экспрессию и/или секрецию из клетки-хозяина. Эти регуляторные последовательности, включают, например, промоторы (например, промоторы CMV или SV40) и сигнальные последовательности. Экспрессионные векторы также могут включать селекционные и амплификационные маркеры, такие как ген дигидрофолатредуктазы (DHFR), гигромицин-B-фосфотрансферазы и тимидинкиназы. Используемые компоненты векторов, такие как селекционные маркеры, репликоны, энхансеры можно либо приобрести в продаже, либо получить с помощью стандартных способов. Векторы могут быть сконструированы для экспрессии в различных клеточных культурах, например, в клетках млекопитающих, таких как CHO, COS, HEK293, NS0, фибробласты, клетках насекомых, дрожжей и бактерий, таких как E. coli. В некоторых случаях используют клетки, которые позволяют оптимальное гликозилирование экспрессированного белка.
Ген легкой цепи анти-MIF антитела и ген тяжелой цепи анти-MIF антитела можно встроить в отдельные векторы, или можно встроить оба гена в один экспрессионный вектор. Гены антитела встраивают в экспрессионный вектор стандартными способами, например, лигированием по комплементарным сайтам рестрикции на фрагменте гена антитела и векторе, или лигированием по «тупым» концам, если сайты рестрикции отсутствуют.
Получение анти-MIF антител или их антиген-связывающих частей может включать любой известный в данной области способ введения рекомбинантной ДНК в эукариотические клетки с помощью трансфекции, например, посредством электропорации или микроинъекции. Например, рекомбинантную экспрессию анти-MIF антитела можно получить введением экспрессионной плазмиды, содержащей кодирующую анти-MIF антитело последовательность ДНК под контролем одной или нескольких регуляторных последовательностей, таких как сильный промотор, в подходящую клеточную линию-хозяина с помощью соответствующего способа трансфекции, что в результате приводит к клеткам, имеющим введенные последовательности, стабильно интегрированные в геном. Липофекционный способ является примером способа трансфекции, который можно использовать по настоящему изобретению.
Получение анти-MIF антител может также включать любой известный в данной области способ культивирования указанных трансформированных клеток, например, непрерывным или периодическим способом, и экспрессию анти-MIF антитела, например, конститутивную или индуцируемую.
Клеткой-хозяином по настоящему изобретению может быть любая эукариотическая клетка. В одном варианте осуществления изобретения клеткой является клетка млекопитающего со способностью проводить пост-трансляционные модификации анти-MIF антител. Например, указанную клетку млекопитающего получают из клеточной линии млекопитающего, как, например, клеточной линии, выбранной из группы, состоящей из клеток SkHep, CHO, HEK293 и ВНК. В одном варианте осуществления изобретения анти-MIF антитело экспрессируется в клеточной линии СНО, лишенной DHFR, например, DXB11, с добавлением G418 в качестве селекционного маркера. При введении рекомбинантных экспрессионных векторов, кодирующих гены антител, в клетки-хозяева млекопитающих антитела получают культивированием клеток-хозяев в течение времени, достаточного для экспрессии антитела в клетках-хозяевах или секреции антитела в культуральную среду, в которой растут клетки-хозяева.
Анти-MIF антитела можно выделить из культуральной среды с использованием стандартных способов очистки белков.
В дополнение, получение анти-MIF антител может включать любой известный в данной области способ очистки антител, например, с помощью анион-обменной хроматографии или аффинной хроматографии. В одном варианте осуществления изобретения анти-MIF антитело можно очистить из супернатантов культуры клеток с помощью гель-фильтрации.
Свойства анти-MIF антител
Изобретение относится к анти-MIF антителам или их антиген-связывающей части, которые обладают, по меньшей мере, одним из следующих свойств:
а) связываются с С-концевой или центральной областью MIF человека;
б) ингибируют подавляющую активность глюкокортикоидов (GCO);
в) ингибируют пролиферацию клеточных линий, таких как фибробласты или раковые клетки (например, NIH/3T3 или PC-3);
г) связываются с активным MIF;
д) не связываются с неактивным MIF;
е) конкурируют с мышиным анти-MIF антителом III.D.9.
В некоторых вариантах осуществления изобретения активным MIF является изоформа активного MIF, которая возникает в результате обработки MIF человека мягкими окислителями, такими как цистин, или в результате иммобилизации MIF человека на подложке, такой как планшет для ELISA или шарики. В других вариантах осуществления изобретения активным MIF является изоформа активного MIF, которая встречается in vivo после бактериальной инфекции у животных. В других вариантах осуществления изобретения активным MIF является изоформа активного MIF, которая встречается in vivo на поверхности клеток (например, THP1, CFB).
В некоторых вариантах осуществления изобретения неактивным MIF является восстановленный MIF (например, описанный в примере 7) или внутриклеточный MIF.
В других вариантах осуществления изобретения анти-MIF антитела или их антиген-связывающую часть связывают активный MIF с KD меньше 500 нМ.
Фармацевтические композиции анти-MIF антител и способы лечения
Изобретение также относится к композициям, содержащим анти-MIF антитело или его антиген-связывающую часть, для лечения субъекта, нуждающегося в лечении связанных с MIF заболеваний, а именно, иммунологических заболеваний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения субъектом, нуждающимся в лечении, является человек. Гиперпролиферативные нарушения, такие как раковые заболевания, которые можно лечить с помощью анти-MIF антител по изобретению, могут затрагивать любую ткань или орган и включают, но не ограничены этим, раковые заболевания головного мозга, легких, сквамозных клеток, мочевого пузыря, желудка, поджелудочной железы, молочных желез, головы, шеи, печени, почек, яичников, простаты, толстой и прямой кишки, пищевода, гинекологический рак, рак носоглотки или щитовидной железы, меланомы, лимфомы, лейкемии или множественные миеломы. В частности, анти-MIF антитела по изобретению пригодны для лечения карцином молочных желез, простаты, толстой кишки и легких.
Изобретение также охватывает способы лечения у субъекта, включая человека, воспалительных заболеваний, таких как васкулит, артрит, сепсис, септический шок, эндотоксиновый шок, синдром токсического шока, приобретенный синдром дыхательной недостаточности, гломерулонефрит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, язвенный колит, перитонит, нефрит, атопический дерматит, астма, конъюнктивит, жар, малярия или псориаз, которые включают стадию введения указанному субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества анти-MIF антитела или его антиген-связывающей части.
В других вариантах осуществления изобретения композицию, содержащую указанное анти-MIF антитело по изобретению, используют для лечения воспалительного заболевания, выбранного из группы, состоящей из гломерулонефрита, воспалительного заболевания желудка, нефрита и перитонита.
