RU2586412C2 - Method for evaluating risk of pregnancy failure - Google Patents
Method for evaluating risk of pregnancy failure Download PDFInfo
- Publication number
- RU2586412C2 RU2586412C2 RU2012123860/15A RU2012123860A RU2586412C2 RU 2586412 C2 RU2586412 C2 RU 2586412C2 RU 2012123860/15 A RU2012123860/15 A RU 2012123860/15A RU 2012123860 A RU2012123860 A RU 2012123860A RU 2586412 C2 RU2586412 C2 RU 2586412C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- risk
- pregnancy
- biomarkers
- xanthine
- hypoxanthine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 75
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 title claims abstract description 66
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 70
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 claims abstract description 61
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims abstract description 51
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 claims abstract description 34
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims abstract description 33
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 24
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 claims description 17
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 claims description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 6
- ZXUCBXRTRRIBSO-UHFFFAOYSA-L tetrabutylazanium;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC ZXUCBXRTRRIBSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 claims 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 206010036595 Premature delivery Diseases 0.000 abstract 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 abstract 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 abstract 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 18
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 17
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 14
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 14
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 8
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 8
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 7
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 7
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010061452 Complication of pregnancy Diseases 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YDGMGEXADBMOMJ-UHFFFAOYSA-N asymmetrical dimethylarginine Natural products CN(C)C(N)=NCCCC(N)C(O)=O YDGMGEXADBMOMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 208000012113 pregnancy disease Diseases 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- YDGMGEXADBMOMJ-LURJTMIESA-N N(g)-dimethylarginine Chemical compound CN(C)C(\N)=N\CCC[C@H](N)C(O)=O YDGMGEXADBMOMJ-LURJTMIESA-N 0.000 description 5
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 4
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000002296 eclampsia Diseases 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 3
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 2
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 2
- 108030001694 Pappalysin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000005819 Pregnancy-Associated Plasma Protein-A Human genes 0.000 description 2
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000037020 contractile activity Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 108010067471 inhibin A Proteins 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000002705 metabolomic analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001431 metabolomic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- -1 prostenoids Proteins 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 2
- NWGZOALPWZDXNG-LURJTMIESA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(dimethylamino)pentanoic acid Chemical compound CN(C)[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NWGZOALPWZDXNG-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000036663 ADAM12 Human genes 0.000 description 1
- 108091007507 ADAM12 Proteins 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 101100504320 Caenorhabditis elegans mcp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101600111816 Homo sapiens Sex hormone-binding globulin (isoform 1) Proteins 0.000 description 1
- 101000990915 Homo sapiens Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108091058560 IL8 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000001019 Inborn Errors Metabolism Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004375 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000957 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 208000006399 Premature Obstetric Labor Diseases 0.000 description 1
- 206010036600 Premature labour Diseases 0.000 description 1
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Natural products C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 102300044179 Sex hormone-binding globulin isoform 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010041092 Small for dates baby Diseases 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 1
- 101710187743 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 238000003981 capillary liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011997 immunoflourescence assay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 231100000577 impaired fetal development Toxicity 0.000 description 1
- 208000016245 inborn errors of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000015978 inherited metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010905 molecular spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 208000026440 premature labor Diseases 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 108010037253 syncytin Proteins 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к практическому здравоохранению, физиологии, может быть использовано в качестве способа медицинского обследования. Изобретение может быть также использовано в гинекологической и акушерской практике для прогнозирования риска возникновения патологических состояний, осложнения течения беременности, диагностике и мониторинге развития ряда заболеваний (например, синдрома Леша-Найхана, болезни Канавана и др.). Изобретение относится к химическому анализу биологических материалов, например крови, мочи, исследованию или анализу материалов путем разделения на составные части (компоненты) с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, а также метаболомному анализу, который также называют анализом метаболического профиля. В основе изобретения лежит количественный анализ гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты в сыворотке крови человека с последующим сравнением их значений с пороговыми для оценки риска возникновения нарушений течения беременности.The invention relates to practical health care, physiology, can be used as a method of medical examination. The invention can also be used in gynecological and obstetric practice to predict the risk of pathological conditions, complicate the course of pregnancy, diagnose and monitor the development of a number of diseases (for example, Lesch-Naihan syndrome, Kanavan disease, etc.). The invention relates to chemical analysis of biological materials, such as blood, urine, research or analysis of materials by separation into components (components) using adsorption, absorption or similar processes or using ion exchange, as well as metabolic analysis, which is also called metabolic profile analysis . The invention is based on a quantitative analysis of hypoxanthine, xanthine and uric acid in human serum, followed by a comparison of their values with threshold values to assess the risk of pregnancy disorders.
В настоящее время важным аспектом акушерской практики и наблюдения за беременностью является оценка риска беременности и перинатальной патологии.Currently, an important aspect of obstetric practice and pregnancy monitoring is the assessment of the risk of pregnancy and perinatal pathology.
На сегодняшний день существует ряд биомаркеров, измерение концентраций которых в крови, моче, амниотической жидкости используется для оценки возникновения нарушений гестационного процесса, а именно преэклампсии, гипоксии, преждевременных родах. Следует отметить некоторые белковые показатели, измеряемые в сыворотке крови матери и позволяющие проводить оценку риска возникновения преэклампсии не только во втором и третьем триместрах беременности, и на более ранних сроках гестации (плацентарный фактор роста (PLGF), сосудисто-эндотелиальный фактор роста (VEGF), fms-подобная тирозин киназа 1 (sFLT-1), эндотелии-1, 2). Оценку риска возникновения преждевременных родов осуществляют по результатам анализов крови на гормоны - прогестерон, пролактин, эстрогены и кортизол, а также назначают динамическое исследование в крови беременной уровня хорионического гонадотропина человека (ХГЧ).Today, there are a number of biomarkers, the measurement of concentrations in the blood, urine, amniotic fluid is used to assess the occurrence of disorders of the gestational process, namely preeclampsia, hypoxia, premature birth. It should be noted some protein indicators, measured in maternal blood serum and allowing assessment of the risk of preeclampsia not only in the second and third trimesters of pregnancy, and at earlier gestational periods (placental growth factor (PLGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), fms-like tyrosine kinase 1 (sFLT-1), endothelium-1, 2). The risk of premature birth is assessed by the results of blood tests for hormones - progesterone, prolactin, estrogens and cortisol, and a dynamic study of the level of human chorionic gonadotropin (hCG) in a pregnant woman is also prescribed.
Известен способ оценки риска возникновения патологии беременности, в частности преэклампсии, в основе которого лежит определения соотношения концентраций белков sFlt-1 / PLGF в кровотоке [1]. В случае преэклампсии уровень sFlt-1 в плазме крови беременных женщин повышен, а уровень PLGF понижен по сравнению с нормально протекающей беременностью. Таким образом, соотношение sFlt-1/PLGF позволяет выявить риск развивающейся преэклампсии.A known method for assessing the risk of pregnancy pathology, in particular preeclampsia, which is based on determining the ratio of protein concentrations sFlt-1 / PLGF in the bloodstream [1]. In the case of preeclampsia, the level of sFlt-1 in the blood plasma of pregnant women is increased, and the level of PLGF is lowered compared to a normal pregnancy. Thus, the ratio sFlt-1 / PLGF allows you to identify the risk of developing preeclampsia.
В литературе описываются применения подобных вышеуказанному способов оценки риска возникновения нарушений течения беременности на основании определения концентраций VEGF, PLGF и sFlt-1, среди недостатков которых отмечается высокая длительность анализа, невысокая чувствительность при исследовании пациенток на ранних сроках гестации.The literature describes the use of methods similar to the above for assessing the risk of pregnancy disorders based on the determination of the concentrations of VEGF, PLGF and sFlt-1, among the shortcomings of which there is a high analysis duration and low sensitivity in the study of patients in early gestation.
Известен способ неизвазивной оценки риска развития преэклампсии в I триместре беременности путем определения концентраций указанных белков методами иммуноферментного анализа (ИФА), в моче с использованием для диагностики коэффициента uFP=log(sFlt-1/PLGF*100). Метод гарантирует диагностическую точность 88.2% при uFP>2.1 [2].A known method for non-invasive risk assessment of preeclampsia in the first trimester of pregnancy by determining the concentrations of these proteins by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in urine using the coefficient uFP = log (sFlt-1 / PLGF * 100) for diagnosis. The method guarantees diagnostic accuracy of 88.2% at uFP> 2.1 [2].
