RU2585233C2 - Промышленный способ получения компактина - Google Patents
Промышленный способ получения компактина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2585233C2 RU2585233C2 RU2013158478/10A RU2013158478A RU2585233C2 RU 2585233 C2 RU2585233 C2 RU 2585233C2 RU 2013158478/10 A RU2013158478/10 A RU 2013158478/10A RU 2013158478 A RU2013158478 A RU 2013158478A RU 2585233 C2 RU2585233 C2 RU 2585233C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compactin
- hours
- lactone
- butyl acetate
- culture fluid
- Prior art date
Links
- VGMFHMLQOYWYHN-UHFFFAOYSA-N Compactin Natural products OCC1OC(OC2C(O)C(O)C(CO)OC2Oc3cc(O)c4C(=O)C(=COc4c3)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C(O)C1O VGMFHMLQOYWYHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N SJ000287055 Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N mevastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CCC=C21 BOZILQFLQYBIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N mevastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=CCC[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 AJLFOPYRIVGYMJ-INTXDZFKSA-N 0.000 title claims abstract description 77
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims abstract description 28
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 241000228153 Penicillium citrinum Species 0.000 claims abstract description 19
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 16
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 14
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims abstract description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 8
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 239000000539 dimer Substances 0.000 abstract description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 abstract description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 26
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 26
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 10
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 9
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 9
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 7
- 238000007273 lactonization reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- PDBXRGUGLTUAAD-ABPOPGQRSA-M sodium;(3r)-7-[(1s,2s,8s,8ar)-2-methyl-8-[(2s)-2-methylbutanoyl]oxy-1,2,6,7,8,8a-hexahydronaphthalen-1-yl]-3-hydroxyheptanoate Chemical class [Na+].C1=C[C@H](C)[C@H](CCCC[C@@H](O)CC([O-])=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)CCC=C21 PDBXRGUGLTUAAD-ABPOPGQRSA-M 0.000 description 5
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- -1 compactin lactone Chemical class 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N pravastatin Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N 0.000 description 3
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Inorganic materials [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N (3S)-3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C[C@@](O)(CC(O)=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 CABVTRNMFUVUDM-VRHQGPGLSA-N 0.000 description 1
- MARPHFYISMSXDB-FOLKQPSDSA-N 5-[2-[3-[[(2r)-4-[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-hydroxy-3-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-2-hydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoylamino]ethylsulfanyl]-3-(hydroxymethyl)-5-oxopentanoic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)CC(CO)CC(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MARPHFYISMSXDB-FOLKQPSDSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 241001219054 Penicillium adametzioides Species 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000012824 chemical production Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000020346 hyperlipoproteinemia Diseases 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N propan-2-ol;hydrate Chemical compound O.CC(C)O XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
- C12P7/26—Ketones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/80—Penicillium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен промышленный способ получения компактина. Осуществляют культивирование штамма-продуцента Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводы, источники азота и минеральные соли. Полученную культуральную жидкость подкисляют минеральной кислотой до pH 2,5-3,5 и выдерживают в течение 1-2 ч. Экстрагируют компактин из мицелия бутилацетатом в три ступени. Экстракты очищают активированным углем. Очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата при пониженном давлении. Затем добавляют минеральную кислоту и нагревают до 85-90°C при пониженном давлении до полной лактонизации компактина. Осуществляют кристаллизацию компактин-лактона. Затем осуществляют перекристаллизацию компактин-лактона из водного раствора изопропанола при комнатной температуре и периодическом перемешивании в течение 1-2 часов, затем при 6-10°C в течение не менее 4 часов с выделением компактина. Получают продукт с содержанием компактина не менее 97%, суммой примесей не более 1,0%, единичной максимальной примесью димера не более 0,5%. Выход продукта составляет не менее 65%. 4 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению высокоочищенного компактина - промежуточного продукта для получения одного из ингибиторов биосинтеза холестерина в организме. Конкретно изобретение относится к способу получения компактина на основе штамма-продуцента компактина - Penicillium citrinum. Заявляемое изобретение обеспечивает высокорентабельное промышленное производство компактина с высокой степенью очистки.