Лечение может также включать введение одного или нескольких анти-MIF антител по изобретению или их антиген-связывающих частей, отдельно или с фармацевтически приемлемым носителем. Некоторыми примерами фармацевтически приемлемых носителей являются вода, солевой раствор, фосфатно-солевой буфер, декстроза, глицерин, этанол и т.п., а также их комбинации. Во многих случаях в композицию предпочтительно вводить изотонические агенты, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, или хлорид натрия. Дополнительными примерами фармацевтически приемлемых веществ являются увлажнители или минорное количество вспомогательных веществ, таких как увлажнители или эмульгаторы, консерванты или буферные вещества, которые увеличивают срок хранения или эффективность антитела.
Анти-MIF антитела по изобретению или содержащие их фармацевтические композиции можно вводить в комбинации с одним или несколькими другими терапевтическими, диагностическими или профилактическими средствами. Дополнительные терапевтические средства в зависимости от заболевания включают другие анти-неопластические, противоопухолевые, антиангиогенные, химиотерапевтические средства или стероиды.
Фармацевтические композиции по данному изобретению могут находиться в различных формах, например, в жидкой, мягкой или твердой лекарственных формах, таких как жидкие растворы (например, растворы для инъекции или инфузии), дисперсии или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, липосомы и суппозитории. Предпочтительная форма зависит от предполагаемого пути введения и терапевтического применения. Обычные предпочтительные композиции представляют собой растворы для инъекции или инфузии, такие как композиции, аналогичные используемым для пассивной иммунизации у людей. Предпочтительным путем введения является парентеральный (например, внутривенный, подкожный, интраперитонеальный, внутримышечный). В предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело вводят с помощью внутривенной инфузии или инъекции. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения антитело вводят с помощью внутримышечной или подкожной инъекции. Для опытного специалиста в данной области будет очевидно, что путь и/или вид введения будут варьировать в зависимости от желаемых результатов.
Анти-MIF антитело можно вводить однократно, но более предпочтительно многократное введение. Например, антитело можно вводить от трех раз ежедневно до одного раза в шесть месяцев или через больший интервал времени. Введение можно осуществлять по схеме, такой как введение три раза в день, дважды в день, один раз в день, один раз в два дня, один раз в три дня, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца и один раз в шесть месяцев.
Изобретение также охватывает применение анти-MIF антитела или его антиген-связывающего фрагмента в изготовлении лекарственного средства для лечения иммунологических заболеваний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения.
Изобретение дополнительно охватывает применение анти-MIF антитела или его антиген-связывающего фрагмента в лечении иммунологических заболеваний, таких как воспалительные заболевания и гиперпролиферативные нарушения.
Изобретение также охватывает применение анти-MIF антитела или его антиген-связывающего фрагмента в способах диагностики. В одном варианте осуществления изобретения анти-MIF антитело или его антиген-связывающую часть можно использовать для детекции MIF человека в биологическом образце.
Анти-MIF антитела и их антиген-связывающие части также можно использовать для определения уровня MIF на поверхности клеток в ткани или клеток, полученных из ткани. В некоторых вариантах осуществления изобретения ткань поражена заболеванием. Ткань затем можно использовать в иммунологическом анализе для определения, например, общего уровня MIF, уровня MIF на клеточной поверхности или локализации MIF.
Изобретение дополнительно относится к наборам, содержащим анти-MIF антитело или его антиген-связывающую часть по изобретению или фармацевтическую композицию, содержащую такое антитело или часть. В дополнение к антителу или фармацевтической композиции набор может включать диагностические или терапевтические агенты. Набор может также включать инструкции для применения в диагностическом или терапевтическом способе.
Изобретение дополнительно относится к способу идентификации анти-MIF антител, способных ингибировать биологическую функцию MIF человека и вызывать полезный эффект в животной модели, путем проведения следующих стадий:
а) отбора антитела, которое связывает активный MIF и не связывает неактивный MIF;
б) тестирования указанного антитела в in vitro методах анализа, таких как метод анализа подавляющей активности глюкокортикоидов (GCO) или метод анализа клеточной пролиферации;
в) отбора антитела, которое ингибирует GCO и/или пролиферацию клеток.
Результаты показали, что анти-MIF антитело, которое связывает только активный MIF и не связывает неактивный MIF, а также ингибирует GCO и/или клеточную пролиферацию, вызывает полезный эффект в животной модели (например, смотри пример 6).
Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, не ограничивающими изобретение.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Пример 1: Отбор антител
Для получения фрагментов анти-MIF антител человека использовали методику фагового дисплея
Начиная с библиотеки фагового дисплея проводили различные варианты скрининга, в трех из них использовали полноразмерный MIF (MIF человека на подложке/MIF человека в растворе/чередование MIF человека и мыши). В других использовали шесть пептидов из MIF, чередующихся с полноразмерным MIF. Эти шесть пептидов были сконструированы разделением белка MIF на шесть пептидов с длиной приблизительно 30 аминокислот с перекрывающимися последовательностями длиной приблизительно 15 аминокислот. После нескольких раундов селекции были найдены уникальные последовательности, которые связывались с мишенью скрининга, все связывающиеся последовательности были проэкспрессированы и очищены в виде IgG4-антител человека. Эти антитела были протестированы в ряде анализов для демонстрации in vitro ингибирования MIF. Для определения части связывания на белке MIF проводили эпитопное картирование. 193 антитела были протестированы и распределены в соответствии с их активностью ингибирования MIF in vitro. In vitro методы анализа описаны ниже. В качестве контроля использовали три мышиных анти-MIF антитела (III.D.9, XIV.14.3 и XIV.15.5).
Пример 2: Ингибирование активности MIF по подавлению эффекта глюкокортикоидов (GCO).
Этот способ основан на ингибировании эндогенного MIF, т.е. MIF, продуцируемого используемой клеточной линией. Этот способ применяется при скрининге антител и для определения кривых зависимости эффекта от дозы.
GCO-анализ для скрининга антител:
Суспензионную культуру клеток ТНР1 осаждали центрифугированием, и клетки ресуспендировали в свежей полной среде до плотности клеток 106 клеток в мл. Эту культуру переносили в лунки 96-луночного микропланшета (90 мкл на лунку), и добавляли анти-MIF антитело до конечной концентрации 75 мкг/мл. Каждое антитело тестировали в трех повторах. После инкубации в течение ночи при 37°С добавляли дексаметазон до концентрации 2 нМ и после 1-часовой инкубации при 37°С добавляли LPS до конечной концентрации 3 нг/мл. После дополнительной 6-часовой инкубации при 37°С собирали супернатант и определяли концентрацию IL-6 с помощью ELISA (набор Cytoset, доступен в продаже). Усредняли данные по трем повторам и определяли процент секреции IL-6 по сравнению с контрольными антителами. Антитела, которые показывали секрецию IL-6 меньше 75%, оценивали как положительные.
