RU2577719C1 - Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности - Google Patents
Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2577719C1 RU2577719C1 RU2014152089/15A RU2014152089A RU2577719C1 RU 2577719 C1 RU2577719 C1 RU 2577719C1 RU 2014152089/15 A RU2014152089/15 A RU 2014152089/15A RU 2014152089 A RU2014152089 A RU 2014152089A RU 2577719 C1 RU2577719 C1 RU 2577719C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mmlnp
- pvp
- lysis
- lytic activity
- atherosclerosis
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 claims abstract description 39
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 abstract 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 37
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 15
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 14
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 11
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 108010071584 oxidized low density lipoprotein Proteins 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 4
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 206010048554 Endothelial dysfunction Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000008694 endothelial dysfunction Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 3
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 2
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 2
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 2
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 2
- 102000053028 CD36 Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 101100216294 Danio rerio apoeb gene Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000006447 Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 2
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N probucol Chemical compound C=1C(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=CC=1SC(C)(C)SC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003912 probucol Drugs 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004679 31P NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101710095342 Apolipoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 102100040202 Apolipoprotein B-100 Human genes 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101001051093 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 102100035792 Kininogen-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000004722 NADPH Oxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010002998 NADPH Oxidases Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 1
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102100031950 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Human genes 0.000 description 1
- 101710164073 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Proteins 0.000 description 1
- 102000005473 Secretory Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010031873 Secretory Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- LVXVIPZBNJSUKL-NJAPINKUSA-N [(6ar,9r,10as)-10a-methoxy-4,7-dimethyl-6a,8,9,10-tetrahydro-6h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-yl]methanol Chemical compound C1=CC([C@]2(OC)[C@H](N(C)C[C@H](CO)C2)C2)=C3C2=CN(C)C3=C1 LVXVIPZBNJSUKL-NJAPINKUSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011861 anti-inflammatory therapy Methods 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000003090 exacerbative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000497 foam cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 108091005485 macrophage scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003906 phosphoinositides Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002277 temperature effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 108010017342 very high density lipoproteins Proteins 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к клинической биохимии и представляет собой способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) путем обработки сыворотки крови 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка: ПВП (1:0,84), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП, добавляют аутологичные отмытые стандартизованные эритроциты человека, инкубируют в течение 48 часов при комнатной температуре, измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 620 нм, по калибровочному графику определяют степень лизиса и при лизисе более 10% констатируют повышенную литическую активность ммЛНП. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов определения литической активности ммЛНП. 4 пр., 4 табл., 1 ил.
Description
Изобретение относится к клинической биохимии, кардиологии, неврологии и может быть использовано для определения литической активности (атерогенности) множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) как для прогноза течения атеросклеротического процесса в организме человека, так и для разработки препаратов, уменьшающих патогенность ммЛНП и предупреждающих развитие эндотелиальной дисфункции на ранних стадиях атеросклероза.
Атеросклероз является сложным, периодически обостряющимся хроническим воспалительным процессом повреждения сосудов, развивающимся на фоне нарушений холестеринового обмена, который приводит к структурной модификации сосудистого эндотелия и разрастанию соединительной ткани, обуславливая формирование атеросклеротической бляшки. Атеросклероз и его осложнения - ишемическая болезнь сердца, инсульт, поражение сосудов нижних конечностей продолжают оставаться наиболее частой причиной инвалидизации и смертности населения в экономически развитых странах Европы, США и особенно России [European Guidelines on Cardiovascular Disease // Eur. Heart J. - 2003. - V. 24, №17. - P. 1601-1610; NCEP. Adult Treatment Panel III Guidelines // Circulation. - 2004. - V. 110. - P. 227-239; ВНОК. Российские рекомендации. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. М. - 2004. - 36 с.].
В прогрессировании атеросклеротического процесса важную роль играет сосудистая эндотелиальная дисфункция, которая в настоящее время рассматривается как независимый фактор риска атеросклероза и атеротромбоза [Нагорнев В.А. Патогенез атеросклероза. М.: СПб. - 2006].
