RU2572721C1 - Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных - Google Patents
Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2572721C1 RU2572721C1 RU2014144674/15A RU2014144674A RU2572721C1 RU 2572721 C1 RU2572721 C1 RU 2572721C1 RU 2014144674/15 A RU2014144674/15 A RU 2014144674/15A RU 2014144674 A RU2014144674 A RU 2014144674A RU 2572721 C1 RU2572721 C1 RU 2572721C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amyloidosis
- animals
- experimental
- egg albumin
- native egg
- Prior art date
Links
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 title claims description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 16
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 8
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001018100 Homo sapiens Lysozyme C Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102100033468 Lysozyme C Human genes 0.000 description 2
- 206010038357 Renal amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 2
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 2
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 2
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 201000007891 familial visceral amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 201000008319 inclusion body myositis Diseases 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000005004 lymphoid follicle Anatomy 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 2
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940080237 sodium caseinate Drugs 0.000 description 2
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 102400000574 Amyloid-beta protein 42 Human genes 0.000 description 1
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- 206010030348 Open-Angle Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000006933 amyloid-beta aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 229940071162 caseinate Drugs 0.000 description 1
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000005086 glomerual capillary Anatomy 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 230000008722 morphological abnormality Effects 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000929 nociceptor Anatomy 0.000 description 1
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 201000006366 primary open angle glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007101 progressive neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 208000007153 proteostasis deficiencies Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, и может быть использовано для моделирования экспериментального амилоидоза у животных. Для этого проводят введение молодой мыши через день подкожно в течение 30 дней эксперимента белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, при этом в качестве белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, вводят 30% раствор нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке по 0,5 мл. Изобретение обеспечивает образование амилоидных масс преимущественно в печени, селезенке, почках у молодых мышей с целью дальнейшего использования их в экспериментах, например, при апробации способов лечения амилоидоза. 13 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии и может быть использовано для экспериментальной апробации методов профилактики и лечения системного амилоидоза.
Проблема амилоидоза в связи со старением человеческой популяции и увеличением числа больных, имеющих хронические воспалительные заболевания, а также числа больных с различными наследственными формами амилоидоза становится все более актуальной. Так указывают, что амилоидоз сердца обнаруживают у 2,3% умерших в возрасте до 50 лет, в возрастной группе 50-70 лет его выявляют у 30%, в группе 70-80 лет - уже у 41%, а у лиц, умерших в возрасте старше 90 лет, амилоидоз обнаруживали в 71-90% случаев [Козловская Л.В., Рамеев В.В., Саркисова И.А. Амилоидоз у пожилых // Клиническая медицина: Научно-практический журнал. - 2005. - Т. 83, N 6. - С. 12-20. - ISSN 0023-2149]. Более того, в настоящее время выясняется, что ряд заболеваний, патогенез которых ранее никак не связывали с амилоидогенезом, также реализуется через локальное отложение этого белка в тканях. Например, установлено, что причиной первичной открытоугольной глаукомы является отложение бета-амилоида и тау-белка не только в ганглионарные волокна сетчатки и аксоны зрительного нерва, но и проводящие пути зрительного анализатора вплоть до коры головного мозга [Chiu К., So K. - F., Chuen-Chung Chang R. Progressive Neurodegeneration of Retina in Alzheimer′s Disease - Are β-Amyloid Peptide and Tau New Pathological Factors in Glaucoma? // Glaucoma. Basic and Clinical Aspects. - 2013. Rumelt Sh. (Ed.), available from: http://www.intechopen.com/books/glaucoma-basic-and-clinical-aspects/progressive-neurodegeneration-of-retina-in-alzheimer-s-disease-are-amyloid-peptide-and-tau-nwe-patho].