Метод определения значений IC50
Эксперимент проводили, как было описано для скринингового анализа, за исключением того, что использовали увеличивающиеся количества антитела (обычно 1-125 нМ). Полученные кривые зависимости эффекта от дозы выражали как % ингибирования по сравнению с антителом, используемым в качестве отрицательного контроля. Эту кривую использовали для вычисления максимального ингибиторного эффекта антитела (% ингибирования макс.) и концентрации антитела, которая давала 50% от максимального ингибиторного эффекта (IC50).
Итоговые результаты приведены на Фиг.8 в колонке 3 (IC50) и колонке 4 (максимальное ингибирование). Для сравнения мышиное антитело XIV.14.3 дает только 36% ингибирования GCO (данные не приведены).
Пример 3: Ингибирование клеточной пролиферации
У находящихся в состоянии покоя клеток NIH/3T3 сыворотка стимулирует секрецию MIF, а MIF, в свою очередь, стимулирует пролиферацию клеток. Поэтому, антитела, ингибирующие этот эндогенный MIF, уменьшают пролиферацию находящихся в покое клеток NIH/3T3. Уменьшение пролиферации определяют по включению 3Н-тимидина.
1000 клеток NIH/3T3 инкубировали в 96-луночном планшете в течение выходных дней при 37°C в среде, содержащей 10% сыворотки. Затем клетки подвергали голоданию в течение ночи при 37°С с помощью инкубации в среде, содержащей 0,5% сыворотки. Удаляли среду, содержащую 0,5% сыворотку, и заменяли на свежую среду, содержащую 10% сыворотки, 75 мкг/мл антитела и 5 мкКю/мл 3Н-тимидина. После 16-часовой инкубации в СО2-инкубаторе при 37°С клетки дважды промывали 150 мкл холодного PBS на лунку. С помощью многоканальной пипетки добавляли 150 мкл 5% (вес/объем) раствора ТХУ и инкубировали 30 минут при 4°C. Планшеты промывали 150 мкл PBS. Добавляли 75 мкл 0,5 M раствора NaOH с 0,5% SDS на лунку, перемешивали и хранили при комнатной температуре. Уровень радиоактивности измеряли на β-счетчике, смешивая 75 мкл раствора образца с 5 мл Ultima Gold (Packard). Проводили по три измерения для каждого образа, и значения сравнивали со значениями для контрольного антитела с помощью т-теста. Антитела, которые достоверно снижали пролиферацию (P<0,05), оценивали как положительные. Итоговые результаты приведены на Фиг.8, колонка 5.
Пример 4: Изучение связывания: определение эпитопов для анти-MIF антител
Каждый пептид разводили в буфере для пришивания белков к подложке до концентрации пептида обычно 5 мкг/мл, добавляли в микропланшеты (NUNC Immobilizer™ Amino Plate F96 Clear) и инкубировали в течение ночи при 4°C (100 мкл на лунку). В качестве контролей использовали рекомбинантный полноразмерный MIF и PBS. Планшет промывали 3 рада 200 мкл PBST, и добавляли антитела (4 мкг/мл в PBS) по 100 мкл на лунку, инкубировали 2 часа при комнатной температуре при мягком качании. Планшет промывали 3 раза 200 мкл PBST и добавляли детектирующее антитело (например, меченное HRP специфичное к Fc-области IgG человека, Sigma) в количестве 100 мкл на лунку. После 1-часовой инкубации при комнатной температуре при мягком качании планшет промывали 3 раза 200 мкл PBST. Каждую лунку инкубировали с 100 мкл раствора ТМВ (кат. № T-0440, Sigma) в течение 30 минут в темноте. Реакцию останавливали добавлением 100 мкл 1,8 М раствора H2SO4 на лунку. Образцы измеряли при 450 нм.
Пример 5: Конкуренция анти-MIF антител человека с мышиным анти-MIF антителом III.D.9
Для конкуренции с мышиным анти-MIF антителом III.D.9 использовали антитело Вах94.
96-луночные планшеты (NUNC Maxisorp) покрывали рекомбинантным MIF человека. Мышиное анти-MIF антитело III.D.9 и анти-MIF антитела человека разводили в TBST/2% БСА и смешивали, причем конечную концентрацию III.D9 поддерживали на уровне 2 мкг/мл, а концентрацию анти-MIF антител человека увеличивали от 0 мкг/мл обычно до 32 мкг/мл. После промывания микропланшета наносили антитела и инкубировали при комнатной температуре обычно в течение 2 часов. После промывания планшет инкубировали с пероксидазным конъюгатом антител к мышиным IgG (специфичным к Fc-области) в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывания планшет инкубировали с раствором ТМВ, и реакцию останавливали добавлением раствора H2SO4. Аппроксимация полученной кривой конкуренции позволяет вычислить максимальное ингибирование связывания III.D.9. Итоговые результаты приведены на Фиг.8, колонка 6.
Пример 6: Увеличение выживаемости при использовании анти-MIF антител в животной модели перитонита, вызванного инфекцией E.coli
Эксперимент проводили согласно методике группы Calandra et al. (Nature Immunology, 2000) с использованием самок мышей NMRI (25-30 г, 6-10 недель), которым вводили с помощью интраперитонеальной инъекции 6000 КОЕ суспензии 0111:В4 E.coli в растворе 15% муцина и 4% гемоглобина. Две или три колонии (0111:B04 E.coli) из культуры на чашке с питательном агаром инокулировали в 10 мл TSB и инкубировали в течение ночи при 36°C при качании. Культуру разводили в физиологическом растворе до требуемых концентраций (ночная культура обычно достигает плотности 2*109 КОЕ/мл) и смешивали с муцином и гемоглобином (1 объем разведенной бактериальной культуры, 2 объема 15% муцина, 2 объема 4% гемоглобина). Поскольку бактерии в разведенной смеси имеют тенденцию к осаждению, то смесь перемешивали между инъекциями. Для инъекций использовали широкую иглу (например, 23-й номер) для того, чтобы избежать закупоривания иглы осадком из инъекционной смеси. Антитело Вах94 (IgG4) и совпадающее по изотипу контрольное антитело вводили интраперитонеально за 2 часа до бактериального заражения. Дозировка антитела составляла обычно 800 мкг/мышь, и на каждую группу брали по 20 мышей. Статистически значимый эффект на выживаемость/время смерти мог быть показан для изотипов IgG1 и IgG4 анти-MIF антител человека. На Фиг.6 показаны результаты, полученные для антитела Вах94 и антитела Вах152 (IgG4). Для оценки кривых выживаемости использовали статистический метод Каплана-Мейера.
Пример 7: Специфичность связывания с активным MIF
Описанные в этом изобретении анти-MIF антитела способны различать активный и неактивный MIF, которые образуются в результате мягкого окисления или восстановления, соответственно. Различия между этими конформационными вариантами оценивали с помощью ELISA или поверхностного плазмонного резонанса.