Заболевание начинается с накопления липопротеинов, в первую очередь липопротеинов низкой плотности (ЛНП), во внеклеточном матриксе сосуда. Данные частицы ЛНП агрегируют и подвергаются модификации в результате окисления. Модифицированные окислением ЛНП (моЛНП) являются токсичными и повреждают сосуды, вызывая воспаление и фиброз [Steinberg D. The LDL modification hypothesis of atherogenesis: an update // J. Lipid Res. - 2009. - V. 50. - P. S376 - S381].
Наиболее убедительные доказательства участия моЛНП в развитии атеросклероза подтверждаются следующими данными:
1) моЛНП обнаруживают в атеросклеротической бляшке, но не в нормальных артериях [Rosenfeld М.Е., Palinski W., Yla-Herttuala S., Butler S., Witztum J.L. Distribution of oxidation specific lipid-protein adducts and apolipoprotein В in atherosclerotic lesions of varying severity from WHHL rabbits // Atherosclerosis. - 1990. - V. 10. - P. 336-349];
2) аутоантитела, образующиеся против неоэпитопов моЛНП, определяются в крови, и титр этих антител коррелирует с тяжестью атеросклероза и рассматривается в качестве маркера заболевания [Itabe Н., Mori М., Higashi Y., and Takano Т. Minimally modified LDL is an oxidized LDL enriched with oxidized phosphatidylcholines // J Biochem. - 2003. - V. 134. - P. 459-465; Tsimikas S. Oxidative biomarkers in the diagnosis and prognosis of cardiovascular disease // Am J Cardiol. - 2006. - V. 98. - P. 9P - 17P];
3) в исследованиях на животных при моделировании атеросклероза было показано, что антиоксиданты (витамин Е, пробукол, аналоги пробукола и KoQ) оказывают протективное действие, хотя в клинических испытаниях на людях с использованием витамина Е эти данные не были полностью подтверждены [Witztum J.L. and Steinberg D. The oxidative modification hypothesis of atherosclerosis: Does it hold for humans? // Trends Cardiovasc Med. - 2001. - V. 11. - P. 93-102];
4) было обнаружено, что у мышей генетический нокаут различных скавенд-жер-рецепторов значительно подавляет развитие атеросклероза [Kuchibhotla S., Vanegas D., Kennedy D.J., Guy E, Nimako G, Morton RE, Febbraio M. at al. Absence of CD36 protects against atherosclerosis in ApoE knock-aut mice with no additional protection provided by absence of scavenger receptor AI/II // Cardiovasc Res. - 2008. - V. 78. - P. 185-196; Manning-Tobin J.J., Moore K.J., Seimon T.A., Bell SA, Sharuk M, Alvarez-Leite JI. at al. Loss of SA-A and CD36 activity reduces atherosclerotic lesion complexity without abrogating foam cell formation in hyperlipidemic mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2009. - V. 29. - P. 19-26; Mehta J.L., Sanada N., Hu C.P., Chen J, Dandapat A, Sugawara F at al. Deletion of LOX-1 reduces atherogenesis in LDLR knockout mice fed high cholesterol diet // Circ Res. - 2007. - V. 100. - P. 1634-1642; de Winther M.P.J., van Dijk K.W., Havekes L.M., and Hofker M.H. Macrophage scavenger receptor Class A: A multifunctional receptor in a Atherosclerosis // Artherioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - V. 20. - P. 290-297], что указывает на значимость этих рецепторов и их лигандов (моЛНП) в развитии повреждения артерий;
5) установлено также, что истощение фермента 12/15-липооксигеназы, который является физиологическим окисляющим агентом ЛНП, замедляет развитие атеросклероза [HuoY., Zhao L., Hyman M.C., Shashkin P, Harry BL, Burcin T at al. Critical role of macrophage 12/15-lipooxygenese for atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice // Circulation. - 2004. - V. 110. - P. 2024-2031], в то время как его повышенная экспрессия ускоряет атеросклероз [Harats D., Shaish A., Geoege J., Mulkins M, Kurihara H, Levkovitz H. at al. Overexpression of 15-lipooxygenase in vascular endothelium accelerates early atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2000. - V. 20. - P. 2100-2105], свидетельствуя о важной роли окислительной модификации ЛНП в развитии данного заболевания;
6) Като и соавт. (2009) в исследованиях на апоЕ-дефицитных мышах показали, что повышение плазменного уровня окисленных ЛНП предшествует развитию повреждений артерий [Kato R., Mori С, Kitazato K., Arata S, Obama T, Mori M. at al. Transient increase in plasma oxidized LDL during the progression of atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2009. - V. 29. - P. 33-39];
7) было показано, что специфическое снижение плазменного уровня моЛНП при увеличении экспрессии скавенджер-рецептора (LOX-1) в печени предотвращает прогрессирование атеросклеротического повреждения у апоЕ-дефицитных мышей даже при наличии тяжелой гиперхолестеринемии [Ishi-gaki Y., Katagiri H., Gao J., Yamada T, Imai J, Uno K. at al. Impact of plasma oxidized low-density lipoprotein removal on atherosclerosis // Circulation. - 2008. - V. 118. - Р. 75-83].
