RU2573991C1 - Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты - Google Patents
Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2573991C1 RU2573991C1 RU2015116161/15A RU2015116161A RU2573991C1 RU 2573991 C1 RU2573991 C1 RU 2573991C1 RU 2015116161/15 A RU2015116161/15 A RU 2015116161/15A RU 2015116161 A RU2015116161 A RU 2015116161A RU 2573991 C1 RU2573991 C1 RU 2573991C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gmdp
- acetylglucosaminyl
- dbe
- alanyl
- glutamic acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 91
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 24
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims abstract description 15
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 2-amino-3-O-[(R)-1-carboxyethyl]-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical class OC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](N)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O MSFSPUZXLOGKHJ-PGYHGBPZSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000002128 reflection high energy electron diffraction Methods 0.000 claims description 15
- -1 N-acetylglucosaminyl-N-acetylamine -glutamic acid Chemical compound 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 abstract description 5
- 230000005494 condensation Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 31
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 30
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 30
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 9
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L palladium(II) chloride Chemical compound Cl[Pd]Cl PIBWKRNGBLPSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- LOQXRSDDMWHVNZ-MJOAMXQYSA-N (2R)-2-[(3R,4R,5S,6R)-2-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]-3-(diacetylamino)-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxypropanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@H]1C(O)(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H](C(=O)O)C)O)CO)C1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)C(C)=O LOQXRSDDMWHVNZ-MJOAMXQYSA-N 0.000 description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 4
- HTDMWOVJVKVAGC-UYXJWNHNSA-N (2r)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]pentanedioic acid;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O HTDMWOVJVKVAGC-UYXJWNHNSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027541 GTP-binding protein Rheb Human genes 0.000 description 2
- VYZAGTDAHUIRQA-CRCLSJGQSA-N L-alanyl-D-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- 101150020518 RHEB gene Proteins 0.000 description 2
- IOVVFSGCNWQFQT-UHFFFAOYSA-N bis(2,3,4,5,6-pentafluorophenyl) carbonate Chemical compound FC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1OC(=O)OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F IOVVFSGCNWQFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 2
- BHKILIWPLSUSAT-UYXJWNHNSA-N (2r)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]pentanedioic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O BHKILIWPLSUSAT-UYXJWNHNSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000186140 Asperula odorata Species 0.000 description 1
- MXMOFDISXOBSJM-BHACDBBJSA-N C[C@H](NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1N)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(O)=O Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1N)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(O)=O MXMOFDISXOBSJM-BHACDBBJSA-N 0.000 description 1
- 235000008526 Galium odoratum Nutrition 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N N-acetyl-alpha-D-muramic acid Chemical class OC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]1NC(C)=O MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229950001715 glucosaminylmuramyl dipeptide Drugs 0.000 description 1
- 108700026361 glucosaminylmuramyl-2-alanine-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 125000005490 tosylate group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000007738 vacuum evaporation Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области синтеза физиологически активных мурамилдипептидов, более конкретно к усовершенствованному способу получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А). Способ получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты включает конденсацию незащищенного производного мурамовой кислоты с защищенным линейным дипептидом, каталитический гидрогенолиз синтезированного дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ), выполняемый над палладиевым катализатором, отличающийся тем, что каталитический гидрогенолиз осуществляют в среде этилового спирта с применением промотора катализатора - гидразин гидрата (ГГ) и восстановителя - муравьиной кислоты (МК) при следующих соотношениях реагентов: соотношение по массе {ДБЭ:Pd}={1:0,100-0,500}; соотношение в массовых процентах {Pd:ГГ}={100:0,5-1,5}; соотношение в мольных эквивалентах {ДБЭ:МК}={1:2-4}. Применение данного изобретения обеспечивает более высокую селективность каталитического процесса образования целевого продукта формулы (IV), отвечающего за минимизацию нежелательных примесей в нем, и более высокий выход целевого продукта по сравнению с известными способами. 2 табл., 6 пр., 4 схемы.
Description
Изобретение относится к области синтеза физиологически активных мурамилдипептидов, конкретно к усовершенствованному способу получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А).
Известно, что ГМДП-А обладает иммуномодулирующей, противоопухолевой и другими видами биологической активности [(RU 97101904 A); (US 4395399 A); (RU 96109376 A); (WO 9809989); (ЕР 0722332 В1); (US 2007167355 A); (RU 2209078); (RU 2139086 C1); (WO 2005007676); (US 5534492); (WO 9601645); (WO 9609063); (WO 2008070564); (WO 9313791)]. При этом токсикологические исследования этого соединения показали, что оно не является токсичным и, в отличие от многих других мурамилдипептидов, пирогенным в диапазоне приемлемых терапевтических доз [RU 2139086]. Поэтому актуальной задачей является создание способа получения данного соединения, приемлемого для его промышленного производства в качестве активной фармацевтической субстанции лекарственного средства.