ELISA для оценки дифференциального связывания антител:
- Трансформация MIF в его активную конформацию с помощью мягкого окисления.
Рекомбинантный MIF человека (0,5 мг/мл в PBS) инкубировали в течение 3 часов при 37°C с 3-кратным избытком (по объему) насыщенного раствора L-цистина в PBS (~ 0,4-0,5 мМ L-цистин). Затем проводили двукратный диализ MIF против PBS в диализной кассете Slide-A-Lyzer® с отсечением по молекулярному весу 7 кД (от компании Pierce).
- Трансформация MIF в его неактивную конформацию.
MIF восстанавливали при концентрации 0,5 мг/мл ночной инкубацией с 8-16 мМ дитиотреитолом (конечная концентрация) при 4°C.
- Протокол ELISA.
96-луночные микропланшеты (NUNC Maxisorp™) покрывали анти-MIF антителами при концентрации 5 мкг/мл (разведенными в буфере для пришивания белков к подложке). После промывания планшета с помощью TBST (Tris-солевого буфера с 0,1 % Tween-20 (по объему)) и блокирования с использованием 2% раствора (объем/вес) БСА в (TBST/2%БСА) в лунки добавляли серийные разведения либо активного, либо неактивного MIF, и инкубировали при комнатной температуре в течение 1-2 часов. Связанный MIF детектировали с помощью кроличьего поликлонального анти-MIF антитела и меченного пероксидазой хрена козьего антитела к антителам кролика (Biorad). С целью уменьшения неспецифического связывания для разведения MIF, кроличьего анти-MIF антитела и пероксидазного конъюгата использовали TBST/2%БСА. На Фиг.7 показаны результаты ELISA, полученные с антителом Bax94.
Оценка дифференциального связывания антител с помощью Biacore
Кинетику связывания активного и неактивного MIF с антителом Вах94 исследовали с помощью поверхностного плазмонного резонанса с использованием системы Biacore 3000. Для этого иммобилизовали 10000 единиц резонанса Bax 94 на сенсорном чипе с СМ5-матрицей (карбоксиметилированным декстраном) и инкубировали с активным или неактивным MIF, huMIF, в провосстановительном и проокислительном глутатионовых редокс-буферах в диапазоне от 4,8 мМ GSH/0,2 мМ GSSG (GSSG = оксиленный глутатион) до 5 мМ GSSG в буфере HBS-EP (GE Healthcare). В качестве контроле использовали MIF для анализа связывания во второй проточной ячейке, содержащей иммобилизованное совпадающее по изотипу контрольное антитело. Для оценки вычитали единицы ответа связывания контрольного антитела и антитела Вах 94.
Пример 8: Детекция активного MIF на поверхности клеток ТНР-1
Клетки инкубировали с анти-MIF антителом Вах 94. Клетки промывали ледяным PBS и ресуспендировали в холодном буфере для лизиса клеток (Cell Signaling Technology®). Магнитные шарики с белком G, Magnetic Protein G Dynabeads® (Invitrogen), блокировали TBST с 5% обезжиренного сухого молока (вес/объем), промывали и добавляли к лизированным клеткам. Иммуноосаждение проводили в течение ночи при 4°C. Затем шарики промывали буфером для лизиса клеток и TBST и кипятили в буфере для наноса образцов на ДСН-ПААГ (без восстанавливающих агентов). Проводили ДСН-ПААГЭ образцов в невосстанавливающих условиях для Вестерн-блоттинга.
Пример 9: Связывание анти-MIF антител с мембраносвязанным MIF
Клетки ТНР-1 промывали ледяным PBS и ресуспендировали в холодном буфере для окрашивания клеток (Biolegend) с 200 мкг/мл мышиных IgG. Добавляли FITC- или TRITC-меченные анти-MIF антитела до конечной концентрации обычно 200-500 нМ и инкубировали при 4°C. Клетки последовательно промывали ледяным буфером для окрашивания клеток и ресуспендировали в буфере для окрашивания клеток с раствором Via-Prohe™ Cell Viability Solution (BD Biosciences). Интенсивность флуоресценции клеток измеряли на цитопроточном флуориметре FACS Canto™ II Flow Cytometry System (BD Biosciences) и средний FITC-/TRITC-сдвиг популяций живых клеток сравнивали с данными, полученными с использованием меченным красителем контрольным антителом, совпадающим по изотипу.
Пример 10: Определение аффинности Fab-фрагментов анти-MIF антител с помощью Biacore-анализа
Обычно 40 RU (единиц резонанса) рекомбинантного MIF человека иммобилизовали на сенсорном чипе с СМ5-матрицей (карбоксиметилированным декстраном) (Biacore). Разведенные в HBS-EP Fab-фрагменты впрыскивали в диапазоне концентраций обычно 6-100 нМ. После каждого цикла чип регенерировали в 50 мМ NaOH плюс 1 M NaCl. Аффинность вычисляли по модели Лангмюра 1:1. Итоговые результаты приведены на Фиг.8, колонка 7.
Пример 11: Полезный эффект анти-MIF антител в животной модели серповидного гломерулонефрита
Анти-MIF антитела тестировали в крысиной модели серповидного гломерулонефрита, описанной Frederick W.K. Tarn et. al. (Nephrol Dial Transplant, 1999, 1658-1666).
Нефротоксичный нефрит вызывали у самцов крыс Wistar Kyoto одной внутривенной инъекцией анти-сыворотки к клубочковой базальной мембране крыс. В «предупредительном» варианте эксперимента лечение анти-MIF антителами и совпадающим по изотипу контрольным антителом начинали во время индукции нефрита (день 0) с помощью интраперитонеальной инъекции. Лечение обычно повторяли через день, и животных выбраковывали на 7 день для гистологического анализа. Мочу собирали перед экспериментом (базовая линия) и перед окончанием эксперимента (день 7). В «терапевтическом» варианте эксперимента лечение анти-MIF антителом начинали через 4 дня после индукции заболевания и повторяли через день. Крыс обычно выбраковывали на 8-й день. Мочу собирали перед экспериментом (базовая линия), перед началом лечения (день 4) и перед выбраковкой животных (день 8). Дозировка антител обычно составляла 1-20 мг/кг на инъекцию, и для каждой группы использовали от 6 до 8 крыс. Тяжесть заболевания определяли, измеряя протеинурию, инфильтрацию макрофагов в почечные клубочки и гистологические повреждения (образование экстракапиллярной пролиферации, т.е. полулуний). В «предупредительном» варианте эксперимента лечение анти-MIF антителом Вах69 (10 мг/кг на дозу) в течение 7 дней приводило к 47%-му снижению протеинурии по сравнению с животными, получавшими контрольное антитело. Лечение возникшего заболевания (терапевтический эксперимент) приводило к дозозависимому снижению протеинурии на 16% (10 мг/кг Вах69 на дозу) и 34% (20 мг/кг Вах69 на дозу) по сравнению с животными, получавшими контрольное антитело.
Пример 12: Полезный эффект анти-MIF антител в животной модели язвенного колита (адаптивный перенос наивных Т-клеток мышам Rag -/-)
Мышей C57BL/6 умерщвляли и выделяли клетки CD45RBhi (наивные Т-клетки) сортингом на цитопроточном флуориметре популяции клеток селезенки. Клетки CD45RBhi (5×105) вводили с помощью интраперитонеальной инъекции 7-9 недельным мышам C57BL/6 Rag-/-, у которых приблизительно через 2 недели развивался язвенный колит (de Jong et al., Nature Immunology, 2001, 1061-1066). Анти-MIF антитела и совпадающее по изотипу контрольное антитело вводили с помощью интраперитонеальной инъекции дважды в неделю (доза 1 мг на мышь). В «предупредительном» варианте эксперимента лечение начинали во время инъекции Т-клеток. В «терапевтическом» варианте эксперимента лечение начинали через 4 недели после индукции заболевания. У мышей еженедельно проверяли вес и развитие заболевания. Обычно через восемь недель после переноса клеток CD4CD45RBhi реципиентам C57BL76 Rag-/- вычисляли индекс активности болезни (DAI) и собирали срезы толстой кишки для оценки гистологического индекса (HI). Индекс активности болезни (DAI) и гистологический индекс (HI) определяли в конце эксперимента на животной модели (DAI основан на четырех параметрах: сутулость и истощение (оценка 0 или 1), утолщение прямой кишки (0-3) и консистенция стула (0-3)). В «терапевтическом» эксперименте для лечения на возникшего заболевания использовали анти-MIF антитела Вах69 и ВахА10, и среднее значение DAI было значительно снижено приблизительно на 60% (Вах69) и приблизительно на 40% (ВахА10) по сравнению с мышами, получавшими совпадающее по изотипу антитело. Кроме того, средняя оценка HI была снижена приблизительно на 33% после лечения с помощью Вах69.
Пример 13: Полезный эффект анти-MIF антител в животной модели язвенного колита (агонистическая анти-CD40 модель)
Эта модель основана на активации макрофагов и дендритных клеток агонистическим анти-CD40 антителом, которое индуцирует патологический процесс в кишечнике, напоминающий воспалительное заболевание желудка у мышей Rag1-/-.
Совпадающие по возрасту и полу мыши Rag-1-/- (4-5 недельные) были приобретены в компании Jackson Laboratories и содержались в виварии две недели перед началом эксперимента. Агонистическое моноклональное антитело к CD40 (FGK45, IgG2a) или изотипический контроль, крысиное IgG2a, растворяли в PBS до концентрации 1 мг/мл. Пяти группам (по 10 мышей на каждую группу) вводили с помощью интраперитонеальной инъекции 200 мкг агонистического анти-CD40 моноклонального антитела, и из них четырем группам вводили анти-MIF антитела в день 0 и 1 (2×1мг на мышь). Шестой группе (10 мышам) вводили только изотипический контроль (крысиное IgG2a, группа здоровых животных). Мышей взвешивали в течение следующих 7 дней. На 7-й день вычисляли индекс активности болезни (DAI) и собирали срезы толстой кишки для оценки гистологического индекса (HI). Оценка DAI основана на: сутулость (0-1), истощение (0-1), консистенция стула (0-3) и утолщение прямой кишки (0-3). Гистологическая оценка основана на утолщении (0-3), удлинении криптов, воспалении (0-3) и абсцессе (0-1). Лечение анти-MIF антителами Вах94, ВахА10 и Вах69 значительно снижало оценку DAI (ВахА10: снижение на ~48%; Вах94: снижение на ~62%; Вах69: снижение на ~73%) по сравнению с мышами, получавшими изотипический контроль. Кроме того, средние оценки HI также уменьшались под действием этих антител.
Пример 14: Ингибирование роста опухоли у голых мышей Mf1 с помощью анти-MIF антител
Клетки аденомы простаты человека (РС-3) собирали из экспоненциально растущей культуры и смешивали с матригелем, лишенным ростовых факторов. 2×106 клеток в 0,25 мл матригеля прививали подкожно в правую паховую область голых мышей Mf1. Лечение анти-MIF антителом Вах94 и изотипическим контролем С3 начинали через один день после прививки опухоли (0,6 мг антитела на мышь в день) и повторяли через день. Размер опухоли обычно начинали измерять через две недели после инъекции клеток и проводили через день. Объем опухоли вычисляли, используя формулу V=0,5×a×b2 (в которой «a» является наибольшим диаметром, а «b» является наименьшим диаметром). Рост опухоли у мышей, получавших Вах94 был значительно снижен, а средний объем опухоли через 28 дней после индукции опухоли был в 4,3 раза выше в группе, получавшей изотипический контроль, по сравнению с группой, получавшей антитело Вах94.
В «терапевтическом» варианте эксперимента лечение антителами начинали через одну неделю после прививки опухоли. С помощью интраперитонеальной инъекции вводили через день по 50 мг/кг на дозу изотипического контрольного антитела С3 и анти-MIF антитела Вах69. Через 22 дня после начала введения антител определяли средний объем опухоли, который был в 2,7 раза выше в группе, получавшей С3, по сравнению с группой, получавшей Вах 69.
Пример 15: Проапоптотический эффект анти-MIF антител
Проапоптотический эффект анти-MIF антитела Вах94 был показан в клеточном анализе активности каспазы-3 на клеточной лини рака простаты человека РС-3. Клетки РС-3 высевали на культуральные чашки диаметром 10 см (~106 клеток на чашку) в присутствии 10% фетальной бычьей сыворотки. Через 24 часа добавляли свежую среду, содержащую антитело Вах94 (100 нМ) или контрольное антитело С3 (100 нМ). После другой инкубации в течение 48 часов приготавливали клеточные лизаты, и измеряли активность каспазы-3, добавляя флуоресцентно-меченный каспазный субстрат (Фиг.9).
Пример 16: Ингибирование инвазии опухолевых клеток
Анти-MIF антитела Вах94 и Вах69 тестировали с помощью метода анализа инвазивной активности клеток Transwell™, используя клеточную линию рака простаты человека РС-3.
Высевали 5×104 клеток РС-3 на лунку 24-луночных планшетов Transwell™ (размер пор 8 мкм), покрытых поли-D-лизином на нижней поверхности поликарбонатной мембраны и имеющих лишенный ростовых факторов матригель на поверхности вкладышей Transwell™. Клеткам позволяли прикрепиться в течение 4 часов в присутствии 10% фетальной бычьей сыворотки. Затем среду заменяли на бессывороточную среду, и клетки оставляли голодать в течение ночи (т.е. на 16 часов). Далее в нижний отсек добавляли соединения (10 нМ MIF, 500 нМ антитело). Клеткам позволяли мигрировать через пористую мембрану в течение 24 часов. После инкубации прикрепленные мигрировавшие клетки на нижней поверхности мембраны окрашивали раствором Гимза. Число клеток, прикрепленных к нижней поверхности мембраны, подсчитывали в независимых полях зрения при 400-кратном увеличении (Фиг.10).
