[go: up one dir, main page]

RU2543357C1 - Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration - Google Patents

Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration Download PDF

Info

Publication number
RU2543357C1
RU2543357C1 RU2013151989/15A RU2013151989A RU2543357C1 RU 2543357 C1 RU2543357 C1 RU 2543357C1 RU 2013151989/15 A RU2013151989/15 A RU 2013151989/15A RU 2013151989 A RU2013151989 A RU 2013151989A RU 2543357 C1 RU2543357 C1 RU 2543357C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
lys
edema
antimicrobial peptide
dermis
macrophages
Prior art date
Application number
RU2013151989/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Виктор Анатольевич Лазаренко
Юрий Дмитриевич Ляшев
Николай Иванович Шевченко
Original Assignee
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2013151989/15A priority Critical patent/RU2543357C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2543357C1 publication Critical patent/RU2543357C1/en

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: skin regeneration is stimulated by using a synthetic analogue of indolicidine, a natural antimicrobial peptide having formula H-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Lys-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH2.
EFFECT: accelerating reparative skin regeneration following a burn injury.
2 tbl, 1 ex

Description

Область применения: изобретение относится к медицине, в частности к комбустиологии, может быть использовано для стимуляции регенерации кожи после ожоговой травмы у лабораторных животных, больных.Scope: the invention relates to medicine, in particular to combustiology, can be used to stimulate skin regeneration after burn injury in laboratory animals, patients.

В литературе последних лет описаны такие свойства антимикробных пептидов (АМП), как реализация защитных и приспособительных реакций при инфицировании, стрессорном воздействии (Korneva Е.А., Rybakina E.G., Kokryakov V.N., Orlov D.S., Shamova O.V., Shanin S.N. Interleukin-1 and defensins in thermoregulation, stress and immunity // Annals of NY Acad. Sci. - 1997. - Vol.812. - P.465-474; Aberg K.M., Radek K.A., Choi E-H, Kim D-K., Demerjian M., Hupe M., Kerbleski J., Gallo R.L., Ganz Т., Mauro Т., Feingold K.R., Elias P.M. Psychological stress downregulates epidermal antimicrobial peptide expression and increases severity of cutaneous infections in mice // J Clin Invest. - 2007. - Vol.117, №11. - P.3339-3349), паразитарной инвазии (McGwire В.S., Kulkarni M.M. Interactions of antimicrobial peptides with Leishmania and trypanosomes and their functional role in host parasitism // Exp Parasitol. - 2010. - Vol.126, №3. - P.397-405), опухолевом росте (Jin G., Kawsar H.I., Hirsch S.A., Zeng C., Jia X., Feng Z., Ghosh S.K., Zheng Q.Y., Zhou A., McIntyre Т.M., Weinberg A. An Antimicrobial Peptide Regulates Tumor-Associated Macrophage Trafficking via the Chemokine Receptor CCR2, a Model for Tumorigenesis // PLoS One. - 2010. - Vol.5, №6. - P.10993). Антимикробные пептиды относят к группе биологически активных веществ, синтезируемых преимущественно нейтрофильными гранулоцитами и макрофагами, а также эпителиальными клетками барьерных органов. Отмечают дозозависимые эффекты их действия. На сегодняшний день наиболее изученной является их непосредственная антимикробная биологическая активность, отражающая наиболее значимую роль этих пептидов в защитных функциях организма (Korneva E.A., Kokryakov V.N. Defensins: antimicrobial peptides with a broad spectrum of biological activity. // Neuroimmune Biology. - 2003. - Vol.3. - P.451-462).The literature of recent years describes such properties of antimicrobial peptides (AMPs) as the implementation of protective and adaptive reactions during infection, stress exposure (Korneva EA, Rybakina EG, Kokryakov VN, Orlov DS, Shamova OV, Shanin SN Interleukin-1 and defensins in thermoregulation, stress and immunity // Annals of NY Acad. Sci. - 1997. - Vol. 812. - P.465-474; Aberg KM, Radek KA, Choi EH, Kim DK., Demerjian M., Hupe M. , Kerbleski J., Gallo RL, Ganz T., Mauro T., Feingold KR, Elias PM Psychological stress downregulates epidermal antimicrobial peptide expression and increases severity of cutaneous infections in mice // J Clin Invest. - 2007. - Vol. 117, No. 11. - P.3339-3349), parasitic invasion (McGwire B.S., Kulkarni MM Interactions of antimicrobial peptides with Leishmania an d trypanosomes and their functional role in host parasitism // Exp Parasitol. - 2010. - Vol.126, No. 3. - P.397-405), tumor growth (Jin G., Kawsar HI, Hirsch SA, Zeng C., Jia X., Feng Z., Ghosh SK, Zheng QY, Zhou A., McIntyre T.M., Weinberg A. An Antimicrobial Peptide Regulates Tumor-Associated Macrophage Trafficking via the Chemokine Receptor CCR2, a Model for Tumorigenesis // PLoS One . - 2010. - Vol.5, No. 6. - P.10993). Antimicrobial peptides belong to the group of biologically active substances synthesized mainly by neutrophilic granulocytes and macrophages, as well as epithelial cells of barrier organs. The dose-dependent effects of their action are noted. To date, the most studied is their direct antimicrobial biological activity, reflecting the most significant role of these peptides in the protective functions of the body (Korneva EA, Kokryakov VN Defensins: antimicrobial peptides with a broad spectrum of biological activity. // Neuroimmune Biology. - 2003. - Vol. .3. - P.451-462).