Известен способ оценки риска возникновения преэклампсии и эклампсии на сроке не более 20 недель путем определения концентрации в биологическом образце, по крайней мере, одного из белков sFlt-1, PLGF, VEGF или любой их комбинации с использованием ИФА. В качестве образца могут быть использованы моча или сыворотка крови. Индикатором риска развития преэклампсии или эклампсии может быть, в частности, уровень sFlt-1>2 нг/мл или антиангиогенный индекс преэклампсии (PAAI): sFlt-1/VEGF+PLGF, превышающий 20 [3].A known method for assessing the risk of preeclampsia and eclampsia for a period of not more than 20 weeks by determining the concentration in a biological sample of at least one of the proteins sFlt-1, PLGF, VEGF, or any combination thereof using ELISA. Urine or blood serum may be used as a sample. An indicator of the risk of preeclampsia or eclampsia may be, in particular, sFlt-1> 2 ng / ml or anti-angiogenic preeclampsia index (PAAI): sFlt-1 / VEGF + PLGF in excess of 20 [3].
В литературе описаны также способы, позволяющие диагностировать преэклампсию на сроке беременности от 12 недель с использованием данных генотипирования и ИФА содержания различных форм VEGF и его рецепторов, а также PLGF [4-6].The literature also describes methods for diagnosing preeclampsia at a gestational age of 12 weeks or more using genotyping and ELISA data of various forms of VEGF and its receptors, as well as PLGF [4-6].
Известен способ ранней оценки риска возникновения нарушений беременности, в частности преэклампсии, уже начиная с 5 недели (а также на сроке 6-12, 14, 16, 18, 20 или 24 недель) с использованием ангиогенных биомаркеров sFlt-1 и PLGF. Также описывается диагностика других нарушений течения беременности путем определения концентраций глобулина, связывающего половые гормоны (SHBG), цитокинов и интерлейкина 6 [7].There is a method of early assessment of the risk of pregnancy disorders, in particular preeclampsia, already starting from 5 weeks (and also at a period of 6-12, 14, 16, 18, 20 or 24 weeks) using angiogenic biomarkers sFlt-1 and PLGF. It also describes the diagnosis of other pregnancy disorders by determining the concentrations of sex hormone binding globulin (SHBG), cytokines, and interleukin 6 [7].
Известны также способы ранней оценки риска развития патологий беременности, основанные на измерении концентраций многих других белков, а также мониторинге уровня экспрессии кодирующих их генов в биологическом материале, взятом у беременных женщин. К таким белкам относятся плацентарный и сывороточный изоферритин [8], гемоглобин [9, 10], ингибин А [11], TGF [12], синцитин [13], а также специфический полипептид с молекулярной массой 26.6 кДа [14].Methods are also known for early assessment of the risk of pregnancy pathologies, based on measuring the concentrations of many other proteins, as well as monitoring the expression level of the genes encoding them in biological material taken from pregnant women. Such proteins include placental and serum isoferritin [8], hemoglobin [9, 10], inhibin A [11], TGF [12], syncytin [13], as well as a specific polypeptide with a molecular weight of 26.6 kDa [14].
Известны способы, в которых наряду с PLGF отмечается возможность использования РАРР-А (pregnancy-associated plasma protein А) для диагностики как ранней (начиная с 11-13 недели), так и поздней (после 34 недели) преэклампсии. В тест-систему для диагностики преэклампсии и связанных с ней нарушений также включены реагенты для определения других биомаркеров (РР13, ММР3, TNFR1, ADAM12 и др.) [15].Known methods in which, along with PLGF, the possibility of using PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein A) for the diagnosis of both early (starting from 11-13 weeks) and late (after 34 weeks) preeclampsia is noted. Reagents for determining other biomarkers (PP13, MMP3, TNFR1, ADAM12, etc.) are also included in the test system for the diagnosis of preeclampsia and related disorders [15].
Известен способ, описывающий процедуру скрининга гестационных нарушений, в том числе преэклампсии, на 6-24 неделях беременности и основанный на определении уровня PLGF, SHGB, а также группы цитокинов в составе крови, мочи, амниотической жидкости, плацентраной ткани и других биологических образцов, отобранных у беременных женщин [16]. Диагностическая система включает в себя биологический микрочип с иммобилизированными реагентами для упрощения детектирования интересующих белковых молекул.There is a method that describes the screening of gestational disorders, including preeclampsia, at 6-24 weeks of pregnancy and based on determining the level of PLGF, SHGB, as well as a group of cytokines in the composition of blood, urine, amniotic fluid, placental tissue and other biological samples taken in pregnant women [16]. The diagnostic system includes a biological microchip with immobilized reagents to simplify the detection of protein molecules of interest.
Способ [17] предназначен для оценки риска возникновения преэклампсии в течение всей беременности, и включает определение экспрессии по крайней мере одного, двух или трех биомаркеров апоптических процессов трофобласта на основе иммуноферментного и других методов анализа цельной крови или сыворотки крови матери. В частности, для оценки риска в первом триместре беременности используется, по крайней мере, один биомаркер из группы: Ang, Leptin, RANTES, PDGF, ICAM I, VEGF, G-SCF, Fas, EGF, IGFBP 1, MCP 1, IL8, FasL, - а также связанных с ними ферментов и метаболитов.The method [17] is intended to assess the risk of preeclampsia throughout pregnancy, and includes determining the expression of at least one, two, or three biomarkers of apoptotic trophoblast processes based on enzyme-linked immunosorbent assay and other methods of analyzing whole blood or maternal blood serum. In particular, to assess risk in the first trimester of pregnancy, at least one biomarker from the group is used: Ang, Leptin, RANTES, PDGF, ICAM I, VEGF, G-SCF, Fas, EGF, IGFBP 1, MCP 1, IL8, FasL, - as well as related enzymes and metabolites.
Известен способ оценки риска развития преэклампсии на 9-11 или 10-14 неделях беременности с использованием тест-систем, позволяющих определять концентрации различных комбинаций белковых молекул (от 5 до 40 в каждой системе) в сыворотке материнской крови с помощью метода ИФА [18].There is a method of assessing the risk of preeclampsia at 9-11 or 10-14 weeks of gestation using test systems that allow you to determine the concentration of various combinations of protein molecules (from 5 to 40 in each system) in maternal blood serum using the ELISA method [18].
В способе [19] представлено более 150 генов, дифференциально экспрессируемых в случае преэклампсии по сравнению с нормально протекающей беременностью, а также различные методы диагностики, включающие исследование экспрессии генов с помощью гибридизационных чипов или ПЦР, а также определение концентраций кодируемых ими биомаркеров в биологических образцах методами ИФА, ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС, блоттинга и др.The method [19] presents more than 150 genes differentially expressed in the case of preeclampsia compared with a normal pregnancy, as well as various diagnostic methods, including the study of gene expression using hybridization chips or PCR, as well as determining the concentrations of biomarkers encoded by them in biological samples by methods IFA, HPLC, HPLC-MS, blotting, etc.
Способ [20] представляет собой метод ранней (начиная с 13 недели) диагностики риска преждевременных родов с помощью определения уровня экспрессии генов-биомаркеров (от 27 до 611 возможных биомаркеров в представленных тест-системах) в клетках крови матери.The method [20] is a method of early (starting from the 13th week) diagnosis of the risk of preterm birth by determining the level of expression of biomarker genes (from 27 to 611 possible biomarkers in the presented test systems) in the mother’s blood cells.
Известен также способ, в котором предложен анализ комплекса (33) белковых биомаркеров для оценки риска развития преэклампсии, начиная с 5 недели беременности, однако наиболее оптимальным сроком для проведения диагностики является 22-24 неделя беременности [21].There is also known a method in which an analysis of the complex (33) of protein biomarkers is proposed for assessing the risk of preeclampsia starting from the 5th week of pregnancy, but the most optimal time for diagnosis is 22-24 weeks of pregnancy [21].
Известен также способ, используемый для диагностики преэклампсии на сроке 12-14 недель. Способ заключается в хроматографическом разделении белков в составе сыворотки крови, мочи, амниотической жидкости, а также других биологических жидкостях и тканях, с последующим МС-детектированием. В роли биомаркеров преэклампсии используют интенсивности отдельных пиков (соответствующие определенным величинам m/z), диагностика проводится с использованием соотношений различных биомаркеров [22].There is also known a method used to diagnose preeclampsia for a period of 12-14 weeks. The method consists in chromatographic separation of proteins in the composition of blood serum, urine, amniotic fluid, as well as other biological fluids and tissues, followed by MS detection. Intensity of individual peaks (corresponding to certain m / z values) are used as biomarkers of preeclampsia; diagnosis is carried out using the ratios of various biomarkers [22].
