RU2436589C2 - Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина - Google Patents
Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2436589C2 RU2436589C2 RU2009129953/15A RU2009129953A RU2436589C2 RU 2436589 C2 RU2436589 C2 RU 2436589C2 RU 2009129953/15 A RU2009129953/15 A RU 2009129953/15A RU 2009129953 A RU2009129953 A RU 2009129953A RU 2436589 C2 RU2436589 C2 RU 2436589C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- conjugate
- peptide
- exendin
- group
- fragment
- Prior art date
Links
- 230000002473 insulinotropic effect Effects 0.000 title claims abstract description 103
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 title description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 201
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 claims abstract description 102
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 claims abstract description 97
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 68
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 27
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 19
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 12
- LMHMJYMCGJNXRS-IOPUOMRJSA-N exendin-3 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@H](C)O)[C@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 LMHMJYMCGJNXRS-IOPUOMRJSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 108010015174 exendin 3 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 108
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 108
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 claims description 98
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 69
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 69
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 48
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 37
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 23
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 claims description 23
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 21
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 20
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 claims description 7
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 6
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 6
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 6
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 5
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical group CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 5
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 5
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical group CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 5
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 5
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 5
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 4
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 4
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 claims description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 4
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 3
- 229940053198 antiepileptics succinimide derivative Drugs 0.000 claims description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 3
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical compound CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 claims 1
- 108010069898 fibrinogen fragment X Proteins 0.000 claims 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 claims 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 32
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 51
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 36
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 31
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 31
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 17
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 14
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 8
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 7
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 6
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 6
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 3
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 3
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 3
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 101800002247 Brain natriuretic peptide 45 Proteins 0.000 description 2
- 108010055448 CJC 1131 Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 description 2
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 2
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- AIWAEWBZDJARBJ-PXUUZXDZSA-N fz7co35x2s Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)CCN1C(C=CC1=O)=O)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AIWAEWBZDJARBJ-PXUUZXDZSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 2
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- VXEVKSKAINMPFG-QWUNSSNDSA-N (2S)-5-[[(5S)-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]acetyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]propanoyl]amino]propanoyl]amino]-6-[[(2S)-4-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-1-(carboxymethylamino)-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]amino]-6-oxohexyl]amino]-2-(hexadecanoylamino)-5-hydroxypentanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CCC(NCCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC4=CC=C(C=C4)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC5=CC=CC=C5)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC6=CNC=N6)N)O)C(=O)O VXEVKSKAINMPFG-QWUNSSNDSA-N 0.000 description 1
- MSFZPBXAGPYVFD-NFBCFJMWSA-N (2r)-2-amino-3-[1-[3-[2-[2-[2-[4-[[(5s)-5,6-diamino-6-oxohexyl]amino]butylamino]-2-oxoethoxy]ethoxy]ethylamino]-3-oxopropyl]-2,5-dioxopyrrolidin-3-yl]sulfanylpropanoic acid Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCCCNCCCCNC(=O)COCCOCCNC(=O)CCN1C(=O)CC(SC[C@H](N)C(O)=O)C1=O MSFZPBXAGPYVFD-NFBCFJMWSA-N 0.000 description 1
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102100039339 Atrial natriuretic peptide receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710102163 Atrial natriuretic peptide receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- XLSZMDLNRCVEIJ-UHFFFAOYSA-N Cc1c[nH]cn1 Chemical compound Cc1c[nH]cn1 XLSZMDLNRCVEIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016917 Complement C1 Human genes 0.000 description 1
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102400000326 Glucagon-like peptide 2 Human genes 0.000 description 1
- 101800000221 Glucagon-like peptide 2 Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- 125000003580 L-valyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000035554 Proglucagon Human genes 0.000 description 1
- 108010058003 Proglucagon Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 230000006126 farnesylation Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- UKVFVQPAANCXIL-FJVFSOETSA-N glp-1 (1-37) amide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 UKVFVQPAANCXIL-FJVFSOETSA-N 0.000 description 1
- TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N glucagon-like peptide 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 TWSALRJGPBVBQU-PKQQPRCHSA-N 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000021255 pancreatic insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
- A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/605—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к конъюгату инсулинотропного пептида, имеющему повышенную продолжительность действия in vivo и стабильность и включающему инсулинотропный пептид, выбранный из группы, состоящей из эксендина-3 и эксендина-4 и их производных, непептидный полимер, где один из концов молекулы непептидного полимера связан с аминокислотным остатком, отличным от N-концевого остатка инсулинотропного пептида. Изобретение обеспечивает получение конъюгата инсулинотропного пептида, обладающего активностью in vivo, которая сохраняется на относительно высоком уровне, и существенно увеличенным временем полужизни в крови, с возможностью применения его при разработке составов длительного действия на основе различных пептидных лекарственных средств. 4 н. и 25 з.п. ф-лы, 1 табл., 14 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к конъюгату инсулинотропного пептида, предназначенному для использования в композициях инсулинотропных пептидов длительного действия. Конкретно настоящее изобретение относится к модифицированному конъюгату инсулинотропного пептида, имеющему значительно увеличенную продолжительность действия за счет ковалентного связывания инсулинотропного пептида с непептидным полимером и Fc-фрагментом иммуноглобулина, а также к способу получения этого конъюгата.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пептиды имеют тенденцию к легкому денатурированию из-за своей низкой стабильности, разрушению in vivo под действием протеолитических ферментов, что приводит к потере активности, и, кроме того, имеют относительно небольшой размер, что позволяет им легко проходить через почки. Соответственно, для поддержания уровня в крови и титров лекарственных средств, содержащих пептид в качестве фармацевтически эффективного компонента, пептидные лекарственные средства необходимо часто вводить пациенту. Однако лекарственные средства на основе пептидов, как правило, вводят в форме препаратов для инъекций, и такое частое введение вызывает сильные болевые ощущения у пациентов. Для решения этой проблемы предпринимались значительные усилия. Одной из попыток было введение пептидного лекарственного средства путем ротоглоточной или носоглоточной ингаляции, повышая перенос пептидного лекарственного средства через биологические мембраны. Однако с помощью этого подхода по-прежнему трудно поддерживать активность пептидного лекарственного средства in vivo из-за невысокой эффективности переноса in vivo по сравнению с инъекцией.
С другой стороны, предпринимались значительные усилия для улучшения стабильности пептидных лекарственных средств в крови и для поддержания высоких уровней лекарственных средств в крови в течение продолжительного периода времени для максимального увеличения фармацевтической эффективности препаратов. Следовательно, для получения пептидных лекарственных средств длительного действия необходимо повысить стабильность пептидных лекарственных средств и поддерживать их титры на достаточно высоком уровне, не вызывая иммунный ответ у пациентов.
Что касается способа стабилизации пептидов и ингибирования их деградации под действием протеолитических ферментов, был проведен ряд экспериментов с целью модифицировать специфическую аминокислотную последовательность, чувствительную к действию протеолитического фермента. Например, пептид GLP-1 (амид 7-37 или 7-36), функция которого связана с уменьшением концентрации глюкозы в крови при лечении диабета 2 типа, обладает коротким полупериодом физиологической активности, составляющим примерно 4 минуты или менее (Kreymann et al., 1987), из-за снижения титров GLP-1 вследствие расщепления между 8-м (Ala) и 9-м (Asp) аминокислотными остатками под действием дипептидилпептидазы IV (DPP IV). В результате были проведены различные исследования аналогов GLP-1, обладающих устойчивостью к DPP-IV, и были выполнены эксперименты по замене Ala8 на Gly (Deacon et al., 1998; Brucelin et al., 1999), или на Leu, или D-Ala (Xiao et al., 2001), что позволяло повысить устойчивость к DPP IV при сохранении активности. N-концевая аминокислота GLP-1, а именно His7, является решающей в отношении активности GLP-1 и служит мишенью DPP IV. Соответственно в патенте США № 5545618 описана модификация N-конца с использованием алкильной или ацильной группы, и в документе Gallwitz et al. описано, что His в 7-м положении может быть N-метилирован или альфа-метилирован или же His может быть целиком заменен на имидазол с увеличением устойчивости к действию DPP IV и поддержанием физиологической активности.
Кроме описанных модификаций, эксендин-4, который является аналогом GLP-1, выделенным из слюнных желез гигантской ящерицы ядозуба (патент США № 5424686), обладает устойчивостью к действию DPP IV и более высокой физиологической активностью, чем GLP-1. В результате время его полужизни in vivo составляет от 2 до 4 часов, что превышает аналогичное время для GLP-1. Однако в случае повышения устойчивости только к действию DPP IV физиологическая активность не поддерживается на достаточном уровне, и, например, коммерчески доступный эксендин-4 (эксенатид) необходимо вводить в виде инъекции пациенту два раза в день, что опять создает неудобства для пациента.
Проблема, связанная с указанными инсулинотропными пептидами, в основном связана с тем, что они обладают незначительным размером. Так, например, они не могут возвращаться в циркуляцию из почек и в результате выводятся из организма. Соответственно, использовали способ химического присоединения к молекуле пептида полимерного вещества, имеющего высокую растворимость, например полиэтиленгликоля (ПЭГ), для ингибирования его выведения через почки.
ПЭГ неспецифически связывается с определенным сайтом или различными сайтами мишеневого пептида, обеспечивая эффект увеличения молекулярной массы пептида, и, таким образом, ингибирует выведение пептида почками и предотвращает гидролиз, не вызывая каких-либо побочных эффектов. Например, в международной патентной публикации WO 2006/076471 указано, что ПЭГ связывается с натрийуретическим пептидом B-типа или BNP, который связывается с NPR-A, активируя выработку цГМФ, что приводит к снижению артериального давления, и в результате конъюгат используют в качестве терапевтического средства при застойной сердечной недостаточности, тем самым поддерживая физиологическую активность. В патенте США № 6924264 описано, что ПЭГ связывается с лизином эксендина-4, повышая время его присутствия in vivo. Однако при этом способе повышается молекулярная масса ПЭГ, за счет чего возрастает время пребывания пептидного лекарственного средства in vivo, одновременно с повышением молекулярного веса значительно снижается титр пептидного лекарственного средства и его реакционная способность также падает. Соответственно, имеет место нежелательное снижение эффективности.
В международной патентной публикации WO 02/46227 описан слитый белок, полученный путем объединения GLP-1, эксендина-4 или их аналогов с сывороточным альбумином человека или фрагментом иммуноглобулина (Fc) с использованием генетических методик рекомбинантных ДНК. В патенте США 6756480 описан слитый Fc-белок, полученный путем объединения паратиреоидного гормона (PTH) и его аналога с Fc-фрагментом. Эти способы позволяют решить такие трудности, как низкий выход и отсутствие специфичности при ПЭГилировании, но они по-прежнему не могут решить проблему, связанную с тем, что эффект увеличения времени полужизни в крови не столь значим, как ожидалось, и в некоторых случаях титры также низкие. Для получения максимального эффекта увеличения времени полужизни в крови используются разные пептидные линкеры, но они могут вызывать иммунный ответ. Кроме того, если используется пептид, содержащий дисульфидные связи, например BNP, то существует высокая вероятность неправильной укладки цепи. В результате такие пептиды вряд ли могут найти применение.
Кроме того, производное GLP-1, а именно NN2211, получают замещением аминокислотного остатка GLP-1 и связывают с ацильной боковой цепью с образованием нековалентной связи с альбумином, что ведет к увеличению времени пребывания in vivo. Однако время полужизни этого производного составляет от 11 до 15 часов, что не является значительным приростом по сравнению с эксендином-4. Таким образом, производные GLP-1 до сих пор необходимо вводить путем инъекции один раз в день (Nauck et al., 2004). Кроме того, CJC-1131 представляет собой производное GLP-1, содержащее малеимидную функциональную группу для ковалентного связывания GLP-1 с альбумином крови, и предпринимались усилия, направленные на использование CJC-1131 с целью увеличения времени полужизни in vivo, однако сейчас эти попытки прекращены. Предложенное впоследствии соединение, а именно CJC-1134, представляет собой эксендин-4, который ковалентно связан с рекомбинантным альбумином, и этот продукт не демонстрирует значительного эффекта повышения стабильности в крови, причем время его полужизни в крови составляет примерно 17 часов (у крыс) (Thibauoleau et al., 2006).
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
Таким образом, авторы настоящего изобретения осуществили сайт-специфичное связывание Fc-фрагмента иммуноглобулина и непептидного полимера с инсулинотропным пептидом по аминокислотному остатку, отличному от N-концевого, с помощью ковалентной связи и обнаружили, что конъюгат по настоящему изобретению проявляет значительно увеличенную эффективность in vivo и обладает увеличенным временем полужизни. В частности, авторы изобретения установили, что среди прочих конъюгатов инсулинотропных пептидов конъюгаты таких пептидов, как эксендин-4, дезаминогистидилэксендин-4, в котором удалена N-концевая аминогруппа эксендина-4, бета-гидроксиимидазопропионилэксендин-4, в котором N-концевая аминогруппа эксендина-4 замещена гидроксильной группой, диметилгистидилэксендин-4, в котором N-концевая аминогруппа эксендина-4 модифицирована введением двух метильных групп, и имидазоацетилэксендин-4, в котором удалены альфа-атом углерода первого остатка гистидина и связанная с ним N-концевая аминогруппа, демонстрируют значительное увеличение эффективности in vivo и времени полужизни.
Техническое решение
Целью настоящего изобретения являлось создание лекарственного средства инсулинотропного пептида длительного действия, обладающего способностью сохранять активность инсулинотропного пептида in vivo с повышенным временем полужизни в крови.
Краткое описание чертежей
На фиг.1 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата нативный эксендин-4(N)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.2 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата нативный эксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.3 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата дезаминогистидилэксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.4 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата (2-гидрокси-3-(1H-имидазол-4-ил)пропионил)эксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.5 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата (2-(1H-имидазол-4-ил)ацетил)эксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.6 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата Ser12 мутированного дезаминогистидилэксендина-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.7 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата Arg12 мутированного дезаминогистидилэксендина-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.8 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата дезаминогистидилэксендин-4(Lys)-ПЭГ-альбумин сыворотки человека (HSA).
На фиг.9 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата диметилгистидилэксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.10 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата GLP-1(N)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.11 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата дезаминогистидил GLP-1(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.12 показаны результаты ВЭЖХ на обращенной фазе, предназначенной для определения чистоты конъюгата нативный эксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
На фиг.13 показаны результаты определения чистоты конъюгата (2-(1H-имидазол-4-ил)ацетил)эксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина с помощью 12% SDS-PAGE.
На фиг.14 показаны результаты измерения эффекта уменьшения концентрации глюкозы в крови, вызванного конъюгатом дезаминогистидилэксендин-4(Lys)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина.
Наилучший способ осуществления изобретения
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения разработан конъюгат инсулинотропного пептида длительного действия, в котором инсулинотропный пептид и непептидный полимер, содержащий реакционноспособные группы на обоих концах молекулы, ковалентно связаны друг с другом.
Инсулинотропный пептид по настоящему изобретению представляет собой пептид, обладающий инсулинотропным действием, т.е. способствующий синтезу и экспрессии инсулина в бета-клетках поджелудочной железы. К этим пептидам относятся предшественники, агонисты, производные, фрагменты и варианты, и предпочтительно GLP (глюкагоноподобный пептид)-1, эксендин 3 и эксендин 4.
GLP-1 представляет собой гормон, который секретируется в тонком кишечнике и в целом содействует биосинтезу и секреции инсулина, ингибирует секрецию глюкагона и стимулирует поглощение глюкозы в клетках. В тонком кишечнике предшественник глюкагона распадается на три пептида, а именно глюкагон, GLP-1 и GLP-2. В данном случае под GLP-1 понимают GLP-1(1-37), который первоначально находится в форме, не обладающей инсулинотропным действием. Но впоследствии эта форма перерабатывается и превращается в активированную форму GLP-1 (7-37). GLP-1 (7-37) имеет следующую аминокислотную последовательность:
GLP-1 (7-37)
HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EPIAW LVKGR G
Термин «производное GLP-1» означает пептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 80% гомологична аминокислотной последовательности GLP-1, возможно, в химически модифицированной форме, и который проявляет инсулинотропное действие, по меньшей мере эквивалентное или превосходящее инсулинотропное действие GLP-1.
Термин «фрагмент GLP-1» означает фрагмент в форме, в которой один или несколько аминокислотных остатков присоединены или удалены с N-конца или C-конца нативного GLP-1, где присоединенные аминокислотные остатки, возможно, являются аминокислотами неприродного происхождения (например, D-аминокислотами).
Термин «вариант GLP-1» означает пептид, обладающий инсулинотропным действием, который содержит одну или несколько аминокислотных последовательностей, отличающихся от последовательностей нативного GLP-1.
Эксендин 3 и эксендин 4 представляют собой инсулинотропные пептиды, состоящие из 39 аминокислот, которые на 53% гомологичны аминокислотной последовательности GLP-1. Эксендин-3 и эксендин-4 имеют следующие аминокислотные последовательности:
эксендин-3
HSDGT FTSDL SKQME EEAVR LFIEW LKNGG PSSGA PPPS
эксендин-4
HGEGT FTSDL SKQME EEAVR LFIEW LKNGG PSSGA PPPS
Термин «агонист эксендина» означает соединение, которое взаимодействует с рецепторами in vivo и обладает такой же биологической активностью, как и эксендин, причем его структура не является родственной структуре эксендина. Термин «производное эксендина» означает пептид, который по меньшей мере на 80% гомологичен аминокислотным последовательностям нативного эксендина, в котором некоторые группы аминокислотных остатков могут быть химически замещены (например, альфа-метилирование, альфа-гидроксилирование), удалены (например, деаминирование) или модифицированы (например, N-метилирование) и который обладает инсулинотропным действием.
Термин «фрагмент эксендина» означает фрагмент, в котором на N-конце или C-конце молекулы нативного эксендина присоединены или удалены один или несколько аминокислотных остатков, в который могут входить неприродные аминокислоты (например, D-аминокислоты) и который обладает инсулинотропным действием.
Термин «вариант эксендина» означает пептид, который отличается от нативного эксендина по меньшей мере одной аминокислотной последовательностью и при этом обладает инсулинотропным действием.
Каждый из способов получения агонистов, производных, фрагментов и вариантов эксендина может использоваться самостоятельно или в комбинациях. Например, настоящее изобретение относится к инсулинотропному пептиду с аминокислотной последовательностью, в которой существует отличие по меньшей мере на один аминокислотный остаток от последовательности нативного инсулинотропного пептида и имеющий дезаминированный остаток на N-конце.
В конкретном варианте осуществления нативный инсулинотропный пептид, используемый в настоящем изобретении, и модифицированный инсулинотропный пептид могут быть синтезированы с использованием твердофазного способа синтеза и большинство нативных пептидов, включая нативные инсулинотропные пептиды, могут быть получены с помощью рекомбинантных методик.
Кроме того, инсулинотропный пептид, используемый в настоящем изобретении, может связываться с непептидным полимером на различных сайтах.
Конъюгат пептида, полученный по настоящему изобретению, может обладать активностью, которая изменяется в зависимости от сайта присоединения инсулинотропного пептида.
Например, конъюгат может быть связан на N-конце и на другом концевом участке, отличном от N-конца, например на C-конце соответственно, что указывает на различные активности in vitro. Реакционноспособная альдегидная группа селективно присоединяется к N-концу при низких значениях pH и может связываться с остатком лизина с образованием ковалентной связи при высоких значениях pH, например, pH 9,0. Реакция ПЭГилирования может проходить при различных значениях pH, после чего изомеры положения могут быть выделены из реакционной смеси с использованием ионообменной колонки.
Если инсулинотропный пептид необходимо присоединить на сайте, отличном от N-конца, который является важным сайтом, определяющим активность in vivo, то с помощью малеимидного линкера в молекуле непептидного полимера в аминокислотный остаток на соответствующем сайте может быть введена реакционноспособная тиольная группа, модифицирующая нативную аминокислотную последовательность образованием ковалентной связи.
Если инсулинотропный пептид необходимо присоединить на сайте, отличном от N-конца, который является важным фрагментом, определяющим активность in vivo, то с помощью альдегидного линкера в молекуле непептидного полимера в аминокислотный остаток на соответствующем сайте может быть введена реакционноспособная аминогруппа, модифицирующая нативную аминокислотную последовательность с образованием ковалентной связи.
Если используется альдегидный линкер в молекуле непетидного полимера, то он взаимодействует с аминогруппой, находящейся на N-конце, и остатками лизина, и модифицированная форма инсулинотропного пептида может использоваться для селективного увеличения выхода реакции. Например, на желаемом сайте может быть сохранена только одна аминогруппа, которую необходимо ввести в реакцию, способами блокирования N-конца, методикой замещения остатка лизина, способом введения аминогруппы по карбокси-концу и тому подобным, что позволяет повысить выход реакций ПЭГилирования и сочетания. Способы защиты N-концевой аминогруппы включают, но ими не ограничиваются, диметилирование, а также метилирование, деаминирование, ацетилирование и тому подобное.
В одном из предпочтительных вариантов осуществления конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению представляет собой конъюгат инсулинотропного пептида, в котором Fc-фрагмент иммуноглобулина специфично связан с аминогруппой, отличной от аминогруппы, расположенной на N-конце инсулинотропного пептида. В одном из конкретных вариантов осуществления авторы настоящего изобретения осуществили ПЭГилирование нативного эксендина-4 при pH 9,0, селективно присоединив ПЭГ к остатку лизина инсулинотропного пептида. В качестве альтернативы для ПЭГилирования остатка Lys, осуществляли ПЭГилирование производных эксендина-4, в которых N-конец удален или защищен, при pH 7,5. ПЭГилирование N-конца блокировали либо удалением альфа-аминогруппы N-концевого гистидина, либо замещением N-концевой аминогруппы гидроксильной группой, либо модификацией альфа-аминогруппы N-концевого гистидина введением двух метильных групп, либо удалением альфа-углерода первой аминокислоты (гистидина) и связанной с ним N-концевой аминогруппы с сохранением имидазоацетильной группы и т.д. Эти производные представлены следующими химическими формулами:
<Химическая формула 1>
| (а) |
|
(b) |
|
|
Дезаминогистидил
(DA)-эксендин-4 |
Бета-гидроксиимидазопропил
(HY)-эксендин-4 |
||
| (c) |
|
(d) |
|
|
Имидазоацетил
(CA)-эксендин-4 |
Диметилгистидил
(DM)-эксендин-4 |
||
В отличие от связывания к N-концу, при присоединении ПЭГ к остатку лизина, а не к N-концу сохраняется уровень активности in vitro, равный примерно 8,5% (см. таблицу). Кроме того, даже если конъюгаты Fc и дезаминогистидилэксендина-4 (в описании обозначен как DA-эксендин-4), полученного удалением N-концевой аминогруппы эксендина-4, бета-гидроксиимидазопропилэксендина-4 (в описании обозначен как HY-эксендин-4), полученного замещением N-концевой аминогруппы эксендина-4 гидроксильной группой, диметилгистидилэксендина-4 (в описании обозначен как DM-эксендин-4), полученного модификацией N-концевой аминогруппы эксендина-4 введением двух метильных групп, и имидазоацетилэксендина-4 (в описании обозначен как CA-эксендин-4), полученного удалением α-углерода первого остатка гистидина в молекуле эксендина-4 и связанной с ним N-концевой аминогруппы, показывали сопоставимую активность in vitro и время полужизни в крови по сравнению с конъюгатом нативного эксендина-4 (см. таблицу), то указанные конъюгаты демонстрировали неожиданно высокую продолжительность эффективного действия in vivo (фиг. 14). Конъюгат DM-эксендин-4 и Fc-фрагмент иммуноглобулина, конъюгат DA-эксендин-4 и Fc-фрагмент иммуноглобулина, конъюгат CA-эксендин-4 и Fc-фрагмент иммуноглобулина и конъюгат HY-эксендин-4 и Fc-фрагмент иммуноглобулина, полученные по настоящему изобретению, продемонстрировали увеличение времени полужизни в крови до 50 часов или более. Уменьшение титра также было максимально уменьшено связыванием с остатком Lys, который не влияет на активность пептида. Кроме того, наблюдалась неожиданно высокая активность снижения высоких уровней глюкозы при удалении аминогруппы или альфа-углерода на N-конце пептида.
Fc-фрагмент иммуноглобулина безопасен для использования в качестве носителя действующего пептида, поскольку является биоразрушаемым полипептидом, который подвергается метаболизму in vivo. Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина обладает относительно низкой молекулярной массой по сравнению с полноразмерной молекулой иммуноглобулина и, таким образом, является предпочтительным с точки зрения получения, очистки и эффективности конъюгата. Поскольку Fc-фрагмент иммуноглобулина не содержит Fab-фрагмента, аминокислотная последовательность которого различается в зависимости от подклассов антитела и который, таким образом, в значительной степени неоднороден, можно ожидать, что Fc-фрагмент иммуноглобулина может в значительной степени увеличить однородность препарата и являться менее антигенным.
Инсулинотропный пептид, используемый в настоящем изобретении, связывают с носителем и непептидным полимером.
Носитель, который может использоваться в настоящем изобретении, может быть выбран из группы, состоящей из Fc-фрагмента иммуноглобулина, альбумина, трансферрина и ПЭГ, и предпочтительно представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина.
Термин «Fc-фрагмент иммуноглобулина» в настоящей заявке относится к константной области 2 тяжелой цепи (CH2) и константной области 3 тяжелой цепи (CH3) иммуноглобулина, а не к вариабельным областям тяжелой и легкой цепей, константной области 1 тяжелой цепи (CH1) и константной области 1 легкой цепи (CL1) иммуноглобулина. Fc-фрагмент может дополнительно содержать шарнирную область константной области тяжелой цепи. Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может включать часть или весь Fc-фрагмент, в том числе константную область 1 тяжелой цепи (CH1) и/или константную область 1 легкой цепи (CL1), за исключением вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, если обладает физиологическим действием, в основном сходным с нативным белком или превосходящим его. Кроме того, Fc-фрагмент Ig может быть фрагментом, в котором имеется делеция относительно протяженной части аминокислотной последовательности в областях CH2 и/или CH3. То есть Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может включать 1) домен CH1, домен CH2, домен CH3 и домен CH4, 2) домен CH1 и домен CH2, 3) домен CH1 и домен CH3, 4) домен CH2 и домен CH3, 5) комбинацию одного или нескольких доменов и шарнирной области иммуноглобулина (или части шарнирной области) и 6) димер каждого из доменов константных областей тяжелой цепи и константной области легкой цепи.
Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению включает нативную аминокислотную последовательность и ее производные (продукты мутаций). Производное аминокислотной последовательности представляет собой последовательность, которая отличается от нативной аминокислотной последовательности за счет делеций, вставок, неконсервативных или консервативных замещений или комбинаций перечисленного, относящихся к одному или нескольким аминокислотным остаткам. Например, в Fc IgG, аминокислотные остатки, которые, как известно, играют важную роль в связывании в положениях 214-238, 297-299, 318-322 или 327-331, могут использоваться как подходящие мишени для модификации. Кроме того, возможны другие разнообразные производные, включая производные, в которых удалена область, способная к образованию дисульфидных связей, или удалены некоторые остатки на N-конце нативной формы Fc или к последовательности добавлен метиониновый остаток. Кроме того, для ликвидации эффекторных функций может осуществляться делеция на комплемент-связывающем сайте, например C1q-связывающем сайте и сайте ADCC (антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности). Методики получения таких производных последовательностей Fc-фрагмента иммуноглобулина раскрыты в международных патентных публикациях WO 97/34631 и WO 96/32478.
Из уровня техники известны аминокислотные замены в белках и пептидах, которые в целом не изменяют активность молекул (H.Neurath, R.L. Hill, The proteins, Academic Press, New York, 1979). Наиболее часто встречающимися заменами являются Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu и Asp/Gly в обоих направлениях.
Если это желательно, Fc-фрагмент может быть модифицирован путем фосфорилирования, сульфатирования, акрилирования, гликозилирования, метилирования, фарнезилирования, ацетилирования, амидирования и тому подобного.
Указанные выше производные Fc-фрагмента представляют собой производные, которые имеют биологическую активность, идентичную фрагменту Fc по настоящему изобретению, или лучшую структурную устойчивость, например, по отношению к действию тепла, pH или тому подобное.
Помимо этого, эти Fc-фрагменты могут быть получены из нативных форм, выделенных из организмов людей, а также других животных, включая коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок, или же они могут быть рекомбинантными продуктами или их производными, полученными из трансформированных животных клеток или микроорганизмов. Для целей настоящего изобретения они могут быть получены из нативного иммуноглобулина, путем выделения целых молекул иммуноглобулина из организма человека или животных и обработки их протеолитическими ферментами. Папаин расщепляет нативный иммуноглобулин на Fab- и Fc-фрагменты, и обработка пепсином приводит к получению pF'c- и F(ab)2-фрагментов. Эти фрагменты можно подвергнуть, например, эксклюзионной хроматографии для выделения Fc или pF'c.
Предпочтительно Fc-фрагмент человека представляет собой Fc-фрагмент рекомбинантного иммуноглобулина, который получают из микроорганизмов.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может представлять собой форму, включающую нативные цепи сахаров, увеличенные по сравнению с нативной формой цепи сахаров или уменьшенные по сравнению с нативной формой цепи сахаров, или же они могут представлять собой дегликозилированную форму. Увеличение, уменьшение или удаление цепей сахаров Fc-фрагмента иммуноглобулина может быть достигнуто обычными способами, известными в данной области, например химическими способами, способами с использованием ферментов и способами генной инженерии с использованием микроорганизмов. Удаление цепей сахаров из Fc-фрагмента ведет к резкому повышению сродства связывания с фрагментом C1q первого компонента комплемента C1 и уменьшению или потере антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности или комплемент-зависимой цитотоксичности, в результате чего не происходит инициирование ненужных иммунных ответов in vivo. С этой точки зрения Fc-фрагмент иммуноглобулина в дегликозилированной или агликозилированной форме может оказаться более подходящим для целей настоящего изобретения в качестве носителя лекарственного компонента.
В настоящей заявке термин «дегликозилирование» относится к ферментному удалению фрагментов сахаров из Fc-фрагмента, а термин «агликозилирование» означает, что Fc-фрагмент получен в форме, не содержащей фрагментов гликозидов с помощью прокариот, предпочтительно E.coli.
С другой стороны, Fc-фрагмент иммуноглобулина может быть получен из организмов людей или животных, включая коров, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок, и предпочтительно людей. Помимо этого, Fc-фрагмент иммуноглобулина может быть Fc-фрагментом, который получен из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM или который получен из их комбинаций или гибридов. Предпочтительно фрагмент получают из IgG или IgM, которые относятся к числу наиболее часто встречающихся белков человеческой крови, и наиболее предпочтительно из IgG, который, как известно, увеличивает время полужизни лиганд-связывающих белков.
С другой стороны, термин «комбинация» в настоящей заявке означает, что полипептиды, образующие фрагменты одной цепи Fc-фрагмента иммуноглобулина одного происхождения, связывают с полипептидной цепью другого происхождения с получением димера или мультимера. Т.е. димер или мультимер может быть сформирован из двух или нескольких фрагментов, выбранных из группы, состоящей из фрагментов IgG Fc, IgA Fc, IgM Fc, IgD Fc и IgE Fc.
Термин «гибрид» в настоящей заявке означает, что в единой цепи Fc-фрагмента иммуноглобулина присутствуют последовательности, образующие два или несколько Fc-фрагментов иммуноглобулина различного происхождения. В настоящем изобретении возможны различные типы гибридов. Т.е. доменные гибриды могут состоять из одного-четырех доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов CH1, CH2, CH3 и CH4 IgG Fc, IgM Fc, IgA Fc, IgE Fc и IgD Fc, а также могут включать шарнирную область.
С другой стороны, IgG подразделяются на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и настоящее изобретение включает их комбинации и гибриды. Предпочтительными являются подклассы IgG2 и IgG4, и наиболее предпочтительным является Fc-фрагмент IgG4, который реже имеет эффекторные функции, например CDC (комплемент-зависимую цитотоксичность).
Т.е. в качестве носителя действующего пептида по настоящему изобретению наиболее предпочтительным Fc-фрагментом иммуноглобулина является негликозилированный Fc-фрагмент, являющийся производным IgG4. Fc-фрагмент, выделенный из иммуноглобулина человеческого происхождения, является более предпочтительным, чем Fc-фрагмент иммуноглобулина нечеловеческого происхождения, который может действовать как антиген в организме человека и вызывать нежелательные иммунные ответы, например вызывать выработку нового антитела против этого антигена.
Термин «непептидный полимер» в настоящем описании относится к биосовместимому полимеру, включающему два или более повторяющихся звена, связанных друг с другом любой ковалентной связью за исключением пептидной связи.
Непептидный полимер, который может использоваться в настоящем изобретении, может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, таких как PLA (полимолочная кислота) и PLGA (полимолочная-гликолевая кислота), липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и предпочтительно представляет собой полиэтиленгликоль. Кроме того, в объем настоящего изобретения включены их производные, которые хорошо известны в технике и легко могут быть получены специалистом в данной области.
Недостатком пептидного линкера, который используется в слитых белках, полученных стандартным способом слияния в рамке считывания, является тем, что он легко расщепляется in vivo под действием протеолитических ферментов, и в силу этого не удается получить ожидаемого значительного эффекта увеличения времени полужизни действующего пептида в крови при применении носителя. Однако в настоящем изобретении для сохранения времени полужизни пептида в крови примерно на уровне этого времени для носителя может быть применен полимер, обладающий устойчивостью к протеолитическим ферментам. Следовательно, любой непептидный полимер, который может использоваться в настоящем изобретении, может применяться без каких-либо ограничений, если он является полимером, имеющим упомянутые выше свойства, а именно является полимером, устойчивым к действию протеолитических ферментов in vivo. Непептидный полимер предпочтительно имеет молекулярную массу в диапазоне от 1 до 100 КДа, и более предпочтительно от 1 до 20 КДа. Кроме того, непептидный полимер по настоящему изобретению, связанный с Fc-фрагментом иммуноглобулина, может являться одним полимером или представлять собой комбинацию полимеров различных типов.
Непептидный полимер, используемый в настоящем изобретении, включает реакционноспособную группу, способную связываться с Fc-фрагментом иммуноглобулина и пептидным действующим средством.
Непептидный полимер содержит реакционноспособные группы на обоих концах молекулы, которые предпочтительно выбраны из альдегидной группы, остатка пропионового альдегида, остатка бутиральдегида, малеимидной группы и производных сукцинимида. Производные сукцинимида могут представлять собой сукцинимидилпропионат, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилкарбоксиметил или сукцинимидилкарбонат. В частности, если непептидный полимер содержит альдегидные группы на обоих концах молекулы, он способен связываться по обоим концам с физиологически активным полипептидом и иммуноглобулином с минимальными побочными взаимодействиями. Конечный продукт, получаемый восстановительным алкилированием альдегидной связи, значительно более стабилен, чем продукт, содержащий амидные связи. Альдегидная функциональная группа селективно связывается с N-концом при низких значениях pH и может связываться с остатком лизина с образованием ковалентной связи при высоких значениях pH, например pH 9,0.
Реакционноспособные группы на обоих концах молекулы непептидного полимера могут быть одинаковыми или различными. Например, непептидный полимер на одном из концов молекулы может содержать малеимидную группу и на другом конце молекулы альдегидную группу, остаток пропионового альдегида или остаток бутиральдегида. Если в качестве непептидного полимера применяется полиэтиленгликоль, содержащий гидроксигруппы на обоих концах молекулы, эти гидроксигруппы могут быть активированы путем превращения в различные реакционноспособные группы с помощью известных химических реакций, или же для получения конъюгата инсулинотропного пептида по настоящему изобретению можно применять коммерчески доступные полиэтиленгликоли, содержащие модифицированные реакционноспособные группы.
Конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению сохраняет обычную активность инсулинотропного пептида in vivo, например стимулирование синтеза и секреции инсулина, управление аппетитом, потерю массы тела, увеличение чувствительности бета-клеток к глюкозе в крови, содействие пролиферации бета-клеток, замедление опорожнения желудка и подавление глюкагона, и, кроме того, значительно увеличивает время полужизни в крови инсулинотропного пептида и, следовательно, поддерживает эффективность пептида in vivo, что делает описываемый конъюгат применимым при лечении диабета, ожирения, острого коронарного синдрома или поликистозного синдрома яичников.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата инсулинотропного пептида, включающему стадии:
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционноспособные группы, выбранные из альдегида, малеимида, и производных сукцинимида, с аминогруппой или тиольной группой инсулинотропного пептида;
(2) выделения конъюгата, включающего инсулинотропный пептид из реакционной смеси стадии (1), в котором непептидный полимер ковалентно связан с участком пептида, отличным от N-конца; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом непептидного полимера, входящего в выделенный конъюгат, с получением конъюгата пептида, содержащего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами непептидного полимера.
Термин «конъюгат» в данном случае относится к промежуточному продукту, полученному ковалентным связыванием непептидного полимера с инсулинотропным пептидом, после чего другой конец непептидного полимера связывают с Fc-фрагментом иммуноглобулина.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата инсулинотропного пептида, включающему стадии:
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы альдегидные функциональные группы, с остатком лизина инсулинотропного пептида;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, содержащего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с остатком лизина; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера, входящей в выделенный конъюгат, с получением белкового конъюгата, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера. Более предпочтительно непептидный полимер и остаток лизина инсулинотропного пептида на стадии (1) связывают при pH 7,5 или выше.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, предназначенной для лечения диабета, содержащей конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению.
Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат по настоящему изобретению, может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. В случае перорального введения, фармацевтически приемлемый носитель может включать связующее вещество, смазывающее средство, дезинтегрирующее средство, наполнитель, солюбилизирующее средство, диспергирующее средство, стабилизатор, суспендирующее средство, краситель и ароматизатор. В случае препаратов для инъекций, фармацевтически приемлемый носитель может включать буферный реагент, консервирующее средство, аналгетик, солюбилизатор, изотоническое средство и стабилизатор. В случае препаратов для местного применения фармацевтически приемлемый носитель может включать основу, наполнитель, смазывающее средство и консервирующее средство. Из фармацевтических композиций по настоящему изобретению в комбинации с упомянутыми выше фармацевтически приемлемыми носителями можно получать различные дозированные лекарственные формы. Например, для перорального введения, фармацевтическая композиция может быть получена в виде таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов или облаток. В случае препаратов для инъекций, фармацевтическая композиция может быть заключена в ампулы в виде дозированной лекарственной формы для однократного или многократного введения, например контейнера с мультидозой. Фармацевтические композиции могут также иметь форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул и препаратов длительного действия.
С другой стороны, примеры носителей, наполнителей и разбавителей, пригодных для фармацевтических составов, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинаты, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральные масла. Кроме того, фармацевтические составы могут дополнительно включать наполнители, средства против коагуляции, смазывающие средства, увлажняющие средства, ароматизаторы и антисептики.
Конъюгаты по настоящему изобретению могут использоваться для лечения диабета, ожирения, острого коронарного синдрома или поликистозного синдрома яичников. Соответственно фармацевтические композиции, содержащие эти конъюгаты, могут вводиться для лечения этих заболеваний.
Термин «введение» в настоящем описании означает введение пациенту заранее определенного количества вещества каким-либо подходящим способом. Конъюгат по настоящему изобретению можно вводить любым из обычных путей, если он может достичь желаемой ткани. В изобретении рассматривается ряд путей введения, включая внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрикожный, пероральный, местный, интраназальный, внутрилегочный или интраректальный, но настоящее изобретение не ограничено этими стандартными путями введения. Однако поскольку пептиды расщепляются при пероральном введении, действующие ингредиенты композиций для перорального введения должны быть снабжены покрытием или включены в состав, который защищает их от разрушения в желудке. Предпочтительно композиции по настоящему изобретению могут вводиться в форме, подходящей для инъекций. Кроме того, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут вводиться с применением соответствующих устройств, способных доставлять действующие ингредиенты в целевые клетки.
Частота введения и дозировка фармацевтических композиций по настоящему изобретению могут определяться несколькими сопутствующими факторами, включая тип заболевания, подвергаемого лечению, путь введения, возраст, пол, массу тела пациента и тяжесть заболевания, а также тип действующего компонента лекарственного препарата. Поскольку фармацевтическая композиция по настоящему изобретению обладает превосходной продолжительностью действия и титром in vivo, она позволяет значительно уменьшить частоту введения и дозу фармацевтических препаратов по настоящему изобретению.
Лучшее понимание настоящего изобретения может быть достигнуто при ознакомлении со следующими примерами, которые приведены для иллюстрации и не должны быть истолкованы как ограничение объема настоящего изобретения.
СПОСОБЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 1. ПЭГилирование эксендина-4 и выделение изомера положения
Эксендин-4 ПЭГилировали на N-конце (AP, USA), осуществляя взаимодействие пептида и 3,4K PropionALD(2) PEG (ПЭГ, включающего две группы пропионового альдегида, IDB Inc., Южная Корея) при 4°C в течение 90 минут, молярное соотношение 1:15 при концентрации пептида 3 мг/мл. За это время реакция проходила в буфере NaOAc при pH 4,0 и концентрации 100 мМ, и для осуществления реакции добавляли и 20 мМ SCB (NaCNBH3) в качестве восстанавливающего средства. 3,4K PropionALD(2) PEG вступал в реакцию ПЭгилирования на остатке лизина (Lys) эксендина-4 при 4°C в течение 3 ч при молярном соотношении 1:30 и концентрации пептида 3 мг/мл. За это время реакция проходила в Na-фосфатном буфере при pH 9,0 в концентрации 100 мМ, и для осуществления реакции добавляли и 20 мМ SCB в качестве восстанавливающего средства. Моно-ПЭГилированный пептид выделяли из каждой реакционной смеси с применением колонки SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences) и изомеры разделяли с применением колонки SOURCE S (XK 16 мл, Amersham Biosciences). Было обнаружено, что пик, соответствующий продукту с ПЭГилированным N-концом, появляется раньше других и затем друг за другом появляются два пика, соответствующих ПЭГилированию по остаткам лизина. Соответствие между пиками и участками, по которым произошло ПЭГилирование, было подтверждено способом составления пептидных карт. Конъюгат, в котором ПЭГилирование прошло по Lys-12, элюировался раньше, и Lys-27 ПЭГилированный конъюгат элюировался в последнюю очередь, причем изомер положения с ПЭГилированным N-концом и изомер положения с ПЭГилированным Lys-12 полностью отделялись друг от друга.
Колонка: SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 2,0 мл/мин
Градиент: A 0→40% 80 мин B (A: 20 мМ Tris, pH 8,5; B: A+0,5M NaCl)
Колонка: SOURCE S (XK 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 2,0 мл/мин
Градиент: A 0→100% 50 мин B (A: 20 мМ лимонная кислота, pH 3,0; B: A+0,5M KCl)
Пример 2. Получение конъюгата эксендин-4(N)-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя способ, описанный в примере 1, проводили взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с N-концевым фрагментом эксендина-4, выделяли только N-концевой изомер и затем сшивали его с Fc-фрагментом иммуноглобулина. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 50 мг/мл при 4°C в течение 17 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в раствор в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. Реакционную смесь очищали с использованием двух хроматографических колонок. Первую из них, а именно SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences), применяли для удаления значительного количества Fc-фрагмента иммуноглобулина, которое не вступило в реакцию сочетания. При применении 20 мМ TRIS (pH 7,5) и 1М NaCl с солевым градиентом, Fc-фрагмент иммуноглобулина обладал относительно слабым связыванием и элюировался из колонки раньше, и затем элюировался конъюгат эксендин-4-Fc-фрагмент иммуноглобулина. Во время этой первой стадии очистки удалялось определенное количество Fc-фрагмента иммуноглобулина, но поскольку Fc-фрагмент иммуноглобулина и конъюгат эксендин-4-Fc-фрагмент иммуноглобулина имеют сходную друг с другом способность к связыванию в ионообменной колонке, их не удавалось полностью отделить друг от друга. Соответственно, второй этап разделения осуществляли с использованием гидрофобности каждого их двух соединений. Используя 20 мМ Tris (pH 7,5), 1,5М сульфат аммония в колонке SOURCE ISO (HR 16 мл, Amersham Biosciences), объединяли образцы, прошедшие первичную очистку, и полученный образец элюировали при постепенном уменьшении концентрации сульфата аммония. В колонке HIC Fc-фрагмент иммуноглобулина, имевший более слабое связывание, элюировался вначале, и затем происходило элюирование конъюгата эксендин-4-Fc-фрагмент иммуноглобулина, имевшего сильное связывание с неподвижной фазой колонки. Поскольку компоненты обладали сильно различающейся гидрофобностью, их можно было значительно легче отделить друг от друга, чем в ионообменной колонке. Однако, поскольку применялись избыточные количества Fc-фрагмента иммуноглобулина из-за разницы в мольном соотношении, не удалось достичь высокой чистоты, используя только колонку HIC. Чистота, измеренная с применением ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 91,6% (фиг.1).
Колонка: SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 2,0 мл/мин
Градиент: A 0→25% 70 мин B (A: 20 мМ Tris, pH 7,5; B: A+1M NaCl)
Колонка: SOURCE ISO (HR 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 7,0 мл/мин
Градиент: B 100→0% 60 мин B (A: Tris, pH 7,5; B: A+1,5M сульфат аммония)
Пример 3: Получение конъюгата эксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя методику, описанную в примере 1, осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатками лизина (Lys) эксендина-4, выделяли только Lys изомеры и затем сшивали с Fc-фрагментом иммуноглобулина. В реакции сшивания использовали изомер положения Lys27, который давал последний из двух пиков, соответствующих продуктам взаимодействия с остатками лизина, т.к. этот изомер обладал большей реакционной способностью и легче отделялся от пика N-концевого изомера. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 50 мг/мл при 4°C в течение 16 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в раствор в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 91,7% (фиг.2).
Пример 4: Получение конъюгата дезаминогистидилэксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Для получения продукта взаимодействия 3,4K PropionALD(2) PEG с лизиновым остатком (Lys) дезаминогистидилэксендина 4 (DA-эксендин-4, AP, USA) проводили ПЭГилирование путем взаимодействия пептида и 3,4K PropionALD(2) при 4°C в течение 12 часов при молярном соотношении 1:30 и концентрации пептида 3 мг/мл. Реакцию проводили в Na-фосфатном буфере, pH 7,5, 100 мМ, и добавляли 20 мм SCB в качестве восстанавливающего реагента. ПЭГилированный пептид очищали по двухстадийной методике, используя колонки SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences) и SOURCE S (XK 16 мл, Amersham Biosciences). В реакции сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина использовали изомер положения Lys27, который давал последний из двух изомерных пиков, т.к. этот изомер обладал большей реакционной способностью и легче отделялся от пика N-концевого изомера. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 20 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 95,8% (фиг.3).
Колонка: SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 2,0 мл/мин
Градиент: A 0→40% 70 мин B (A: 20 мМ Tris, pH 9,0; B: A+1M NaCl)
Колонка: SOURCE S (XK 16 мл, Amersham Biosciences)
Скорость потока: 2,0 мл/мин
Градиент: A 0→50% 50 мин B (A: 20 мМ лимонная кислота, pH 3,0; B: A+1M KCl).
Пример 5: Получение конъюгата гидроксилимидазопропионилэксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя методику, описанную в примере 4, осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатками лизина (Lys) бета-гидроксиимидазопропионилэксендина-4 (HY-эксендин-4, AP, USA). В реакции сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина использовали изомер положения Lys27, который давал последний из изомерных пиков, т.к. этот изомер обладал большей реакционной способностью и легче отделялся от пика N-концевого изомера. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 20 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 93,9% (фиг.4).
Пример 6: Получение конъюгата имидазоацетилэксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя методику, описанную в примере 4, осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатками лизина (Lys) имидазоацетилэксендина-4 (CA-эксендин-4, AP, USA). В реакции сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина использовали изомер положения Lys27, который давал последний из двух изомерных пиков, т.к. этот изомер обладал большей реакционной способностью и легче отделялся от пика N-концевого изомера. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 20 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 95,8% (фиг.5).
Пример 7: Получение конъюгата Ser12 мутированный DA эксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатком лизина (Lys) Ser12 мутированного DA эксендина-4 путем взаимодействия пептида и 3,4K PropionALD(2) PEG при 25°C в течение 3 часов при мольном соотношении 1:30 и концентрации пептида 3 мг/мл. В данном случае реакцию проводили в Na-фосфатном буфере при pH 7,5 и концентрации 100 мМ, причем для проведения реакции в раствор добавляли 20 мМ SCB в качестве восстанавливающего реагента. При очистке моно-ПЭГилированного пептида применяли колонку SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences), но не применяли SOURCE S (XK 16 мл, Amersham Biosciences) в соответствии с описанием, приведенным в примере 4. Реакцию сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 20 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. Поскольку Ser12 мутированный DA эксендин-4 обладал значительно более сильными анионными свойствами, избыточное количество Fc-фрагмента иммуноглобулина, не принявшего участия в реакции, эффективно удалялось с помощью очистки с применением только колонки SOURCE Q. Соответственно, стадия очистки с применением колонки SOURCE ISO была опущена, и условия стадии очистки с применением колонки SOURCE Q были теми же, что и в примере 2. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 92,5% (фиг.6).
Пример 8: Получение конъюгата Arg12 мутированный DA эксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя методику, описанную в примере 7, осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатком лизина (Lys) Arg12 мутированного DA эксендина-4 (AP, USA) и проводили очистку продукта. Затем осуществляли реакцию сшивания в Fc-фрагментом иммуноглобулина. Реакцию проводили при соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:8 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 20 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 99,2% (фиг.7).
Пример 9: Получение конъюгата дезаминогистидилэксендин-4(Lys27)-альбумин
Применяя методику, описанную в примере 4, осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG с остатками лизина (Lys) дезаминогистидилэксендина-4 (AP, USA) и проводили очистку продукта. Реакцию сшивания с альбумином проводили при соотношении пептид:альбумин человеческой крови (Green cross, South Korea) в качестве носителя 1:7 и общей концентрации белков 50 мг/мл при 4°C в течение 24 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстанавливающего средства добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 90,3% (фиг.8).
Пример 10. Получение конъюгата диметилгистидилэксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Применяя диметилгистидилэксендин-4 (DM эксендин, AP, USA), получали конъюгат диметилгистидилэксендин-4(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина по методике, описанной в примере 4. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 96,4% (фиг.9).
Пример 11. Получение конъюгата GLP-1(N)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Осуществляли взаимодействие 3,4K ButyrALD(2) PEG (т.е. ПЭГ, содержащего две бутиральдегидные группы, Nektar, USA) и N-концевого фрагмента GLP-1 (AP, USA), проводя реакцию пептида и ПЭГ при 4°C в течение 90 мин, при мольном соотношении 1:5 и концентрации пептида 3 мг/мл. За это время реакция проходила в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0), к которому в качестве восстановителя добавляли 20 мМ SCB (NaCNBH3). Затем проводили реакцию сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина при мольном соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:10 и общей концентрации белков 50 мг/мл при 4°C в течение 16 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстановителя добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 91% (фиг.10).
Пример 12. Получение конъюгата дезаминогистидил-GLP-1(Lys27)-Fc-фрагмент иммуноглобулина
Осуществляли взаимодействие 3,4K PropionALD(2) PEG и лизинового остатка (Lys) дезаминогистидил-GLP-1 (AP, USA), проводя реакцию пептида и 3,4K PropionALD(2) при 4°C в течение 4 часов, при мольном соотношении 1:30 и концентрации пептида 3 мг/мл. За это время реакция проходила в Na-фосфатном буфере в концентрации 100 мМ при pH 7,5, и в качестве восстановителя для осуществления реакции добавляли 20 мМ SCB. Осуществляли очистку моно-ПЭГилированного пептида с применением колонки SOURCE Q (XK 16 мл, Amersham Biosciences). Затем проводили реакцию сшивания с Fc-фрагментом иммуноглобулина при мольном соотношении пептид:Fc-фрагмент иммуноглобулина 1:6 и общей концентрации белков 60 мг/мл при 4°C в течение 16 часов. Реакцию проводили в 100 мМ растворе K-P (pH 6,0) и в качестве восстановителя добавляли 20 мМ SCB. После проведения реакции сшивания осуществляли двухстадийную очистку, аналогичную описанной в примере 2, применяя колонки SOURCE Q 16 мл и SOURCE ISO 16 мл. Однако разделение продуктов на колонке SOURCE ISO 16 мл ухудшилось, поскольку различие в гидрофобности конъюгата GLP-1-Fc-фрагмент иммуноглобулина и самим Fc-фрагментом иммуноглобулина меньше, чем между конъюгатом эксендин-4-Fc-фрагмент иммуноглобулина и Fc-фрагментом иммуноглобулина. Соответственно, в дополнение к описанной выше методике очистки, осуществили еще одну стадию очистки с применением колонки SOURCE ISO 16 мл. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 91,9% (фиг.11).
Пример 13. Получение конъюгата с применением линкера ButyrALD PEG
3,4K-Эксендин-4 получали по способу, описанному в примере 1, используя 3,4K ButyrALD(2) PEG (т.е. ПЭГ, содержащий две бутиральдегидные группы, Nektar, USA). Полученный продукт сшивали с Fc-фрагментом иммуноглобулина с помощью способа, описанного в примере 3. Чистота продукта, измеренная способом ВЭЖХ на обращенной фазе, составляла 92,3% (фиг.12).
Пример 14. Измерение активности in vitro препаратов эксендина 4 с продолжительным высвобождением
Для измерения эффективности препаратов эксендина-4 длительного действия применяли методику измерения активности клеток in vitro. Как правило, для измерения in vitro активности GLP-1 выделяли клетки инсулиномы островков Лангерганса и определяли, увеличиваются ли уровни cAMP в клетках после обработки GLP-1.
В методике измерения активности in vitro, примененной в настоящем исследовании, использовали клетки RIN-m5F (ATCC), которые известны как клетки инсулиномы крыс. Эти клетки содержат рецепторы GLP-1, и поэтому их часто применяют в методиках измерения активности in vitro пептидов семейства GLP-1. Клетки RIN-m5F обрабатывали GLP-1, эксендином-4 и тестируемыми препаратами в различных концентрациях. Измеряли уровни cAMP, являющихся сигнальными молекулами в этих клетках, которые появлялись при действии тестируемых соединений, вычисляли значения EC50 и сравнивали их друг с другом. Результаты показаны в таблице.
| Тестируемые соединения | Время полужизни в крови (часы) | Титр in vitro (%) |
| эксендин-4 | 0,7 | 100 |
| эксендин-4(N)-ПЭГ-Fc | 62 | <0,2 |
| эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | 61 | 13,2 |
| DM эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | 69 | 2,6 |
| DA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | 54 | 13,2 |
| HY эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | 52 | 7,6 |
| CA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | 52 | 8,5 |
| Ser12 DA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc | нет данных | 2,6 |
| DA эксендин-4(Lys27)-альбумин | 2,0 | |
| DA GLP-1(Lys20,28)-ПЭГ-Fc | 27 | 2,0 |
- DM эксендин-4: диметилгистидилэксендин-4;
- DA эксендин-4: дезаминогистидилэксендин 4;
- HY эксендин-4: бета-гидроксиимидазопропионилэксендин-4;
- CA эксендин-4: имидазоацетилэксендин-4;
- Ser12 DA эксендин-4: DA эксендин-4, в котором 12-й остаток лизина эксендина-4 заменен на серин;
- DA GLP-1: дезаминогистидил-GLP-1;
- эксендин-4(N)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором N-концевая область эксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина эксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- DM эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина диметилгистидилэксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- DA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина дезаминогистидилэксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- HY эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина бета-гидроксиимидазопропионилэксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- CA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина имидазоацетилэксендина-4 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- Ser12 DA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина Ser-12 дезаминогистидилэксендина-4, в котором 12-й остаток лизина эксендина-4 заменен на серин, и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ;
- DA эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-альбумин: конъюгат, в котором 27-й остаток лизина дезаминогистидилэксендина-4 и альбумин связаны с ПЭГ;
- DA GLP-1(Lys20,28)-ПЭГ-Fc: конъюгат, в котором остатки лизина дезаминогистидил GLP-1 и Fc-фрагмент связаны с ПЭГ.
Пример 15: Тест in vivo эффективности препаратов эксендина-4 длительного действия
Для измерения in vivo эффективности препаратов эксендина-4 длительного действия применяли способ измерения эффекта снижения концентрации глюкозы в крови для мышей db/db, взятых в качестве моделей диабета. Мышам, являвшимся моделями диабета, в возрасте примерно 6-7 недель, не ограничивая их в еде, один раз в две недели вводили 100 мкг/кг препарата эксендина-4 длительного действия и один раз в день 100 мкг/кг нативного эксендина-4. После введения тестируемых соединений ежедневно отбирали образцы крови и определяли изменения содержания глюкозы в крови. В частности, в случае нативного эксендина-4, концентрацию глюкозы в крови измеряли через 1 час после введения (фиг.14). Конъюгаты производных эксендина-4 сохраняли пониженную концентрацию глюкозы в крови в течение 10 или более дней даже в случае однократного введения, тогда как активность конъюгатов нативного эксендина-4 в отношении снижения уровней глюкозы исчезала через 8 дней.
Промышленная применимость
Конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению обладает активностью in vivo, которая сохраняется на относительно высоком уровне, и существенно увеличенным временем полужизни в крови, и, следовательно, его желательно применять при разработке составов длительного действия на основе различных пептидных лекарственных средств.
Claims (29)
1. Конъюгат инсулинотропного пептида, содержащий инсулинотропный пептид и Fc-фрагмент иммуноглобулина, которые связаны непептидным полимером, где инсулинотропный пептид выбран из группы, состоящей из эксендина-3, эксендина-4 и их производных, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где один из концов молекулы непептидного полимера связан с аминокислотным остатком, отличным от N-концевого остатка инсулинотропного пептида.
2. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором производное выбрано из группы, состоящей из пептидов, обладающих инсулинотропным действием и содержащих на N-конце аминогруппу, которая замещена, удалена или модифицирована по сравнению с нативным инсулинотропным пептидом, а также их фрагментов или вариантов.
3. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором производное выбрано из группы, состоящей из пептидов, в которых удален альфа-атом углерода и аминогруппа на N-конце нативного инсулинотропного пептида, а также их фрагментов и вариантов.
4. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где производное эксендина-4 выбрано из группы, состоящей, в числе других инсулинотропных пептидов, из производного эксендина-4, полученного удалением N-концевой аминогруппы, производного эксендина-4, полученного замещением N-концевой аминогруппы гидроксильной группой, производного эксендина-4, полученного модификацией N-концевой аминогруппы с помощью введения двух метильных групп, производного эксендина-4, полученного удалением альфа-атома углерода гистидина, т.е. первого аминокислотного остатка эксендина-4, производного эксендина-4, полученного заменой 12-го аминокислотного остатка (лизина) на серии, или производного эксендина-4, полученного заменой 12-го аминокислотного остатка (лизина) на аргинин.
5. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором дезаминогистидилэксендин-4, полученный удалением аминогруппы из N-концевого остатка эксендина-4, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
6. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором производное эксендина-4, полученное заменой аминогруппы N-концевого остатка эксендина-4 гидроксильной группой, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
7. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, в котором производное эксендина-4, полученное удалением альфа-атома углерода, к которому присоединена N-концевая аминогруппа гистидина в N-концевой области эксендина-4, и Fc-фрагмент иммуноглобулина связаны с помощью непептидного полимера, где непептидный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразрушаемых полимеров, липидных полимеров, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и где конъюгат инсулинотропного пептида обладает улучшенным эффектом понижения уровней глюкозы в крови и увеличенной продолжительностью действия in vivo по сравнению с конъюгатом, содержащим нативный эксендин-4.
8. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где инсулинотропное пептидное производное представлено следующей Формулой 1:
где заместитель R1 выбран из гистидина, дезаминогистидильной группы, N-диметилгистидильной группы, бета-гидроксиимидазопропильной группы и 4-имидазоацетильной группы;
заместитель R2 выбран из группы, состоящей из -NH2, -ОН и -Lys;
фрагмент X выбран из группы, состоящей из
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Аrg-Leu-Рbе-Ilе-Glu-Тrp-Leu-R4-Аsn-Gly-Gly-Рrо-Ser-Ser-Gly-Аlа-Рrо-Рrо-Pro-Ser,
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly и
Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (где R3 выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg; и R4 выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg);
Y представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированный полиол, поливиниловый спирт, полисахарид, декстран, поливинилэтиловый эфир, биоразрушаемый полимер, липидный полимер, хитин, гиалуроновую кислоту и их комбинации и Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина.
где заместитель R1 выбран из гистидина, дезаминогистидильной группы, N-диметилгистидильной группы, бета-гидроксиимидазопропильной группы и 4-имидазоацетильной группы;
заместитель R2 выбран из группы, состоящей из -NH2, -ОН и -Lys;
фрагмент X выбран из группы, состоящей из
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Аrg-Leu-Рbе-Ilе-Glu-Тrp-Leu-R4-Аsn-Gly-Gly-Рrо-Ser-Ser-Gly-Аlа-Рrо-Рrо-Pro-Ser,
Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly и
Ser-Asp-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-R3-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-R4-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser (где R3 выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg; и R4 выбран из группы, состоящей из Lys, Ser и Arg);
Y представляет собой полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, сополимер этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированный полиол, поливиниловый спирт, полисахарид, декстран, поливинилэтиловый эфир, биоразрушаемый полимер, липидный полимер, хитин, гиалуроновую кислоту и их комбинации и Z представляет собой Fc-фрагмент иммуноглобулина.
9. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где каждый из двух концов молекулы непептидного полимера связан с аминогруппой и тиольной группой Fc-фрагмента иммуноглобулина и инсулинотропного пептида.
10. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина дегликозилирован.
11. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина состоит из 1-4 доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов СН1, СН2, СН3 и СН4.
12. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.11, где Fc-фрагмент иммуноглобулина дополнительно включает шарнирную область.
13. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент, полученный из иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
14. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.13, где каждый из доменов Fc-фрагмента иммуноглобулина представляет собой гибрид доменов различного происхождения, полученных из иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
15. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.13, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой димер или мультимер (комбинацию Fc-фрагмента иммуноглобулина), состоящий из одноцепочного иммуноглобулина одного и того же происхождения.
16. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.13, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент IgG4.
17. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.16, где Fc-фрагмент иммунглобулина представляет собой дегликозилированный Fc-фрагмент человеческого IgG4.
18. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.1, где реакционно-способная группа непептидного полимера выбрана из альдегидной группы, пропиональдегидной группы, бутиральдегидной группы, малеимидной группы и производного сукцинимида.
19. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.18, где производное сукцинимида выбрано из группы, состоящей из сукцинимидилпропионата, сукцинимидилкарбоксиметила, гидроксисукцинимидила или сукцинимидилкарбоната.
20. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.18, где на обоих концах молекулы непептидного полимера имеются реакционно-способные альдегидные группы.
21. Конъюгат инсулинотропного пептида по п.20, где непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
22. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.1, включающий стадии:
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционно-способную группу, выбранную из альдегида, малеимида и производных сукцинимида, с амино или тиольной группой инсулинотропного пептида, выбранного из группы состоящей из эксендина-3, эксендина-4 и их производных;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с аминокислотным остатком, отличным от аминокислотного остатка, находящегося на N-конце; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата с получением конъюгата пептида, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционно-способную группу, выбранную из альдегида, малеимида и производных сукцинимида, с амино или тиольной группой инсулинотропного пептида, выбранного из группы состоящей из эксендина-3, эксендина-4 и их производных;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с аминокислотным остатком, отличным от аминокислотного остатка, находящегося на N-конце; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата с получением конъюгата пептида, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
23. Способ получения конъюгата инсулинотропного пептида по п.1, включающий стадии:
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционно-способную альдегидную группу, с остатком лизина инсулинотропного пептида, выбранного из группы, состоящей из эксендина-3, эксендина-4 и их производных, при рН 7,5 или выше;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с остатком лизина; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата с получением белкового конъюгата, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
(1) ковалентного связывания непептидного полимера, содержащего на обоих концах молекулы реакционно-способную альдегидную группу, с остатком лизина инсулинотропного пептида, выбранного из группы, состоящей из эксендина-3, эксендина-4 и их производных, при рН 7,5 или выше;
(2) выделения из реакционной смеси стадии (1) конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, в котором непептидный полимер ковалентно связан с остатком лизина; и
(3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом молекулы непептидного полимера выделенного конъюгата с получением белкового конъюгата, включающего Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с обоими концами молекулы непептидного полимера.
24. Способ по п.22 или 23, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, у которого удалена аминогруппа на N-конце.
25. Способ по п.22 или 23, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, у которого аминогруппа на N-конце замещена гидроксильной группой.
26. Способ по п.22 или 23, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, у которого удален альфа-углерод первого гистидина и связанная с ним аминогруппа на N-конце.
27. Способ по п.22 или 23, где непептидный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
28. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения диабета, ожирения, острого коронарного синдрома или синдрома поликистоза яичников, включающая конъюгат инсулинотропного пептида по п.1.
29. Способ по п.22 или 23, где инсулинотропный пептид представляет собой производное эксендина-4, у которого аминогруппа на N-конце модифицирована двумя метильными группами.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2007-0001662 | 2007-01-05 | ||
| KR20070001662 | 2007-01-05 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009129953A RU2009129953A (ru) | 2011-02-10 |
| RU2436589C2 true RU2436589C2 (ru) | 2011-12-20 |
Family
ID=39588830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009129953/15A RU2436589C2 (ru) | 2007-01-05 | 2008-01-04 | Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8476230B2 (ru) |
| EP (1) | EP2114438B8 (ru) |
| JP (2) | JP2008169195A (ru) |
| KR (3) | KR101058290B1 (ru) |
| CN (3) | CN101646451B (ru) |
| AR (2) | AR065639A1 (ru) |
| AU (1) | AU2008203574B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0806262A2 (ru) |
| CA (1) | CA2674538C (ru) |
| DK (1) | DK2114438T3 (ru) |
| ES (1) | ES2394121T3 (ru) |
| IL (1) | IL199566A (ru) |
| MX (1) | MX2009007267A (ru) |
| MY (1) | MY164479A (ru) |
| NZ (1) | NZ577812A (ru) |
| PT (1) | PT2114438E (ru) |
| RU (1) | RU2436589C2 (ru) |
| TW (1) | TWI413528B (ru) |
| WO (1) | WO2008082274A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200904337B (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9833516B2 (en) | 2012-07-25 | 2017-12-05 | Hanmi Pharm. Co., Ltd | Liquid formulation of long-acting insulin and insulinotropic peptide |
| RU2712644C2 (ru) * | 2014-12-02 | 2020-01-30 | Резолют, Инк. | Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью |
Families Citing this family (73)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8263084B2 (en) | 2003-11-13 | 2012-09-11 | Hanmi Science Co., Ltd | Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate |
| US8110665B2 (en) * | 2003-11-13 | 2012-02-07 | Hanmi Holdings Co., Ltd. | Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin FC region as a carrier |
| KR101135244B1 (ko) | 2007-11-29 | 2012-04-24 | 한미사이언스 주식회사 | 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물 |
| JP2009019027A (ja) * | 2007-07-16 | 2009-01-29 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | アミノ末端のアミノ酸が変異したインスリン分泌ペプチド誘導体 |
| KR101200659B1 (ko) * | 2008-07-23 | 2012-11-12 | 한미사이언스 주식회사 | 세 말단 반응기를 갖는 비펩타이드성 중합체를 이용한 생리활성 폴리펩타이드 약물 결합체 |
| WO2010118384A2 (en) | 2009-04-10 | 2010-10-14 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Amylin agonist compounds for estrogen-deficient mammals |
| US9194011B2 (en) | 2009-11-17 | 2015-11-24 | Protalix Ltd. | Stabilized alpha-galactosidase and uses thereof |
| WO2011063414A1 (en) | 2009-11-23 | 2011-05-26 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Polypeptide conjugate |
| BR112012022029B1 (pt) * | 2010-03-02 | 2022-10-11 | Protalix Ltd | Estrutura de proteina multimérica, seu uso e processo para preparação da estrutura de proteína multimérica |
| WO2011107494A1 (de) | 2010-03-03 | 2011-09-09 | Sanofi | Neue aromatische glykosidderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung |
| AR081066A1 (es) * | 2010-04-02 | 2012-06-06 | Hanmi Holdings Co Ltd | Conjugado de insulina donde se usa un fragmento de inmunoglobulina |
| US9981017B2 (en) | 2010-04-02 | 2018-05-29 | Hanmi Science Co., Ltd. | Insulin conjugate using an immunoglobulin fragment |
| DE102010015123A1 (de) | 2010-04-16 | 2011-10-20 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Benzylamidische Diphenylazetidinone, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung |
| KR101324828B1 (ko) * | 2010-06-08 | 2013-11-01 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 단쇄 인슐린 아날로그 약물 결합체 |
| EP2582709B1 (de) | 2010-06-18 | 2018-01-24 | Sanofi | Azolopyridin-3-on-derivate als inhibitoren von lipasen und phospholipasen |
| US8530413B2 (en) | 2010-06-21 | 2013-09-10 | Sanofi | Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments |
| TW201215387A (en) | 2010-07-05 | 2012-04-16 | Sanofi Aventis | Spirocyclically substituted 1,3-propane dioxide derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as a medicament |
| TW201215388A (en) | 2010-07-05 | 2012-04-16 | Sanofi Sa | (2-aryloxyacetylamino)phenylpropionic acid derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments |
| TW201221505A (en) | 2010-07-05 | 2012-06-01 | Sanofi Sa | Aryloxyalkylene-substituted hydroxyphenylhexynoic acids, process for preparation thereof and use thereof as a medicament |
| KR101382593B1 (ko) * | 2010-07-21 | 2014-04-10 | 한미사이언스 주식회사 | 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
| EP3028720A1 (en) | 2010-09-28 | 2016-06-08 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Engineered polypeptides having enhanced duration of action |
| EA024507B1 (ru) | 2010-09-28 | 2016-09-30 | Амилин Фармасьютикалс, Ллк | Хорошо растворимые лептины |
| EP2714069A4 (en) * | 2011-05-25 | 2015-06-24 | Amylin Pharmaceuticals Llc | LONG-TERM CONJUGATES WITH TWO HORMONES |
| UA113626C2 (xx) * | 2011-06-02 | 2017-02-27 | Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії | |
| RU2739209C2 (ru) | 2011-06-10 | 2020-12-21 | Ханми Сайенс Ко., Лтд. | Новые производные оксинтомодулина и содержащая их фармацевтическая композиция для лечения ожирения |
| SI2721062T1 (sl) | 2011-06-17 | 2019-03-29 | Hanmi Science Co., Ltd. | Konjugat, obsegajoč oksintomodulinski in imunoglobinski fragment, in uporaba le-tega |
| CN104271588B (zh) | 2011-07-08 | 2017-10-10 | 安米林药品有限责任公司 | 具有增强的作用持续时间和降低的免疫原性的工程改造的多肽 |
| DK2729160T3 (da) | 2011-07-08 | 2019-07-01 | Aegerion Pharmaceuticals Inc | Manipulerede polypeptider, der har forbedret virkningstid og reduceret immunogenicitet |
| EP2567959B1 (en) | 2011-09-12 | 2014-04-16 | Sanofi | 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors |
| WO2013037390A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Sanofi | 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors |
| EP2760862B1 (en) | 2011-09-27 | 2015-10-21 | Sanofi | 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-alkyl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors |
| KR20130049671A (ko) | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
| CN103172745A (zh) * | 2011-12-21 | 2013-06-26 | 北京韩美药品有限公司 | 包含免疫球蛋白Fc片段的长效人内皮抑素 |
| KR102041412B1 (ko) | 2011-12-30 | 2019-11-11 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 Ｆｃ 단편 유도체 |
| KR101895047B1 (ko) * | 2011-12-30 | 2018-09-06 | 한미사이언스 주식회사 | 면역글로불린 단편을 이용한 위치 특이적 글루카곤 유사 펩타이드-2 약물 결합체 |
| AR090281A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hanmi Science Co Ltd | Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo |
| KR101665009B1 (ko) * | 2012-03-09 | 2016-10-11 | 한미사이언스 주식회사 | 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| US10441665B2 (en) | 2012-07-25 | 2019-10-15 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Liquid formulation of long acting insulinotropic peptide conjugate |
| AR094821A1 (es) * | 2012-07-25 | 2015-09-02 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada |
| KR101968344B1 (ko) | 2012-07-25 | 2019-04-12 | 한미약품 주식회사 | 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물 |
| IN2015DN03795A (ru) | 2012-10-24 | 2015-10-02 | Inserm Inst Nat De La Santé Et De La Rech Médicale | |
| KR101993393B1 (ko) | 2012-11-06 | 2019-10-01 | 한미약품 주식회사 | 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물 |
| US9724420B2 (en) | 2012-11-06 | 2017-08-08 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Liquid formulation of protein conjugate comprising an oxyntomodulin derivative covalently linked to a non-peptidyl polymer to an immunoglobulin FC region |
| KR20140088837A (ko) * | 2013-01-03 | 2014-07-11 | 한미약품 주식회사 | Ｎ-말단 전하가 변형된 인슐린 분비 펩티드 유도체 |
| BR112015019985A2 (pt) * | 2013-02-26 | 2017-08-29 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Novo análogo de insulina e sua utilização |
| KR101895634B1 (ko) * | 2013-05-31 | 2018-09-05 | 한미약품 주식회사 | 변이된 힌지 영역을 포함하는 IgG4 Fc 단편 |
| AR096890A1 (es) * | 2013-07-12 | 2016-02-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn |
| AR096891A1 (es) | 2013-07-12 | 2016-02-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo |
| MX369656B (es) | 2014-01-20 | 2019-11-15 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Insulina de accion prolongada y uso de la misma. |
| DK3127923T3 (da) * | 2014-03-31 | 2021-11-22 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Fremgangsmåde til forbedring af oppløselighed af protein og peptid ved hjælp af immunoglobulin-fc-fragment-binding |
| AR100639A1 (es) * | 2014-05-29 | 2016-10-19 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada |
| TWI684458B (zh) | 2014-05-30 | 2020-02-11 | 南韓商韓美藥品股份有限公司 | 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物 |
| KR20150140177A (ko) * | 2014-06-05 | 2015-12-15 | 한미약품 주식회사 | 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법 |
| TWI802396B (zh) | 2014-09-16 | 2023-05-11 | 南韓商韓美藥品股份有限公司 | 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途 |
| AR103322A1 (es) | 2014-12-30 | 2017-05-03 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Derivados de glucagón con estabilidad mejorada |
| KR102418477B1 (ko) | 2014-12-30 | 2022-07-08 | 한미약품 주식회사 | 글루카곤 유도체 |
| WO2016151018A1 (en) | 2015-03-24 | 2016-09-29 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method and pharmaceutical composition for use in the treatment of diabetes |
| CR20180034A (es) | 2015-06-30 | 2018-04-16 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Derivados de glucagón y una composición que comprende un conjugado de acción prolongada del mismo. |
| UY36870A (es) | 2015-08-28 | 2017-03-31 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Análogos de insulina novedosos |
| EP4534107A3 (en) * | 2015-09-24 | 2025-12-10 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Protein complex by use of a specific site of an immunoglobulin fragment for linkage |
| AU2016382394B2 (en) | 2015-12-31 | 2019-07-04 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Long-acting conjugate of triple glucagon/GLP-1/GIP receptor agonist |
| PE20190355A1 (es) | 2016-06-29 | 2019-03-07 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Derivado de glucagon, conjugado del mismo, composicion que comprende el mismo y uso terapeutico del mismo |
| AU2017332408B2 (en) | 2016-09-23 | 2022-02-10 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analogs with reduced affinity to insulin receptor and use thereof |
| JOP20190097A1 (ar) * | 2016-10-27 | 2019-04-28 | Janssen Pharmaceutica Nv | الجلوبولينات المناعية واستخداماتها |
| KR20180064321A (ko) | 2016-12-05 | 2018-06-14 | 한미약품 주식회사 | 면역반응이 약화된 결합체 |
| KR102645064B1 (ko) * | 2017-02-03 | 2024-03-08 | 한미약품 주식회사 | 지속성이 증가된 생리활성 물질의 결합체 및 이의 용도 |
| KR101941975B1 (ko) | 2017-03-17 | 2019-01-25 | 고려대학교 산학협력단 | Atpif1을 함유하는 당뇨 치료용 약학조성물 |
| AU2018239037B2 (en) | 2017-03-23 | 2022-05-26 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof |
| CN119390821A (zh) | 2017-08-15 | 2025-02-07 | 伊兰科美国公司 | 兽药用IgG Fc变体 |
| CA3084326A1 (en) * | 2017-09-28 | 2019-04-04 | Jaehyuk Choi | Long-acting conjugates of glp-2 derivatives |
| CN111406073A (zh) | 2017-09-29 | 2020-07-10 | 韩美药品株式会社 | 具有提高功效的持久性蛋白质缀合物 |
| WO2022266467A2 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Recombinant histone polypeptide and uses thereof |
| KR20230000682A (ko) | 2021-06-25 | 2023-01-03 | 한미약품 주식회사 | 심혈관 질환 또는 신장 기능장애 발생의 위험을 감소시키기 위한 에페글레나타이드 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5512540A (en) * | 1987-04-15 | 1996-04-30 | Semiconductor Energy Laboratory Co., Ltd. | Method of manufacturing superconducting patterns |
| US6815203B1 (en) * | 1999-06-23 | 2004-11-09 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Methods of making pancreatic islet cells |
| RU2005120240A (ru) * | 2003-11-13 | 2006-04-20 | Ханми Фарм. Инд. Ко., Лтд. (Kr) | Белковый комплекс, полученный с использованием фрагмента иммуноглобулина, и способ получения такого комплекса |
| WO2006107124A1 (en) * | 2005-04-08 | 2006-10-12 | Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. | Immunoglobulin fc fragment modified by non-peptide polymer and pharmaceutical composition comprising the same |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5545618A (en) | 1990-01-24 | 1996-08-13 | Buckley; Douglas I. | GLP-1 analogs useful for diabetes treatment |
| US5705483A (en) | 1993-12-09 | 1998-01-06 | Eli Lilly And Company | Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods |
| US5424686A (en) | 1994-04-20 | 1995-06-13 | Philips Electronics North America Corporation | Negative-resistance-compensated microwave buffer |
| US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
| WO1997034631A1 (en) | 1996-03-18 | 1997-09-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobin-like domains with increased half lives |
| US7157555B1 (en) * | 1997-08-08 | 2007-01-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Exendin agonist compounds |
| US6924264B1 (en) | 1999-04-30 | 2005-08-02 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Modified exendins and exendin agonists |
| US6756480B2 (en) | 2000-04-27 | 2004-06-29 | Amgen Inc. | Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein |
| DK1355942T3 (da) | 2000-12-07 | 2008-11-17 | Lilly Co Eli | GLP-1-fusionsproteiner |
| AU2002233340B2 (en) | 2001-02-19 | 2008-05-22 | Merck Patent Gmbh | Artificial fusion proteins with reduced immunogenicity |
| US7790681B2 (en) * | 2002-12-17 | 2010-09-07 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of cardiac arrhythmias with GLP-1 receptor ligands |
| BRPI0407936A (pt) | 2003-03-19 | 2006-02-21 | Lilly Co Eli | composto de glp-1 peguilado, método de estimular o receptor de glp-1 em um indivìduo, e, uso de composto glp-1 peguilado |
| CA2528591C (en) | 2003-06-12 | 2013-01-08 | Eli Lilly And Company | Glp-1 analog fusion proteins |
| DE10352479A1 (de) * | 2003-11-07 | 2005-06-09 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von Polymerisatpulvern aus wässrigen Polymerisatdispersionen |
| JP2006514649A (ja) * | 2003-12-17 | 2006-05-11 | アミリン・ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド | 腎症の治療および予防のための組成物 |
| CN101665538A (zh) | 2003-12-18 | 2010-03-10 | 诺沃挪第克公司 | 与白蛋白样物质相连的新glp-1类似物 |
| MX2007000728A (es) * | 2004-07-21 | 2007-03-15 | Ambrx Inc | Polipeptidos biosinteticos que utilizan amino acidos no naturalmente codificados. |
| EA011166B1 (ru) * | 2004-12-22 | 2009-02-27 | Эли Лилли Энд Компани | Композиции слитых белков-аналогов glp-1 |
| WO2006076471A2 (en) | 2005-01-12 | 2006-07-20 | Nobex Corporation | Bnp conjugates and methods of use |
| EA012442B1 (ru) | 2005-05-13 | 2009-10-30 | Эли Лилли Энд Компани | Пегилированные соединения glp-1 |
-
2007
- 2007-08-31 JP JP2007226155A patent/JP2008169195A/ja active Pending
-
2008
- 2008-01-04 NZ NZ577812A patent/NZ577812A/en active IP Right Revival
- 2008-01-04 CA CA2674538A patent/CA2674538C/en active Active
- 2008-01-04 AU AU2008203574A patent/AU2008203574B2/en active Active
- 2008-01-04 CN CN200880001766.4A patent/CN101646451B/zh active Active
- 2008-01-04 JP JP2009544800A patent/JP5399265B2/ja active Active
- 2008-01-04 DK DK08704601.7T patent/DK2114438T3/da active
- 2008-01-04 CN CN201310309288.6A patent/CN103435699B/zh active Active
- 2008-01-04 EP EP08704601A patent/EP2114438B8/en active Active
- 2008-01-04 RU RU2009129953/15A patent/RU2436589C2/ru active
- 2008-01-04 ES ES08704601T patent/ES2394121T3/es active Active
- 2008-01-04 WO PCT/KR2008/000061 patent/WO2008082274A1/en not_active Ceased
- 2008-01-04 PT PT08704601T patent/PT2114438E/pt unknown
- 2008-01-04 CN CN201310309673.0A patent/CN103435700B/zh active Active
- 2008-01-04 US US12/523,050 patent/US8476230B2/en active Active
- 2008-01-04 KR KR1020080001479A patent/KR101058290B1/ko active Active
- 2008-01-04 BR BRPI0806262-5A patent/BRPI0806262A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2008-01-04 MY MYPI20092818A patent/MY164479A/en unknown
- 2008-01-04 MX MX2009007267A patent/MX2009007267A/es active IP Right Grant
- 2008-03-05 TW TW097107631A patent/TWI413528B/zh active
- 2008-03-07 AR ARP080100947A patent/AR065639A1/es active IP Right Grant
-
2009
- 2009-06-22 ZA ZA200904337A patent/ZA200904337B/xx unknown
- 2009-06-25 IL IL199566A patent/IL199566A/en active IP Right Grant
-
2010
- 2010-05-19 KR KR1020100047019A patent/KR101058315B1/ko active Active
-
2011
- 2011-06-30 KR KR1020110065014A patent/KR20110092253A/ko not_active Ceased
-
2018
- 2018-01-26 AR ARP180100182A patent/AR110853A2/es not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5512540A (en) * | 1987-04-15 | 1996-04-30 | Semiconductor Energy Laboratory Co., Ltd. | Method of manufacturing superconducting patterns |
| US6815203B1 (en) * | 1999-06-23 | 2004-11-09 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Methods of making pancreatic islet cells |
| RU2005120240A (ru) * | 2003-11-13 | 2006-04-20 | Ханми Фарм. Инд. Ко., Лтд. (Kr) | Белковый комплекс, полученный с использованием фрагмента иммуноглобулина, и способ получения такого комплекса |
| WO2006107124A1 (en) * | 2005-04-08 | 2006-10-12 | Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. | Immunoglobulin fc fragment modified by non-peptide polymer and pharmaceutical composition comprising the same |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PARKES D G et al. Inculinotropic actions of exendin-4 and glucagons-like peptid-1 in vivo and vitro. Metabolism. 2001. May; 50(5); 583-9. PMID:11319721. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9833516B2 (en) | 2012-07-25 | 2017-12-05 | Hanmi Pharm. Co., Ltd | Liquid formulation of long-acting insulin and insulinotropic peptide |
| RU2643766C2 (ru) * | 2012-07-25 | 2018-02-05 | Ханми Фарм. Ко., Лтд. | Жидкая композиция длительно действующих инсулина и инсулинотропного пептида |
| RU2712644C2 (ru) * | 2014-12-02 | 2020-01-30 | Резолют, Инк. | Белки и белковые конъюгаты с повышенной гидрофобностью |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2436589C2 (ru) | Инсулинотропный комплекс, в котором использован фрагмент иммуноглобулина | |
| KR101424550B1 (ko) | 지속형 인슐린 결합체 및 지속형 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 당뇨병 치료용 조성물 | |
| US20080124347A1 (en) | Insulinotropic peptide conjugate using carrier substance | |
| JP6076902B2 (ja) | 新規な持続型グルカゴン結合体およびこれを含む肥満の予防および治療用薬学的組成物 | |
| EP2227243B1 (en) | A pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate | |
| TWI520746B (zh) | 使用免疫球蛋白片段之胰島素接合物 | |
| US20090238838A1 (en) | Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc | |
| KR101665009B1 (ko) | 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| RU2624129C2 (ru) | Способ получения комплекса физиологически активного полипептида | |
| KR20140058104A (ko) | 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물 | |
| KR101767570B1 (ko) | 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체 | |
| KR20170100908A (ko) | 지속형 fgf21 수용체 아고니스트 결합체 및 지속형 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 대사증후군 치료용 조성물 | |
| HK1136504B (en) | An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20121106 |