Claims (22)
1. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть, которое специфически связывает C-концевую или центральную область MIF и ингибирует биологическую функцию MIF человека, где кодирующая VL-область указанного антитела включает нуклеотидную последовательность, которая тождественна последовательности VL антитела Bax8 (SEQ ID NO: 13), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 14), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 15), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 16), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 17), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 18) или последовательности, которая имеет по крайней мере 85% гомологии по последовательности с любой из указанных нуклеотидных последовательностей, и ДНК последовательность, кодирующая VH-область антитела, включает нуклеотидную последовательность, которая тождественна последовательности VH антитела Bax8 (SEQ ID NO: 19), антитела Bax69 (SEQ ID NO: 20), антитела Bax74 (SEQ ID NO: 21), антитела Bax94 (SEQ ID NO: 22), антитела Bax152 (SEQ ID NO: 23), антитела BaxA10 (SEQ ID NO: 24) или последовательности, которая имеет по крайней мере 85% гомологии по последовательности с любой из указанных нуклеотидных последовательностей.
2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1, где указанное антитело или антигенсвязывающая часть обладает, по меньшей мере, одним из следующих свойств:
а) ингибирует подавляющую активность глюкокортикоидов (GCO);
б) ингибирует пролиферацию раковых клеток или фибробластов;
в) связывается с активным MIF;
г) не связывается с неактивным MIF;
д) конкурирует с мышиным анти-MIF антителом III.D.9.
а) ингибирует подавляющую активность глюкокортикоидов (GCO);
б) ингибирует пролиферацию раковых клеток или фибробластов;
в) связывается с активным MIF;
г) не связывается с неактивным MIF;
д) конкурирует с мышиным анти-MIF антителом III.D.9.
3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1 или 2, где указанное антитело или антигенсвязывающая часть связывает MIF человека с KD меньше 500 нМ.
4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1, где указанное антитело или антигенсвязывающая часть связывает активный MIF.
5. Моноклональное антитело по п.1, где указанное антитело представляет собой антитело субформата IgG4.
6. Моноклональное антитело по п.5, где указанный субформат IgG4 имеет одну мутацию, в результате которой субпоследовательность CPSC в Fc-области IgG4 становится СРРС.
7. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающая часть по п.1, где указанное антитело или антигенсвязывающая часть содержит:
а) CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, независимо выбранные из тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10;
б) CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, независимо выбранные из легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10.
а) CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, независимо выбранные из тяжелой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10;
б) CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, независимо выбранные из легкой цепи антитела, выбранного из группы, состоящей из антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10.
8. Моноклональное антитело по п.1, где антитело содержит:
в) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10;
г) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10.
в) аминокислотную последовательность тяжелой цепи, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10;
г) аминокислотную последовательность легкой цепи, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности легкой цепи антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10.
9. Моноклональное антитело или антигенсвязывающая часть по п.1 для применения в лечении иммунологического заболевания, причем указанное иммунологическое заболевание является воспалительным заболеванием или гиперпролиферативным нарушением.
10. Моноклональное антитело или антигенсвязывающая часть по п.9, где указанное воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из васкулита, артрита, сепсиса, септического шока, эндотоксинового шока, синдрома токсического шока, приобретенного синдрома дыхательной недостаточности, гломерулонефрита, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, перитонита, нефрита и псориаза.
11. Фармацевтическая композиция для лечения иммунологического заболевания, выбранного из воспалительного заболевания или гиперпролиферативного нарушения, содержащая моноклональное антитело или его антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Фармацевтическая композиция по п.11, в которой моноклональным антителом является антитело, выбранное из группы, состоящей из антитела Bax8, антитела Bax69, антитела Bax74, антитела Bax94, антитела Bax152 и антитела BaxA10.
13. Фармацевтическая композиция по п.11, где указанное воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из васкулита, артрита, сепсиса, септического шока, эндотоксинового шока, синдрома токсического шока, приобретенного синдрома дыхательной недостаточности, гломерулонефрита, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, перитонита, нефрита и псориаза.
14. Способ лечения у субъекта, включая человека, иммунологического заболевания, выбранного из воспалительного заболевания или гиперпролиферативного нарушения, включающий стадию введения указанному субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества моноклонального антитела или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-8 или фармацевтической композиции по п.11 или 12, причем указанное антитело или указанная антигенсвязывающая часть дополнительно ингибирует биологическую функцию MIF человека.
15. Способ по п.14, в котором указанное воспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из васкулита, артрита, сепсиса, септического шока, эндотоксинового шока, синдрома токсического шока, приобретенного синдрома дыхательной недостаточности, гломерулонефрита, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, язвенного колита, перитонита, нефрита и псориаза.
16. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь или легкую цепь моноклонального антитела или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-8.
17. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.16, где вектор необязательно содержит контролирующую экспрессию последовательность, функционально связанную с указанной молекулой нуклеиновой кислоты.
18. Клетка-хозяин для получения антитела по п.1, содержащая вектор по п.17 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.16.
19. Клетка-хозяин по п.18, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь, и молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь моноклонального антитела или антигенсвязывающей части по любому из пп.1-8.
20. Клетка-хозяин, которая продуцирует моноклональное антитело или антигенсвязывающую часть по любому из пп.1-8, содержащая вектор по п.17 или молекулу нуклеиновой кислоты по п.16.
21. Способ получения моноклонального антитела или его антигенсвязывающей части, включающий культивирование клетки-хозяина по п.18 или 20 при подходящих условиях и выделение указанного антитела или его антигенсвязывающей части.
22. Способ идентификации анти-MIF антител, способных ингибировать биологическую функцию MIF человека и вызывать полезный эффект в животной модели, путем проведения следующих стадий:
а) отбора антитела, которое специфически связывает C-концевую или центральную область MIF;
б) тестирования указанного антитела в in vitro методах анализа;
в) отбора антитела, которое ингибирует активность глюкокортикоидов (GCO) и/или пролиферацию клеток.
