RU2580305C1 - ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica - Google Patents
ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica Download PDFInfo
- Publication number
- RU2580305C1 RU2580305C1 RU2015106731/15A RU2015106731A RU2580305C1 RU 2580305 C1 RU2580305 C1 RU 2580305C1 RU 2015106731/15 A RU2015106731/15 A RU 2015106731/15A RU 2015106731 A RU2015106731 A RU 2015106731A RU 2580305 C1 RU2580305 C1 RU 2580305C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lichen
- extract
- virus
- extracts
- dry extract
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 70
- 241001310324 Cetraria islandica Species 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 51
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims abstract description 35
- 241000252870 H3N2 subtype Species 0.000 claims abstract description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241001473385 H5N1 subtype Species 0.000 claims abstract description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 14
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 14
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 11
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 11
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 11
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 claims description 10
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 claims description 10
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000002216 flavonol derivatives Chemical class 0.000 claims description 10
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 claims description 10
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 claims description 10
- 239000001648 tannin Substances 0.000 claims description 10
- 241001310323 Cetraria Species 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 39
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 17
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 11
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 11
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 11
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 10
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 10
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 8
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 6
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- WEYVVCKOOFYHRW-GOSISDBHSA-N (-)-usnic acid Chemical class O=C([C@]12C)C(C(=O)C)=C(O)C=C1OC1=C2C(O)=C(C)C(O)=C1C(C)=O WEYVVCKOOFYHRW-GOSISDBHSA-N 0.000 description 3
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 3
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 3
- PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N oseltamivir phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 PGZUMBJQJWIWGJ-ONAKXNSWSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 229940061367 tamiflu Drugs 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000724670 Cladonia stellaris Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N Guanosine-5'-triphosphate Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XKMLYUALXHKNFT-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 240000000950 Hippophae rhamnoides Species 0.000 description 2
- 235000003145 Hippophae rhamnoides Nutrition 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N Rimantadine hydrochloride Chemical compound Cl.C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 OZBDFBJXRJWNAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000027549 TRPC Human genes 0.000 description 2
- 108060008648 TRPC Proteins 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- WEYVVCKOOFYHRW-UHFFFAOYSA-N usnic acid Chemical compound CC12C(=O)C(C(=O)C)=C(O)C=C1OC1=C2C(O)=C(C)C(O)=C1C(C)=O WEYVVCKOOFYHRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 2
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 2
- WEYVVCKOOFYHRW-SFHVURJKSA-N (+)-usnic acid Chemical compound O=C([C@@]12C)C(C(=O)C)=C(O)C=C1OC1=C2C(O)=C(C)C(O)=C1C(C)=O WEYVVCKOOFYHRW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- FIHZWZBEAXASKA-UHFFFAOYSA-N Anthron Natural products COc1cc2Cc3cc(C)cc(O)c3C(=O)c2c(O)c1C=CC(C)C FIHZWZBEAXASKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000006898 Antona Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241001117772 Elaeagnaceae Species 0.000 description 1
- 206010053172 Fatal outcomes Diseases 0.000 description 1
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 101150046652 M2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006270 Proton Pumps Human genes 0.000 description 1
- 108010083204 Proton Pumps Proteins 0.000 description 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010062106 Respiratory tract infection viral Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000219100 Rhamnaceae Species 0.000 description 1
- 208000034712 Rickettsia Infections Diseases 0.000 description 1
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 1
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 1
- 241000006302 Usnea Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 1
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940042406 direct acting antivirals neuraminidase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940052761 dopaminergic adamantane derivative Drugs 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003172 expectorant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003419 expectorant effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- -1 flavonoid compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012503 pharmacopoeial method Methods 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002911 sialidase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003390 teratogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- ICTZCAHDGHPRQR-UHFFFAOYSA-N usnic acid Natural products OC1=C(C)C(O)=C(C(C)=O)C2=C1C1(C)C(O)=C(C(=O)C)C(=O)C=C1O2 ICTZCAHDGHPRQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229940100050 virazole Drugs 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/09—Lichens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противовирусному средству на основе экстракта лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. (Цетрарии исландской). Противовирусное средство на основе экстракта лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. (Цетрарии исландской), которое содержит сухой экстракт указанного лишайника, приготовленный методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья или приготовленный методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, водные растворы которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл при водном извлечении и в концентрации не менее 0,01 мг/мл при этанольном извлечении обладают противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1. Вышеописанное средство обладает эффективной противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1. 2 з.п. ф-лы, 9 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к области фармацевтики, химической технологии, вирусологии, медицины и ветеринарии. Изобретение касается средства, полученного на основе сухого экстракта лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. (Цетрарии исландской), с противовирусной активностью в отношении вируса гриппа.
Грипп - острое инфекционное заболевание дыхательных путей, вызываемое вирусом гриппа. Входит в группу острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Периодически распространяется в виде эпидемий и пандемий. В настоящее время выявлено более 2000 вариантов вируса гриппа, различающихся между собой антигенным спектром [http://www.nih.gov/researchmatters/october2009/10052009india.htm]. По оценкам ВОЗ от всех вариантов вируса во время сезонных эпидемий в мире ежегодно умирают от 250 до 500 тыс. человек (большинство из них старше 65 лет), в некоторые годы число смертей может достигать миллиона [http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs211/en/].