В настоящее время для синтеза мурамилпептидов наибольшее распространение получили способы, включающие конденсацию защищенного или незащищенного производного N-ацетилмурамовой кислоты (ДС), имеющего активированную карбоксильную группу, и защищенного пептида (ДП), с последующим удалением защитных групп образовавшейся новой молекулы через стадии деблокирования защищенного мурамилпептида каталитическим гидрогенолизом [(SU 1346046); (SU 1326197); (SU 727647); (SU 660589); (US 4395399); (US 4101649); (US 408273;)]. В указанных патентных публикациях стадия каталитического гидрогенолиза бензильной сложноэфирной защиты выполняется способами, известными в данной области техники пептидного синтеза, - проведением реакции над палладиевым катализатором при весовом соотношении {деблокируемое вещество: палладий}, равном {1:0,01-0,05}, в среде, концентрированной (от 99,5% до 60%) уксусной кислоты. В патенте [RU 2181729] стадию каталитического гидрогенолиза бензильной сложноэфирной защиты производного мурамовой кислоты выполняют аналогично, но без применения уксусной кислоты, в среде этанола. Таким образом, в указанных патентных публикациях стадия деблокирования пептидного фрагмента мурамилпептида выполняется по общеизвестной методике с незначительными вариациями: путем выдержки деблокируемого вещества над палладиевым катализатором при соотношении {деблокируемое вещество: палладий}, равном {1:0,01-0,05} [(Гершкович А.А., Кибирев В.К., Химический синтез пептидов, Киев, Наукова Думка, 1992, с. 130)].
Наиболее близким к заявляемому техническому решению является способ получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты [US 4395399], в котором целевое вещество получают предварительной конденсацией незащищенного производного мурамовой кислоты (дисахарида) (I) и защищенного линейного дипептида (V), а стадию каталитического гидрогенолиза бензильной защиты в полученном дибензиловом эфире N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (VIII) выполняют над палладиевой чернью в среде 75% уксусной кислоты в течение 6 часов (схема 1 А, Б, В, Г). В патенте не указаны соотношения деблокируемого вещества и палладиевого катализатора, однако в общей части патента сообщается, что проводимые химические реакции выполняются общеизвестными методами пептидного синтеза. Недостаток использованного метода гидрогенолиза заключается в том, что он не обеспечивает селективности реакции деблокирования. Не была учтена особенность строения данного производного (IX) глюкозаминилмурамил дипептида: после деблокировки пептидной части, концевой группой становится радикал глутаровой кислоты, способной в предлагаемых условиях длительной обработки в концентрированных водных растворах кислоты над катализатором претерпевать декарбоксилирование (схема 2), а также образовывать циклический ангидрид (схема 3). Таким образом, в предложенных условиях гидрогенолиза кроме целевого продукта в значимых количествах образуются примесные близкородственные продукты (X и XI), трудно отделяемые от основного вещества и влияющие на его фармакологические свойства, а также на выход целевого продукта.
Дополнительным недостатком предложенного способа является экстенсивность стадии каталитического гидрогенолиза - реакция длится 6 часов в сильнокислой среде, что создает условия для химической деструкции лабильного дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (схема 4) с образованием продуктов (XII), загрязняющих целевой продукт.
По совокупности указанных недостатков способ [(US 4395399)]] не может быть использован для получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты фармакопейного качества и с высоким выходом.
Задача изобретения состоит в создании способа получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты лишеного этих недостатков.
Техническим результатом, на достижение которого направлено изобретение, является обеспечение более высокой селективности каталитического процесса образования целевого продукта формулы (IX), отвечающего за минимизацию нежелательных примесей в нем и более высокого выхода целевого продукта по сравнению с известными способами.
Технический результат достигается предлагаемым способом получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты, включающим конденсацию незащищенного производного мурамовой кислоты с защищенным линейным дипептидом и последующую стадию каталитического гидрогенолиза синтезированного дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ), выполняемую в среде этилового спирта над палладиевым катализатором с применением промотора катализатора - гидразин гидрата (ГГ) и восстановителя - муравьиной кислоты (МК) при следующих соотношениях реагентов:
Соотношение по массе {ДБЭ:Pd}={1:0,100-0,500}
Соотношение в массовых процентах {Pd:ГГ}={100:0,1-1,5}
Соотношение в мольных эквивалентах {ДБЭ:МК}={1:2-4}
В предложенном способе конденсация дисахаридного (ДС) и дипептидного (ДП) реагентов выполняется известными методами пептидного синтеза, а каталитический гидрогенолиз полученного диэфира - при строгом качественном и количественном соблюдении предложенных условий, поскольку изменение параметров технологического процесса вне указанных условий не обеспечивает селективность деблокирования молекулы и приводит к образованию значимого количества нежелательных примесей к целевой молекуле, что в свою очередь снижает выход целевого продукта.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. N-ацетил-D-глюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты (ДС) (I) в растворе диметилформамида при температуре не выше 0°C подщелачивают добавлением третичных аминов и активируют добавлением известных активирующих агентов (реагента Вудворда К, бис(пентафторфенил)карбоната (II) или других с аналогичным действием). Получают активированный эфир N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты (III).
Защищенный дипептид, вводимый в реакцию в форме соли (V), переводят в свободное защищенное основание (VII) добавлением третичного амина.
Полученный раствор свободного защищенного основания приливают к раствору активированного ДС. Дают выдержку и контролируют конец реакции. Реакцию считают законченной, если в ВЭЖХ хроматограмме реакционной массы содержится менее 5% активированного ДС и менее 2% защищенного ДП.
Если имеет место выпадение в осадок солей побочных продуктов реакции, эти соли, например, (IV) и (VI) отфильтровывают. Промежуточный продукт - дибензиловый эфир N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ) (VIII) выделяют методом осаждения или выпаривания под вакуумом. Сырец полупродукта очищают подходящими хроматографическими методами, концентрируют и анализируют на содержание основного вещества и примесей.
Применяя метод упарки и переупарки растворителя под вакуумом, переводят ДБЭ ГМДП-А в раствор в этиловом спирте.
Из двуххлористого палладия приготавливают катализатор палладиевая чернь (Pd), который хранят под слоем воды. Непосредственно перед проведением реакции гидрогенолиза декантируют водный слой над катализатором, несколькими промывками этиловым спиртом, удаляют остатки воды и суспензируют катализатор в среде этилового спирта. К катализатору добавляют промотор - гидразин гидрат (ГГ), соблюдая указанные диапазоны соотношения {Pd:ГГ}.
К спиртовой суспензии, содержащей палладий и ГГ последовательно прибавляют муравьиную кислоту и спиртовый раствор ДБЭ, соблюдая указанные диапазоны соотношения {ДБЭ:МК} и {ДБЭ:Pd}. В токе азота раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, контролируя завершенность реакции методом аналитической ВЭЖХ. Реакция считается завершенной, если в растворе остается менее 2% ДБЭ ГМДП-А.
Реакционную массу, содержащую сырец ГМДП-А, декантируют и методами вакуумной упарки и переупарки с водой очищают с одновременной заменой спиртового растворителя на водный. Водный раствор сырца ГМДП-А очищают методом препаративной обращенно фазовой ВЭЖХ. Целевые фракции, содержащие очищенный продукт, концентрируют в вакууме и лиофилизируют. Получают ГМДП-А с выходом от 56% до 67%, содержащую не менее 96% целевого вещества, не более 1,0% суммарно посторонних примесей и не более 0,5% единичной посторонней примеси.
Описанный способ позволяет осуществить стадию каталитического гидрогенолиза с высокой селективностью и получить N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовуюкислоту с высокой степенью чистоты при высоком выходе целевого продукта.
Для целей данного изобретения возможно использовать как палладиевую чернь, так и палладиевый катализатор, нанесенный на носитель - уголь, Al2O3 или другие общепринятые для этих целей носители. В этом случае при расчете соотношений {деблокируемого вещество:Pd} и {Pd:ГГ} учитывают не техническую массу катализатора, а только массу содержащегося в нем палладия.
Гидразин гидрат для целей данного изобретения можно использовать в виде 100%-ного, 64%-ного или 35%-ного растворов. При этом в соотношении {Pd:ГГ} расчет ведут на 100%-ное содержание гидразин гидрата, который вводят в суспензию катализатора в этиловом спирте строго перед введением остальных реагентов.
В качестве ключевого дипептидного реагента для целей данного изобретения возможно использовать различные соли защищенного дипептида дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты. Например, могут быть использованы тозилаты, хлоргидраты, оксалаты, трифторацетаты и другие соли (V) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты (защищенного линейного дипептида VII), получаемые известными методами пептидного синтеза [Гершкович А.А., Кибирев В.К. Химический синтез пептидов. Киев: Наукова Думка, 1992, с. 130]. Однако метод очистки сырца полупродукта ДБЭ ГМДП-А, необходимой перед проведением реакции гидрогенолиза, не является универсальным и зависит от исходной соли защищенного дипептида, взятого в синтез.
В качестве ключевого дисахаридного реагента в синтезе ГМДП-А используют незащищенную N-ацетил-D-глюкозаминил-N-ацетилмурамовую кислоту, получаемую известными методами [(Ghuysen J.-M., Bact. Rev. 32, №4, 407, 1972); (Ciorbaru R., Lederer E., Bioch. Bioph. Res. Comm. 59, №4, 1317, 1974); (SU 1135163); (SU 1496229)].
Пример 1
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
К раствору 83 г (0,168 М) N-ацетил глюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты в 4,17 л диметилформамида при температуре минус 2°C±2°C прибавляют 26 мл триэтиламина и 78,15 г (0,24 М) реагента Вудворда К. Смесь перемешивают при температуре минус 2°C±2°C в течение 1 часа и затем, при комнатной температуре, от 1 часа и более до получения прозрачного раствора.
