[go: up one dir, main page]

RU2437932C1 - Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant - Google Patents

Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant Download PDF

Info

Publication number
RU2437932C1
RU2437932C1 RU2010119642/10A RU2010119642A RU2437932C1 RU 2437932 C1 RU2437932 C1 RU 2437932C1 RU 2010119642/10 A RU2010119642/10 A RU 2010119642/10A RU 2010119642 A RU2010119642 A RU 2010119642A RU 2437932 C1 RU2437932 C1 RU 2437932C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
bacteria
colonies
disinfectant
grown
growth
Prior art date
Application number
RU2010119642/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Вячеслав Васильевич Шкарин (RU)
Вячеслав Васильевич Шкарин
Ольга Васильевна Ковалишена (RU)
Ольга Васильевна Ковалишена
Анна Сергеевна Благонравова (RU)
Анна Сергеевна Благонравова
Ольга Николаевна Воробьёва (RU)
Ольга Николаевна Воробьёва
Ирина Григорьевна Алексеева (RU)
Ирина Григорьевна Алексеева
Николай Валентинович Саперкин (RU)
Николай Валентинович Саперкин
Original Assignee
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "НижГМА Росздрава")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "НижГМА Росздрава") filed Critical Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО "НижГМА Росздрава")
Priority to RU2010119642/10A priority Critical patent/RU2437932C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2437932C1 publication Critical patent/RU2437932C1/en

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry. ^ SUBSTANCE: method involves preliminary selection of concentration of a disinfectant solution at which bacteria exhibit partial sensitivity to said disinfectant. The bacteria are exposed to the disinfectant solution at the given concentration. Grown colonies of bacteria are collected after exposure to said disinfectant and then sown on a solid culture medium, followed by culturing at 37C. Bacteria colonies isolated from those grown at the previous step are selected in amount of 1-299 colony-forming units (CFU/ml). The collected isolated colonies are resown on a culture medium and grown at conditions needed for growth of bacteria of that type, followed by dividing the grown colonies into two parts. One part of the grown bacteria colonies is exposed to the disinfectant at the selected concentration, and the other part is exposed to the disinfectant at bactericidal concentration. If upon exposure to the disinfectant at bactericidal concentration, there is no growth of bacteria or their growth ranges from 1 to 299 (CFU/ml), then the cycle of selecting bacteria grown at the previous step, their resowing on the culture medium, growing colonies of said bacteria at conditions needed for growth of said type of bacteria and exposing the grown colonies to the disinfectant at the selected and bactericidal concentrations is repeated once more until after exposing the column to the disinfectant solution at bactericidal concentration, growth of bacteria on the culture medium is equal to 300 (CFU/ml), which indicates bacterial resistance to the disinfectant. ^ EFFECT: invention enables to simulate bacterial resistance to a disinfectant, evaluate build-up of resistance and bactericidal potential of hospital strains to disinfectants during their practical use. ^ 1 tbl, 1 ex

Description

Предлагаемый способ относится к биотехнологии, может быть использован для моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам, а также для оценки бактерицидного действия дезинфицирующих средств.The proposed method relates to biotechnology, can be used to simulate the formation of resistance of bacteria to disinfectants, as well as to assess the bactericidal action of disinfectants.

Устойчивость микроорганизмов к применяемым дезинфектантам является одной из актуальнейших проблем, требующих решения, для предупреждения формирования и распространения устойчивых к дезинфицирующим средствам (ДС) штаммов микроорганизмов в учреждениях здравоохранения (1, 2, 3).The resistance of microorganisms to the used disinfectants is one of the most urgent problems that need to be addressed to prevent the formation and spread of microbial strains resistant to disinfectants (DS) in health facilities (1, 2, 3).