В настоящее время не существует достаточно эффективных средств предотвращения эпидемий и пандемий гриппа. Борьба с гриппозной инфекцией основывается на вакцинопрофилактике и на лечении с комплексным применением этиотропных, патогенетических и симптоматических средств [Ершов Ф.И., Романцев М.Г. Лекарственные средства, применяемые при вирусных заболеваниях. - М., 2007, 368]. Среди препаратов этиотропного действия известны два класса: ингибиторы М2-каналов (производные адамантана) и ингибиторы нейраминидазы (озельтамивир и занамивир). Препараты этиотропного действия первого класса (амантадин и ремантадин) блокируют протонные насосы и предотвращают проникновение вируса в клетки [Stephenson, I; Nicholson K (1999). «Chemotherapeutic control of infiuenza». J Antimicrob Chemother 44 (1): 6-10. PMID 10459804], однако они часто являются малоэффективными в отношении штаммов вируса гриппа птиц и совсем не эффективными в отношении вируса гриппа В, что связано с возникновением мутаций в гене М2 белка, приводящих к появлению резистентности вируса гриппа к ремантадину [Watts J. Asian nations step up action to curb spread of avian influenza. Lancet. 2004, 363, 9406: 373, 430, 6996: 209-213]. Препараты второго класса (озельтамивир и занамивир) эффективны в отношении вирусов гриппа А и В, они подавляют распространение вируса в организме, снижают тяжесть симптомов, сокращают продолжительность заболевания и уменьшают частоту вторичных осложнений, однако имеются данные о том, что названные лекарственные средства вызывают ряд побочных действий, таких как тошнота, рвота, диарея, а также психические расстройства: нарушение сознания, галлюцинации, психозы [http://www.medicalnewstoday.com/articles/89734.php]. Кроме того, имеются данные о появлении устойчивости многих штаммов вируса гриппа к озельтамивиру [WHO Rapid Advice Guidelines on pharmacological management of humans infected with avian influenza A (H5N1) virus, WHO., 2006].
Отдельную группу для профилактики и лечения гриппа представляют препараты интерферона, обладающего противовирусным, противовоспалительным и иммуномодулирующим действием.
Еще одним препаратом, используемым иногда при терапии гриппа, является рибавирин. Последний в комбинации с интерфероном применяется при лечении гриппа на ранних стадиях инфекции. Являясь аналогом нуклеозидов, рибавирин эффективен в субтоксических концентрациях, и системное его применение вызывает побочные реакции, в частности анемию и тератогенный эффект при употреблении во время беременности. Тем не менее рибавирин использовался внутривенно при терапии тяжелых случаев заболевания человека гриппом птиц субтипа H5N1. После применения рибавирина были отмечены случаи полного выздоровления пациентов. Рибавирин является препаратом комплексного механизма действия. Он влияет на репликацию вируса гриппа двумя путями - прямо, вмешиваясь в полимеразные процессы при репликации и транскрипции вирусного генома, и опосредованно - угнетая фермент клетки инозинмонофосфатдегидрогеназу и истощая тем самым клеточный пул гуанозинтрифосфата (ГТФ), являющегося субстратом, необходимым для построения вирусных РНК. Поскольку основная мишень препарата не вирусный, а клеточный фермент, то устойчивые к рибавирину штаммы вируса гриппа отмечаются крайне редко или не обнаруживаются вообще. В то же время невысокая активность и существенные побочные эффекты позволяют рекомендовать его только при тяжелых состояниях больных гриппом (De Clercq Е. // Nat Rev Dmg Discov. 2006; 5:1015-25; Beigel J, Bray M. // Antiviral Research 2008; 78:91-102).
В связи с вышеизложенным поиск новых эффективных в отношении гриппозной инфекции лекарственных веществ является одной из приоритетных задач здравоохранения.
Предшествующий уровень техники
Известно отечественное противовирусное средство гипорамин (Hiporhaminum), получаемое из листьев облепихи крушиновидной - Hippophae rhamnoides L. семейства Лоховые - Elaeagnaceae, представляющее собой сухой очищенный стандартизованный экстракт на основе полифенольного комплекса галлоэллаготаннинов (Вичканова С.А. Изучение листьев облепихи и создание на их основе отечественного противовирусного средства «Гипорамин» // В книге: «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». V Междунар. съезд. Матер. съезда. - С. - П. - 2001. - С. 198-204). Гипорамин обладает выраженной противовирусной активностью в отношении различных штаммов вируса гриппа человека. В основе механизма действия гипорамина лежит ингибирующий эффект на вирусную нейраминидазу. Однако для гипарамина в литературе не описана противовирусная активность в отношении пандемических штаммов вируса гриппа человека субтипа H1N1, а также в отношении высокопатогенных штаммов вируса гриппа птиц субтипа H5N1 с пандемическим потенциалом, способных инфицировать людей и вызывать тяжелые заболевания с летальным исходом.