Раствор 161,51 г (0,310 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты трифторацетата в смеси 21 мл триэтиламина и 0,520 л диметилформамида прикапывают к раствору активированного дисахарида при перемешивании в течение 15-20 минут и оставляют при комнатной температуре на 20-часовую выдержку. Отбирают пробу раствора и контролируют завершенность реакции методом ВЭЖХ. Реакцию считают завершенной, когда на ВЭЖХ хроматограмме остаточное содержание активированного ДС не превышает 5%, а ДП - 2%.
К реакционной массе прибавляют 0,520 л 50%-ного водного этанола и упаривают ее на ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C.
Кубовый остаток очищают методом ионнообменной хроматографии последовательно на колонках, упакованных сорбентом Dowex, сначала в (H+-форме), а потом в (CH3COO-форме). В обоих случаях элюентом служит 50% водный этанол.
Элюат с целевым продуктом упаривают на ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К кубовому остатку приливают 0,600 л метанола и переводят его в раствор. Добавлением к раствору диэтилового эфира высаждают дибензиловый эфир N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты. Выход продукта после вакуумной сушки при 25°C составляет 104,20 г (71% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты(ГМДП-А)
Из 24,82 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% Pd приготавливают 14,60 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
Перед проведением гидрогенолиза воду максимально декантируют, катализатор дважды промывают порциями по 0,10 л этилового спирта и приливают к нему последовательно 0,50 л этилового спирта; 0,114 г (0,114 мл) 64%-ного раствора гидразин гидрата (0,073 г 100%-ного ГГ) и 17,53 г (0,014 л) муравьиной кислоты.
Включают интенсивное перемешивание и к суспензии катализатора добавляют раствор 104,2 г дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты в 1,00 л этилового спирта.
При интенсивном перемешивании и комнатной температуре проводят гидрогенолиз. Через 1 час от начала реакции мешалку останавливают и, после осаждения катализатора на дно реактора, отбирают пробу раствора для определения конца реакции. Контроль ведут методом ВЭЖХ по содержанию остаточного ДБЭ ГМДП-А. Реакцию считают завершенной при содержании ДБЭ ГМДП-А≤2%. Время исчерпывающего деблокирования (содержание ДБЭ ГМДП-А≤2%) составляет 1 час. Супернатант над осевшим на дно реактора катализатором декантируют. Катализатор дважды промывают этиловым спиртом порциями по 0,10 л для полноты извлечения целевого продукта. Декантант, объединенный с промывным спиртом, упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К кубовому остатку приливают 0,600 л метанола и переводят его в раствор. Добавлением к раствору диэтилового эфира высаждают сырец N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты. Выход продукта после вакуумной сушки составил 75,25 г (91% на ДБЭ ГМДП-А и 63% на ДС).
Сырец ГМДП-А в мерной колбе на 0,5 л растворяют в 0,300 л воды и доводят объем колбы до метки.
Очистку сырца ГМДП-А осуществляют методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографической градиентной системе, укомплектованной колонной-катриджем, заполненной модифицированным силикагелем «Polygoprep 100-30 С18».
В качестве подвижной фазы используют с заданным градиентом воду и 76% этиловый спирт.
Элюаты, близкие по хроматографическому профилю, содержащие целевой продукт, объединяют, концентрируют и лиофилизируют.
Получают 74,1 г ГМДП-А (выход 89,6% на ДБЭ ГМДП-А и 62,1% на ДС), содержащую 96% целевого вещества, 0,8% суммарно посторонних примесей и имеющую максимальное содержание единичной посторонней примеси 0,36%.
Пример 2
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
К раствору 85 г (0,172 М) N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты в 0,300 л диметилформамида при температуре минус 7°C±2°C прибавляют 20 мл 4-метилморфолина и 72 г (0,183 М) бис(пентафторфенил)карбоната. Смесь перемешивают при температуре минус 7°C±2°C в течение 1 часа и затем при комнатной температуре 2 часа до получения прозрачного раствора.
Раствор 98 г (0,172 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты тозилата в смеси 20 мл 4-метилморфолина и 0,300 л диметилформамида охлаждают до минус 7°C±2°C и медленно прикапывают к раствору активированного дисахарида при перемешивании в течение 15-20 минут и дают еще 20-минутную выдержку. Отбирают пробу раствора и контролируют завершенность реакции методом ВЭЖХ. Реакцию считают завершенной, когда на ВЭЖХ хроматограмме остаточное содержание активированного ДС не превышает 5%, а ДП - 2%.
Реакционную массу отфильтровывают от выпавших в осадок солей метилморфолина с побочными продуктами реакции (IV) и (VI) (см. схему 1). Фильтрат упаривают на ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 1,0-1,5 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C.