Способ, аналогичный описанному выше, но используемый для диагностики риска преждевременных родов, описан в [23].A method similar to that described above, but used to diagnose the risk of premature birth, is described in [23].
Известен также способ, используемый для оценки риска возникновения преждевременных родов, начиная с 12 недели беременности. Способ основан на ИФА биологического материала, в качестве которого может быть использована как жидкость, так и твердая масса, отобранная в области заднего свода матки. Исследование материала включает анализ содержания 6 основных групп белковых продуктов локального воспаления (цитокины, простеноиды, коллагеназа, эластаза, фибронектин, церуллоплазмин, фибрин, интерфероны, иммуноглобулины, продукты жизнедеятельности мисцеллярных белых кровяных клеток и др.) [24].There is also known a method used to assess the risk of premature birth, starting from 12 weeks of pregnancy. The method is based on the ELISA of biological material, which can be used as liquid or solid mass, selected in the posterior arch of the uterus. The study of the material includes analysis of the content of 6 main groups of protein products of local inflammation (cytokines, prostenoids, collagenase, elastase, fibronectin, cerulloplasmin, fibrin, interferons, immunoglobulins, waste products of miscellular white blood cells, etc.) [24].
Таким образом, большая часть способов оценки риска возникновения нарушений течения беременности, а именно преэклампсии, гипоксии, преждевременных родов, основаны на анализе ряда белков, измерение концентраций которых в сыворотке крови, моче, амниотической жидкости и другом биологическом материале на сегодняшний день используется для оценки риска возникновения патологии беременности. Однако данные заболевания являются многосистемными и маловероятно, что их обнаружение и оценка риска возникновения связаны с одним или группой белков (единичные маркеры имеют недостаточную чувствительность (от 30 до 60% в случае, например, преэклампсии)).Thus, most of the methods for assessing the risk of pregnancy disorders, namely pre-eclampsia, hypoxia, preterm delivery, are based on the analysis of a number of proteins whose concentration measurements in blood serum, urine, amniotic fluid and other biological material are currently used to assess risk the occurrence of pregnancy pathology. However, these diseases are multi-systemic and it is unlikely that their detection and assessment of the risk of occurrence is associated with one or a group of proteins (single markers have insufficient sensitivity (from 30 to 60% in the case of, for example, preeclampsia)).
В биологических жидкостях человека следует оценивать также и присутствующие в значительном количестве другие вещества, метаболиты, которые могут быть значительно более важными биомаркерами и использование которых для диагностики позволит выявлять риск возникновения патологий уже в I триместре беременности, поскольку метаболиты наиболее тесно связаны с активностью клетки или организма на функциональном уровне.Other substances, metabolites that can be significantly more important biomarkers and the use of which for diagnosis will identify the risk of pathologies already in the first trimester of pregnancy should be evaluated in human biological fluids as well, since metabolites are most closely related to the activity of a cell or organism at the functional level.
В последние годы наблюдается рост исследований, в которых были получены данные, подтверждающие важность применения метаболомных исследований для оценки риска возникновения нарушений течения беременности. В этих работах были получены данные о взаимосвязи метаболических маркеров с различными видами нарушений, такими как ранние потери беременности, преэклампсия, нарушенное развитие плода, преждевременные роды [25-30].In recent years, there has been an increase in studies in which data have been obtained confirming the importance of using metabolic studies to assess the risk of pregnancy disorders. In these works, data were obtained on the relationship of metabolic markers with various types of disorders, such as early pregnancy loss, preeclampsia, impaired fetal development, and premature birth [25-30].
Известен способ ранней оценки риска возникновения преэклампсии, в котором наряду с группой белковых молекул используют в качестве биомаркера уровень гликозаминогликанов (ГАГ) в образце биопсии плаценты, определяемый с помощью хромато графических методов [31]. Недостатком известного способа является необходимость биопсии плаценты, что создает предпосылки для осложнения беременности.There is a method for early assessment of the risk of preeclampsia, in which, along with a group of protein molecules, the level of glycosaminoglycans (GAG) in the placenta biopsy sample, determined using chromatographic methods, is used as a biomarker [31]. The disadvantage of this method is the need for a biopsy of the placenta, which creates the prerequisites for complicating pregnancy.
Известен способ прогноза развития преэклампсии, включающий забор биологической жидкости (кровь, моча, синовиальная жидкость, цереброспинальная жидкость), определение содержания в ней гистидина или его метиловых производных, а также липидов и кетоновых тел методами ЯМР-спектроскопии (предпочтительный метод) и/или ферментативного анализа и/или методами разделения и/или определения антител. При отклонении полученных показателей от известных для женщин на данных сроках с нормально протекающей беременностью делают заключение о риске развития преэклампсии [32].A known method for predicting the development of preeclampsia, including the intake of biological fluid (blood, urine, synovial fluid, cerebrospinal fluid), determining the content of histidine or its methyl derivatives, as well as lipids and ketone bodies by NMR spectroscopy (preferred method) and / or enzymatic analysis and / or methods of separation and / or determination of antibodies. If the obtained indicators deviate from those known for women at these dates with a normal pregnancy, they conclude that there is a risk of preeclampsia [32].
Все перечисленные выше способы оценки риска возникновения патологии беременности не обладают необходимой чувствительностью, а применяемые методы исследования биологического материала с использованием иммуноферментного анализа, масспектрометрии, ядерно-магнитного резонанса являются длительными, при этом осуществление некоторых из них затруднено в условиях рутинного клинического анализа при отсутствии высококвалифицированного обслуживающего персонала. Другим недостатком является высокая стоимость оборудования для ЯМР.All of the above methods for assessing the risk of pregnancy pathology do not have the necessary sensitivity, and the methods used to study biological material using enzyme immunoassay, mass spectrometry, and nuclear magnetic resonance are lengthy, while some of them are difficult to perform in a routine clinical analysis in the absence of a highly qualified service provider staff. Another disadvantage is the high cost of NMR equipment.
Известен способ определения риска развития преэклампсии беременности, включающий забор биологического материала (кровь, сыворотка, плазма, моча, спиномозговая жидкость, синовиальная жидкость, амниотическая жидкость, вагинальная жидкость, жидкость, полученная при лаваже, ткань или их комбинация), разделение биомаркеров белковой природы методом капиллярной жидкостной хроматографии, идентификация хотя бы одного из 9 биомаркеров по времени их высвобождения Rf (аналог времени удерживания, определяющий расположение пика на хроматограмме относительно других пиков), проведение масс-спектрометрического анализа для количественного определения по предварительно построенным калибровочным кривым концентрации m/z хотя бы одного из предложенных девяти биомаркеров; определении количественного соотношения концентраций различных биомаркеров в исследуемом биологическом материале, причем количественные параметры, используемые для диагностики (линейные комбинации указанных соотношений), подобраны таким образом, что их отрицательное значение свидетельствует о риске развития преэклампсии, в то время как положительное значение говорит об отсутствии такого риска. Недостатком известного способа то, что он не позволяет одновременно определить риск развития преждевременных родов. Кроме того, способ является трудоемким и требует привлечения высококвалифицированного персонала (33).A known method for determining the risk of developing preeclampsia of pregnancy, including the collection of biological material (blood, serum, plasma, urine, cerebrospinal fluid, synovial fluid, amniotic fluid, vaginal fluid obtained from lavage, tissue or a combination thereof), separation of protein biomarkers by the method capillary liquid chromatography, identification of at least one of the 9 biomarkers by the time of their release Rf (analog of the retention time, which determines the location of the peak in the chromatogram from ositelno other peaks) holding a mass spectrometric analysis to quantify and to the calibration curve the concentration of m / z of at least one of the proposed nine biomarkers; determining the quantitative ratio of the concentrations of various biomarkers in the studied biological material, and the quantitative parameters used for diagnosis (linear combinations of these ratios) are selected so that their negative value indicates the risk of preeclampsia, while a positive value indicates the absence of such a risk . The disadvantage of this method is that it does not simultaneously determine the risk of premature birth. In addition, the method is time-consuming and requires the involvement of highly qualified personnel (33).
