RU2555327C2 - Immunobiological agent for treating urinary bladder cancer and method of application thereof - Google Patents
Immunobiological agent for treating urinary bladder cancer and method of application thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2555327C2 RU2555327C2 RU2013114199/15A RU2013114199A RU2555327C2 RU 2555327 C2 RU2555327 C2 RU 2555327C2 RU 2013114199/15 A RU2013114199/15 A RU 2013114199/15A RU 2013114199 A RU2013114199 A RU 2013114199A RU 2555327 C2 RU2555327 C2 RU 2555327C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dose
- bcg
- peptidoglycan
- cfu
- immunobiological agent
- Prior art date
Links
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 51
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 49
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 49
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 claims abstract description 27
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 16
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 16
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 15
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 12
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 10
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-N-nitrosourea Chemical compound O=NN(C)C(N)=O ZRKWMRDKSOPRRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 5
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- -1 L-alanine-γ-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid Chemical compound 0.000 description 4
- 206010024305 Leukaemia monocytic Diseases 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 201000006894 monocytic leukemia Diseases 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 3
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 2
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- QIFGMZZTJRULMA-XLPZGREQSA-N gamma-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC[C@H](C(O)=O)NC(=O)CC[C@@H](N)C(O)=O QIFGMZZTJRULMA-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 2
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 230000027317 positive regulation of immune response Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- 102000004039 Caspase-9 Human genes 0.000 description 1
- 108090000566 Caspase-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001522878 Escherichia coli B Species 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 101001125032 Homo sapiens Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000669460 Homo sapiens Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 1
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FMNCPUGORYYCEM-AXTSPUMRSA-N L-alanyl-gamma-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC[C@H](N)C(O)=O FMNCPUGORYYCEM-AXTSPUMRSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100029424 Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039357 Toll-like receptor 5 Human genes 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000005904 anticancer immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 239000000677 immunologic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124541 immunological agent Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к иммунологии, а именно к иммунобиологическим композициям, и может быть использовано как иммуностимулирующее средство для лечения рака мочевого пузыря, а также для профилактики рецидивов рака мочевого пузыря после оперативного лечения.The invention relates to immunology, namely to immunobiological compositions, and can be used as an immunostimulating agent for the treatment of bladder cancer, as well as for the prevention of relapse of bladder cancer after surgical treatment.
Предшествующий уровень техникиState of the art
Рак мочевого пузыря (РМП) является одной из актуальных проблем современного здравоохранения. По данным ВОЗ, РМП составляет 3% всех выявляемых злокачественных заболеваний и 70% всех новообразований мочевой системы в мире. Основным методом лечения РМП является оперативный способ. Однако результаты самостоятельного хирургического лечения больных РМП часто остаются неудовлетворительными. После удаления опухоли у 60 - 70% больных наблюдаются рецидивы заболевания.Bladder cancer (RMP) is one of the urgent problems of modern health care. According to WHO, RMP accounts for 3% of all detected malignant diseases and 70% of all neoplasms of the urinary system in the world. The main treatment for RMP is the surgical method. However, the results of independent surgical treatment of patients with RMP often remain unsatisfactory. After removal of the tumor, relapse of the disease is observed in 60 - 70% of patients.
Поиск методов, позволяющих улучшить результаты оперативного лечения, является важной задачей современной онкоурологии.The search for methods to improve the results of surgical treatment is an important task of modern oncourology.
Известен способ лечения поверхностного рака мочевого пузыря (Матвеев Б.П., Фигурин К.М. и Карякин О.Б. "Рак мочевого пузыря", Москва, 2001 г.), в котором авторы предлагают вводить противоопухолевые препараты в мочевой пузырь после оперативного удаления опухоли. Однако недостатком данного метода является высокая токсичность химиопрепаратов, которые действуют на всю стенку мочевого пузыря.A known method of treating superficial cancer of the bladder (Matveev B.P., Figurin K.M. and Karyakin O. B. "Bladder cancer", Moscow, 2001), in which the authors propose the introduction of antitumor drugs into the bladder after surgery tumor removal. However, the disadvantage of this method is the high toxicity of chemotherapy drugs that act on the entire wall of the bladder.
Известно решение (патент РФ № RU 2290096), при котором предлагается способ введения химиопрепаратов с помощью микроирригаторов, которые вшивают в подслизистый слой мочевого пузыря пациентов после оперативного вмешательства. Данный способ позволяет уменьшить общую токсичность химиопрепаратов за счет локального введения, однако имеет недостаток, связанный с высокой травматичностью метода, поскольку требует дополнительного оперативного вмешательства для удаления микроирригаторов.A solution is known (RF patent No. RU 2290096), in which a method for administering chemotherapeutic agents using microirrigators that are sutured into the submucosal layer of the bladder of patients after surgery is proposed. This method allows to reduce the overall toxicity of chemotherapeutic agents due to local administration, however, it has the disadvantage associated with the high invasiveness of the method, since it requires additional surgical intervention to remove microirrigators.
Известно также решение по патенту US 5194257, где заявлено использование бацилл Кальмета-Герена (БЦЖ), которые вводятся в мочевой пузырь после оперативного удаления опухоли. Данное решение основывается на том, что БЦЖ является мощным неспецифическим иммуностимулятором, вызывающим комплекс локальных иммунных реакций, в котором задействованы Т- и В-лимфоциты, макрофаги, и целый ряд цитотоксичеких цитокинов, что обеспечивает ее противоопухолевую активность.Also known is the solution according to patent US 5194257, which claims the use of Calmett-Guerin bacilli (BCG), which are introduced into the bladder after surgical removal of the tumor. This decision is based on the fact that BCG is a powerful nonspecific immunostimulant that causes a complex of local immune reactions, in which T and B lymphocytes, macrophages, and a number of cytotoxic cytokines are involved, which ensures its antitumor activity.
Данное техническое решение как наиболее близкое к заявляемому по составу действующего вещества и способу его использования выбрано авторами заявляемого изобретения за прототип.This technical solution as the closest to the claimed by the composition of the active substance and the method of its use is selected by the authors of the claimed invention for the prototype.
К недостаткам прототипа можно отнести следующее:The disadvantages of the prototype include the following:
1) относительно низкая иммуностимулирующая активность, которая требует введения высоких доз БЦЖ и приводит к увеличению токсичности;1) a relatively low immunostimulating activity, which requires the introduction of high doses of BCG and leads to an increase in toxicity;
2) небольшая длительность эффекта, которая требует многократных инстилляция БЦЖ.2) a short duration of the effect, which requires multiple instillation of BCG.
Таким образом, в уровне техники существует острая потребность в разработке эффективного препарата для лечения рака мочевого пузыря после оперативного удаления опухолей, которое было бы лишено указанных недостатков.Thus, in the prior art there is an urgent need to develop an effective drug for the treatment of bladder cancer after surgical removal of tumors, which would be devoid of these disadvantages.
Раскрытие настоящего изобретения.Disclosure of the present invention.
Задачей настоящего изобретения является создание иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ, обладающего высокой иммуностимулирующей активностью и пролонгированностью действия, с возможностью его использования в терапии рака мочевого пузыря, с обеспечением индукции широкого спектра иммунных реакций, формируемых за счет дополнительной стимуляции врожденной иммунной системы посредством активации NOD рецепторов 1.The objective of the present invention is to provide an immunobiological agent based on BCG vaccine with high immunostimulating activity and prolonged action, with the possibility of its use in the treatment of bladder cancer, with the provision of induction of a wide range of immune reactions generated by additional stimulation of the innate immune system by activating NOD receptors one.
Указанная выше задача настоящего изобретения решается за счет того, что, создано иммунобиологическое средство для лечения рака мочевого пузыря на основе вакцины БЦЖ, при этом оно дополнительно включает фрагмент пептидогликана, содержащий в своей структуре диаминопимелиновую кислоту, взятые в эффективном количестве. В качестве фрагментов пептидогликана используют фрагменты пептидогликана, полученные из клеточной стенки бактерий. В качестве фрагментов пептидогликана могут быть также использованы фрагменты пептидогликана, полученные путем химического синтеза. В одной дозе содержится:The above objective of the present invention is solved due to the fact that an immunobiological agent for the treatment of bladder cancer based on BCG vaccine has been created, and it further includes a peptidoglycan fragment containing diaminopimelic acid in its structure taken in an effective amount. Peptidoglycan fragments are peptidoglycan fragments obtained from the bacterial cell wall. Peptidoglycan fragments obtained by chemical synthesis can also be used as peptidoglycan fragments. One dose contains:
БЦЖ - от 103 КОЕ/дозу до 1010 КОЕ/дозу,BCG - from 10 3 CFU / dose to 10 10 CFU / dose,
низкомолекулярный фрагмент пептидогликана - от 10 пг/дозу до 10 мг/дозу.low molecular weight fragment of peptidoglycan - from 10 pg / dose to 10 mg / dose.
Заявленное иммунобиологическое средство используют в эффективном количестве для терапии рака мочевого пузыря.The claimed immunobiological agent is used in an effective amount for the treatment of bladder cancer.
Противоопухолевое действие БЦЖ связано с ее иммуностимулирующими свойствами. Известно, что в состав данных бактерий входят структуры, являющиеся лигандами рецепторов врожденной иммунной системы (TLR4, TLR5 и др.). Взаимодействие компонентов БЦЖ с данными рецепторами приводит к активации различных транскрипционных факторов (например, транскрипционного фактора NF-kB), контролирующих экспрессию целого ряда провоспалительных молекул.The antitumor effect of BCG is associated with its immunostimulating properties. It is known that these bacteria include structures that are ligands of the receptors of the innate immune system (TLR4, TLR5, etc.). The interaction of BCG components with these receptors leads to the activation of various transcription factors (for example, transcription factor NF-kB) that control the expression of a number of pro-inflammatory molecules.
Так, было показано, что введение БЦЖ усиливает экспрессию адгезионных и костимуляторных молекул, включая внутриклеточные адгезионные молекулы ICAM-1, которые влияют на связывание Т-лимфоцитов и нейтрофилов с опухолевыми клетками. Также есть литературные данные, указывающие на то, что при введении данных бактерий, увеличивается экспрессия HLAII, CD80, CD1b молекул, происходит индукция экспрессии ряда цитокинов, таких как интерлейкин-8 (ИЛ-8), интерлейкин-6 (ИЛ-6), фактор некроза опухолей альфа (TNFα), гранулоцитарно-макрофагальный фактор роста (GM-CSF).So, it was shown that the introduction of BCG enhances the expression of adhesion and co-stimulatory molecules, including intracellular adhesion molecules ICAM-1, which affect the binding of T-lymphocytes and neutrophils to tumor cells. There is also literature data indicating that the introduction of these bacteria increases the expression of HLAII, CD80, CD1b molecules, induces the expression of a number of cytokines, such as interleukin-8 (IL-8), interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor alpha (TNFα), granulocyte macrophage growth factor (GM-CSF).
Фрагмент пептидогликана, содержащий диаминопимелиновую кислоту, является агонистом NOD рецептора 1. Диаминопимелиновая кислота является минимальным фрагментом, который распознает данный рецептор. При этом изменение состава других аминокислот и моносахаридов, входящих в состав пептидогликана, позволяет модулировать активность данного соединения.A peptidoglycan fragment containing diaminopimelic acid is an agonist of
Согласно литературным данным лиганды NOD рецептора 1 способны усиливать апоптоз, опосредованный каспазой 9. Активация NOD1 рецептора приводит усилению ряда иммунных реакций, например, усилению фагоцитоза, активации зрелых Т-клеток, пролиферации и созревания В-клеток, процессинге и презентации антигена дендритными клетками, прямой активации В-клеток памяти и последующей продукции антител, в том числе IgG, и других (Palm N.W. Medzhitov R., Pattern recognition receptors and control of adaptive immunity. Immunol Rev. 2009 Jan;227(1):221-33).According to published data, ligands of
Полученное иммунобиологическое средство, содержащее вакцину БЦЖ и низкомолекулярные фрагменты пептидогликана, обеспечивает значительно больший уровень индукции иммунных реакций по сравнению с интенсивностью тех эффектов, которые инициируются при применении индивидуальных компонентов, входящих в его состав.The resulting immunobiological agent containing BCG vaccine and low molecular weight fragments of peptidoglycan provides a significantly higher level of induction of immune responses compared to the intensity of those effects that are triggered by the use of individual components that make up its composition.
Минимальное количество исследований, которое необходимо, чтобы доказать эффективность иммунобиологического средства, разработанного авторами, включает сравнение способности индуцировать иммунные реакции, изучение противоопухолевой активности и токсичности.The minimum number of studies that is necessary to prove the effectiveness of an immunobiological agent developed by the authors includes a comparison of the ability to induce immune responses, the study of antitumor activity and toxicity.
Краткое описание фигурBrief Description of the Figures
На фиг.1 представлена схема работы репортерной конструкции, которая находится под контролем NF-kB-зависимого промотора.Figure 1 presents the scheme of the reporter design, which is under the control of the NF-kB-dependent promoter.
На фиг.2 представлена гистограмма, показывающая изменение активности транскрипционного фактора NF-kB в клетках ТНР-1 при добавлении к ним иммунобиологических средств, содержащих различное количество БЦЖ и диаминопимелиновой кислоты.Figure 2 presents a histogram showing the change in the activity of the transcription factor NF-kB in THP-1 cells when immunobiological agents containing various amounts of BCG and diaminopimelic acid are added to them.
Ось ординат - оптическая плотность OD415Y-axis - optical density OD415
Ось абсцисс - концентрация диаминопимелиновой кислоты (мг/дозу)The abscissa axis is the concentration of diaminopimelic acid (mg / dose)
Ось аппликат - концентрация БЦЖ (КОЕ/дозу)Axis of applicate - BCG concentration (CFU / dose)
На фиг.3 представлена гистограмма, показывающая изменение концентрации цитокинов IL-1a, IL-6, МСР-1, CXCL-1, MIP-1a в клетках ТНР-1 при добавлении иммунобиологических средств на основе вакцины БЦЖ. Ось ординат - концентрация цитокинов, пг/млFigure 3 presents a histogram showing the change in the concentration of the cytokines IL-1a, IL-6, MCP-1, CXCL-1, MIP-1a in THP-1 cells with the addition of immunobiological agents based on BCG vaccine. The ordinate axis - the concentration of cytokines, PG / ml
Ось абсцисс: 1-IL-1α, 2-IL-6, 3-МСР-1, 4-CXCL-1, 5-MIP-1αAbscissa axis: 1-IL-1α, 2-IL-6, 3-MCP-1, 4-CXCL-1, 5-MIP-1α
На фиг.4 представлена схема эксперимента по проверке противоопухолевой активности иммунобиологического средства на основе БЦЖ. По оси абсцисс указано время с начала эксперимента (недели), А - введение N-метил-М-нитрозомочевины, Б - введение физиологического раствора, В - введение вакцины БЦЖ, Г - введение иммунобиологического средства на основе БЦЖ.Figure 4 presents a diagram of an experiment to test the antitumor activity of an immunobiological agent based on BCG. The abscissa indicates the time from the beginning of the experiment (week), A - the introduction of N-methyl-M-nitrosourea, B - the introduction of physiological saline, C - the introduction of BCG vaccine, D - the introduction of an immunobiological agent based on BCG.
На фиг.5 представлена гистограмма, показывающая изменение коэффициента токсичности в клетках ТНР-1 при добавлении к ним иммунобиологических средств, содержащих различное количество БЦЖ и диаминопимелиновой кислоты.Figure 5 presents a histogram showing the change in the toxicity coefficient in THP-1 cells when immunobiological agents containing different amounts of BCG and diaminopimelic acid are added to them.
Ось ординат - коэффициент токсичности, %.The ordinate axis is the toxicity coefficient,%.
Ось абсцисс - концентрация диаминопимелиновой кислоты (мг/дозу).The abscissa axis is the concentration of diaminopimelic acid (mg / dose).
Ось аппликат - концентрация БЦЖ (КОЕ/дозу).Axis of applicate is the concentration of BCG (CFU / dose).
Примеры осуществления настоящего изобретенияExamples of the implementation of the present invention
Пример 1Example 1
Определение доз БЦЖ и фрагмента пептидогликана, содержащего диаминопимелиновую кислоту, в составе разрабатываемого иммунобиологического средства Исходя из литературных данных, основным механизмом противоопухолевой активности БЦЖ является стимуляция иммунных реакций. Целью данного эксперимента было определить дозы действующих веществ иммунобиологического средства на основе БЦЖ путем анализа их иммуностимулирующих свойств. На первом этапе инвазии, БЦЖ активирует различные рецепторы врожденной иммунной системы. Другой компонент иммунобиологического средства - фрагмент пептидогликана, содержащий в своей структуре диаминопимелиновую кислоту, также является агонистом рецепторов врожденной иммунной системы -NOD рецепторов 1. Активация соответствующих рецепторов БЦЖ и фрагментами пептидогликана приводит к усилению активности транскрипционных факторов (в том числе транскрипционного фактора NF-kB), которые регулируют экспрессию различных провоспалительных белков и, как следствие, развитие тех или иных иммунных реакций. Таким образом, оценка активности транскрипционного фактора NF-kB позволит косвенно оценить эффективность стимуляции иммунных реакций. Для определения активности NF-kB была выбрана модель на основе клеточной линии моноцитарной лейкемии человека ТНР-SEAP, содержащей ген щелочной фосфатазы под контролем NF-kB-зависимого промотера (см. фиг.1).Determination of doses of BCG and a fragment of peptidoglycan containing diaminopimelic acid in the composition of the developed immunobiological agent Based on published data, the main mechanism of BCG antitumor activity is the stimulation of immune responses. The purpose of this experiment was to determine the dose of the active substances of an immunobiological agent based on BCG by analyzing their immunostimulating properties. In the first stage of invasion, BCG activates various receptors of the innate immune system. Another component of an immunobiological agent, a peptidoglycan fragment containing diaminopimelic acid in its structure, is also an agonist of receptors of the innate immune system —
Клетки пассировались на 25 см2 культуральных флаконах в ростовой среде RPMI с 10% эмбриональной сывороткой. Для проведения анализа клетки были рассеяны на 96-луночный планшет в количестве 105 клеток на лунку. После рассева клеток планшет инкубировали при +37°C и 5% CO2 в течение 24 часов.Cells were passaged on 25 cm 2 culture vials in RPMI growth medium with 10% fetal serum. For analysis, cells were scattered on a 96-well plate in an amount of 10 5 cells per well. After sieving the cells, the plate was incubated at + 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours.
Далее был получен ряд иммунобиологических средств на основе вакцины БЦЖ (в следующих концентрациях: 0, 102 КОЕ/дозу, 103 КОЕ/дозу, 104 КОЕ/дозу, 105 КОЕ/дозу, 106 КОЕ/дозу, 107 КОЕ/дозу, 108 КОЕ/дозу, 109 КОЕ/дозу, 1010 КОЕ/дозу, 1011 КОЕ/дозу), и фрагмента пептидогликана: L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновой кислоты (в следующих концентрациях: 1 пг/дозу, 10 пг/дозу, 100 пг/дозу, 1 мкг/дозу, 10 мкг/дозу, 100 мкг/дозу, 1 мг/дозу, 10 мг/дозу, 100 мг/дозу). Под дозой понимается количество препарата, предназначенное для единовременного (за 1 инстилляцию) введения в мочевой пузырь. Объем препарата, рекомендованный для одной инстилляции в мочевой пузырь, составляет 50 мл (инструкции к препаратам «Иммурон-вак», «Уро-БЦЖ медак»). Поскольку препарат содержит живые бактериальные клетки, для разведения рекомендуется использовать любой изотонический растворитель надлежащего фармацевтического качества. В данном случае нами использовался физиологический раствор.Further there was obtained a number of immunological agents based on BCG vaccine (in the following concentrations: 0, 10 February CFU / dose, March 10 CFU / dose, April 10 CFU / dose, May 10 CFU / dose, June 10 CFU / dose of 10 7 cfu / dose, 10 8 CFU / dose, 10 9 CFU / dose, 10 10 CFU / dose, 10 11 CFU / dose), and a fragment of the peptidoglycan: L-alanine-γ-D-glutamylmesodiaminopimelic acid (in the following concentrations: 1 pg / dose, 10 pg / dose, 100 pg / dose, 1 μg / dose, 10 μg / dose, 100 μg / dose, 1 mg / dose, 10 mg / dose, 100 mg / dose). Dose refers to the amount of the drug intended for a single (per 1 instillation) injection into the bladder. The volume of the drug recommended for one instillation into the bladder is 50 ml (instructions for the preparations Immuron-vak, Uro-BCG medak). Since the preparation contains live bacterial cells, it is recommended to use any isotonic solvent of appropriate pharmaceutical quality for dilution. In this case, we used physiological saline.
После разведения препаратов 10 мкл из каждого образца было добавлено в соответствующие лунки планшета.After reconstitution, 10 μl from each sample was added to the corresponding wells of the plate.