Сырец ДБЭ ГМДП-А очищают последовательно методом ионнообменной хроматографии кубового остатка на колонке, упакованной сорбентом «Sephadex DEAE А-25» в (CH3COO-форме), элюент - вода, а потом методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ. При ВЭЖХ используют в качестве сорбента силикагель «Polygoprep 100-30 С18». Элюцию ведут в градиентном режиме, используя в качестве элюентов 0,1 М уксусную кислоту и 76% этиловый спирт. Элюат, содержащий целевой продукт упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. Кубовый остаток переливают в мерную колбу вместимостью 1,0 л и добавлением воды нормализуют объем раствора очищенного ДБЭ ГМДП-А до 1,0 л. Из раствора отбирают аликвоту и определяют в ней методом аналитической ВЭЖХ с применением стандартного образца содержание ДБЭ ГМДП-А и примесей. Выход продукта по данным анализа составляет 109,71 г (73% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А)
Раствор 109,71 г БДЭ ГМДП-А в 1,0 л воды помещают в кубовую колбу и упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К маслянистому кубовому остатку добавляют 0,250 л этилового спирта, взбалтыванием получают однородный раствор и переливают его в мерную колбу вместимостью 1,0 л. Добавлением этилового спирта нормализуют объем раствора очищенного ДБЭ ГМДП-А до 1,0 л.
Из 18,70 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% Pd приготавливают 11,0 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
Перед проведением гидрогенолиза воду максимально декантируют, катализатор дважды промывают порциями по 0,10 л этилового спирта и приливают к нему последовательно 0,50 л этилового спирта; 0,258 г (0,258 мл) 64%-ного раствора гидразин гидрата (0,165 г в пересчете на 100%-ный ГГ) и 23,00 г (0,019 л) муравьиной кислоты.
Включают интенсивное перемешивание и к суспензии катализатора добавляют раствор 109,71 г дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты в 1,00 л этилового спирта.
При интенсивном перемешивании и комнатной температуре проводят гидрогенолиз. Через 1 час от начала реакции мешалку останавливают и, после осаждения катализатора на дно реактора, отбирают пробу раствора для определения конца реакции. Контроль ведут методом ВЭЖХ по содержанию остаточного ДБЭ ГМДП-А. Реакцию считают завершенной при содержании ДБЭ ГМДП-А≤2%. Время исчерпывающего деблокирования (содержание ДБЭ ГМДП-А≤2%) составляет 1 час. Супернатант над осевшим на дно реактора катализатором декантируют. Катализатор дважды промывают этиловым спиртом порциями по 0,10 л для полноты извлечения целевого продукта. Декантант, объединенный с промывным спиртом, упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 35-38°C до прекращения испарения летучих. К кубовому остатку приливают 0,600 л воды и переводят его в раствор. При остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C раствор концентрируют до прекращения испарения летучих. Кубовый остаток переносят в мерную колбу на 0,250 л и доводят объем колбы до метки. Из нормализованного по объему раствора отбирают аликвоту и определяют методом аналитической ВЭЖХ с использованием стандарта содержание целевого вещества и примесей. Выход сырца ГМДП-А (IX) составляет 81 г (93% на ДБЭ ГМДП-А и 67,9% на ДС).
Очистку сырца ГМДП-А осуществляют методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографической градиентной системе, укомплектованной колонной-катриджем, заполненной модифицированным силикагелем «Polygoprep 100-30 С18». В качестве подвижной фазы используют в градиентном режиме элюенты: воду и 76%-ный этиловый спирт.
Элюаты, близкие по хроматографическому профилю, содержащие целевой продукт, объединяют, концентрируют под вакуумом и лиофилизируют.
Получают 80,0 г ГМДП-А (выход 92% на ДБЭ ГМДП-А и 67% на ДС), содержащую 99% целевого вещества, 0,9% суммарно посторонних примесей и имеющую максимальное содержание единичной посторонней примеси 0,30%.
Пример 3
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
Реакцию конденсации проводят в условиях, описанных в примере 2, с использованием исходных реагентов: 85, г (0,172 М) N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты и 75,0 г (0,172 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты хлоргидрата.
Сырец ДБЭ ГМДП-А очищают методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ, используя в качестве сорбента силикагель «Polygoprep 100-30 С18». Элюцию ведут в градиентном режиме, используя в качестве элюентов 0,1 М уксусную кислоту и 76% этиловый спирт. Все технологические операции, начиная со стадии препаративной ВЭЖХ проводят как описано в примере 2.
Из нормализованного до объема 1 л очищенного водного раствора ДБЭ ГМДП-А отбирают аликвоту и определяют в ней методом аналитической ВЭЖХ с применением стандартного образца содержание ДБЭ ГМДП-А и примесей. Выход продукта по данным анализа составляет 97,69 г (65% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А)
Раствор 97,69 г БДЭ ГМДП-А в 1,0 л воды помещают в кубовую колбу и упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К маслянистому кубовому остатку добавляют 0,250 л этилового спирта, взбалтыванием получают однородный раствор и переливают его в мерную колбу вместимостью 1,0 л. Добавлением этилового спирта нормализуют объем раствора очищенного ДБЭ ГМДП-А до 1,0 л.
Из 83,3 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% Pd приготавливают 49,0 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
Перед проведением гидрогенолиза воду максимально декантируют, катализатор дважды промывают порциями по 0,10 л этилового спирта и приливают к нему последовательно 0,50 л этилового спирта; 0,076 г (0,076 мл) 64%-ного раствора гидразин гидрата (0,050 г в пересчете на 100%-ный ГГ) и 10,22 г (0,008 л) муравьиной кислоты.