Известен ингибитор репродукции пандемического вируса гриппа человека (штамм A/California/07/09 (H1N1)v), представляющий собой (R)-усниновую кислоту и окисленное производное (S)-усниновой кислоты (Соколов Д.Н., Лузина О.А., Половинка М.П., Салахутдинов Н.Ф., Киселев О.И., Зарубаев В.В., Штро А.А. Усниновая кислота и ее окисленное производное в качестве ингибиторов репродукции вируса гриппа // Патент РФ №2464033. Бюл. №29 от 20.10.2012). (R)-Усниновую кислоту выделяли из лишайника Cladonia stellaris, а окисленное производное (S)-усниновую кислоту из смеси лишайников рода Usnea. Исследования биологической активности этих соединений, проведенные в отношении пандемического вируса гриппа человека (штамм A/California/07/09 (H1N1)v), показали их высокую эффективность как ингибиторов репродукции этого вируса. Полученные количественные показатели ингибирования подтверждают высокую степень подавления репликации вируса гриппа A/California/07/09 (H1N1)v в культуре клеток MDCK данными соединениями, превышающую, например, тот же показатель у эталона сравнения - рибавирина в 2-3 раза.
Однако для (R)-Усниновой кислоты из лишайника Cladonia stellaris, а также для окисленного производного (S)-усниновой кислоты не показана противовирусная активность в отношении штаммов вируса гриппа других подтипов, включая высокопатогенные штаммы вируса гриппа птиц субтипа H5N1 с пандемическим потенциалом, способные инфицировать людей и вызывать у них тяжелые заболевания с летальным исходом.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является средство для лечения и профилактики острых респираторных вирусных и бактериальных заболеваний, (патент РФ №2412718, МПК A61K 39/09, опубл. 27.02.2011 г.), характеризующееся тем, что оно содержит 10-70% сахарный сироп слоевища лишайника цетрарии исландской (Cetraria islandica (L.) Ach.) или смесь слоевища лишайника цетрарии исландской (Cetraria islandica (L.) Ach.) с лекарственным растением, обладающим отхаркивающим, противовоспалительным, бактерицидным, противовирусным и общеукрепляющим действием при массовом соотношении слоевища лишайника цетрарии исландской и лекарственного растения 1:10 и консервант в количестве 0,2 мас.%, при этом плотность сиропа составляет 1,22-1,30 г/см3 и массовая доля полисахаридов не менее 0,8%. Противовирусную активность в опытах in vitro оценивали в отношении следующих вирусов: грипп A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), грипп А/Чита/3/03 (H3N2), грипп A/Duck/Singapore/R/F 119-3/97 (H5N2), грипп B/Victoria/35/72, аденовирус человека 5 типа (Ad5), вирус парагриппа человека 3 типа (ПГ3). В качестве препаратов сравнения использовали Ремантадин для вируса гриппа и Виразол для аденовируса и вируса парагриппа. Однако в прототипе отсутствуют данные об активности средства на основе лишайника Цетрарии исландской (Cetraria islandica (L.) Ach.) против вируса гриппа A/H5N1.
Техническим результатом изобретения является расширение спектра противовирусной активности средства на основе сухого экстракта лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. (Цетрарии исландской) в отношении вируса гриппа субтипов AH3N2 и A/H5N1. Технический результат достигается тем, что средство на основе экстракта лишайника Cetraria islandica, согласно изобретению содержит сухой экстракт указанного лишайника, приготовленный методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
| полисахариды | 35,7-43,7 мг/г |
| суммарные белки | 3,7-4,5 мг/г |
| катехины | 1,0-1,2 мг/г |
| флавонолы | 32,0-39,0 мг/г |
| танины | 63,0-77,0 мг/г |
| сапонины | 62,0-76,0 мг/г |
или приготовленный методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
| полисахариды | 118,0-144,2 мг/г |
| суммарные белки | 10,3-12,5 мг/г |
| катехины | 0,6-0,8 мг/г |
| флавонолы | 5,9-7,3 мг/г |
| танины | 25,0-28,0 мг/г |
| сапонины | 507,0-620,0 мг/г |
водные растворы которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл при водном извлечении и в концентрации не менее 0,01 мг/мл при этанольном извлечении обладают противовирусной активностью в отношении вируса гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1. Средство может быть приготовлено методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
| полисахариды | 39,7 мг/г |
| суммарные белки | 4,1 мг/г |
| катехины | 1,1 мг/г |
| флавонолы | 35,7 мг/г |
| танины | 70,0 мг/г |
| сапонины | 69,3 мг/г |
водный раствор которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл обладает активностью против вируса гриппа.
Средство может быть приготовлено методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
| полисахариды | 131,1 мг/г |
| суммарные белки | 11,4 мг/г |
| катехины | 0,7 мг/г |
| флавонолы | 6,6 мг/г |
| танины | 25,0 мг/г |
| сапонины | 563,3 мг/г |
водный раствор которого в концентрации не менее 0,01 мг/мл обладает активностью против вируса гриппа.