Компактин является ингибитором фермента бета-гидрокси-метил-глутарил-КоА-редуктазы (HMG-CoA) и способен ингибировать ранние стадии биосинтеза холестерина. Поэтому производные компактина и родственные ему соединения (статины) широко применяются в качестве активного начала фармацевтических препаратов для снижения высокого уровня холестерина в крови.
Известно, что компактин является исходным ферментационным сырьем в технологии получения фармацевтической субстанции правастатина - одного из наиболее эффективных лекарственных препаратов, применяемых для лечения гиперлипопротеинемий IIa, IIb и III фенотипов.
Компактин подвергается конверсии в правастатин в результате биологической трансформации, при этом очень важно не вносить вместе с компактином дополнительное количество родственных примесей, особенно таких трудно отделяемых, как димер компактина, что позволяет снизить затраты по очистке конечного продукта - фармацевтической субстанции правастатина.
В настоящее время особое значение приобретают разработка новых технологичных и рентабельных способов получения компактина, которые стабильно обеспечивали бы высокий выход продукта при его промышленном получении.
Известны штаммы-продуценты компактина видов Penicillium citrinum и Penicillium adametzioides (US 3983140, 4049495, 5691173).
Однако продуктивность известных штаммов невысока, что не обеспечивает рентабельности процесса и высокого выхода продукта на конечной стадии.
Известны способы получения компактина путем культивирования штамма-продуцента компактина и многоступенчатого выделения целевого продукта, чаще всего в форме лактона, с заключительной стадией кристаллизации (RU 2114912, WO 98/50572). Основными недостатками описанных способов являются:
- недостаточная чистота целевого продукта, загрязнение его трудноотделяемыми примесями, такими как димер и кислотные формы компактина;
- низкие экономические показатели, недостаточный выход целевого продукта (50-60%);
- сложность и многостадийность технологии, использование дорогостоящего оборудования.
Наиболее близким аналогом промышленного способа получения компактина является способ получения компактина, в котором культуральную жидкость штамма-продуцента после ферментации подвергают щелочной обработке и очищают с помощью щелочи. После этого целевой продукт выделяют в кислых условиях экстракцией гидрофобным растворителем, после чего осуществляют кристаллизацию, экстрагент концентрируют и затем проводят экстракцию слабым основанием, целевой продукт выделяют кристаллизацией (WO/2001/062949).
Известный способ не обеспечивает получение целевого продукта достаточной степени чистоты и с высоким выходом, способ является многостадийным, трудоемким, требует использования больших объемов токсичных органических растворителей.
Техническим результатом заявленного изобретения - промышленного способа получения компактина на основе штамма-продуцента - Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 - является получение продукта высокого качества, с суммарным содержанием примесей не более 1,0%, единичной максимальной примесью (димер) не более 0,5% и выходом продукта не менее 65%.
Для достижения указанного технического результата и обеспечения высокопроизводительного получения компактина предлагается основанный на использовании штамма-продуцента Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 промышленный способ получения компактина, предусматривающий культивирование указанного штамма-продуцента в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводы, источники азота и минеральные соли, выделение компактина путем экстракции его органическим растворителем, очистку целевого продукта кристаллизацией и перекристаллизацией, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм Penicillium citrinum ВКПМ F-1099;
- полученную культуральную жидкость подкисляют минеральной кислотой до pH 2,5-3,5 и выдерживают в течение 1-2 ч;
- экстракцию компактина проводят из мицелия органическим растворителем - бутилацетатом в три ступени;
- экстракты очищают активированным углем;
- очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата при пониженном давлении, затем добавляют минеральную кислоту и нагревают до 85-90°C при пониженном давлении до полной лактонизации компактина;
- после кристаллизации осуществляют перекристаллизацию компактин-лактона из водного раствора изопропанола при комнатной температуре и периодическом перемешивании в течение 1-2 часов, затем при 6-10°C в течение не менее 4 часов с выделением компактина.