Получение и очистку ГМДП-А проводят в условиях, описанных в примере 2.
Выход сырца ГМДП-А составляет 69,77 г (90% на ДБЭ ГМДП-А и 58,5% на ДС).
Выход очищенной ГМДП-А составляет 68,5 г ГМДП-А (88,3% на ДБЭ ГМДП-А и 57,4% на ДС). Содержание целевого вещества 98%; посторонних примесей, суммарно 0,6%; максимальное содержание единичной посторонней примеси 0,29%.
Пример 4
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
Реакцию конденсации проводят в условиях, описанных в примере 2, с использованием исходных реагентов: 85, г (0,172 М) N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты и 84,0 г (0,172 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты оксалата.
Сырец ДБЭ ГМДП-А очищают сочетанным методом ионообменной и препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ в условиях, описанных в примере 2. Из нормализованного до объема 1 л очищенного водного раствора ДБЭ ГМДП-А отбирают аликвоту и определяют в ней методом аналитической ВЭЖХ с применением стандартного образца содержание ДБЭ ГМДП-А и примесей. Выход продукта по данным анализа составляет 94,68 г (63% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А)
Раствор 94,68 г БДЭ ГМДП-А в 1,0 л воды помещают в кубовую колбу и упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К маслянистому кубовому остатку добавляют 0,250 л этилового спирта, взбалтыванием получают однородный раствор и переливают его в мерную колбу вместимостью 1,0 л. Добавлением этилового спирта нормализуют объем раствора очищенного ДБЭ ГМДП-А до 1,0 л.
Из 32,3 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% Pd приготавливают 19,0 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
Перед проведением гидрогенолиза воду максимально декантируют, катализатор дважды промывают порциями по 0,10 л этилового спирта и приливают к нему последовательно 0,50 л этилового спирта; 0,150 г (0,150 мл) 64%-ного раствора гидразин гидрата (0,100 г в пересчете на 100%-ный ГГ) и 14,91 г (0,012 л) муравьиной кислоты.
Получение сырца ГМДП-А проводят в условиях, описанных в примере 2. Выход сырца ГМДП-А составляет 67,62 г (90% на ДБЭ ГМДП-А и 56,7% на ДС).
Очистку и выделение сырца ГМДП-А осуществляют методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ в условиях, описанных в примере 2.
Получают 66,7 г ГМДП-А (выход 88,7% на ДБЭ ГМДП-А и 55,9% на ДС), содержащую 97% целевого вещества; 0,4% суммарно посторонних примесей имеющую максимальное содержание единичной посторонней примеси 0,19%.
Пример 5
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминоеой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
Реакцию конденсации проводят в условиях, описанных в примере 2, с использованием исходных реагентов: 85, г (0,172 М) N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамовой кислоты и 88,0 г (0,172 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты трифторацетата.
Сырец ДБЭ ГМДП-А очищают сочетанным методом ионообменной и препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ в условиях, описанных в примере 2. Из нормализованного до объема 1 л очищенного водного раствора ДБЭ ГМДП-А отбирают аликвоту и определяют в ней методом аналитической ВЭЖХ с применением стандартного образца содержание ДБЭ ГМДП-А и примесей. Выход продукта по данным анализасоставляет 105,20 г (70% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А)
Раствор 105,20 г БДЭ ГМДП-А в 1,0 л воды помещают в кубовую колбу и упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К маслянистому кубовому остатку добавляют 0,250 л этилового спирта, взбалтыванием получают однородный раствор и переливают его в мерную колбу вместимостью 1,0 л. Добавлением этилового спирта нормализуют объем раствора очищенного ДБЭ ГМДП-А до 1,0 л.
Из 25,0 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% Pd приготавливают 14,7 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
Перед проведением гидрогенолиза воду максимально декантируют, катализатор дважды промывают порциями по 0,10 л этилового спирта и приливают к нему последовательно 0,50 л этилового спирта; 0,114 г (0,114 мл) 64%-ного раствора гидразин гидрата (0,073 г в пересчете на 100%-ный ГГ) и 16,57 г (0,014 л) муравьиной кислоты.
Получение и очистку ГМДП-А проводят в условиях, описанных в примере 2.
Выход сырца ГМДП-А составляет 72,63 г (87% на ДБЭ ГМДП-А и 60,9% на ДС).
Выход очищенного ГМДП-А составляет 71,5 г (85,6% на ДБЭ ГМДП-А и 59,9% на ДС). Содержание целевого вещества 98%; посторонних примесей, суммарно, 1%; максимальное содержание единичной посторонней примеси 0,31%.
