RU2569305C1

RU2569305C1 - CRYSTALLINE FORM OF 2-CHLORO-4-METHOXY-N-[4-(8-METHYL-IMIDAZO[1,2-a]PYRIDIN-2-YL)-PHENYL]-BENZAMIDE, ACTIVE COMPONENT, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND MEDICINAL AGENT

Info

Publication number: RU2569305C1
Application number: RU2014145116/04A
Authority: RU
Inventors: Сергей Викторович Леонов; Елена Ивановна Марусич
Priority date: 2014-11-10
Filing date: 2014-11-10
Publication date: 2015-11-20

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to a crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N-[4-(8-methyl-imidazo[1,2-a]pyridin-2-yl)-phenyl]-benzamide of formula 1

. The invention also relates to a pharmaceutical composition and a medicinal agent based on a compound of formula 1, which can be used to prevent and treat a proliferative disease associated with the triggering of Hedgehog (Hh) embryonic signalling cascade.

EFFECT: obtaining a crystalline form of a compound of formula 1, characterised by high rate of dissolution and high storage stability.

6 cl, 1 dwg, 2 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к новому физиологически активному веществу, новому ингибитору запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh)-имидазо[1,2-a]пиридин-2-ил-фенил бензамиду, его новой кристаллической форме, активному компоненту для фармацевтических композиций, к фармацевтическим композициям и лекарственным средствам, содержащим ингибитор запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh), способу лечения пролиферативных заболеваний, таких как рак поджелудочной железы или рак простаты.The invention relates to a new physiologically active substance, a new inhibitor of the triggering of the embryonic signaling cascade Hedgehog (Hh) -imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl-phenyl benzamide, its new crystalline form, the active component for pharmaceutical compositions, to pharmaceutical compositions and drugs containing a Hedgehog (Hh) embryonic signaling cascade inhibitor, a method for treating proliferative diseases such as pancreatic cancer or prostate cancer.

Рак поджелудочной железы является одним из самых смертоносных злокачественных новообразований. Среднее значение продолжительности жизни после постановки диагноза составляет 2-8 месяцев, и только 1-4% всех пациентов с аденокарциномой поджелудочной железы срок увеличивается до 5 лет после установления диагноза [Bardeesy N, et al. Nat. Rev. Cancer 2002, 2, 897-909 и Singh AP, et al. Cancer Res. 2004, 64, 622-30]. Необратимый исход от рака поджелудочной железы связано с поздней диагностикой и отсутствием эффективной терапии для лечения. В большинстве случаев болезнь диагностируют на этапе, когда он местнораспространен или уже появляются метастазы в другие органы. Современные методы терапии, которые основываются на сочетании химиотерапии или операции и излучения, по-прежнему оказываются недостаточными для многих пациентов. Расположенная в верхней части живота в забрюшинной области поджелудочная железа тесно связана со многими крупными структурами, включая воротную вену, желудок, двенадцатиперстную кишку, желчный проток и верхнюю брыжеечную артерию.Pancreatic cancer is one of the deadliest malignancies. The average life expectancy after diagnosis is 2-8 months, and only 1-4% of all patients with pancreatic adenocarcinoma, the period increases to 5 years after diagnosis [Bardeesy N, et al. Nat. Rev. Cancer 2002, 2, 897-909; and Singh AP, et al. Cancer Res. 2004, 64, 622-30]. The irreversible outcome of pancreatic cancer is associated with late diagnosis and the lack of effective therapy for treatment. In most cases, the disease is diagnosed at a stage when it is locally distributed or metastases to other organs already appear. Modern methods of therapy, which are based on a combination of chemotherapy or surgery and radiation, still prove to be insufficient for many patients. The pancreas located in the upper abdomen in the retroperitoneal region is closely associated with many large structures, including the portal vein, stomach, duodenum, bile duct, and superior mesenteric artery.

Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) - это несколько основных сигнальных путей (например, Hedgehog, Notch, Wnt), которые встречаются в большинстве процессов, необходимых для нормального развития эмбриона. Сигнальный путь Hedgehog был найден у мухи-дрозофилы и является основным регулятором процесса дифференцирования клеток, формирования тканей и клеточного размножения. Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) играет решающую роль в онкогенезе, когда происходит его возобновление в тканях взрослого организма посредством любых мутаций или других механизмов. Сигнальный каскад Hedgehog (Hh) является важным формирователем онкогенеза по меньшей мере в одной трети всех типов рака.The Hedgehog (Hh) signaling cascade is a few of the main signaling pathways (e.g., Hedgehog, Notch, Wnt) that are found in most processes necessary for the normal development of the embryo. The Hedgehog signaling pathway was found in a Drosophila fly and is the main regulator of the process of cell differentiation, tissue formation and cell reproduction. The Hedgehog (Hh) signaling cascade plays a decisive role in oncogenesis when it is resumed in adult tissues through any mutations or other mechanisms. The Hedgehog (Hh) signaling cascade is an important driver of oncogenesis in at least one third of all types of cancer.

Онкогенные мутации в сигнальном каскаде Hedgehog (Hh) были обнаружены в базальных клетках карциномы и медулобластомы, а повышенная активность Hh сигнальной системы приводит к раку поджелудочной железы, толстого кишечника, желудка, печени и раку простаты. Предположительное количество заболеваний раком с лиганд-зависимой активацией Hh сигнального каскада в США превышает 200000 случаев ежегодно и приблизительно в 10 раз больше по всему миру.Oncogenic mutations in the Hedgehog (Hh) signaling cascade were found in basal cells of carcinoma and meduloblastoma, and increased Hh signaling activity leads to cancer of the pancreas, colon, stomach, liver, and prostate cancer. The estimated number of cancers with ligand-dependent activation of the Hh signaling cascade in the United States exceeds 200,000 cases annually, and about 10 times more worldwide.

Человеческий белок Sonic Hedgehog (SHh) синтезируется в виде 45 КДа белка-предшественника, который подвергается внутримолекулярному расщеплению для получения 20 КДа фрагмента, который является ответственным за нормальные сигнальные активности Hedgehog (Hh) протеинов. На поверхности клетки сигнал Hedgehog (Hh), как полагают, непосредственно связывается с 12-кратно пронизывающим мембрану протеином Patched (Ptc) и 7-кратно пронизывающим мембрану протеином Smoothened (Smo). В нормальных зрелых клетках Ptc является негативным регулятором активности белка Smo. Связывание SHh с Ptc подавляет блокирующий эффект Ptc относительно Smo, позволяя Smo преобразовать SHh сигнал через плазматическую мембрану. Сигнальный каскад, инициированный Smo, выражается в активации транскрипционных факторов Gli, которые мигрируют в клеточное ядро, где они регулируют целевой фактор транскрипции, осуществляющий рост клеток и дифференциацию в эмбриональных клетках, и в этом случае неконтролируемая активация клеток взрослого организма связана со злокачественными новообразованиями.The human Sonic Hedgehog (SHh) protein is synthesized as a 45 KDa precursor protein, which undergoes intramolecular cleavage to produce a 20 KDa fragment, which is responsible for the normal signaling activities of Hedgehog (Hh) proteins. On the surface of the cell, the Hedgehog (Hh) signal is thought to be directly associated with the 12-fold membrane piercing protein Patched (Ptc) and the 7-fold membrane piercing protein Smoothened (Smo). In normal mature cells, Ptc is a negative regulator of Smo protein activity. The binding of SHh to Ptc suppresses the blocking effect of Ptc relative to Smo, allowing Smo to convert the SHh signal through the plasma membrane. The signaling cascade initiated by Smo is expressed in the activation of transcription factors Gli, which migrate to the cell nucleus, where they regulate the target transcription factor, which performs cell growth and differentiation in embryonic cells, in which case uncontrolled activation of adult cells is associated with malignant neoplasms.

Эффект цитотоксической активности в отношении клеток рака поджелудочной железы человека (PANC1) или рака простаты (DU145) за счет ингибирования клеточного сигнального пути Hedgehog был продемонстрирован в значительном количестве публикаций, в частности [Y. Rifai, et al. J. Nat. Prod. 2010, 73, 995-997 или Y. Rifai, et al. Bioorg. and Med. Chem. Letters, 2011, 21, 718-722].The effect of cytotoxic activity on human pancreatic cancer cells (PANC1) or prostate cancer (DU145) due to inhibition of the Hedgehog cell signaling pathway has been demonstrated in a significant number of publications, in particular [Y. Rifai, et al. J. Nat. Prod. 2010, 73, 995-997 or Y. Rifai, et al. Bioorg. and Med. Chem. Letters, 2011, 21, 718-722].

Вследствие указанных факторов поиск новых инновационных лекарственных средств для борьбы с раком поджелудочной железы является актуальным, а поиск эффективных ингибиторов запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh), а именно имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил-фенил бензамидов, представляется исключительно важной, актуальной и многообещающей задачей.Due to these factors, the search for new innovative drugs to fight pancreatic cancer is relevant, and the search for effective inhibitors of the triggering of the Hedgehog (Hh) embryonic signaling cascade, namely imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl-phenyl benzamide, seems to be extremely important, relevant and promising task.

Авторами данного изобретения были выполнены синтез и широкие исследования активности различных имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил-фенил бензамидов, среди которых наиболее предпочтительным и перспективным является 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамид формулы 1.The authors of this invention have carried out the synthesis and extensive studies of the activity of various imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl-phenyl benzamides, among which 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8 methyl imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1.

В публикации международной заявки [WO 2011118812, National Univ. Corp. Hokkaido University (JP)] описываются биоактивные вещества для лечения нейродегенеративных заболеваний, среди которых упоминается соединение формулы А, которые позволяют провести более фундаментальную терапию нейродегенеративных заболеваний, подавляя окислительную стресс-индуцированную гибель нервных клеток, и применяется для лечения болезни Паркинсона.In the publication of the international application [WO 2011118812, National Univ. Corp. Hokkaido University (JP)] describes bioactive substances for the treatment of neurodegenerative diseases, among which a compound of formula A is mentioned, which allow for a more fundamental treatment of neurodegenerative diseases, suppressing oxidative stress-induced death of nerve cells, and is used to treat Parkinson's disease.

Из уровня техники известно, что наиболее релевантными источниками соединений, близких по структуре соединению формулы 1, является патент США [US 8486936, АЛЛА ХЕМ, ЛЛС (US)], который описывает соединения формулы I:It is known from the prior art that the most relevant sources of compounds that are similar in structure to a compound of formula 1 is US patent [US 8486936, ALLA KHEM, LLS (US)], which describes compounds of formula I:

Из уровня техники также известно, что соединение формулы 1 приводится в п.19 формулы изобретения публикации [WO 2010129620, LLC INNOVATIVE PHARMA (RU0] международной заявки и в п.19 формулы изобретения евразийской заявки [EА 201101579, ООО "ИФАРМА" (RU)].It is also known from the prior art that a compound of formula 1 is given in paragraph 19 of the claims of the publication [WO 2010129620, LLC INNOVATIVE PHARMA (RU0) of the international application and in paragraph 19 of the claims of the Eurasian application [EA 201101579, IFARMA LLC (RU) ].

Также известно, что соединение 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамид зарегистрировано в CAS Registry под номером 1254584-50-3 и предлагается к продаже фирмой ChemDiv, Inc (US).It is also known that the compound 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide is registered in the CAS Registry under the number 1254584- 50-3 and is offered for sale by ChemDiv, Inc (US).

Однако в отношении соединения CAS 1254584-50-3 до настоящего времени имеется только сообщение о том, что это соединение получено комбинаторным способом посредством очистки из изопропанола, но его кристаллическая форма неизвестна и не охарактеризована.However, with respect to compound CAS 1254584-50-3, so far there is only a message that this compound was obtained by the combinatorial method by purification from isopropanol, but its crystalline form is unknown and not characterized.

Необходимо выяснить, способно ли данное соединение кристаллизоваться и иметь кристаллические формы. Затем, если кристаллические формы существуют, необходимо найти воспроизводимые способы получения химически стабильных кристаллических форм и выявить новые кристаллические формы данного соединения.It is necessary to find out whether this compound is able to crystallize and have crystalline forms. Then, if crystalline forms exist, it is necessary to find reproducible methods for the preparation of chemically stable crystalline forms and to identify new crystalline forms of this compound.

Стабильность в твердом состоянии и срок хранения активных компонентов являются очень важными факторами. Лекарственное соединение и композиции, включающие его, должны обладать способностью эффективно храниться в течение значительных периодов времени, не проявляя значительного изменения физико-химических свойств активного компонента (например, его химического состава, плотности, гигроскопичности и растворимости). Кроме того, также является важным представить лекарственный препарат в форме, которая является как можно более чистой. В этом отношении аморфные соединения могут представлять значительные проблемы. Например, с такими соединениями труднее обращаться и включать их в лекарственные формы по сравнению с кристаллическим соединением, за счет сомнительной растворимости, и часто оказывается, что они нестабильны и химически загрязнены. Специалисту в данной области будет понятно, что, если лекарственный препарат можно легко получать в стабильной кристаллической форме, то можно решить вышеуказанные проблемы. Обычно невозможно предсказать только на основе молекулярной структуры, каким будет поведение соединения при кристаллизации, и обычно это можно установить только эмпирически.Solid stability and shelf life of active components are very important factors. A drug compound and compositions comprising it must be able to be effectively stored for significant periods of time without showing a significant change in the physicochemical properties of the active component (for example, its chemical composition, density, hygroscopicity and solubility). In addition, it is also important to present the drug in a form that is as clean as possible. In this regard, amorphous compounds can present significant problems. For example, it is more difficult to handle such compounds and include them in dosage forms compared with the crystalline compound, due to dubious solubility, and it often turns out that they are unstable and chemically contaminated. One skilled in the art will understand that if a drug can be easily obtained in a stable crystalline form, then the above problems can be solved. It is usually impossible to predict only on the basis of the molecular structure what the behavior of the compound will be during crystallization, and usually this can only be established empirically.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в нахождении новых стабильных кристаллических форм 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида.Thus, it is an object of the present invention to find new stable crystalline forms of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide .

Технический результат настоящего изобретения заключается в улучшенных свойствах данного соединения при его использовании, в частности более высокая скорость растворения и повышенная стабильность при хранении.The technical result of the present invention is to improve the properties of this compound when it is used, in particular, a higher dissolution rate and increased storage stability.

Поставленная задача и технический результат достигаются получением новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, или фармацевтически приемлемой соли с дифракционными пиками на порошковой рентгеновской дифрактограмме, которые характеризуют следующие показатели: углы дифракции (2θ, °), интенсивность (I, %).The task and technical result are achieved by obtaining a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt with diffraction peaks in a powder X-ray diffraction pattern, which characterize the following indicators: diffraction angles (2θ, °), intensity (I,%).

Предметом настоящего изобретения является новая кристаллическая форма 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, имеющая на порошковой рентгеновской дифрактограмме характеристические пики при следующих углах дифракции 2θ (±0,10°): 8,9; 12,4; 15,0; 17,5; 19,9; 21,7The subject of the present invention is a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1, having a powder X-ray diffraction pattern, characteristic peaks at the following diffraction angles 2θ (± 0.10 °): 8.9; 12.4; 15.0; 17.5; 19.9; 21.7

Предметом настоящего изобретения является активный компонент, обладающий свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, представляющий собой новую кристаллическую форму 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1.The subject of the present invention is an active component having the property of a Hedgehog embryonic signaling trigger inhibitor, which is a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2 yl) phenyl] benzamide of the formula 1.

Предметом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, содержащая в эффективном количестве активный компонент, обладающий свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, по настоящему изобретению.An object of the present invention is a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of proliferative diseases associated with triggering a Hedgehog embryonic signaling cascade, containing in an effective amount an active ingredient having the property of a Hedgehog embryonic signaling cascade inhibitor of the present invention.

Фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемыми эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с активным компонентом по настоящему изобретению может включать и другие активные ингредиенты, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов, например аллергических реакций. При необходимости использования фармацевтических композиций по настоящему изобретению в клинической практике они могут смешиваться для изготовления различных форм, при этом они могут включать в свой состав традиционные фармацевтические носители; например пероральные формы (такие как, таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, растворы или суспензии); формы для инъекций (такие как, растворы или суспензии для инъекций, или сухой порошок для инъекций, который требует лишь добавления воды для инъекций перед использованием); местные формы (такие как, мази или растворы).The pharmaceutical composition may include pharmaceutically acceptable excipients. By pharmaceutically acceptable excipients are meant diluents, excipients and / or carriers used in the pharmaceutical field. The pharmaceutical composition along with the active component of the present invention may include other active ingredients, provided that they do not cause undesirable effects, such as allergic reactions. If it is necessary to use the pharmaceutical compositions of the present invention in clinical practice, they can be mixed for the manufacture of various forms, while they can include traditional pharmaceutical carriers; for example, oral forms (such as tablets, gelatine capsules, pills, solutions or suspensions); injection forms (such as injectable solutions or suspensions, or dry powder for injection, which only requires the addition of water for injection before use); local forms (such as ointments or solutions).

Носители, используемые в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в том числе в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтеграторы, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, бесцветные агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.The carriers used in the pharmaceutical compositions of the present invention are carriers that are used in the pharmaceutical field to obtain common forms, including oral agents using binders, lubricants, disintegrants, solvents, diluents, stabilizers, suspending agents, colorless agents flavoring agents of taste; antiseptic agents, solubilizers, stabilizers are used in injection forms; in local forms, bases, diluents, lubricants, antiseptic agents are used.

Более предпочтительной фармацевтической композицией для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения пролиферативного заболевания, выбранного из рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, рака простаты или гепатоцеллюлярной карциномы.A more preferred pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of proliferative diseases associated with the initiation of the Hedgehog embryonic signaling cascade is a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of a proliferative disease selected from colon cancer, lung cancer, stomach cancer, prostate cancer or hepatocellular carcinoma.

Более предпочтительной фармацевтической композицией для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является фармацевтическая композиция для профилактики или лечения рака поджелудочной железы.A more preferred pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of proliferative diseases associated with the initiation of the Hedgehog embryonic signaling cascade is a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of pancreatic cancer.

Фармацевтическая композиции по настоящему изобретению может быть получена смешением активного компонента, представляющего собой новую кристаллическую форму 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, с инертным наполнителем, растворителем и/или другими фармацевтически приемлемыми эксципиентами.The pharmaceutical composition of the present invention can be obtained by mixing the active component, which is a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) - phenyl] benzamide of the formula 1, with an inert excipient, solvent and / or other pharmaceutically acceptable excipients.

Предметом настоящего изобретения является лекарственное средство для профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, в виде таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее в эффективном количестве активный компонент или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.An object of the present invention is a medicament for the prophylaxis or treatment of proliferative diseases associated with the initiation of the Hedgehog embryonic signaling cascade, in the form of tablets, capsules or injections, placed in a pharmaceutically acceptable package containing in an effective amount an active ingredient or a pharmaceutical composition of the present invention.

Предметом настоящего изобретения является способ профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, согласно которому нуждающемуся субъекту вводят эффективное количество активного компонента, обладающего свойством ингибитора запуска эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, или фармацевтической композиции, или лекарственного средства по настоящему изобретению.An object of the present invention is a method for the prophylaxis or treatment of proliferative diseases associated with triggering a Hedgehog embryonic signaling cascade, according to which a needy subject is administered an effective amount of an active component having the property of a Hedgehog embryonic signaling cascade inhibitor or pharmaceutical composition or drug of the present invention.

Более предпочтительным способом профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является способ профилактики или лечения пролиферативного заболевания, выбранного из рака толстой кишки, рака легкого, рака желудка, рака простаты или гепатоцеллюлярной карциномы.A more preferred method for preventing or treating proliferative diseases associated with triggering a Hedgehog embryonic signaling cascade is a method for preventing or treating a proliferative disease selected from colon cancer, lung cancer, stomach cancer, prostate cancer, or hepatocellular carcinoma.

Более предпочтительным способом профилактики или лечения пролиферативных заболеваний, связанных с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog, является способ профилактики или лечения рака поджелудочной железы.A more preferred method for the prevention or treatment of proliferative diseases associated with the initiation of the Hedgehog embryonic signaling cascade is a method for the prevention or treatment of pancreatic cancer.

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно, местно или ректально). Клиническая дозировка активного компонента (субстанции), фармацевтической композиции или лекарственного комбинированного средства, включающих фармацевтически эффективное количество активного компонента, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 10~500 мг, предпочтительно 50~300 мг. Поэтому во время приготовления фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 10~500 мг, предпочтительно 50~300 мг. В соответствии с указаниями врача или фармацевта данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно от одного до шести раз).Medicines may be administered orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, topically or rectally). The clinical dosage of the active component (s), pharmaceutical composition or combination drug comprising a pharmaceutically effective amount of the active component in patients can be adjusted depending on the therapeutic efficacy and bioavailability of the active ingredients in the body, their metabolic rate and excretion from the body, as well as depending on the age, sex and stage of the patient’s disease, while the daily dose in adults is usually 10 ~ 500 mg, preferably 50 ~ 300 mg. Therefore, during the preparation of the pharmaceutical compositions of the present invention in the form of dosage units, the above effective dosage should be taken into account, with each dosage unit of the preparation containing 10 ~ 500 mg, preferably 50 ~ 300 mg. In accordance with the instructions of a doctor or pharmacist, these drugs can be taken several times during certain periods of time (preferably from one to six times).

Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.The following are definitions of terms that are used in the description of the present invention.

«Агонисты» означают соединения, которые, связываясь с рецепторами определенного типа, активно способствуют передаче этими рецепторами свойственного им специфического сигнала и тем самым вызывают биологический ответ клетки.“Agonists” means compounds that, by binding to receptors of a particular type, actively contribute to the transmission by these receptors of their specific signal and thereby elicit a biological response from the cell.

«Активный компонент» (лекарственное вещество, лекарственная субстанция, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства)."Active component" (drug substance, drug substance, drug-substance) means a physiologically active substance of synthetic or other (biotechnological, plant, animal, microbial and other) origin, having pharmacological activity and is the active principle of the pharmaceutical composition used for the manufacture and manufacture medicinal product (means).

«Антагонисты» означают лиганды, которые связываются с рецепторами определенного типа и не вызывают активного клеточного ответа. Антагонисты препятствуют связыванию агонистов с рецепторами и тем самым блокируют передачу специфического рецепторного сигнала.“Antagonists” means ligands that bind to receptors of a particular type and do not elicit an active cellular response. Antagonists inhibit the binding of agonists to receptors and thereby block the transmission of a specific receptor signal.

«Ингибиторы» (лат. inhibere - задерживать) означает вещество, замедляющее или предотвращающее течение какой-либо химической реакции; ферментативный ингибитор - вещество, замедляющее или блокирующее обратимо или необратимо протекание ферментативной реакции. Изучение ингибирования ферментов играет важную роль в создании лекарств, в изучении механизма действия и структуры ферментов."Inhibitors" (lat. Inhibere - to delay) means a substance that slows down or prevents the course of any chemical reaction; enzymatic inhibitor - a substance that slows down or blocks the reversible or irreversible course of an enzymatic reaction. The study of enzyme inhibition plays an important role in the creation of drugs, in the study of the mechanism of action and structure of enzymes.

«Лекарственное средство (препарат)» - комбинация нескольких лекарственных веществ для одновременного использования в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей, ректальных суспензий и гелей и др. готовых форм, предназначенная для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего. Лекарственные вещества в одном комплекте могут быть представлены в виде различных готовых форм, предназначенных для введения в организм животного или человека различными способами, например перорально и ректально.“Medicinal product (preparation)” - a combination of several medicinal substances for simultaneous use in the form of tablets, capsules, injections, ointments, rectal suspensions and gels and other finished forms, designed to restore, correct or alter physiological functions in humans and animals, and also for the treatment and prevention of diseases, diagnosis, anesthesia, contraception, cosmetology and other things. Medicinal substances in one set can be presented in the form of various ready-made forms intended for administration into an animal or human body in various ways, for example, orally and rectally.

«Лиганды» (от латинского ligo - связывать) представляют собой химические вещества (малая молекула, неорганический ион, пептид, белок и прочее), способные взаимодействовать с рецепторами, которые трансформируют это взаимодействие в специфический сигнал."Ligands" (from Latin ligo - bind) are chemicals (small molecule, inorganic ion, peptide, protein, etc.) that can interact with receptors that transform this interaction into a specific signal.

«Рецепторы» (от латинского recipere - получать, узнавать) представляют собой биологические макромолекулы, расположенные на цитоплазматической мембране клетки или внутриклеточно, способные специфически взаимодействовать с ограниченным набором физиологически активных веществ (лигандов) и трансформировать сигнал об этом взаимодействии в определенный клеточный ответ."Receptors" (from the Latin recipere - to receive, to recognize) are biological macromolecules located on the cytoplasmic membrane of a cell or intracellular, capable of specifically interacting with a limited set of physiologically active substances (ligands) and transforming the signal about this interaction into a specific cellular response.

«Сигнальный каскад» (сигнальная система, каскад передачи сигнала) означает совокупность взаимосвязанных последовательных и параллельных молекулярных процессов регуляции клеточного метаболизма внешними (первичными) сигналами, несущими в клетку информацию, что принципиально отличает их от других поступающих в клетку химических соединений, служащих для нее источником материи и энергии. Молекулярные механизмы передачи (трансдукции) внешних сигналов в клетку подразумевают не только передачу сигналов как таковую, но и весь комплекс событий, с ней сопряженных, в том числе усиление, ослабление и подавление (или выключение) сигналов.“Signal cascade” (signal system, signal transmission cascade) means a set of interconnected sequential and parallel molecular processes of regulation of cellular metabolism by external (primary) signals that carry information into the cell, which fundamentally distinguishes them from other chemical compounds entering the cell that serve as its source matter and energy. The molecular mechanisms of transmission (transduction) of external signals into the cell imply not only the transmission of signals as such, but also the whole complex of events associated with it, including amplification, attenuation and suppression (or switching off) of signals.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение общей формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как, консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, алгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназалъные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения. Фармацевтические композиции, как правило, получают с помощью стандартных процедур, предусматривающих смешение активного соединения с жидким или тонко измельченным твердым носителем. Для изготовления суппозиториев помимо активных компонентов используют также масло какао, сплавы его с парафином и гидрогенизированными жирами, растительные и животные гидрогенизированные жиры, твердый жир, ланоль, сплавы гидрогенизированных жиров с воском, твердым парафином и другие основы, разрешенные для медицинского применения."Pharmaceutical composition" means a composition comprising a compound of general formula 1 and at least one of the components selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable and pharmacologically compatible excipients, solvents, diluents, carriers, excipients, distributing and perceiving agents, delivery vehicles, such as preservatives, stabilizers, fillers, grinders, moisturizers, emulsifiers, suspending agents, thickeners, sweeteners, perfumes, flavors, antibacterials tal agents, fungicides, lubricants, prolonged delivery regulators, the choice and ratio of which depends on the nature and method of administration and dosage. Examples of suspending agents are ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene, sorbitol and sorbitol ether, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar-agar and tragacanth, as well as mixtures of these substances. Protection against the action of microorganisms can be provided with a variety of antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, sorbic acid and the like. The composition may also include isotonic agents, for example, sugars, sodium chloride and the like. The prolonged action of the composition can be achieved using agents that slow down the absorption of the active principle, for example aluminum monostearate and gelatin. Examples of suitable carriers, solvents, diluents and delivery vehicles are water, ethanol, polyalcohols, and also mixtures thereof, vegetable oils (such as olive oil) and injectable organic esters (such as ethyl oleate). Examples of excipients are lactose, milk sugar, sodium citrate, calcium carbonate, calcium phosphate and the like. Examples of grinders and distributors are starch, alginic acid and its salts, silicates. Examples of lubricants are magnesium stearate, sodium lauryl sulfate, talc, and high molecular weight polyethylene glycol. The pharmaceutical composition for oral, sublingual, transdermal, intramuscular, intravenous, subcutaneous, local or rectal administration of the active principle, alone or in combination with another active principle, can be administered to animals and humans in a standard administration form in the form of a mixture with traditional pharmaceutical carriers. Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, gelatine capsules, pills, powders, granules, chewing gums and oral solutions or suspensions, sublingual and buccal administration forms, aerosols, implants, local, transdermal, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intranasal or intraocular administration forms and rectal administration forms. Pharmaceutical compositions are generally prepared using standard procedures involving the mixing of the active compound with a liquid or finely divided solid carrier. For the manufacture of suppositories, in addition to the active components, cocoa butter, its alloys with paraffin and hydrogenated fats, vegetable and animal hydrogenated fats, solid fat, lanol, alloys of hydrogenated fats with wax, hard paraffin and other bases approved for medical use are also used.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные. (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как, холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.“Pharmaceutically acceptable salt” means the relatively non-toxic organic and inorganic salts of the acids and bases of the present invention. These salts can be obtained in situ during the synthesis, isolation or purification of the compounds or prepared specially. In particular, base salts can be prepared specifically based on the purified free base of the claimed compound and a suitable organic or inorganic acid. Examples of salts thus obtained are hydrochlorides, hydrobromides, sulfates, bisulfates, phosphates, nitrates, acetates, oxalates, valeriates, oleates, palmitates, stearates, laurates, borates, benzoates, lactates, tosylates, citrates, maleates, fumarates, succinates, tartrates mesylates, malonates, salicylates, propionates, ethanesulfonates, benzenesulfonates, sulfamates and the like. (A detailed description of the properties of such salts is given in Berge S. M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Salts of the claimed acids can also be specially prepared by reacting the purified acid with a suitable base, and metal and amine salts can be synthesized. Metal salts include sodium, potassium, calcium, barium, zinc, magnesium, lithium and aluminum salts, the most desirable of which are sodium and potassium salts. Suitable inorganic bases from which metal salts can be obtained are hydroxide, carbonate, sodium bicarbonate and hydride, potassium hydroxide and bicarbonate, potash, lithium hydroxide, calcium hydroxide, magnesium hydroxide, zinc hydroxide. As organic bases from which salts of the claimed acids can be obtained, amines and amino acids are selected that are sufficiently basic to form a stable salt and are suitable for medical use (in particular, they should have low toxicity). Such amines include ammonia, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, ethylamine, diethylamine, triethylamine, benzylamine, dibenzylamine, dicyclohexylamine, piperazine, ethylpiperidine, tris (hydroxymethyl) aminomethane and the like. In addition, tetraalkylammonium hydroxides, for example, such as choline, tetramethylammonium, tetraethylammonium and the like, can be used for salt formation. As amino acids, the main amino acids can be used - lysine, ornithine and arginine.

«Фармацевтически приемлемые эксципиенты» под фармацевтически приемлимыми эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители."Pharmaceutically acceptable excipients" by pharmaceutically acceptable excipients refers to pharmaceutical diluents, excipients and / or carriers.

Также изобретение поясняется чертежами.The invention is also illustrated by the drawings.

Фиг. 1. Порошковая рентгеновская дифрактограмма новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, полученной согласно настоящему изобретению. Зависимость интенсивность от угла 2θ, °.FIG. 1. X-ray powder diffraction pattern of a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1, obtained according to the present invention. Dependence of intensity on angle 2θ, °.

Представленные ниже примеры иллюстрируют, но не ограничивают изобретение.The following examples illustrate but do not limit the invention.

Пример 1. Метод синтеза соединения формулы 1. Синтез осуществляют в соответствии со Схемой 1.Example 1. The synthesis method of the compounds of formula 1. The synthesis is carried out in accordance with Scheme 1.

Смесь аминопиридина 2 (0,04 моль) и нитробромацетофенона 3 (0,04 моль) в этаноле (80 мл) кипятят в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают и сушат на открытом воздухе. Чистый желтый кристаллический продукт 4 был получен с выходом 66-75%.A mixture of aminopyridine 2 (0.04 mol) and nitrobromoacetophenone 3 (0.04 mol) in ethanol (80 ml) is boiled for 3 hours, then cooled to room temperature. The precipitate formed is filtered off, washed and dried in the open. Pure yellow crystalline product 4 was obtained with a yield of 66-75%.

Смесь соединения 4 (0,05 моль), SnCl₂ (0,18 моль), воды (60 мл) и соляной кислоты (80 мл) перемешивают при 60°C в течение 1 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и выливают в воду (500 мл). Полученную смесь подщелачивают 10%-ным раствором соды до pH 9-10. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат на открытом воздухе и перекристаллизовывают из этанола, что дает чистое соединение 5 в виде белых кристаллов с выходом 75-88%.A mixture of compound 4 (0.05 mol), SnCl ₂ (0.18 mol), water (60 ml) and hydrochloric acid (80 ml) was stirred at 60 ° C for 1 h, then cooled to room temperature and poured into water (500 ml). The resulting mixture was alkalinized with a 10% soda solution to a pH of 9-10. The precipitate formed is filtered off, washed with water, dried in the open air and recrystallized from ethanol, which affords pure compound 5 as white crystals with a yield of 75-88%.

Карбоновую кислоту 6 (1,1 ммоль) добавляют к раствору 1, 1′-карбонилдиимидазола (1,2 мМоль) в абсолютном ДМФ (5 мл). Реакционную смесь перемешивают при 80°C в течение 1 ч без доступа воздуха. Затем добавляют амин 5 (1 ммоль) и полученную реакционную смесь перемешивают при 100°C дополнительно 3-4 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. После этого реакционную смесь вливают в 10-кратный объем воды, осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат на открытом воздухе. Соединение формулы 1 получают с выходом 75%, LC MS m/z 392 (M+1).Carboxylic acid 6 (1.1 mmol) is added to a solution of 1,1′-carbonyldiimidazole (1.2 mmol) in absolute DMF (5 ml). The reaction mixture was stirred at 80 ° C for 1 h without air. Then amine 5 (1 mmol) was added and the resulting reaction mixture was stirred at 100 ° C for an additional 3-4 hours and left overnight at room temperature. After that, the reaction mixture is poured into a 10-fold volume of water, the precipitate is filtered off, washed with water and dried in the open air. The compound of formula 1 is obtained in 75% yield, LC MS m / z 392 (M + 1).

Пример 2. Получение кристаллической формы метилового эфира 3-(7-((N-n-толилацетамидо)метил)-2,3)4,5-тетрагидробензо[f][1,4]оксазепин-4-карбоксамидо)тиофен-2-карбоновой кислоты формулы 1.Example 2. Obtaining a crystalline form of methyl ester 3- (7 - ((Nn-tolylacetamido) methyl) -2,3) 4,5-tetrahydrobenzo [f] [1,4] oxazepine-4-carboxamido) thiophene-2-carbon acids of the formula 1.

10 мг 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 растворяют в 10 мл метанола, нагревая смесь до 40°C. К раствору, полученному в результате этого, по каплям добавляют 10 мл воды при той же температуре в течение 20 мин и полученную смесь охлаждают до 5°C в течение суток, после чего отфильтровывают и собирают кристаллическое вещество. Кристаллы сушат при 50°C при пониженном давлении до тех пор, пока масса кристаллов не перестает уменьшаться при дальнейшем высушивании, в результате чего было произведено 9,75 мг белого твердого вещества.10 mg of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1 is dissolved in 10 ml of methanol, heating the mixture to 40 ° C. To the solution resulting from this, 10 ml of water was added dropwise at the same temperature over 20 minutes, and the resulting mixture was cooled to 5 ° C during the day, after which it was filtered off and the crystalline material was collected. The crystals are dried at 50 ° C. under reduced pressure until the crystal mass ceases to decrease upon further drying, resulting in 9.75 mg of a white solid.

Порошковый рентгеноструктурный анализ полученной кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 проводят при помощи дифрактометра Rigaku с детектором Saturn 944 HG и медного излучения CuKα. На спектре порошковой рентгеновской дифрактограммы кристаллического вещества (Фиг. 1) наблюдают характеристические пики при углах дифракции 2θ (±0,10°): 8,9; 12,4; 15,0; 17,5; 19,9; 21,7.X-ray powder diffraction analysis of the obtained crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1 is carried out using a Rigaku diffractometer with Saturn 944 HG and CuKα radiation detector. On the spectrum of the powder x-ray diffractogram of a crystalline substance (Fig. 1), characteristic peaks are observed at diffraction angles of 2θ (± 0.10 °): 8.9; 12.4; 15.0; 17.5; 19.9; 21.7.

Пример 3. Биологические испытания и определение ингибирующей активности (IC₅₀) соединения формулы 1.Example 3. Biological tests and determination of the inhibitory activity (IC ₅₀ ) of the compounds of formula 1.

Для идентификации ингибиторов SHh-сигнального каскада белка используют клетки С3Н10Т1/2. SHh-белок активирует клетки C3Н10Т1/2, что приводит к их остеогенной дифференцировке [Kinto N., Iwamoto M., Enomoto-Iwamoto М., Noji S., Ohuchi X., Yoshioka X., Kataoka H., Wada Y., Yuhao Г., Takahashi H.E., Yoshiki C., Yamaguchi A. Fibroblasts expressing Sonic hedgehog induce osteoblast differentiation and ectopic bone formation. FEBS Lett. 1997; 404 (2-3): 319-23 и Spinella-Jaegle S., Rawadi G. Kawai S., Gallea S., Faucheu C., Mollat P., Courtois В., Bergaud В., Ramez V., Blanchet A.M., Adelmant G., Baron R., Roman-Roman S. Sonic hedgehog increases the commitment of pluripotent mesenchymal cells into the osteoblastic lineage and abolishes adipocytic differentiation. J. Cell. 2001; 114 (Pt 11): 2085-94] и, в частности, выраженному повышению фермента щелочной фосфатазы.C3H10T1 / 2 cells are used to identify inhibitors of the SHh signaling cascade of the protein. SHh protein activates C3H10T1 / 2 cells, which leads to their osteogenic differentiation [Kinto N., Iwamoto M., Enomoto-Iwamoto M., Noji S., Ohuchi X., Yoshioka X., Kataoka H., Wada Y., Yuhao G., Takahashi HE, Yoshiki C., Yamaguchi A. Fibroblasts expressing Sonic hedgehog induce osteoblast differentiation and ectopic bone formation. FEBS Lett. 1997; 404 (2-3): 319-23 and Spinella-Jaegle S., Rawadi G. Kawai S., Gallea S., Faucheu C., Mollat P., Courtois B., Bergaud B., Ramez V., Blanchet AM , Adelmant G., Baron R., Roman-Roman S. Sonic hedgehog increases the commitment of pluripotent mesenchymal cells into the osteoblastic lineage and abolishes adipocytic differentiation. J. Cell. 2001; 114 (Pt 11): 2085-94] and, in particular, a marked increase in the alkaline phosphatase enzyme.

Клетки культивируют в среде DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой в инкубаторе при температуре 37°C, 100% влажности и 5% содержанием CO₂. Клетки помещают в 384-луночные пластины и оставляют на ночь. На следующий день исследуемые соединения в концентрации 10 мкМ добавляют к клеткам, инкубируют в течение 30 мин, затем рекомбинантный (R&D, США) SHh белок в концентрации 0,3 мкг/мл добавляют и инкубируют в течении 3 дней. Клетки с ДМСО и клетки без SHh белка используют в качестве тест контроля. Для определения активности клеточной щелочной фосфатазы клетки лизируют в буфере, содержащем 0,2% Тритон-X100, лизаты инкубируют вместе с пролюминисцентной подложкой CSPD (Applied Biosystems, США) и измеряют люминесценцию с использованием анализатора VICTOR² V (PerkinElmer, США).Cells were cultured in DMEM medium with 10% fetal calf serum in an incubator at a temperature of 37 ° C, 100% humidity and 5% CO ₂ . Cells are placed in 384-well plates and left overnight. The next day, the studied compounds at a concentration of 10 μM are added to the cells, incubated for 30 min, then recombinant (R&D, USA) SHh protein at a concentration of 0.3 μg / ml is added and incubated for 3 days. Cells with DMSO and cells without SHh protein are used as a test control. To determine the activity of cellular alkaline phosphatase, cells are lysed in a buffer containing 0.2% Triton-X100, lysates are incubated with a CSPD pro-luminescent substrate (Applied Biosystems, USA) and luminescence is measured using a VICTOR ² V analyzer (PerkinElmer, USA).

Для устранения неспецифического ингибирования соединениями щелочной фосфатазы клетки в первую очередь инкубируют с белком SHh в течение 3 дней, лизируют и добавляют до определения активности щелочной фосфатазы исследуемых соединений. Для устранения цитотоксичных соединений клетки инкубируют вместе с исследуемыми соединениями и SHh белками в течение 3 дней и количество живых клеток в соответствующих лунках определяют с использованием реагента CellTiter-Blue (Promega, США).To eliminate nonspecific inhibition by alkaline phosphatase compounds, cells are first incubated with SHh protein for 3 days, lysed and added until the activity of alkaline phosphatase of the studied compounds is determined. To eliminate cytotoxic compounds, cells are incubated together with the test compounds and SHh proteins for 3 days, and the number of living cells in the respective wells is determined using CellTiter-Blue reagent (Promega, USA).

Ингибирующая активность соединений определяют концентрацией соединений, вызывающей половину максимального ингибирования стимуляции клеточной щелочной фосфатазы SHh (IC₅₀). Ингибирующая концентрация IC₅₀ новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 составляет 390 нМ.The inhibitory activity of compounds is determined by the concentration of compounds, causing half the maximum inhibition of stimulation of cellular alkaline phosphatase SHh (IC ₅₀ ). The inhibitory concentration of IC _{50 of the} new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1 is 390 nM.

Пример 4. Определение кинетики растворения кристаллической формы.Example 4. Determination of the kinetics of dissolution of the crystalline form.

Кинетику растворения новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, полученной в примере 2, сравнивают с кинетикой растворения аморфного соединения CAS 1254584-50-3. Прибор для определения скорости растворения представляет собой трехгорлый сосуд емкостью 1 л. В один из тубусов вводят термометр, в другой - стеклянную трубку для взятия проб и их комплексирования, а в третий - основную деталь прибора - цилиндрическую корзинку высотой 3,6 см и диаметром 2,5 см, сделанную из нержавеющей стали в виде сетки с отверстиями диаметром 40 меш (около 0,351 мм). Корзинка насажена на ось мотора.The dissolution kinetics of a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1 obtained in Example 2, compared with the dissolution kinetics of the amorphous compound CAS 1254584-50-3. The device for determining the dissolution rate is a three-necked vessel with a capacity of 1 liter. A thermometer is introduced into one of the tubes, a glass tube for sampling and their integration in the other, and the main part of the device is a cylindrical basket 3.6 cm high and 2.5 cm in diameter, made of stainless steel in the form of a mesh with holes 40 mesh diameter (about 0.351 mm). The basket is mounted on the axis of the motor.

В сосуд наливают растворяющую среду (1000 мл), в данном эксперименте ДМСО, поскольку он является важным биполярным апротонным растворителем и благодаря своей сильной растворяющей способности, ДМСО часто используется как растворитель в химических реакциях и система биологического скрининга. Исследуемый образец помещают в цилиндрическую корзинку, которую устанавливают на расстоянии 2 см от дна сосуда.A dissolving medium (1000 ml) is poured into the vessel, in this experiment DMSO, since it is an important bipolar aprotic solvent and, due to its strong dissolving ability, DMSO is often used as a solvent in chemical reactions and a biological screening system. The test sample is placed in a cylindrical basket, which is installed at a distance of 2 cm from the bottom of the vessel.

Для сравнительного образца 1 используют 200 мг новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, а для сравнительного образца - 2-200 мг аморфного соединения СAS 1254584-50-3 с получением после полного растворения раствора, содержащего 200 м.д. соединения CAS 1254584-50-3.For comparative sample 1, 200 mg of the new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1 is used, and for a comparative sample, 2-200 mg of the amorphous compound CAS 1254584-50-3 to obtain, after complete dissolution, a solution containing 200 ppm CAS compounds 1254584-50-3.

Температуру растворяющей среды во время опыта поддерживают постоянной (37±0,5°C). Скорость вращения корзинки в среде регулируют с точностью ±5%, она составляет 200 об/мин. Через установленные интервалы времени отбирают для анализа пробы по 1-2 мл для определения содержания лекарственного вещества. Взятый объем растворителя тотчас же восполняют новым.The temperature of the solvent medium during the experiment is kept constant (37 ± 0.5 ° C). The rotation speed of the basket in the medium is regulated with an accuracy of ± 5%, it is 200 rpm. At set intervals, 1-2 ml samples are taken for analysis to determine the drug content. The taken volume of solvent is immediately replaced with a new one.

Полученные результаты приведены в таблице 1 (где величины представляют собой количество (м.д.) образцов 1 или 2 в растворе:The results are shown in table 1 (where the values are the number (ppm) of samples 1 or 2 in solution:

Результаты демонстрируют, что скорость растворения новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1 в ДМСО выше, чем скорость растворения аморфного соединения CAS 1254584-50-3. В частности, время, в течение которого происходит 50% растворение новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, в несколько раза меньше, чем для сравнительного образца аморфного соединения CAS 1254584-50-3.The results demonstrate that the dissolution rate of the new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1 in DMSO higher than the dissolution rate of the amorphous compound CAS 1254584-50-3. In particular, the time during which 50% dissolution of the new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] takes place -benzamide of the formula 1, several times less than for the comparative sample of the amorphous compound CAS 1254584-50-3.

Пример 5. Исследование хранения кристаллической формы.Example 5. The study of storage of crystalline form.

Все образцы хранились в стеклянных виалах, укупоренных резиновыми пробками с алюминиевыми колпачками, в холодильной камере при температуре ~4,7°C и в морозильной камере при температура около -23°C. Количество примесей определялось методом внутренней нормализации, детектирование проводилось УФ-детектором при длине волны 220 нм.All samples were stored in glass vials, sealed with rubber stoppers with aluminum caps, in a refrigerator at a temperature of ~ 4.7 ° C and in a freezer at a temperature of about -23 ° C. The amount of impurities was determined by the internal normalization method; detection was carried out by a UV detector at a wavelength of 220 nm.

В таблице 2 представлены результаты испытаний новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1, свидетельствующие об улучшении ее стабильности при пониженной температуре по сравнению с аморфным соединением CAS 1254584-50-3.Table 2 presents the test results of a new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of formula 1, indicating about the improvement of its stability at low temperature compared with the amorphous compound CAS 1254584-50-3.

Результаты однозначно свидетельствуют о перспективности заявляемой новой кристаллической формы 2-хлоро-4-метокси-H-[4-(8-метил-имидазо[1,2-a]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1.The results clearly indicate the promise of the proposed new crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-H- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1.

Настоящее изобретение может быть использовано в медицине, ветеринарии, биохимии.The present invention can be used in medicine, veterinary medicine, biochemistry.

Claims

1. The crystalline form of 2-chloro-4-methoxy-N- [4- (8-methyl-imidazo [1,2-a] pyridin-2-yl) phenyl] benzamide of the formula 1, having characteristic X-ray powder diffraction patterns peaks at the following angles 2θ (± 0.10 °): 8.9; 12.4; 15.0; 17.5; 19.9; 21.7

.

2. An active component having the property of an inhibitor of the start of the Hedgehog embryonic signaling cascade, which is a compound of formula 1 according to claim 1.

3. A pharmaceutical composition for the prevention and treatment of proliferative disease associated with the launch of the Hedgehog embryonic signaling cascade, containing in an effective amount the active component according to claim 2.

4. The pharmaceutical composition of claim 3, wherein the proliferative disease is selected from colon cancer, lung cancer, stomach cancer, prostate cancer, or hepatocellular carcinoma.

5. The pharmaceutical composition according to claim 3, where the proliferative disease is pancreatic cancer.

6. A drug for the prevention and treatment of proliferative diseases associated with the launch of the Hedgehog embryonic signaling cascade, in the form of tablets, capsules or injections, placed in a pharmaceutically acceptable package containing in an effective amount the active ingredient according to claim 2 or the pharmaceutical composition according to claim 3 .