Используемый для получения компактина штамм Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 получен из штамма Penicillium citrinum SANK 18767 методом последовательного индуцированного мутагенеза. (Ukraintseva S.N., Voinova Т.М., Dzhavakhiya V.G. «Obtaining the highly productive mutants Penicillium citrinum producing compactin and optimization of fermentation process in shaken flasks» Biotechnology in Biology and Medicine. Editor A.M. Egorov and G. Zaikov, New York, 2006; Украинцева C.H., Воинова T.M., Джавахия В.Г. «Повышение активности гриба Penicillium citrinum - продуцента компактина, методом индуцированного мутагенеза и оптимизация условий культивирования высокопродуктивных штаммов». Материалы 3-й международной конференции из серии "Наука и бизнес", 19-21 июня 2006, Пущино, с. 72-75, 2006 г.)
Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУПГосНИИГенетика под номером F-1099.
Техническим результатом приведенной совокупности существенных признаков является получение продукта с содержанием основного вещества не менее 97%, суммой примесей не более 1,0%, единичной максимальной примесью димера не более 0,5%. Выход продукта составляет не менее 65%.
Кроме того, штамм Penicillium citrinum ВКПМ F-1099 является высокопродуктивным по компактину и стабильным по своим культуральным и физиолого-биохимическим характеристикам, что позволяет эффективно применять его в процессе биосинтеза компактина и получать культуральную жидкость с высоким содержанием компактина (10-12 мг/г). Высокая продуктивность данного штамма обеспечивает высокий выход целевого продукта и рентабельность его производства.
Таким образом, преимуществом заявленного способа является практически полный переход компактина в лактонную форму и минимальное содержание в продукте примеси в виде димера, что подтверждено представленными в описании примерами.
Предлагаемая технология получения компактина апробирована на пилотных ферментационных установках объемом 10 и 100 литров и пилотной установке химочистки.
В результате исследования была разработана технология процесса ферментации и химической очистки, обеспечивающая заданные цели - получение высококачественного и рентабельного продукта.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом.
Проводят выращивание посевного материала и аппаратную ферментацию с дозированным или постоянным внесением дополнительного источника углеводного питания, регулированием содержания растворенного кислорода, опосредованным регулированием кислотности культуральной жидкости. Это позволяет получить культуральную жидкость с концентрацией компактина 10-12 мг/г и низким содержанием родственных примесей.
Выращивание посевного материала проводят в инокуляторе на посевной питательной среде в течение 48-55 часов при 24°C, при постоянном перемешивании и аэрации. В качестве исходного посевного материала используют споровую культуру, выращенную на агаризованной среде или ячмене. Споровая нагрузка при засеве посевного аппарата составляет 0,75·105-1,25·105 спор/мл.
Процесс биосинтеза проводят на ферментационной питательной среде в течение 192-264 часов. Посевной материал из инокулятора передается на ферментацию в объеме 8-10% от загруженной ферментационной среды. Концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 25-40% путем регулирования скорости перемешивания среды, аэрации и избыточного давления в пределах 0,2-0,5 ати.
В процессе ферментации в культуральную жидкость вносят добавку:
1) 50%-ный раствор сахарозы в объеме, равном 11-12% от объема первоначально загруженной питательной среды. Повторяют при снижении концентрации сахарозы в культуральной жидкости;
или
2) 50%-ный раствор сахарозы с переменной скоростью 0,0025-0,0045 м3/м3·ч (объем добавки/объем загруженной среды в час) для поддержания концентрации сахарозы в культуральной жидкости на постоянном уровне, что также позволяет поддерживать pH культуральной жидкости на постоянном уровне.