Наиболее близким к заявленному является способ оценки риска развития преэклампсии, включающий определение в плазме крови или других биологических жидкостях беременной женщины концентрации асимметричной (АДМА) и симметричной (СДМА) форм диметиларгинина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) или ИФА (предпочтительно на 10-25 неделях беременности), при концентрация АДМА>1.45 мкмоль/л и/или величине АДМА, по крайней мере, в 3 раза превышающей уровень АДМА у женщин, не испытавших преэклампсию и/или при соотношении концентраций АДМА/СДМА, по крайней мере, в 5 раз более высоком по сравнению с нормально протекающей беременностью, делают заключение о риске развития преэклампсии (34). Для реализации способа плазму в объеме 1,5 мл наносят на активированную катионообменную колонку, элюируют, элюент испаряют в среде жидкого азота, осадок растворяют, фильтруют и хроматографируют с помощью ВЭЖХ. Для идентификации биомаркеров в данном способе требуется их предварительная модификация реагентом офтальальдегид (o-phthalaldehyde, ОРА) Недостатком известного способа является то, что он не позволяет одновременно выявлять риск развития преждевременных родов. Кроме того, способ является трудоемким, т.к. включает длительную предварительную подготовку образцов до стадии хроматографии, включающую нанесение на катионообменную колонку, испарение элюента в среде жидкого азота, необходимость предварительной модификации биомаркеров для их идентификации. Кроме того, для осуществления способа требуется достаточно большой объем крови.Closest to the claimed is a method for assessing the risk of preeclampsia, including the determination of the concentration of asymmetric (ADMA) and symmetric (SDMA) forms of dimethylarginine in plasma or other biological fluids of a pregnant woman using high performance liquid chromatography (HPLC) or ELISA (preferably 10-25 weeks of pregnancy), with an ADMA concentration> 1.45 μmol / L and / or an ADMA value of at least 3 times the ADMA level in women who have not experienced preeclampsia and / or with a concentration ratio th ADMA / SDMA, at least 5 times higher compared to the normal pregnancy, conclude on the risk of pre-eclampsia (34). To implement the method, plasma in a volume of 1.5 ml was applied to an activated cation exchange column, eluted, the eluent was evaporated in liquid nitrogen, the precipitate was dissolved, filtered and chromatographed by HPLC. To identify biomarkers in this method, their preliminary modification with the ophthalaldehyde reagent (o-phthalaldehyde, OPA) is required. The disadvantage of this method is that it does not allow to simultaneously identify the risk of premature birth. In addition, the method is time consuming, because includes a long preliminary preparation of samples before the chromatography stage, including deposition on a cation exchange column, evaporation of the eluent in liquid nitrogen, the need for preliminary modification of biomarkers for their identification. In addition, for the implementation of the method requires a sufficiently large volume of blood.
Задачей, на решение которой направлено изобретение, является дополнительное определение риска развития преждевременных родов, расширение арсенала средств для определения риска развития преэклампсии, снижение трудоемкости способа, уменьшение количества забираемой крови.The problem to which the invention is directed is to additionally determine the risk of preterm birth, expand the arsenal of tools to determine the risk of preeclampsia, reduce the complexity of the method, reduce the amount of blood taken.
Решение поставленной задачи достигается тем, что в качестве биомаркеров риска развития патологии беременности используют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты, для чего сыворотку крови разводят дистиллированной водой, освобождают от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности путем фильтрования и последующего центрифугирования; в осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент; одновременно регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте; вычисляют концентрацию гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты по времени удерживания и площади пика поглощения в сравнении с аналогичными показателями стандартного раствора, содержащего заведомо известные концентрации гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты; при концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии; при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0.9 - о риске развития преждевременных родов; сыворотку крови предварительно разводят дистиллированной водой в 2 раза; освобождение разведенной дистиллированной водой сыворотки крови от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности, осуществляют путем фильтрования через мембрану инертного фильтра с отсечкой по молекулярному весу разделяемых компонентов в 3 кДа и последующего центрифугирования в течение 30 мин при температуре 4°C со скоростью 10500 g; в качестве ион-парного реагента используют тетрабутиламмоний сульфат; регистрацию сигнала в ультрафиолетовой области спектра, соответствующего мочевой кислоте, ксантину, гипоксантину, осуществляют с помощью высокочувствительного диод-матричного детектора при длине волны 260 нм.The solution to this problem is achieved by the fact that as a biomarker of the risk of developing a pregnancy pathology, a concentration of hypoxanthine, xanthine, uric acid is used, for which blood serum is diluted with distilled water, it is freed from proteins masking the determination of biomarkers of the risk of pregnancy pathology by filtering and subsequent centrifugation; in the precipitated fraction, biomarkers of the risk of developing a pathology of pregnancy are separated using reverse phase liquid chromatography using a buffer solution containing an ion-pair reagent; at the same time, a signal is recorded in the ultraviolet region of the spectrum corresponding to hypoxanthine, xanthine, uric acid; calculate the concentration of hypoxanthine, xanthine, uric acid by the retention time and the area of the peak of absorption in comparison with similar indicators of a standard solution containing known concentrations of hypoxanthine, xanthine, uric acid; with a uric acid concentration of more than 600 μmol / l, a conclusion is made about the risk of developing preeclampsia; with a ratio of hypoxanthine / xanthine concentration of more than 0.9 - about the risk of premature birth; blood serum is previously diluted with distilled water in 2 times; the release of serum diluted with distilled water from proteins masking the determination of biomarkers for the risk of pregnancy pathology is carried out by filtering through an inert filter membrane with a molecular weight cut-off of the separated components of 3 kDa and subsequent centrifugation for 30 min at 4 ° C at a speed of 10500 g ; tetrabutylammonium sulfate is used as an ion-pair reagent; signal registration in the ultraviolet region of the spectrum corresponding to uric acid, xanthine, hypoxanthine is carried out using a highly sensitive diode array detector at a wavelength of 260 nm.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Выполняют забор венозной крови, получают сыворотку крови, разводят ее дистиллированной водой, освобождают полученный раствор от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности путем фильтрования и последующего центрифугирования. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент. Одновременно регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Вычисляют концентрацию гипоксантина (HYP), ксантина (XAN), мочевой кислоты (UA), по времени удерживания и площади пика поглощения в сравнении с аналогичными показателями стандартного раствора, содержащего заведомо известные концентрации гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты. При концентрации мочевой кислоты более 600 мкмоль/л делают заключение о риске развития преэклампсии; при соотношении концентраций гипоксантин/ксантин более 0.9 - о риске развития преждевременных родов.Venous blood sampling is performed, blood serum is obtained, diluted with distilled water, the resulting solution is freed from proteins masking the determination of biomarkers for the risk of pregnancy pathology by filtration and subsequent centrifugation. In the precipitated fraction, biomarkers of the risk of developing pregnancy pathology are separated using reverse phase liquid chromatography using a buffer solution containing an ion-pair reagent. At the same time, a signal is recorded in the ultraviolet region of the spectrum corresponding to hypoxanthine, xanthine, uric acid. The concentration of hypoxanthine (HYP), xanthine (XAN), uric acid (UA), the retention time and the peak absorption area are calculated in comparison with similar indicators of a standard solution containing known concentrations of hypoxanthine, xanthine, uric acid. With a uric acid concentration of more than 600 μmol / l, a conclusion is made about the risk of developing preeclampsia; with a ratio of hypoxanthine / xanthine concentrations of more than 0.9 - about the risk of premature birth.
Венозную кровь объемом 250 мкл отбирают в вакуумные пробирки, с последующим выделением сыворотки крови согласно стандартному протоколу, аналогично описанному в [35]. Пробу сыворотки крови разводят в 2 раза дистиллированной водой (например, 250 мкл сыворотки и 250 мкл воды). Для освобождения от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности, полученный раствор фильтруют путем нанесения на мембрану инертного фильтра с отсечкой по молекулярному весу разделяемых компонентов в 3 кДа, затем центрифугируют в течение 30 мин при температуре 4°C и 10500×g оборотах. На дне пробирки собирают осажденную фракцию, не содержащую белков, маскирующих определение метаболитов.Venous blood with a volume of 250 μl was collected in vacuum tubes, followed by isolation of blood serum according to a standard protocol similar to that described in [35]. A blood serum sample is diluted 2 times with distilled water (for example, 250 μl of serum and 250 μl of water). In order to get rid of proteins masking the determination of biomarkers for the risk of pregnancy pathology, the resulting solution is filtered by applying an inert filter to the membrane with a cut-off molecular weight of the separated components of 3 kDa, then centrifuged for 30 min at 4 ° C and 10,500 × g rpm. At the bottom of the tube, a precipitated fraction containing no proteins masking the determination of metabolites is collected.
В осажденной фракции объемом 100 мкл разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент. В качестве ион-парного реагента используют тетрабутиламмоний сульфат.In the precipitated fraction with a volume of 100 μl, biomarkers of the risk of developing a pathology of pregnancy are separated using reverse phase liquid chromatography using a buffer solution containing an ion-pair reagent. As the ion-pair reagent, tetrabutylammonium sulfate is used.