Далее клетки инкубировали 18 часов. Затем из лунок планшета удаляли ростовую среду и добавляли по 100 мкл раствора п-нитрофенилфосфата (4 мг/мл). Далее определяли активность фермента щелочной фосфатазы путем измерения оптической плотности раствора, при длине волны 405 нм 3 раза с интервалом 10 минут. В данном случае изменение оптической плотности раствора пропорционально количеству фермента щелочной фосфатазы, а следовательно, пропорционально активности транскрипционного фактора NF-kB. Полученные результаты представлены в Таблице 1.Then the cells were incubated for 18 hours. Then, growth medium was removed from the plate wells and 100 μl of p-nitrophenyl phosphate solution (4 mg / ml) was added. Next, the activity of the alkaline phosphatase enzyme was determined by measuring the optical density of the solution at a wavelength of 405
Для наглядности полученные данные представлены также в виде трехмерной гистограммы (см. фиг.2), где ось ординат - оптическая плотность OD415, ось абсцисс - концентрация L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновой кислоты (мг/дозу), ось аппликат - концентрация БЦЖ (КОЕ/дозу)For clarity, the data obtained are also presented in the form of a three-dimensional histogram (see Fig. 2), where the ordinate axis is the optical density OD415, the abscissa axis is the concentration of L-alanine-γ-D-glutamylmesodiaminopimelic acid (mg / dose), the applicate axis is the concentration BCG (CFU / dose)
Использованная в эксперименте L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота была получена из клеточной стенки бактерий (E.coli) согласно стандартной методике (J.Heijenoort, L. Elbaz, P.MI&Je, A. Petit, Е. Bricas, J. Ghuysen, Structure of the meso-Diaminopimelic Acid Containing Peptidoglycans in Escherichia coli В and Bacillus megaterium KM, Biochemistry, 1969, №8 (1), 207-213): выделение γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновой кислоты проводили с помощью хроматографии с использованием двух соединенных последовательно колонок Sephadex G-50-G25, с последующей финальной очисткой методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке С18. Дополнительный эксперимент был также проведен с L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислотой, полученной методом химического синтеза по стандартной методике (A. Roychowdhury, М. Wolfert, G.Boons Synthesis and Proinflammatory Properties of Muramyl Tripeptides Containing Lysine and Diaminopimelic Acid Moieties, ChemBioChem 2005, 6, 2088 - 2097). L-аланин -γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота была синтезирована с использованием стандартных методов пептидного синтеза из производных мезодиаминопимелиновой кислоты, глутамина и аланина.The L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid used in the experiment was obtained from the bacterial cell wall (E. coli) according to the standard procedure (J. Heijenoort, L. Elbaz, P.MI & Je, A. Petit, E. Bricas, J. Ghuysen, Structure of the meso-Diaminopimelic Acid Containing Peptidoglycans in Escherichia coli B and Bacillus megaterium KM, Biochemistry, 1969, No. 8 (1), 207-213): γ-D-glutamyl mesodiaminopimelic acid was isolated by chromatography using two connected Sephadex G-50-G25 columns sequentially, followed by final cleaning by reverse-phase high-performance liquid chromatography graphs on column C18. An additional experiment was also conducted with L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid obtained by chemical synthesis according to the standard method (A. Roychowdhury, M. Wolfert, G. Boons Synthesis and Proinflammatory Properties of Muramyl Tripeptides Containing Lysine and Diaminopimelic Acid Moieties,
Результаты экспериментов, поставленных с использованием фрагментов пептидогликана, полученных различными методами (химическим синтезом и выделением из клеточной стенки бактерий), не отличались.The results of experiments performed using peptidoglycan fragments obtained by various methods (chemical synthesis and isolation of bacteria from the cell wall) did not differ.
Как видно из представленных данных, иммунобиологическое средство на основе БЦЖ и низкомолекулярных фрагментов пептидогликана эффективно активирует основной провоспалительный транскрипционный фактор NF-kB в диапазоне концентраций БЦЖ (103 КОЕ/дозу - 1011 КОЕ/дозу), L-аланил-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновой кислоты (10 пг/дозу - 100 мг/дозу). При этом происходит значительное повышение интенсивности (потенциирование) эффектов, так как активация транскрипционного фактора NF-kB при действии иммунобиологического средства гораздо выше, чем сумма уровней активации NFkB его отдельными компонентами.As can be seen from the data presented, an immunobiological agent based on BCG and low molecular weight fragments of peptidoglycan effectively activates the main pro-inflammatory transcription factor NF-kB in the concentration range of BCG (10 3 CFU / dose - 10 11 CFU / dose), L-alanyl-γ-D- glutamylmezodiaminopimelic acid (10 pg / dose - 100 mg / dose). In this case, a significant increase in the intensity (potentiation) of the effects occurs, since the activation of the transcription factor NF-kB under the action of an immunobiological agent is much higher than the sum of the levels of NFkB activation by its individual components.
Пример 2Example 2
Оценка длительности эффекта иммунобиологического средства на основе БЦЖ и фрагментов пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислотуEstimation of the duration of the effect of an immunobiological agent based on BCG and peptidoglycan fragments containing diaminopimelic acid in their structure
Целью данного эксперимента было сравнить длительность эффекта разработанного иммунобиологического средства по сравнению с вакциной БЦЖ (по способности активировать транскрипционный фактор NFkB).The purpose of this experiment was to compare the duration of the effect of the developed immunobiological agent compared with the BCG vaccine (by the ability to activate the transcription factor NFkB).
Для определения активности NF-kB была выбрана модель на основе клеточной линии моноцитарной лейкемии человека ТНР-SEAP, содержащей ген щелочной фосфатазы под контролем NF-kB-зависимого промотера (см. фиг.1).To determine the activity of NF-kB, a model based on the THP-SEAP human monocytic leukemia cell line containing the alkaline phosphatase gene under the control of the NF-kB-dependent promoter was selected (see Fig. 1).
Клетки пассировались на 25 см2 культуральных флаконах в ростовой среде RPMI с 10% эмбриональной сывороткой. Для проведения анализа клетки были рассеяны на 96-луночный планшет в количестве 105 клеток на лунку. После рассева клеток планшет инкубировали при +37°C и 5% CO2 в течение 24 часов.Cells were passaged on 25 cm 2 culture vials in RPMI growth medium with 10% fetal serum. For analysis, cells were scattered on a 96-well plate in an amount of 10 5 cells per well. After sieving the cells, the plate was incubated at + 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours.
Через сутки к клеткам были добавлены следующие образцы:After a day, the following samples were added to the cells:
1) иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ (105 КОЕ/дозу), фрагмента пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислоту (в данном случае L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота, 100 нг/дозу),1) an immunobiological agent based on BCG vaccine (10 5 CFU / dose), a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid in its structure (in this case L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid, 100 ng / dose),
2) БЦЖ(104 КОЕ/дозу),2) BCG (10 4 CFU / dose),
3) фрагмент пептидогликана, содержащий диаминопимелиновую кислоту (L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота, 100 нг/дозу).3) a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid (L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid, 100 ng / dose).
Активность транскрипционного фактора NF-kB определяли через 6, 12, 18, 24 часа.The activity of the transcription factor NF-kB was determined after 6, 12, 18, 24 hours.
Затем из лунок планшета удаляли ростовую среду и добавляли по 100 мкл раствора п-нитрофенилфосфата (4 мг/мл). Далее определяли активность фермента щелочной фосфатазы, путем измерения оптической плотности раствора, при длине волны 405 нм 3 раза с интервалом 10 минут.В данном случае изменение оптической плотности раствора пропорционально количеству фермента щелочной фосфатазы, а следовательно, пропорционально активности транскрипционного фактора NF-kB. Полученные результаты представлены в Таблице 2.Then, growth medium was removed from the plate wells and 100 μl of p-nitrophenyl phosphate solution (4 mg / ml) was added. Next, the activity of the alkaline phosphatase enzyme was determined by measuring the optical density of the solution at a wavelength of 405
средство
на основе БЦЖImmunobiological
means
based on BCG
Результаты экспериментов, поставленных с использованием фрагментов пептидогликана, полученных различными методами (химическим синтезом и выделением из клеточной стенки бактерий), не отличались.The results of experiments performed using peptidoglycan fragments obtained by various methods (chemical synthesis and isolation of bacteria from the cell wall) did not differ.
Как видно из представленных данных, иммунобиологическое средство на основе БЦЖ и низкомолекулярных фрагментов пептидогликана обладает пролонгированным действием по сравнению с БЦЖ.As can be seen from the data presented, an immunobiological agent based on BCG and low molecular weight fragments of peptidoglycan has a prolonged effect compared to BCG.
Пример 3Example 3
Оценка иммуностимулирующих свойств иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ и фрагмента пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислотуEvaluation of the immunostimulating properties of an immunobiological agent based on BCG vaccine and a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid in its structure
Целью данного эксперимента было сравнить иммуностимулирующие свойства разработанного иммунобиологического средства по сравнению с вакциной БЦЖ (по способности индуцировать выброс цитокинов).The purpose of this experiment was to compare the immunostimulating properties of the developed immunobiological agent compared to BCG vaccine (in its ability to induce cytokine release).
Для этого была выбрана модель культуры клеток моноцитарной лейкемии человека ТНР-1. Из литературных данных известно, что моноциты - это одна из главных клеточных популяций, принимающих участие в противораковом иммунитете. Кроме того, клетки данной линии экспрессируют достаточно большой спектр цитокинов.For this, a THP-1 human monocytic leukemia cell culture model was selected. From literature data it is known that monocytes are one of the main cell populations participating in anti-cancer immunity. In addition, cells of this line express a fairly wide range of cytokines.
Для оценки уровня экспрессии цитокинов были выбраны тест-системы фирмы eBioscience (BMS810FF, BMS821FF) для мультиплексного анализа, которые позволяют измерять уровень экспрессии 17 цитокинов и хемокинов.To assess the level of expression of cytokines, eBioscience test systems (BMS810FF, BMS821FF) were selected for multiplex analysis, which allow measuring the expression level of 17 cytokines and chemokines.
Для исследования были выбраны такие концентрации действующих веществ иммунобиологического средства: БЦЖ и фрагмента пептидогликана, которые лежат в центре исследованного в примере 1 диапазона концентраций.For the study, we selected such concentrations of the active substances of the immunobiological agent: BCG and a fragment of the peptidoglycan, which lie in the center of the concentration range studied in Example 1.
Клетки пассировались на 25 см2 культуральных матрасах в ростовой среде RPMI с 10% эмбриональной сывороткой. Для проведения анализа клетки были рассеяны на 96-луночный планшет в количестве 105 клеток на лунку. После рассева клеток планшет инкубировали при +37°C и 5% CO2 в течение 24 часов. Через сутки к клеткам были добавлены следующие образцы:Cells were passaged on 25 cm2 culture mattresses in RPMI growth medium with 10% fetal serum. For analysis, the cells were scattered on a 96-well plate in an amount of 105 cells per well. After sieving the cells, the plate was incubated at + 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours. After a day, the following samples were added to the cells:
1) иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ (105 КОЕ/дозу), фрагмента пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислоту (в данном случае L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота, 100 нг/дозу),1) an immunobiological agent based on BCG vaccine (105 CFU / dose), a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid in its structure (in this case L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid, 100 ng / dose),
2) БЦЖ(104 КОЕ/дозу),2) BCG (104 CFU / dose),
3) фрагмент пептидогликана, содержащий диаминопимелиновую кислоту (L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота, 100 нг/дозу).3) a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid (L-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid, 100 ng / dose).
В эксперименте использовали фрагменты пептидогликана, полученные путем химического синтеза (по приведенной в примере 1 методике).In the experiment used fragments of peptidoglycan obtained by chemical synthesis (according to the method described in example 1).
Далее клетки инкубировали 18 часов. Затем определяли уровень экспрессии цитокинов с помощью коммерческого набора. Полученные результаты представлены на фиг.2, где ось ординат - концентрация цитокинов, пг/мл, ось абсцисс: 1-1L-1α, 2-IL-6, 3-МСР-1, 4-CXCL-1, 5-М1Р-1α,Then the cells were incubated for 18 hours. Then determined the level of expression of cytokines using a commercial kit. The results are presented in figure 2, where the ordinate axis is the concentration of cytokines, pg / ml, the abscissa axis: 1-1L-1α, 2-IL-6, 3-MCP-1, 4-CXCL-1, 5-M1P- 1α,
Было показано, что разработанное иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ индуцирует экспрессию цитокинов: IL-1α, IL-6, МСР-1, CXCL-1, MIP-1α, которые играют важную роль в противоопухолевом иммунном ответе. При этом происходит потенциирование эффектов: поскольку уровень экспрессии цитокинов при действии иммунобиологического средства гораздо выше, чем сумма уровней активации цитокинов его отдельными компонентами.It was shown that the developed immunobiological agent based on BCG vaccine induces the expression of cytokines: IL-1α, IL-6, MCP-1, CXCL-1, MIP-1α, which play an important role in the antitumor immune response. In this case, potentiation of effects occurs: since the level of cytokine expression under the action of an immunobiological agent is much higher than the sum of the levels of cytokine activation by its individual components.
Аналогичные результаты были получены в эксперименте с использованием фрагментов пептидогликана, полученных путем выделения из клеточной стенки бактерий (по приведенной в примере 1 методике).Similar results were obtained in an experiment using peptidoglycan fragments obtained by isolating bacteria from the cell wall (according to the procedure described in Example 1).
Пример 4Example 4
Оценка противоопухолевой активности иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ и фрагментов пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислотуEvaluation of the antitumor activity of an immunobiological agent based on BCG vaccine and peptidoglycan fragments containing diaminopimelic acid in their structure
Целью данного примера является оценка противоопухолевой эффективности иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ на модели рака мочевого пузыря мышей, индуцируемого N-метил-N-нитрозомочевиной.The purpose of this example is to evaluate the antitumor efficacy of an BCG-based immunobiological agent in a mouse bladder cancer model induced by N-methyl-N-nitrosourea.
На фиг.4 представлена схема эксперимента. По оси абсцисс указано время с начала эксперимента (недели), А - введение N-метил-N-нитрозомочевины, Б - введение физиологического раствора, В - введение БЦЖ, Г - введение иммунобиологического средства на основе БЦЖ.Figure 4 presents a diagram of the experiment. The abscissa indicates the time from the beginning of the experiment (week), A - the introduction of N-methyl-N-nitrosourea, B - the introduction of physiological saline, C - the introduction of BCG, D - the introduction of an immunobiological agent based on BCG.
Для проведения эксперимента были использованы мыши линии BALB/c, самки, весом 18-20 г. Все животные были катетеризованы по стандартной методике (С.Hung, К. Dodson, S. Hultgren, A murine model of urinary tract infection, Nature protocols, 4, 1230-1243, 2009). Далее всем животным вводили N-метил-N-нитрозомочевину (0,2 мг/мышь) в объеме 50 мкл. Данную процедуру повторяли еженедельно, в течение 10 недель. Таким образом, общая доза N-метил-N-нитрозомочевины составила 2 мг/мышь. После окончания курса N-метил-N-нитрозомочевины все животные были разделены на три группы, которым вводилиFor the experiment, BALB / c mice were used, females weighing 18-20 g. All animals were catheterized according to the standard method (C. Hung, C. Dodson, S. Hultgren, A murine model of urinary tract infection, Nature protocols, 4, 1230-1243, 2009). Next, all animals were injected with N-methyl-N-nitrosourea (0.2 mg / mouse) in a volume of 50 μl. This procedure was repeated weekly for 10 weeks. Thus, the total dose of N-methyl-N-nitrosourea was 2 mg / mouse. After the course of N-methyl-N-nitrosourea, all animals were divided into three groups, which were introduced
1) иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ (104 КОЕ/дозу), отличающееся тем, что оно включает фрагмент пептидогликана, содержащий в своей структуре диаминопимелиновую кислоту (в данном случае L-аланил-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновую кислоту, 100 нг/дозу),1) an immunobiological agent based on BCG vaccine (10 4 CFU / dose), characterized in that it includes a peptidoglycan fragment containing diaminopimelic acid in its structure (in this case L-alanyl-γ-D-glutamylmesodiaminopimelic acid, 100 ng / dose ),
2) БЦЖ (104 КОЕ/дозу),2) BCG (10 4 CFU / dose),
3) фрагмент пептидогликана, содержащий диаминопимелиновую кислоту (L-аланил-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновую кислоту, 100 нг/дозу.)3) a fragment of a peptidoglycan containing diaminopimelic acid (L-alanyl-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid, 100 ng / dose.)
Для исследования были выбраны такие концентрации действующих веществ иммунобиологического средства: БЦЖ и фрагмента пептидогликана, которые лежат в середине исследованного в примере 1 диапазона концентраций.For the study, we selected such concentrations of the active substances of the immunobiological agent: BCG and the peptidoglycan fragment, which lie in the middle of the concentration range studied in Example 1.
Препараты вводились в мочевой пузырь с помощью катетера в терапевтической дозе, 3 раза с интервалом в неделю. Через 12 недель после последней инстилляции животные были усыплены.The drugs were injected into the bladder using a catheter at a therapeutic dose, 3 times at weekly intervals. 12 weeks after the last instillation, the animals were euthanized.
Далее был подготовлен гистологический препарат мочевого пузыря. Все органы были помещены в заливочные формы, наполненные средой для замораживания образцов (кат№05-9891, Bio-Optica), и заморожены в спирте, охлажденном жидким азотом. Далее с помощью криотома Shandon (UK) были подготовлены срезы толщиной 10 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Морфологическое изучение срезов проводили при увеличениях микроскопа ×100 и ×400. Полученные результаты представлены в таблице 3.Next, a histological preparation of the bladder was prepared. All organs were placed in casting molds filled with sample freezing medium (Cat. No. 05-9891, Bio-Optica) and frozen in alcohol cooled with liquid nitrogen. Then, using a Shandon cryotome (UK), sections were prepared with a thickness of 10 μm, which were stained with hematoxylin and eosin. Morphological study of sections was carried out at magnifications of a microscope × 100 and × 400. The results are presented in table 3.
диаминопимелиновую кислотуBCG vaccine-based immunobiological agent, characterized in that it comprises a peptidoglycan fragment containing in its structure
diaminopimelic acid
ческий
растворPhysiologists
chesky
solution
точный ракTransition glue
accurate cancer
патологииLack of
pathology
Анализ гистологических изменений, полученных образцов показал, что в группе, которая получала БЦЖ, переходноклеточный рак встречался в 43% случаев, тогда как в группе, которая получала иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ, отличающееся тем, что оно включает фрагмент пептидогликана, содержащий в своей структуре диаминопимелиновую кислоту, переходноклеточный рак наблюдался в 34% случаев. Предраковое состояние было диагностировано в 26% случаях после введения вакцины БЦЖ и в 29% случаях после введения иммунобиологического средства на основе БЦЖ.Analysis of the histological changes of the obtained samples showed that in the group that received BCG, transitional cell carcinoma occurred in 43% of cases, while in the group that received an immunobiological agent based on BCG vaccine, characterized in that it includes a peptidoglycan fragment containing diaminopimelic acid structure, transitional cell carcinoma was observed in 34% of cases. A precancerous condition was diagnosed in 26% of cases after the introduction of the BCG vaccine and in 29% of cases after the introduction of an immunobiological agent based on BCG.
В эксперименте использовали фрагменты пептидогликана, полученные путем химического синтеза (по приведенной в примере 1 методике).In the experiment used fragments of peptidoglycan obtained by chemical synthesis (according to the method described in example 1).
Аналогичные результаты были получены в эксперименте с использованием фрагментов пептидогликана, полученных путем выделения из клеточной стенки бактерий (по приведенной в примере 1 методике).Similar results were obtained in an experiment using peptidoglycan fragments obtained by isolating bacteria from the cell wall (according to the procedure described in Example 1).
Исходя из полученных результатов проделанной работы можно заключить, что иммунобиологическое средство на основе БЦЖ имеет ярковыраженную противоопухолевую активность и обладает большим терапевтическим эффектом, чем прототип - БЦЖ.Based on the results of the work done, we can conclude that the BCG-based immunobiological agent has a pronounced antitumor activity and has a greater therapeutic effect than the prototype BCG.
Пример 5Example 5
Оценка токсичности иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ и фрагментов пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислотуToxicity assessment of an immunobiological agent based on BCG vaccine and peptidoglycan fragments containing diaminopimelic acid in their structure
Целью данного исследования являлось определение безопасности и потенциальных токсических эффектов иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ.The purpose of this study was to determine the safety and potential toxic effects of an immunobiological agent based on BCG vaccine.
На первом этапе была определена токсичность иммунобиологического средства in vitro. Для этого были использованы клетки моноцитарной лейкемии человека ТНР-1.At the first stage, the toxicity of the in vitro immunobiological agent was determined. For this, cells of human monocytic leukemia THP-1 were used.
Клетки пассировались на 25 см2 культуральных флаконах в ростовой среде DMEM с 10% эмбриональной сывороткой. Для проведения анализа клетки были рассеяны на 96-луночный планшет в количестве 105 клеток на лунку. После рассева клеток планшет инкубировали при +37°C и 5% CO2 в течение 24 часов.Cells were passaged on 25 cm 2 culture vials in DMEM growth medium with 10% fetal serum. For analysis, cells were scattered on a 96-well plate in an amount of 10 5 cells per well. After sieving the cells, the plate was incubated at + 37 ° C and 5% CO 2 for 24 hours.
Далее к клеткам были добавлены иммунобиологические средства на основе БЦЖ с теми же концентрациями действующих веществ, что и в примере 1:Next, BCG-based immunobiological agents were added to the cells with the same concentrations of active substances as in Example 1:
БЦЖ - 0 КОЕ/дозу, 102 КОЕ/дозу, 103 КОЕ/дозу, 104 КОЕ/дозу, 105 КОЕ/дозу, 106 КОЕ/дозу, 107 КОЕ/дозу, 108 КОЕ/дозу, 109 КОЕ/дозу, 1010 КОЕ/дозу, 1011 КОЕ/дозуBCG - 0 CFU / dose, February 10 CFU / dose, March 10 CFU / dose of 10 4 cfu / dose, May 10 CFU / dose, June 10 CFU / dose of 10 7 cfu / dose, 10 8 cfu / dose, 10 9 cfu / dose, 10 10 cfu / dose, 10 11 cfu / dose
L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновая кислота - 0 пг/дозу, 1 пг/дозу, 10 пг/дозу, 100 пг/дозу, 1 мкг/дозу, 10 мкг/дозу, 100 мкг/дозу, 1 мг/дозу, 10 мг/дозу, 100 мг/дозуL-alanine-γ-D-glutamylmezodiaminopimelic acid - 0 pg / dose, 1 pg / dose, 10 pg / dose, 100 pg / dose, 1 μg / dose, 10 μg / dose, 100 μg / dose, 1 mg /
Под дозой понимается количество препарата, предназначенное для единовременного (за 1 инстилляцию) введения в мочевой пузырь. Объем препарата, рекомендованный для одной инстилляции в мочевой пузырь, составляет 50 мл. Поскольку препарат содержит живые бактериальные клетки, для разведения рекомендуется использовать любой изотонический растворитель надлежащего фармацевтического качества. В данном случае был использован физиологический раствор.Dose refers to the amount of the drug intended for a single (per 1 instillation) injection into the bladder. The volume of the drug recommended for one instillation into the bladder is 50 ml. Since the preparation contains live bacterial cells, it is recommended to use any isotonic solvent of appropriate pharmaceutical quality for dilution. In this case, saline was used.
Клетки инкубировали в течение 18 часов. Затем из лунок планшета удаляли ростовую среду и добавляли по 50 мкл охлажденного спирта для фиксации клеток. Далее к фиксированным клеткам добавляли 100 мкл 0,1% раствора метиленового голубого. Через 20 минут лунки промывали дистиллятом от несвязавшегося красителя, высушивали и затем экстрагировали метиленовый голубой 1% раствором SDS. Оптическую плотность измеряли при длине волны: 540 нм и 620 нм. Результат необходимо было представить в виде разницы значений (Z), измеренных при длине волны 620 и 540 нм. Определялся коэффициент токсичности образца Т:Cells were incubated for 18 hours. Then, growth medium was removed from the plate wells and 50 μl of chilled alcohol was added to fix the cells. Next, 100 μl of a 0.1% methylene blue solution was added to the fixed cells. After 20 minutes, the wells were washed with distillate from an unbound dye, dried and then extracted with methylene blue with 1% SDS. The optical density was measured at a wavelength of: 540 nm and 620 nm. The result had to be presented as the difference of the values (Z) measured at a wavelength of 620 and 540 nm. The toxicity coefficient of sample T was determined:
где Z контроль - разница значений оптической плотности, измеренных при длине волны 620 и 540 нм, в отрицательном контроле,where Z control is the difference in optical density values measured at a wavelength of 620 and 540 nm in the negative control,
Z эксперимент - разница значений оптической плотности, измеренных при длине волны 620 и 540 нм, в опытной лунке.Z experiment - the difference in optical density values measured at a wavelength of 620 and 540 nm in the experimental well.
При этом Т=0 означает, что препарат не токсичен и не влияет на выживаемость данной клеточной культуры, а Т=100% означает, что препарат токсичен и в лунке планшета нет живых клеток.Moreover, T = 0 means that the drug is not toxic and does not affect the survival of this cell culture, and T = 100% means that the drug is toxic and there are no living cells in the well of the tablet.
Полученные результаты представлены в таблице 4.The results are presented in table 4.
Для наглядности полученные данные представлены также в виде трехмерной гистограммы (см. фиг.5), где ось ординат - коэффициент токсичности, %, ось абсцисс - концентрация L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновой кислоты (мг/дозу), ось аппликат - концентрация БЦЖ (КОЕ/дозу)For clarity, the data obtained are also presented in the form of a three-dimensional histogram (see Fig. 5), where the ordinate axis is the toxicity coefficient,%, the abscissa axis is the concentration of L-alanine-γ-D-glutamylmesodiaminopimelic acid (mg / dose), the applicate axis is BCG concentration (CFU / dose)
В эксперименте использовали фрагменты пептидогликана, полученные путем химического синтеза (по приведенной в примере 1 методике).In the experiment used fragments of peptidoglycan obtained by chemical synthesis (according to the method described in example 1).
Аналогичные результаты были получены в эксперименте с использованием фрагментов пептидогликана, полученных путем выделения из клеточной стенки бактерий (по приведенной в примере 1 методике).Similar results were obtained in an experiment using peptidoglycan fragments obtained by isolating bacteria from the cell wall (according to the procedure described in Example 1).
Как видно из представленных результатов, наибольшей токсичностью обладали иммунобиологические средства, содержащие БЦЖ в концентрации 1011 КОЕ/дозу и γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновую кислоту (концентрация 100 мг/дозу). Остальные иммунобиологические средства, содержащие БЦЖ (103-1010 КОЕ/дозу) и L-аланин-γ-D-глутамилмезодиаминопимелиновую кислоту (10 пг/дозу -10 мг/дозу), либо не обладали токсичностью, либо обладали незначительной токсичностью. Следовательно, данные концентрации БЦЖ и фрагмента пептидогликана могут использоваться для создания иммунобиологического средства.As can be seen from the presented results, immunobiological agents containing BCG at a concentration of 10 11 CFU / dose and γ-D-glutamylmesodiaminopimelic acid (
Использование совместно в композиции БЦЖ и фрагментов пептидогликана приводит к активации соответствующих рецепторов БЦЖ и фрагментами пептидогликана и к усилению активности транскрипционных факторов (в том числе транскрипционного фактора NF-kB), которые регулируют экспрессию различных провоспалительных белков и, как следствие, развитие тех или иных иммунных реакций.The use of BCG and peptidoglycan fragments together in the composition leads to activation of the corresponding BCG receptors and peptidoglycan fragments and to an increase in the activity of transcription factors (including the transcription factor NF-kB), which regulate the expression of various pro-inflammatory proteins and, as a consequence, the development of certain immune reactions.
В приведенных примерах было показано, что разработанное иммунобиологическое средство на основе вакцины БЦЖ индуцирует экспрессию цитокинов: IL-1α, IL-6, МСР-1, CXCL-1, MIP-1α, которые играют важную роль в противоопухолевом иммунном ответе. При этом происходит потенциирование эффектов: поскольку уровень экспрессии цитокинов при действии иммунобиологического средства гораздо выше, чем сумма уровней активации цитокинов его отдельными компонентами. Пролонгированный эффект достигается за счет потенциирования индукции иммунных реакций по сравнению с интенсивностью тех эффектов, которые инициируются при применении индивидуальных компонентов, входящих в его состав (пример 2).In the above examples, it was shown that the developed BCG vaccine-based immunobiological agent induces the expression of cytokines: IL-1α, IL-6, MCP-1, CXCL-1, MIP-1α, which play an important role in the antitumor immune response. In this case, potentiation of effects occurs: since the level of cytokine expression under the action of an immunobiological agent is much higher than the sum of the levels of cytokine activation by its individual components. The prolonged effect is achieved due to the potentiation of the induction of immune responses in comparison with the intensity of those effects that are triggered by the application of the individual components included in its composition (example 2).
Аналогичные результаты были получены в эксперименте с использованием фрагментов пептидогликана, полученных путем выделения из клеточной стенки бактерий (по приведенной в примере 1 методике).Similar results were obtained in an experiment using peptidoglycan fragments obtained by isolating bacteria from the cell wall (according to the procedure described in Example 1).
Таким образом, подтверждается изобретательский уровень данного изобретения.Thus, the inventive step of the present invention is confirmed.
Промышленная применимость. Результаты, приведенные в примерах, подтверждают промышленную применимость заявленного изобретения и выполнение поставленной задачи, а именно создание иммунобиологического средства на основе вакцины БЦЖ и фрагмента пептидогликана, содержащего в своей структуре диаминопимелиновую кислоту, обладающего высокой иммуностимулирующей активностью и пролонгированностью действия, с возможностью его использования в терапии рака мочевого пузыря, с обеспечением индукции широкого спектра иммунных реакций, формируемых за счет дополнительной стимуляции врожденной иммунной системы посредством активации NOD рецепторов 1.Industrial applicability. The results given in the examples confirm the industrial applicability of the claimed invention and the implementation of the task, namely the creation of an immunobiological agent based on BCG vaccine and a fragment of peptidoglycan containing diaminopimelic acid with high immunostimulating activity and prolonged action, with the possibility of its use in therapy bladder cancer, with the provision of the induction of a wide range of immune reactions, formed due to additional stimulation of the innate immune system through activation of
Claims (5)
БЦЖ - от 103 КОЕ/дозу до 1010 КОЕ/дозу,
низкомолекулярный фрагмент пептидогликана - от 10 пг/дозу до 10 мг/дозу.4. The immunobiological agent according to claim 1, characterized in that in one dose contains:
BCG - from 10 3 CFU / dose to 10 10 CFU / dose,
low molecular weight fragment of peptidoglycan - from 10 pg / dose to 10 mg / dose.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013114199/15A RU2555327C2 (en) | 2013-03-29 | 2013-03-29 | Immunobiological agent for treating urinary bladder cancer and method of application thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013114199/15A RU2555327C2 (en) | 2013-03-29 | 2013-03-29 | Immunobiological agent for treating urinary bladder cancer and method of application thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013114199A RU2013114199A (en) | 2014-10-10 |
| RU2555327C2 true RU2555327C2 (en) | 2015-07-10 |
Family
ID=53379750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013114199/15A RU2555327C2 (en) | 2013-03-29 | 2013-03-29 | Immunobiological agent for treating urinary bladder cancer and method of application thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2555327C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2755638C2 (en) * | 2019-12-30 | 2021-09-17 | Игорь Викторович Красильников | Method for increasing antitumour resistance, antioxidant and immunostimulating effects on the body |
-
2013
- 2013-03-29 RU RU2013114199/15A patent/RU2555327C2/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SIMONS MP., et al., Identification of the mycobacterial subcomponents involved in the release of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand from human neutrophils. Infect Immun. 2007 Mar;75(3):1265-71. Epub 2006 Dec 28 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2755638C2 (en) * | 2019-12-30 | 2021-09-17 | Игорь Викторович Красильников | Method for increasing antitumour resistance, antioxidant and immunostimulating effects on the body |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013114199A (en) | 2014-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhou et al. | Exosomes derived from immunogenically dying tumor cells as a versatile tool for vaccination against pancreatic cancer | |
| Gu et al. | Enhancing anti-tumor immunity through liposomal oxaliplatin and localized immunotherapy via STING activation | |
| Doshi et al. | Systemic nano-delivery of low-dose STING agonist targeted to CD103+ dendritic cells for cancer immunotherapy | |
| Watkins-Schulz et al. | A microparticle platform for STING-targeted immunotherapy enhances natural killer cell-and CD8+ T cell-mediated anti-tumor immunity | |
| Cecil et al. | Outer membrane vesicles prime and activate macrophage inflammasomes and cytokine secretion in vitro and in vivo | |
| Izumoto et al. | Phase II clinical trial of Wilms tumor 1 peptide vaccination for patients with recurrent glioblastoma multiforme | |
| Suga et al. | TLR4, rather than TLR2, regulates wound healing through TGF-β and CCL5 expression | |
| US20130129675A1 (en) | Interferon therapies in combination with blockade of stat3 activation | |
| KR20170138534A (en) | Therapeutically Administered Blood Apoptosis Cell Preparations and Uses Thereof | |
| KR20190084207A (en) | Medium regeneration medium of adipose tissue-derived mesenchymal stromal cells and their preparation and use | |
| Ha et al. | Chronic inflammation drives glioma growth: cellular and molecular factors responsible for an immunosuppressive microenvironment | |
| Mathern et al. | Mouse and human Notch-1 regulate mucosal immune responses | |
| Yang et al. | A nanoformulation for immunosuppression reversal and broad-spectrum self-amplifying antitumor ferroptosis-immunotherapy | |
| EP3532076B1 (en) | Immunotherapeutic treatments for tumours | |
| CA3006302C (en) | Method of ex vivo enhancement of immune cell activity for cancer immunotherapy with a small molecule ablative compound | |
| Salem et al. | Acute inflammation induces immunomodulatory effects on myeloid cells associated with anti-tumor responses in a tumor mouse model | |
| Wu et al. | Antihelminthic niclosamide modulates dendritic cells activation and function | |
| Aydin et al. | The proteomic effects of pulsed focused ultrasound on tumor microenvironments of murine melanoma and breast cancer models | |
| JP2021515797A (en) | Insight method for inducing immune response | |
| Montero et al. | Helminth-derived peptide GK-1 induces Myd88-dependent pro-inflammatory signaling events in bone marrow-derived antigen-presenting cells | |
| Garay et al. | Crosstalk between PKA and Epac regulates the phenotypic maturation and function of human dendritic cells | |
| Kang et al. | The guggulsterone derivative GG-52 inhibits NF-κB signaling in bone marrow-derived dendritic cells and attenuates colitis in IL-10 knockout mice | |
| US11471463B2 (en) | Enhancers of cellular cannibalism for use to sensitize tumors to radiation therapy | |
| Li et al. | A cross-linked macropore hydrogel based on M1 macrophage lysate and alginate regulates tumor-associated macrophages for the treatment of melanoma | |
| Huang et al. | In vitro and in vivo killing effects of methionine enkephalin on osteosarcoma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| PD4A | Correction of name of patent owner |