Полученная таким образом культуральная жидкость с содержанием компактина 10-12 мг/г передается на стадию выделения и химической очистки.
Как правило, основной формой использования компактина является лактон, так как он легко кристаллизуется, хорошо очищается от примесей, стабилен при хранении, однако используется и натриевая форма компактина. Поэтому получение целевого продукта в форме лактона или натриевой соли имеет свои особенности.
Получение компактин-лактона методом экстракции
В предложенном способе выделения компактин-лактона экстракция компактина осуществляется органическим растворителем не из ферментационного бульона, что требует оборудования типа декантеров, а из мицелия, на котором осаждается присутствующий в культуральной жидкости компактин в лактонной и кислой форме при подкислении культуральной жидкости минеральными кислотами до pH 2.5-3,5 и выдержке в течение 1-2 часов.
Для достижения практически 100% выхода по стадии, в данном изобретении экстракция органическим растворителем осуществляется в 3 ступени, с соблюдением оптимальных условий на каждой ступени.
Так как компактин получают в виде лактона, основной стадией процесса является стадия лактонизации.
Предлагаемая очистка экстракта перед стадией концентрирования и лактонизации активированным углем, а также использование минеральной кислоты в качестве катализатора процесса лактонизации, оптимальный режим концентрирования и лактонизации обеспечивают степень лактонизации не менее 99% за 3-6 часов при минимальном содержании примесей. Дополнительно кристаллы лактона промываются для полного избавления от примесей водным щелочным раствором.
Преимуществом заявленного способа лактонизации является:
- практически полный переход компактина в лактонную форму;
- минимальное содержание в продукте примеси в виде димера,
В отличие от ближайшего аналога, кристаллизацию целевого продукта ведут из водного раствора изопропанола при комнатной температуре (25°C) с периодическим перемешиванием в течение 1-2 часов, затем при Т=6-10°C в течение не менее 4 часов. Получают продукт с чистотой не менее 90%, выходом 75%, суммарным содержанием примесей не более 1,5%, единичной максимальной примесью (димер) не более 0,5%.
С целью получения высокоочищенного целевого продукта дополнительно включена стадия перекристаллизации в органическом растворителе, либо перевод лактона в натриевую соль компактина с дополнительной очисткой целевого продукта активным углем. Получают продукт с содержанием основного вещества не менее 95%, суммой примесей не более 1,0%, единичной максимальной примесью (димер) не более 0,5% и выходом продукта не менее 65%.
Получение натриевой соли компактина
Натриевую соль компактина с содержанием основного вещества не менее 98% (ВЭЖХ), суммой примесей не более 1,0%, единичной максимальной примесью (димер) не более 0,5% и выходом от теории 88% получают из компактин-лактона. Компактин-лактон растворяют в смеси изопропилового спирта и воды, затем проводят делактонизацию путем добавления NaOH (pH 11-12) и при температуре 40°C. Затем водно-изопропанольную смесь нейтрализуют до pH 9.0-9.5 и отгоняют изопропиловый спирт на роторном испарителе при пониженном давлении и температуре 45°C. Компактин экстрагируют бутилацетатом из водного раствора при кислом pH, водную фазу отделяют, экстракт очищают активным углем, фильтруют и промывают. Для получения натриевой формы компактина к экстракту добавляют NaOH до pH 9.0-9.5, органическую фазу удаляют. С целью концентрирования водного раствора и кристаллизации отгоняют воду в виде азеотропа с изопропиловым спиртом при пониженном давлении и температуре 45°C. Выпавшие кристаллы натриевой соли компактина фильтруют, промывают и сушат.
Преимуществами данной технологии являются:
- экономичность метода;
- отсутствие побочных продуктов;
- выход конечного продукта - 88% от теории;
- высокое качество получаемой натриевой соли компактина - содержание основного вещества не менее 98% (ВЭЖХ); сумма примесей не более 1.0%, единичная максимальная примесь димер не более 0.5%;
- использование типичного для химического производства оборудования.