В качестве подвижной фазы используют два буфера. Буфер А содержит 12 мМ тетрабутиламмоний сульфат, 10 мМ КН2РО4 и 0,125% метанола, pH 7.00. Буфер Б: 2.8 мМ тетрабутиламмоний сульфат, 100 мМ КН2РО4, 30% метанола, pH 5.50. Разделение смеси осуществляют градиентным элюированием в следующем режиме: 20 мин 100% буфера А, 8 мин 80% буфера А и 20% буфера Б, 10 мин 70% буфера А и 30% буфера Б, 12 мин 55% буфера А и 45% буфера Б, 11 мин 40% буфера А и 60% буфера Б, 9 мин 15% буфера А и 85% буфера Б, 10 мин 0% буфера А и 100% буфера Б, 10 мин 50% буфера А и 50% буфера Б, 15 мин 100% буфера А. Скорость потока 1.2 мл/мин, температура колонки 10°C. Разделение осуществляют с помощью обращенно-фазовой хроматографической колонки Hypersil С-18, размер частиц 5 мкм, размер колонки 250×4.6 мм. Колонку защищают предколонкой.Two buffers are used as the mobile phase. Buffer A contains 12 mM tetrabutylammonium sulfate, 10 mM KH 2 PO 4 and 0.125% methanol, pH 7.00. Buffer B: 2.8 mM tetrabutylammonium sulfate, 100 mM KH 2 PO 4 , 30% methanol, pH 5.50. The mixture is separated by gradient elution in the following mode: 20 min 100% buffer A, 8 min 80% buffer A and 20% buffer B, 10 min 70% buffer A and 30% buffer B, 12 min 55% buffer A and 45% buffer B, 11 min. 40% of buffer A and 60% of buffer B, 9 min. 15% of buffer A and 85% of buffer B, 10 min. 0% of buffer A and 100% of buffer B, 10 min. 50% of buffer A and 50% of buffer B, 15 min. 100% buffer A. Flow rate 1.2 ml / min, column temperature 10 ° C. Separation is carried out using a Hypersil C-18 reverse phase chromatographic column, particle size 5 μm, column size 250 × 4.6 mm. The column is protected by a pre-column.
Регистрацию сигнала, соответствующего каждому биомаркеру в ультрафиолетовой области спектра, осуществляют с помощью высокочувствительного диод-матричного детектора при длине волны 260 нм.Registration of the signal corresponding to each biomarker in the ultraviolet region of the spectrum is carried out using a highly sensitive diode array detector at a wavelength of 260 nm.
Для определения концентраций веществ в сыворотке крови используют калибровочные кривые, получаемые посредством метода внутреннего стандарта при использовании соответствующего метаболита известной концентрации, при этом процедуру выполняют отдельно для каждого метаболита (гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты) следующим образом. Биомаркер известной концентрации добавляют к аликвоте сыворотки крови, не используемой в анализе (обозначим Сыворотка А). Готовят стандартную навеску метаболита (например, гипоксантина) массой 1 мг, растворяют ее в 1 мл 1 М раствора NaOH до получения гомогенной смеси. Для нейтрализации pH к полученному раствору добавляют по каплям 1 М НСl до значения pH 6-7. Разбавляют полученный раствор в 2, 4, 8, 16 раз (четыре разведения). К 100 мкл дистиллированной воды и к 100 мкл каждого из полученных растворов добавляют 100 мкл Сыворотки А, тщательно перемешивают. Далее согласно заявленному способу освобождают полученные растворы для построения калибровочных кривых, а также образец Сыворотки А от белков, маскирующих определение биомаркеров риска развития патологии беременности путем фильтрования и последующего центрифугирования. В осажденной фракции разделяют биомаркеры риска развития патологии беременности при помощи обращенно-фазовой жидкостной хроматографии с использованием буферного раствора, содержащего ион-парный реагент.Одновременно регистрируют сигнал в ультрафиолетовой области спектра, соответствующий гипоксантину, ксантину, мочевой кислоте. Для растворов для построения калибровочных кривых вычисляют площади хроматографических пиков при известном времени удерживания, характерном для каждого из биомаркеров: 4.14±0.12 мин для гипоксантина; 5.43±0.10 мин - для ксантина; 10.66±0.21 мин - для мочевой кислоты (36). Калибровочные кривые строят в координатах зависимости концентрации метаболита от площади пика поглощения.To determine the concentration of substances in the blood serum, calibration curves are used, obtained by the internal standard method using the appropriate metabolite of known concentration, and the procedure is performed separately for each metabolite (hypoxanthine, xanthine, uric acid) as follows. A biomarker of known concentration is added to an aliquot of blood serum not used in the analysis (designated Serum A). Prepare a standard sample of a metabolite (for example, hypoxanthine) weighing 1 mg, dissolve it in 1 ml of a 1 M NaOH solution to obtain a homogeneous mixture. To neutralize the pH, 1 M Hcl was added dropwise to the resulting solution to a pH of 6-7. Dilute the resulting solution 2, 4, 8, 16 times (four dilutions). To 100 μl of distilled water and 100 μl of each of the resulting solutions add 100 μl of Serum A, mix thoroughly. Further, according to the claimed method, the solutions obtained for constructing calibration curves are released, as well as a sample of Serum A from proteins masking the determination of biomarkers of the risk of developing a pregnancy pathology by filtration and subsequent centrifugation. In the precipitated fraction, biomarkers of the risk of developing pregnancy pathology are separated using reverse phase liquid chromatography using a buffer solution containing an ion-pair reagent. Simultaneously, a signal is recorded in the ultraviolet region of the spectrum corresponding to hypoxanthine, xanthine, uric acid. For solutions for constructing calibration curves, the areas of chromatographic peaks are calculated at a known retention time characteristic of each of the biomarkers: 4.14 ± 0.12 min for hypoxanthine; 5.43 ± 0.10 min - for xanthine; 10.66 ± 0.21 min - for uric acid (36). Calibration curves are plotted in the coordinates of the metabolite concentration versus the area of the absorption peak.
Концентрации биомаркеров в анализируемых пробах беременных женщин вычисляют согласно полученным калибровочным кривым с учетом времени удерживания и площади пика поглощения при длине волны 260 нм.The concentration of biomarkers in the analyzed samples of pregnant women is calculated according to the obtained calibration curves taking into account the retention time and the area of the absorption peak at a wavelength of 260 nm.
Вычисляют концентрацию мочевой кислоты, а также отношение концентраций гипоксанина и ксантина:The concentration of uric acid, as well as the ratio of the concentrations of hypoxanin and xanthine, are calculated:
Полученные значения концентрации мочевой кислоты (UA), отношения концентраций
Данные критерии отражают особенности изменения метаболизма ксантина, гипоксантина, мочевой кислоты при риске возникновении преэклампсии или преждевременных родов. Заявленный способ обладает высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью. В заявленном способе в сравнении с прототипом не требуется подготовка образца с помощью катионообменной колонки, предварительная модификация биомаркеров для их идентификации. Объем забираемой крови существенно ниже. Все это делает возможным широкое использование способа оценки риска возникновения патологии беременности в клинической практике.These criteria reflect the characteristics of changes in the metabolism of xanthine, hypoxanthine, uric acid with a risk of preeclampsia or premature birth. The claimed method has high sensitivity, specificity and reproducibility. In the claimed method in comparison with the prototype does not require sample preparation using a cation exchange column, a preliminary modification of biomarkers for their identification. The volume of blood taken is significantly lower. All this makes it possible to widely use the method for assessing the risk of pregnancy pathology in clinical practice.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Пациентка 1. Возраст: 23 года. Неделя беременности - 15. Индекс массы тела: 27.5 кг/м2. Систолическое артериальное давление: 113 мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление: 67 мм рт.ст. Содержание белка в моче (суточное): 0,7 г (протеинурия). Повышенное содержание белка в моче, наличие артериальной гипертензии в семейном анамнезе. В связи с этим рекомендованы динамическое наблюдение артериального давления и хроматографический анализ сыворотки венозной крови на содержание метаболитов пуринового пути.Patient 1. Age: 23 years. Pregnancy week - 15. Body mass index: 27.5 kg / m 2 . Systolic blood pressure: 113 mmHg Diastolic blood pressure: 67 mmHg Urine protein content (daily): 0.7 g (proteinuria). An increased protein content in the urine, the presence of arterial hypertension in a family history. In this regard, dynamic monitoring of blood pressure and chromatographic analysis of venous blood serum for the content of purine pathogens are recommended.