Пример 6 (по прототипу)
Получение дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ ГМДП-А)
К раствору 83 г (0,168 М) N-ацетил глюкозаминил (1-4) - N-ацетилмурамовой кислоты в 4,17 л диметилформамида при температуре минус 2°C±2°C прибавляют 26 мл триэтиламина и 78,15 г (0,24 М) реагента Вудворда К. Смесь перемешивают при температуре минус 2°C±2°C в течение 1 часа и затем 1-1,5 часа до получения прозрачного раствора. Раствор 161,51 г (0,310 М) дибензилового эфира L-аланил-D-глутаминовой кислоты трифторацетата в смеси 21 мл триэтиламина и 0,520 л диметилформамида прикапывают при перемешивании в течение 15-20 минут и оставляют при комнатной температуре на 20-часовую выдержку. Отбирают пробу раствора и контролируют завершенность реакции методом ВЭЖХ. Реакцию считают завершенной, когда на ВЭЖХ хроматограмме остаточное содержание активированного ДС непревышает 5%, а ДП - 2%.
К реакционной массе прибавляют 0,520 л 50%-ного водного этанола и упаривают ее на ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C. Кубовый остаток очищают методом ионнообменной хроматографии последовательно на колонках, упакованных сорбентом «Dowex», сначала в (H+-форме), а потом в (CH3COO-форме). В обоих случаях элюэнтом служит 50% водный этанол. Элюат с целевым продуктом упаривают на ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К кубовому остатку приливают 0,600 л метанола и переводят его в раствор. Добавлением к раствору диэтилового эфира высаждают дибензиловый эфир N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты. Выход продукта после вакуумной сушки при 25°C составляет 104,20 г (38% на ДС).
Получение N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ГМДП-А)
Из 4,25 г двуххлористого палладия с содержанием 59,80% приготавливают 2,5 г палладиевой черни, которую хранят под слоем 0,250 л воды.
50,00 г дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты растворяют в 0,800 л 75% уксусной кислоты и приливают к суспензии катализатора. При интенсивном перемешивании и комнатной температуре проводят гидрогенолиз. Через 4 часа от начала реакции мешалку останавливают и, после осаждения катализатора на дно реактора, отбирают пробу раствора для определения конца реакции. Контроль ведут через каждые 0,5 часа методом ВЭЖХ по содержанию остаточного ДБЭ ГМДП-А. Реакцию считают завершенной при содержании ДБЭ ГМДП-А≤2%. Время исчерпывающего деблокирования (содержание ДБЭ ГМДП-А≤2%) составляет 6 часов. Супернатант над осевшим на дно реактора катализатором декантируют и дважды промывают порциями по 0,150 л этилового спирта для полноты извлечения целевого продукта. Декантант с промывным спиртом упаривают в ротационном вакуумном испарителе при остаточном давлении 10-15 мм рт.ст. и температуре в кубовой бане 38-42°C до прекращения испарения летучих. К кубовому остатку приливают 0,600 л метанола и переводят его в раствор. Добавлением к раствору диэтилового эфира высаждают сырец N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты. Выход продукта после вакуумной сушки составляет 31,00 г (78,1% на ДБЭ ГМДП-А и 26,6% на ДС). Содержание основного вещества и примесей, определенных методом аналитической ВЭЖХ, составляет, соответственно, 88,5% и 9,5%.
Сырец ГМДП-А в мерной колбе на 0,5 л растворяют в 0, 300 л воды и доводят объем колбы водой до метки. Очистку ГМДП-А осуществляют методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ как описано в примере 2.
Элюаты, близкие по хроматографическому профилю, содержащие целевой продукт, объединяют, концентрируют и лиофилизируют.
Получают 29,9 г ГМДП-А с выходом 75% на ДБЭ ГМДП-А и 25,7% на ДС, содержащую 88,5% целевого вещества; 9,5% суммарно посторонних примесей и имеющую максимальное содержание единичной посторонней примеси 2,84%.
Для исследования влияния условий проведения гидрогенолиза на состав примесей проводили идентификацию примесей в образцах, полученных в примерах 1-6. Для идентификации использовали комбинированный метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС) с ионизацией электороспреем (EMI-MS) в режиме отрицательных ионов. Масс-спектры, полученные таким образом, содержали интенсивные пики [M-H]- и незначительное число фрагментарных ионов. Это позволило установить молекулярные массы, рассчитать брутто-формулы и с большой долей вероятности предположить структуры основных примесных соединений, присутствующих в образцах.
В таблице 1 приведены предполагаемые структуры примесей, отвечающие их массовым числам, полученным методом ВЭЖХ-МС, в сравнении с массовыми числами ГМДП-А и его полупродукта ДБЭ ГМДП-А.
В таблице 2 приведены показатели качества ГМДП-А, полученной заявляемым способом либо по прототипу.
Показатели качества ГМДП-А, получаемой заявляемым способом, удовлетворяют требованиям, предъявляемым к фармацевтическим субстанциям: суммарное содержание посторонних примесей не более 1% и максимальное содержание единичной примеси - не более 0,5%.