Таким образом, по сравнению с прототипом разработано новое противовирусное средство для ингибирования репродукции вируса гриппа субтипов H3N2 и H5N1 в зависимости от способа извлечения экстрактивных веществ из сухого вещества лишайника Cetraria islandica (L.) Ach., а также от содержания экстрактивных веществ в сухих экстрактах и от их суммарной концентрации в водных растворах экстрактов.
Ниже приведены примеры 1-2 получения экстрактивных веществ из лишайника Cetraria islandica (L.) Ach.
Пример 1. Получение сухого экстракта из лишайника методом высушивания водного извлечения из измельченного и гомогенизированного сырья
10 г измельченного и гомогенизированного сухого сырья лишайника суспендировали в 600 мл стерильной дистиллированной воды в течение 1 часа при периодическом помешивании при температуре (95-100°С). При этих условиях оптимальной продолжительностью процесса максимального извлечения таких классов БАВ, как полисахариды и белки, был период 1 ч, так как увеличение продолжительности процесса свыше 1 ч не приводило к статистически достоверному увеличению содержания данных БАВ в водных извлечениях экстрактивных веществ по сравнению с таковым при проведении процесса извлечения в течение 1 ч, а только удлиняло технологический процесс (табл. 1).
Затем надосадочную жидкость отделяли фильтрованием, а осадок повторно обрабатывали 400 мл воды в течение 1 часа при температуре 95-100°С, далее экстракты объединяли, выпаривали на ротационном испарителе и высушивали при температуре 60°С в сушильном шкафу.
Пример 2. Получение сухого экстракта из лишайника методом высушивания этанольного извлечения из измельченного и гомогенизированного сырья
10 г измельченного и гомогенизированного сухого сырья лишайника суспендировали в 200 мл 70%-ного водного раствора этанола трехкратно в течение 8 часов общего времени экстрагирования при температуре 60°С. При этих условиях оптимальной продолжительностью общего процесса максимального извлечения полисахаридов и белков был период 8 ч, так как увеличение продолжительности процесса до 96 ч не приводило к статистически достоверному увеличению содержания данных классов БАВ в этанольных извлечениях экстрактивных веществ по сравнению с таковым при проведении общего процесса извлечения в течение 8 ч, а только удлиняло технологический процесс (табл. 2).
Затем объединенные охлажденные экстракты фильтровали через стеклянные фильтры, выпаривали на ротационном испарителе и высушивали при температуре 60°С в сушильном шкафу.
Пример 3. Определение характеристик водного и этанольного извлечений
Для качественного обнаружения флавоноидных соединений в экстрактах лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. применяли качественные реакции с раствором натрия гидроксида, алюминия хлорида, железа хлорида, а также метод тонкослойной хроматографии (ТСХ).
Обнаружение содержания катехинов в экстрактах проводили спектрофотометрическим методом, основанном на способности давать малиновое окрашивание с 1%-ным раствором ванилина в концентрированной соляной кислоте. Плотность раствора замеряли при 504 нм. Пересчетный коэффициент рассчитан по d-катехину.
Флавонолы определяли спектрофотометрическим методом по Беликову. Количество их рассчитывали по графику, построенному по рутину.
Содержание танинов определяли титрометрически по Левенталю.
Сапонины осаждали из упаренного спиртового экстракта семикратным объемом ацетона.
Количественное содержание белка в образцах определяли по Бредфорду по фармакопейной методике.
Суммарное содержание полисахаридов определяли спектрофотометрически модифицированным антроновым методом Дрейвуда, включающим кислотный гидролиз полисахаридов серной кислотой с получением моносахаридов, образующих с антроном окрашенные комплексы сине-зеленого цвета с максимумом спектра поглощения при 520-625 нм. При разбавлении реакционной смеси этиловым спиртом максимум спектра поглощения смещается до 430 нм. Определение содержания полисахаридов проводили в пересчете на глюкозу, используя предварительно построенный калибровочный график зависимости величины оптической плотности глюкозы (λ=430 нм) от концентрации.
Результаты определения химических характеристик водного и этанольного извлечений из лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. приведены в таблице 3.
Как видно из таблицы 3, сухой экстракт лишайника, приготовленный методом высушивания этанольного извлечения из измельченного и гомогенизированного сырья, по сравнению с сухим экстрактом, полученным методом высушивания водного извлечения из измельченного и гомогенизированного сырья, содержит сахаров больше в 33 раза, белков больше в 2,8 раза, сапонинов больше в 8,2 раза, в то время как катехинов меньше в 1,6 раза, флавонолов меньше в 5,4 раза и танинов меньше в 2,6 раза.
Пример 4. Определение вирулицидной активности экстрактов лишайника Cetraria islandica
Вирулицидную активность экстрактов лишайника исследовали после экспозиции их с вируссодержащим материалом при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем титровали инфекционную активность вируса гриппа в каждом варианте опыта в культуре клеток MDCK. Экстракт характеризовался вирулицидной активностью в случае снижения инфекционного титра вируса гриппа для клеток MDCK после экспозиции в 100 раз и более.
Как видно из таблицы 4, водный и этанольный экстракты Cetraria islandica обладают выраженными вирулицидными свойствами в отношении вируса гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) (снижение инфекционной активности под действием экстрактов происходит на 7,0 lg и более).
При этом наибольшей способностью инактивировать инфекционные свойства вируса гриппа субтипа H5N1 обладает этанольный экстракт, который снижает инфекционную активность данного вируса на 9,5 lg.
В отношении вируса гриппа человека субтипа H3N2 ни один из исследованных экстрактов вирулицидными свойствами не обладает (табл. 4).
Пример 5. Определение противовирусной активности экстрактов лишайника Cetraria islandica в культуре клеток MDCK
Культура клеток. Для тестирования противовирусной активности экстрактов использовали перевиваемую культуру клеток MDCK, полученную из коллекции культур клеток ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». По 100 мкл суспензии клеток MDCK в среде RPMI-1640, содержащей 10% сыворотки крови плодов коровы, вносили в 96-луночные планшеты. Планшеты с клетками помещали в термостат при температуре +37°С, 5% CO2 и 100% влажности на 2-3 сут до образования клеточного монослоя.
Определение токсичности экстрактов. Для определения токсических концентраций образцы экстрактов разводили в несколько раз и оценивали наличие токсического действия в монослое культуры клеток MDCK с помощью инвертированного микроскопа. Для этого образцы экстрактов растворяли в среде RPMI-1640, содержащей 5% сыворотки крови плодов коровы, делали разведения образцов в 5 раз, в 10, 100, 1000, 10000, 100000, 1000000 раз средой, вносили по 100 мкл в соответствующие лунки планшета и ставили в термостат при температуре +37°С, 5% CO2 и 100% влажности на 2 сут. Через 2 сут с помощью инвертированного микроскопа оценивали наличие токсического действия в монослое клеток MDCK, инкубированных с разными концентрациями экстрактов лишайника. В опытах по определению противовирусной активности экстрактов на культуре клеток MDCK использовали предварительно определенные их максимально переносимые концентрации (МПК) для этой клеточной культуры.
Определение противовирусной активности экстрактов в отношении вируса гриппа. В работе использовали штамм вируса гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и штамм вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2), полученные из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» (п.Кольцове, Новосибирская обл.).
Наработку вируса гриппа производили на 10-суточных куриных эмбрионах (КЭ), титрование вируса гриппа проводили на культуре клеток MDCK. Концентрация разных субтипов вируса гриппа в вирусаллантоисной жидкости (ВАЖ) составляла от 5,5 до 9,5 lg ТЦД50/мл (десятичных логарифмов 50% тканевых цитопатических доз в мл). В опытах по определению противовирусной активности экстрактов лишайника в отношении вируса гриппа готовили разведения ВАЖ каждого вируса от 1 до 8 с десятикратным шагом с использованием поддерживающей среды RPMI-1640 (ООО «Биолот», Россия), содержащей 2 мкг/мл трипсина ТРСК (Sigma, США).
Для определения противовирусной активности образцов в монослой культуры клеток MDCK вносили по 50 мкл выбранного разведения экстракта на поддерживающей среде RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина, и инкубировали в течение 1 часа при 37°С в атмосфере 5% CO2 в термостате ТС-1/80 СПУ (Россия). Затем в лунки с препаратом добавляли по 50 мкл разведенной поддерживающей средой от 10-1 до 10-8 вирусаллантоисной жидкости (ВАЖ). Клетки инкубировали 2 сут при температуре 37°С в атмосфере 5% CO2. Через 2 сут в каждой лунке с помощью инвертированного микроскопа регистрировали цитопатическое действие (ЦПД) в монослое клеток и определяли наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглютинации (РГА) с 1%-ной суспензией эритроцитов кур. За титр вируса в контроле и опыте принимали величину, обратную десятичному логарифму наибольшего разведения исходного вируса, способного вызвать положительную реакцию гемагглютинации в лунке, и выражали в количестве 50% инфекционных доз (ИД50). Титры вируса определяли в lg ТЦД50/мл в контроле (50%-ная инфицирующая доза - ИД50 in vitro без препарата) и в опыте (ИД50 in vitro с препаратом). Вирусингибирующее действие исследуемых экстрактов оценивали по снижению титра вируса в опыте по сравнению с контролем, для этого высчитывали индекс нейтрализации (ИН) вирусов под влиянием экстракта: ИН=ИД50контроль-ИД50 опыт (lg).
На основании полученных данных рассчитывали 50% ингибирующую дозу IC50, т.е. концентрацию экстракта, снижающую уровень вирусной репликации вдвое (на 0,3 lg ИД50), и индекс селективности или химиотерапевтический индекс (SI), представляющий собой отношение ТС50 к IC50.
В качестве контроля использовали:
1. Контроль клеток MDCK, культивируемых в питательной среде RPMI-1640 (ООО «Биолот», С-Петербург), содержащей 2 мкг/мл трипсина ТРСК (Sigma, США).
2. Контроль репродукции штаммов вируса гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68 (H3N2) с 1 до 8 разведения с десятикратным шагом без внесения экстрактов.
В процессе исследования ингибирования репродукции вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2) и вируса гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) экстрактами лишайника и эталонами сравнения (римантадином, тамифлю и рибавирином) по профилактической схеме в монослое клеток MDCK были получены результаты, представленные в таблицах 5 и 6.
Как видно из таблицы 5, экстракт, полученный из водного извлечения лишайника, проявил незначительный противовирусный эффект в отношении используемых в эксперименте штаммов вируса гриппа субтипов H3N2 и H5N1.
Индексы нейтрализации для штаммов вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2) и A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) под действием экстракта, полученного из водного извлечения Цетрарии исландской, в концентрации 1,0 мг/мл составили 1,0 и 1,5 lg соответственно. Экстракт, полученный из этанольного извлечения лишайника Cetraria islandica, проявивший по сравнению с экстрактом из водного извлечения лишайника более выраженный противогриппозный эффект (ИН в отношении субтипов H3N2 и H5N1 вируса гриппа составили 2,0 и 2,5 соответственно), содержал 11,4 мг/г суммарных белков и 131,1 мг/г суммарных сахаров (табл. 3). Более значительная противовирусная активность экстракта из этанольного извлечения лишайника по сравнению с таковым из водного извлечения может быть связана с большим содержанием суммарных белков (в 2,8 раза), сахаров (в 33 раза) и сапонинов (в 8,2 раза).
Интересно было сравнить в экспериментах in vitro противовирусную активность экстрактов и коммерческих противогриппозных препаратов: тамифлю, римантадина и рибавирина, в отношении этих штаммов вируса гриппа. Как видно из табл. 5, рибавирин и этанольный экстракт лишайника проявили сравнимую противовирусную активность в отношении обоих штаммов вируса гриппа, римантадин обнаружил противовирусную активность, сравнимую с этанольным экстрактом лишайника, только в отношении вируса гриппа человека, и, наконец, тамифлю оказывал незначительное противовирусное действие на данные вирусы. Полученные результаты объясняются механизмами действия коммерческих препаратов против гриппа и согласуются с литературными данными [Stephenson, I; Nicholson K (1999). «Chemotherapeutic control of influenza». J Antimicrob Chemother 44 (1): 6-10. PMID 10459804; Watts J. Asian nations step up action to curb spread of avian influenza. Lancet. 2004, 363, 9406: 373]., 430, 6996: 209-213; WHO Rapid Advice Guidelines on pharmacological management of humans infected with avian influenza A (H5N1) virus, WHO., 2006; De Clercq E. // Nat Rev Dmg Discov. 2006; 5:1015-25; Beigel J, Bray M. // Antiviral Research 2008; 78:91-102].
На основании полученных данных были рассчитаны среднетоксические (ТС50) и среднеэффективные вирусингибирующие (1С50) концентрации экстрактов лишайника Cetraria islandica и коммерческих противогриппозных препаратов в отношении используемых штаммов вируса гриппа, снижающие уровень вирусной репликации вдвое (на 0,3 lg ИД50), и индексы селективности или химиотерапевтические индексы (SI), представляющие собой отношение ТС50 к IC50 (табл. 6).
Представленные в таблице 6 результаты показывают, что водный и этанольный экстракты подавляют размножение вируса гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) в культуре клеток MDCK, при этом среднеэффективные ингибирующие концентрации составляют 15,0 и 3,5 мкг/мл, а индексы селективности 50 и 128,5 соответственно, что говорит о низкой токсичности этих экстрактов для эукариотических клеток.
Оценка противовирусной активности экстрактов, представленных в таблице 6, по отношению к вирусу гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2) показала, что значения IC50 для водного и этанольного экстрактов были выше по сравнению со значениями данного показателя для препаратов в отношении вируса гриппа птиц H5N1 и составляли 130,0 и 13,0 мкг/мл соответственно, при этом индексы селективности составляли 5,8 и 34,6 соответственно.
Таким образом, получены водные и этанольные экстракты лишайника, обладающие низкой токсичностью и выраженной противовирусной активностью в культуре клеток MDCK. Данные растительные экстракты способны ингибировать репликацию вирусов гриппа A/H3N2 и A/H5N1 в концентрациях от нескольких микрограмм до нескольких десятков микрограмм в миллилитре.
Экстракты, внесенные за 24 ч до инфицирования клеток MDCK вирусом гриппа, защищали клетки от патогенного действия вируса (табл. 7). Наибольшим противовирусным эффектом в этих условиях обладал этанольный экстракт, который защищал 41,2 и 55,6% клеток от патогенного воздействия вируса гриппа субтипов H5N1 и H3N2 соответственно при 100% гибели клеток в контроле (без внесения экстрактов). Меньшей противовирусной активностью характеризовался водный экстракт (табл. 7).