ПРИМЕР 1
Выращивание посевного материала штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ проводят в аппарате вместимостью 10 л на посевной питательной среде следующего состава (на 1 л среды):
- соевая мука - 20 г;
- пептон (триптон) - 10 г;
- сахароза - 100 г;
- натрия нитрат - 2 г;
- магния сульфат семиводный - 1 г;
- вода дистиллированная - до 1 л;
- щелочь (KOH или NaOH) или кислота (HCl) до pH 6,0-6,2.
Посевную среду стерилизуют в аппарате при 120°C 30 минут.
Посев посевного аппарата проводят споровым посевным материалом, выращенным на агаризованной среде, споровая нагрузка составила 1,0·105 спор/мл. Выращивание посевного материала в посевном аппарате проводят в течение 44 часов при 24°C, перемешивании и аэрации. В момент передачи посевного материала в ферментационный аппарат объемная биомасса продуцента составляет 15,2%. Посевной материал передают на ферментацию в объеме 8% от загруженной ферментационной среды.
Культуру штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ выращивают в аппарате вместимостью 10 л в течение 211 часов на ферментационной питательной среде следующего состава (на 1 л среды):
- соевая мука - 30 г;
- пептон (триптон) - 10 г;
- дрожжевой экстракт - 3 г;
- сахароза - 100 г;
- натрия нитрат - 5 г;
- магния сульфат семиводный - 1 г;
- вода дистиллированная - до 1 л;
- щелочь (KOH или NaOH) или кислота (HCl) до pH 5,8-6,0.
Ферментационную среду стерилизуют в аппарате при 120°C 30 минут.
В процессе ферментации регулируют подачу воздуха, скорость перемешивания среды, избыточное давление, концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 30-40%. На 73, 101 и 129 часы роста вводят 50%-ный раствор сахарозы в объеме 9,2% к начальному объему среды (по 600 мл при начальном объеме 6,5 л). Массовая доля компактина в культуральной жидкости на момент слива составляет 10,61 мг/г при массовой доле углеводов 0,28%, объемной биомассе 42,5% и pH 5,75. Слито из аппарата 6,2 кг культуральной жидкости, фактический съем компактина в культуральной жидкости составляет 70,2 г.
961,5 см3 (1000 г) культуральной жидкости, полученной культивированием Penicillium citrinum штамм F-1099 ВКПМ, содержащей 11 г компактина, подкисляют минеральной кислотой до pH 2,5-3.5, выдерживают в течение 30 мин. Биомассу фильтруют, промывают подкисленной водой, тщательно отжимают. Проводят экстракцию компактина из мицелия бутилацетатом в три ступени. Экстракты объединяют, очищают активным углем (9,4 г). Очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата при пониженном давлении, в концентрат добавляют 3 см3 минеральной кислоты и продолжают нагрев при пониженном давлении и температуре 85-90°C в течение 3 часов до полной лактонизации компактина. Для очистки от примесей реакционную массу промывают щелочным раствором и водой. Промытые кристаллы лактона компактина растворяют в изопропиловом спирте, кристаллизуют и высушивают. Получают 8,3 г компактина с содержанием не менее 90%. Далее проводят перекристаллизацию из изопропилового спирта. Выход компактина составляет 65,6%, содержание основного вещества 99% (ВЭЖХ).
ПРИМЕР 2
10 г компактина-лактона с содержанием основного вещества 93,6% растворяют в смеси изопропилового спирта и воды и проводят делактонизацию при перемешивании, температуре 40°C и pH 11-12 (добавление NaOH). Затем кислотой доводят pH до 9,0-9,5 и на роторном испарителе из смеси отгоняют изопропиловый спирт при пониженном давлении и температуре 45°C. Из водного раствора компактин экстрагируют бутилацетатом при pH 3.0, водную фазу отделяют. Бутилацетатный экстракт очищают активированным углем, фильтруют и промывают. Для получения натриевой формы компактина к экстракту при перемешивании добавляют NaOH до pH 9.0-9.5, выдерживают 30 мин, органическую фазу удаляют. С целью концентрирования раствора и кристаллизации натриевой соли компактина на роторном испарителе отгоняют воду в виде азеотропа с изопропиловым спиртом при пониженном давлении и температуре 45°C. Выпавшие кристаллы натриевой соли компактина фильтруют, промывают и сушат. Получают 10,2 г компактина в форме натриевой соли с содержанием основного вещества 97,5% (ВЭЖХ), суммой примесей 0,19%. Выход от теории составляет 87,7%.
ПРИМЕР 3
Выращивание посевного материала штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ проводят в аппарате вместимостью 10 л на посевной питательной среде в течение 43 часов при 24°C, перемешивании и аэрации. Аппарат засевают споровым посевным материалом, выращенным на агаризованной питательной среде, споровая нагрузка составляет 0,8·105 спор/мл. В момент передачи посевного материала в ферментационный аппарат объемная биомасса продуцента составляет 18,1%. Посевной материал передают на ферментацию в объеме 8% от загруженной ферментационной среды.
Культуру штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ выращивают в аппарате вместимостью 10 л в течение 192 часов на ферментационной питательной среде. Регулируют подачу воздуха, скорость перемешивания среды, избыточное давление, концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 25-40%. С 73 часа роста и до конца ферментации непрерывно вводят 50%-ный раствор сахарозы с удельной скоростью 0,0025-0,0035 м3/м3·ч (объем добавки/объем загруженной среды в час). Массовая доля компактина в культуральной жидкости на момент слива составляет 9,74 мг/г при следовом количестве углеводов, объемной биомассе 43,1% и pH 5,92. Слито из аппарата 6,3 кг культуральной жидкости, фактический съем компактина в культуральной жидкости составляет 61,4 г.
1021 г культуральной жидкости, содержащей 9,9 г компактина, подкисляют серной кислотой до pH 2,75, выдерживают в течение 1 ч. Биомассу фильтруют, промывают подкисленной водой, тщательно отжимают. Проводят экстракцию компактина из мицелия бутилацетатом в три ступени. Экстракты объединяют, очищают активным углем (9,7 г). Очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата при пониженном давлении с 3,4 мл серной кислоты и температуре 85°C до полной лактонизации компактина. Для очистки от примесей реакционную массу дважды промывают раствором соды и водой. Промытые кристаллы лактона компактина растворяют в изопропиловом спирте, кристаллизуют и сушат. Получают 8,2 г компактина с содержанием 94,7%. Далее проводят перекристаллизацию из изопропилового спирта. Получают 7,12 г с содержанием основного вещества 98,3% (ВЭЖХ), суммой примесей 0,6%. Выход компактина составляет 71,9%.
ПРИМЕР 4
Выращивание посевного материала штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ проводят в аппарате вместимостью 10 л на посевной питательной среде в течение 42 часов при 24°C, перемешивании и аэрации. Аппарат засевают споровым посевным материалом, выращенным на ячмене, споровая нагрузка составляет 1,0·105 спор/мл. В момент передачи посевного материала в ферментационный аппарат объемная биомасса продуцента составляет 15,6%. Посевной материал передают на ферментацию в объеме 8% от загруженной ферментационной среды.
Культуру штамма Penicillium citrinum F-1099 ВКПМ выращивают в аппарате вместимостью 100 л в течение 193 часов на питательной среде КЗ. Регулируют подачу воздуха, скорость перемешивания среды, избыточное давление, концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 35-40%. С 74 часа роста и до конца ферментации непрерывно вводят 50%-ный раствор сахарозы со скоростью 0,0025-0,0040 м3/м3·ч (объем добавки/объем загруженной среды в час). Введением добавки удерживают pH культуральной жидкости на уровне 6,0-6,4. Массовая доля компактина в культуральной жидкости на момент слива составляет 9,4 мг/г при массовой доле углеводов 0,4%, объемной биомассе 47,8% и pH 5,93. Слито из аппарата 68 л культуральной жидкости, фактический съем компактина в культуральной жидкости составляет 639 г.
Культуральную жидкость подкисляют серной кислотой до pH 2,67, выдерживают в течение 1 ч. Биомассу фильтруют, промывают подкисленной водой, тщательно отжимают. Проводят экстракцию компактина из мицелия 15,3 кг бутилацетатом 86 л в три ступени. Экстракты объединяют, очищают активированным углем. Очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата на установке Laborota-20 при пониженном давлении, в концентрат добавляют 194,3 см3 концентрированной минеральной кислоты и продолжают нагрев при пониженном давлении и температуре 85°C в течение 5 часов до полной лактонизации компактина. Для очистки от примесей лактонизированную массу дважды промывают щелочным водным раствором. Промытые кристаллы лактона компактина растворяют в изопропиловом спирте, кристаллизуют при температуре 6-8°C и сушат. Получают 484,7 г компактина с содержанием 92,1%. Далее проводят перекристаллизацию из органического растворителя. Получают 421,7 г компактин лактона с содержанием основного вещества 97.8%(ВЭЖХ), суммой примесей 0,9%, единичной 0.3% Выход компактина от культуральной жидкости составляет 66%.
Claims (1)
- Промышленный способ получения компактина, предусматривающий культивирование штамма-продуцента в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводы, источники азота и минеральные соли, выделение компактина путем экстракции его органическим растворителем, очистку целевого продукта кристаллизацией и перекристаллизацией, отличающийся тем, что
- в качестве продуцента используют штамм Penicillium citrinum ВКПМ F-1099;
- полученную культуральную жидкость подкисляют минеральной кислотой до pH 2,5-3,5 и выдерживают в течение 1-2 ч;
- экстракцию компактина проводят из мицелия органическим растворителем - бутилацетатом в три ступени;
- экстракты очищают активированным углем;
- очищенный экстракт концентрируют отгонкой бутилацетата при пониженном давлении, затем добавляют минеральную кислоту и нагревают до 85-90°C при пониженном давлении до полной лактонизации компактина;
- после кристаллизации осуществляют перекристаллизацию компактин-лактона из водного раствора изопропанола при комнатной температуре и периодическом перемешивании в течение 1-2 часов, затем при 6-10°C в течение не менее 4 часов с выделением компактина.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013158478/10A RU2585233C2 (ru) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | Промышленный способ получения компактина |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013158478/10A RU2585233C2 (ru) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | Промышленный способ получения компактина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013158478A RU2013158478A (ru) | 2015-07-10 |
| RU2585233C2 true RU2585233C2 (ru) | 2016-05-27 |
Family
ID=53538081
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013158478/10A RU2585233C2 (ru) | 2013-12-27 | 2013-12-27 | Промышленный способ получения компактина |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2585233C2 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998050572A1 (en) * | 1997-05-07 | 1998-11-12 | Dsm N.V. | HMG-CoA REDUCTASE INHIBITOR PREPARATION PROCESS |
| RU2235130C2 (ru) * | 1998-02-18 | 2004-08-27 | Лек Фармасьютикал Энд Кэмикал Компани Д.Д. | Способ выделения и способ очистки ингибитора hmg-coa-редуктазы |
| RU2246481C2 (ru) * | 1999-12-17 | 2005-02-20 | Рэнбакси Лабораториз Лимитед | Способ получения натриевых солей статинов |
| RU2265665C2 (ru) * | 2000-02-24 | 2005-12-10 | Тева Джиоджисзерджиар Ресзвенитаршашаг | Способ очистки ферментационного бульона |
-
2013
- 2013-12-27 RU RU2013158478/10A patent/RU2585233C2/ru not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998050572A1 (en) * | 1997-05-07 | 1998-11-12 | Dsm N.V. | HMG-CoA REDUCTASE INHIBITOR PREPARATION PROCESS |
| RU2235130C2 (ru) * | 1998-02-18 | 2004-08-27 | Лек Фармасьютикал Энд Кэмикал Компани Д.Д. | Способ выделения и способ очистки ингибитора hmg-coa-редуктазы |
| RU2246481C2 (ru) * | 1999-12-17 | 2005-02-20 | Рэнбакси Лабораториз Лимитед | Способ получения натриевых солей статинов |
| RU2265665C2 (ru) * | 2000-02-24 | 2005-12-10 | Тева Джиоджисзерджиар Ресзвенитаршашаг | Способ очистки ферментационного бульона |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MANZONI M. et al. "Production of statins by filamentous fungi", Biotechnology Letters, 1999, v.21, pp.253-257. * |
| UKRAINTSEVA S.N. et al. "Penicillium citrinum strain improvement for Compactin production by induced-mutagenesis and optimisation of obtained mutant cultivation conditions", Biotechnology Titles from Nova Science Publishers, Inc. Biotechnology and Medicine 2004, G. E. Zaikov (Editor), New York, p.69-76. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013158478A (ru) | 2015-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107353274A (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i及制备抗人食管癌药物的应用 | |
| CN108026546A (zh) | 微杆菌属菌株用于生产抗菌剂的用途 | |
| CN102936252B (zh) | 一类二倍半萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| DK145381B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et antibiotisk stof,kaldet n-acetyldehydrothienamycin,eller farmaceutisk acceptable salte deraf | |
| CN107298672A (zh) | 源于草酸青霉的黑麦酮酸i在制备抗人结肠癌药物的应用 | |
| KR850001666B1 (ko) | 마크로라이드 항생물질의 제조방법 | |
| RU2585233C2 (ru) | Промышленный способ получения компактина | |
| CH636903A5 (fr) | Antibiotiques de desoxynarasine. | |
| CN104926914A (zh) | 积雪草酸衍生物及其制备方法及其在制备降糖药物中的应用 | |
| RU2585234C2 (ru) | Способ получения компактина | |
| CN104059044B (zh) | 一种呫吨酮衍生物及其制备方法与应用 | |
| Wang et al. | Development of macrolide lactone antibiotic brefeldin A fermentation process with Eupenicillium brefeldianum ZJB082702 | |
| CN111117893A (zh) | 一种产生4-o-去甲基巴尔巴地衣酸的土曲霉菌株极其应用 | |
| WO2014115934A1 (ko) | 하이드록시 지방산의 글리세롤유도체 및 그 제조방법 | |
| JP2873894B2 (ja) | 環状デプシペプチドおよびその製造法 | |
| CN103074395B (zh) | 一种用于生产Safracin B的发酵培养基 | |
| DE4328231C1 (de) | Verfahren zur Herstellung von (L)-2-Chlorpropionsäure und deren Salzen | |
| CN102180857A (zh) | 一种xanthene衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN102491915B (zh) | 一种乌苯美司水解中间体的制备方法 | |
| CN112851610B (zh) | 一种倍半萜衍生物及其制备方法与应用 | |
| JPS6135988B2 (ru) | ||
| CN108624633B (zh) | 一种吲哚-3-甲醛的制备方法及其应用 | |
| Karpenko et al. | PRODUCTION OF ANTISTAPHYLOCOCCAL ANTIBIOTIC BATUMIN UNDER CONDITIONS OF BATCH CULTIVATION PROCESS | |
| EP0260486A1 (de) | Neue pharmakologisch wirksame Phenoxazinone, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung | |
| CN120400292A (zh) | 一种青霉素高效发酵工艺 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20150609 |
|
| FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20151021 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |