RU2426552C2 - Экстракты phaseolus vulgaris, их применение и композиции, содержащие их - Google Patents
Экстракты phaseolus vulgaris, их применение и композиции, содержащие их Download PDFInfo
- Publication number
- RU2426552C2 RU2426552C2 RU2008124974/15A RU2008124974A RU2426552C2 RU 2426552 C2 RU2426552 C2 RU 2426552C2 RU 2008124974/15 A RU2008124974/15 A RU 2008124974/15A RU 2008124974 A RU2008124974 A RU 2008124974A RU 2426552 C2 RU2426552 C2 RU 2426552C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extract
- ethanol
- extracts
- appetite
- phytohemagglutinins
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 title claims description 13
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 title claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 39
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000036528 appetite Effects 0.000 claims abstract description 6
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 101710171801 Alpha-amylase inhibitor Proteins 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 claims 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims 1
- 235000007882 dietary composition Nutrition 0.000 claims 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 241000219833 Phaseolus Species 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002483 medication Methods 0.000 abstract 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 6
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 6
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 3
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 3
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010020710 Hyperphagia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000883 anti-obesity agent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000020830 overeating Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000005195 poor health Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической и пищевой промышленности, в частности к средству, подавляющему аппетит. Экстракт, подавляющий аппетит, полученный экстрагированием из Phaseolus sp. смесями этанола и воды, с определенным содержанием ингибитора α-амилазы и фитогемагглютининов. Способ получения экстракта. Применение экстрактов. Фармацевтическая или диетическая композиция, подавляющая аппетит. Вышеописанные средства эффективно подавляют аппетит. 4 н. и 1 з.п. ф-лы.
Description
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к экстрактам, полученным из семян растений рода Phaseolus, и способу их получения.
Детальнее, данное изобретение относится к экстрактам семян Phaseolus vulgaris, отличающимся содержанием ингибиторов α-амилазы и фитогемагглютининов в установленном соотношении, которые уменьшают всасывание глюкозы, получаемой из крахмала пищи, и уменьшают аппетит при повторном введении.
Уровень техники
Ингибитор α-амилазы (αАI) представляет собой гликопротеин, содержащийся в семенах фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris), который подавляет ферментативную активность амилазы животного происхождения и особенно человеческой амилазы различным, видоспецифичным образом. Данный ингибитор, который был впервые выделен Marshall и Lauda в 1974 г. (J.Biol. Chem., 250(20), 8030-8037, 1975), привлек интерес, так как его действие, подавляющее активность панкреатической амилазы, может влиять на всасывание глюкозы в кишечнике (происходящее в результате ферментативного гидролиза крахмала) и быть потенциально применимо, главным образом, в пищевой промышленности. Углеводороды представляют собой важный источник калорий и способствуют синтезу жиров у людей, которые предрасположены к ожирению или диабету II типа. В природе при развитии видов доступность пищи для выживания была прерывистой, таким образом, была важнейшей способность накапливать энергию, превышающую количество, необходимое для немедленного использования. Жировые клетки, расположенные в различных частях тела, представляют собой места, где энергия накапливается, таким образом, она легкодоступна, если организм нуждается в ней. Указанная физиологическая система, управляемая эндокринной секрецией и нервной системой, дает возможность людям выживать в отсутствие пищи в течение длительных периодов. Однако в результате переедания, малоподвижного образа жизни и генетической предрасположенности, связанных с образом жизни в странах с развитой промышленностью, система неконтролируемо увеличивает отложения энергии в виде жировой ткани с неблагоприятными последствиями, такими как дефекты внешности, сопровождающиеся перегрузкой сердечно-сосудистой системы. Одну из главных проблем представляет собой ожирение, которое достигает высокого уровня в некоторых странах, таких как Соединенные Штаты Америки. Ожирение является основной причиной сердечно-сосудистых заболеваний, гипертензии и диабета. Избыточная масса, которая распространена и среди мужчин, и среди женщин, вызвана поглощением больших и больших количеств пищи и приводит к ухудшению здоровья. Так как избыточная глюкоза крови приводит к возрастанию отложения энергии, очень важно наличие веществ, которые снижают абсорбцию глюкозы.
Потребность в средствах против ожирения, распространенная в мире, привела к исследованию и изучению пищи, которая препятствует прогрессирующему накоплению массы тела.
Ингибиторы α-амилазы давно определены в различных бобовых и кукурузе, и специальные клинические испытания, проведенные в последние годы, дали неоднозначные результаты. В зависимости от способа получения, использованного для концентрирования и выделения данных ингибиторов, результаты были противоречивыми, так, многие коммерческие препараты доказано теряют эффективность in vivo. В соответствии с первыми исследованиями Layer, Carlson и Di Magno (Gastroenterology, 88(6): 1895, 1902, 1985) указанная проблема существует, очевидно, вследствие высокой степени разведения ингибитора в препаратах с высокой загрязненностью примесями; в сущности, препараты очищенного ингибитора доказанно являются активными в отношении α-амилазы при введении непосредственно в кишечник.
Частично способы, описанные в литературе для получения ингибиторов α-амилазы, предусматривают экстрагирование фосфатным буфером и перевод белков в нерастворяемую форму сульфатом аммония и не обеспечивают какую-либо избирательность. Полученные экстракты содержат высокие концентрации фитогемагглютининов и должны быть разведены для получения экстрактов с допустимым уровнем токсичности. Помимо биологического аспекта известные способы включают некоторые стадии, которые делают сложным получение продукта, так чтобы он являлся и активным и безопасным. Проблемы, которые возникают во время экстрагирования буферами различной ионной силы и рН, обусловлены высокой концентрацией белковых и полисахаридных примесей, которые делают их слишком вязкими, приводя к проблемам низкой способности к фильтрации и более длительному времени получения. Так как они представляют собой водные экстракты, высок риск микробного загрязнения белкового экстракта, которое трудно контролировать, особенно в случае высокой вязкости препаратов. Все указанные условия приводят к потере продукта и затрудняют получение конечных экстрактов с низким титром фитогемагглютининов и соответствующих многокомпонентной стандартизации. Различные способы использованы для преодоления проблемы ограничения фитогемагглютининов, включая термическую обработку, которая приводит к разрушению не только фитогемагглютининов, но и ингибиторов α-амилазы, что является причиной того, что полученный продукт почти неактивен. Действительно, имеющиеся на рынке продукты обладают очень низким содержанием αAI. Другие продукты, которые излишне высоко обогащены ингибиторами α-амилазы, вызывают неприятную проблему метеоризима при введении в больших дозах.
Описание изобретения
Продукты, соответствующие изобретению, получены экстрагированием водной или водно-этанольной средой и осаждением приемлемыми смесями этанола и воды.
Неожиданно обнаружили, что использование водно-этанольных смесей с подходящими концентрированными водными экстрактами обыкновенных бобов повышает содержание в экстрактах ингибиторов α-амилазы, обладающей активностью от 1000 до 1600 USP/мг (HPLC титр от 6 до 14% масс./масс.) и содержание фитогемагглютининов от 8000 до 30000 HAU/г, и, таким образом, может быть применено в продуктах для использования в диете при достаточно низких дозах с получением требуемого результата. В добавление к указанному главному преимуществу способ, к которому относится изобретение, вызывает значительное уменьшение количества микробов. Другое важное преимущество представляет собой возможность получения конечного продукта с повышенным содержанием (αAI) ингибитора, с определенными соотношениями фитогемагглютининов.
Способ по изобретению включает экстракцию биомассы буферами с рН в интервале от 3 до 6,5, предпочтительно рН 3,5-5,5 и еще более предпочтительно 4, при температурах от 2 до 25°С и более предпочтительно от 4 до 18°С и последующим выделением экстракта из биомассы центрифугированием.
Подходящие буферы для экстракции обычно представляют собой фосфатный, цитратный или ацетатный буферы или дикарбоновые аминокислотные буферы, предпочтительны фосфатный или цитратный буферы. Буферизированные водно-спиртовые смеси могут быть также использованы в качестве экстрагирующего растворителя.
В зависимости от использованных экстракторов и от цикла экстракции использовали от 5 до 20 объемов буфера на часть лекарственного препарата, предпочтительно 10-12,5 частей, и смесь перемешивали в течение 1-4 часов, предпочтительно 2 часа; биомасса может быть дополнительно экстрагирована более трех раз с соответствующим количеством буфера и в каком-либо случае до тех пор, пока не исчерпается содержание ингибитора α-амилазы и фитогемагглютинина.
Комбинированные экстракты очищают фильтрацией или центрифугированием и концентрируют в вакууме при температуре с 25 до 35°С, предпочтительно при 30°С, или ультрафильтрацией (с отсечкой молекул 10000 Дa) до объема, соответствующего приблизительно 10% массы экстракта после центрифугирования.
Концентрированный водный экстракт затем осаждают этанолом, добавленным до конечной концентрации от 60 до 70% объем/объем, предпочтительно 65% объем/объем, действующим при температуре от 18 до 30°С и предпочтительно от 20 до 25°С.
Полученный осадок может быть подвергнут центрифугированию и/или фильтрации, повторно растворен в дистиллированной воде и вновь осажден в 60% этаноле для уменьшения доли солей. В качестве альтернативы осадок может быть отфильтрован через мембрану с отсечкой молекул массой 10000 Дa. Отстой осадка, который составляет экстракт, соответствующий изобретению, высушивают.
Если используют указанные способы, получают экстракт со следующими свойствами:
- HPLC титр: ≥ 6% ≤14% масс./масс.;
- α-амилазу ингибирующая активность ≥ 1000 ≤ 1600 USP/мг;
- гемагглютинирующая активность ≥ 8000 ≤ 30000 HAU/г.
Эффективность экстрактов была испытана на крысах, подвергнутых воздействию доз 200 и 400 мг/кг в сутки, не ограниченных в питании специальным богатым крахмалом кормом. Во время воздействия экстрактами, соответствующими изобретению, значительно уменьшалось потребление пищи, в то время как потребление воды оставалось неизменным.
Продукт, соответствующий изобретению, прекрасно переносится и может быть введен в состав фармацевтической композиции или композиции для диеты в дозах от 50 до 1000 мг, получаемых в основные приемы пищи. Экстракт может быть введен в состав питьевых форм и т.п., принимаемых в качестве препаратов, уменьшающих аппетит.
Примеры, приведенные ниже, демонстрируют получение и преимущества изобретения.
ПРИМЕР 1: Получение экстракта обыкновенных бобов с повышенным содержанием αAI, полученного экстракцией цитратным буфером и осаждением этанолом
Суспензию 150 г измельченных обыкновенных бобов в 1,5 л лимонной кислоты 5,75 г/л перемешивали в течение 3 часов при + 4°С.
Суспензию центрифугировали и водный центрифугат концентрировали 7,5 раз (сухой остаток: 15,0% масс./масс.). Концентрат развели 95% этанолом до концентрации 65% этанола до получения осадка, который восстановили центрифугированием при +22°С. Собранное твердое вещество высушили в вакууме при температуре, не превышающей 50°С. Полученный продукт (выход продукта 2,36%) обладает ингибирующей α-амилазу активностью 1050 ед./мг, гемагглютинирующей активностью 9000 HAU/г и титром HPLC 7,3% масс./масс.
ПРИМЕР 2: Осаждение экстракта обыкновенных бобов с повышенным содержанием αAI, полученного экстракцией цитратным буфером и осаждением этанолом
Суспензию 150 г измельченных обыкновенных бобов в 1,5 л лимонной кислоты 5,75 г/л перемешивали в течение 2 часов при +22°С.
Суспензию центрифугировали и водный центрифугат концентрировали 10,5 раз (сухой остаток: 17,1% масс./масс.). Концентрат развели 95% этанолом до концентрации 65% этанола с получением осадка, который восстановили центрифугированием при +22°С. Собранное твердое вещество высушили в вакууме при температуре, не превышающей 50°С. Полученный продукт (выход продукта 3,5%) обладает ингибирующей α-амилазу активностью 1600 ед./мг, гемагглютинирующей активностью 18600 HAU/г и титром HPLC 10,0% масс./масс.
ПРИМЕР 3: Осаждение экстракта обыкновенных бобов с повышенным содержанием αAI, полученного двойной экстракцией водно-спиртовым раствором (30% этанол) лимонной кислоты и осаждением этанолом
Суспензию 100 г измельченных обыкновенных бобов в 1,0 л смеси воды и этанола в соотношении 70:30, содержащей лимонную кислоту 4,6 г/л, перемешивали в течение 2 часов при +22°С.
Суспензию центрифугировали, и чистую водную фазу отделяли, и остаток подвергали новому экстракционному циклу 750 мл воды. Жидкую фазу повторной экстракции соединили с первой и концентрировали 4,3 раза (сухой остаток: 4,78% масс./масс.). Концентрат развели 95% этанолом до концентрации 70% этанола до получения осадка, который восстановили центрифугированием при +22°С. Собранное твердое вещество высушили в вакууме при температуре, не превышающей 50°С. Полученный продукт (выход продукта 0,88%) обладает ингибирующей α-амилазу активностью 1570 ед./мг, гемагглютинирующей активностью 27000 HAU/г и титром HPLC 13,6% масс./масс.
Claims (5)
1. Экстракт, подавляющий аппетит, полученный экстрагированием из Phaseolus vulgaris смесями этанола и воды, отличающийся содержанием ингибитора α-амилазы от 1000 до 1600 USP/мг (титр HPLC от 6 до 14% мас./мас.) и содержанием фитогемагглютининов от 8000 до 30000 HAU/г.
2. Способ получения экстракта по п.1, который предусматривает:
a) экстрагирование Phaseolus vulgaris водными буферами с рН в интервале от 3 до 6,5, и последующее отделение экстракта от биомассы, которая может быть дополнительно экстрагирована буфером в случае необходимости до тех пор пока ингибиторы α-амилазы и фитогемагглютинины не будут извлечены полностью;
b) фильтрацию и центрифугирование сочетанных экстрактов, и концентрированно до объема, соответствующего примерно 10% массы экстракта после центрифугирования;
c) раздельное осаждение концентрированного водного экстракта разбавленным этанолом, при конечной концентрации спирта от 60 до 70% об./об.;
d) отделение преципитата и повторное осаждение дистиллированной водой с 60% этанолом, или фильтрацию через мембрану с отсечкой молекул массой 10000 Да и высушивание остатка преципитата.
a) экстрагирование Phaseolus vulgaris водными буферами с рН в интервале от 3 до 6,5, и последующее отделение экстракта от биомассы, которая может быть дополнительно экстрагирована буфером в случае необходимости до тех пор пока ингибиторы α-амилазы и фитогемагглютинины не будут извлечены полностью;
b) фильтрацию и центрифугирование сочетанных экстрактов, и концентрированно до объема, соответствующего примерно 10% массы экстракта после центрифугирования;
c) раздельное осаждение концентрированного водного экстракта разбавленным этанолом, при конечной концентрации спирта от 60 до 70% об./об.;
d) отделение преципитата и повторное осаждение дистиллированной водой с 60% этанолом, или фильтрацию через мембрану с отсечкой молекул массой 10000 Да и высушивание остатка преципитата.
3. Способ по п.2 в котором используют фосфатный, цитратный или ацетатный буферы, дикарбоновые аминокислотные буферы или буферированные водно-спиртовые растворы.
4. Применение экстрактов по п.1 для получения композиции, полезной в качестве средства, подавляющего аппетит.
5. Фармацевтическая или диетическая композиция, подавляющая аппетит, содержащая в качестве активного ингредиента экстракт по п.1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT002450A ITMI20052450A1 (it) | 2005-12-22 | 2005-12-22 | Estratti di phaseolus vulgaris loro uso e formulazioni che li contengono |
| ITMI2005A002450 | 2005-12-22 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008124974A RU2008124974A (ru) | 2009-12-27 |
| RU2426552C2 true RU2426552C2 (ru) | 2011-08-20 |
Family
ID=37888415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008124974/15A RU2426552C2 (ru) | 2005-12-22 | 2006-12-13 | Экстракты phaseolus vulgaris, их применение и композиции, содержащие их |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20090169657A1 (ru) |
| EP (1) | EP1962877B1 (ru) |
| JP (1) | JP5452931B2 (ru) |
| KR (1) | KR101449763B1 (ru) |
| CN (1) | CN101340923B (ru) |
| AU (1) | AU2006328983B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0620054A8 (ru) |
| CA (1) | CA2634345C (ru) |
| DK (1) | DK1962877T3 (ru) |
| ES (1) | ES2813929T3 (ru) |
| IL (1) | IL192292A (ru) |
| IT (1) | ITMI20052450A1 (ru) |
| NO (1) | NO346419B1 (ru) |
| PT (1) | PT1962877T (ru) |
| RU (1) | RU2426552C2 (ru) |
| SI (1) | SI1962877T1 (ru) |
| WO (1) | WO2007071334A2 (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE602007001128D1 (de) | 2007-03-07 | 2009-06-25 | Indena Spa | Formulierungen mit Extrakten aus Cynara scolymus und Phaseolus vulgaris zur Behandlung von Adipositas |
| CN101555275B (zh) * | 2009-05-08 | 2011-09-28 | 广东省食品工业研究所 | 一种利用生物酶法制备α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| KR20110138001A (ko) * | 2010-06-18 | 2011-12-26 | (주)아모레퍼시픽 | 유색콩 추출물을 함유하는 조성물 |
| ITMI20121727A1 (it) | 2012-10-12 | 2014-04-13 | Indena Spa | Formulazioni per il trattamento e la prevenzione dell'obesita' |
| TW201427674A (zh) * | 2013-01-15 | 2014-07-16 | ji-min Song | 花豆種子萃取物及其製備方法與用途 |
| US9290752B2 (en) | 2013-03-13 | 2016-03-22 | Sunny Delight Beverages Co. | Process for enhancing the amylase inhibitory efficacy from phaseolus vulgaris extracts |
| CN107206038A (zh) * | 2015-01-14 | 2017-09-26 | 阿科普·苏里科维奇·库察尼杨 | 用于生产具有降血糖活性的生物活性物质的复合物的方法 |
| CN116270793A (zh) * | 2023-02-07 | 2023-06-23 | 湖南朗林生物资源股份有限公司 | 一种白芸豆提取物的制备方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ518167A (en) * | 1999-09-08 | 2003-03-28 | Med Eq As | Composition comprising an alpha-amylase inhibitor, inulin, fructooligosaccharides and a fat inhibitor for treating obesity and preventing weight gain or causing weight loss |
| WO2005094602A2 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Purified extract of an alpha-amylase inhibitor from phytoemagglutinin-essentially free beans, process for its extraction and compositions containing it |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2628757A1 (de) * | 1976-06-26 | 1977-12-29 | Guenter Dr Woeber | Amylase inhibitor |
| JPH06116197A (ja) | 1992-09-07 | 1994-04-26 | Max Fuakutaa Kk | 新規ラジカルスカベンジャー |
| US6797287B2 (en) * | 2001-09-25 | 2004-09-28 | Pharmachem Laboratories, Inc. | Phaseolamin compositions and methods for using the same |
| CN1665521A (zh) * | 2002-06-28 | 2005-09-07 | 法蒙凯姆实验室公司 | 纯化淀粉酶抑制剂及用于获得该纯化淀粉酶抑制剂的新颖方法 |
| US20040131749A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-07-08 | Archer-Daniels-Midland Company | Phytochemicals from edible bean process streams |
| US7553502B2 (en) * | 2007-03-07 | 2009-06-30 | Indena S.P.A. | Formulations of alpha-amylase inhibitors with alpha-glucosidase inhibitors useful in the treatment of diabetes and obesity |
| DE602007001128D1 (de) * | 2007-03-07 | 2009-06-25 | Indena Spa | Formulierungen mit Extrakten aus Cynara scolymus und Phaseolus vulgaris zur Behandlung von Adipositas |
-
2005
- 2005-12-22 IT IT002450A patent/ITMI20052450A1/it unknown
-
2006
- 2006-12-13 WO PCT/EP2006/012012 patent/WO2007071334A2/en not_active Ceased
- 2006-12-13 CN CN2006800480680A patent/CN101340923B/zh active Active
- 2006-12-13 EP EP06829580.7A patent/EP1962877B1/en active Active
- 2006-12-13 BR BRPI0620054A patent/BRPI0620054A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2006-12-13 KR KR1020087014705A patent/KR101449763B1/ko active Active
- 2006-12-13 JP JP2008546204A patent/JP5452931B2/ja active Active
- 2006-12-13 PT PT68295807T patent/PT1962877T/pt unknown
- 2006-12-13 AU AU2006328983A patent/AU2006328983B2/en active Active
- 2006-12-13 CA CA2634345A patent/CA2634345C/en active Active
- 2006-12-13 ES ES06829580T patent/ES2813929T3/es active Active
- 2006-12-13 US US12/158,063 patent/US20090169657A1/en not_active Abandoned
- 2006-12-13 RU RU2008124974/15A patent/RU2426552C2/ru active
- 2006-12-13 DK DK06829580.7T patent/DK1962877T3/da active
- 2006-12-13 SI SI200632384T patent/SI1962877T1/sl unknown
-
2008
- 2008-06-19 NO NO20082729A patent/NO346419B1/no unknown
- 2008-06-19 IL IL192292A patent/IL192292A/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-07-07 US US15/643,900 patent/US11241470B2/en active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ518167A (en) * | 1999-09-08 | 2003-03-28 | Med Eq As | Composition comprising an alpha-amylase inhibitor, inulin, fructooligosaccharides and a fat inhibitor for treating obesity and preventing weight gain or causing weight loss |
| WO2005094602A2 (en) * | 2004-03-30 | 2005-10-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Purified extract of an alpha-amylase inhibitor from phytoemagglutinin-essentially free beans, process for its extraction and compositions containing it |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Joseph R. et al. Purification and some physical and chemical properties of red kidney bean (Phaseolus vulgaris) a-amylase inhibitor // J. of Food Biochemistry, vol.1, 1977, p.217-238. * |
| Lajolo F.M. et al. Purification of alpha amylase inhibitor of black bean phaseolus-vulgaris cultivar rico-23» // Ciencia Tecnologia de Alimentos, vol.4, no.1, 1984, p.1-11. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BRPI0620054A2 (pt) | 2011-11-01 |
| US20090169657A1 (en) | 2009-07-02 |
| EP1962877B1 (en) | 2020-07-22 |
| IL192292A0 (en) | 2008-12-29 |
| NO346419B1 (no) | 2022-07-18 |
| EP1962877A2 (en) | 2008-09-03 |
| KR20080080127A (ko) | 2008-09-02 |
| SI1962877T1 (sl) | 2020-09-30 |
| BRPI0620054A8 (pt) | 2018-12-26 |
| CN101340923B (zh) | 2013-11-06 |
| CN101340923A (zh) | 2009-01-07 |
| KR101449763B1 (ko) | 2014-10-13 |
| DK1962877T3 (da) | 2020-08-31 |
| JP2009520716A (ja) | 2009-05-28 |
| JP5452931B2 (ja) | 2014-03-26 |
| AU2006328983B2 (en) | 2012-06-28 |
| HK1127995A1 (en) | 2009-10-16 |
| ITMI20052450A1 (it) | 2007-06-23 |
| US11241470B2 (en) | 2022-02-08 |
| RU2008124974A (ru) | 2009-12-27 |
| PT1962877T (pt) | 2020-09-04 |
| WO2007071334A2 (en) | 2007-06-28 |
| IL192292A (en) | 2013-05-30 |
| CA2634345C (en) | 2016-09-27 |
| ES2813929T3 (es) | 2021-03-25 |
| CA2634345A1 (en) | 2007-06-28 |
| WO2007071334A3 (en) | 2007-09-13 |
| AU2006328983A1 (en) | 2007-06-28 |
| NO20082729L (no) | 2008-07-08 |
| US20170333508A1 (en) | 2017-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11241470B2 (en) | Phaseolus vulgaris extracts, their use and formulations containing them | |
| JP4669920B2 (ja) | 血糖上昇抑制且つ血圧上昇抑制作用を有する機能性素材 | |
| RU2453323C2 (ru) | Композиции, содержащие экстракты cynara scolymus и phaseolus vulgaris, которые полезны для лечения ожирения | |
| WO2015190872A1 (ko) | 스피루리나 추출물을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
| JP4520089B2 (ja) | ルブロフサリン配糖体含有組成物 | |
| JP2022187483A (ja) | オートファジー促進用組成物 | |
| KR101385191B1 (ko) | 치커리 추출물의 근육 손상 예방, 치료 또는 개선을 위한 용도 | |
| WO2005074961A1 (ja) | 体脂肪調整剤 | |
| JP5019708B2 (ja) | 糖尿病の治療および予防用組成物 | |
| CN115052612A (zh) | 含有水解乳清蛋白作为活性成分的用于减轻、预防或治疗肌肉减少症的组合物 | |
| JP2009269896A (ja) | 抗糖尿病食品または医薬品素材及び抗糖尿病食品または医薬品 | |
| JP7253642B1 (ja) | 血糖値上昇抑制用経口組成物及びＡＧＥｓ生成抑制用経口組成物、並びにサプリメント、機能性食品及び医薬組成物 | |
| US20090093397A1 (en) | Phaseolus vulgaris extracts, their use, and formulations containing them | |
| KR100594989B1 (ko) | 해조식물로부터 추출한 안지오텐신 전환효소 활성억제제를 함유하는 고혈압 개선제 및 이를 포함하는 제품 | |
| EP4169522A1 (en) | Pharmaceutical composition containing saururus chinensis fraction, and preparation method therefor | |
| KR20060106065A (ko) | 신선초 뿌리 추출물, 하이드록시데리신(4-hydroxyderricin)및 잔소안제롤(xanthoangelol)의 간보호 효과 | |
| CN117919212A (zh) | 一种具有抗肥胖功效的多肽组合物及其应用 | |
| JP2022093893A (ja) | 抗アレルギー用組成物 | |
| JP2004143120A (ja) | 血圧降下作用に有効な保健食品及び血圧降下剤 | |
| JP2021109858A (ja) | メタボリックシンドロームの予防または改善剤 | |
| KR20070088984A (ko) | 독활 추출물을 함유하는 염증성 질환 및 치료에 유용한 약제 | |
| KR20100121351A (ko) | 파세러스 불가리스 추출물, 그 용도 및 이를 함유하는 배합물 | |
| TW201138797A (en) | A manufacture method of a plant extraction for reducing blood sugar |