RU2425692C2 - Обработанный нагреванием бактерин (варианты), способ получения такого бактерина (варианты) и вакцина, содержащая такой бактерин - Google Patents
Обработанный нагреванием бактерин (варианты), способ получения такого бактерина (варианты) и вакцина, содержащая такой бактерин Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425692C2 RU2425692C2 RU2009108004/10A RU2009108004A RU2425692C2 RU 2425692 C2 RU2425692 C2 RU 2425692C2 RU 2009108004/10 A RU2009108004/10 A RU 2009108004/10A RU 2009108004 A RU2009108004 A RU 2009108004A RU 2425692 C2 RU2425692 C2 RU 2425692C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacterin
- leptospira
- heat
- lipase activity
- treated
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 64
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 claims abstract description 49
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 43
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 43
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 claims description 38
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 13
- 241000589926 Leptospira interrogans serovar Hardjo Species 0.000 claims description 10
- 241001550390 Leptospira interrogans serovar Canicola Species 0.000 claims description 8
- 241001518154 Leptospira kirschneri serovar Grippotyphosa Species 0.000 claims description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 32
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 14
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 14
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 14
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 14
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 13
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 13
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 11
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 11
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 7
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N [(2r)-2-[(3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)C1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N 0.000 description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000003921 particle size analysis Methods 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000711895 Bovine orthopneumovirus Species 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 3
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 2-(1,2-dihydroxyethyl)oxolane-3,4-diol Polymers OCC(O)C1OCC(O)C1O JNYAEWCLZODPBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical class OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- -1 Sorbitan ester Chemical class 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 2
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- ARZLUCYKIWYSHR-UHFFFAOYSA-N hydroxymethoxymethanol Chemical compound OCOCO ARZLUCYKIWYSHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N sorbitan Polymers OCC(O)C1OCC(O)[C@@H]1O JNYAEWCLZODPBN-CTQIIAAMSA-N 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- FUSNOPLQVRUIIM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-2-(4,4-dimethyl-2-oxoimidazolidin-1-yl)-n-[3-(trifluoromethyl)phenyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1NC(C)(C)CN1C(N=C1N)=NC=C1C(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 FUSNOPLQVRUIIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 241000714230 Avian leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241001353878 Canine parainfluenza virus Species 0.000 description 1
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N Sorbitan monopalmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O IYFATESGLOUGBX-YVNJGZBMSA-N 0.000 description 1
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000711508 Turkey coronavirus Species 0.000 description 1
- 208000036029 Uterine contractions during pregnancy Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229960005447 anthrax vaccines Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013098 chemical test method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N ethenamine Chemical compound NC=C UYMKPFRHYYNDTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004312 hexamethylene tetramine Substances 0.000 description 1
- 235000010299 hexamethylene tetramine Nutrition 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 229910000377 hydrazine sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012493 hydrazine sulfate Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 229940059904 light mineral oil Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012927 reference suspension Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 239000001570 sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000011071 sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 229940031953 sorbitan monopalmitate Drugs 0.000 description 1
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0225—Spirochetes, e.g. Treponema, Leptospira, Borrelia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии и касается бактеринов, имеющих сниженную липазную активность убитых бактерий Leptospira, способов получения таких бактеринов и вакцины, содержащей такой бактерин. Представленный бактерин получают посредством нагревания бактерина при температуре и в течение времени, достаточного для снижения липазной активности исходного бактерина до уровня 50% и менее. Представленное изобретение позволяет получать стабильные эмульсионные вакцины. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 табл.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к области вакцин и к способам стабилизации эмульсионных вакцин. В частности, это изобретение относится к обработанным нагреванием бактеринам, способу получения обработанных нагреванием бактеринов и эмульсионным вакцинам, получаемым из таких обработанных нагреванием бактеринов.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Вакцинацию все шире используют для контроля инфекционных заболеваний у животных. В вакцинах часто используют адъюванты, потому что они способны увеличивать гуморальный и/или клеточный иммунный ответ на антиген. Вакцины часто приготавливают в виде эмульсий, потому что эмульсия может действовать в качестве адъюванта и имеет свойство удерживать антиген в качестве депо в месте инъекции. В эмульсионных вакцинах обычно используют эмульгаторы. Кроме использования эмульгаторов, стабильность эмульсионных вакцин может достигаться за счет снижения размера капель эмульсии механическим способом.
Патент США №5084269 относится к адъювантному препарату, содержащему лецитин в комбинации с минеральным маслом, который вызывает меньшее раздражение у животного-хозяина и одновременно индуцирует повышенный системный иммунитет. Композиции в соответствии с Патентом США 5084269 имеются в продаже под торговым названием AMPHIGEN®, торговая марка Pfizer, Inc.
Обычно бактериальные антигены являются нестабильными при нагревании, и даже краткое экспонирование повышенной температуре может снижать активность антигенов. Например, существующие в настоящее время вакцины против сибирской язвы могут терять всю биологическую активность за 48 часов при 37°С (S.Sing, N.Ahuja, V.Chauhan, E.Rajasekaran, W.S.Mohsin, R.Bhat, and R.Bhatnagar; Bioche. Biophys. Res. Commun. 2002 Sep. 6; 295(5):1058-62).
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к обработанным нагреванием бактеринам, способу получения обработанных нагреванием бактеринов и эмульсионным вакцинам, получаемым из таких обработанных нагреванием бактеринов. Способ включает нагревание бактерина до температуры от примерно 35 до примерно 80°С с образованием обработанного нагреванием бактерина.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Приемлемая антигенная активность - Термин "приемлемая антигенная активность" означает способность индуцировать защитный иммунный ответ у вакцинированных животных после контрольного заражения или при прохождении кодифицированного теста на действенность с гомологичным живым организмом.
Бактерии - Термин "бактерин" означает суспензию убитых бактерий, которую можно использовать в качестве компонента вакцины.
Эмульгатор - Термин "эмульгатор" означает субстанцию, используемую для придания эмульсии большей стабильности.
Эмульсия - Термин "эмульсия" означает композицию двух несмешивающихся жидкостей, в которой мелкие капельки одной жидкости суспендированы в непрерывной фазе другой жидкости.
Обработанный нагреванием бактерин - Термин "обработанный нагреванием бактерин" означает бактерин, который был обработан нагреванием и который имеет липазную активность 50% или менее по сравнению с липазной активностью до обработки нагреванием и имеет приемлемую антигенную активность.
Обратная эмульсия - Термин "обратная эмульсия" означает эмульсию воды в масле.
Липаза - Термин "липаза" означает ферменты, эстеразы, липазы и фосфолипазы, которые могут вызывать распад эмульгатора в эмульсионной вакцине.
Нормальная эмульсия - Термин "нормальная эмульсия" означает эмульсию масла в воде.
Эмульсия масла в воде - Термин "эмульсия масла в воде" означает эмульсию, в которой мелкие капельки масла суспендированы в непрерывной водной фазе.
Комнатная температура - Термин "комнатная температура" означает температуру от 18 до 25°С.
Эмульсия воды в масле - Термин "эмульсия воды в масле" означает эмульсию, в которой капельки воды суспендированы в непрерывной масляной фазе.
ОПИСАНИЕ
Это изобретение относится к бактеринам со сниженной липазной активностью, вакцинам, получаемым из таких бактеринов, и способу снижения липазной активности бактеринов. Кроме антигенных компонентов, некоторые бактерины обладают липазной активностью. Когда бактерины с липазной активностью включены в состав эмульсии, липаза может разлагать эмульгаторы, использованные для создания эмульсии. Эмульсионные вакцины, которые содержат бактерины, имеющие высокую липазную активность, имеют тенденцию к нестабильности, а те, которые содержат бактерины, имеющие низкие уровни липазы, имеют тенденцию к стабильности. Примеры бактерий, которые могут, когда они убиты, продуцировать бактерины, имеющие липазную активность, включают
Липаза, которая может разрушать эмульгаторы, используемые для создания эмульсии, и таким образом вызывать нестабильность и распад эмульсии, может включать один или более чем один фермент, разрушающий эмульсии, такой как эстеразы, липазы и фосфолипазы. Все вместе эти ферменты, эстеразы, липазы и фосфолипазы, называют липаза. Липазную активность бактерина можно измерять при использовании синтетического субстрата, называемого О-пивалоилоксиметилумбеллиферон (С-РОМ). Скорость гидролиза, вызываемого липазой, представляет собой меру липазной активности. Скорость реакции гидролиза, вызываемого липазой в этом взаимодействии, отслеживают по увеличению интенсивности флуоресценции продукта липазной активности. Эта скорость реакции зависит от точных условий выбранного гидролитического теста, так что сравнения уровней липазной активности при измерении скоростей гидролиза надо делать при использовании данных, полученных в тесте в одних и тех же условиях. Описанные в литературе способы раскрыты в нескольких статьях, в том числе Kurioka S. and Matsuda М. (1976) Ana. Biochem. 75: 281-289, De Silva NS and Quinn PA. (1987) J. Clin. Microbiol. 25: 729-731 и Grau, A. and Ortiz, A. (1998) Chem. Phys. of Lipids 91: 109-118.
В эмульсионной вакцине разрушение эмульсии вызывает фазовое разделение компонентов. Это является нежелательным, потому что при разделении фаз индивидуальные дозы, извлеченные из контейнера, могут не содержать один и тот же уровень вакцинных компонентов. Вдобавок потеря эмульсии может приводить к потере адъювантной активности эмульгатора и приводить к снижению антигенного эффекта вакцины.
В вакцины часто наряду с бактеринами включают ослабленные живые вирусы. Такие вакцины являются полезными, потому что одну вакцину можно использовать для создания иммунитета к разным заболеваниям. Если в бактерине присутствует липазная активность, она будет вызывать высвобождение эмульгатора из эмульсии. Этот свободный эмульгатор может разрушать и инактивировать вирусы живой вакцины и тем самым приводить к потере вирусной инфекционности.
Бактерин, полезный в вакцинах, можно получать путем культивирования бактерии, представляющей интерес, а затем киллинга бактерий с тем, чтобы получить бактерин, содержащий множество разных бактериальных компонентов, в том числе компоненты клеточной стенки. Бактерии можно убивать множеством разных способов, в том числе экспонированием их таким соединениям, как мертиолат, формалин, формальдегид, диэтиламин, бинарный этиленамин (BEI), бета-пропиолактон (BPL) и глутаральдегид. Можно использовать комбинации этих соединений. Кроме того, бактерии можно убивать стерилизующей радиацией.
Обнаружено, что липазную активность бактерина, имеющего такую липазную активность, можно снизить обработкой нагреванием. Конкретно, липазную активность бактерина можно снизить нагреванием бактерина до температуры от примерно 35 до примерно 80°С с получением обработанного нагреванием бактерина, который имеет приемлемую антигенную активность. Обработку нагреванием осуществляют в течение достаточного времени, так что липазная активность обработанного нагреванием бактерина представляет собой 50% или менее чем 50% той, что находят в бактерине до обработки нагреванием. Для хорошей стабильности эмульсионной вакцины снижение липазной активности до нуля не является необходимым. Авторы обнаружили, что вакцины, имеющие хороший срок хранения, можно получать из обработанных нагреванием бактеринов, имеющих уровень липазной активности, который представляет собой 50% или менее чем 50% уровня липазной активности до обработки нагреванием.
Если в качестве меры липазной активности бактерина используют скорость гидролиза тестового субстрата, то скорость гидролиза тестового субстрат до обработки нагреванием сравнивают со скоростью гидролиза после обработки нагреванием. Обработку нагреванием осуществляют так, что снижают скорость гидролиза до 50% или менее чем 50% скорости гидролиза, которую наблюдали у свежего бактерина.
Точный способ измерения уровня липазной активность не является критическим, так как один и тот же способ используют для измерения активности до обработки нагреванием и активности после обработки нагреванием. Например, если скорость гидролиза тестового субстрата измеряют при использовании одного субстрата, другой субстрат может давать другую скорость. Однако, если один и тот же субстрат используют для определения исходной активности и определения активности после обработки, относительные скорости все равно должны показывать эффект обработки нагреванием.
Для бактеринов, содержащих одно или более чем одно из следующего, Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira grippotyphosa, Leptospira pomona, имеется кодифицированный тест на антигенную активность (9CFR §113.101, §113.102, §113.103, §113.104 и §113.105). Для этих видов приемлемую антигенную активность определяют как способность индуцировать такой защитный иммунный ответ у вакцинированных хомячков, что, когда хомячков подвергают действию гомологичных живых бактерий, по меньшей мере 75% вакцинированных хомячков выживают в модели, где по меньшей мере 80% невакцинированных хомячков не выживают. В случае антигена Leptospira hardjo приемлемую антигенную активность определяют как способность вакцины индуцировать геометрическое среднее титра серологической агглютинации против Leptospira hardjo не меньше чем 40 у телят, которые были вакцинированы вакциной, содержащей бактериальный антиген Leptospira hardjo. Для других бактеринов приемлемую антигенную активность определяют как способность индуцировать защитный иммунный ответ у вакцинированных животных после действия или прохождения кодифицированного теста на действенность с гомологичным живым организмом.
Обработку нагреванием можно осуществлять в диапазоне температур и в течение изменяющегося периода времени. Обычно нагревание можно осуществлять при температуре от примерно 35 до примерно 80°С в течение времени от примерно 20 минут до примерно 24 часов. Когда бактерин нагревают до более высокой температуры, такой как от примерно 75 до примерно 80°С, время нагревания находится в пределах начала диапазона времени. Когда нагревание осуществляют при более низкой температуре, нагревание осуществляют в течение более длительного периода времени. Другая комбинация температуры и времени представляет собой нагревание при температуре от примерно 60 до примерно 70°С в течение времени от примерно 9 до примерно 10 часов. Другая комбинация температуры и времени представляет собой нагревание при температуре от примерно 65 до примерно 70°С в течение времени от примерно 5 до примерно 8 часов. Другая комбинация температуры и времени представляет собой нагревание при температуре от примерно 65 до примерно 70°С в течение времени примерно один час. Другая комбинация температуры и времени представляет собой нагревание при температуре от примерно 55 до примерно 65°С в течение времени от примерно 5 до примерно 8 часов.
Бактерины после обработки нагреванием имеют более низкую липазную активность, чем только что полученные бактерины, но в других отношениях могут быть приготовлены так же, как и только что полученные бактерины. Соответственно обработанные нагреванием бактерины можно включать в состав вакцин обычными способами получения вакцин. Эти способы хорошо известны в данной области.
Эмульсионные вакцины можно получать комбинированием желаемого бактерина с масляной фазой и эмульгатором или эмульгаторами. Эту комбинацию затем подвергают интенсивному перемешиванию с образованием эмульсии. Подходящие способы перемешивания включают гомогенизацию и затем микрофлюидизацию. В комбинацию до эмульгирования можно также включать консерванты и эксципиенты.
Вакцины могут включать как бактерины, так и вирусные антигены. При получении вакцины, которая включает бактерины и вирусные антигены, бактерины, любые вирусные антигены для введения в состав вакцины, эмульгатор или эмульгаторы и возможно консерванты и эксципиенты объединяют с масляной фазой и эмульгируют. После образования эмульсии можно доводить рН препаратов до надлежащего значения рН с помощью растворов NaOH или HCl. При применении вакцин обычно желательно, чтобы значение рН находилось близко к нейтральному, для избежания раздражения в месте инъекции. Обычным является рН от около 7,0 до около 7,3.
Подходящие масляные фазы для получения эмульсионной вакцины включают неметаболизируемые масла и метаболизируемые масла. Неметаболизируемые масла включают минеральные масла, такие как белое минеральное масло и светлое минеральное масло. Метаболизируемые масла включают растительные масла, рыбий жир и синтетические глицериды жирных кислот.
Примерами эмульгаторов, которые можно использовать в получении эмульсионных вакцин по этому изобретению, являются фосфолипиды, сложные эфиры сорбитана, сложные эфиры полиэтоксилированного сорбитана и производные маннита, которые являются обычными эмульгаторами для вакцины. Фосфолипидные эмульгаторы включают лецитин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидилсерин и лецитин (например, такой как AMPHIGEN®). Эмульгаторы, представляющие собой сложные эфиры сорбитана, включают монолаурат сорбитана (например, Span® 20 и Arlacel® 20), моноолеат сорбитана (например, Span® 80 и Arlacel® 80), монопальмитат сорбитана (например, Span® 40 и Arlacel® 40) и моностеарат сорбитана (например, Span® 60 и Arlacel® 60). Сложные эфиры полиэтоксилированного сорбитана включают монолаурат полиэтоксисорбитана (например, Tween® 20 и Tween® 21), моноолеат полиэтоксисорбитана (например, Tween® 80), монопальмитат полиэтоксисорбитана (например, Tween® 40) и моностеарат полиэтоксисорбитана (например, Tween® 60). Эмульгаторы, представляющие собой производное маннита, включают октадекановые эфиры маннита. Span®, Arlacel® и Tween® представляют собой торговые марки ICI Americas. AMPHIGEN® представляет собой торговую марку Pfizer, Inc. Обычно вакцины готовят в виде нормальных эмульсий масла в воде, хотя возможно получение обратных эмульсий воды в масле.
В вакцинах можно использовать множество разных адъювантов, таких как Quil А, холестерин, фосфат алюминия и гидроксид алюминия, и консервантов, таких как мертиолат. Quil А представляет собой очищенную смесь сапонинов килайи, экстрагированных из коры южноамериканского дерева Quillaja Saponaria Molina. Quil А действует прямо на иммунную систему так, что активирует обобщенный статус чувствительности. При этом он индуцирует как гуморальные, так и опосредованные клетками ответы. Липофильная цепь делает возможным взаимодействие антигена и адъюванта для доставки в цитозоль для процессинга эндогенным путем. Quil А часто используют с холестерином, потому что холестерин устраняет менее желательные побочные эффекты при добавлении в надлежащих пропорциях. Холестерин формирует нерастворимые комплексы с Quil А, которые образуют спиралевидные структуры при связывании холестерина с Quil А так, что экспонируют сахарные блоки молекул, которые помогают стимулировать иммунный ответ.
Обычно к вакцинам, содержащим бактерины, добавляют вирусные антигены. Одним из преимуществ этого подхода является то, что одну вакцину можно использовать для создания иммунитета к нескольким заболеваниям вместо необходимости в дозах нескольких разных вакцин для получения того же результата. В вакцинах можно использовать как убитые вирусы, так и ослабленные живые вирусы. Вирусы, которые можно использовать, представляют собой герпес-вирус птиц, герпес-вирусы коров, герпес-вирусы собак, герпес-вирусы лошадей, вирус вирусного ринотрахеита кошек, вирус болезни Марека, герпес-вирус овец, герпес-вирус свиней, вирус псевдобешенства, птичьи парамиксовирусы, коровий респираторный синцитиальный вирус, вирус собачьей чумы, вирус собачьего парагриппа, коровьего парагриппа 3, овечьего парагриппа 3, вирус чумы рогатого скота, вирус пограничной болезни, вирус вирусной диареи коров (BVD), вирус классической лихорадки свиней, вирус птичьего лейкоза, вирус иммунодефицита коров, вирус лейкемии коров, вирус инфекционной анемии лошадей, вирус иммунодефицита кошек, вирус лейкемии кошек, вирус прогрессирующей пневмонии овец, вирус аденокарциномы легких овец, коронавирус собак, коронавирус коров, коронавирус кошачьего энтерита, вирус инфекционного перитонита кошек, вирус эпидемической диареи свиней, вирус гемагглютинирующего энцефаломиелита свиней, свиной парвовирус, вирус инфекционного гастроэнтерита, индюшачий коронавирус, вирус однодневной лихорадки коров, вирус бешенства, вирус везикулярного стоматита, птичьего гриппа, лошадиного гриппа, вирус гриппа свиней, вирус гриппа собак, вирус восточного энцефалита лошадей (ЕЕЕ), вирус венесуэльского энцефалита лошадей и вирус западного энцефалита лошадей.
Если в бактерине присутствует липазная активность, она может вызвать высвобождение эмульгатора из эмульсии. Этот свободный эмульгатор может разрушить оболочку живого вируса и инактивировать вирусы живой вакцины, что приводит к потере вирусной инфекционности. Соответственно обработка бактерина нагреванием служит для стабилизации эмульсии, сохраняет ее адъювантный эффект, а также сохраняет вирусную инфекционность вирусов.
Нижеследующие примеры даны с целью дополнительной иллюстрации и не предназначены ограничивать объем заявленного изобретения.
СПОСОБЫ
Способ 1. Определение мутности
Мутность определяют в нефелометрических единицах (НЕ) способом светорассеяния. Интенсивность света, рассеянного пробой в определенных условиях, сравнивают с интенсивностью света, рассеянного стандартной референтной суспензией. Чем выше интенсивность рассеянного света, тем выше мутность пробы. Источник света направляют на пробу, и рассеяние света измеряют под углом 90° к направлению источника света. Прибор калибруют измерением рассеяния света суспензией формазина.
Калибровка прибора нефелометра
Ультрафильтрованную воду получают фильтрацией дистиллированной воды через мембранный фильтр, имеющий размер пор 0,2 мкм. Первый раствор получают растворением 1,00 г сульфата гидразина, (NH2)H2SO4, в ультрафильтрованной воде и разбавлением ультрафильтрованной водой до 100 мл в мерной колбе. Второй раствор получают растворением 10,00 г гексаметилентетрамина в ультрафильтрованной воде и разбавлением ультрафильтрованной водой до 100 мл в мерной колбе. Суспензию формазина получают перемешиванием 5,0 мл первого раствора с 5,0 мл второго раствора. Смеси дают стоять в течение 24 часов при приблизительно 24°С. Смесь разбавляют до 100 мл ультрафильтрованной водой с образованием маточной мутной суспензии, имеющей мутность 400 НЕ. Суспензию формазина с мутностью 40 НЕ получают разбавлением 10,00 мл маточной мутной суспензии до 100 мл ультрафильтрованной водой. Дополнительные калибровочные растворы получают разбавлением маточного раствора.
Измерение мутности
Пробы для измерения разбавляют ультрафильтрованной водой так, что мутность попадает в пределы калиброванного диапазона нефелометра. Мутность измеряют и исходную мутность вычисляют при использовании нижеследующего уравнения:
Исходная мутность в 
где: М представляет собой мутность разбавленной пробы, в НЕ;
D представляет собой объем воды при разведении, в мл;
О представляет собой исходный объем пробы, в мл.
Способ 2. Анализ липазы
Липазную активность определяли при использовании О-пивалоксиметилумбеллиферона в качестве флуорогенного субстрата. При катализируемом липазой гидролизе этого нефлуоресцентного субстрата получают гидроксиметиловый эфир, который является нестабильным в водных условиях. При разложении нестабильного гидроксиметилового эфира образуется формальдегид и флуоресцентный продукт умбеллиферон. Отслеживание интенсивности флуоресценции продуцируемого умбеллиферона как функции времени дает чувствительный кинетический показатель липазной ферментативной активности.
Растворы О-пивалоксиметилумбеллиферона (Molecular Probes, продукт № Р35901) получали в неразбавленном ДМСО при маточной концентрации 5 мМ; неиспользованный раствор хранили при -20°C в защищенном от света месте. 5-мМ раствор О-пивалоксиметилумбеллиферона разбавляли до 750 мкМ с использованием буфера 58 мМ ТРИС-HCl (рН 8,0) и получившийся раствор предварительно нагревали до 37°С. Пробу Leptospira или контроль буфер/среда центрифугировали в течение 10 минут при комнатной температуре при 6500 g с образованием осадка и супернатанта. Взаимодействия осуществляли при комнатной температуре объединением 15 мкл буфера 100 мМ ТРИС-HCl (рН 8,0) с 15 мкл супернатанта из пробы Leptospira или контроля буфер/среда в аналитических лунках малообъемных 96-луночных планшетов (Corning 3393, несвязывающая поверхность из черного полистирола, половина площади); предварительным инкубированием в течение 10 минут при 37°С; затем инициированием взаимодействия добавлением 20 мкл 750 мкМ О-пивалоксиметилумбеллиферона или контроля буфер/среда. Получившиеся реакционные смеси содержали буфер 53 мМ ТРИС-HCl (рН 8,0) и 0 или 300 мкМ О-пивалоксиметилумбеллиферона. Интенсивность флуоресценции измеряли через интервалы в 30-45 секунд в течение одного часа (Spectramax Gemini XS, 37°С, λех=360 нм, λem=460 нм, установка чувствительности РМТ на средний уровень, 6 считываний с лунки). Скорость взаимодействия определяли по наклону получившейся кривой хода процесса.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Снижение липазной активности путем обработки нагреванием
Для получения бактерина получали пул убитых мертиолатом лептоспир, содержащий следующие виды: Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo и Leptospira pomona. Шесть проб бактерина хранили в течение ночи (приблизительно 12 часов) при 4°С, 37°С, 45°С, 56°С, 65°С и 80°С. Проба, которую хранили при 4°С, служила необработанным контролем. Пробы, которые хранили в течение 12 часов при 4°С, 37°С, 45°С, 56°С, 65°С и 80°С, представляли собой обработанные нагреванием пробы. После хранения скорость, при которой тестовый субстрат гидролизовали в присутствии каждого бактерина, измеряли в соответствии со Способом 2. Скорость гидролиза для пробы, деленная на скорость гидролиза для пробы, которую хранили при 4°С, и помноженная на 100, представляет собой процент исходной липазной активности каждого бактерина, который остается после хранения. В следующей таблице показаны температура хранения и процент исходной липазной активности, который остается после хранения.
| Температура хранение (12 часов) | 4°С | 37°С | 45°С | 56°С | 65°С | 80°С |
| Процент исходной липазной активности | 100% | 55,4% | 32,5% | 15,7% | 10,8% | 8,4% |
Пример 2. Получение экспериментальных вакцинных препаратов
Выращивали культуры Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo и Leptospira pomona. Мутность каждой культуры измеряли в нефелометрических единицах (НЕ). Бактерий убивали при использовании мертиолата с образованием бактеринов. Каждый бактерии обрабатывали нагреванием при 65°С в течение 8 часов для снижения липазной активности. Бактерины объединяли и затем смешивали при использовании AMPHIGEN®, адъювантов, консервантов и буферов для разведения так, что каждая 5-мл доза вакцины содержала компоненты, указанные в таблице ниже. Концентрации антигенов
| Компонент | Концентрация компонента / доза |
| L. canicola | 1200 HE/5-мл доза |
| L. icterohaemorrhagiae | 1200 НЕ/5-мл доза |
| L. grippotyphosa | 1200 НЕ/5-мл доза |
| L. hardjo | 2400 НЕ / 5-мл доза |
| L. pomona | 1200 НЕ/5-мл доза |
Препарат гомогенизировали при использовании гомогенизатора Silverson и подвергали микрофлюидизации при использовании микрофлюидизатора от Microfluidics. После гомогенизации и микрофлюидизации доводили рН препарата до рН 7,0-7,3.
Пример 3. Тестирование действенности на хомячках и коровах
Вакцину Примера 2 вводили хомячкам и коровам для тестирования действенности при использовании стандартных лабораторных моделей и моделей животного-хозяина. Тестовых хомячков подвергали действию дозы Leptospira canicola, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira grippotyphosa или Leptospira pomona для тестирования действенности вакцин. Количества выживших определяли в качестве показателей эффективности. У коров определяли титры микроскопический агглютинации против Leptospira hardjo для демонстрации действенности этой фракции вакцины у коров. Таблица ниже показывает, что вакцины, полученные из обработанных нагреванием бактеринов Leptospira, способны вызывать антигенный ответ, который соответствует критериям эффективности.
| Термальное кондиционирование Leptospira | Выжившие хомячки | Серология у коров | |||
| Canicola | Icteero | Grippo | Pomona | Hardjo | |
| 65°С (8 часов) | 10/10 | 10/10 | 10/10 | 10/10 | Соответствует |
| Без обработки | 10/10 | 10/10 | 10/10 | 10/10 | Соответствует |
Пример 4. Физико-химическое тестирование вакцин
Вакцину получали из обработанных нагреванием бактеринов Leptospira в соответствии со способом Примера 2. Такую же вакцину получали из не обработанных нагреванием бактеринов Leptospira в соответствии со способом Примера 2. Оба вакцинных препарата хранили при 4°С в течение 60 суток. Анализ размера частиц при использовании лазерного дифрактометра делали для каждой только что полученной вакцины в день 0 и снова через 60 суток.
Графики, приведенные ниже, показывают распределения размеров частиц для каждой вакцины в день 0 до хранения и после хранения в течение 60 суток.
Анализ размеров частиц только что полученной вакцины, содержащей не обработанные нагреванием бактерины Leptospira, в день 0.
Анализ размеров частиц только что полученной вакцины, содержащей не обработанные нагреванием бактерины Leptospira, на 60-е сутки.
Анализ размеров частиц только что полученной вакцины, содержащей обработанные нагреванием бактерины Leptospira, в день 0.
Анализ размеров частиц только что полученной вакцины, содержащей обработанные нагреванием бактерины Leptospira, на 60-е сутки.
Вакцина, полученная из обработанных нагреванием бактеринов Leptospira, показывает сохранение размеров частиц, что указывает на стабильность эмульсии. Вакцина, полученная из не обработанных нагреванием бактеринов Leptospira, показывает увеличение размеров частиц, что указывает на распад эмульсии.
Пример 5. Анализ вирулицидности
Следуя способу Примера 2, получали вакцины из не обработанных нагреванием бактеринов Leptospira и обработанных нагреванием бактеринов Leptospira. После 5-6 месяцев старения тестировали вакцины на вирулицидную активность против вируса BHY-1, вируса PI3 и вируса BRSV. Тест на вирулицидную активность осуществляли регидратацией моновалентных контролей для анализа вирулицидности (VAC) адъювантным разбавителем, подлежащим тестированию. Два моновалентного контроля для анализа вирулицидности регидратировали при каждом объеме дозы. Два регидратированных моновалентных VAC объединяли в пул и инкубировали при 20-25°С в течение двух часов перед титрованием и инокуляцией на клетки для определения титра живых вирусов по TCID50 (доза, инфицирующая 50% культуры ткани). Неудовлетворительной является потеря вирусного титра больше чем 0,7 TCID50/мл.
Результаты анализов вирулицидности, показывающие потерю вирусного титра, приведены в таблице ниже.
| Термальное кондиционирование Leptospira | Потеря вирусного титра (TCID50) | ||
| BHY-1 | PI3 | BRSV | |
| 8 часов при 65°С | 0,1 | 0,0 | 0,4 |
| Без обработки | 1,0 | ≥1,2 | ≥1,3 |
Вакцина, полученная с не обработанными нагреванием бактеринами Leptospira, показывает высокие уровни вирулицидной активности. Вакцина, полученная с обработанными нагреванием бактеринами Leptospira, была не вирулицидной.
Claims (14)
1. Обработанный нагреванием бактерин, содержащий суспензию убитых бактерий Leptospira, имеющий липазную активность 50% или менее по сравнению с липазной активностью бактерина до обработки нагреванием.
2. Обработанный нагреванием бактерин по п.1, где обработка нагреванием включает нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение времени от примерно 20 мин до примерно 24 ч.
3. Обработанный нагреванием бактерин по п.1, где обработка нагреванием включает нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 60 до примерно 70°С в течение времени от примерно 9 до примерно 10 ч.
4. Обработанный нагреванием бактерин по п.1, где обработка нагреванием включает нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 65 до примерно 70°С в течение времени от около 5 до около 8 ч.
5. Обработанный нагреванием бактерин, содержащий суспензию убитых бактерий, по п.1, где обработка нагреванием включает нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 65 до примерно 70°С в течение времени примерно 1 ч.
6. Обработанный нагреванием бактерин, содержащий суспензию убитых бактерий, по п.1, где обработка нагреванием включает нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 55 до примерно 65°С в течение времени от примерно 5 до примерно 8 ч.
7. Обработанный нагреванием бактерин, содержащий суспензию убитых бактерий, по п.2, где убитые бактерии представляют собой от одного до пяти видов Leptospira, выбранных из группы, состоящей из Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae и Leptospira pomona.
8. Вакцина для индукции защитного иммунного ответа против Leptospira, содержащая эмульсию и обработанный нагреванием бактерин по п.1.
9. Способ получения обработанного нагреванием бактерина по п.1, включающий нагревание бактерина, имеющего липазную активность, до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение времени от примерно 20 мин до примерно 24 ч.
10. Способ получения обработанного нагреванием бактерина по п.1, включающий
а) измерение липазной активности бактерина;
б) нагревание бактерина до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение времени от примерно 20 мин до примерно 24 ч;
в) измерение липазной активности бактерина после обработки нагреванием;
г) сравнение липазной активности бактерина до нагревания с липазной активностью бактерина после нагревания;
д) выбор обработанного нагреванием бактерина, у которого липазная активность после обработки нагреванием составляет 50% или менее по сравнению с липазной активностью бактерина до обработки нагреванием.
а) измерение липазной активности бактерина;
б) нагревание бактерина до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение времени от примерно 20 мин до примерно 24 ч;
в) измерение липазной активности бактерина после обработки нагреванием;
г) сравнение липазной активности бактерина до нагревания с липазной активностью бактерина после нагревания;
д) выбор обработанного нагреванием бактерина, у которого липазная активность после обработки нагреванием составляет 50% или менее по сравнению с липазной активностью бактерина до обработки нагреванием.
11. Способ по п.9, где бактерин содержит суспензию от одного до пяти убитых видов Leptospira, выбранных из группы, состоящей из Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae и Leptospira pomona.
12. Способ по п.10, где бактерин содержит суспензию от одного до пяти убитых видов Leptospira, выбранных из группы, состоящей из Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira hardjo, Leptospira icterohaemorrhagiae и Leptospira pomona.
13. Обработанный нагреванием бактерин, содержащий суспензию убитых бактерий Leptospira, имеющий липазную активность 50% или менее по сравнению с липазной активностью бактерина до обработки нагреванием, полученный:
а) образованием бактерина, имеющего липазную активность;
б) нагреванием этого бактерина до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение периода времени, достаточного для снижения липазной активности до уровня 50% или менее по сравнению с уровнем до обработки нагреванием.
а) образованием бактерина, имеющего липазную активность;
б) нагреванием этого бактерина до температуры от примерно 45 до примерно 80°С в течение периода времени, достаточного для снижения липазной активности до уровня 50% или менее по сравнению с уровнем до обработки нагреванием.
14. Бактерин по п.13, где период времени, достаточный для снижения липазной активности до уровня 50% или менее по сравнению с уровнем до обработки нагреванием, составляет от примерно 20 мин до примерно 24 ч.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US84366506P | 2006-09-11 | 2006-09-11 | |
| US60/843,665 | 2006-09-11 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011115400/10A Division RU2569457C2 (ru) | 2006-09-11 | 2011-04-20 | Эмульсионная вакцина, полученная из обработанного нагреванием бактерина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009108004A RU2009108004A (ru) | 2010-10-20 |
| RU2425692C2 true RU2425692C2 (ru) | 2011-08-10 |
Family
ID=39110574
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009108004/10A RU2425692C2 (ru) | 2006-09-11 | 2007-08-30 | Обработанный нагреванием бактерин (варианты), способ получения такого бактерина (варианты) и вакцина, содержащая такой бактерин |
| RU2011115400/10A RU2569457C2 (ru) | 2006-09-11 | 2011-04-20 | Эмульсионная вакцина, полученная из обработанного нагреванием бактерина |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011115400/10A RU2569457C2 (ru) | 2006-09-11 | 2011-04-20 | Эмульсионная вакцина, полученная из обработанного нагреванием бактерина |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8491915B2 (ru) |
| EP (2) | EP2377550B1 (ru) |
| JP (2) | JP5550341B2 (ru) |
| KR (1) | KR101238486B1 (ru) |
| CN (1) | CN101516393B (ru) |
| AR (1) | AR062758A1 (ru) |
| AU (1) | AU2007297287B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0716548B1 (ru) |
| CA (1) | CA2663166C (ru) |
| CL (1) | CL2007002621A1 (ru) |
| CO (1) | CO6160333A2 (ru) |
| DK (2) | DK2377550T3 (ru) |
| ES (2) | ES2535977T3 (ru) |
| ME (1) | ME00598B (ru) |
| MX (1) | MX2009001849A (ru) |
| NO (1) | NO339147B1 (ru) |
| NZ (2) | NZ574896A (ru) |
| PL (2) | PL2066340T3 (ru) |
| PT (1) | PT2066340E (ru) |
| RS (1) | RS54981B1 (ru) |
| RU (2) | RU2425692C2 (ru) |
| SI (1) | SI2066340T1 (ru) |
| TW (1) | TWI361077B (ru) |
| UA (1) | UA98115C2 (ru) |
| WO (1) | WO2008032158A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200902493B (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106562927A (zh) * | 2007-12-21 | 2017-04-19 | 硕腾服务有限责任公司 | 经热处理的菌苗，及由这些经热处理的菌苗制备的乳剂疫苗 |
| EP2717055A1 (en) * | 2012-10-04 | 2014-04-09 | Institut Pasteur | Use of Leptospira fainei serovar Hurstbridge bacteria for diagnosing leptospirosis |
| EP4237075A4 (en) * | 2020-05-26 | 2024-12-04 | Cyrus 21st Century Entrepreneurship LLC | KAKIM POUR CINA'S G AND ZODA-E |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2030915C1 (ru) * | 1990-10-31 | 1995-03-20 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Вакцина против лептоспироза животных |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3721169A1 (de) * | 1986-06-30 | 1988-01-14 | Lion Corp | Orale zubereitung |
| US5084269A (en) | 1986-11-06 | 1992-01-28 | Kullenberg Fred W | Adjuvant for dose treatment with antigens |
| US6248329B1 (en) * | 1998-06-01 | 2001-06-19 | Ramaswamy Chandrashekar | Parasitic helminth cuticlin nucleic acid molecules and uses thereof |
| AU2001234616A1 (en) | 2000-01-31 | 2001-08-07 | Vic Jira | Vaccine composition, process and methods |
| US20030147914A1 (en) | 2001-07-02 | 2003-08-07 | Pfizer Inc. | Mycoplasma bovis vaccine and methods of reducing pneumonia in animals |
| EA011578B1 (ru) | 2002-08-26 | 2009-04-28 | Пфайзер Продактс Инк. | Иммуногенная композиция для защиты крупного рогатого скота от инфекций респираторной и репродуктивной систем и ее применение |
| WO2004026024A2 (en) | 2002-09-20 | 2004-04-01 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Vaccine compositions and adjuvant |
| AU2002951692A0 (en) | 2002-09-23 | 2002-10-17 | Vital Biotech (Hong Kong) Limited | Improvements in or relating to vaccines |
| PL378001A1 (pl) * | 2003-01-29 | 2006-02-20 | Pfizer Products Inc. | Szczepionki przeciw Bordetella bronchiseptica dla psów |
| CA2521051C (en) * | 2003-04-04 | 2012-03-20 | Pfizer Products Inc. | Microfluidized oil-in-water emulsions and vaccine compositions |
-
2007
- 2007-08-30 MX MX2009001849A patent/MX2009001849A/es active IP Right Grant
- 2007-08-30 AU AU2007297287A patent/AU2007297287B2/en active Active
- 2007-08-30 ME MEP-2009-75A patent/ME00598B/me unknown
- 2007-08-30 WO PCT/IB2007/002553 patent/WO2008032158A2/en not_active Ceased
- 2007-08-30 PL PL07804880T patent/PL2066340T3/pl unknown
- 2007-08-30 CA CA2663166A patent/CA2663166C/en active Active
- 2007-08-30 UA UAA200902099A patent/UA98115C2/ru unknown
- 2007-08-30 KR KR1020097004968A patent/KR101238486B1/ko active Active
- 2007-08-30 CN CN200780033767.2A patent/CN101516393B/zh active Active
- 2007-08-30 JP JP2009527907A patent/JP5550341B2/ja active Active
- 2007-08-30 EP EP11173797.9A patent/EP2377550B1/en active Active
- 2007-08-30 EP EP07804880.8A patent/EP2066340B1/en active Active
- 2007-08-30 RU RU2009108004/10A patent/RU2425692C2/ru active
- 2007-08-30 NZ NZ574896A patent/NZ574896A/en unknown
- 2007-08-30 ES ES11173797.9T patent/ES2535977T3/es active Active
- 2007-08-30 DK DK11173797T patent/DK2377550T3/en active
- 2007-08-30 DK DK07804880.8T patent/DK2066340T3/da active
- 2007-08-30 NZ NZ595748A patent/NZ595748A/xx unknown
- 2007-08-30 SI SI200731337T patent/SI2066340T1/sl unknown
- 2007-08-30 PT PT78048808T patent/PT2066340E/pt unknown
- 2007-08-30 ES ES07804880T patent/ES2432392T3/es active Active
- 2007-08-30 RS RS20090088A patent/RS54981B1/sr unknown
- 2007-08-30 PL PL11173797T patent/PL2377550T3/pl unknown
- 2007-08-30 BR BRPI0716548-0A patent/BRPI0716548B1/pt active IP Right Grant
- 2007-09-07 US US11/851,951 patent/US8491915B2/en active Active
- 2007-09-10 TW TW096133683A patent/TWI361077B/zh active
- 2007-09-10 CL CL200702621A patent/CL2007002621A1/es unknown
- 2007-09-11 AR ARP070104028A patent/AR062758A1/es not_active Application Discontinuation
-
2009
- 2009-02-16 NO NO20090745A patent/NO339147B1/no unknown
- 2009-03-10 CO CO09024344A patent/CO6160333A2/es unknown
- 2009-04-09 ZA ZA200902493A patent/ZA200902493B/xx unknown
-
2011
- 2011-04-20 RU RU2011115400/10A patent/RU2569457C2/ru active
-
2014
- 2014-01-14 JP JP2014004122A patent/JP5643906B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2030915C1 (ru) * | 1990-10-31 | 1995-03-20 | Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов | Вакцина против лептоспироза животных |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ZEIGLER J.A. et al., Immunization against leptospirosis; vaccine trials with heat-killed whole cell and outer envelope antigens, Bulletin of the Pan American Health Organization, 1976, Vol.X, №2, p.126-130. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101254848B1 (ko) | 열 처리된 박테린, 및 상기 열 처리된 박테린으로부터 제조된 에멀젼 백신 | |
| RU2425692C2 (ru) | Обработанный нагреванием бактерин (варианты), способ получения такого бактерина (варианты) и вакцина, содержащая такой бактерин | |
| HK1236440A1 (en) | Heat treated bacterins, and emulsion vaccines prepared from such heat treated bacterins | |
| HK1145464A (en) | Heat treated bacterins, and emulsion vaccines prepared from such heat treated bacterins | |
| HK1130202B (en) | Heat treated bacterins, and emulsion vaccines prepared from such heat treated bacterins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20150617 |
|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20150918 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner |