RU2436101C1 - Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса - Google Patents
Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса Download PDFInfo
- Publication number
- RU2436101C1 RU2436101C1 RU2010126241/15A RU2010126241A RU2436101C1 RU 2436101 C1 RU2436101 C1 RU 2436101C1 RU 2010126241/15 A RU2010126241/15 A RU 2010126241/15A RU 2010126241 A RU2010126241 A RU 2010126241A RU 2436101 C1 RU2436101 C1 RU 2436101C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- units
- activity
- superoxide dismutase
- catalase
- chemiluminescence
- Prior art date
Links
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 title 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 claims abstract description 127
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 113
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims abstract description 63
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 230000002225 anti-radical effect Effects 0.000 claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 230000007123 defense Effects 0.000 claims description 29
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims description 16
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 208000033764 Acatalasemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000003486 acatalasia Diseases 0.000 claims description 3
- 229940028383 catalase / superoxide dismutase Drugs 0.000 claims description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004224 protection Effects 0.000 abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000012937 correction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 31
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 29
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 27
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 20
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 17
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 16
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 10
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 9
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003244 pro-oxidative effect Effects 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 5
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 108030002440 Catalase peroxidases Proteins 0.000 description 2
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 208000012313 wound discharge Diseases 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N Amitrole Chemical compound NC1=NC=NN1 KLSJWNVTNUYHDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 206010007882 Cellulitis Diseases 0.000 description 1
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027439 Metal poisoning Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 208000014151 Stomatognathic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006851 antioxidant defense Effects 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000000386 donor Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000006056 electrooxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 description 1
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000008127 lead poisoning Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 150000001451 organic peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 108010070915 orgotein Proteins 0.000 description 1
- 229960004534 orgotein Drugs 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 238000010525 oxidative degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010048628 rheumatoid vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000954 sacrococcygeal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N tetracopper;tetrazinc Chemical compound [Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2] TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты. Сущность изобретения: в комплексе определяют активность супероксиддисмутазы (СОДi) и каталазы (KATi) в гемолизате, оценивают изменение этих показателей относительно нормы, которая соответствует значениям СОДk=0,16±0,02 и KATk=115,55±9,41. При значении соотношения этих показателей, равном 1,000±0,002, определяют отсутствие дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты, а при других значениях дополнительно определяют степень выраженности окислительного стресса по максимуму и площади вспышки хемилюминесценции. Далее оценивают дисбаланс функционирования ферментов антирадикальной защиты, вычисляя показатель ИПФФАРЗi, по формуле. При значении ИПФФАРЗi ниже 70,0 ед. определяют недостаточность каталазы, а при значении ИПФФАРЗi выше 130,0 ед. определяют недостаточность супероксиддисмутазы. Использование способа дает возможность оценить функционирование исследуемых ферментов, что позволяет проводить диагностику заболеваний, сопровождающихся окислительным стрессом, а также способ позволяет определять индивидуальный подход к медикаментозной коррекции. 4 табл., 4 ил.
Description
Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике заболеваний, сопровождающихся окислительным стрессом при дисбалансе функционирования ферментов антирадикальной защиты.
Нарушение функционирования ферментов антирадикальной защиты (ФАРЗ) является одним из значимых показателей диагностики окислительного стресса и контроля за лечением антиоксидантными средствами при многих заболеваниях - сахарный диабет, астма, стенокардия, инфаркт миокарда, катаракта, злокачественные новообразования, ревматоидный артрит и другие [Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита. // Соросовский образовательный журнал. - 1999. - №1. - С.2-8]. При этом нередко ключевым механизмом, способствующим формированию окислительного стресса, является развитие дисбаланса в работе ферментов первой и второй линий антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы и каталазы [Дубинина Е.Е., Ефимова Л.Ф., Софронова Л.Н., Геронимус А.Л. Сравнительный анализ активности супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов и цельной крови у новорожденных детей при хронической гипоксии. // Лаб. дело. - 1988. - №8. - С.16; Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах. // Соросовский образовательный журнал. - 2000. - №12. - С.13-19; Gurer Orhan H., Sabir H.U., Ozgunes H. Correlation between clinical indicators of lead poisoning and oxidative stress parameters in controls and lead-exposed workers // Toxicology. - 2004, - Vol.195, N2-3. - P.147-154].
Своевременная диагностика и коррекция нарушений в работе ферментного звена антиоксидантной системы требует четко сформулированных критериев, разграничивающих адаптивную напряженность ФАРЗ, их регуляторные разнонаправленные изменения [Байляк М., Господарев Д., Семчишин Г., Лущак В. - Ингибирование каталазы аминотриазолом in vivio приводит к снижению активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в клетках Saccharomyces cerevisiae. - Биохимия. - 2008. - Том 73, вып.4. - С.515-523] и наличие дисбаланса в работе этих ферментов, приводящее к формированию окислительного стресса.
Известен способ выявления дисбаланса ферментов антиоксидантной защиты - «Показатель отношения Глутатионпероксидазы / Супероксиддисмутазы» [Сукоян Г.В., Андриадзе Н.А., Варазанашвили Н.А., Чикобава Е.А., Отаришвили И.О., Головач И.В., Митьковская Н.П., Карсанов Н.В. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2001. - №2. - С.34-40], основанный на определении активности глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы как показателей ферментного звена антиоксидантной системы, с последующим вычислением отношения активности глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы.
Ход определения: активность СОД определяют на основе метода В.Г.Мхитарян, Г.Е.Бадалян [Мхитарян В.Г., Бадалян Г.Е. Влияние пероксидированных и непероксидированных ненасыщенных жирных кислот на активность супероксиддисмутазы. Журнал экспериментальной и клинической медицины. - 1978. - №6. - С.7-11]; активность глутатионпероксидазы - по методу Е. Beutler [Beutler E. Red Cell Metabolism. A Manual of Biochemical Methods. - New York, 1973. - P.74], методом Oshino и соавт. [Oshino N, Chance B, Sies H, Bücher T. The role of H2O2 generation in perfused rat liver and the reaction of catalase compound I and hydrogen donors. Biochem 1973; 154: 117-131].
Показатель отношения ГП/СОД рассчитывают по формуле 1:
ГП/СОД = активность ГП/активность СОД (формула 1),
где ГП/СОД - отношение активности глутатионпероксидазы и активности супероксиддисмутазы.
Результаты оценивают следующим образом: среднестатистическая величина ГП/СОД, полученная в контрольной группе, будет равна 13,5; состояние, при котором значения антиоксидантного индекса (АОИ) выше 13,5, рассматривают как дисбаланс работы ферментов, чувствительный тест ишемии и реперфузии.
Недостатки:
а) использование в способе «Показатель отношения Глутатионпероксидазы/Супероксиддисмутазы» результатов исследования активности ферментов без учета содержания субстратов, катализируемых ими реакций или содержания продуктов этих реакций приводит к снижению его достоверности и затрудняет трактовку данного показателя, что связано с широкой вариабельностью изменения активности этих ферментов как в сторону повышения, так и в сторону понижения, даже в условиях одной патологии, например в случаях активации ферментов при недостатке субстрата или обратном ингибировании ферментов продуктами катализируемых ими реакций;
б) использование в качестве одной из составляющих в «Показателе отношения Глутатионпероксидазы/Супероксиддисмутазы» активности митохондриальной глутатионпероксидазы уменьшает возможность широкого его использования в клинике, особенно при поражении тканей с исходно невысокой активностью глутатионпероксидазы, что может затруднять трактовку полученных результатов;
в) трудоемким представляется забор биоматериала, необходимого для исследования активности глутатионпероксидазы непосредственно в тканях, поскольку наибольшая ее активность выявлена в миокарде, мозговой ткани, легких, мышцах, глазах [Давыденкова Е.Ф., Шафран М.Г. Атеросклероз и процесс перекисного окисления липидов. // Вест. АМН СССР. - 1989. - №3. - С.10-18], в свою очередь забор в качестве образцов для лабораторных исследований эритроцитов крови может приводить к снижению достоверности получаемых результатов.
За ближайший аналог принят интегральный коэффициент, характеризующий свободнорадикальное окисление (СРО) и антиоксидантную защиту (АОЗ) слюны [Петрович Ю.А., Лемецкая Т.И., Пузин М.Н., Сухова Т.В. Интегральный коэффициент, характеризующий свободнорадикальное окисление и антиоксидантную защиту, и новый «остаточный» коэффициент, отражающий результативность применения антиоксидантов при пародонтите. // Стоматология, 2001, №1, с.38-41], позволяющий выявлять дисбаланс факторов свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты слюны, основанный на определении активности ферментов 1-й и 2-й линии антирадикальной защиты и интенсивности свободнорадикального окисления. Для его осуществления проводят определение уровня малонового диальдегида здоровых и больных (МДАз и МДАб), максимальной амплитуды хемилюминесценции здоровых и больных (МХЛз и МХЛб), периода, в течение которого интенсивность хемилюминесценци достигает полуамплитуды максимальной вспышки у здоровых и больных (ППХЛз и ППХЛб), активности глутатионпероксидазы здоровых и больных (ГПОз и ГПОб), активности супероксиддисмутазы, с последующим делением прооксидантных показателей на антиоксидантные.
Объектом исследования служила смешанная слюна здоровых и больных людей. Пробы слюны центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин. Исследовали супернатант. О показателях СРО судят по максимальной амплитуде хемилюминесценции (МХЛ), которую регистрируют фотоэлектронным умножителем после введения раствора сульфата железа, также по периоду, в течение которого интенсивность хемилюминесценции достигает полуамплитуды максимальной вспышки (ППХЛ), и по уровню МДА, который определяют с помощью стандартной методики [Гаврилов В.Б., Гаврилова A.Р., Мажуль Л.М. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления сыворотки крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой. Вопр. мед. химии. 1987. - Т.33, №1. - С.118-122]. Антиоксидантный потенциал оценивают по активности глутатионпероксидазы (ГПО) по методам [Терехина Н.А., Петрович Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная система (теория, клиническое применение, методы). Пермь, 1992, 34 с., Ravin НА. An improved colorimetric enzymatic assay of ceruloplas-min. J Lab Clin Med 1961; S8:1:161-168] и активность супероксиддисмутазы (СОД) по [Терехина Н.А., Петрович Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная система (теория, клиническое применение, методы). Пермь, 1992; 34], определение которых основано на изменении экстинкции опытного раствора в спектрофотометре.
Расчет проводят по формуле 2:
Чем ниже было значение антиоксидантного коэффициента (АОК) по сравнению с показателями донорской группы, принятой за 100%, тем более выраженным считают дисбаланс (окислительный стресс) в системе анти- /прооксиданты организма.
Недостатки:
а) из прооксидантных показателей учитывают только узкоспецифичный конечный продукт пероксидации липидов - МДА, что приводит к снижению достоверности данного метода;
б) отсутствует учет промежуточных продуктов окислительной модификации биологических молекул как липидной (диеновый конъюгат и т.п.), так и другой природы (белковой, нуклеотидной, углеводной), что снижает чувствительность данного метода и приводит к неверному отражению уровня имеющегося окислительного стресса, а следовательно, неадекватному назначению терапии, направленной на его устранение;
в) при расчете данного коэффициента не учитывают возможность разнонаправленного изменения активности ферментов антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы (1-я линия антирадикальной защиты) и глутатионпероксидазы (3-я линия антирадикальной защиты), поскольку произведение этих ферментов в делителе будет оставаться примерно одной и той же величиной в случаях одновременного снижения активности одного из них при параллельном повышении активности другого, что приведет к неправильной оценке вклада дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты в развитие окислительного стресса, например при повышении активности супероксиддисмутазы в два раза и одновременном снижении активности глутатионпероксидазы в два раза произведение делителя составит как в норме единицу:
(МДАб:МДАз)·(МХЛб:МХЛз)·(ППХЛб:ППХЛз)/(1·1=1)
((МДАб:МДАз)·(МХЛб:МХЛз)·(ППХЛб:ППХЛз)/(2·0,5=1)), хотя имеющийся дисбаланс в работе этих ферментов может приводить к накоплению пероксида водорода - продукта реакции дисмутации супероксидного анион-радикала, катализируемого супероксиддисмутазой, а в дальнейшем к образованию и других активных форм кислорода, в том числе при взаимодействии пероксида водорода с металлами переменной валентности (железо и другие) к увеличению содержания в тканях гидроксильного радикала - наиболее токсичного для клеточных структур;
г) исследования проводят в слюне, что не всегда объективно отражает функционирование эндогенных систем в крови и тканях, поскольку большое влияние оказывают условия забора слюны для биохимических исследований (без стимуляции, при стимуляции химическими веществами, сплевыванием в пробирку или с помощью специальных капсул, например Лешли-Красногорского), что может изменять качественный и количественный состав слюны и ротовой жидкости, кроме того, большое влияние могут оказывать стоматологические заболевания на характер получаемой слюны, искажая истинную картину состояния внутренней антиоксидантной системы организма.
Задача - создание комплексного, достоверного и однозначно трактуемого способа интегральной оценки функционирования ферментов антирадикальной защиты в условиях окислительного стресса с помощью показателя, основанного на использовании минимального количества дополнительных специальных лабораторных методов диагностики, позволяющего определять выраженность дисбаланса ферментов антирадикальной защиты в условиях окислительного стресса, своевременно назначать рациональную антиоксидантную терапию в должном объеме и контролировать ее эффективность в процессе лечения; с последующей проверкой в практической медицине вышеизложенных предложений при диагностике и лечении окислительного стресса.
Сущностью изобретения является то, что в комплексе определяют активность супероксиддисмутазы (СОДi) и каталазы (КATi) в гемолизате, далее оценивают изменение этих показателей относительно нормы, которая соответствует значениям СОДk=0,16±0,02 и КATk=115,55±9,41, и при значении соотношения этих показателей, равном 1,000±0,002, определяют отсутствие дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты, а при других значениях этого соотношения дополнительно определяют степень выраженности окислительного стресса по максимуму и площади вспышки хемилюминесценции и оценивают дисбаланс функционирования ферментов антирадикальной защиты по формуле 3:
ИПФФАРЗi - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты обследуемого, в единицах соотношения каталаза/супероксиддисмутаза, ед. соотн. КАТ/СОД,
100 - расчетный коэффициент,
КATi - активность каталазы гемолизата обследуемого, в единицах активности, ед. акт.,
КATk - активность каталазы гемолизата контрольной группы, в единицах активности, ед. акт.,
СОДi - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого, в единицах активности, ед. акт.,
COДk - активность супероксиддисмутазы гемолизата контрольной группы, в единицах активности, ед. акт.,
ПХЛi - площадь хемилюминесценции обследуемого, в единицах площади, ед. пл.,
ПХЛk - площадь хемилюминесценции контрольной группы, в единицах площади, ед. пл.,
MBXЛi - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого, в условных единицах, усл. ед.,
MBXЛk - максимум вспышки хемилюминесценции контрольной группы, в условных единицах, усл. ед.,
при значении ИПФФАРЗi ниже 70,0 ед. соотношения КАТ/СОД определяют недостаточность каталазы, а при значении ИПФФАРЗi выше 130,0 ед. соотношения КАТ/СОД определяют недостаточность супероксиддисмутазы.
Техническим результатом изобретения является:
1) интегральная оценка функционирования ключевых ферментов антирадикальной защиты - каталазы и супероксиддисмутазы, с одновременным определением их роли в развитии и формировании окислительного стресса в организме обследуемого;
2) использование в качестве критерия выраженности явлений окислительного стресса как максимума вспышки хемилюминесценции, позволяющего определить количество прооксидантных факторов в организме (металлы переменной степени окисления, органические пероксиды и гидропероксиды), так и площади хемилюминесценции, позволяющей определить снижение пролонгированной устойчивости антиоксидантной системы к свободнорадикальным процессам;
3) для определения данного интегрального показателя используют доступный биоматериал - эритроциты крови, в которых в достаточном количестве содержится как супероксиддисмутаза, так и каталаза [Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман Н. Основы биохимии. // Пер. с англ. - М.: Мир, 1981. - Т.1-3. - 1878 с.; Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы. // Лаб. дело. - 1988. - №1. - С.16], что повышает универсальность определения и использования данного показателя для клинических исследований при различных заболеваниях;
4) применяют приоритетный подход в дифференцированной оценке вклада каждой из составляющих уравнения в получаемый результат при расчете интегрального показателя функционирования ферментов антирадикальной защиты и их роли в развитии окислительного стресса путем возведения отношения каталаза/супероксиддисмутаза в степень показателя произведения максимума и площади хемилюминесценции, позволяющих определить интенсивности образования супероксидного анион-радикала и пероксида водорода - субстратов для супероксиддисмутазы и каталазы соответственно, с учетом контрольных значений, что позволяет как повысить чувствительность способа, то есть увеличить процент истинно положительных результатов у лиц, страдающих заболеваниями с явлениями окислительного стресса, вызываемого дисбалансом работы ферментов антирадикальной защиты (когда ПХЛi/ПХЛk·MBXЛi/MBXЛk существенно отличается от показателя 1,0), так и повысить специфичность, то есть уменьшить частоту ложноположительных результатов у обследуемых с произведением максимума и площади хемилюминесценции, близкой к контрольным значениям (когда ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk стремится к показателю 1,0), таким образом достигается максимально возможная диагностическая эффективность для данного способа определения дисбаланса в системе ферментов антирадикальной защиты (табл.1, табл.2, фиг.1, фиг.2).
На фиг.1 с помощью графиков показано моделирование диапазона значений ИПФФАРЗ в условиях пропорционального снижения активности каталазы и повышения активности супероксиддисмутазы при различных уровнях хемилюминесценции (данные приведены в таблице 1, где ИПФФАРЗ - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты, ед. соотношения КАТ/СОД, КАТ - каталаза, определяемая как КАТ = КATi/КATk, где КATi - активность каталазы гемолизата обследуемого, ед. акт., КATk - активность каталазы гемолизата контрольной группы, ед.акт., СОД - супероксиддисмутаза, определяемая как СОД=СОДi/СОДk, где СОДi - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого, ед. акт., СОДk - активность супероксиддисмутазы гемолизата контрольной группы, ед. акт., ХЛ - хемилюминесценция, определяемая как ХЛ=ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk, где ПХЛi - площадь хемилюминесценции обследуемого, ед. пл., ПХЛk - площадь хемилюминесценции контрольной группы, ед. пл., МВХЛi - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого, усл. ед., МВХЛk - максимум вспышки хемилюминесценции контрольной группы, усл. ед.).
На фиг.2 с помощью графиков показано моделирование диапазона значений ИПФФАРЗ в условиях снижения активности супероксиддисмутазы при различных уровнях хемилюминесценции (данные приведены в таблице 2, где ИПФФАРЗ - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты, ед. соотношения КАТ/СОД, КАТ - каталаза, определяемая как КАТ=KATi/КATk, где КАТi - активность каталазы гемолизата обследуемого, ед. акт., КATk - активность каталазы гемолизата контрольной группы, ед.акт., СОД - супероксиддисмутаза, определяемая как СОД=СОДi/СОДk, где СОДi - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого, ед. акт., СОДk - активность супероксиддисмутазы гемолизата контрольной группы, ед. акт., ХЛ - хемилюминесценция, определяемая как ХЛ=ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk, где ПХЛi - площадь хемилюминесценции обследуемого, ед. пл., ПХЛk - площадь хемилюминесценции контрольной группы, ед. пл., МВХЛi - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого, усл. ед., MBXЛk - максимум вспышки хемилюминесценции контрольной группы, усл. ед.).
5) Особенностью ферментов антирадикальной защиты и белков, непосредственно взаимодействующих с активными формами кислорода, является их сравнительно повышенная устойчивость к окислительной деструкции [Gutteridge J.M.C., Wilkins S. Copper salt-dependent hydroxyl radical formation. Damage to proteins acting as antioxidants // Biochim. Biophys. Acta. - 1983. - V.758. - P.38-41, Halliwell В., Aruoma O.I., Wasil M., Gutteridge J.M.C. The resistents of transferrin and ceruloplasmin to oxidative damage // Biochem. J. - 1988. - V.256. - P.311-312, Sharonov B.P., Govorova N.Yu., Lyzlova S.N. Serum protein degradation by hypochlorite // Biochem. Internat. - 1989. - V.19, №1. - P.27-35, Salo D.C., Pacifici R.E., Lin S.W., Giulivi C., Davies K.J.A. Superoxide dismutase undergoes proteolysis and fragmentation following oxidative modification and inactivation // J. Biol. Chem. - 1990. - V.265, №20. - P.11919-11927]. Но и они оказались ранжированы как в отношении действия конкретного оксиданта, так и по чувствительности к различным концентрациям активных форм кислорода. Например, при изучении влияния некоторых оксидантов на супероксиддисмутазу, каталазу и глутатионпероксидазу наиболее устойчивым оказался первый фермент, а наименее - последний [Aruoma O.I., Halliwell В. Action of hypochlorous acid on the antioxidant protective enzymes superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase // Biochem. J. - 1987. - V.248, №.3. - P.973-976]. В связи с чем представляется важным для объективной оценки дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты в условиях окислительного стресса параллельно с определением активности этих ферментов измерять уровень интенсивности свободнорадикального окисления, в том числе с помощью хемилюминесцентных методов.
Способ осуществляют следующим образом.
Для диагностики дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты организма человека используют интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты (ИПФФАРЗ). Объектом исследования служит кровь обследуемых, стабилизированная антикоагулянтами, в которой определяют активность каталазы и супероксиддисмутазы, а также активность свободнорадикальных процессов хемилюминометрическим методом.
Активность каталазы определяют в гемолизате эритроцитов по методу [Beers R., Sizer I. A Spectrophotometric Method for Measuring the Breakdown of Hydrogen Peroxide by Catalase // J. Biol. Chem. - 1952. - №195. - P. 133] в модификации [Павлюченко И.И., Луговая И.А., Федосов С.Р., Басов А.А., Быков М.И. Активность ферментов антирадикальной защиты в эритроцитах и в раневом отделяемом у больных с осложненным течением сахарного диабета // XIV международная конференция «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Ялта - Гурзуф, 2006. - С.281-287]. Определение активности каталазы основано на определении скорости утилизации перекиси водорода в реакционной смеси, в которую вносится биологический материал, содержащий фермент. Об интенсивности утилизации перекиси водорода судили по скорости снижения экстинкции при длине волны 260 нм, на которой перекись водорода имеет максимум светопоглощения. Приготовление гемолизата производилось путем внесения в пробирку с 10 мл дистиллированной Н2О 50 мкл отмытых эритроцитов. Параллельно ставилась контрольная (без биологического материала) и опытная (в присутствии исследуемого биологического материала) пробы. В пробирки с опытной и контрольной пробой вносили 0,5 мл 3% H2O2 + 2 мл 0,1 М калий-фосфатного буфера (рН 7,4). Затем в пробирки с контрольной пробой добавляли 0,3 мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты (для инактивации каталазы перед внесением в контроль раствора пероксида водорода). Подогревали опыт и контроль в течение 10 минут при температуре 37°С. Вносили 200 мкл гемолизата эритроцитов параллельно в опыт и контроль и инкубировали в течение 180 секунд при температуре 37°С в сухом термостате. После окончания инкубации в пробирки с опытной пробой добавляли 0,3 мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты и пробирки центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. Супернатант фотометрировали против 5% раствора трихлоруксусной кислоты при длине волны 260 нм. Полученная экстинкция соответствует содержанию перекиси водорода в супернатанте. Разность в оптической плотности контрольной и опытной проб использовалась для расчета активности каталазы. Расчет активности каталазы производили по разнице экстинкций в опытной и контрольной пробах согласно закону Бугера-Ламберта-Бэра с учетом молярного коэффициента светопоглощения перекиси водорода при длине волны 260 нм ε = 22 М-1 · см-1 по формуле 4:
где А - активность каталазы, ммоль / (мин·л);
ΔЕ - разность экстинкций контрольных и опытных проб;
Vp.c. - объем реакционной смеси (3 мл);
Vпр - объем пробы, использованной для определения активности КАТ (0,2 мл);
l - длина оптического пути (1 см);
ε - молярный коэффициент светопоглощения H2O2;
t - время инкубации (3 мин);
х - степень разведения эритроцитарной взвеси в гемолизате.
Полученные результаты активности каталазы делили на количество эритроцитов в использованной взвеси и выражали в условных единицах активности (ед. акт.).
Для определения активности супероксиддисмутазы используют методику [Костюк В.А., Потапович А.И., Ковалева Ж.В. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина // Вопросы медицинской химии. - 1990. - №2. - С.88-91] в модификации [Павлюченко И.И., Луговая И.А., Федосов С.Р., Басов А.А., Быков М.И. Активность ферментов антирадикальной защиты в эритроцитах и в раневом отделяемом у больных с осложненным течением сахарного диабета // XIV международная конференция «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Ялта - Гурзуф, 2006. - С.281-287]. Метод основан на способности супероксиддисмутазы ингибировать реакцию аутоокисления кверцетина в связи с тем, что одним из промежуточных продуктов этой реакции является супероксидный анион-радикал. Выполнение методики заключается в определении разницы экстинкций растворов опытной пробы (с биосубстратом) и контрольной пробы (без биосубстрата). Аутоокисление кверцетина (1,4 мкМ) проводили в течение 15 минут при комнатной температуре в 0,015 М фосфатном буфере рН 7,8, содержащем 0,08 мМ этилендиаминтетраацетата и 0,8 мМ тетраметилэтилендиамина в конечном объеме 3,5 мл. Реакцию начинали внесением в среду инкубации кверцетина в 0,1 мл диметилсульфоксида. Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре при 406 нм. Степень ингибирования аутоокисления кверцетина определяли по разнице в оптической плотности опытной и контрольной пробы. Результаты активности супероксиддисмутазы выражают в единицах активности (ед. акт.), соответствующих степени ингибирования реакции за единицу времени, которую находят по формуле (формула 5):
СОД - активность супероксиддисмутазы гемолизата, в единицах активности, ед. акт.,
Е0кон - экстинкция контрольной пробы перед инициацией аутоокисления кверцетина, в единицах оптической плотности, е.о.п.,
Е15кон - экстинкция контрольной пробы через 15 минут после инициации аутоокисления кверцетина, в единицах оптической плотности, е.о.п.,
Е0оп - экстинкция опытной пробы перед инициацией аутоокисления кверцетина, в единицах оптической плотности, е.о.п.,
Е15оп - экстинкция опытной пробы через 15 минут после инициации аутоокисления кверцетина, в единицах оптической плотности, е.о.п.
Люминол-зависимая H2O2-индуцированная хемилюминесценция плазмы крови и экссудата раны измерялась на хемилюминотестере ЛТ-1 производства НПО «Люмин» (Ростов-на-Дону) по авторской методике [Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. «Система лабораторной диагностики окислительного стресса». Патент на полезную модель №54787 по заявке №2006101586 от 19.01.2006]. В кювету вносили 2,9 мл 50 мкМ раствора люминола в 0,1 М трис-HCl буфере (рН 6,8). Биологический субстрат (плазма крови или раневой экссудат) осаждали 28% трихлоруксусной кислотой в соотношении 1:10 и центрифугированием на 3000 об/с в течение 10 минут. Затем добавляли 100 мкл полученного супернатанта в кювету. Термостатировали кювету с реакционной системой 500 секунд в сухом термостате (t=37°С). После этого кювета помещалась в люминотестер ЛТ-1 и реакция радикального окисления люминола запускалась впрыскиванием с помощью шприца-дозатора через инжектор 0,5 мл 3% Н2О2. Интенсивность вспышки хемилюминесценции регистрировалась в условных единицах (у.е.) хемилюминесценции в виде двух параметров: максимум вспышки хемилюминесценции и площадь хемилюминесценции. Изучение динамики процесса хемилюминесценции [Федосов С.Р., Павлюченко И.И., Басов А.А. Способ повышения информативности прибора «Хемилюминотестер LT-1» // Современные проблемы науки и образования. - 2006. - №4 (прил. №1). - С.27-28] производилось с помощью собственного аппаратно-программного комплекса [Пат. 2236008 Российская Федерация. МПК А61К 33/00. Способ лабораторной диагностики окислительного стресса организма человека / Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р.; заявитель и патентообладатель Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. - №2006101586/22; заявл. 19.01.2006; опубл. 27.07.2006 // Бюл. - 2006. - №21. - 2 с.] с программным обеспечением [Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ 2006611562. Программа для регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-1 / Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Басов А.А.; заявитель и правообладатель Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Басов А.А. - №2006610783; заявл. 16.03.2006; зарег. 10.05.2006], позволяющим оцифровывать аналоговый сигнал с выхода хемилюминотестера ЛТ-1. Определялись следующие показатели хемилюминесценции: максимум вспышки хемилюминесценции в сравнении с эталоном (рабочий раствор люминола) и площадь хемилюминесценции за 25 секунд в сравнении с эталоном (рабочий раствор люминола). В обоих случаях эталоном служила реакционная смесь без биологического образца. Интенсивность реакций свободнорадикального окисления, определяемая с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции по максимуму и площади хемилюминесценции, указывает на наличие окислительного стресса и отражает его уровень.
Полученные результаты трактуют следующим образом.
Чем ниже значения в 100 единиц (соотношение КАТ/СОД) положительный результат ИПФФАРЗ, тем большую роль в развитии окислительного стресса организма играет недостаточность каталазы (второй линии ФАРЗ), чем выше значения 100 единиц (соотношение КАТ/СОД) положительный результат ИПФФАРЗ, тем большую роль в развитии окислительного стресса организма играет недостаточность супероксиддисмутазы (первой линии ФАРЗ), а чем ближе к значению 100,0 условных единиц положительный результат ИПФФАРЗ, тем меньшую роль в развитии окислительного стресса играют ферменты антирадикальной защиты - как каталаза, так и супероксиддисмутаза.
Обоснование достигнутых результатов
Особенность предлагаемого способа заключается в определении дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты (каталазы и супероксиддисмутазы) и параллельной оценки их роли в развитии окислительного стресса, выраженность которого оценивают по уровню генерации активных форм кислорода - супероксидного анион-радикала и пероксида водорода, определяемых методом люминол-H2O2-зависимой хемилюминесценции с помощью авторской модификации [Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. «Система лабораторной диагностики окислительного стресса». Патент на полезную модель №54787 по заявке №2006101586 от 19.01.2006], позволяющей определять как максимум вспышки хемилюминесценции, так и площадь хемилюминесценции.
Помимо эндогенного синтеза, ферменты антирадикальной защиты могут поступать в организм в составе пищевых веществ, фармацевтических препаратов и биодобавок. Супероксиддисмутазу и каталазу нередко используют в виде лекарственных форм при ожоговой болезни, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, в хирургической практике, ревматологии, в качестве антитромботических средств, при воспалительных заболеваниях и иммунодефицитных состояниях, в стоматологии [Гайворонская Т.В., Петросян Э.А., Галенко-Ярошевский В.П. Влияние натрия гипохлорита и препаратов супероксиддисмутазы на состояние про-антиоксидантной системы крови при гнойной ране. - Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Прил.3: 174-177; Гайворонская Т.В. Экспериментальное обоснование эффективности применения непрямого электрохимического окисления крови и антиоксидантной терапии при лечении гнойных ран мягких тканей. - Стоматология. - 2008. - 1: 18-22; Макаревич О.П., Голиков П.П. Активность супероксиддисмутазы крови в острый период различных заболеваний. // Лаб. дело. - 1983. - №6. - С.24-27, Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Ковалентная модификация субъединиц супероксиддисмутазы хондроитинсульфатом. // Биохимия. - 1997. - Т. 62. - Вып.10. - 1359-1363, Максименко А.В., Тищенко Е.Г. Модификация каталазы хондроитинсульфатом. // Биохимия. - 1997. - Т.62. - Вып.10. - С.1364-1368, Максименко А.В., Тищенко Е.Г., Голубых В.Л. Антитромботическое действие производных каталазы и хондроитинсульфата при артериальном поражении у крыс. // Вопросы медицинской химии. - 1998. - Т. 44. - Вып.4. - С.362-368, Архипенко Ю.В., Сазонтова Т.Г. Роль про- и антиоксидантных факторов при адаптации к различным видам гипоксии // Кислород и свободные радикалы: материалы международного симпозиума. - Гродно, 1996. - С.7-8., Berckman R., Flohe L. The pathogenetic role of superoxide dismutaze. // Bull. Eur. Physiopathol. Respirat. - 1981. - N914. - P.275-285, Blane D.R., Heal N.D., Treby D.A. Protection again hydrogen peroxide in synovial fluid from rheumathoid patients. // Clin. Sci. - 1981. - V.61. - N4. - P.483-486, McCord J.M. Superoxide radical: controversies, contradictions, and paradoxes // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1995. - V.209. - №2. - P.112-117], кроме того, в настоящее время в медицине используются также имитаторы ферментов антирадикальной защиты [Packer L., Cadenas E. Handbook of Synthetic Antioxidants. - New York: Marcel Dekker, 1996] - все это требует новых надежных и доступных методов диагностики их функционирования для определения показаний к назначению данной группы препаратов и мониторинга эффективности антиоксидантной терапии, проводимой с их использованием.
Проведены исследования состояния баланса каталазы и супероксиддисмутазы крови у различных категорий больных (n>200 чел.).
Анализируя активность каталазы у пациентов с сахарным диабетом и у здоровых людей, можно отметить отсутствие между ними существенного различия. Так, активность каталазы у пациентов с сахарным диабетом составляет 110,51±4,82 ед. акт., а у здоровых людей - 115,55±9,41 ед. акт.
При сравнении активности супероксиддисмутазы у пациентов с сахарным диабетом и у здоровых людей обращает на себя внимание имеющееся между ними различие. Так, активность супероксиддисмутазы у пациентов с сахарным диабетом составляет 0,097±0,01 ед. акт., а у здоровых людей - 0,159±0,015 ед. акт. Активность супероксиддисмутазы у пациентов с сахарным диабетом снижена на 39% от аналогичного показателя у здоровых людей.
Максимум вспышки хемилюминесценции плазмы крови у пациентов с сахарным диабетом составляет 0,832±0,086 усл. ед., а у здоровых людей - 0,236±0,021 усл. ед. Максимум вспышки хемилюминесценции у пациентов с сахарным диабетом превышает аналогичный показатель у здоровых людей в 3,52 раза, что связано с наличием сахарного диабета и нарушениями в системах специфической и неспецифической защиты организма.
Площадь хемилюминесценции плазмы крови у пациентов с сахарным диабетом составляет 0,978±0,02 ед. пл., а у здоровых людей - 0,723±0,049 ед. пл. Площадь хемилюминесценции у пациентов с сахарным диабетом превышает аналогичный показатель у здоровых людей в 1,35 раза, что в первую очередь обусловлено метаболическими расстройствами и снижением защитных механизмов у пациентов, страдающих сахарным диабетом.
С целью увеличения наглядности авторами был произведен расчет ИПФФАРЗi у пациентов с сахарным диабетом. ИПФФАРЗi составил 853,4 ед. соотн. КАТ/СОД, что свидетельствует об имеющем существенное значение для организма снижении активности супероксиддисмутазы у пациентов с сахарным диабетом.
Использование интегрального коэффициента ИПФФАРЗi в сравнении с отдельно взятыми показателями активности каталазы и супероксиддисмутазы позволяет с большей точностью и эффективностью определять состояние ферментативного компонента антиоксидантной системы, что может иметь решающее значение при выборе оптимального метода лечения пациента.
Пример 1. В отделение гнойной хирургии Краевой клинической больницы г.Краснодара 10 июня 2006 года поступил пациент Карагозян М.А., возраст 37 лет. Диагноз: «Сахарный диабет 2 типа, инсулинпотребный, тяжелая форма. Синдром диабетической стопы, нейропатическая форма, глубокая флегмона тыла и подошвы правой стопы». Длительность заболевания сахарным диабетом составляла 8 лет. Проведено обследование с целью диагностирования возможного наличия дисбаланса основных ферментов антирадикальной защиты - каталазы и супероксиддисмутазы. Активность каталазы была снижена на 13,2% (по сравнению со средним показателем активности каталазы у здоровых людей КАТ=115,55 ед. акт.) и составила КATi=100,27 ед. акт. Активность супероксиддисмутазы была повышена на 6,3% (по сравнению со средним показателем активности супероксиддисмутазы у здоровых людей СОД=0,159 ед. акт.) и составила СОДi=0,169 ед. акт. Показатель максимума вспышки хемилюминесценции был повышен в 5,3 раза (по сравнению со средним показателем максимума вспышки хемилюминесценции у здоровых людей МВХЛ=0,236 усл. ед.) и составила MBXЛi=1,281 усл. ед. Показатель площади хемилюминесценции был повышен в 3,1 раза (по сравнению со средним показателем площади хемилюминесценции у здоровых людей ПХЛ=0,723 ед. пл.) и составила ПХЛi=2,224 ед. пл. У этого пациента ИПФФАРЗi составил 27,7 ед. соотн. КАТ/СОД, что определили как выраженный дисбаланс в сторону преобладания активности супероксиддисмутазы над активностью каталазы.
В течение 20 дней было проведено хирургическое и медикаментозное лечение, в том числе с применением антиоксидантных препаратов (липоевой кислоты в стандартной дозировке). После завершения лечения проведено повторное обследование с целью определения динамики изменений вышеуказанных показателей. Активность каталазы была снижена на 11,4% (по сравнению со средним показателем активности каталазы у здоровых людей КАТ=115,55 ед. акт.) и составила: КATi=102,32 ед. акт. Активность супероксиддисмутазы была снижена на 13,4% (по сравнению со средним показателем активности супероксиддисмутазы здоровых людей СОД=0,159 ед. акт.) и составила: СОДi=0,138 ед. акт. Показатель максимума вспышки хемилюминесценции был повышен в 4,5 раза (по сравнению со средним показателем максимума вспышки хемилюминесценции у здоровых людей МВХЛ=0,236 усл. ед.) и составил: MBXЛi=1,083 усл. ед. Показатель площади хемилюминесценции был повышен в 1,5 раза (по сравнению со средним показателем площади хемилюминесценции у здоровых людей ПХЛ=0,723 ед. пл.) и составил: ПХЛ=1,065 ед. пл. После лечения ИПФФАРЗi у данного пациента составил 114,5 ед. соотн. КАТ/СОД, что определили как восстановление физиологической нормы баланса активности каталазы и супероксиддисмутазы, а проведенное лечение оценили как эффективное и адекватное (табл.3, фиг.3).
На фиг.3 с помощью графиков показана динамика ИПФФАРЗ у больного сахарным диабетом на фоне проведенного комплексного лечения с антиоксидантными средствами (пример 1, данные приведены в таблице 3, где ИПФФАРЗ - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты, ед. соотношения КАТ/СОД, КАТ - каталаза, определяемая как КАТ=КATi/КATk, где КATi - активность каталазы гемолизата обследуемого, ед. акт., КATk - активность каталазы гемолизата контрольной группы, ед.акт., СОД - супероксиддисмутаза, определяемая как СОД=СОДi/СОДk, где СОДi - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого, ед. акт., СОДk - активность супероксиддисмутазы гемолизата контрольной группы, ед. акт., ХЛ - хемилюминесценция, определяемая как ХЛ=ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk, где ПХЛi - площадь хемилюминесценции обследуемого, ед. пл., ПХЛk - площадь хемилюминесценции контрольной группы, ед. пл., МВХЛi - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого, усл. ед., МВХЛk - максимум вспышки хемилюминесценции контрольной группы, усл. ед.).
Пример 2. В отделение гнойной хирургии Краевой клинической больницы г.Краснодара 7 апреля 2006 года поступила пациент Медведева А.А., возраст 62 года. Диагноз: «Пролежневая язва крестцово-копчиковой области. Сахарный диабет 2 типа, легкая форма». Проведено обследование с целью диагностирования возможного наличия дисбаланса основных ферментов антирадикальной защиты - каталазы и супероксиддисмутазы. Активность каталазы была снижена на 5,5% (по сравнению со средним показателем активности каталазы у здоровых людей КАТ=115,55 ед. акт.) и составила: КATi=109,19 ед. акт. Активность супероксиддисмутазы была снижена на 18,2% (по сравнению со средним показателем активности супероксиддисмутазы у здоровых людей СОД=0,159 ед. акт.) и составила: СОДi=0,130 ед. акт. Показатель максимума вспышки хемилюминесценции был повышен на 38,6% (по сравнению со средним показателем максимума вспышки хемилюминесценции у здоровых людей МВХЛ=0,236 усл. ед.) и составил: MBXЛi=0,327 усл. ед. Показатель площади хемилюминесценции был повышен на 15,9% (по сравнению со средним показателем площади хемилюминесценции у здоровых людей ПХЛ=0,723 ед. пл.) и составил: ПХЛi=0,838 ед. пл. У этого пациента ИПФФАРЗi составил 126,2 ед. соотн. КАТ/СОД, что определили как клинически незначимый дисбаланс, не требующий специфической терапии.
В течение 12 дней было проведено хирургическое лечение без использования антиоксидантных препаратов. После окончания стационарного лечения проведено повторное обследование с целью определения динамики изменений вышеуказанных показателей. Активность каталазы описываемого пациента практически не отличалась от средних показателей у здоровых людей: КATi=112,55 ед. акт. Также и активность супероксиддисмутазы была близка к среднему показателю пациентов с сахарным диабетом без гнойного заболевания СОДi=0,162 ед. акт. Показатель максимума вспышки хемилюминесценции был повышен на 26,7% (по сравнению со средним показателем максимума вспышки хемилюминесценции у здоровых людей МВХЛ=0,236 усл. ед.) и составил: МВХЛi=0,299 усл. ед. Показатель площади хемилюминесценции был повышен на 5,4% (по сравнению со средним показателем площади хемилюминесценции у здоровых людей ПХЛ=0,723 ед. пл.) и составил: ПХЛ=0,772 ед. пл. После лечения ИПФФАРЗi у данного пациента составил 95,5 ед. соотн. КАТ/СОД, что определили как полное восстановление физиологической нормы баланса активности каталазы и супероксиддисмутазы (табл.4, фиг.4). Оценка ИПФФАРЗi позволила отказаться от проведения специфической антиоксидантной терапии и снизить стоимость лечения при сохранении положительного результата лечения.
На фиг.4 с помощью графиков показана динамика ИПФФАРЗ у больного сахарным диабетом на фоне проведенного лечения без использования антиоксидантов (пример 2, данные приведены в таблице 4, где ИПФФАРЗ - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты, ед. соотношения КАТ/СОД, КАТ - каталаза, определяемая как КАТ=КATi/КATk, где КATi - активность каталазы гемолизата обследуемого, ед. акт., КATk - активность каталазы гемолизата контрольной группы, ед.акт., СОД - супероксиддисмутаза, определяемая как СОД=СОДi/СОДk, где СОДi - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого, ед. акт., СОДk - активность супероксиддисмутазы гемолизата контрольной группы, ед. акт., ХЛ - хемилюминесценция, определяемая как ХЛ=ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk, где ПХЛi - площадь хемилюминесценции обследуемого, ед. пл., ПХЛk - площадь хемилюминесценции контрольной группы, ед. пл., МВХЛi - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого, усл. ед., МВХЛk - максимум вспышки хемилюминесценции контрольной группы, усл. ед.).
Данное изобретение позволяет:
1. Оценить баланс каталазы и супероксиддисмутазы как показателя, демонстрирующего дисфункцию основных ферментов антиоксидантной защиты человеческого организма, что позволит своевременно провести адекватные мероприятия по его медикаментозной коррекции.
2. Провести оценку патобиохимической значимости дисбаланса каталазы и супероксиддисмутазы за счет дополнительной оценки состояния прооксидантной и антиоксидантной систем, что позволит проводить индивидуальную оценку показаний к назначению медикаментозной терапии и сократить дозировки используемых лекарственных препаратов с антиоксидантной активностью, в том числе содержащих ферменты антирадикальной защиты либо их имитаторы, уменьшая тем самым количество возможных побочных эффектов, а также снизить расходы на указанные препараты.
3. Позволяет разработать индивидуальные критерии к подходам коррекции дисбаланса каталазы и супероксиддисмутазы у различных категорий больных, например определять необходимость использования в лечении препаратов на основе супероксиддисмутазы (рексод, орготеин, содерм и другие) и каталазы (на основе липосом), а также имитаторов ферментов антирадикальной защиты, кроме того, данный показатель позволит достоверно оценивать эффективность по восстановлению баланса функционирования ферментов антирадикальной защиты в процессе лечения с целью выполнения своевременной коррекции проводимой терапии.
Практическим результатом предложения является определение дисбаланса основных ферментов антирадикальной защиты у обследуемых больных, а также оценка диагностической значимости выявленных изменений, что позволяет определять индивидуальные показания к медикаментозной коррекции, а значит сократить время пребывания больных в стационарах и ограничить количество необходимых для лечения медикаментов.
Claims (1)
- Способ диагностики нарушений метаболизма в организме, вызванных окислительным стрессом, включающий определение активности ферментов 1-й и 2-й линии антирадикальной защиты и интенсивности свободнорадикального окисления, отличающийся тем, что в комплексе определяют активность супероксиддисмутазы (СОДi) и каталазы (KATi) в гемолизате, далее оценивают изменение этих показателей относительно нормы, которая соответствует значениям СОДk=0,16±0,02 и KATk=115,55±9,41, и при значении соотношения этих показателей равном 1,000±0,002 определяют отсутствие дисбаланса функционирования ферментов антирадикальной защиты, а при других значениях этого соотношения дополнительно определяют степень выраженности окислительного стресса по максимуму и площади вспышки хемилюминесценции и оценивают дисбаланс функционирования ферментов антирадикальной защиты по формуле:
ИПФФAPЗi=100·(KATi/KATki:COДi/COДk)ПХЛi/ПХЛk·МВХЛi/МВХЛk, где
ИПФФАРЗi - интегральный показатель функционирования ферментов антирадикальной защиты обследуемого, в единицах соотношения каталаза/супероксиддисмутаза, ед. соотн. КАТ/СОД,
КАТ - активность каталазы гемолизата обследуемого (i) и контрольной группы (k), в единицах активности, ед. акт.,
СОД - активность супероксиддисмутазы гемолизата обследуемого (i) и контрольной группы (k), в единицах активности, ед. акт.,
ПХЛ - площадь хемилюминесценции обследуемого (i) и контрольной группы (k), в единицах площади, ед. пл.,
МВХЛ - максимум вспышки хемилюминесценции обследуемого (i) и контрольной группы (k), в условных единицах, усл. ед.,
при значении ИПФФАРЗi ниже 70,0 единиц определяют недостаточность каталазы, а при значении ИПФФАРЗi выше 130,0 единиц определяют недостаточность супероксиддисмутазы.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010126241/15A RU2436101C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010126241/15A RU2436101C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2436101C1 true RU2436101C1 (ru) | 2011-12-10 |
Family
ID=45405706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010126241/15A RU2436101C1 (ru) | 2010-06-25 | 2010-06-25 | Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2436101C1 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2533846C1 (ru) * | 2013-05-13 | 2014-11-20 | Сергей Леонидович Устьянцев | Способ определения энтропии в организме человека или животного |
| RU2546526C1 (ru) * | 2014-02-11 | 2015-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля |
| RU2763478C1 (ru) * | 2021-02-16 | 2021-12-29 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" (ФГАОУ ВО "КФУ им. В.И. Вернадского") | Способ оценки оксидативного стресса при метаболическом синдроме |
| CN114049916A (zh) * | 2021-11-30 | 2022-02-15 | 大连海洋大学 | 长牡蛎氧化应激状态评价方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2186592C1 (ru) * | 2001-06-13 | 2002-08-10 | Красноярская государственная медицинская академия | Способ коррекции системы антиоксидантной защиты при деструктивном панкреатите |
| WO2002103036A1 (en) * | 2001-06-20 | 2002-12-27 | Young-Mee Park | An enzymatic method for rapid quantitation of oxidized reduced glutathione |
-
2010
- 2010-06-25 RU RU2010126241/15A patent/RU2436101C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2186592C1 (ru) * | 2001-06-13 | 2002-08-10 | Красноярская государственная медицинская академия | Способ коррекции системы антиоксидантной защиты при деструктивном панкреатите |
| WO2002103036A1 (en) * | 2001-06-20 | 2002-12-27 | Young-Mee Park | An enzymatic method for rapid quantitation of oxidized reduced glutathione |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GRAF WD et al. Comparison of erythrocyte antioxidant enzyme activities and embryologic level of neural tube defects. Eur. J. Pediatr. Surg. 1995, Dec; 5 Suppi 1:8-11. реф. Найдено из БД PubMed PMID: 8770569. * |
| ПЕТРОВИЧ Ю.А. и др. Интегральный коэффициент, характеризующий свободнорадикальное окисление и антиоксидантную защиту, и новый «остаточный» коэффициент, отражающий результативность применения антиоксидантов при пародонте. - Стоматология, 2001, №1, с.38-41. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2533846C1 (ru) * | 2013-05-13 | 2014-11-20 | Сергей Леонидович Устьянцев | Способ определения энтропии в организме человека или животного |
| RU2546526C1 (ru) * | 2014-02-11 | 2015-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Способ диагностики окислительного стресса у детского населения в условиях внешнесредового воздействия никеля |
| RU2763478C1 (ru) * | 2021-02-16 | 2021-12-29 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Крымский федеральный университет имени В.И. Вернадского" (ФГАОУ ВО "КФУ им. В.И. Вернадского") | Способ оценки оксидативного стресса при метаболическом синдроме |
| CN114049916A (zh) * | 2021-11-30 | 2022-02-15 | 大连海洋大学 | 长牡蛎氧化应激状态评价方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Canakci et al. | Increased levels of 8-hydroxydeoxyguanosine and malondialdehyde and its relationship with antioxidant enzymes in saliva of periodontitis patients | |
| Kensler et al. | Inhibition of phorbol ester-stimulated chemiluminescence in human polymorphonuclear leukocytes by retinoic acid and 5, 6-epoxyretinoic acid | |
| Zanetti et al. | Caloric restriction improves endothelial dysfunction during vascular aging: effects on nitric oxide synthase isoforms and oxidative stress in rat aorta | |
| Prigione et al. | Oxidative stress in peripheral blood mononuclear cells from patients with Parkinson's disease: negative correlation with levodopa dosage | |
| Köse et al. | Lipid peroxidation and erythrocyte antioxidant enzymes in patients with Behçet’s disease | |
| Wereszczynska-Siemiatkowska et al. | Oxidative Stress as an Early Prognostic Factor in Acute Pancreatitis (AP): Its Correlation with Serum Phospholipase A: 2:(PLA: 2:) and Plasma Polymorphonuclear Elastase (PMN-E) in Different-Severity Forms of Human AP | |
| RU2436101C1 (ru) | Способ диагностики нарушений метаболизма в организме в условиях окислительного стресса | |
| Benjamin et al. | Effect of nonsurgical periodontal therapy on some oxidative stress markers in patients with chronic periodontitis: A biochemical study | |
| Werts et al. | Relationships between cellular superoxide dismutase and susceptibility to chemically induced cancer in the rat mammary gland | |
| Londzin-Olesik et al. | The effect of thyroid hormone status on selected antioxidant parameters in patients with Graves’ disease and active thyroid-associated orbitopathy | |
| Chiu et al. | Prolonged exposure to high glucose induces premature senescence through oxidative stress and autophagy in retinal pigment epithelial cells | |
| Perrin-Nadif et al. | Blood antioxidant enzymes as markers of exposure or effect in coal miners. | |
| JPH06507235A (ja) | 診断試験 | |
| Piwowar et al. | Markers of oxidative protein damage in plasma and urine of type 2 diabetic patients | |
| Serra et al. | Oxidative stress in Alzheimer's and vascular dementias: masking of the antioxidant profiles by a concomitant Type II diabetes mellitus condition | |
| Ece et al. | Paraoxonase, total antioxidant activity and peroxide levels in marasmic children: relationships with leptin | |
| Michalak et al. | Serum paraoxonase/arylesterase activity affects outcome in ischemic stroke patients | |
| Fatjó et al. | Myocardial antioxidant status in chronic alcoholism | |
| Chu et al. | Untargeted metabolomics analysis of gingival tissue in patients with severe periodontitis | |
| RU2426992C1 (ru) | Способ прогнозирования течения травматической болезни головного мозга | |
| Boehme et al. | Simvastatin restores pulmonary endothelial function in the setting of pulmonary over-circulation | |
| Almeida et al. | Modulation of hemorheological parameters by the erythrocyte redox thiol status | |
| Coleman et al. | Full‐length plasma skeletal muscle myosin isoform deficiency is associated with coagulopathy in acutely injured patients | |
| Muhanedalnajer et al. | Determination OF ADVANCED oxidative PROTEIN PRODUCTS levels and its correlation with INFLAMMATION IN diabetic foot patients | |
| Iqbal et al. | Effect of vitamins C, E and nigella sativa seeds on antioxidant activity in fibromyalgia patients |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120626 |