Claims (1)
- Способ получения N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты, включающий конденсацию незащищенного производного мурамовой кислоты с защищенным линейным дипептидом и последующую стадию каталитического гидрогенолиза синтезированного дибензилового эфира N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамил-L-аланил-D-глутаминовой кислоты (ДБЭ), выполняемую над палладиевым катализатором, отличающийся тем, что согласно изобретению стадию каталитического гидрогенолиза осуществляют в среде этилового спирта с применением промотора катализатора - гидразин гидрата (ГГ) и восстановителя - муравьиной кислоты(МК) при следующих соотношениях реагентов:
соотношение по массе {ДБЭ:Pd}={1:0,100-0,500},
соотношение в массовых процентах {Pd:ГГ}={100:0,5-1,5},
соотношение в мольных эквивалентах {ДБЭ:МК}={1:2-4}.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015116161/15A RU2573991C1 (ru) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015116161/15A RU2573991C1 (ru) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2573991C1 true RU2573991C1 (ru) | 2016-01-27 |
Family
ID=55237041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015116161/15A RU2573991C1 (ru) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2573991C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5914332A (en) * | 1995-12-13 | 1999-06-22 | Abbott Laboratories | Retroviral protease inhibiting compounds |
| RU2181729C1 (ru) * | 2000-09-20 | 2002-04-27 | Калюжин Олег Витальевич | Производные мурамовой кислоты |
-
2015
- 2015-04-29 RU RU2015116161/15A patent/RU2573991C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5914332A (en) * | 1995-12-13 | 1999-06-22 | Abbott Laboratories | Retroviral protease inhibiting compounds |
| RU2181729C1 (ru) * | 2000-09-20 | 2002-04-27 | Калюжин Олег Витальевич | Производные мурамовой кислоты |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ABHIJIT ROYCHOWDHURY et al. Synthesis and Proinflammatory Properties of Muramyl Tripeptides Containing Lysine and Diaminopimelic Acid Moieties. ChemBioChem 2005, 6, PP.2088 - 2097. STEVEN M. SCHWARTZMAN, EDGAR RIBI. A Shortened Synthesis of Adjuvant Dipeptide (MDP), Preparative Biochemistry, 1980, 10, 3, PP. 255-267. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA001356B1 (ru) | Дигликозилированные 1,2-диолы как псевдосоединения сиалил- lewis x и сиалил-lewis a | |
| Hearn et al. | L-Proline-N-oxalic anhydride | |
| US20240262864A1 (en) | Echinocandin drug impurity, and preparation and purification methods and use thereof | |
| CN109796457B (zh) | 一种2-(3-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-1-基)乙基-1-醇的制备方法及其应用 | |
| RU2573991C1 (ru) | Способ получения n-ацетилглюкозаминил-n-ацетилмурамил-l-аланил-d-глутаминовой кислоты | |
| DK2493493T3 (en) | New bacitracinantibiotika | |
| JP2007534630A (ja) | グリコペプチドホスホン酸誘導体の塩酸塩 | |
| CN103917096A (zh) | 外周阿片样物质拮抗剂化合物的制备方法及所述化合物的中间体 | |
| CA2987708A1 (en) | A method for preparation of ibrutinib precursor | |
| EP1318142B1 (en) | T-butoxycarbonylaminoethylamine for the synthesis of pna monomer units, amino acid derivatives, intermediates thereof, and processes for productions of them | |
| Pao et al. | Effect of SerineO-Glycosylation onCis-TransProline Isomerization | |
| CN113185552A (zh) | 一种富马酸丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法 | |
| Mal et al. | Schellman Motif in Dehydrooligopeptides: Crystal and Molecular Structure of Boc‐Val‐ΔPhe‐Leu‐Phe‐Ala‐ΔPhe‐Leu‐OMe | |
| HUP0300387A2 (hu) | Glikopeptid és annak előállítása | |
| CN111517974A (zh) | 一种氨基酸n端烷基化衍生物及其制备方法和应用 | |
| US20150087808A1 (en) | Process for the manufacture of cyclic undecapeptides | |
| Phillips et al. | Synthesis and fast-atom-bombardment-mass spectrometry of N-acetylmuramoyl-l-alanyl-d-isoglutamine (MDP) | |
| DE69922150T2 (de) | Deoxyhypusin reagenz und peptide | |
| EP1615871B1 (en) | Process for the preparation of dialkyl 3-oxoglutarates | |
| Qian et al. | Design and Synthesis of Fmoc‐Thr [PO (OH)(OPOM)] for the Preparation of Peptide Prodrugs Containing Phosphothreonine in Fully Protected Form | |
| JP2866098B2 (ja) | 環状アミノ酸の製造方法 | |
| RU2304583C1 (ru) | Способ синтеза ди- и триаминохлоринов | |
| Kalashnikov et al. | Debenzylation of 2, 6, 8, 12-tetraacetyl-4, 10-dibenzyl-2, 4, 6, 8, 10, 12-hexaazatetracyclo [5.5. 0.03, 11.05, 9] dodecane | |
| CN109053771B (zh) | 一种托法替布的有关物质及其制备方法和应用 | |
| JPH08510215A (ja) | 合成アグルコダルバヘプチド抗生物質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |