RU2560711C1 - Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths - Google Patents
Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths Download PDFInfo
- Publication number
- RU2560711C1 RU2560711C1 RU2014123570/15A RU2014123570A RU2560711C1 RU 2560711 C1 RU2560711 C1 RU 2560711C1 RU 2014123570/15 A RU2014123570/15 A RU 2014123570/15A RU 2014123570 A RU2014123570 A RU 2014123570A RU 2560711 C1 RU2560711 C1 RU 2560711C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- expression level
- skin
- mir
- melanoma
- relative
- Prior art date
Links
- 230000008470 skin growth Effects 0.000 title abstract 4
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 title 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 206010027145 Melanocytic naevus Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 15
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108091062154 Mir-205 Proteins 0.000 claims description 16
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 208000017226 melanocytic skin neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010088 skin benign neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 claims 1
- 108020004688 Small Nuclear RNA Proteins 0.000 claims 1
- 101150026546 hsa gene Proteins 0.000 claims 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 abstract description 6
- 108091067482 Homo sapiens miR-205 stem-loop Proteins 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 6
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 3
- 208000000471 Dysplastic Nevus Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010062805 Dysplastic naevus Diseases 0.000 description 2
- 208000009077 Pigmented Nevus Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 208000028138 melanocytic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000004649 neutrophil actin dysfunction Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000010368 Extramammary Paget Disease Diseases 0.000 description 1
- 101001129705 Homo sapiens PH domain leucine-rich repeat-containing protein phosphatase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 108091008065 MIR21 Proteins 0.000 description 1
- 206010025652 Malignant melanoma in situ Diseases 0.000 description 1
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 1
- 208000006964 Nevi and Melanomas Diseases 0.000 description 1
- 206010029488 Nodular melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102100031136 PH domain leucine-rich repeat-containing protein phosphatase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 208000017563 cutaneous Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 208000007098 intradermal nevus Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 201000000032 nodular malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007474 nonparametric Mann- Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 208000029211 papillomatosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, онкологии, патологической анатомии, и может применяться для диагностики меланомы кожи в лабораторных центрах.The invention relates to medicine, in particular to dermatology, oncology, pathological anatomy, and can be used to diagnose skin melanoma in laboratory centers.
Существуют различные методы диагностики меланоцитарных новообразований. К прижизненным неинвазивным методам относится традиционная дерматоскопия, заключающаяся в том, что исследование пигментного новообразования кожи проводят с увеличением до х10, используя эффект эпилюминисценции при создании масляной среды между объектом исследования и дерматоскопом. Однако при использовании дерматоскопии в настоящее время остаются нерешенными проблемы дифференциальной диагностики диспластических невусов и меланомы in situ, выявления беспигментной меланомы, динамического наблюдения за группой высокого риска развития меланомы кожи, что требует продолжения научных исследований в данной области [Соколов Д.В. Дерматоскопия (эпилюминесцентная поверхностная микроскопия): in vivo диагностика меланомы кожи (обзор литературы) / Соколов Д.В., Махсон А.Н., Демидов Л.В. [и др.] // Сибирский онкологический журнал.- 2008. - №29. - С. 63-67].There are various methods for diagnosing melanocytic neoplasms. Intravital non-invasive methods include traditional dermatoscopy, which consists in the fact that the study of pigmented skin neoplasm is performed with an increase of up to x10, using the effect of epiluminescence when creating an oil medium between the object of study and a dermatoscope. However, with the use of dermatoscopy, the problems of differential diagnosis of dysplastic nevuses and melanoma in situ, detection of pigmentless melanoma, dynamic monitoring of the high-risk group for the development of skin melanoma, which requires further research in this area [Sokolov D.V. Dermatoscopy (epiluminescent surface microscopy): in vivo diagnosis of skin melanoma (literature review) / Sokolov D.V., Makhson A.N., Demidov L.V. [et al.] // Siberian Oncology Journal. - 2008. - No. 29. - S. 63-67].
Также используется гистологическое исследование, которое на настоящий момент является золотым стандартом для диагностической классификации меланоцитарных новообразований. Данный способ представляет собой исследование тканей, взятых во время диагностической процедуры или операции с последующим приготовлением гистологического препарата для изучения с помощью светового или электронного микроскопа состава исследуемой ткани, наличия или отсутствия патологических клеток. Однако, несмотря на то что гистологические критерии позволяют отнести большинство меланоцитарных опухолей либо к невусу, либо к меланоме, существуют так называемые неясные случаи [Sparrow, L.E. Differential expression of epidermal growth factor receptor in melanocyte tumours demonstrated by immunohistochemistry and mRNA in situ hybridization / L.E. Sparrow, P.J. Heenan // Australas J Dermatol. - 1999. - Vol. 40, №1. - P. 19-24]. Результаты гистологического исследования зависят от квалификации врача и возможностей диагностического центра, поэтому необходимы поиски альтернативных и более точных способов диагностики.A histological examination is also used, which is currently the gold standard for the diagnostic classification of melanocytic neoplasms. This method is a study of tissues taken during a diagnostic procedure or operation, followed by the preparation of a histological preparation for examination using a light or electron microscope of the composition of the test tissue, the presence or absence of pathological cells. However, despite the fact that histological criteria make it possible to attribute the majority of melanocytic tumors to either nevus or melanoma, there are so-called unclear cases [Sparrow, L.E. Differential expression of epidermal growth factor receptor in melanocyte tumors demonstrated by immunohistochemistry and mRNA in situ hybridization / L.E. Sparrow, P.J. Heenan // Australas J Dermatol. - 1999. - Vol. 40, No. 1. - P. 19-24]. The results of a histological examination depend on the qualifications of the doctor and the capabilities of the diagnostic center, so the search for alternative and more accurate diagnostic methods is necessary.
Другой современный способ для первичной и дифференциальной диагностики меланоцитарных поражений кожи на молекулярно-генетическом уровне проводят с помощью реакции флуоресцентной in situ гибридизации (FISH). [Hikita, Т. Immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization studies on noninvasive and invasive extramammary paget′s disease / T. Hikita, Y.Ohtsuki, T. Maeda [et al.] // International Journal of Surgical Pathology - 2012. - Vol. 20, №5. - P. 441-448.] Способ FISH-цитогенетический способ, который применяют для детекции и определения положения специфической последовательности ДНК на метафазных хромосомах или интерфазных ядрах in situ. Данный способ является дорогостоящим и применяется для неясных случаев. Недостатки его - высокая трудоемкость для клинической лаборатории патологоанатомического профиля, субъективность оценки результатов без четких количественных критериев.Another modern method for the primary and differential diagnosis of melanocytic skin lesions at the molecular genetic level is carried out using the fluorescence in situ hybridization reaction (FISH). [Hikita, T. Immunohistochemical and fluorescence in situ hybridization studies on noninvasive and invasive extramammary paget's disease / T. Hikita, Y. Ohtsuki, T. Maeda [et al.] // International Journal of Surgical Pathology - 2012. - Vol . 20, No. 5. - P. 441-448.] Method The FISH-cytogenetic method, which is used to detect and determine the position of a specific DNA sequence on metaphase chromosomes or interphase nuclei in situ. This method is expensive and is used for unclear cases. Its disadvantages are the high complexity for the clinical laboratory of the pathoanatomical profile, the subjectivity of evaluating the results without clear quantitative criteria.
На данный момент актуальным является разъяснение молекулярных механизмов развития меланомы кожи. Идентифицированными регуляторами экспрессии генов на посттранскрипционном уровне являются так называемые микро-рибонуклеиновые кислоты (микроРНК) - малые некодирующие РНК длиной около 22 пар нуклеотидов, которые комплиментарно связываются с мРНК, вызывая ингибирование трансляции или разрушение мРНК. Каждый отдельный вид микроРНК может связываться с различными мРНК-мишенями, а также мРНК может находиться под регуляторным контролем сразу нескольких разновидностей микроРНК. [Segura M.F. MicroRNA and cutaneous melanoma: from discovery to prognosis and therapy. Carcinogenesis / M.F. Segura, H.S. Greenwald, D. Hanniford [et al.] // Oxford Journals - 2012. - Vol. 33, №10. - P. 1823-1832.] Одной из таких микроРНК является miR-205, которая работает как супрессор опухолевого роста. Известно, что в случае некоторых видов опухолей miR-205 индуцирует апоптоз и тормозит рост опухоли. Также miR-205 имеет значение в регуляции эпителиально-мезенхимальной трансформации и опухолевой инвазии [Cai J. MiR-205 targets PTEN and PHLPP2 to augment АКТ signaling and drive malignant phenotypes in non-small cell lung cancer/ J. Cai J, L. Fang, Y. Huang [et al.] // Cancer Res. - 2013. - Vol. 73, №17. P. 5402-5415].At the moment, it is relevant to explain the molecular mechanisms of skin melanoma development. Identified regulators of gene expression at the post-transcriptional level are the so-called micro-ribonucleic acids (microRNAs) - small non-coding RNAs with a length of about 22 pairs of nucleotides that complementarily bind to mRNA, causing translation inhibition or mRNA destruction. Each individual type of miRNA can bind to different mRNA targets, and mRNA can be under the regulatory control of several varieties of miRNAs at once. [Segura M.F. MicroRNA and cutaneous melanoma: from discovery to prognosis and therapy. Carcinogenesis / M.F. Segura, H.S. Greenwald, D. Hanniford [et al.] // Oxford Journals - 2012. - Vol. 33, No. 10. - P. 1823-1832.] One such miRNA is miR-205, which acts as a tumor suppressor. In the case of certain types of tumors, miR-205 is known to induce apoptosis and inhibit tumor growth. MiR-205 is also important in the regulation of epithelial-mesenchymal transformation and tumor invasion [Cai J. MiR-205 targets PTEN and PHLPP2 to augment AKT signaling and drive malignant phenotypes in non-small cell lung cancer / J. Cai J, L. Fang , Y. Huang [et al.] // Cancer Res. - 2013 .-- Vol. 73, No. 17. P. 5402-5415].
Наиболее близким к предлагаемому является способ, в основу которого положено определение уровня экспрессии значимых микроРНК для диагностирования диспластического невуса и меланомы, включающий анализ образцов от пациентов с целью определения уровней экспрессии микроРНК (US patent 2013/0196869 A1, 01.08.2013). Однако данный способ является многоемким и дорогостоющим, так как необходимо определять большое число микроРНК.Closest to the proposed one is a method based on determining the expression level of significant miRNAs for diagnosing dysplastic nevus and melanoma, including analyzing samples from patients to determine miRNA expression levels (US patent 2013/0196869 A1, 08/01/2013). However, this method is large and expensive, since it is necessary to determine a large number of miRNAs.
Задача предлагаемого способа - оптимизация дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи.The objective of the proposed method is the optimization of the differential diagnosis of melanocytic skin tumors.
Поставленную задачу решают за счет того, что с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени по нормализующей микроРНК-SNRNA-U6, маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205: при относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.The problem is solved due to the fact that real-time PCR is performed with the test sample by normalizing miRNA-SNRNA-U6, the differential diagnosis marker is the hsa-miR-205 gene: with a relative expression level from 0.29926 to 13.202, the studied melanocytic skin formation is melanoma, and with a relative level of expression from 25.70993 to 1583.114 - nevus; with an intermediate interval of values from 13.202 to 25.70993, an immunohistochemical study of the biopsy using primary antibodies to specific markers is necessary: S 100, HMB 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.
Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Проводят забор исследуемой ткани (биоптата) у обследуемых лиц. Полученный биоптат подвергают стандартной фиксации в парафине для получения гистологических срезов, далее проводят нарезку срезов на микротоме.The proposed method is as follows. The test tissue (biopsy) is sampled from the subjects. The obtained biopsy specimen is subjected to standard fixation in paraffin to obtain histological sections, then sections are cut on a microtome.
Осуществляют выделение РНК по стандартному протоколу с помощью системы «Рибозоль-В» (AmpliSens, ФГУН ЦНИИЭ Ростпотребнадзора). Затем переходят к постановке реакции обратной транскрипции с праймером к микроРНК - hsa-miR-205 и нормализующей микро-РНК - snRNA-U6 (Applied Biosystems) для получения кДНК, чтобы исследовать относительный уровнь экспрессии микроРНК методом ПНР в реальном времени.RNA is isolated according to the standard protocol using the “Ribozol-B” system (AmpliSens, Federal State Institution of Research and Development at the Federal Service for Consumer Rights Protection and Human Welfare). Then they go on to formulate a reverse transcription reaction with a primer for microRNA - hsa-miR-205 and normalizing micro-RNA - snRNA-U6 (Applied Biosystems) to obtain cDNA in order to study the relative level of microRNA expression by real-time PNR.
Амплификацию проводят на амплификаторе Applied Biosystems StepOne в 48-луночных планшетах в объеме по 20 мкл в каждой лунке, содержащем ПЦР буфер: 7.67 мкл безРНКазная вода, 1 мкл TagMan Small RNA Assay (20X), 10 мкл TagMan Master Mix, 1.33 мкл праймера hsa-miR-205 и snRNA-U6 в соответствующие лунки. Условия ПЦР следующие: 50°C - 2 мин, 95°C - 10 мин и 40 циклов: 95°C - 15 с, 60°C - 1 мин.Amplification is carried out on an Applied Biosystems StepOne thermocycler in 48-well plates in a volume of 20 μl in each well containing PCR buffer: 7.67 μl RNAse-free water, 1 μl TagMan Small RNA Assay (20X), 10 μl TagMan Master Mix, 1.33 μl hsa primer -miR-205 and snRNA-U6 in the corresponding wells. PCR conditions are as follows: 50 ° C - 2 min, 95 ° C - 10 min and 40 cycles: 95 ° C - 15 s, 60 ° C - 1 min.
Содержание микроРНК в исследуемом образце вычисляем как относительный уровень экспрессии по формуле: 2-ΔСТ, где ΔСТ=(CT miR-205 - CT U6RNA). [Chan, SH. MiR-21 MicroRNA Expression in Human Gastric Carcinomas and its Clinical Association/ SH. Chan, CW. Wu, AF. Li //Anticancer Research - 2008. - №28. - P. 907-912.]The microRNA content in the test sample is calculated as the relative expression level according to the formula: 2 -ΔCT , where ΔCT = (CT miR-205 - CT U6RNA). [Chan, SH. MiR-21 MicroRNA Expression in Human Gastric Carcinomas and its Clinical Association / SH. Chan, CW. Wu, AF. Li // Anticancer Research - 2008. - No. 28. - P. 907-912.]
Статистическую обработку проводили между двумя группами при помощи непараметрического U-критерия Манна-Уитни (программа Statistics 7). Для исследуемой микроРНК (miR-205) выявлены достоверно значимые различия для этих групп (меланома и невус): значительное снижение уровня экспрессии miR-205 в меланоме по сравнению с невусом.Statistical processing was performed between the two groups using the nonparametric Mann-Whitney U-test (Statistics 7 program). Reliably significant differences for these groups (melanoma and nevus) were revealed for the studied miRNA (miR-205): a significant decrease in the level of miR-205 expression in melanoma compared to nevus.
При относительном уровне экспрессии miR-205 от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии miR-205 от 25,70993 до 1583,114 является невусом (см. табл. 1). В таблице представлены группы исследуемых образцов, их количество и числовые значения для относительных уровней экспрессии микроРНК в меланомах и невусах.With a relative expression level of miR-205 from 0.29926 to 13.202, the studied melanocytic skin formation is melanoma, and with a relative expression level of miR-205 from 25.70993 to 1583.114 it is a nevus (see Table 1). The table shows the groups of studied samples, their number and numerical values for relative levels of miRNA expression in melanomas and nevi.
Предлагаемый способ диагностики является более быстрым и менее затратным.The proposed diagnostic method is faster and less expensive.
Пример 1. Пациент А., 50 лет, обратился в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом меланома кожи голени. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергли стандартному способу фиксации для получения гистологических срезов.Example 1. Patient A., 50 years old, turned to the Krasnoyarsk Regional Oncology Center with a preliminary diagnosis of melanoma of the lower leg skin. Surgical excision was performed, the obtained biopsy of the test tissue was subjected to the standard fixation method to obtain histological sections.
Гистологическое заключение онкологического диспансера: пигментная узловая меланома, III стадия по Кларку, по Бреслоу 4 мм.The histological conclusion of the oncological clinic: pigmented nodular melanoma, stage III according to Clark, according to Breslow 4 mm.
Одномоментно с полученным биоптатом проведено исследование методом ПЦР в реальном времени.Simultaneously with the obtained biopsy, a real-time PCR study was performed.
Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=8,123, данное значение относительного уровня экспрессии свидетельствует о том, что исследуемое образование является меланомой кожи.Conclusion of real-time PCR: expression level miR-205 = 8.123, this value of the relative expression level indicates that the studied formation is melanoma of the skin.
Пример 2. Пациент П., 38 лет, поступил в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом пигментный невус кожи спины. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергся стандартной методике фиксации для получения гистологических срезов.Example 2. Patient P., 38 years old, was admitted to the Krasnoyarsk Regional Oncology Center with a preliminary diagnosis of pigmented nevus of the skin of the back. Surgical excision was performed, the obtained biopsy of the test tissue was subjected to a standard fixation procedure to obtain histological sections.
Гистологическое заключение: картина сложного пигментного невуса с папилломатозом, гиперкератозом плоского эпителия.The histological conclusion: a picture of a complex pigmentary nevus with papillomatosis, hyperkeratosis of the squamous epithelium.
Одномоментно с полученным биоптатом проведено исследование методом ПЦР в реальном времени.Simultaneously with the obtained biopsy, a real-time PCR study was performed.
Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=124,809, данное значение относительного уровня экспрессии свидетельствует о том, что исследуемое образование является невусом.Conclusion of real-time PCR: expression level miR-205 = 124.809, this value of the relative expression level indicates that the studied formation is a nevus.
Пример 3. Пациент О., 27 лет, поступил в Красноярский краевой онкологический диспансер с предварительным диагнозом пигментный невус кожи правой молочной железы. Произведено хирургическое иссечение, полученный биоптат исследуемой ткани подвергся стандартной методике фиксации для получения гистологических срезов.Example 3. Patient O., 27 years old, was admitted to the Krasnoyarsk Regional Oncology Center with a preliminary diagnosis of pigmented nevus of the skin of the right breast. Surgical excision was performed, the obtained biopsy of the test tissue was subjected to a standard fixation procedure to obtain histological sections.
Гистологическое заключение: участки кожи с наличием в дерме гнезд тяжей невусных клеток с гранулами пигмента в цитоплазме. Строение внутридермального невуса.The histological conclusion: skin areas with the presence in the dermis of nests of strands of nevus cells with granules of pigment in the cytoplasm. The structure of the intradermal nevus.
Одномоментно с полученным биоптатом была выполнена амплификация методом ПЦР в реальном времени.Simultaneously with the obtained biopsy, amplification by real-time PCR was performed.
Заключение ПЦР в реальном времени: уровень экспрессии miR-205=22,809, данное значение относительного уровня экспрессии попадает в промежуточный интервал значений, поэтому в этом случае дополнительно проведено иммуногистохимическое исследование, которое показало отсутствие положительной иммуногистохимической реакции на специфические маркеры: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF, следовательно, данное образование является невусом.Conclusion of real-time PCR: expression level miR-205 = 22.809, this value of the relative expression level falls into the intermediate range of values, therefore, in this case, an additional immunohistochemical study was carried out, which showed the absence of a positive immunohistochemical reaction to specific markers: S 100, NMB 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF, therefore, this formation is a nevus.
На примере пациента А. и пациента П. видно, что проведенные исследования подтверждают гистологические заключения, что говорит о достоверности поставленного нами диагноза. Пример пациента О., свидетельствует о том, что, если относительный уровень экспрессии miR-205 попадает в промежуточный интервал значений, то для постановки диагноза необходимо дополнительное проведение иммуногистохимического исследования биоптата по стандартной методике с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.On the example of patient A. and patient P., it can be seen that the studies confirm the histological findings, which indicates the reliability of our diagnosis. An example of patient O. indicates that if the relative level of expression of miR-205 falls into the intermediate range of values, then additional immunohistochemical studies of the biopsy should be performed according to the standard method using primary antibodies to specific markers for diagnosis: S 100, НМВ 45 , MART 1, MELAN A, CD-63, MITF.
Предлагаемый способ позволяет в кратчайшие сроки и с наименьшими затратами устанавливать диагноз при меланоцитарных новообразований кожи.The proposed method allows in the shortest possible time and at the lowest cost to establish a diagnosis of melanocytic skin neoplasms.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014123570/15A RU2560711C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2014123570/15A RU2560711C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2560711C1 true RU2560711C1 (en) | 2015-08-20 |
Family
ID=53880794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014123570/15A RU2560711C1 (en) | 2014-06-09 | 2014-06-09 | Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2560711C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2418068C2 (en) * | 2005-08-17 | 2011-05-10 | Сирна Терапьютикс, Инк. | Chemically modified short interfering nucleic acid molecules that mediate rna interference |
| RU2496417C1 (en) * | 2012-03-12 | 2013-10-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Красноярский Государственный Медицинский Университет Имени Профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства Здравоохранения И Социального Развития Российской Федерации" | Method of differential diagnostics of melanocytic neoplasms of skin |
-
2014
- 2014-06-09 RU RU2014123570/15A patent/RU2560711C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2418068C2 (en) * | 2005-08-17 | 2011-05-10 | Сирна Терапьютикс, Инк. | Chemically modified short interfering nucleic acid molecules that mediate rna interference |
| RU2496417C1 (en) * | 2012-03-12 | 2013-10-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Красноярский Государственный Медицинский Университет Имени Профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства Здравоохранения И Социального Развития Российской Федерации" | Method of differential diagnostics of melanocytic neoplasms of skin |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДАРЬЯЛОВА С.Л. и др. Диагностика и лечение злокачественных опухолей. - М: Медицина, 1993. " С.242-247. BOLOGNIA JL еt al. What's new in the treatment of cutaneous melanoma? // Semin Cutan Med Surg. 1998 Jun;17(2):96-107. реферат, он-лайн [Найдено в Интернет на www.pubmed.com 03.02.2015], PMID: 9669603 [PubMed - indexed for MEDLINE] * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Siegal et al. | Dynamics of circulating hypoxia-mediated miRNAs and tumor response in patients with high-grade glioma treated with bevacizumab | |
| CN120924663A (en) | Kit or device for detecting biliary tract cancer and detection method | |
| ES2440747T3 (en) | Diagnostic procedures to determine the prognosis of non-small cell lung cancer | |
| CN119842899A (en) | Liver cancer detection kit or device and detection method | |
| Fullwood et al. | Investigating the use of Raman and immersion Raman spectroscopy for spectral histopathology of metastatic brain cancer and primary sites of origin | |
| KR20050100371A (en) | Methods of detecting gene expression in normal and cancerous cells | |
| RU2583871C1 (en) | Method for differential diagnosis of gliomas of human brain | |
| CN110218796B (en) | New target PCDHB2 for breast cancer bone metastasis diagnosis and treatment | |
| Blessmann et al. | Amplification of the PPFIA1 gene region on 11q13 in oral squamous cell carcinomas (OSCC) | |
| CN107475386B (en) | Long-chain non-coding RNA marker for diagnosis and treatment osteosarcoma | |
| RU2560711C1 (en) | Differential diagnostic technique for melanocytic skin growths | |
| CN102985564A (en) | ACF detection method | |
| US20110097271A1 (en) | Colon Cancer Associated Transcript 1 (CCAT1) As A Cancer Marker | |
| CN112646886B (en) | Application of FOXD1 in invasive breast cancer | |
| RU2451937C2 (en) | Diagnostic technique for breast cancer by blood plasma interleukin il-8 and/or il-18 rna level | |
| JP2012170335A (en) | Diagnostic method and therapeutic composition for oral squamous cell carcinoma | |
| CN105463117A (en) | Primer pair for detecting human RIOK2 gene expression quantity and relative expression quantity | |
| WO2013191242A1 (en) | Test method and treatment means for small cell lung cancer having poor prognosis | |
| CN107365859B (en) | Molecular markers of the LncRNA as diagnosis and treatment osteosarcoma | |
| CN104011198A (en) | ACF detection method | |
| Arai et al. | Efficacy of photodynamic diagnosis‐assisted transurethral resection of bladder tumor for T1 bladder cancer: Novel second transurethral resection initiatives utilizing photodynamic diagnosis. | |
| RU2611340C2 (en) | Method of monitoring efficiency of anticancer therapy of non-small cell lung cancer | |
| CN103834722A (en) | Core gene chip and probe suitable for general survey of colon cancer | |
| Votruba et al. | PD01. 15 Raman Spectroscopy and NIR Spectroscopy as Possible AID in Localisation of Solitary Pulmonary Nodules | |
| JPWO2017051542A1 (en) | Method of selecting therapy and biomarker indicating the same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160610 |