При внесении экстрактов лишайника в момент инфицирования клеток вирусом гриппа также наблюдали их противовирусную активность. В этом случае также больший противовирусный эффект отмечен для этанольного экстракта: этот экстракт защищал 44,5 и 75,8% клеток MDCK от вирусиндуцированной гибели, обусловленной вирусами гриппа A/Aichi/2/68 и A/chicken/Kurgan/05/2005 соответственно при 100% гибели клеток в контроле (без внесения экстрактов) (табл. 7).
В дальнейшем представлялось интересным выяснить, в какой мере сохраняется способность у инфицированных и обработанных экстрактами Cetraria islandica клеток MDCK продуцировать инфекционный вирус. Полученные данные свидетельствуют о том, что в пробах культуральной среды, отобранных через 48 ч после инфицирования культур клеток, обработанных экстрактами лишайника, наблюдали существенное снижение инфекционного вируса по сравнению с концентрацией вируса в пробах из необработанных клеточных культур (табл. 8 и 9).
При этом наиболее выраженными противовирусными свойствами в отношении вируса гриппа A/Aichi/2/68 обладал этанольный экстракт, который в концентрации 50 мкг/мл подавлял на 3,5 lg способность клеток продуцировать инфекционный вирус в течение 48 ч после заражения, в то время как в отношении вируса гриппа A/chicken/Kurgan/05/2005 большую противовирусную активность обнаружил водный экстракт, который в концентрации 500 мкг/мл подавлял на 6,0 lg способность клеток продуцировать инфекционный вирус (табл. 8 и 9).
Для изучения механизма действия экстрактов Cetraria islandica на гриппозную инфекцию были проведены опыты по исследованию зависимости противовирусного эффекта экстрактов от времени их введения: за 24 и 1 ч до и через 1, 3, 6 и 24 ч после заражения клеток MDCK вирусом. Этанольный экстракт ингибировал инфекцию, вызванную вирусом гриппа птиц A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1), на стадии адсорбции вируса и в период от 0 до 6 ч после инфекции, в то время как водный экстракт ингибирующее действие оказывал также на стадии адсорбции вируса и в течение только раннего периода его репликации (от 0 до 1 ч после инфекции). В отношении вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2) оба экстракта ингибировали инфекцию на стадии адсорбции вируса и в период от 5 до 6 ч после инфекции. Таким образом, водный и этанольный экстракты лишайника Cetraria islandica имеют высокую биологическую активность, которая проявляется в том, что они эффективно ингибируют репликацию вируса гриппа в культуре клеток MDCK, и могут использоваться в качестве основы для новых высокоэффективных противовирусных препаратов для профилактики и лечения гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
Claims (3)
1. Противовирусное средство на основе экстракта лишайника Cetraria islandica (L.) Ach. (Цетрарии исландской), характеризующееся тем, что оно содержит сухой экстракт указанного лишайника, приготовленный методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
полисахариды 35,7-43,7 мг/г
суммарные белки 3,7-4,5 мг/г
катехины 1,0-1,2 мг/г
флавонолы 32,0-39,0 мг/г
танины 63,0-77,0 мг/г
сапонины 62,0-76,0 мг/г
или приготовленный методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
полисахариды 118,0-144,2 мг/г
суммарные белки 10,3-12,5 мг/г
катехины 0,6-0,8 мг/г
флавонолы 5,9-7,3 мг/г
танины 25,0-28,0 мг/г
сапонины 507,0-620,0 мг/г
водные растворы которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл при водном извлечении и в концентрации не менее 0,01 мг/мл при этанольном извлечении обладают противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
или приготовленный методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья, при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
водные растворы которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл при водном извлечении и в концентрации не менее 0,01 мг/мл при этанольном извлечении обладают противовирусной активностью в отношении вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно приготовлено методом высушивания водного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
полисахариды 39,7 мг/г
суммарные белки 4,1 мг/г
катехины 1,1 мг/г
флавонолы 35,7 мг/г
танины 70,0 мг/г
сапонины 69,3 мг/г
водный раствор которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл обладает активностью против вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
водный раствор которого в концентрации не менее 0,1 мг/мл обладает активностью против вирусов гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
3. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно приготовлено методом высушивания этанольного извлечения биологически активных веществ из измельченного и гомогенизированного сырья при следующем содержании компонентов в сухом экстракте:
полисахариды 131,1 мг/г
суммарные белки 11,4 мг/г
катехины 0,7 мг/г
флавонолы 6,6 мг/г
танины 25,0 мг/г
сапонины 563,3 мг/г
водный раствор которого в концентрации не менее 0,01 мг/мл обладает активностью против вируса гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
водный раствор которого в концентрации не менее 0,01 мг/мл обладает активностью против вируса гриппа субтипов A/H3N2 и A/H5N1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015106731/15A RU2580305C1 (ru) | 2015-02-26 | 2015-02-26 | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015106731/15A RU2580305C1 (ru) | 2015-02-26 | 2015-02-26 | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2580305C1 true RU2580305C1 (ru) | 2016-04-10 |
Family
ID=55794010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015106731/15A RU2580305C1 (ru) | 2015-02-26 | 2015-02-26 | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2580305C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018112666A1 (en) * | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Klox Technologies Inc. | Biophotonic compositions comprising lichen extract and their use to treat skin disorders |
| GB2637232A (en) * | 2024-01-11 | 2025-07-16 | Bios Therapy Physiological Systems For Health S P A | A natural matrix mixture for the treatment of bone fragility |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040010390A (ko) * | 2002-07-26 | 2004-01-31 | 가부시끼가이샤 롯데 | 항인플루엔자 바이러스제 및 그것을 포함하는 조성물과음식물 |
| RU2412718C1 (ru) * | 2009-10-21 | 2011-02-27 | Открытое Акционерное Общество Завод Экологической Техники И Экопитания "Диод" | Средство для лечения и профилактики острых респираторных вирусных и бактериальных заболеваний и способ его получения |
-
2015
- 2015-02-26 RU RU2015106731/15A patent/RU2580305C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20040010390A (ko) * | 2002-07-26 | 2004-01-31 | 가부시끼가이샤 롯데 | 항인플루엔자 바이러스제 및 그것을 포함하는 조성물과음식물 |
| RU2412718C1 (ru) * | 2009-10-21 | 2011-02-27 | Открытое Акционерное Общество Завод Экологической Техники И Экопитания "Диод" | Средство для лечения и профилактики острых респираторных вирусных и бактериальных заболеваний и способ его получения |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PENGSUPARP T. et all.Mechanistic evaluation of new plant-derived compounds that inhibit HIV-1 reverse transcriptase //J. Nat. Prod. 1995 Jul, 58(7): 1024-31. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018112666A1 (en) * | 2016-12-23 | 2018-06-28 | Klox Technologies Inc. | Biophotonic compositions comprising lichen extract and their use to treat skin disorders |
| GB2637232A (en) * | 2024-01-11 | 2025-07-16 | Bios Therapy Physiological Systems For Health S P A | A natural matrix mixture for the treatment of bone fragility |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hayashi et al. | Inhibitory effect of cinnamaldehyde, derived from Cinnamomi cortex, on the growth of influenza A/PR/8 virus in vitro and in vivo | |
| EP3579833B1 (en) | Methods of treating influenza | |
| Park et al. | Aronia melanocarpa and its components demonstrate antiviral activity against influenza viruses | |
| Serkedjieva et al. | In vitro anti-influenza virus activity of a plant preparation from Geranium sanguineum L. | |
| WO2022228651A1 (en) | Pyruvate esters for the treatment of viral diseases | |
| EP1567137B1 (en) | Use of resveratrol for the preparation of a medicament useful for the treatment of influenza virus infections | |
| RU2580305C1 (ru) | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИШАЙНИКА Cetraria islandica | |
| TW201442719A (zh) | 魚針草萃取物及其純化物抗流感病毒之用途 | |
| RU2568849C1 (ru) | Средство, представляющее собой амид глицирризиновой кислоты с 5-аминоурацилом, проявляющее противовирусную активность в отношении вируса гриппа a/h1n1 | |
| Kwon et al. | Antiviral activity of soybean GL 2626/96 (Glycine max) ethanolic extract against influenza A virus in vitro and in vivo | |
| Yang et al. | Exploration of the mechanisms of Callicarpa nudiflora Hook. et Arn against influenza A virus (H1N1) infection | |
| Makarevich et al. | Anti-influenza activity of Cetraria islandica lichen extracts in in vitro experiments | |
| RU2283126C1 (ru) | Средство для профилактики и лечения вирусного гриппа птиц | |
| RU2580304C1 (ru) | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ ИЗ Alchemilla vulgaris L. | |
| JP5173813B2 (ja) | インフルエンザの予防および処置のための薬剤 | |
| CN101262873B (zh) | 灰白岩蔷薇提取物用于制备预防和/或治疗流感的药物的应用 | |
| Yang et al. | Antiviral-effect of nitrogen-containing compounds isolated from Sarcodon imbricatus on influenza A virus through regulation of ZBP-1 mediated necroptosis | |
| RU2584751C1 (ru) | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ПЛОДОВОГО ТЕЛА БАЗИДИОМИЦЕТА Coprinus comatus | |
| RU2753609C1 (ru) | Противовирусное гуминовое средство | |
| Altaf et al. | An in vitro assessment of anti-SARS-CoV-2 activity of oral preparations of iodine complexes (RENESSANS) | |
| RU2580296C1 (ru) | ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО НА ОСНОВЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ПЛОДОВОГО ТЕЛА КСИЛОТРОФНОГО БАЗИДИОМИЦЕТА Bjerkandera adusta | |
| RU2553627C2 (ru) | Средства на основе медь (ii) содержащего комплексного соединения дигидрокверцетина, обладающее противовирусной активностью | |
| TWI599366B (zh) | 含地榆之抗流感病毒醫藥組合物 | |
| Juranic et al. | Jang-Gi Choi, Young-Hee Jin, Heeeun Lee, Tae Woo Oh, Nam-Hui Yim, Won-Kyung Cho* and Jin Yeul Ma | |
| WO2011036883A1 (ja) | 抗インフルエンザウイルス剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200227 |