Преодоление устойчивости невозможно без понимания закономерностей ее формирования. К сожалению, существующие требования к разработке новых ДС не предусматривают проведение исследований возможностей и условий развития резистентных к ним вариантов микроорганизмов, в частности бактерий. Необходимость изучения формирования устойчивости бактерий к ДС и ее параметров вызвала потребность разработки предлагаемого.Overcoming stability is impossible without understanding the laws of its formation. Unfortunately, the existing requirements for the development of new DS do not include studies of the possibilities and conditions for the development of variants of microorganisms resistant to them, in particular bacteria. The need to study the formation of bacterial resistance to DS and its parameters has necessitated the development of the proposed.

Способы моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам могут быть использованы как в научных целях, так и при производстве дезинфицирующих средств и в испытательных центрах.Methods of modeling the formation of bacterial resistance to disinfectants can be used both for scientific purposes and in the production of disinfectants and in test centers.

В настоящий момент не известны способы, позволяющие формировать устойчивость бактерий к дезинфицирующим средствам.Currently, no methods are known that allow the formation of bacterial resistance to disinfectants.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа, позволяющего моделировать формирование устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам.The objective of the invention is to develop a method that allows you to simulate the formation of resistance of bacteria to disinfectants.

Поставленная задача решается предлагаемым способом моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству (ДС), включающим предварительный подбор концентрации раствора ДС, при которой бактерии проявляют неполную чувствительность к данному средству, воздействие на бактерии раствором ДС при данной концентрации, отбор выросших колоний бактерий после воздействия ДС и высев их на твердую питательную среду, после чего из выросших бактерий в количестве от 1 до 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) отбирают изолированные колонии бактерий, которые пересевают на питательную среду и выращивают их при условиях, необходимых для роста бактерий данного вида, на одну часть выращенных колоний бактерий воздействуют раствором ДС подобранной концентрации, на другую часть выращенных колоний бактерий воздействуют раствором ДС бактерицидной концентрации, и если при воздействии раствором ДС бактерицидной концентрации рост бактерий отсутствует или их рост составляет от 1 до 299 (КОЕ/мл), цикл отбора выращенных на предыдущем этапе бактерий, пересева бактерий на питательную среду, выращивания данных колоний бактерий при условиях, необходимых для роста данного вида бактерий, и воздействия на выращенные колонии бактерий раствором ДС подобранной бактерицидной концентрации повторяют столько раз, пока после воздействия на колонии бактерий раствором ДС бактерицидной концентрации рост бактерий на питательной среде не составит 300 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл), по которому судят о формировании у бактерий устойчивости к данному дезинфицирующему средству.The problem is solved by the proposed method for modeling the formation of resistance of bacteria to a disinfectant (DS), including preliminary selection of the concentration of a solution of DS, in which bacteria show incomplete sensitivity to this agent, exposure to bacteria with a solution of DS at a given concentration, selection of grown bacterial colonies after exposure to DS and seeding them on a solid nutrient medium, after which isolated bacteria from the grown bacteria in an amount of 1 to 299 colony forming units (CFU / ml) are selected colonies of bacteria that are subcultured on a nutrient medium and grow them under conditions necessary for the growth of bacteria of a given species, one part of the grown bacterial colonies is exposed to a solution of selected concentration DS, the other part of the grown bacterial colonies is affected by a solution of bactericidal concentration, and if exposed to the solution DS bactericidal concentration, the growth of bacteria is absent or their growth is from 1 to 299 (CFU / ml), the selection cycle of bacteria grown at the previous stage, the bacteria are reseeded to environment, growing these bacterial colonies under the conditions necessary for the growth of this type of bacteria, and exposure to the grown bacterial colonies with a DS solution of a selected bactericidal concentration, is repeated as many times until after bacteria exposure to a bacterial colony with a bactericidal concentration solution, the bacteria growth on the medium is 300 colony forming units (CFU / ml), which are used to judge the formation of bacteria resistance to this disinfectant.

Предпочтительно, что из выросших от 1 до 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) микроорганизма отбирают несколько изолированных колоний, а именно при росте единичных колоний - количеством от 1 до 5 - отбирают все колонии, при росте от 6 до 299 колоний отбирают от 5 до 10 колоний.It is preferable that several isolated colonies are selected from 1 to 299 colony forming units (CFU / ml) of the microorganism, namely, when single colonies grow from 1 to 5 in number, all colonies are selected, from 6 to 299 colonies, from 5 to 10 colonies.

Предпочтительно, что пересев изолированных колоний микроорганизма осуществляют на твердую питательную среду, в частности на скошенный питательный агар.It is preferable that the reseeding of isolated colonies of the microorganism is carried out on a solid nutrient medium, in particular on oblique nutrient agar.

Предлагаемый способ путем систематического воздействия ДС в заниженной концентрации позволяет смоделировать формирование устойчивости бактерий к действию ДС за счет адаптации бактерий к ДС.The proposed method by the systematic effect of DS in low concentration allows you to simulate the formation of resistance of bacteria to the action of DS due to the adaptation of bacteria to DS.

Поэтому предлагаемый способ может быть использован для:Therefore, the proposed method can be used for:

- объективной оценки формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующим средствам с количественной оценкой полученных результатов;- an objective assessment of the formation of resistance of bacteria to disinfectants with a quantitative assessment of the results;

- выявления механизма формирования устойчивости бактерий к различным дезинфицирующим средствам;- identification of the mechanism of formation of resistance of bacteria to various disinfectants;

- оценки дозы и времени эффективного воздействия дезинфицирующего средства при формировании устойчивости у разных бактерий к различным дезинфицирующим средствам;- assessment of the dose and time of effective exposure to the disinfectant in the formation of resistance of different bacteria to various disinfectants;

- тестировать дезинфицирующие средства на этапе их разработки для совершенствования бактерицидного потенциала;- test disinfectants at the stage of their development to improve the bactericidal potential;

- моделировать формирование устойчивости бактерий в лабораторных условиях для применения этих данных в условиях практического здравоохранения, в очагах инфекционных заболеваний, при проведении профилактической дезинфекции.- to model the formation of bacterial resistance in laboratory conditions for the application of these data in practical health care, in foci of infectious diseases, during preventive disinfection.

Предлагаемый способ реализуют следующим образомThe proposed method is implemented as follows