Определено следующее содержание метаболитов в сыворотке крови:The following metabolite content in blood serum was determined:
Гипоксантин - 7,9 мкМHypoxanthin - 7.9 μM
Ксантин - 3,11 мкМXanthine - 3.11 μM
Мочевая кислота - 442,0 мкМUric acid - 442.0 μM
HYP/XAN - 2,54HYP / XAN - 2.54
Согласно результатам динамического исследования артериального давления поставлен диагноз - артериальная гипертензия. Отношение HYP/XAN превышает 0.9, возможен риск преждевременных родов. На 23 неделе обнаружена повышенная сократительная деятельность матки, укорочение и размягчение шейки матки. Выбор выжидательной тактики ведения беременности с угрозой прерывания. В последствии преэклампсия не выявлена.According to the results of a dynamic study of blood pressure, a diagnosis was made - arterial hypertension. The HYP / XAN ratio exceeds 0.9, the risk of premature birth is possible. At week 23, increased contractile activity of the uterus, shortening and softening of the cervix were detected. The choice of expectant management of pregnancy with the threat of termination. Subsequently, preeclampsia was not detected.
Пациентка 2. Возраст: 28 лет. Неделя беременности - 17. Индекс массы тела: 25,7 кг/м2. Систолическое артериальное давление: 137 мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление: 92 мм рт.ст. Содержание белка в моче (суточное): 0,3 г. В связи с повышенным артериальным давлением рекомендован хроматографический анализ сыворотки венозной крови по заявленному способу на содержание метаболитов пуринового пути. Определено следующее содержание метаболитов в сыворотке крови:Patient 2. Age: 28 years. Pregnancy week - 17. Body mass index: 25.7 kg / m 2 . Systolic blood pressure: 137 mmHg Diastolic blood pressure: 92 mmHg Urine protein content (daily): 0.3 g. Due to high blood pressure, a chromatographic analysis of venous blood serum is recommended according to the claimed method for the purine pathogen metabolite content. The following metabolite content in blood serum was determined:
Гипоксантин - 13,8 мкМHypoxanthin - 13.8 μM
Ксантин - 12,7 мкМXanthine - 12.7 μM
Мочевая кислота - 739,0 мкМUric acid - 739.0 μM
HYP/XAN - 1,086HYP / XAN - 1,086
Концентрация мочевой кислоты более 600 мкМ.The concentration of uric acid is more than 600 μM.
Согласно результатам хроматографического анализа сыворотки венозной крови пациентки во время беременности возможно развитие преэклампсии и повышен риск преждевременных родов.According to the results of chromatographic analysis of the patient’s venous blood serum during pregnancy, preeclampsia is possible and the risk of premature birth is increased.
На 18 неделе обнаружена повышенная сократительная деятельность матки, укорочение и размягчение шейки матки. Выбор выжидательной тактики ведения беременности с угрозой прерывания. В последствие выявлена преэклампсия на 28 неделе беременности.At week 18, increased contractile activity of the uterus, shortening and softening of the cervix were found. The choice of expectant management of pregnancy with the threat of termination. As a consequence, preeclampsia was detected at 28 weeks of gestation.
Пациентка 3. Возраст: 22 года. Неделя беременности - 15. Индекс массы тела: 26 кг/м2. Систолическое артериальное давление: 140 мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление: 89 мм рт.ст. Содержание белка в моче (суточное): 0,28 г. В связи с повышенным артериальным давлением рекомендован хроматографический анализ сыворотки венозной крови на содержание метаболитов пуринового пути.Patient 3. Age: 22 years. Pregnancy week - 15. Body mass index: 26 kg / m 2 . Systolic blood pressure: 140 mmHg Diastolic blood pressure: 89 mmHg Urine protein content (daily): 0.28 g. Due to high blood pressure, a chromatographic analysis of venous blood serum is recommended for purine pathogen metabolites.
Определено следующее содержание метаболитов в сыворотке крови:The following metabolite content in blood serum was determined:
Гипоксантин - 13,7 мкМHypoxanthin - 13.7 μM
Ксантин - 16,7 мкМXanthine - 16.7 μM
Мочевая кислота - 824,9 мкМUric acid - 824.9 μM
HYP/XAN-0,82.HYP / XAN-0.82.
Согласно результатам хроматографического анализа сыворотки венозной крови пациентки по заявленному способу во время беременности возможно развитие преэклампсии.According to the results of chromatographic analysis of the serum of the venous blood of the patient according to the claimed method during pregnancy, the development of preeclampsia is possible.
В последствии преэклампсия выявлена на 25 неделе.Subsequently, preeclampsia was detected at week 25.
Пациентка 4.Patient 4.
Возраст: 29 года. Неделя беременности - 19. Индекс массы тела: 28,1 кг/м2. Систолическое артериальное давление: 120 мм рт.ст. Диастолическое артериальное давление: 82 мм рт.ст. Содержание белка в моче (суточное): 0,2 г. Определено следующее содержание метаболитов в сыворотке крови согласно заявленному способу:Age: 29 years. Pregnancy week - 19. Body mass index: 28.1 kg / m 2 . Systolic blood pressure: 120 mmHg Diastolic blood pressure: 82 mmHg Urine protein content (daily): 0.2 g. The following serum metabolite content was determined according to the claimed method:
Гипоксантин - 13,4 мкМHypoxanthin - 13.4 μM
Ксантин - 19,1 мкМXanthine - 19.1 μM
Мочевая кислота - 518,3 МкмUric Acid - 518.3 μm
HYP/XAN - 0,7HYP / XAN - 0.7
Согласно результатам хроматографического анализа сыворотки венозной крови пациентки по заявленному способу во время беременности не предполагается развитие патологии беременности. Впоследствии беременность протекала физиологически и завершилась нормальными родами.According to the results of chromatographic analysis of the serum of the venous blood of the patient according to the claimed method during pregnancy, the development of the pathology of pregnancy is not expected. Subsequently, the pregnancy proceeded physiologically and ended in normal childbirth.
Литература.Literature.
1. Muteins of placental growth factor type 1, preparation and application thereof. Maglione, D. US 7314734 B2, 19.05.2003.1. Muteins of placental growth factor type 1, preparation and application thereof. Maglione, D. US 7314734 B2, May 19, 2003.
2. Diagnosis of preeclampsia. Buhimschi, C., Buhimschi, I., Norwitz, E. US 2010/0227342, 17.05.20102. Diagnosis of preeclampsia. Buhimschi, C., Buhimschi, I., Norwitz, E. US 2010/0227342, 05.17.2010
3. Methods of diagnosing pre-eclampsia or eclampsia. Karumanchi, S., Maynard, S., Sukhatme, V. 7947449, 4.08.2008.3. Methods of diagnosing pre-eclampsia or eclampsia. Karumanchi, S., Maynard, S., Sukhatme, V. 7947449, 4.08.2008.
4. Detection of risk of pre-eclampsia. Bates, D., Bills, V., Harper, S., Qiu, Y. US 2011/0076259, 24.09.2010.4. Detection of risk of pre-eclampsia. Bates, D., Bills, V., Harper, S., Qiu, Y. US 2011/0076259, 09.24.2010.
5. Variants of VEGFR and their use in the diagnosis and treatment of pregnancy associated medical conditions. Keshet, E., Sela, S., Ithin, A., Yagel, S. US 2010/0136012, 20.12.2007.5. Variants of VEGFR and their use in the diagnosis and treatment of pregnancy associated medical conditions. Keshet, E., Sela, S., Ithin, A., Yagel, S. US 2010/0136012, December 20, 2007.
6. Modulators of VEGF splicing as pro- and anti-angiogenic agents. Bates, D., Harper, S., James, N., Dawid, G. WO 2008/110777, 10.03.2008.6. Modulators of VEGF splicing as pro- and anti-angiogenic agents. Bates, D., Harper, S., James, N., Dawid, G. WO 2008/110777, 03/10/2008.
7. Screening for gestational disorders. Thadhani, R., Karumanchi, S. US 7344892, 23.09.2004.7. Screening for gestational disorders. Thadhani, R., Karumanchi, S. US 7344892, September 23, 2004.
8. Isoferritin as a marker for pathological pregnancy. Moroz; C. US 5871735, 12.06.1990.8. Isoferritin as a marker for pathological pregnancy. Moroz; C. US 5871735, 06/12/1990.
9. Diagnosis and treatment of preeclampsia. Hansson, S., Akerstrom, B. US 2010/0105070 A1, 12.02.2008.9. Diagnosis and treatment of preeclampsia. Hansson, S., Akerstrom, B. US 2010/0105070 A1, 02/12/2008.
10. Diagnosis of preeclampsia in mammals. Olson; C, Peterson; C. US 5849474, 06.12.1995.10. Diagnosis of preeclampsia in mammals. Olson; C, Peterson; C. US 5849474, December 6, 1995.
11. Inhibin-A: a marker for differentiation, diagnosing and screening abnormal pregnancies. Segal, S., Rivnay, B. US 2006/0046274 A1, 31.08.2004.11. Inhibin-A: a marker for differentiation, diagnosing and screening abnormal pregnancies. Segal, S., Rivnay, B. US 2006/0046274 A1, 08/31/2004.
12. Methods for early diagnosing of an increased risk of preeclampsia. Caniggia, I., Post, M., Lye, S. US 7754495 B2, 16.10.2008.12. Methods for early diagnosing of an increased risk of preeclampsia. Caniggia, I., Post, M., Lye, S. US 7754495 B2, 10.16.2008.
13. Diagnosis and treatment of preeclampsia. Buhimschi, I., Norwitz, E., Buhimschi, C, Tsen, L. WO 2005/093413, 22.03.2005.13. Diagnosis and treatment of preeclampsia. Buhimschi, I., Norwitz, E., Buhimschi, C, Tsen, L. WO 2005/093413, 03.22.2005.
14. Method of diagnosing preeclampsia. Voroteliak, V. US 2010/0190192 A1, 15.09.2009.14. Method of diagnosing preeclampsia. Voroteliak, V. US 2010/0190192 A1, 09/15/2009.
15. Methods for determining the risk of prenatal complications. Cuckle, H., Ahola, Т., Poon, L. US 2010/0304412, 26.01.2009.15. Methods for determining the risk of prenatal complications. Cuckle, H., Ahola, T., Poon, L. US 2010/0304412, 01.26.2009.
16. Compositions and methods for healthy pregnancy. Carter, D. US 2008/0213301 A1, 05.05.2008.16. Compositions and methods for healthy pregnancy. Carter, D. US 2008/0213301 A1, 05/05/2008.
17. Methods of determining whether a pregnant woman is at risk of developing preeclampsia. Mor, G., Neale, D., Romero, R. US 7790463 B2, 02.02.2006.17. Methods of determining whether a pregnant woman is at risk of developing preeclampsia. Mor, G., Neale, D., Romero, R. US 7,790,463 B2, 02.02.2006.
18. Maternal serum biomarkers for detection of pre-eclampsia. Nagalla, S., Rasanen, J., Gravett, M. US 2010/0016173 A1, 30.01.2009.18. Maternal serum biomarkers for detection of pre-eclampsia. Nagalla, S., Rasanen, J., Gravett, M. US 2010/0016173 A1, 01.30.2009.
19. Biomarkers for preeclampsia. Fisher, S., Winn, V., Haimov-Kochman, R. US 2008/0233583 A1, 20.02.2008.19. Biomarkers for preeclampsia. Fisher, S., Winn, V., Haimov-Kochman, R. US 2008/0233583 A1, 02.20.2008.
20. Preterm delivery diagnostic assay. Williams, M., Enquobahrie, D. US 2011/0144076 A1, 01.05.2009.20. Preterm delivery diagnostic assay. Williams, M., Enquobahrie, D. US 2011/0144076 A1, 05/01/2009.
21. Biomarkers for hypertensive disorders of pregnancy. Kas, K. US 2011/0251094 A1, 13.04.2011.21. Biomarkers for hypertensive disorders of pregnancy. Kas, K. US 2011/0251094 A1, 04/13/2011.
22. Identifying and quantifying biomarkers associated with preeclampsia. Graves, S., Esplin, M. US 2011/0247404 A1, 24.06.2009.22. Identifying and quantifying biomarkers associated with preeclampsia. Graves, S., Esplin, M. US 2011/0247404 A1, June 24, 2009.
23. Identification and quantification of biomarkers for evaluating the risk of preterm birth. Graves, S., Esplin, M., Thulin, C. US 2010/0297679 A1, 17.07.2008.23. Identification and quantification of biomarkers for evaluating the risk of preterm birth. Graves, S., Esplin, M., Thulin, C. US 2010/0297679 A1, 07.17.2008.
24. Screening method for identifying women at increased risk for imminent delivery. Senyei; A., Casal; D. US 5516702, 29.06.1994.24. Screening method for identifying women at increased risk for imminent delivery. Senyei; A., Casal; D. US 5516702, 06.29.1994.
25. Robust early pregnancy prediction of later preeclampsia using metabolomic biomarkers. Kenny LC, Broadhurst DI, Dunn W, Brown M, North RA, McCowan L, Roberts C, Cooper GJ, Kell DB, Baker PN. // Hypertension. 2010. V. 56(4), pp. 741-749.25. Robust early pregnancy prediction of later preeclampsia using metabolomic biomarkers. Kenny LC, Broadhurst DI, Dunn W, Brown M, North RA, McCowan L, Roberts C, Cooper GJ, Kell DB, Baker PN. // Hypertension. 2010. V. 56 (4), pp. 741-749.
26. Metabolomics in premature labor: a novel approach to identify patients at risk for preterm delivery. Romero R, Mazaki-Tovi S, Vaisbuch E, Kusanovic JP, Chaiworapongsa T, Gomez R, Nien JK, Yoon BH, Mazor M, Luo J, Banks D, Ryals J, Beecher C. // J Matern Fetal Neonatal Med. 2010. V. 23(12), pp. 1344-1359.26. Metabolomics in premature labor: a novel approach to identify patients at risk for preterm delivery. Romero R, Mazaki-Tovi S, Vaisbuch E, Kusanovic JP, Chaiworapongsa T, Gomez R, Nien JK, Yoon BH, Mazor M, Luo J, Banks D, Ryals J, Beecher C. // J Matern Fetal Neonatal Med. 2010. V. 23 (12), pp. 1344-1359.
27. Changes in the metabolic footprint of placental explant-conditioned medium cultured in different oxygen tensions from placentas of small for gestational age and normal pregnancies. Horgan RP, Broadhurst DI, Dunn WB, Brown M, Heazell AE, Kell DB, Baker PN, Kenny LC. // Placenta. 2010. V. 31(10), pp. 893-901.27. Changes in the metabolic footprint of placental explant-conditioned medium cultured in different oxygen tensions from placentas of small for gestational age and normal pregnancies. Horgan RP, Broadhurst DI, Dunn WB, Brown M, Heazell AE, Kell DB, Baker PN, Kenny LC. // Placenta. 2010. V. 31 (10), pp. 893-901.
28. Changes in the metabolic footprint of placental explant-conditioned culture medium identifies metabolic disturbances related to hypoxia and pre-eclampsia. Dunn WB, Brown M, Worton SA, Crocker IP, Broadhurst D, Horgan R, Kenny LC, Baker PN, Kell DB, Heazell AE. // Placenta. 2009. V. 30(11), pp. 974-980.28. Changes in the metabolic footprint of placental explant-conditioned culture medium identifies metabolic disturbances related to hypoxia and pre-eclampsia. Dunn WB, Brown M, Worton SA, Crocker IP, Broadhurst D, Horgan R, Kenny LC, Baker PN, Kell DB, Heazell AE. // Placenta. 2009. V. 30 (11), pp. 974-980.
29. Identification and quantification of preterm birth biomarkers in human cervicovaginal fluid by liquid chromatography/tandem mass spectrometry. Shah SJ, Yu KH, Sangar V, Parry SI, Blair IA. // J Proteome Res. 2009. V. 8(5), pp. 2407-2417.29. Identification and quantification of preterm birth biomarkers in human cervicovaginal fluid by liquid chromatography / tandem mass spectrometry. Shah SJ, Yu KH, Sangar V, Parry SI, Blair IA. // J Proteome Res. 2009. V. 8 (5), pp. 2407-2417.
30. Maternal-fetal metabolism in normal pregnancy and preeclampsia, von Versen-Hoeynck FM, Powers RW. // Front Biosci. 2007. V. 1, pp. 2457-2470.30. Maternal-fetal metabolism in normal pregnancy and preeclampsia, von Versen-Hoeynck FM, Powers RW. // Front Biosci. 2007. V. 1, pp. 2457-2470.
31. Biomarker and composition for diagnosis of preeclampsia and method for using the same. Park, W., Kim, N., Warda, M., Han, J. US 2011/0269136 A1, 28.02.2011.31. Biomarker and composition for diagnosis of preeclampsia and method for using the same. Park, W., Kim, N., Warda, M., Han, J. US 2011/0269136 A1, 02.28.2011.
32. Biomarkers for preeclampsia. Fisher, J., Turner, E., Walker, J. US 2010/0190181 A1, 26.06.2007.32. Biomarkers for preeclampsia. Fisher, J., Turner, E., Walker, J. US 2010/0190181 A1, 06/26/2007.
33. Screen for preeclampsia. Savvidou, M., Hingorani, A., Vallance, P., Nicolaides, K. US 2007/0185200 A1, 19.04.2004.33. Screen for preeclampsia. Savvidou, M., Hingorani, A., Vallance, P., Nicolaides, K. US 2007/0185200 A1, 04/19/2004.
34. Identifying and quantifying biomarkers associated with preeclampsia. Graves, S., Esplin, M. US 2011/0247404 A1, 24.06.2009.34. Identifying and quantifying biomarkers associated with preeclampsia. Graves, S., Esplin, M. US 2011/0247404 A1, June 24, 2009.
35. Применение метода молекулярной спектроскопии средней инфракрасной области для определения ряда биохимических показателей сыворотки крови. С.А. Хаустова, Я.И. Давыдов, Е.В. Трушкин, М.Ю. Шкурников, Р. Мюллер, Й. Бекхаус, А.Г. Тоневицкий // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2009. Т. 148, С. 707-711.35. The use of the method of molecular spectroscopy of the middle infrared region to determine a number of biochemical parameters of blood serum. S.A. Khaustova, Y.I. Davydov, E.V. Trushkin, M.Yu. Skurnikov, R. Muller, J. Beckhaus, A.G. Tonevitsky // Bulletin of experimental biology and medicine. 2009.V. 148, S. 707-711.
36. Simultaneous high performance liquid chromatographic separation of purines, pyrimidines, N-acetylated amino acids, and dicarboxylic acids for the chemical diagnosis of inborn errors of metabolism. B. Tavazzi, G. Lazzarino, P. Leone, A.M. Amorini, F. Bellia, C.G. Janson, V. Di Pietro, L. Ceccarelli, S. Donzelli, J.S. Francis, B. Giardina // Clin. Biochem. 2005. V. 38, pp. 997-1008.36. Simultaneous high performance liquid chromatographic separation of purines, pyrimidines, N-acetylated amino acids, and dicarboxylic acids for the chemical diagnosis of inborn errors of metabolism. B. Tavazzi, G. Lazzarino, P. Leone, A.M. Amorini, F. Bellia, C.G. Janson, V. Di Pietro, L. Ceccarelli, S. Donzelli, J.S. Francis, B. Giardina // Clin. Biochem. 2005. V. 38, pp. 997-1008.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012123860/15A RU2586412C2 (en) | 2012-06-09 | 2012-06-09 | Method for evaluating risk of pregnancy failure |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012123860/15A RU2586412C2 (en) | 2012-06-09 | 2012-06-09 | Method for evaluating risk of pregnancy failure |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012123860A RU2012123860A (en) | 2013-12-20 |
| RU2586412C2 true RU2586412C2 (en) | 2016-06-10 |
Family
ID=49784451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012123860/15A RU2586412C2 (en) | 2012-06-09 | 2012-06-09 | Method for evaluating risk of pregnancy failure |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2586412C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2691114C1 (en) * | 2018-03-20 | 2019-06-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for forecasting development of pre-eclampsia in late pregnancy |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3494233A4 (en) * | 2016-08-05 | 2020-03-18 | Sera Prognostics, Inc. | Biomarkers for predicting preterm birth due to preterm premature rupture of membranes versus idiopathic spontaneous labor |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2243562C1 (en) * | 2003-07-04 | 2004-12-27 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Method for predicting the risk of eclampsia development in pregnant women |
| RU2256914C1 (en) * | 2003-12-10 | 2005-07-20 | Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии | Method for predicting perinatal pathology in pregnant women with chronic infectious-inflammatory diseases |
| RU2313793C1 (en) * | 2006-05-24 | 2007-12-27 | ФГУ Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Method for predicting non-progressive pregnancy cases |
| RU2344424C1 (en) * | 2007-07-16 | 2009-01-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of predicting menacing premature birth at women with threat of miscarriage of early terms |
| RU2375716C2 (en) * | 2004-02-06 | 2009-12-10 | Проекто Де Биомедисина Сима, С.Л. | Method for estimating risk of development and propensity for pathology associated with epcr autoantibodies observed |
| RU2437097C1 (en) * | 2010-05-21 | 2011-12-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method for prediction of pregnancy termination in threatened preterm labour |
-
2012
- 2012-06-09 RU RU2012123860/15A patent/RU2586412C2/en active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2243562C1 (en) * | 2003-07-04 | 2004-12-27 | Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей | Method for predicting the risk of eclampsia development in pregnant women |
| RU2256914C1 (en) * | 2003-12-10 | 2005-07-20 | Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии | Method for predicting perinatal pathology in pregnant women with chronic infectious-inflammatory diseases |
| RU2375716C2 (en) * | 2004-02-06 | 2009-12-10 | Проекто Де Биомедисина Сима, С.Л. | Method for estimating risk of development and propensity for pathology associated with epcr autoantibodies observed |
| RU2313793C1 (en) * | 2006-05-24 | 2007-12-27 | ФГУ Ростовский НИИ акушерства и педиатрии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Method for predicting non-progressive pregnancy cases |
| RU2344424C1 (en) * | 2007-07-16 | 2009-01-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method of predicting menacing premature birth at women with threat of miscarriage of early terms |
| RU2437097C1 (en) * | 2010-05-21 | 2011-12-20 | Федеральное государственное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method for prediction of pregnancy termination in threatened preterm labour |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2691114C1 (en) * | 2018-03-20 | 2019-06-11 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for forecasting development of pre-eclampsia in late pregnancy |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2012123860A (en) | 2013-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Flores et al. | Noninvasive diagnosis of endometriosis: Review of current peripheral blood and endometrial biomarkers | |
| Caillon et al. | Evaluation of sFlt-1/PlGF ratio for predicting and improving clinical management of pre-eclampsia: experience in a specialized perinatal care center. | |
| Edgell et al. | Assessing receptivity in the endometrium: the need for a rapid, non-invasive test | |
| AU2007312960A1 (en) | Assay for the detection of biomarkers associated with pregnancy related conditions | |
| NL2019067B1 (en) | Markers and their ratio to determine the risk for early-onset preeclampsia | |
| Cheng et al. | Establishing age-specific reference intervals for anti-Müllerian hormone in adult Chinese women based on a multicenter population | |
| US20060240495A1 (en) | Non-invasive assessment of intra-amniotic environment | |
| Zhang et al. | Follicular fluid metabolomics: tool for predicting IVF outcomes of different infertility causes | |
| RU2586412C2 (en) | Method for evaluating risk of pregnancy failure | |
| EP2686681B1 (en) | Diagnostic biomarker to predict women at risk for preterm delivery | |
| US20130210040A1 (en) | Diagnostic method | |
| JP3897117B2 (en) | Method for determining and predicting the severity of pregnancy toxemia, and for evaluating fetal / placental function in pregnancy toxemia | |
| Oluwole et al. | Urinary Nephrin Levels Among Pregnant Women With Preeclampsia in Lagos, Southwest Nigeria: An Analytical Cross-Sectional Study | |
| CN103267851B (en) | A kind of kit detecting premature rupture of fetal membranes and preparation method thereof | |
| JP4583685B2 (en) | Method for measuring fertility of mammals, especially humans | |
| Gupta et al. | Altered proteome profiles in maternal plasma in pregnancies with fetal growth restriction: Haptoglobin α2 isoform as a potential biomarker | |
| WO2007148720A1 (en) | Protein associated with nephrotic syndrome and use thereof | |
| CN112126683A (en) | Marker for the diagnosis of delayed preeclampsia | |
| US20250334591A1 (en) | Identification of cervical biomarkers | |
| Naruse et al. | Identification of interleukin-6 (IL-6) and squamous cell carcinoma (SCC) as amniotic fluid-specific markers | |
| RU2800717C1 (en) | Method of predicting the risk of pre-eclampsia in pregnant women with type 1 diabetes mellitus | |
| RU2797507C1 (en) | Method for prediction of effectiveness of assisted reproductive technologies | |
| US20230028818A1 (en) | Methods for using extracellular microvesicles with syncytiotrophoblast markers to diagnose preeclampsia | |
| D'Silva | Identification of first trimester maternal serum markers predictive of spontaneous preterm birth | |
| RITCHIE et al. | Proteinuria in preeclampsia: From bench to bedside |