Таким образом, учитывая важную патогенетическую роль моЛНП, а в целом - множественно модифицированных ЛНП при атеросклерозе, остается актуальной разработка простых, доступных способов определения литической активности (атерогенности) ммЛНП как для прогноза течения и эффективности лечения, так и для разработки новых подходов терапии атеросклеротических заболеваний и эндотелиальной дисфункции на ранних стадиях.
Известен способ определения атерогенности сыворотки крови по ее способности вызывать накопление холестерина в культивируемых клетках [Tertov V.V., Orekhov A.N., Nikitina N.A. Perova NV, Lyakishev AA, Serebrennikov SG et al. Peritoneal macrophages: a model for detecting atherogenic potential in patiens blood serum // Ann. Med. - 1989. - V. 21(6). - Р. 455-459]. Недостатком этого способа являются трудоемкость, высокая себестоимость, сложность и длительность проведения исследования.
Также известен способ определения литической активности липопротеинов, содержащих лизофосфатидилхолин (лФХ), в инкубированной мышиной плазме [Suzuki A., Kawakami М. A hemolytic lipoprotein containing lyso-phosphatidylcholine prodused in incubated mouse plasma // Biochimica et Biophysica Acta. - 1983. - V. 753. - P. 236-243]. В плазме крови человека и крыс большое количество лФХ также присутствует в липопротеинах очень высокой плотности в виде комплекса с альбумином [Switzer S., Eder Н.А. Transport of lysolecithin by albumin in human and rat plasma // J. Lipid Res. - 1965. - V. 6. - P. 506-511; Wille L.E., Heiberg A., Gjone E. Studies on serum pre-alpha-lipoprotein. An albumin-ApoA-I-lysolecithin-containing lipoprotein family (AAL) // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1978. - V. 38, Suppl. 150. - P. 59-65], однако логическая активность лФХ не была показана.
В настоящее время показано, что лФХ является большим плазменным липидом, который узнается как важный клеточно-сигнализирующая молекула и продуцируется в физиологических условиях при действии фосфолипазы А2 (ФлА2) на лФХ. лФХ транспортирует глицерофосфолипидные компоненты, такие как жирные кислоты, фосфатидилглицерол и холин между тканями, является лигандом для специфического белок-G-связанного рецептора и активирует некоторые вторичные мессенджеры. лФХ является также большим фосфолипидным компонентом моЛНП и признается критическим фактором для проявления атерогенной активности моЛНП [Schmitz G., Rueb-saamen K. Metabolism and atherogenic desease association of lysophosphatidyl-choline // Atherosclerosis. - 2010. - V. 208. - P. 10-18].