Предварительно подбирают концентрацию ДС, при которой бактерии проявляют неполную чувствительность к данному средству и которая характеризуется ростом бактерий в количестве 1 - 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл), для этого на основе бактерицидной концентрации данного дезинфицирующего средства готовят его серийные разведения и после этого действуют раствором данного ДС на взвесь испытуемых бактерий, при этом на стадии подбора концентрации ДС, при которой бактерии проявляет неполную чувствительность к данному средству, и на всех последующих стадиях используется экспозиция (время воздействия ДС на бактерии), предполагающая бактерицидный эффект для соответствующего дезинфицирующего средства, а дезинфицирующее средство может быть представлено любым дезинфицирующим средством с действующим веществом на основе разных химических групп, а бактерии - любой вид бактерий (патогенные, условно-патогенные), выделенные из клинического материала, объектов внешней среды, тест-бактерии), затем воздействуют на бактерии раствором ДС при данной концентрации и отбирают выросшие после воздействия ДС колонии бактерий, которые высевают на твердую питательную среду, после чего из выросших бактерий в количестве от 1 до 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) отбирают изолированные колонии бактерий, в частности при росте единичных колоний - количеством от 1 до 5 - отбирают все колонии, при росте от 6 до 299 колоний отбирают от 5 до 10 колоний, которые пересевают на питательную среду, в частности на скошенный питательный агар, и выращивают их, выдерживая при условиях, необходимых для роста бактерий данного вида, и далее на одну часть выращенных колоний воздействуют раствором ДС подобранной концентрацией, на другую часть выращенных колоний воздействуют раствором ДС бактерицидной концентрации, и если при воздействии раствором ДС бактерицидной концентрации отсутствует рост бактерий или их рост составляет от 1 до 299 КОЕ/мл, цикл отбора выращенного на предыдущем этапе бактерий, их пересева на питательную среду, выращивания колоний бактерий путем инкубирования их при условиях, необходимых для роста данного вида бактерий, и воздействия на обе части выращенных колоний раствором ДС повторяют столько раз, пока после воздействия на колонии раствором ДС в бактерицидной концентрации рост бактерий на питательной среде не составит 300 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл), по которому судят о формировании у бактерий устойчивости к данному дезинфицирующему средству, поскольку общеизвестно, что штамм бактерий устойчив к воздействию дезинфицирующих средств при их росте 300 и более КОЕ/мл.The concentration of DS is preliminarily selected at which the bacteria show incomplete sensitivity to this agent and which is characterized by the growth of bacteria in the amount of 1 - 299 colony forming units (CFU / ml), for this, serial dilutions are prepared on the basis of the bactericidal concentration of this disinfectant and then act with a solution of this DS to a suspension of the tested bacteria, while at the stage of selecting the concentration of DS, at which the bacteria shows incomplete sensitivity to this drug, and at all after in the subsequent stages, exposure is used (the time of the DS exposure to bacteria), which suggests a bactericidal effect for the corresponding disinfectant, and the disinfectant can be any disinfectant with the active substance based on different chemical groups, and bacteria - any kind of bacteria (pathogenic, conditionally pathogenic ), isolated from clinical material, environmental objects, test bacteria), then act on the bacteria with a DS solution at a given concentration and select those grown after the impact of DS of a colony of bacteria that are seeded on a solid nutrient medium, after which isolated bacterial colonies are selected from the grown bacteria in an amount of 1 to 299 colony forming units (CFU / ml), in particular, when single colonies grow in an amount of 1 to 5, all are selected colonies, with growth from 6 to 299 colonies, from 5 to 10 colonies are selected, which are subcultured on a nutrient medium, in particular, on beveled nutrient agar, and they are grown, keeping under the conditions necessary for the growth of bacteria of this species, and then one part of the dig colonies are exposed to a solution of DS with a selected concentration, another part of the grown colonies is exposed to a solution of DS of a bactericidal concentration, and if bacteria are not exposed to a solution of DS with a bactericidal concentration, or their growth is from 1 to 299 CFU / ml, the selection cycle of bacteria grown at the previous stage, replanting them on a nutrient medium, growing colonies of bacteria by incubating them under the conditions necessary for the growth of this type of bacteria, and exposure of both parts of the grown colonies to a solution m DS repeat so many times until after exposure to the colonies with a solution of DS in a bactericidal concentration, the growth of bacteria in the nutrient medium is 300 colony forming units (CFU / ml), which is used to judge the formation of resistance to this disinfectant in bacteria, since it is well known that the strain bacteria is resistant to disinfectants with their growth of 300 or more CFU / ml.

Пример конкретного исполнения предлагаемого способаAn example of a specific implementation of the proposed method

Предварительно осуществили подбор концентрации ДС на основе четвертичных аммониевых соединений (торговое название «Фрисепт»), при которой бактерии вида E.coli (тест - штамм М-17) проявили неполную чувствительность к данному средству, которая характеризуется ростом бактерий 1-299 КОЕ/мл, для этого на взвесь бактерии вида E.coli (мутностью 5 единиц по Макфарланду) воздействовали раствором ДС в концентрациях 0,5%; 0,1%; 0,05%; 0,02%; 0,01% в течение 60 минут с последующим высевом бактерий на твердую питательную среду (мясопептонный агар) и выдерживанием при 37°С в течение суток, а затем производили количественный учет роста бактерий, в результате учета было выявлено, что при концентрации ДС 0,02% бактерии данного вида проявили неполную чувствительность к данному ДС, и рост бактерий при этом составил от 30 до 160 КОЕ/мл в разных опытах, в то время как при концентрации ДС 0,5%, 0,1%, 0,05% роста бактерий не обнаружено, а при концентрации ДС 0,01% рост бактерий составил более 300 КОЕ/мл (данные приведены в таблице). При этом необходимо отметить, что на стадии подбора и на всех последующих стадиях использовалась экспозиция (время воздействия ДС на бактерии), предполагающая бактерицидный эффект для соответствующего дезинфицирующего средства, после того как была подобрана концентрация раствора ДС, при которой бактерии проявили неполную чувствительность к данному средству. Далее на взвесь бактерий воздействовали раствором ДС с концентрации 0,02% в течение 60 минут, после чего смесь, содержащую бактерии, раствор ДС, нейтрализатор ДС, была высеяна на твердую питательную среду (мясопептонный агар) и выдержана при 37°С в течение суток, а затем из выросших колоний бактерий в количестве от 60 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) были отобраны 10 изолированных колоний, которые пересеяли на твердую питательную среду (скошенный мясопептонный агар), и выращивали данные колонии, выдерживая их при 37°С в течение суток, далее из каждой выращенной колонии была приготовлена взвесь бактерий, при этом на одну часть полученной взвеси воздействовали раствором ДС в бактерицидной концентрации (0,5%) в течение 60 минут, а на другую часть взвеси бактерий воздействовали подобранной концентрацией (0,02%) также в течение 60 минут с последующим высевом смеси и ее выдерживанием, в результате при воздействии ДС в бактерицидной концентрации рост бактерий отсутствовал, в связи с этим цикл выращивания микроорганизма, отбора выращенных на предыдущем этапе колоний микроорганизма, воздействия бактерицидной концентрацией и подобранной концентрацией был повторен 6 раз, в результате чего после воздействия на колонии бактерий раствора ДС бактерицидной концентрации (0,5%) в течение 60 минут рост бактерий на питательной среде составил 300 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл), по которому судили о формировании у бактерий вида E.coli (штамм М-17) устойчивости к данному дезинфицирующему средству.Preliminarily, the concentration of DS based on quaternary ammonium compounds (trade name "Friept") was selected in which bacteria of the E. coli species (test strain M-17) showed incomplete sensitivity to this agent, which is characterized by bacterial growth of 1-299 CFU / ml , for this, bacteria of the species E. coli (turbidity of 5 units according to McFarland) were suspended in suspension with a solution of DS in concentrations of 0.5%; 0.1%; 0.05%; 0.02%; 0.01% for 60 minutes, followed by seeding the bacteria on a solid nutrient medium (meat-peptone agar) and keeping at 37 ° С for a day, and then the bacteria growth was quantified, as a result of the calculation it was revealed that at a concentration of DS 0, 02% of bacteria of this species showed incomplete sensitivity to this DS, and the growth of bacteria in this case was from 30 to 160 CFU / ml in different experiments, while at a concentration of DS of 0.5%, 0.1%, 0.05% no bacterial growth was detected, and at a DS concentration of 0.01%, the growth of bacteria was more than 300 CFU / ml (data ivedeny in the table). It should be noted that at the selection stage and at all subsequent stages, an exposure was used (the time of exposure of the DS to bacteria), suggesting a bactericidal effect for the corresponding disinfectant, after the concentration of the DS solution was selected at which the bacteria showed incomplete sensitivity to this agent . Then, a suspension of bacteria was exposed to a DS solution with a concentration of 0.02% for 60 minutes, after which a mixture containing bacteria, a DS solution, a DS neutralizer was seeded on a solid nutrient medium (meat peptone agar) and kept at 37 ° C for 24 hours and then from isolated bacterial colonies in an amount of 60 colony forming units (CFU / ml), 10 isolated colonies were selected, which were plated on solid nutrient medium (beveled meat-peptone agar), and these colonies were grown, keeping them at 37 ° С for 24 hours further from each the bacterial suspension was prepared, while one part of the obtained suspension was exposed to a solution of DS in a bactericidal concentration (0.5%) for 60 minutes, and the other part of the suspension of bacteria was exposed to a selected concentration (0.02%) also for 60 minutes with the subsequent sowing of the mixture and its aging, as a result, when the DS was applied in a bactericidal concentration, there was no bacterial growth, in this regard, the microorganism growth cycle, the selection of microorganism colonies grown at the previous stage, the bactericidal concentration and the selected concentration was repeated 6 times, as a result of which, after exposure to a bacterial colony of a DS solution of a bactericidal concentration (0.5%) for 60 minutes, the growth of bacteria on a nutrient medium was 300 colony forming units (CFU / ml), according to which on the formation in bacteria of the species E. coli (strain M-17) of resistance to this disinfectant.

Figure 00000001
Figure 00000001

* концентрация ДС, рекомендованная методическими указаниями* concentration of DS recommended by guidelines

** заниженная концентрация дезинфицирующего средства** low concentration of disinfectant

*** применялась экспозиция 60 минут, рекомендованная методическими указаниями по применению ДС.*** An exposure of 60 minutes was recommended, recommended by the guidelines for the use of DS.

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет моделировать формирование устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству и может быть использован как в научных целях для оценки формирования резистентности госпитальных штаммов к дезинфицирующим средствам на этапе их практического применения, в условиях лаборатории с целью последующего ее преодоления при использовании, так и в практическом здравоохранении для совершенствования дезинфекционных мероприятий и обоснования ротации ДС в лечебно-профилактических учреждениях, в очагах инфекционных заболеваний, при проведении профилактической дезинфекции, а также при разработке дезинфицирующего средства для оценки его бактерицидного потенциала и подбора оптимальных режимов дезинфекции и производстве дезинфицирующих средств.As can be seen from the obtained results, the proposed method allows to simulate the formation of resistance of bacteria to a disinfectant and can be used for scientific purposes to assess the formation of resistance of hospital strains to disinfectants at the stage of their practical use, in a laboratory with the aim of overcoming it when used, and in practical health care to improve disinfection measures and rationale for the rotation of drugs in medical and preventive care conditions, in the foci of infectious diseases, during prophylactic disinfection, as well as in the development of a disinfectant to assess its bactericidal potential and the selection of optimal disinfection regimes and the production of disinfectants.

Источники информацииInformation sources

1. Соколова Н.Ф. Актуальные проблемы дезинфекции в целях профилактики внутрибольничных инфекций в ЛПУ. Внутрибольничные инфекции в стационарах различного профиля. Профилактика, лечение, осложнения. Тезисы доклада 3-й научно-практической конференции. М., 2005, с.21.1. Sokolova N.F. Actual problems of disinfection in order to prevent nosocomial infections in hospitals. Nosocomial infections in hospitals of various profiles. Prevention, treatment, complications. Abstracts of the 3rd scientific-practical conference. M., 2005, p.21.

2. Chapman J.S. Disifectant resistance mechanisms, cross-resistance, co-resistance International Biodeterioration & Biodegradation. 2003, Vol.51, Is. 4, p.271.2. Chapman J.S. Disifectant resistance mechanisms, cross-resistance, co-resistance International Biodeterioration & Biodegradation. 2003, Vol. 51, Is. 4, p. 271.

3. Russel A.D. Bacterial adaptation and resistance to antiseptics, desinfectants and preservatives is not a new phenomenon J. Hosp. Infect. 2004, Vol.57, Is. 2, p.97.3. Russel A.D. Bacterial adaptation and resistance to antiseptics, desinfectants and preservatives is not a new phenomenon J. Hosp. Infect. 2004, Vol. 57, Is. 2, p. 97.

Claims (3)

1. Способ моделирования формирования устойчивости бактерий к дезинфицирующему средству (ДС), включающий предварительный подбор концентрации раствора ДС, при которой бактерии проявляют неполную чувствительность к данному средству, воздействие на бактерии раствором ДС при данной концентрации, отбор выросших колоний бактерий после воздействия ДС и высев их на твердую питательную среду, после чего из выросших бактерий в количестве от 1 до 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) отбирают изолированные колонии бактерий, которые пересевают на питательную среду и выращивают их при условиях, необходимых для роста бактерий данного вида, на одну часть выращенных колоний бактерий воздействуют раствором ДС подобранной концентрации, на другую часть выращенных колоний бактерий воздействуют раствором ДС бактерицидной концентрации, и если при воздействии раствором ДС бактерицидной концентрации рост бактерий отсутствует или их рост составляет от 1 до 299 (КОЕ/мл), цикл отбора выращенных на предыдущем этапе бактерий, пересева бактерий на питательную среду, выращивания данных колоний бактерий при условиях, необходимых для роста данного вида бактерий, и воздействия на выращенные колонии бактерий раствором ДС подобранной и бактерицидной концентрации повторяют столько раз, пока после воздействия на колонии бактерий раствором ДС бактерицидной концентрации рост бактерий на питательной среде не составит 300 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл), по которому судят о формировании у бактерий устойчивости к данному дезинфицирующему средству.1. A method for modeling the formation of resistance of bacteria to a disinfectant (DS), including preliminary selection of the concentration of a solution of DS, in which bacteria show incomplete sensitivity to this tool, exposure to bacteria with a solution of DS at a given concentration, selection of grown bacterial colonies after exposure to DS and sowing them on solid nutrient medium, after which isolated bacterial colonies are selected from the grown bacteria in an amount of 1 to 299 colony forming units (CFU / ml), which are subcultured culture medium and grow them under the conditions necessary for the growth of bacteria of this species, one part of the grown bacterial colonies is exposed to a solution of DS of a selected concentration, the other part of the grown bacterial colonies is affected by a solution of DS of a bactericidal concentration, and if there is no bacterial growth when exposed to a solution of a bactericidal concentration of DS or their growth is from 1 to 299 (CFU / ml), the selection cycle of bacteria grown in the previous stage, the bacteria are re-plated on a nutrient medium, and these colonies are grown under the conditions necessary for the growth of this type of bacteria, and the effect on the grown bacterial colonies with a DS solution of a selected and bactericidal concentration is repeated so many times until after bacteria exposure to a bacterial colony with a DS solution of a bactericidal concentration, the growth of bacteria on the nutrient medium is 300 colony forming units (CFU / ml), which is used to judge the formation of resistance to a given disinfectant in bacteria. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что из выросших от 1 до 299 колониеобразующих единиц (КОЕ/мл) бактерий отбирают несколько изолированных колоний, а именно: при росте единичных колоний количеством от 1 до 5 отбирают все колонии, при росте от 6 до 299 колоний отбирают от 5 до 10 колоний.2. The method according to claim 1, characterized in that from the colony forming units (CFU / ml) of bacteria grown from 1 to 299, several isolated colonies are selected, namely: when single colonies grow from 1 to 5, all colonies are selected, with growth from 6 to 299 colonies, 5 to 10 colonies are selected. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что пересев изолированных колоний бактерий осуществляют на твердую питательную среду, в частности на скошенный питательный агар. 3. The method according to claim 1, characterized in that the reseeding of isolated colonies of bacteria is carried out on a solid nutrient medium, in particular on mowed nutrient agar.
RU2010119642/10A 2010-05-18 2010-05-18 Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant RU2437932C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010119642/10A RU2437932C1 (en) 2010-05-18 2010-05-18 Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010119642/10A RU2437932C1 (en) 2010-05-18 2010-05-18 Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2437932C1 true RU2437932C1 (en) 2011-12-27

Family

ID=45782843

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010119642/10A RU2437932C1 (en) 2010-05-18 2010-05-18 Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2437932C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2494761C1 (en) * 2012-05-16 2013-10-10 Григорий Иванович Рубан Method for prevention of developing acquired microorganism resistance to disinfectants

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378363C1 (en) * 2008-06-10 2010-01-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Росздрава" (ГОУ ВПО "НИЖГМА РОСЗДРАВА") Method for determining microorganism sensitivity to disinfectant (versions)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378363C1 (en) * 2008-06-10 2010-01-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Росздрава" (ГОУ ВПО "НИЖГМА РОСЗДРАВА") Method for determining microorganism sensitivity to disinfectant (versions)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHAPMAN J.S., Disinfectant resistance mechanisms, crossresistance and co-resistance, International Biodeterioration & Biodegradation, 2003, v. 51, p.271-276. RUSSELL A.D. Bacterial adaptation and resistance to antiseptics, disinfectants and preservatives is not a new phenomenon, J. Hosp., Infect., 2004, v.57, p.97-104. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2494761C1 (en) * 2012-05-16 2013-10-10 Григорий Иванович Рубан Method for prevention of developing acquired microorganism resistance to disinfectants

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shen et al. Antimicrobial efficacy of chlorhexidine against bacteria in biofilms at different stages of development
Podbielski et al. Additive antimicrobial activity of calcium hydroxide and chlorhexidine on common endodontic bacterial pathogens
de Almeida et al. Comparative evaluation of calcium hypochlorite and sodium hypochlorite associated with passive ultrasonic irrigation on antimicrobial activity of a root canal system infected with Enterococcus faecalis: an in vitro study
Fox et al. Assessing the risk of resistance to cationic biocides incorporating realism-based and biophysical approaches
JP2014204955A (en) Deodorant using autotrophic microorganism and manufacturing method thereof
Heckman et al. Streptococcus iniae biofilm formation enhances environmental persistence and resistance to antimicrobials and disinfectants
Misuriya et al. A comparative antimicrobial analysis of various root canal irrigating solutions on endodontic pathogens: an in vitro study
Feßler et al. Development and evaluation of a broth macrodilution method to determine the biocide susceptibility of bacteria
Ott et al. Models for gut-mediated horizontal gene transfer by bacterial plasmid conjugation
Soto et al. Biofilm formation of Francisella noatunensis subsp. orientalis
Dixit et al. Persistence of Escherichia coli in the microbiomes of red Romaine lettuce (Lactuca sativa cv.‘Outredgeous’) and mizuna mustard (Brassica rapa var. japonica)-does seed sanitization matter?
Scheib et al. Intermediate Cluster Disinfection: Which Disinfection Solution Is Most Effective on Milking Liners? A Comparison of Microorganism Reduction on Liner Inner Surfaces Using Quantitative Swab Sampling Technique
Anaraki et al. Effect of different energy levels of microwave on disinfection of dental stone casts
RU2437932C1 (en) Method of simulating build-up of bacterial resistance to disinfectant
Cooper et al. Biofilms, wound infection and the issue of control
Soto et al. Environmental persistence and disinfectant susceptibility of Klebsiella pneumoniae recovered from pinnipeds stranded on the California coast
Moslehifard et al. Efficacy of disinfection of dental stone casts: Virkon versus sodium hypochlorite
Herruzo-Cabrera et al. The influence of laboratory adaptation on test strains, such as Pseudomonas aeruginosa, in the evaluation of the antimicrobial efficacy of ortho-phthalaldehyde
RU2679845C2 (en) Method of biological disinfecting probiotic cleaning and disinfection of bacteria from pathogenes and viruses of medical facilities
Chaubey et al. Mycobacterium Biofilms Synthesis, Ultrastructure, and Their Perspectives in Drug Tolerance, Environment, and Medicine
RU2435864C1 (en) Method of probiotic cell treatment with contained small non-productive animals in veterinary hospital environment
Hoces et al. Fitness advantage of Bacteroides thetaiotaomicron capsular polysaccharide is dependent on the resident microbiota
Chaiwong et al. Bacterial fauna associated with the blow fly, Chrysomya megacephala (F.) in Ubon Ratchathani Province of Northeast Thailand
Nawaz et al. Evaluation of Antibacterial Efficacy of Clove Oil Against Multidrug-Resistant Clinical Isolates
Patel et al. Supernatants of the probiotic bacterial cultures at sub-MIC levels attenuate virulence of pathogenic bacteria towards the model host caenorhabditis elegans

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20120519