Антимикробные пептиды обладают селективностью действия по отношению к бактериям, выработка резистентности к АМП микроорганизмами затруднена в связи с особенностями механизма бактерицидного действия данных пептидов (Orlov D.S., Nguyen Т., Lehrer R.I. Potassium release, a useful tool for studying antimicrobial peptides // J. Microbiol Methods. - 2002. - Vol.49, №3. - P.325-328).Antimicrobial peptides have a selectivity for bacteria, the development of resistance to AMP by microorganisms is difficult due to the specific mechanism of the bactericidal action of these peptides (Orlov DS, Nguyen T., Lehrer RI Potassium release, a useful tool for studying antimicrobial peptides // J. Microbiol Methods. - 2002. - Vol. 49, No. 3. - P.325-328).

АМП не задерживаются и не накапливаются в организме, не угнетают функции иммунной системы, а обладают различными иммуномодулирующими эффектами, например свойством стимулировать активность естественных киллерных (ЕК) клеток (Chernysh S., Irina К., Irina A. Anti-tumor activity of immunomodulatory peptide alloferon-1 in mouse tumor transplantation model // Int Immunopharmacol. - 2012. - Vol.12, №1. - P.312-314).AMPs do not linger and do not accumulate in the body, do not inhibit the functions of the immune system, but have various immunomodulating effects, for example, the ability to stimulate the activity of natural killer (EC) cells (Chernysh S., Irina K., Irina A. Anti-tumor activity of immunomodulatory peptide alloferon-1 in mouse tumor transplantation model // Int Immunopharmacol. - 2012. - Vol.12, No. 1. - P.312-314).

Техническим результатом изобретения является применение синтетического аналога природного антимикробного пептида индолицидин, имеющего формулу H-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Lys-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH2, для стимуляции репаративной регенерации кожи.The technical result of the invention is the use of a synthetic analogue of the natural antimicrobial peptide indolicidin having the formula H-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Lys-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH 2 , to stimulate the reparative regeneration of the skin .

Синтетический аналог природного антимикробного пептида индолицидин вводят парентерально (внутрибрюшинно) в дозе 100 мкг на 1 кг массы тела в 0,2 мл физиологического раствора ежедневно в течение 5 дней с момента ожоговой травмы экспериментальным животным (крысам линии Wistar).A synthetic analogue of the natural antimicrobial peptide, indolecidine, is administered parenterally (intraperitoneally) at a dose of 100 μg per 1 kg of body weight in 0.2 ml of physiological saline daily for 5 days from the time of burn injury to experimental animals (Wistar rats).

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯSPECIFIC USE EXAMPLE

Работа выполнена на 80 крысах-самцах линии Wistar массой 180-200 г. Животным под эфирным наркозом выполняли ожог кожи спины IIIa-IIIb степени площадью 18% поверхности тела [Лазаренко В.А., Моновцов И.А., Квачахия Л.Л. Регенерация кожи и костной ткани у мышей с экспериментальными травмами при иммунокоррекции риботаном // Курский научно-практич. вест. «Человек и его здоровье». - 2004. - №2-3. - С.50-55]. Исследуемые животные были разделены на две группы: контрольную и опытную по 40 особей в каждой. Крысам контрольной группы ежедневно в течение 5 суток после ожоговой травмы внутрибрюшинно вводили 0,2 мл физиологического раствора, а животным опытных групп - синтетический аналог природного антимикробного пептида индолицидин (ООО «НПФ Верта», г. Санкт-Петербург), в дозе 100 мкг/кг в аналогичном объеме физиологического раствора. Указанная доза выбрана на основе анализа данных литературы о высокой эффективности препарата в данном диапазоне доз [Смирнова М.П., Афонин В.Г., Шпень В.М., Тяготин Ю.В., Колодкин Н.И. Взаимосвязь структура-активность в ряду аналогов антибактериального пептида индолицидина. I. Синтез и биологическая активность аналогов с увеличением амфипатичностью и повышенным общим положительным зарядом молекулы// Биоорган, химия. - 2004. - Т.30, №5. - С.458-465].The work was performed on 80 Wistar male rats weighing 180-200 g. Animals under ether anesthesia performed a burn of the back skin of IIIa-IIIb degree with an area of 18% of the body surface [VA Lazarenko, IA Monovtsov, L. L. Kvachakhiya Skin and bone tissue regeneration in mice with experimental injuries during immunocorrection with ribotan // Kursk Scientific and Practical. West "Man and his health." - 2004. - No. 2-3. - S.50-55]. The studied animals were divided into two groups: control and experimental, 40 animals each. Rats of the control group were injected intraperitoneally daily with 5 ml of physiological saline daily for 5 days after a burn injury, and animals of the experimental groups were injected with a synthetic analogue of the natural antimicrobial peptide indolocidin (LLC NPF Verta, St. Petersburg), at a dose of 100 μg / kg in a similar volume of saline. The indicated dose was selected on the basis of analysis of literature data on the high efficacy of the drug in this dose range [Smirnova MP, Afonin V.G., Shpen V.M., Tyagotin Yu.V., Kolodkin N.I. The relationship of structure-activity in a series of analogues of the antibacterial peptide indolecidine. I. Synthesis and biological activity of analogues with an increase in amphipathicity and an increased total positive charge of the molecule // Bioorgan, chemistry. - 2004. - T. 30, No. 5. - S. 458-465].

Гистологическое изучение раневых биоптатов производили на 1-ые, 4-ые, 7-ые, 10-ые и 14-ые сутки от ожоговой травмы и начала лечения после выведении подопытного животного из эксперимента. Забор материала осуществляли путем иссечения участка экспериментальных ожоговых ран и прилежащих интактных тканей. Взятый материал сразу фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина с последующей проводкой по восходящим спиртам и заливкой в парафин по стандартной методике. Приготовленные парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Маллори.A histological study of wound biopsy samples was performed on the 1st, 4th, 7th, 10th and 14th days from a burn injury and treatment was started after the experimental animal was removed from the experiment. Material was taken by excising a section of experimental burn wounds and adjacent intact tissues. The material taken was immediately fixed in a 10% solution of neutral formalin, followed by ascending alcohols and pouring in paraffin according to standard methods. The prepared paraffin sections were stained with hematoxylin-eosin and according to Mallory.

При оценке гистологических срезов обращали внимание на выраженность воспалительных реакций, сроки появления грануляционной ткани, возникновение краевой эпителизации, а также структурную полноценность вновь образованного эпителия.When assessing histological sections, attention was paid to the severity of inflammatory reactions, the timing of the appearance of granulation tissue, the occurrence of marginal epithelization, as well as the structural usefulness of the newly formed epithelium.

При морфометрическом исследовании использовали окулярную стереометрическую сетку Автандилова, содержащую 100 тест-точек [Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии: Учеб. пособие. - М.: Медицина, 2002. - 238 с; Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии. - М.: Медицина, 1984. - 286 с.]. Проводили подсчет точек при увеличении ×400, совпадающих с изучаемыми гистологическими структурами на срезе ткани, и по 10-15 полям зрения микроскопа определяли долю некротизированной ткани, баллонной дистрофии, а также долю поверхностного новообразованного эпителия и подлежащей рыхлой соединительной ткани, объем распространения отека. Полученные результаты выражали в процентах (таблица 1).During the morphometric study, Avtandilov’s ocular stereometric network containing 100 test points was used [G. Avtandilov Fundamentals of quantitative pathological anatomy: Textbook. allowance. - M .: Medicine, 2002 .-- 238 s; Avtandilov G.G. Problems of pathogenesis and pathoanatomical diagnosis of diseases in aspects of morphometry. - M.: Medicine, 1984. - 286 p.]. Points were calculated at a magnification of × 400, which coincided with the studied histological structures on a tissue section, and the fraction of necrotic tissue, balloon dystrophy, as well as the fraction of superficial newly formed epithelium and underlying loose connective tissue, and the spread of edema were determined from 10-15 fields of view of the microscope. The results were expressed as a percentage (table 1).

Figure 00000001
Figure 00000001

Нами было выполнено также морфометрическое исследование, заключающееся в следующем: на срезах гистологических препаратов при увеличении ×400 на выбранном участке в пределах раневого дефекта под лейкоцитарно-фибринозным струпом производили подсчет фибробластов, гранулоцитов, лимфоцитов и макрофагов до 100 клеток, полученные результаты выражали в процентах (таблица 2).We also performed a morphometric study, which consisted of the following: on sections of histological preparations with an increase of × 400 in a selected area within the wound defect under a leukocyte-fibrinous scab, fibroblasts, granulocytes, lymphocytes and macrophages were counted to 100 cells, the results were expressed in percent ( table 2).

Figure 00000002
Figure 00000002

Установлено, что во всех группах к концу первых суток после нанесения ожога поверхность ожоговой раны не была покрыта струпом, края раны отечны, поврежденная кожа бледная.It was found that in all groups by the end of the first day after applying the burn, the surface of the burn wound was not covered with a scab, the edges of the wound were swollen, and the damaged skin was pale.

При микроскопии в контрольной группе отмечалось отсутствие лейкоцитарно-фибринозного струпа, гибель эпидермиса непосредственно в месте воздействия термического агента составляла 19,00±4,43% (табл.2), истончение эпидермиса, прилежащего к зоне деструкции за счет отсутствия в нем рогового и истончения шиповатого слоев; в блестящем слое отмечается формирование пузырей, заполненных коллоидом, не склонных к слиянию. Сосочковый слой не дифференцируется. Подлежащие ткани резко отечны (до 38,06±2,11%), выражена инфильтрация полиморфно-ядерными лейкоцитами (ПЯЛ), а также единичными макрофагами на разных стадиях дифференцировки. Пучки коллагеновых волокон сетчатого слоя дермы отечны и плотно прилежат друг к другу. Отек распространяется к гиподерме и за пределы зоны деструкции эпидермиса. В сетчатом слое дермы отмечаются признаки баллонной дистрофии (8,41±0,92%). Гиподерма также выражено инфильтрирована ПЯЛ. Дифференцируемые фибробласты имели базофильную цитоплазму и набухшие, разрыхленные ядра. Кровеносные и лимфатические сосуды расширены, отмечается стаз. Дифференцируются разрушенные волосяные фолликулы, протоки потовых желез не дифференцируются.Microscopy in the control group showed the absence of a leukocyte-fibrinous scab, the death of the epidermis directly at the site of exposure to the thermal agent was 19.00 ± 4.43% (Table 2), the thinning of the epidermis adjacent to the destruction zone due to the absence of horny and thinning prickly layers; in the shiny layer, the formation of bubbles filled with a colloid, not prone to fusion, is noted. The papillary layer does not differentiate. The underlying tissues are sharply edematous (up to 38.06 ± 2.11%), infiltration by polymorphonuclear leukocytes (PNL), as well as single macrophages at different stages of differentiation, is expressed. The bundles of collagen fibers of the reticular dermis are swollen and closely adjacent to each other. Edema spreads to the hypoderm and outside the epidermal destruction zone. In the reticular layer of the dermis, signs of balloon dystrophy are noted (8.41 ± 0.92%). The hypodermis is also pronounced infiltrated by the PNL. Differentiable fibroblasts had a basophilic cytoplasm and swollen, loosened nuclei. Blood and lymph vessels are dilated, stasis is noted. Destroyed hair follicles are differentiated, the ducts of the sweat glands do not differentiate.

В гистологических препаратах животных контрольной группы в первые сутки эксперимента доля некротизированной ткани составляла 19,00±4,43%, отмечали максимальное распространение отека до 38,06±2,11%, баллонной дистрофии до 8,41±0,92%. Клеточный инфильтрат представлен в большинстве гранулоцитами 62,88±2,06%, доля фибробластов, лимфоцитов и макрофагов составили соответственно: 8,63±0,60%, 12,00±1,15%, 17,75±0,86%.In the histological preparations of animals of the control group on the first day of the experiment, the proportion of necrotic tissue was 19.00 ± 4.43%, the maximum spread of edema was observed to 38.06 ± 2.11%, balloon dystrophy to 8.41 ± 0.92%. Cellular infiltrate is represented in most granulocytes by 62.88 ± 2.06%, the proportion of fibroblasts, lymphocytes and macrophages was respectively: 8.63 ± 0.60%, 12.00 ± 1.15%, 17.75 ± 0.86% .

В опытной группе, получавшей аналог индолицидина в дозе 100 мкг/кг, на следующие сутки после нанесения ожоговой травмы отмечали отсутствие лейкоцитарно-фибринозного струпа. В месте воздействия термического агента эпидермис либо отсутствовал, либо был некротизирован (до 33,21±1,56%). В прилежащем эпидермисе интактной кожи обнаруживали пузыри, содержащие коллоид. В дерме не дифференцировался сосочковый слой. Коллагеновые волокна сетчатого слоя были отечны. Наиболее выраженный отек верхнего слоя дермы (до 33,21±1,56%) отмечали в местах отсутствия эпидермиса. По сравнению с контрольной группой отек был менее выражен (на 12,02%), что, по-видимому, способствовало интенсивной инфильтрации дермы нейтрофилами и макрофагами. В клеточном инфильтрате преобладали гранулоциты и макрофаги. Менее выражены признаки дистрофии дермы по сравнению с контрольной группой. Гиподерма также была интенсивно инфильтрирована. Отмечали расширение кровеносных и лимфатических сосудов и стаз в них.In the experimental group receiving an indolecidine analogue at a dose of 100 μg / kg, the absence of a leukocyte-fibrinous scab was noted on the next day after applying a burn injury. At the site of exposure to the thermal agent, the epidermis was either absent or was necrotic (up to 33.21 ± 1.56%). Bubbles containing colloid were found in the adjacent epidermis of intact skin. The papillary layer did not differentiate in the dermis. The collagen fibers of the reticular layer were swollen. The most pronounced edema of the upper layer of the dermis (up to 33.21 ± 1.56%) was noted in places where the epidermis was absent. Compared to the control group, edema was less pronounced (by 12.02%), which, apparently, contributed to the intensive infiltration of the dermis with neutrophils and macrophages. Granulocytes and macrophages prevailed in cell infiltrate. Signs of dermal dystrophy are less pronounced compared with the control group. The hypodermis was also intensely infiltrated. Marked expansion of blood and lymph vessels and stasis in them.

На первые сутки после нанесения ожога в гистологических препаратах животных, получавших Инд 21 в дозе 100 мкг/кг, отмечается увеличение доли некротизированной ткани по сравнению с контрольной группой на 37,56%, менее выраженный отек дермы и баллонной дистрофии (на 12,02% и 46,36%). В клеточном составе инфильтрата преобладали гранулоциты, количество которых было меньше по сравнению с контрольной группой на 28,83%, уменьшалось также количество лимфоцитов (на 28,13%). Количество фибробластов и макрофагов по сравнению с показателями контрольной группы было выше на 49,28% и 90,85% соответственно.On the first day after a burn in the histological preparations of animals treated with Indus 21 at a dose of 100 μg / kg, an increase in the proportion of necrotic tissue compared with the control group was noted by 37.56%, less pronounced edema of the dermis and balloon dystrophy (by 12.02% and 46.36%). Granulocytes prevailed in the cellular composition of the infiltrate, the number of which was less by 28.83% compared with the control group, and the number of lymphocytes also decreased (by 28.13%). The number of fibroblasts and macrophages compared with the control group was higher by 49.28% and 90.85%, respectively.

На 4-е сутки после моделирования ожоговой раны у животных контрольной серии морфологическая картина регенерирующих тканей в зоне термической травмы выглядела следующим образом: отмечается начало формирование лейкоцитарно-фибринозного струпа над зоной деструкции. По сравнению с предыдущим сроком эксперимента отмечается уменьшение отека (33,21±1,56%), распространяющегося на всю толщу дермы и переходящего на гиподерму. Отмечается более выраженная инфильтрация ПЯЛ и макрофагами гиподермы и прилежащего к ней сетчатого слоя дермы. Инфильтрат и отек распространяются на интактную ткань. В дерме отмечается уменьшение признаков дистрофии по сравнению с предыдущим сроком наблюдения. Ближайший край интактной кожи под струпом, истончен, в некоторых срезах в толще интактного эпидермиса определяются пузыри. Отмечается стаз в сосудах. Признаки эпителизации отсутствуют или маловыражены.On the 4th day after modeling the burn wound in animals of the control series, the morphological picture of the regenerating tissues in the zone of thermal injury was as follows: the formation of a leukocyte-fibrinous scab above the destruction zone was noted. Compared with the previous period of the experiment, there is a decrease in edema (33.21 ± 1.56%), which extends to the entire thickness of the dermis and passes to the hypoderma. A more pronounced infiltration of the PNL and macrophages of the hypodermis and the adjacent reticular dermis is noted. Infiltrate and edema spread to intact tissue. In the dermis, there is a decrease in signs of dystrophy compared with the previous observation period. The nearest edge of intact skin under the scab is thinned, in some sections in the thickness of the intact epidermis blisters are detected. There is stasis in the vessels. Signs of epithelialization are absent or poorly expressed.

На четвертые сутки у крыс контрольной группы по сравнению с предыдущим сроком наблюдения доля некротизированной ткани возрастала на 74,78%, отмечали снижение отека тканей и доли баллонной дистрофии на 12,75% и 32,97% соответственно. Доля новообразованного эпителия составила 3,81±0,84%, подлежащей рыхлой соединительной ткани - 1,66±0,57%. Доля нейтрофилов и лимфоцитов снизилась на 26,84% и 11,46% соответственно. Отмечено увеличение доли фибробластов (на 39,13%) и макрофагов (на 62,68%) по сравнению с предыдущим сроком наблюдения.On the fourth day, in rats of the control group, compared with the previous observation period, the proportion of necrotic tissue increased by 74.78%, a decrease in tissue edema and the proportion of balloon dystrophy were noted by 12.75% and 32.97%, respectively. The proportion of the newly formed epithelium was 3.81 ± 0.84%, of the underlying loose connective tissue - 1.66 ± 0.57%. The proportion of neutrophils and lymphocytes decreased by 26.84% and 11.46%, respectively. An increase in the proportion of fibroblasts (by 39.13%) and macrophages (by 62.68%) compared with the previous observation period was noted.

В опытной группе, получавшей аналог индолицидина в дозе 100 мкг/кг, на четвертые сутки эксперимента ожоговая рана в большинстве случаев покрыта оформленным фибринозно-лейкоцитарным струпом, который в некоторых срезах располагается на участках эпителизации. По сравнению с предыдущим сроком наблюдения отек уменьшается и имеет тенденцию к распространению к гиподерме. В сетчатом слое дермы полнокровные капилляры. Клеточная инфильтрация выражена значительно и представлена в большинстве фибробластами, нейтрофилами, а также макрофагами. Инфильтрат распространяется за пределы интактной дермы.In the experimental group receiving the indolecidine analogue at a dose of 100 μg / kg, on the fourth day of the experiment, the burn wound in most cases is covered with a formed fibrinous-leukocyte scab, which in some sections is located on the sites of epithelization. Compared to the previous observation period, edema decreases and tends to spread to hypodermis. In the reticular layer of the dermis are full-blooded capillaries. Cellular infiltration is pronounced and is represented in most fibroblasts, neutrophils, as well as macrophages. Infiltrate extends beyond the intact dermis.

На четвертые сутки доля некротизированных тканей увеличивалась на 9,55% по сравнению с предыдущим сроком эксперимента. Снижались распространенность отека дермы (на 24,44%), баллонной дистрофии (на 91,28%). Отмечали появление новообразованного эпителия (7,47±1,11%), доля которого была достоверно выше, чем в контрольной группе (p<0,05), и рыхлой грануляционной ткани. Клеточный состав инфильтрата был наиболее выражен фибробластами, нейтрофильными гранулоцитами и макрофагами. По сравнению с предыдущим сроком наблюдения снижался уровень гранулоцитов (на 22,63%) и макрофагов (на 60,89%), тогда как количество фибробластов и лимфоцитов возрастало (на 226,21% и 17,39% соответственно).On the fourth day, the proportion of necrotic tissues increased by 9.55% compared with the previous experiment. The prevalence of dermal edema (by 24.44%), balloon dystrophy (by 91.28%) decreased. The appearance of a newly formed epithelium (7.47 ± 1.11%), the proportion of which was significantly higher than in the control group (p <0.05), and loose granulation tissue was noted. The cellular composition of the infiltrate was most pronounced by fibroblasts, neutrophilic granulocytes and macrophages. Compared with the previous observation period, the level of granulocytes (by 22.63%) and macrophages (by 60.89%) decreased, while the number of fibroblasts and lymphocytes increased (by 226.21% and 17.39%, respectively).

В препаратах контрольной серии на седьмые сутки после ожоговой травмы четко визуализировался выраженный лейкоцитарно-фибринозный струп (24,30±5,26%), располагающийся на дерме, отторгающийся в некоторых местах. Дерма и гиподерма оставались отечны (29,73±3,37%) и инфильтрированы, но по сравнению с 4-ми сутками эксперимента менее выражено. В дерме обнаруживали признаки формирования демаркационного вала, образованного лейкоцитами. Отмечается начало краевой и островковой эпителизации под струпом.In the preparations of the control series, on the seventh day after a burn injury, a pronounced leukocyte-fibrinous scab (24.30 ± 5.26%), located on the dermis, rejected in some places was clearly visualized. The dermis and hypoderm remained edematous (29.73 ± 3.37%) and infiltrated, but less pronounced compared to the 4th day of the experiment. In the dermis, signs of the formation of a demarcation shaft formed by white blood cells were found. The beginning of regional and islet epithelization under the scab is noted.

На седьмые сутки после нанесения ожога отмечали уменьшение доли некротизированных тканей (на 26,82%) и снижение отека (на 10,47%). Увеличивалась доля новообразованного эпителия и рыхлой соединительной ткани на 8,49% и 18,50% соответственно. В клеточном составе инфильтрата преобладали гранулоциты и макрофаги, число которых снижалось на 37,50% и 3,03% по сравнению с предыдущим сроком наблюдения. Доля фибробластов и лимфоцитов увеличивалось на 83,33% и на 83,53% соответственно.On the seventh day after applying the burn, a decrease in the proportion of necrotic tissues (by 26.82%) and a decrease in edema (by 10.47%) were noted. The proportion of newly formed epithelium and loose connective tissue increased by 8.49% and 18.50%, respectively. Granulocytes and macrophages prevailed in the cellular composition of the infiltrate, the number of which decreased by 37.50% and 3.03% compared with the previous observation period. The proportion of fibroblasts and lymphocytes increased by 83.33% and 83.53%, respectively.

В опытной группе, получавшей аналог индолицидина в дозе 100 мкг/кг, на 7-ые сутки отмечали участки эпителизации (12,46±0,99%), отечность эластических волокон сетчатого слоя дермы (22,95±1,96%) и клеточную инфильтрацию. Регенерировавший эпидермис располагался на рыхлой грануляционной ткани (4,87±0,59%), содержащей большое количество фибробластов. Участки раны, лишенные эпидермиса, были покрыты фибрином или струпом. Дерма была инфильтрирована в большинстве фибробластами, гранулоцитами и макрофагами.In the experimental group receiving an indolicidin analog at a dose of 100 μg / kg, on the 7th day, epithelialization sites (12.46 ± 0.99%), swelling of the elastic fibers of the reticular dermis (22.95 ± 1.96%) and cell infiltration. The regenerated epidermis was located on loose granulation tissue (4.87 ± 0.59%) containing a large number of fibroblasts. The wound sites lacking the epidermis were covered with fibrin or scab. Dermis was infiltrated in most fibroblasts, granulocytes and macrophages.

Через семь суток после нанесения ожога у животных, получавших Инд 21 в дозе 100 мкг/кг, отмечается увеличение доли новообразованного эпителия и подлежащей рыхлой соединительной ткани на 66,79% и 97,70% по сравнению с предыдущим сроком эксперимента, что было достоверно выше по сравнению с контрольной группой. Продолжали снижаться распространенность отека и некротизированной ткани на 9,30% и 87,33% соответственно. Проявлений баллонной дистрофии клеток не отмечено. В клеточном составе преобладали фибробласты, количество которых увеличилось на 6,85% по сравнению с 4-ми сутками наблюдения и оставалось достоверно выше, чем в контрольной группе (p<0,01). Увеличивалось также количество макрофагов (на 50,00%), тогда как количество нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов снижалось на 13,72% и 28,40% соответственно.Seven days after the burn in animals treated with Indus 21 at a dose of 100 μg / kg, there was an increase in the proportion of newly formed epithelium and underlying loose connective tissue by 66.79% and 97.70% compared with the previous experiment, which was significantly higher in comparison with the control group. The prevalence of edema and necrotic tissue continued to decrease by 9.30% and 87.33%, respectively. Manifestations of balloon cell dystrophy were not noted. Fibroblasts predominated in the cellular composition, the number of which increased by 6.85% compared with 4 days of observation and remained significantly higher than in the control group (p <0.01). The number of macrophages also increased (by 50.00%), while the number of neutrophilic granulocytes and lymphocytes decreased by 13.72% and 28.40%, respectively.

Гистологическая картина ран животных контрольной группы на 10-е сутки: под выраженным лейкоцитарно-фибиринозным струпом продолжается формирование эпителия (краевое наползание и островковая эпителизация). Отмечается снижение отека дермы и гиподермы, сохраняется инфильтрация дермы. Количество фибробластов увеличивалось (на 6,25%), число гранулоцитов, напротив, снижалось (на 3,91%). Количество лимфоцитов и макрофагов снижалось до окончания эксперимента.The histological picture of the wounds of animals of the control group on the 10th day: under the expressed leukocyte-fibirinous scab, the formation of the epithelium continues (marginal creep and islet epithelization). There is a decrease in edema of the dermis and hypodermis, dermal infiltration is preserved. The number of fibroblasts increased (by 6.25%), the number of granulocytes, on the contrary, decreased (by 3.91%). The number of lymphocytes and macrophages decreased until the end of the experiment.

На десятые сутки эксперимента в опытной группе, получавшей аналог индолицидина в дозе 100 мкг/кг, доля эпителизированной поверхности ран и рыхлой соединительной ткани увеличивались на 7,21% и 81,40% по сравнению с предыдущим сроком наблюдения и были достоверно выше, чем в контрольной группе (p<0,01). Некротизированные ткани отсутствовали, распространенность отека дермы снижалась на 15,25% по сравнению с 7-ми сутками наблюдения и была достоверно ниже, чем в контрольной группе (p<0,05). Увеличивалось количество фибробластов и лимфоцитов (на 8,08% и 5,17% соответственно), тогда как число гранулоцитов и макрофагов снижалось соответственно на 5,44% и 33,33% по сравнению с предыдущим сроком наблюдения.On the tenth day of the experiment in the experimental group receiving an indolecidine analog at a dose of 100 μg / kg, the proportion of the epithelized surface of the wounds and loose connective tissue increased by 7.21% and 81.40% compared with the previous observation period and were significantly higher than in control group (p <0.01). Necrotic tissue was absent, the prevalence of edema of the dermis decreased by 15.25% compared with 7 days of observation and was significantly lower than in the control group (p <0.05). The number of fibroblasts and lymphocytes increased (by 8.08% and 5.17%, respectively), while the number of granulocytes and macrophages decreased by 5.44% and 33.33%, respectively, compared with the previous observation period.

В гистологической картине инфильтратов ран контрольной группы на 14-е сутки визуализируется четко выраженный лейкоцитарно-фибринозный струп с участками отторжения. На небольшом протяжении струп располагается на вновь образованном эпидермисе (4,56±1,36%). Краевая эпителизация. Увеличивается количество рыхлой грануляционной ткани (до 44,04±1,61%). Отмечали наличие неэпителизированных участков. Сохраняется выраженный отек дермы (25,71±1,21%), ее выраженная инфильтрация. Однако стоит отметить увеличение в клеточном инфильтрате фибробластов. Отек и инфильтрация распространяются на гиподерму. Инфильтрация подкожной жировой клетчатки и мышц выражена в большей степени, чем сетчатого слоя дермы. В некоторых препаратах отмечено формирование вторичного демаркационного вала. Отмечается уменьшение сосудистых реакций и снижение посттравматического отека.In the histological picture of wound infiltrates in the control group, a clearly expressed leukocyte-fibrinous scab with rejection sites is visualized on the 14th day. For a short distance, the scab is located on the newly formed epidermis (4.56 ± 1.36%). Marginal epithelization. The amount of loose granulation tissue increases (up to 44.04 ± 1.61%). The presence of non-epithelialized areas was noted. Pronounced edema of the dermis remains (25.71 ± 1.21%), its pronounced infiltration. However, it is worth noting an increase in fibroblast cell infiltrate. Swelling and infiltration spread to the hypodermis. Infiltration of subcutaneous fat and muscle is more pronounced than the reticular dermis. In some preparations, the formation of a secondary demarcation shaft is noted. There is a decrease in vascular reactions and a decrease in post-traumatic edema.

По сравнению с предыдущим сроком наблюдения доля некротизированных тканей и отека также снижались (на 31,70% и 10,06% соответственно), а новообразованного эпителия и подлежащей соединительной ткани увеличивалась (на 4,85% и 71,41%). Количество фибробластов снижалось на 8,02%. Число гранулоцитов увеличивалось на 20,81%.Compared with the previous observation period, the proportion of necrotic tissues and edema also decreased (by 31.70% and 10.06%, respectively), and the newly formed epithelium and underlying connective tissue increased (by 4.85% and 71.41%). The number of fibroblasts decreased by 8.02%. The number of granulocytes increased by 20.81%.

На 14-ые сутки в опытной группе, получавшей аналог в дозе 100 мкг/кг, отмечали наличие неэпителизированных участков под оформленным струпом. Регенерировавший эпителий (14,53±1,56%) покрывал большую площадь ожоговой раны, располагаясь на рыхлой грануляционной ткани, содержащей большое количество фибробластов и макрофагов. Отек дермы незначительный. Маловыраженная клеточная инфильтрация.On the 14th day in the experimental group receiving an analog at a dose of 100 μg / kg, the presence of unepithelialized areas under a decorated scab was noted. The regenerated epithelium (14.53 ± 1.56%) covered a large area of the burn wound, located on a loose granulation tissue containing a large number of fibroblasts and macrophages. Edema of the dermis is negligible. Mild cell infiltration.

Продолжалось увеличение площади эпителизации (на 8,79%) и распространения подлежащей рыхлой соединительной ткани (на 45,96%) по сравнению с 10-ми сутками наблюдения. Распространенность отека дермы снижалась на 4,25%. Продолжало увеличиваться количество фибробластов (на 8,76%). Число гранулоцитов, лимфоцитов и макрофагов снижалось на 3,54%, 3,28% и 36,68% соответственно.The increase in the area of epithelialization (by 8.79%) and the spread of the underlying loose connective tissue (by 45.96%) compared with 10 days of observation continued. The prevalence of dermal edema decreased by 4.25%. The number of fibroblasts continued to increase (by 8.76%). The number of granulocytes, lymphocytes, and macrophages decreased by 3.54%, 3.28%, and 36.68%, respectively.

Результаты проведенных экспериментов показывают, что под влиянием синтетического аналога индолицидина в клеточном инфильтрате ран с первых суток после ожоговой травмы по сравнению с контролем достоверно увеличивалось количество макрофагов и фибробластов, когда количество нейтрофилов и лимфоцитов было меньше. Отек и баллонная дистрофия выражены менее значительно. Количество некротизированных тканей было максимальным в начале эксперимента и отсутствовало через 14 суток. Под влиянием исследуемого пептида эпителизация и созревание грануляционной ткани протекали значительно интенсивнее и заканчивались раньше, чем у контрольных животных, что также подтверждается клиническими наблюдениями.The results of the experiments show that under the influence of the synthetic analogue of indolecidine in the cell wound infiltrate from the first day after a burn injury compared with the control, the number of macrophages and fibroblasts significantly increased when the number of neutrophils and lymphocytes was less. Edema and balloon dystrophy are less pronounced. The number of necrotic tissues was maximum at the beginning of the experiment and was absent after 14 days. Under the influence of the studied peptide, epithelization and maturation of granulation tissue proceeded much more intensively and ended earlier than in control animals, which is also confirmed by clinical observations.

Таким образом, результаты исследований доказывают, что предлагаемый способ эффективно стимулирует репаративную регенерацию на примере экспериментальных ожоговых ран. Способ основан на применении синтетического аналога природного антимикробного пептида индолицидин, обладающего выраженным стимулирующим и модулирующим действием, полифункциональностью, не является трудоемким и не требует использования сложного оборудования.Thus, the research results prove that the proposed method effectively stimulates reparative regeneration by the example of experimental burn wounds. The method is based on the use of a synthetic analogue of the natural antimicrobial peptide indolecidin, which has a pronounced stimulating and modulating effect, polyfunctionality, is not time-consuming and does not require the use of sophisticated equipment.

Claims (1)

Применение синтетического аналога природного антимикробного пептида индолицидин, имеющего формулу H-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Lys-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH2, для стимуляции репаративной регенерации кожи. The use of a synthetic analogue of the natural antimicrobial peptide indolecidin having the formula H-Lys-Lys-Pro-Trp-Lys-Trp-Pro-Lys-Lys-Pro-Trp-Arg-Arg-NH 2 to stimulate reparative skin regeneration.
RU2013151989/15A 2013-11-21 2013-11-21 Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration RU2543357C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013151989/15A RU2543357C1 (en) 2013-11-21 2013-11-21 Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013151989/15A RU2543357C1 (en) 2013-11-21 2013-11-21 Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2543357C1 true RU2543357C1 (en) 2015-02-27

Family

ID=53290086

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013151989/15A RU2543357C1 (en) 2013-11-21 2013-11-21 Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2543357C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2721273C1 (en) * 2019-04-22 2020-05-18 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Nikomycin peptide from nereid nicomache minor possessing antimicrobial and antitumour activity

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
В.Ю. ЧЕРДАКОВ Антиоксидантные и репаративные эффекты регуляторных пептидов gly-his-lys, тимогена, даларгина и их парных комбинаций при экспериментальной травме кожи. Воронеж Издательство "Научная книга" N1.3(56) 04.02.2013 с.416-420. Н.И. Шевченко и др. Влияние антимикробного пептида индолицидин на функциональную активность макрофагов при термических ожогах кожи. С-Пб Медицинский академический журнал т.12 N3 2012 с.96-98. М.П. Смирнова и др. Взаимосвязь структура "активность в ряду аналогов антибактериального пептида индолицидина. I. Синтез и биологическая активность аналогов с увеличенной амфипатичностью и повышенным общим положительным зарядом молекулы. Биоорганическая химия т.30 N5 2004 с.459, 460,463-464 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2721273C1 (en) * 2019-04-22 2020-05-18 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Nikomycin peptide from nereid nicomache minor possessing antimicrobial and antitumour activity

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zagórska-Dziok et al. Hydrogel-based active substance release systems for cosmetology and dermatology application: A review
Stipcevic et al. Enhanced healing of full-thickness burn wounds using di-rhamnolipid
JP2611159B2 (en) Hyaluronic acid pharmacologically active fraction, method for producing the same and pharmaceutical composition
CN113301910B (en) Skin rejuvenation and healing mixtures of peptide components and uses thereof
RU2687151C2 (en) Tetrapeptides obtained from human synthetic chemicals suitable for treating different skin conditions
Attah et al. The effect of aloe vera (linn) on cutaneous wound healing and wound contraction rate in adult rabbits
EP2145623A1 (en) Pharmaceutical and cosmetic compositions for accelerated healing of wounds and other surface damages
RU2668827C2 (en) Topical antimicrobial dermatological composition
Yu et al. Molecular mechanisms of wound healing: The role of zinc as an essential microelement
JPWO2005112948A1 (en) Drugs for the treatment or treatment of wounds
US10350247B2 (en) Pharmaceutical composition for preventing, treating, and curing psoriasis including snail slime, chamomile, and honey
EP1955705B1 (en) Wound healing agent and composition
RU2543357C1 (en) Using synthetic analogue of indolicidine, natural antimicrobial peptide for stimulating reparative skin regeneration
RU2470640C1 (en) Agent for treating inflammatory oral diseases and method of treating inflammatory oral diseases
CN114081939B (en) Antibacterial peptide Cbf-14 hydrogel and preparation method and application thereof
DE60007973T2 (en) MATRIX PROTEIN COMPOSITIONS FOR Grafting In Non-Mineralized Tissues
WO2016090892A1 (en) Water-soluble gel for treating diabetic foot
CN111214694A (en) Dressing with functions of stopping bleeding and accelerating wound healing and preparation method thereof
Marlinawati et al. The Effect of Papaya Leaf Extract Gel (Carica papaya) on Interleukin-1β Expression and Collagen Density (Col1A1) in the Back Incision Wound Healing of Wistar Rats (Rattus norvegicus).
RU2099094C1 (en) Agent for burn treatment
Faucher et al. Multifunctional photopolymerized semiinterpenetrating network (sIPN) system containing bupivacaine and silver sulfadiazine is an effective donor site treatment in a swine model
Putri et al. Distribution of snail mucous extract (Achatina fulica) on the number of wound’s basal epithelial cells in rats of wistar strain
EP1955704A1 (en) Wound healing agent and composition
Kuznetsova et al. Experimental evaluation of the effectiveness of wound dressings based on biologically active substances from marine hydrobionts
US20240016893A1 (en) Compositions and methods for treating wounds

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20151122