Методы, разработанные для определения лФХ, в основном связаны с определением активности ФлА2 [Aasman van den В.Н. A review on methods of phospholipase A determination // Agents Action. - 1979. - V. 9. - P. 382-389]. Однако потенциальные эффекты детергента в составе буфера на активность фермента, также как и структура фосфолипидного бислоя, не учитываются. Наряду с масс-спектрометрией для анализа лизофосфолипидов существует ряд методов, основанных на хроматографии [Choi S., Lee Y.S., Na D.S., Yoo Y.S. Determination of enzymatic activity and properties of secretory phospholipase A2 by capillary electrophoresis // J. Chromatogr. - 1999. - V. 853. - P. 285-293; Lai C.S., Zhang J.Z., Joseph J. Spin-label assay for phospholipase A2 // Anal Biochem. - 1988. - V. 172. - P. 397-402], ультрафиолетовой и флуоресцентной спектроскопии [Rawyler A., Siegenthaler Р.А. A single and continuous spectro-photometric assay for various lipolytic enzimes, using natural, non-labelled substrates // Biochim Biophys Acta. - 1989. - V. 1004. - P. 337-344], ядерно-магнитно-резонансной спектроскопии [Fuchs В., Schiller J., Wagner U., Hantzschel H., Arnold K. The phosphatidylcholine/lysophosphatidylcholine ratio in human plasma is an indicator of the severity of rheumatoid arthritis: investigations by 31P NMR and MALDI-TOF MS // Clin. Biochem. - 2005. - V. 38. - P. 925-933] и радиоактивности [Catz S.D., Sterin-Speziale N.B. Bradykinin stimulates phosphoinositide turnover and phospholipase С but not phospholipase D and NADPH oxidase in human neutrophils // J. Leukoc. Biol. - 1996. - V. 59. - P. 591-597]. Большинство опубликованных методов, используемых для анализа лФХ, включают разделение их с помощью тонкослойной хроматографии [Wang W.Q., Gustafson A. One-dimensional thin-layer chromatographic separation of phospholipids and lysophospholipids from tissue lipid extracts // J. Chromatogr. - 1992. - V. 581. - P. 139-142; Yokoyama K., Shimizu F., Setaka M. Simultaneous separation of lysophospholipids from the total lipid fraction of crude biological samples using two-dimensional thin-layer chromatography // J. Lipid. Res. - 2000. - V. 41. - P. 142-147] или высокоэффективной жидкостной хроматографии [Guan Z., Grunler J., Piao S., Sindelar P.J. Separation and quantitation of phospholipids and their ether analogues by high-performance liquid chromatography // Anal. Biochem. - 2001. - V. 297. - P. 137-143; Suchocka Z., Gronostajska D., Suchocki P., Pachecka J. New HPLC method for separation of blood plasma phospholipids // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2003. - V. 32. - P. 859-865]. Использование этих методов в рутинной практике ограничено из-за их сложности, длительности процедуры, а также высокой себестоимости анализов.
Техническим результатом предлагаемого способа является устранение вышеуказанных недостатков, расширение арсенала способов определения литической активности (атерогенности) ммЛНП для раннего прогноза течения, проведения и контроля эффективности патогенетической терапии атеросклероза в условиях клинико-диагностических лабораторий за счет упрощения технологии, а также его многократного удешевления.
Этот результат достигается тем, что определение литической активности ммЛНП проводят путем обработки сыворотки крови 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка: ПВП (1:0,84), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП, добавляют аутологичные, отмытые стандартизованные эритроциты человека, инкубируют в течение 48 часов при комнатной температуре, измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 620 нм, по калибровочному графику определяют степень лизиса и при лизисе более 10% констатируют повышенную литическую активность ммЛНП.
Подписи к рисункам
Рис. 1. Калибровочный график для определения степени лизиса эритроцитов человека по оптической плотности при длине волны 620 нм.
Пример 1. Определение оптимальной концентрации эритроцитов человека для теста определения литической активности ммЛНП. Эритроциты человека (ЕЧ) 3 раза отмывают в вероналовом солевом буфере (VBS2+) центрифугированием в течение 10 мин при 2500 об/мин. Строят график зависимости оптической плотности суспензии эритроцитов (при длине волны 620 нм) от концентрации эритроцитов. Для этого 1% суспензию эритроцитов прогрессивно разводят в плоскодонной 96-луночной иммунологической планшете в объеме 100 мкл 0,15М NaCl. Тщательно перемешивают и измеряют на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 620 нм. Результаты представлены в таблице 1. Как видно из данных, представленных в таблице 1, наблюдается линейная зависимость оптической плотности суспензии от концентрации ЕЧ в растворе до А620, равной 0,56 ЕД. Свыше 0,56 ЕД при А620 данная зависимость - нелинейная. Поэтому для теста определения литической активности ммЛНП нами выбрана концентрация суспензии ЕЧ, которая в объеме 100 мкл в 96-луночных планшетах дает оптическую плотность, равную 0,40-0,56 ЕД. Для определения степени лизиса эритроцитов нами предложен калибровочный график, в котором динамику лизиса эритроцитов оценивают по снижению оптической плотности при длине волны 620 нм. За 0% лизиса принимают оптическую плотность контроля эритроцитов на спонтанный лизис (30 мкл ЕЧ + 70 мкл VBS2+), соответственно за 100% лизис принимают оптическую плотность контроля на полный лизис (30 мкл ЕЧ + 70 мкл Н2О). Степень лизиса эритроцитов оценивают через 48 часов инкубации при комнатной температуре по калибровочному графику, представленному на рис. 1.
Как видно из рис. 1, калибровочный график позволяет определять степень лизиса эритроцитов в процентах по оптической плотности пробы без стадии центрифугирования и измерения гемоглобина в супернатанте и последующего расчета степени лизиса эритроцитов по формуле, что существенно упрощает регистрацию результатов анализа литической активности ммЛНП в рутинных исследованиях.
Пример 2. Выделение мм ЛНП из сыворотки крови больных с инструментально подтвержденным атеросклерозом каротидных артерий.
Выделение ммЛНП проводят, как описано в работе [Шойбонов Б.Б., Шойбонова Б.В. Способ определения атерогенности крови человека // Патент РФ №2497116 от 27.10.2013 г.], с незначительной модификацией. Буфер-1 для агрегации мм ЛНП готовят растворением 20 г ПВП-35000 в 100 мл 0,01М Трис-HCl-буфера (pH 7,4), содержащего 0,15 М NaCl; Буфер-2, в отличие от Буфера-1, не содержит ПВП-35000. К 100 мкл пулированной сыворотки крови (10 больных с атеросклерозом каротидных артерий и 10 здоровых доноров) добавляют по 84 мкл Буфера-1, тщательно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин. Агрегированные ммЛНП осаждают центрифугированием при 3100 g в течение 10 мин при 23°С, декантируют, преципитат ммЛНП растворяют в 100 мкл Буфера-2. После растворения осадка в приготовленных ПВП-преципитатах определяют содержание холестерина, триацилглицерида (ТАГ) и общих белков с использованием коммерческих ферментных наборов. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Как видно из данных, представленных в таблице 2, в ПВП-преципитате пулированной сыворотки больных атеросклерозом каротидных артерий содержание холестерина в 5,3 раза, а ТАГ - в 16 раз больше, чем в ПВП-преципитате из сыворотки здоровых доноров. Содержание общего белка в 1,3 раза выше в ПВП-преципитате больных.
Таким образом, наличие холестерина, ТАГ и белка в ПВП-преципитатах из сывороток свидетельствует о липопротеиновой природе агрегатов, образующихся в присутствии 9,1% ПВП 35000±5000 в условиях 54% сыворотки. Повышенный уровень ПВП-преципитата, содержащего мЛПНП у больных с атеросклерозом каротидных артерий, подтверждает патологическую роль мЛПНП при атеросклеротическом процессе.
Пример 3. Определение литической активности ммЛНП, приготовленных из сыворотки крови больных с атеросклерозом каротидных артерий, с использованием аутологичных эритроцитов.
Для подтверждения литической активности (патогенности) ммЛНП, приготовленных из индивидуальных сывороток больных с инструментально подтвержденным атеросклерозом каротидных артерий, были приготовлены аутологичные суспензии эритроцитов для теста, как описано выше (см. пример 1). Положительные результаты теста должны свидетельствовать о патогенности ммЛНП в тесте лизиса аутологичных (собственных) эритроцитов.
Тест литической активности ммЛНП проводят в 96-луночных плоскодонных иммунологических планшетах по 3 повтора. Вначале по 10 мкл (×3) ммЛНП вносят в лунки, потом добавляют 60 мкл (×3) буфера VBS2+ и 30 мкл (×3) суспензии стандартизованных в этом же буфере аутологичных эритроцитов больного. Параллельно ставят контроли: 3 контроля на полный лизис (30 мкл суспензии аутологичных эритроцитов + 70 мкл H2O); 3 контроля на спонтанный лизис эритроцитов (30 мкл аутологичных эритроцитов + 70 мкл буфера VBS2+). Тщательно перемешивают и сразу измеряют оптическую плотность на фотометре для иммуноферментного анализа при длине волны 620 нм (бланк устанавливают против воздуха). После измерения планшеты герметично заклеивают пленкой и оставляют на 48 часов при комнатной температуре. После 48-ми часовой инкубации планшеты тщательно перемешивают и измеряют оптическую плотность при тех же условиях. Проведено исследование литической активности 6 проб ммЛНП, приготовленных из индивидуальных сывороток больных, с использованием в качестве мишеней аутологичные (собственные) отмытые и стандартизованные эритроциты. Полученные результаты представлены в таблице 3.
Как видно из данных, представленных в таблице 3, в пробах 1-5 разброс оптической плотности после 48-часовой инкубации колебался от 0,8% до 5,3%. Только в пробе №6 разброс составил 11%. При определении степени лизиса по калибровочному графику, приведенному в примере 1, максимальная ошибка в пробе №6 составила ± 7,9%.
Таким образом, ошибка по трем точкам не превышает 10%, поэтому наличие литического эффекта ммЛНП можно констатировать при лизисе более 10%.
Выявление литического действия ммЛНП, приготовленных из сыворотки крови больного с атеросклерозом каротидных артерий, и лизис собственных эритроцитов свидетельствует о высокой патогенности ммЛНП и об отсутствии ингибирующих факторов в пробе в виде альбумина и липопротеинов высокой плотности, которые были представлены в работе Suzuki А., Kawakami М. (1983). Авторами показано, что основными факторами, оказывающими литическое действие на эритроциты мыши, являются ФлА2 и лФХ, который является продуктом гидролиза сложноэфирной связи во втором положении фосфатидилхолина и превращении его в лФХ. Для уточнения литического фактора в составе ммЛНП нами проведены следующие исследования.
Пример 4. Влияние повышенной температуры на литическое действие ммЛНП. Для проведения данных исследований были отобраны 8 проб сыворотки крови больных атеросклерозом каротидных артерий и приготовлены ммЛНП, как описано выше. Пробы ммЛНП делили на 2 пробы и одну из них прогревали при 58°С в течение 20 мин для термоинактивации липопротеин ассоциированной ФлА2 (ла-ФлА2), а вторая часть ммЛНП служила контролем. Результаты проведенного теста на литическую активность ммЛНП представлены в таблице 4.
Как видно из данных, представленных в таблице 4, во всех 8 сыворотках содержится повышенный уровень ммЛНП, который определяли по содержанию холестерина в ПВП-преципитатах (от 10 до 33,7 мг/дл), т.е. в 100% мы выявляем количественно атерогенные (множественно модифицированные) ЛНП. Определение литической активности в мм ЛНП в 50% выявляет высокую активность, у 25% - пограничное значение (на уровне 10% литическая активность), и только в 2 пробы ммЛНП не обладали литической активностью. Известно, что инкубация при 58°С в течение 20 мин вызывает инактивацию ла-ФлА2 (Suzuki A., Kawakami М., 1983). Термостабильность литической активности свидетельствует о наличии в составе ммЛНП лФХ, который обладает детергентными свойствами. Как видно из данных, приведенных в таблице 4, инкубация ммЛНП при 58°С действительно вызывает снижение литической активности частично или почти на 50% (проба №8). В то же время обнаружено, что для пробы №7 температурное воздействие не оказывает ингибирующего эффекта на литическую активность ммЛНП. Следовательно, литическая активность ммЛНП (№7) обусловлена наличием термостабильных молекул лФХ.