Через накопление амилоидного белка реализуется патогенез целого ряда заболеваний: миозит с включениями [Kitazawa М., Green К.N., Caccamo A., La Ferla F.М. Genetically augmenting Abeta42 levels in skeletal muscle exacerbates inclusion body myositis-like pathology and motor deficits in transgenic mice // Amer. J. Pathol. - 2006. - V. 168, №6. - P. 1986-1997; Vattemi G., Nogalska A., King Engel W., D′Agostino C, Checler F., Askanas V. Amyloid-beta42 is preferentially accumulated in muscle fibers of patients with sporadic inclusion-body myositis // Acta Neuropathol. - 2009. - V. 117, №5. - P. 569-574.], деменция с тельцами Леви [Gomperts S.N., Rentz D.M., Moran E., Becker J.A., Locascio J.J., Klunk W.E., Mathis C.A., Elmaleh D.R., Shoup T., Fischman A.J., Hyman B.T., Growdon J. H. Johnson К.A. Imaging amyloid deposition in Lewy body diseases // Neurology. - 2008. - V. 71, №12. - P. 903-910], синдромы Альцгеймера [Irvine G.В., El Agnaf О.M., Shankar G.M, Walsh D.M. Protein aggregation in the brain: the molecular basis for Alzheimer′s and Parkinson′s diseases // Molecular Medicine. - 2008. - Vol. 14. - P. 451-464] и Дауна [Head E., Lott I.T. Down syndrome and beta-amyloid deposition // Current Opinion Neurology. - 2004. - V. 17, №2. - P. 95-100] и еще около 30 различных заболеваний [Luheshi L.V., Dobson С.M. Bridging the gap: from protein misfolding to protein misfolding diseases // FEBS Lett. - 2009. - Vol. 583. - P. 2581-2586]. Проведенный анализ исторических и современных литературных данных позволил сделать вывод, что исчерпывающих представлений об этиологии и патогенезе этого заболевания нет, а различные формы амилоидоза могут быть вызваны разными методическими приемами. В связи с этим, разработка новых моделей амилоидоза имеет не только прикладное, но и теоретическое значение. Новые модели амилоидоза необходимы для расширения научных представлений о патогенезе этого процесса, разработки методов профилактики и лечения. Известен способ моделирования экспериментального амилоидоза (Cohen A.S., Shirahama Т. Animal model for human disease: spontaneous and induced amyloidosis // Am. J. Pathol. - 1972. - Vol. 68, N 2. - P. 441-444; Грицман А.Ю. Некоторые вопросы экспериментальной терапии амилоидоза и резорбции амилоида: автореф. дисс. … канд. мед. наук / А.Ю. Грицман; М., 1974. - 24 с.), заключающийся в введении белым мышам через день по 0,5 мл 5%-ного казеината натрия в 0,05 М р-ре NaOH подкожно в течение 60 дней. Недостатком его является то, что приготовление раствора казеината связано с определенными сложностями, такими как поиск чистого казеина, необходимость растворения его точной навески в кипящем 0,25%-ном растворе гидроокиси натрия, фильтрование, стерилизация, хранение. Готовый раствор казеината натрия имеет щелочную реакцию, высокое содержание натрия, что резко ограничивает применение данной модели при исследовании функционального состояния почек, системы кровообращения, минерального обмена и других показателей, связанных с влиянием натрия и его определением.
Кроме того, известны патенты на экспериментальные модели амилоидоза и способы лечения экспериментального амилоидоза с помощью фармакологических препаратов RU 2270672 (51) МПК А61К 31/15; А61Р 13/12; RU 2306617 (51) МПК G09B 23/28; RU 2347279 (51) MIIK G09B 23/28; RU 2373581 (51) МПК G09B 23/28; RU 2446482 (51) МПК G09B 23/28; RU 2473133 (51) МПК G09B 23/28; А61К 31/502; А61Р 13/12; RU 2473134 (51) МПК G09B 23/28, в качестве амилоидогена в которых в основном используется альбумин, как основной белок плазмы крови, которую авторы получали как
от животных (свиньи), так и от человека, а также яичный альбумин, в том числе в сочетании с адъювантом Фрейнда.
