[go: up one dir, main page]

RU2569459C1 - Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure - Google Patents

Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure Download PDF

Info

Publication number
RU2569459C1
RU2569459C1 RU2014148456/10A RU2014148456A RU2569459C1 RU 2569459 C1 RU2569459 C1 RU 2569459C1 RU 2014148456/10 A RU2014148456/10 A RU 2014148456/10A RU 2014148456 A RU2014148456 A RU 2014148456A RU 2569459 C1 RU2569459 C1 RU 2569459C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
heart failure
chronic heart
copies
concentration
mirna
Prior art date
Application number
RU2014148456/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Игорь Витальевич Жиров
Анатолий Глебович Кочетов
Андрей Александрович Скворцов
Ольга Викторовна Лянг
Ринат Рашитович Гимадиев
Александр Андреевич Абрамов
Агунда Владимировна Засеева
Валерий Павлович Масенко
Сергей Николаевич Терещенко
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения России (ФГБУ "РКНПК" МЗ РФ)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения России (ФГБУ "РКНПК" МЗ РФ) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский кардиологический научно-производственный комплекс" Министерства здравоохранения России (ФГБУ "РКНПК" МЗ РФ)
Priority to RU2014148456/10A priority Critical patent/RU2569459C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2569459C1 publication Critical patent/RU2569459C1/en

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnologies.
SUBSTANCE: method includes the human blood test by the method of polimerase chain reaction with hybridisation-fluorescent detection of products of amplification. The circulating levels of microRNA are determined with simultaneous determination of concentration of microRNA-423-5r more than 35500 copies/mcl and mikroRNA-34a-5r more than 4538 copies/mcl establish chronic heart failure, and at simultaneous determination of concentration mikrornk-423-5r above 35500 copies/mcl and the concentration of microRNA-21-5r above 711755 copies/mcl the chronic heart failure against the background of inflammatory cardiomyopathy is identified.
EFFECT: invention allows to diagnose with high reliability the chronic heart failure at early stages of the disease.
2 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано в дифференциальной диагностике хронической сердечной недостаточности (ХСН) и хронической сердечной недостаточности на фоне воспалительной кардиомиопатии.The invention relates to medicine, namely to cardiology, and can be used in the differential diagnosis of chronic heart failure (CHF) and chronic heart failure in the presence of inflammatory cardiomyopathy.

Несмотря на достигнутые успехи в изучении патогенеза и лечения хронической сердечной недостаточности прогноз при данном состоянии остается неблагоприятным и сопоставимым с таковым при различных злокачественных новообразованиях. Это связано с тем, что в последние годы не выявлены новые патогенетические схемы заболевания, являющиеся потенциальными терапевтическими мишенями.Despite the successes achieved in the study of the pathogenesis and treatment of chronic heart failure, the prognosis in this condition remains unfavorable and comparable with that for various malignant neoplasms. This is due to the fact that in recent years no new pathogenetic patterns of the disease have been identified, which are potential therapeutic targets.

Известен способ диагностики хронической сердечной недостаточности, включающий исследование образцов сыворотки или плазмы человека и приведения в контакт биологического образца с антителом к проBNP(1-108), детектирование проBNP(1-108) в образце и корреляцию между количеством обнаруженных комплексов антиген-антитело с клиническим состоянием субъекта.A known method for the diagnosis of chronic heart failure, including the study of serum or human plasma and bringing into contact of a biological sample with an antibody to proBNP (1-108), detecting proBNP (1-108) in the sample and the correlation between the number of detected antigen-antibody complexes with the clinical the state of the subject.

(Патент РФ №2315773, МПК C07K 16/26, опубл. 27.01.2008 г.).(RF patent No. 2315773, IPC C07K 16/26, published on January 27, 2008).

Недостатки данного способа связаны с тем, что имеется ряд других состояний, при которых повышается содержание данного вещества. Сюда относятся беременность, хроническая почечная недостаточность, тромбоэмболические осложнения. Соответственно, проведение точной дифференциальной диагностики в связи с этим затруднено. Кроме того, у ряда категорий больных - в частности у пожилых, пациентов с избыточной массой тела, содержание проBNP не увеличивается даже в случае клинически значимой хронической сердечной недостаточности.The disadvantages of this method are due to the fact that there are a number of other conditions in which the content of a given substance increases. This includes pregnancy, chronic renal failure, thromboembolic complications. Accordingly, it is difficult to make an accurate differential diagnosis. In addition, in a number of categories of patients — in particular, elderly, overweight patients, the pro-BNP content does not increase even in the case of clinically significant chronic heart failure.

Задачей изобретения является создание достоверного способа дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, позволяющего с высокой точностью устанавливать этиологию заболевания для дальнейшего проведения контроля эффективности лечения.The objective of the invention is the creation of a reliable method for differential diagnosis of the etiology of chronic heart failure, which allows you to accurately determine the etiology of the disease for further monitoring of the effectiveness of treatment.

Технический результат заключается в повышении достоверности и точности способа, в том числе на ранних стадиях заболевания.The technical result consists in increasing the reliability and accuracy of the method, including in the early stages of the disease.

Это достигается тем, что в заявляемом способе дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, включающем исследование крови человека, согласно изобретению, в крови методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии.This is achieved by the fact that in the claimed method of differential diagnosis of the etiology of chronic heart failure, including the study of human blood, according to the invention, circulating miRNA levels are determined in the blood by the polymerase chain reaction method with hybridization-fluorescence detection of amplification products and, at the same time, the concentration of miRNA-423-5r is determined more than 35500 copies / μl and miRNA-34a-5p more than 4538 copies / μl establish chronic heart failure, and at the same time determined and miR-423-5r concentration over 35500 copies / l and the concentration of miR-21-5r more than 711,755 copies / l establish chronic heart failure against inflammatory cardiomyopathy.

В последние годы активно изучается возможность воздействия на основные процессы регуляции внутриклеточной транскрипции, проявляющиеся в изменении процессов метаболизма и фиброза. Эти процессы закономерно меняются в процессе формирования хронической сердечной недостаточности и зависят как от стадии, так и от этиологии.In recent years, the possibility of influencing the main processes of regulation of intracellular transcription, manifested in a change in the processes of metabolism and fibrosis, has been actively studied. These processes naturally change during the formation of chronic heart failure and depend on both the stage and etiology.

Несмотря на то, что эти процессы являются сложными, комплексными и мультимодальными, имеется возможность разновекторного влияния на них, модулируя эпигенетическую активность. Это связано с наличием систем, регулирующих данные внутриклеточные процессы на верхнем (корневом) уровне. К числу таких систем относятся микроРНК.Despite the fact that these processes are complex, complex and multimodal, there is the possibility of a multidirectional effect on them, modulating epigenetic activity. This is due to the presence of systems that regulate these intracellular processes at the upper (root) level. These systems include microRNAs.

МикроРНК представляют собой большое количество различных видов одноцепочечных молекул РНК, вовлеченных в процессы эпигенетической регуляции синтеза большого количества различных белков, ферментов, структурных и регуляторных молекул, а также посттранскрипционного подавления активности генов.MicroRNAs are a large number of different types of single-stranded RNA molecules involved in the processes of epigenetic regulation of the synthesis of a large number of different proteins, enzymes, structural and regulatory molecules, as well as post-transcriptional suppression of gene activity.

Перспективы использования микроРНК в диагностике сердечно-сосудистых заболеваний прежде всего связаны с недавним обнаружением нового класса РНК - циркулирующих микроРНК. Хотя до недавнего времени считалось, что время жизни молекул РНК вне клеток очень коротко, введение новых более чувствительных методов позволило обнаружить постоянно присутствующий в крови и физиологических жидкостях класс микроРНК. Устойчивость микроРНК к эндонуклеазам объясняется формированием надмолекулярных комплексов с белковыми молекулами, а также инкапсуляцией микроРНК в липидный слой с образованием наноструктурных комплексов, называемых экзосомами.The prospects for using miRNAs in the diagnosis of cardiovascular diseases are primarily associated with the recent discovery of a new class of RNA - circulating miRNAs. Although until recently it was believed that the lifetime of RNA molecules outside the cells was very short, the introduction of new, more sensitive methods made it possible to detect a class of miRNAs constantly present in blood and physiological fluids. The resistance of miRNAs to endonucleases is explained by the formation of supramolecular complexes with protein molecules, as well as the encapsulation of miRNAs in the lipid layer with the formation of nanostructure complexes called exosomes.

Осуществление способа.The implementation of the method.

Образцы цельной крови собирают в пробирки, содержащие ЭДТА, и центрифугируют при 3000 g в течение 5 минут. Выделение общей РНК (длина цепи менее 1000 н.п.) производят методом адсорбционной колоночной хроматографии на смоле из 200 мкл плазмы крови. Затем осуществляют реакцию обратной транскрипции и синтеза первой цепи кДНК. Для определения уровней исследуемых индивидуальных микроРНК используют химические модификации LNA специфических праймеров и анализируют методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации «в режиме реального времени». Данные по экспрессии микроРНК нормализуют на исходный объем цельной крови.Whole blood samples are collected in tubes containing EDTA and centrifuged at 3000 g for 5 minutes. Isolation of total RNA (chain length less than 1000 bp) is carried out by adsorption column chromatography on a resin from 200 μl of blood plasma. Then carry out the reaction of reverse transcription and synthesis of the first strand of cDNA. To determine the levels of the studied individual microRNAs, chemical modifications of LNA specific primers are used and analyzed by PCR with hybridization-fluorescence detection of amplification products “in real time”. Data on miRNA expression normalize to the original volume of whole blood.

При одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность.With the simultaneous determination of the concentration of miRNA-423-5p more than 35500 copies / μl and miRNA-34a-5p more than 4538 copies / μl establish chronic heart failure.

При одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии.With the simultaneous determination of miRNA-423-5p concentration of more than 35500 copies / μl and miRNA-21-5p concentration of more than 711755 copies / μl, chronic heart failure is established against the background of inflammatory cardiomyopathy.

Пример 1.Example 1

Пациент 49 лет с жалобами на одышку, отеки нижних конечностей. В анамнезе длительно текущая нелеченная артериальная гипертония и перенесенный миокардит. Для назначения специфической терапии требуется определение возможной этиологии сердечной недостаточности - воспалительная или нет.A 49-year-old patient with complaints of shortness of breath, swelling of the lower extremities. A history of long-term untreated arterial hypertension and myocarditis. To prescribe specific therapy, it is necessary to determine the possible etiology of heart failure - inflammatory or not.

С этой целью в соответствии с заявляемым способом были определены циркулирующие микроРНК. Концентрация микроРНК-423-5р составила 84000 копий/мкл и концентрация микроРНК-21-5р составила 823568 копий/мкл. В связи с этим определяющим является воспалительная этиология ХСН. Назначено специфическое лечение со значимым клиническим улучшением.For this purpose, in accordance with the claimed method, circulating miRNAs were determined. The concentration of miRNA-423-5r was 84,000 copies / μl and the concentration of miRNA-21-5r was 823568 copies / μl. In this regard, the inflammatory etiology of heart failure is decisive. Specific treatment was prescribed with significant clinical improvement.

Пример 2.Example 2

Пациент 38 лет с жалобами на одышку, отеки голеней и стоп, плохую переносимость физической нагрузки. В анамнезе перенесенный миокардит и долговременное злоупотребление алкоголем. Для решения вопроса о возможной воспалительной причине сердечной недостаточности и необходимости специфической терапии определены циркулирующие уровни микро РНК по заявляемому способу. Концентрация микроРНК-423-5р составила 57345 копий/мкл и концентрация микроРНК-21-5р составила 11214 копий/мкл. Это показывает на то, что причиной сердечной недостаточности является алкогольная кардиомиопатия. На фоне воздержания от алкоголя и отсутствия противовоспалительной терапии наблюдается значимое улучшение клинической симптоматики.38-year-old patient with complaints of shortness of breath, swelling of the legs and feet, poor tolerance of physical activity. History of myocarditis and long-term alcohol abuse. To solve the question of a possible inflammatory cause of heart failure and the need for specific therapy, circulating levels of micro RNA were determined by the present method. The concentration of miRNA-423-5r was 57345 copies / μl and the concentration of miRNA-21-5r was 11214 copies / μl. This indicates that alcohol cardiomyopathy is the cause of heart failure. Against the background of abstinence from alcohol and the absence of anti-inflammatory therapy, a significant improvement in clinical symptoms is observed.

По заявляемому способу проведено исследование 100 человек, из которых 56 больных с клинически и инструментально подтвержденной ХСН и 44 составили контрольную группу, среди которых 15 (34%) имели ранее установленное сердечно-сосудистое заболевание (ССЗ) без сердечной недостаточности (СН) и 29 (66%) - практически здоровые добровольцы.According to the claimed method, a study of 100 people was conducted, of which 56 patients with clinically and instrumentally confirmed CHF and 44 made up the control group, among which 15 (34%) had previously established cardiovascular disease (CVD) without heart failure (HF) and 29 ( 66%) are practically healthy volunteers.

Таким образом, исследование активности различных микроРНК у пациентов с хронической сердечной недостаточностью дают возможность проведения дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, что позволит провести дифференциальную диагностику ХСН, в том числе и на ранних этапах, а также контроль эффективности лечения.Thus, the study of the activity of various miRNAs in patients with chronic heart failure makes it possible to conduct differential diagnosis of the etiology of chronic heart failure, which will allow differential diagnosis of heart failure, including in the early stages, as well as monitoring the effectiveness of treatment.

Claims (1)

Способ дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, включающий исследование крови человека, отличающийся тем, что в крови методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии. A method for differential diagnosis of the etiology of chronic heart failure, including a study of human blood, characterized in that the circulating miRNA levels are determined in the blood by polymerase chain reaction with hybridization-fluorescence detection of amplification products and, at the same time, the concentration of miRNA-423-5p is determined to be more than 35500 copies / μl and miRNA-34a-5p more than 4538 copies / μl establish chronic heart failure, and while determining the concentration of miRNA-423-5r more than 35500 opium / l and the concentration of miR-21-5r more than 711,755 copies / l establish chronic heart failure against inflammatory cardiomyopathy.
RU2014148456/10A 2014-12-02 2014-12-02 Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure RU2569459C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014148456/10A RU2569459C1 (en) 2014-12-02 2014-12-02 Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014148456/10A RU2569459C1 (en) 2014-12-02 2014-12-02 Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2569459C1 true RU2569459C1 (en) 2015-11-27

Family

ID=54753491

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148456/10A RU2569459C1 (en) 2014-12-02 2014-12-02 Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2569459C1 (en)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017093353A1 (en) * 2015-12-01 2017-06-08 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii (Cnic) Method for diagnosing cardiomyopathies
RU2745337C1 (en) * 2020-04-21 2021-03-24 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пензенский государственный университет" (ОУ ВО "Пензенский государственный университет") Method for early diagnosis of developing chronic heart failure
RU2748529C1 (en) * 2020-09-01 2021-05-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России) Method for determining etiology of chronic heart failure
RU2838260C1 (en) * 2025-03-06 2025-04-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" (ФГБНУ "РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского") SET OF OLIGODEOXYRIBONUCLEOTIDE PRIMERS FOR DIAGNOSING CARDIOVASCULAR DISEASES AND DETECTING RISK OF THEIR DEVELOPMENT BASED ON BIOMOLECULAR MARKER microRNA hsa-miR-145-3p BY QUANTITATIVE PCR AND USE THEREOF

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2315773C2 (en) * 2002-08-07 2008-01-27 Био-Рад Пастер Specific antibodies for diagnosis of cardiac insufficiency

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2315773C2 (en) * 2002-08-07 2008-01-27 Био-Рад Пастер Specific antibodies for diagnosis of cardiac insufficiency

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TIJSEN A.J. ET AL., MiR423-5p as a circulating biomarker for heart failure. Circ Res., 2010, v.106, no.6, p. 1035-1039. *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017093353A1 (en) * 2015-12-01 2017-06-08 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii (Cnic) Method for diagnosing cardiomyopathies
US11459612B2 (en) 2015-12-01 2022-10-04 Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii (F.S.P.) Method for diagnosing cardiomyopathies
RU2745337C1 (en) * 2020-04-21 2021-03-24 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пензенский государственный университет" (ОУ ВО "Пензенский государственный университет") Method for early diagnosis of developing chronic heart failure
RU2748529C1 (en) * 2020-09-01 2021-05-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ кардиологии" Минздрава России) Method for determining etiology of chronic heart failure
RU2838260C1 (en) * 2025-03-06 2025-04-14 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский научный центр хирургии имени академика Б.В. Петровского" (ФГБНУ "РНЦХ им. акад. Б.В. Петровского") SET OF OLIGODEOXYRIBONUCLEOTIDE PRIMERS FOR DIAGNOSING CARDIOVASCULAR DISEASES AND DETECTING RISK OF THEIR DEVELOPMENT BASED ON BIOMOLECULAR MARKER microRNA hsa-miR-145-3p BY QUANTITATIVE PCR AND USE THEREOF

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bye et al. Circulating microRNAs predict future fatal myocardial infarction in healthy individuals–The HUNT study
CA2982486C (en) Nucleic acid markers for rapid diagnosis of kawasaki disease and kit for detection of the nucleic acid markers
Huang et al. Circulating miRNA29 family expression levels in patients with essential hypertension as potential markers for left ventricular hypertrophy
EP3294910A1 (en) Method for diagnosis and prognosis of chronic heart failure
RU2014120427A (en) IDENTIFICATION OF MICRORNA IN PLASMA FOR DETECTION OF EARLY STAGES OF COLORECTAL CANCER
CN102876676A (en) Blood serum/blood plasma micro ribonucleic acid (miRNA) marker relevant with pancreatic cancer and application thereof
RU2569459C1 (en) Method of differential diagnostics of aetiology of chronic heart failure
CN109295204B (en) Peripheral blood mononuclear cell annular RNAs for diagnosing coronary heart disease and related application
CA2916848C (en) Detection of brain cancer
Szabo et al. Transcriptomic biomarkers in safety and risk assessment of chemicals
Baulina et al. NGS-identified circulating miR-375 as a potential regulating component of myocardial infarction associated network
CN108165623A (en) Application of miRNA, product using miRNA and detection method
WO2014187884A2 (en) Mirnas as non-invasive biomarkers for heart failure
Coelho-Lima et al. Overcoming heparin-associated RT-qPCR inhibition and normalization issues for microRNA quantification in patients with acute myocardial infarction
CN105063194B (en) The diagnosis marker of Parkinson a kind of and its application
Huang et al. The association of circulating miR-30a, miR-29 and miR-133 with white-coat hypertension
RU2569458C1 (en) Method of diagnostics of chronic heart failure by using circulating levels of microrna
Vasu et al. Identification of novel endogenous control miRNAs in heart failure for normalization of qPCR data
JP2012019784A5 (en)
CN108977533A (en) It is a kind of for predicting the miRNA combination object of chronic hepatitis B inflammation damnification
CN108004316A (en) Kit for predicting acute myocardial infarction risk
CN111286531A (en) Application of circulating nucleic acid as marker of hypertension, diabetes and hyperlipidemia
CN107488724B (en) Peripheral blood circular RNA marker for noninvasive diagnosis of active tuberculosis and application
CN109486945A (en) A kind of miRNA detection kit and its application in diagnosis coronary lumen stenosis
JPWO2019117306A1 (en) How to help detect Alzheimer's disease