а) отбора антитела, которое специфически связывает C-концевую или центральную область MIF;
б) тестирования указанного антитела в in vitro методах анализа;
в) отбора антитела, которое ингибирует активность глюкокортикоидов (GCO) и/или пролиферацию клеток.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1898808P | 2008-01-04 | 2008-01-04 | |
| US61/018,988 | 2008-01-04 | ||
| US9468508P | 2008-09-05 | 2008-09-05 | |
| US61/094,685 | 2008-09-05 | ||
| PCT/EP2008/011146 WO2009086920A1 (en) | 2008-01-04 | 2008-12-30 | Anti mif antibodies |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013153592/10A Division RU2013153592A (ru) | 2008-01-04 | 2013-12-03 | Анти-mif антитела |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010132647A RU2010132647A (ru) | 2012-02-10 |
| RU2509777C2 true RU2509777C2 (ru) | 2014-03-20 |
Family
ID=40535633
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010132647/10A RU2509777C2 (ru) | 2008-01-04 | 2008-12-30 | Анти-mif антитела |
| RU2013153592/10A RU2013153592A (ru) | 2008-01-04 | 2013-12-03 | Анти-mif антитела |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013153592/10A RU2013153592A (ru) | 2008-01-04 | 2013-12-03 | Анти-mif антитела |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20090220521A1 (ru) |
| EP (4) | EP2548890A1 (ru) |
| JP (1) | JP5502752B2 (ru) |
| KR (2) | KR20160105943A (ru) |
| CN (2) | CN101983207B (ru) |
| AU (1) | AU2008346517B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0821682A2 (ru) |
| CA (1) | CA2711029A1 (ru) |
| CY (1) | CY1117302T1 (ru) |
| DK (1) | DK2231707T3 (ru) |
| ES (3) | ES2531629T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20150224T1 (ru) |
| IL (1) | IL206715A (ru) |
| MX (1) | MX2010007406A (ru) |
| NZ (3) | NZ596409A (ru) |
| PL (2) | PL3118223T3 (ru) |
| PT (1) | PT2231707E (ru) |
| RS (1) | RS53906B1 (ru) |
| RU (2) | RU2509777C2 (ru) |
| SI (1) | SI2231707T1 (ru) |
| WO (1) | WO2009086920A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201004973B (ru) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2531629T3 (es) * | 2008-01-04 | 2015-03-18 | Baxter International Inc. | Anticuerpos anti-MIF |
| WO2013010955A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-24 | Morphosys Ag | Antibodies that are cross-reactive for macrophage migration inhibitory factor (mif) and d-dopachrome tautomerase (d-dt) |
| AU2012327159B2 (en) | 2011-10-07 | 2015-03-26 | Baxalta GmbH | Characterization of CHO-MIF gene and protein, and use thereof |
| WO2013050453A1 (en) | 2011-10-07 | 2013-04-11 | Baxter Healthcare S.A. | Oxmif as a diagnostic marker |
| AU2013202693B2 (en) | 2012-04-16 | 2015-01-22 | Baxalta GmbH | Combination Therapy of Anti-MIF Antibodies and Chemotherapeutics |
| AU2013203957B9 (en) * | 2012-04-16 | 2015-10-15 | Baxalta GmbH | Combination Therapy of Anti-MIF Antibodies and Glucocorticoids |
| KR20150029017A (ko) * | 2012-07-10 | 2015-03-17 | 박스터 헬쓰케어 에스에이 | 항-mif 면역조직화학 |
| US20150309012A1 (en) * | 2012-12-07 | 2015-10-29 | Baxter International Inc. | Anti-mif antibody cell migration assay |
| AU2015206178A1 (en) * | 2014-01-03 | 2016-07-07 | Baxalta GmbH | Anti-MIF immunohistochemistry |
| WO2016026956A1 (en) | 2014-08-22 | 2016-02-25 | Baxalta GmbH | Detection of cho-mif contaminations |
| WO2016156489A1 (en) | 2015-03-31 | 2016-10-06 | Baxalta GmbH | Dosage regimen for anti-mif antibodies |
| US20180155419A1 (en) | 2015-05-18 | 2018-06-07 | Baxalta GmbH | Anti-mif antibodies in the treatment of cancers containing mutant tp53 and/or mutant ras |
| EP3512880A1 (en) * | 2016-09-15 | 2019-07-24 | Ablynx NV | Immunoglobulin single variable domains directed against macrophage migration inhibitory factor |
| CN109868311B (zh) * | 2017-12-01 | 2023-10-20 | 上海市精神卫生中心 | Mif及其预测二代抗精神病药物诱导的代谢不良反应的应用 |
| JP2021526820A (ja) * | 2018-06-07 | 2021-10-11 | オンコワン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 癌治療のための抗ｏｘＭＩＦ／抗ＣＤ３抗体 |
| EP3757252B1 (en) | 2019-06-28 | 2022-03-30 | Walter Ag | A coated cutting tool |
| CN115943160A (zh) * | 2019-12-06 | 2023-04-07 | 翁科奥内研发有限责任公司 | 抗oxMIF/抗CD3双特异性抗体构建体 |
| WO2022069712A1 (en) * | 2020-10-02 | 2022-04-07 | Oncoone Research & Development Gmbh | IMPROVED ANTI-oxMIF ANTIBODIES WITH REDUCED AGGREGATION POTENTIAL AND REDUCED HYDROPHOBICITY |
| WO2022167474A1 (en) | 2021-02-03 | 2022-08-11 | Oncoone Research & Development Gmbh | ANTI-oxMIF RADIOIMMUNOCONJUGATE |
| JP2024532461A (ja) * | 2021-09-03 | 2024-09-05 | オンコワン・リサーチ・アンド・ディベロップメント・ゲゼルシャフト・ミト・ベシュレンクテル・ハフツング | 低減された凝集能及び低減された疎水性を有する、改善されたＦｃサイレンシングされた抗ｏｘＭＩＦ抗体 |
| KR20250112314A (ko) * | 2022-01-10 | 2025-07-23 | 페노믹 에이아이 | 항-콜라겐 삼중 나선 반복 함유 1(cthrc1) 항체 및 이를 사용하는 방법 |
| CN114573693A (zh) * | 2022-04-25 | 2022-06-03 | 中国人民解放军陆军军医大学 | 一种听觉发育中免疫调节分子mif抗体制备方法 |
| CN115814069B (zh) * | 2022-10-31 | 2023-07-21 | 四川大学华西医院 | Mif基因敲除的肿瘤细胞在制备肿瘤疫苗中的用途 |
| KR20250150051A (ko) | 2023-03-03 | 2025-10-17 | 온코원 리서치 앤드 디벨롭먼트 게엠베하 | 과증식성 질환의 예비 표적화를 위한 개선된 이중특이적 항종양 항원/항hsg 항체 |
| WO2025149667A1 (en) | 2024-01-12 | 2025-07-17 | Pheon Therapeutics Ltd | Antibody drug conjugates and uses thereof |
| WO2025171411A1 (en) * | 2024-02-09 | 2025-08-14 | Herophilus, Inc. | Compositions and methods related to modulating macrophage migration inhibitory factor (mif)-cd74 signaling and related treatments for neuroinflammatory conditions |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030099653A1 (en) * | 1993-05-17 | 2003-05-29 | Bucala Richard J. | Inhibition of migration inhibitory factor in the treatment of diseases involving cytokine-mediated toxicity |
| US20030235584A1 (en) * | 2000-02-28 | 2003-12-25 | Kloetzer William S. | Method for preparing anti-MIF antibodies |
| RU2236251C2 (ru) * | 1999-02-12 | 2004-09-20 | Дзе Скриппс Рисерч Инститьют | Способы лечения опухолей и метастазов с использованием комбинации антиангиогенной терапии и иммунотерапии |
| WO2007134538A1 (en) * | 2006-05-24 | 2007-11-29 | Institute Of Biophysics Chinese Academy Of Sciences | Rat antihuman macrophage migration inhibitory factor monoclonal antibody and its application |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6774227B1 (en) * | 1993-05-17 | 2004-08-10 | Cytokine Pharmasciences, Inc. | Therapeutic uses of factors which inhibit or neutralize MIF activity |
| JPH0977799A (ja) * | 1995-09-13 | 1997-03-25 | Sapporo Immuno Diagnostic Lab:Kk | ヒト−マクロファージ遊走阻止因子（ヒト−ｍｉｆ）に対するモノクローナル抗体および該抗体を産生するハイブリドーマ |
| AR045563A1 (es) * | 2003-09-10 | 2005-11-02 | Warner Lambert Co | Anticuerpos dirigidos a m-csf |
| ES2531629T3 (es) * | 2008-01-04 | 2015-03-18 | Baxter International Inc. | Anticuerpos anti-MIF |
-
2008
- 2008-12-30 ES ES08869976.4T patent/ES2531629T3/es active Active
- 2008-12-30 CN CN200880127872.7A patent/CN101983207B/zh active Active
- 2008-12-30 NZ NZ596409A patent/NZ596409A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-12-30 RU RU2010132647/10A patent/RU2509777C2/ru active
- 2008-12-30 AU AU2008346517A patent/AU2008346517B2/en not_active Ceased
- 2008-12-30 EP EP20120189220 patent/EP2548890A1/en not_active Withdrawn
- 2008-12-30 MX MX2010007406A patent/MX2010007406A/es active IP Right Grant
- 2008-12-30 KR KR1020167023984A patent/KR20160105943A/ko not_active Ceased
- 2008-12-30 HR HRP20150224TT patent/HRP20150224T1/hr unknown
- 2008-12-30 PL PL16183733T patent/PL3118223T3/pl unknown
- 2008-12-30 NZ NZ611117A patent/NZ611117A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-12-30 EP EP08869976.4A patent/EP2231707B1/en active Active
- 2008-12-30 PT PT08869976T patent/PT2231707E/pt unknown
- 2008-12-30 DK DK08869976.4T patent/DK2231707T3/en active
- 2008-12-30 CN CN201410037650.3A patent/CN103724430B/zh active Active
- 2008-12-30 WO PCT/EP2008/011146 patent/WO2009086920A1/en not_active Ceased
- 2008-12-30 RS RS20150197A patent/RS53906B1/sr unknown
- 2008-12-30 BR BRPI0821682-7A patent/BRPI0821682A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-12-30 EP EP16183733.1A patent/EP3118223B8/en active Active
- 2008-12-30 SI SI200831400T patent/SI2231707T1/sl unknown
- 2008-12-30 JP JP2010541032A patent/JP5502752B2/ja active Active
- 2008-12-30 US US12/346,309 patent/US20090220521A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-30 NZ NZ586600A patent/NZ586600A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-12-30 EP EP14163839.5A patent/EP2754671B1/en active Active
- 2008-12-30 PL PL08869976T patent/PL2231707T3/pl unknown
- 2008-12-30 CA CA2711029A patent/CA2711029A1/en not_active Abandoned
- 2008-12-30 ES ES16183733T patent/ES2791333T3/es active Active
- 2008-12-30 ES ES14163839.5T patent/ES2623653T3/es active Active
- 2008-12-30 KR KR1020107017306A patent/KR101654678B1/ko active Active
-
2010
- 2010-04-26 US US12/767,635 patent/US8668909B2/en active Active
- 2010-06-30 IL IL206715A patent/IL206715A/en active IP Right Grant
- 2010-07-14 ZA ZA2010/04973A patent/ZA201004973B/en unknown
-
2013
- 2013-12-03 RU RU2013153592/10A patent/RU2013153592A/ru not_active Application Discontinuation
-
2014
- 2014-01-17 US US14/157,967 patent/US20150023978A1/en not_active Abandoned
-
2015
- 2015-03-13 CY CY20151100250T patent/CY1117302T1/el unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030099653A1 (en) * | 1993-05-17 | 2003-05-29 | Bucala Richard J. | Inhibition of migration inhibitory factor in the treatment of diseases involving cytokine-mediated toxicity |
| RU2236251C2 (ru) * | 1999-02-12 | 2004-09-20 | Дзе Скриппс Рисерч Инститьют | Способы лечения опухолей и метастазов с использованием комбинации антиангиогенной терапии и иммунотерапии |
| US20030235584A1 (en) * | 2000-02-28 | 2003-12-25 | Kloetzer William S. | Method for preparing anti-MIF antibodies |
| WO2007134538A1 (en) * | 2006-05-24 | 2007-11-29 | Institute Of Biophysics Chinese Academy Of Sciences | Rat antihuman macrophage migration inhibitory factor monoclonal antibody and its application |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2509777C2 (ru) | Анти-mif антитела | |
| CN105026428B (zh) | PD‑l抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
| RU2689528C2 (ru) | Новое антитело к tslp-рецептору человека | |
| JP6400480B2 (ja) | ペプチドグリカン認識タンパク質１に結合する抗体 | |
| KR20190134614A (ko) | B7-h3 항체, 이의 항원-결합 단편 및 이의 의학적 용도 | |
| KR101589135B1 (ko) | 인간화 항-ｅｍａｐｉｉ 항체 및 이의 용도 | |
| JP2007054079A (ja) | ヒトｍｃｐ−１に対する抗体 | |
| AU2014269287B2 (en) | Anti-TNF-alpha/CXCL10 double-targeting antibody and use thereof | |
| TW201321408A (zh) | 作為診斷標記之oxMIF | |
| TW202144433A (zh) | 抗體或其抗原結合片段、其製備方法及醫藥用途 | |
| KR20250040987A (ko) | 항-아드레노메둘린 비중화 항체, 이의 제조 방법 및 응용 | |
| TW202227504A (zh) | 抗ｅｒｂｂ３抗體或其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
| CN116710484A (zh) | Wars中和抗体及其用途 | |
| HK1147762B (en) | Anti mif antibodies | |
| HK1181052A (en) | Anti mif antibodies | |
| EA050692B1 (ru) | Моноклональное антитело против lag-3 и его антигенсвязывающий фрагмент и их применение | |
| TW201605886A (zh) | 作爲治療標靶的ｍｉｆ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20170920 |