Все известные способы получения экспериментального системного амилоидоза предполагают в качестве экспериментальных животных использование старых крыс, так как именно старческая брадитрофия тканей позволяет ставить вопрос о моделировании амилоидоза. На молодых крысах амилоидоз с использованием известных способов не воспроизводится из-за особенностей обмена веществ. Однако использование старых животных не позволяет проводить долгосрочный фармакологический эксперимент по лечению и профилактике амилоидоза. Продолжительность пребывания старых животных в каком-либо эксперименте резко ограничена преклонным возрастом.
Прототипом заявляемого изобретения является способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных (патент РФ на изобретение №2269825, Заалишвили Т. В., Козырев К. М., заявка №2004127649/14 от 15.09.04 г., МПК G09B 23/28), заключающийся во введении белым мышам через день по 1 мл нативного яичного альбумина подкожно через день из расчета на среднюю массу белых мышей самцов в возрасте 5-6 мес. - 23,3 г (0,05 мл/г массы тела) в течение 30 дней с соблюдением асептики. Нативный яичный альбумин извлекается из куриного яйца одноразовым шприцом без иглы после предварительной обработки 70% этиловым спиртом скорлупы и ее частичного снятия стерильным пинцетом. При таком способе моделирования амилоидоза получают модель с преимущественным поражением почек.
Недостатком такого способа является то, что не удается получить модель амилоидоза со значительным поражением селезенки, которую в дальнейшем можно было бы использовать для изучения и апробации новых методов лечения именно такой формы заболевания. Кроме того, известным способом получают модель амилоидоза на старых крысах, которых невозможно в дальнейшем использовать для долгосрочных фармакологических экспериментов по лечению и профилактике амилоидоза
Заявляемое изобретение решает задачу создания модели системного амилоидоза с преимущественным поражением селезенки на молодых животных с целью дальнейшего использования их в каких-либо экспериментах, например, при апробации различных способов лечения амилоидоза, а также расширение возможных средств для создания моделей амилоидоза.
Техническим результатом заявляемого изобретения является создание модели системного амилоидоза с преимущественным повреждением селезенки, а также возможность создания модели на молодых животных.
Этот технический результат достигается тем, что при моделировании экспериментального амилоидоза у животных, включающем введение молодой мыши через день подкожно в течение 30 дней эксперимента белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, при этом в качестве белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, вводят 30% раствор нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке по 0,5 мл.
Заявляемый способ осуществляют следующим образом. Нативный яичный альбумин извлекают из куриного яйца и пропускают через мелкое сито для удаления пленок. После этого 30 мл яичного альбумина размешиваются в 70 мл цельного обезжиренного молока до гомогенной взвеси, которая делится на разовые порции и замораживается для последующего использования при -20°C. Порции размораживали непосредственно перед использованием. Цельное коровье молоко представляет собой естественный раствор казеина, в котором казеин содержится в нативной форме в количестве от 2,8 до 3,5% (Черников М.П. Протеолиз и биологическая ценность белков. Казеины как собственно пищевые белки. - М.: Медицина, 1975. - 231 с.), что существенно отличается от использования растворов казеина в NaOH. Существенным недостатком применения раствора казеина в NaOH является то обстоятельство, что NaOH значительно раздражает болевые рецепторы, поэтому предлагаемая модель является более соответствующей Принципам надлежащей лабораторной практики (Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 53434-2009), существенным требованием которой является возможно меньшая дополнительная травматизация подопытных животных. Кроме того, заявляемый способ позволяет получить амилоидоз у молодых мышей двухмесячного возраста. Данное обстоятельство позволяет проводить долгосрочный фармакологический эксперимент по лечению и профилактике амилоидоза,
Таким образом, совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».
Сущность заявляемого изобретения не следует для специалистов явным образом из известного уровня медицины, поскольку из него не выявлена описанная выше возможность получения модели экспериментального амилоидоза у молодых животных, заключающаяся во введении белкового препарата подкожно, в качестве которого молодым белым мышам через день вводят смесь 30% нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке по 0,5 мл в течение 30 дней эксперимента, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».
Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность предлагаемого изобретения, может быть многократно использована в экспериментальной биологии и медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и легко воспроизводимом способе моделирования экспериментального амилоидоза у молодых животных, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».
По истечении времени эксперимента (дней) животных декапитировали. Органы: печень, левая почка, селезенка - изъяты, измерены миллиметровой лентой, взвешены на электронных аналитических весах и зафиксированы 10% нейтральным формалином. После формалиновой фиксации органы были отмыты проточной водой, проведены через батарею спиртов восходящей крепости для обезвоживания и залиты парафином.
Из парафиновых заливок были приготовлены срезы толщиной 10 мкм, которые монтировали на предметных стеклах, после чего депарафинировали и окрашивали 1% раствором красного конго для выявления амилоида и докрашивали гематоксилином. Срезы микроскопировали в проходящем свете на микроскопе Лейка с последующей видеофиксацией микрофотографией в цифровом виде, а также на поляризационном микроскопе МИН-8.
Для технологического контроля постановки реакции на конго-красный и исключения ложноположительных результатов совместно с экспериментальными срезами в одной партии окрашивался препарат почки человека, больного почечным амилоидозом, препараты №0697,0698 (на всех фото приведены эталонные линейки).
Пример
Проведена серия опытов из двух групп:
Первая группа - интактные животные, содержавшиеся с подопытными в одной клетке в течение всех 30-ти дней эксперимента для обеспечения однородности условий содержания животных (5 белых молодых мышей).
Вторая группа - подопытные животные (5 белых молодых мышей), которым через день в течение 30-ти суток подкожно вводили смесь 30% яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке через день, по 0,5 мл.
Необходимое минимальное количество животных определяли согласно Принципам надлежащей лабораторной практики (Национальный стандарт Российской Федерации ГОСТ Р 53434-2009).
Полученный морфологический материал предварительно был подвергнут макроморфологическому исследованию. В интактной группе при дневном освещении форма, линейные размеры, цвет и консистенция органов животных были в пределах возрастной нормы, каких-либо патологических изменений, вызванных болезнями лабораторных животных, не выявлено. Капсула почки снимается легко. Данные о влажной массе изъятых органов представлены в таблице.
В подопытной группе при дневном освещении визуально форма, линейные размеры и цвет печени животных этой группы не отличались от интактных, однако консистенция печени была более плотная, чем у интактных мышей, на срезе печень выглядела как сальная. Внешних различий формы, консистенции, цвета и линейных размеров почек в этой группе не наблюдалось. Капсула почки снимается легко.
Селезенка была резко увеличена во всех размерах до 2,0±0,1 см в длину, 0,4±0,1 см в ширину и толщину в направлении от широкой части к селезеночной связке, в контроле 1,5±0,1?0,3±0,1?0,1±0,05 см, соответственно, консистенция плотная. Данные о влажной массе изъятых органов представлены в таблице. Другие органы визуально не изменены.
Примечание: значения р приведены по отношению к интактной труппе. Различия групп определены с помощью z-теста.
Для выявления амилоидоза красным конго окрашивали парафиновые срезы почек, селезенки и печени подопытных животных с последующим докрашиванием гематоксилином параллельно с парафиновыми срезами почки человека с клинически установленным диагнозом амилоидоз почки, обезличенные препараты почки были предоставлены республиканским бюро судебно-медицинской экспертизы Чувашской Республики. После того как окрашенные красным конго срезы почки человека были подвергнуты световой микроскопии, в процессе которой наблюдалась классическая гистологическая картина почечного амилоидоза при окраске конго, световой микроскопии были подвергнуты срезы экспериментальных животных. У животных контрольной группы наблюдалась следующая гистологическая картина:
1. Почка (рис. 1): на срезах толщиной 5 мкм почки диаметр клубочка составлял около 50-70 мкм. Нефротелий был представлен клетками, приближающимися к кубическому эпителию с округлыми ядрами и цитоплазмой, прокрашивающейся в кирпичный цвет. По количеству ядер в петлях капилляров клубочка определялось от 45 до 60 клеток и примерно столько же эритроцитов. Наблюдается картина нефрита.