Таким образом, инкубация препаратов ммЛНП позволяет выявить природу литического фактора для оценки тяжести (остроты) атеросклеротического процесса в организме человека. Наличие же высокоактивной ла-ФлА2 в ммЛНП свидетельствует об острой воспалительной реакции в организме больного с субклиническим или клиническим атеросклерозом и требует интенсивной противовоспалительной терапии. Известно, что основным источником ФлА2 являются активированные макрофаги. Отсутствие литической активности ммЛНП является благоприятным прогнозом для обследуемого и свидетельствует о медленном прогрессировании атеросклеротического процесса, требует дальнейшего наблюдения и проведения стандартной антиатеросклеротической терапии. Термостабильность литического фактора в составе ммЛНП №7 свидетельствует о высокой концентрации лФХ, генерированного по альтернативному пути, без участия ла-ФлА2. Данный механизм, возможно, протекает при дефиците антиоксидантов в организме из-за повышенного их расхода или же связан с нарушением питания и требует дальнейших исследований.
Определение литической активности ммЛНП позволяет проводить диагностику течения атеросклеротического процесса, определение литического фактора при термоинактивации ммЛНП расширяет возможности для коррекции проводимой терапии под контролем уровня литической активности ммЛНП. Определение литической активности ммЛНП открывает новый подход к оценке атерогенности от количественных показателей к качественным (функциональным) показателям. То есть при нормальном уровне ммЛНП, наличие субклинического атеросклероза может быть обусловлено высокой литической активностью (атерогенностью) ммЛНП.
Предлагаемый способ отличается простотой, так как, кроме специального буфера для выделения ммЛНП, остальные компоненты являются рутинным материалом диагностических лабораторий. Для регистрации лизиса эритроцитов человека не требуется стадия центрифугирования. Использование простого и информативного способа определения литической активности ммЛНП позволяет проводить скрининг и выявлять людей с острым течением атеросклеротического процесса, и на доклинических стадиях заболевания, и при клиническом атеросклерозе. Дальнейшие углубленные исследования таких пациентов позволят установить индивидуальную причину атерогенности крови и проводить этиотропную терапию.
Claims (1)
- Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) путем обработки сыворотки крови 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка : ПВП (1:0,84), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП, добавляют аутологичные, отмытые, стандартизованные эритроциты человека, инкубируют в течение 48 часов при комнатной температуре, измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 620 нм, по калибровочному графику определяют степень лизиса и при лизисе более 10% констатируют повышенную литическую активность ммЛНП.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014152089/15A RU2577719C1 (ru) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014152089/15A RU2577719C1 (ru) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2577719C1 true RU2577719C1 (ru) | 2016-03-20 |
Family
ID=55647979
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014152089/15A RU2577719C1 (ru) | 2015-01-15 | 2015-01-15 | Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2577719C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2680848C1 (ru) * | 2017-10-17 | 2019-02-28 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) | Способ оценки характера аутоиммунной реакции организма человека на множественно модифицированные липопротеины низкой плотности в литическом тесте |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1116394A1 (ru) * | 1980-06-12 | 1984-09-30 | Научно-Исследовательский Институт По Биологическим Испытаниям Химических Соединений | Способ определени литической активности веществ |
| RU2444014C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2012-02-27 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Среда и способ определения множественно модифицированных липопротеинов сыворотки крови человека |
-
2015
- 2015-01-15 RU RU2014152089/15A patent/RU2577719C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1116394A1 (ru) * | 1980-06-12 | 1984-09-30 | Научно-Исследовательский Институт По Биологическим Испытаниям Химических Соединений | Способ определени литической активности веществ |
| RU2444014C1 (ru) * | 2010-08-24 | 2012-02-27 | Учреждение Российской Академии Медицинских Наук Нии Общей Патологии И Патофизиологии Рамн | Среда и способ определения множественно модифицированных липопротеинов сыворотки крови человека |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| OREKHOV A.N. et al / Modified Low Density Lipoprotein and Lipoprotein-Containing Circulating Immune Complexes as Diagnostic and Prognostic Biomarkers of Atherosclerosis and Type 1 Diabetes Macrovascular Disease / Int J Mol Sci / 2014, Vol.15, No.7, pp 12807-12841;. ТЕРТОВ В.В. / Множественно-модифицированные липопротеиды низкой плотности, циркулирующие в крови человека / Дис. ... д-ра биол. наук / Москва - 2000. * |
| ШОЙБОНОВ Б.Б. и др. / Определения холестерина в иммунных комплексах / Клин. лаб. диаг. / 2013, No.9, стр.52. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2680848C1 (ru) * | 2017-10-17 | 2019-02-28 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) | Способ оценки характера аутоиммунной реакции организма человека на множественно модифицированные липопротеины низкой плотности в литическом тесте |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Solnica et al. | 2020 Guidelines of the Polish Society of Laboratory Diagnostics (PSLD) and the Polish Lipid Association (PoLA) on laboratory diagnostics of lipid metabolism disorders | |
| Sardiwal et al. | Bone alkaline phosphatase in CKD–mineral bone disorder | |
| Yoshimoto et al. | The discovery of LOX-1, its ligands and clinical significance | |
| Marais et al. | Dysbetalipoproteinaemia: a mixed hyperlipidaemia of remnant lipoproteins due to mutations in apolipoprotein E | |
| Addabbo et al. | The Krebs cycle and mitochondrial mass are early victims of endothelial dysfunction: proteomic approach | |
| Bauer | Lipoprotein-mediated transport of dietary and synthesized lipids and lipid abnormalities of dogs and cats | |
| Eto et al. | A racial difference in apolipoprotein E allele frequencies between the Japanese and Caucasian populations | |
| Stahlberg et al. | Hepatic cholesterol metabolism in human obesity | |
| Dobiásová et al. | Relations between particle size of HDL and LDL lipoproteins and cholesterol esterification rate | |
| Solnica et al. | 2024 Guidelines of the Polish Society of Laboratory Diagnostics and the Polish Lipid Association on laboratory diagnostics of lipid metabolism disorders | |
| KR20080063326A (ko) | 아토피성 피부염 마커와 그의 이용기술 | |
| CA2404000C (en) | A functional assay of high-density lipoprotein | |
| Scanu | The role of lipoprotein (a) in the pathogenesis of atherosclerotic cardiovascular disease and its utility as predictor of coronary heart disease events | |
| AU2001249762A1 (en) | A functional assay of high-density lipoprotein | |
| Pisciotta et al. | Plasma HDL pattern, cholesterol efflux and cholesterol loading capacity of serum in carriers of a novel missense variant (Gly176Trp) of endothelial lipase | |
| Chandra et al. | The SCFFBXO3 ubiquitin E3 ligase regulates inflammation in atherosclerosis | |
| RU2577719C1 (ru) | Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности | |
| RU2501013C1 (ru) | Способ определения минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности в сыворотке или плазме крови человека | |
| Ece et al. | Neutrophil activation, protein oxidation and ceruloplasmin levels in children with Henoch-Schönlein purpura | |
| WO2012051301A9 (en) | Methods for identifying modulators of triglyceride metabolism, for modulating triglyceride metabolism and for identifying subjects at risk for abnormal triglyceride metabolism | |
| Keskin et al. | Elevated plasma advanced oxidation protein products in children with Henoch–Schonlein purpura | |
| Vayá et al. | Erythrocyte membrane composition in patients with primary hypercholesterolemia | |
| Sumegová et al. | Activity of paraoxonase 1 (PON1) and its relationship to markers of lipoprotein oxidation in healthy Slovaks. | |
| EP1300683A1 (en) | Means of examining nephropathy | |
| RU2497116C1 (ru) | Способ определения атерогенности крови человека |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190116 |