Канальцевый эпителий не имел морфологических отклонений и соответствовал гистологической норме.
2. Селезенка (рис. 2): большая часть препаратов представлена белой пульпой, состоящей из лимфоидных фолликулов. Красная пульпа представлена ретикулярной стромой и эритроцитами. Морфологический паттерн соответствует гистологической норме.
3. Печень (рис. 3): паренхима печени имела вид булыжной мостовой (вымывание гликогена в процессе подготовки срезов к окраске) - нормальная гистологическая картина. Цитоплазма клеток светооптически пустая, содержала мелкие зерна. Морфологический паттерн соответствует гистологической норме.
У животных подопытной группы гистологическая картина соответствовала наличию амилоидоза:
1. Почка (рис. 4): диаметр клубочков составлял 50-80 мкм. Нефротелий представлен плоским, а иногда кубическим эпителием. Количество клеток, содержащих ядра, в капиллярах клубочков от 20 до 40. Отдельные сегменты клубочка представлены гомогенными конго-положительными депозитами (показано стрелкой), не содержащими ядер, которые сдавливали петли капилляров, о чем свидетельствуют ядра овальной или уплощенной формы. Выявлялись единичные эритроциты. Просветы канальцев несколько сужены, имели фестончатое строение, содержали зернистые массы. Цитоплазма канальцевого эпителия была мелкозернистая, со слабой конго-положительной реакцией.
2. Селезенка. Препараты (рис. 5, 6): лимфоидные фолликулы селезенки либо циркулярно окружены амилоидом (показано стрелкой - А), во многих фолликулах лимфоидная ткань замещена амилоидом с разной степенью выраженности (показано стрелкой - Б). Красная пульпа практически отсутствует. Препараты (рис. 7, 8): отмечается присутствие большого количества мегакариоцитов на разных стадиях формирования. Препараты (рис. 9, 10): выявляются единичные указанные клетки с патологическими митозами, заключающимися в дехроматизации и рассеянии ядерного материала на два полюса клетки неравномерно (показано стрелкой).
3. Печень. Препараты рис. 11, 12, 13: цитоплазма гепатоцитов при окраске конго красным мелко вакуолизирована. Амилоид-положительное вещество выявлялось только в строме портальных трактов и стенках сосудов.
4. Таким образом, в результате проведенного исследования получены гистоморфологические доказательства эффективности применения смеси 30% нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке для моделирования системного экспериментального амилоидоза у животных. Преимущественно поражаемым органом в данной модели системного амилоидоза является селезенка.
Claims (1)
- Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных, включающий введение молодой мыши через день подкожно в течение 30 дней эксперимента белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, при этом в качестве белкового препарата, содержащего нативный яичный альбумин, вводят 30% раствор нативного яичного альбумина в цельном обезжиренном молоке по 0,5 мл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014144674/15A RU2572721C1 (ru) | 2014-11-05 | 2014-11-05 | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014144674/15A RU2572721C1 (ru) | 2014-11-05 | 2014-11-05 | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2572721C1 true RU2572721C1 (ru) | 2016-01-20 |
Family
ID=55087023
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014144674/15A RU2572721C1 (ru) | 2014-11-05 | 2014-11-05 | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2572721C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2781331C1 (ru) * | 2021-11-25 | 2022-10-11 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Животная модель цинк-зависимого амилоидогенеза при болезни Альцгеймера |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU629548A1 (ru) * | 1977-05-18 | 1978-10-25 | Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР | Способ моделировани амилоидоза |
| SU1202560A1 (ru) * | 1984-07-24 | 1986-01-07 | Киевский Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Туберкулеза,Пульмонологии И Грудной Хирургии Им.Акад.Ф.Г.Яновского | Способ моделировани амилоидоза |
| RU2269825C1 (ru) * | 2004-09-15 | 2006-02-10 | Северо-Осетинская государственная медицинская академия | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2306617C1 (ru) * | 2006-04-18 | 2007-09-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2373581C1 (ru) * | 2008-07-10 | 2009-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2446482C1 (ru) * | 2010-11-13 | 2012-03-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
-
2014
- 2014-11-05 RU RU2014144674/15A patent/RU2572721C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU629548A1 (ru) * | 1977-05-18 | 1978-10-25 | Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР | Способ моделировани амилоидоза |
| SU1202560A1 (ru) * | 1984-07-24 | 1986-01-07 | Киевский Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Туберкулеза,Пульмонологии И Грудной Хирургии Им.Акад.Ф.Г.Яновского | Способ моделировани амилоидоза |
| RU2269825C1 (ru) * | 2004-09-15 | 2006-02-10 | Северо-Осетинская государственная медицинская академия | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2306617C1 (ru) * | 2006-04-18 | 2007-09-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2373581C1 (ru) * | 2008-07-10 | 2009-11-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
| RU2446482C1 (ru) * | 2010-11-13 | 2012-03-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SATO J at al. Accumulation and absorption of serum amyloid A and apolipoprotein E fragments in the course of AA amyloidosis: a study in a mouse model.// Ann Clin Lab Sci. 2014 Summer;44(3):249-53. BUXBAUM JN. Animal models of human amyloidoses: are transgenic mice worth the time and trouble?// FEBS Lett. 2009 Aug 20;583(16):2663-73. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2781331C1 (ru) * | 2021-11-25 | 2022-10-11 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Животная модель цинк-зависимого амилоидогенеза при болезни Альцгеймера |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ghanavati et al. | A perfusion procedure for imaging of the mouse cerebral vasculature by X-ray micro-CT | |
| Gyoneva et al. | Altered motility of plaque-associated microglia in a model of Alzheimer’s disease | |
| US10493108B2 (en) | Non-invasive in vivo imaging and methods for treating diabetes | |
| Granziera et al. | Long-term monitoring of post-stroke plasticity after transient cerebral ischemia in mice using in vivo and ex vivo diffusion tensor MRI | |
| Wang et al. | Microglia in the primary somatosensory barrel cortex mediate trigeminal neuropathic pain | |
| Bignold et al. | David Paul von Hansemann: Contributions to Oncology: Context, Comments and Translations | |
| RU2572721C1 (ru) | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных | |
| RU2269825C1 (ru) | Способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных | |
| Seal et al. | Implementing the chick embryo model to study vestibular developmental disorders | |
| TWI327473B (en) | Composition for treating a cerebrovascular disease and a method for increasing expression of erythropoietin | |
| Deba et al. | An animal model to test reversal of cognitive decline associated with beta-amyloid pathologies | |
| RU2384893C1 (ru) | Способ моделирования хронического нефротоксического гломерулонефрита в эксперименте | |
| CN110384712B (zh) | 核酸适配子在制备治疗阿尔茨海默氏病药物中的应用 | |
| Khalaniia et al. | Pathomorphology of peripheral organs of immunogenesis in cats with spontaneous feline infectious peritonitis | |
| US20120076869A1 (en) | Methods of treating dementia using omentum | |
| CN120514821B (zh) | 一种树鼩帕金森模型造模方法 | |
| JP6339568B2 (ja) | 神経変性障害の治療で使用するための血漿中の成長因子を含む組成物 | |
| CN101107924A (zh) | 一种复合型早老性痴呆动物模型的构建方法 | |
| Liu | The formation mechanism of lewy body at DMV related to parkinson’s disease | |
| CN108938631A (zh) | Sag在制备治疗发育期缺氧缺血脑损伤疾病的药物中的应用 | |
| CN118924879A (zh) | 一种manf蛋白在制备抗衰老药物中的应用 | |
| Schaufler | The role of heme and heme-oxygenase-1 in repetitive mild traumatic brain injury | |
| CN113041339A (zh) | 一种功能性配方食品及其在制备脑出血后继发性脑损伤防治药物中的应用 | |
| Bowen | The cupula of the ear | |
| RU2532525C2 (ru) | Экзогенно-индуцируемая животная модель болезни альцгеймера |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171106 |