[go: up one dir, main page]

RU2402608C2 - Method of producing 4-hydroxy-l-isoleucine - Google Patents

Method of producing 4-hydroxy-l-isoleucine Download PDF

Info

Publication number
RU2402608C2
RU2402608C2 RU2007135817/10A RU2007135817A RU2402608C2 RU 2402608 C2 RU2402608 C2 RU 2402608C2 RU 2007135817/10 A RU2007135817/10 A RU 2007135817/10A RU 2007135817 A RU2007135817 A RU 2007135817A RU 2402608 C2 RU2402608 C2 RU 2402608C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amino acid
isoleucine
acid sequence
protein
seq
Prior art date
Application number
RU2007135817/10A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2007135817A (en
Inventor
Сергей Васильевич Смирнов (RU)
Сергей Васильевич Смирнов
Наталья Николаевна САМСОНОВА (RU)
Наталья Николаевна Самсонова
Вероника Александровна КОТЛЯРОВА (RU)
Вероника Александровна КОТЛЯРОВА
Наталия Юрьевна РУШКЕВИЧ (RU)
Наталия Юрьевна РУШКЕВИЧ
Юрий Иванович Козлов (RU)
Юрий Иванович Козлов
Томохиро КОДЕРА (JP)
Томохиро КОДЕРА
Сакаю СИМИЗУ (JP)
Сакаю СИМИЗУ
Джюн ОГАВА (JP)
Джюн ОГАВА
Макото ХИБИ (JP)
Макото ХИБИ
Original Assignee
Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Аджиномото Ко., Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ), Аджиномото Ко., Инк. filed Critical Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Publication of RU2007135817A publication Critical patent/RU2007135817A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2402608C2 publication Critical patent/RU2402608C2/en

Links

Images

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention represents method of obtaining 4-hydroxyisoleucine or its salt, including stage of obtaining 4-hydroxyisoleucine by hydroxylation of isoleucine or its salt in presence of L-isoleucinedioxygenase, obtained from bacterium belonging to genus Bacillus, and producing 4-hydroxyisoleucine from isoleucine. Invention also relates to L-isoleicindioxygenese, DNA fragment, which codes it, method of its obtaining and application in method of 4-hydroxyisoleucine obtaining.
EFFECT: invention allows to obtain 4-hydroxyisoleucine with high degree of efficiency.
19 cl, 20 dwg, 14 tbl, 9 ex

Description

Текст описания приведен в факсимильном виде.

Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
The text of the description is given in facsimile form.
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070

Claims (19)

1. Способ получения 4-гидроксиизолейцина или его соли, включающий стадию получения 4-гидроксиизолейцина гидроксилированием изолейцина или его соли в присутствии L-изолейциндиоксигеназы, полученной из бактерии, принадлежащей к роду Bacillus, и продуцирующей 4-гидроксиизолейцин из изолейцина.1. A method for producing 4-hydroxyisoleucine or its salt, comprising the step of producing 4-hydroxyisoleucine by hydroxylation of isoleucine or its salt in the presence of L-isoleucine dioxygenase derived from a bacterium belonging to the genus Bacillus and producing 4-hydroxyisoleucine from isoleucine. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что бактерия, принадлежащая к роду Bacillus, выбрана из группы, состоящей из Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Bacillus sphaericus, Bacillus cereus, и Bacillus weihenstephanensis.2. The method according to claim 1, characterized in that the bacterium belonging to the genus Bacillus is selected from the group consisting of Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis, Bacillus sphaericus, Bacillus cereus, and Bacillus weihenstephanensis. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакция гидроксилирования осуществляется в присутствии лизата клеток, приготовленного из микробных клеток в логарифмической фазе роста.3. The method according to claim 1, characterized in that the hydroxylation reaction is carried out in the presence of a cell lysate prepared from microbial cells in a logarithmic growth phase. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что гидроксилаза обладает следующими свойствами:
(a) в качестве кофакторов требуются Fe2+, аскорбиновая кислота и α-кетоглутаровая кислота,
(b) имеет оптимальный рН реакции от 5 до 8,
(c) имеет оптимальную температуру реакции 45°С и ниже,
(d) инактивируется при 50°С и выше, и
(e) ингибируется ЭДТА, Cu2+ и Zn2+.4. The method according to claim 1, characterized in that hydroxylase has the following properties:
(a) Fe 2+ , ascorbic acid and α-ketoglutaric acid are required as cofactors,
(b) has an optimum reaction pH of 5 to 8,
(c) has an optimum reaction temperature of 45 ° C or lower,
(d) inactivated at 50 ° C and above, and
(e) inhibited by EDTA, Cu 2+ and Zn 2+ . 5. L-изолейциндиоксигеназа, обладающая следующими свойствами и выделяемая из бактерии, принадлежащей к роду Bacillus:
(a) в качестве кофакторов требуются Fe2+ аскорбиновая кислота и α-кетоглутаровая кислота,
(b) имеет оптимальный рН реакции от 5 до 8,
(c) имеет оптимальную температуру реакции 45°С и ниже,
(d) инактивируется при 50°С и выше,
(e) ингибируется ЭДТА, Cu2+ и Zn2+,
(f) включает субъединицы, имеющие молекулярную массу 29,000±2,000, что определяется при электрофорезе в SDS-полиакриламидном геле, и
(g) имеет на N-конце аминокислотную последовательность SEQ ID Nо:5.5. L-isoleucine dioxygenase, which has the following properties and is isolated from bacteria belonging to the genus Bacillus:
(a) Fe 2+ ascorbic acid and α-ketoglutaric acid are required as cofactors,
(b) has an optimum reaction pH of 5 to 8,
(c) has an optimum reaction temperature of 45 ° C or lower,
(d) inactivated at 50 ° C and above,
(e) inhibited by EDTA, Cu 2+ and Zn 2+ ,
(f) includes subunits having a molecular weight of 29,000 ± 2,000 as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and
(g) has at the N-terminus the amino acid sequence of SEQ ID N about : 5. 6. L-изолейциндиоксигеназа по п.5, отличающаяся тем, что бактерией, принадлежащей к роду Bacillus является бактерия Bacillus thuringiensis.6. L-isoleucine dioxygenase according to claim 5, characterized in that the bacterium belonging to the genus Bacillus is the bacterium Bacillus thuringiensis. 7. Фрагмент ДНК, кодирующий белок, обладающий активностью L-изолейциндиоксигеназы, выбранный из группы, состоящей из:
(a) фрагмента ДНК, включающего нуклеотидную последовательность, приведенную в Перечне последовательностей под номером 1 (SEQ ID No:1);
(b) фрагмента ДНК, который гибридизуется в жестких условиях с фрагментом ДНК, имеющим нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидной последовательности SEQ ID No:1;
(c) фрагмента ДНК, который кодирует белок, включающий аминокислотную последовательность, приведенную в Перечне последовательностей под номером 2 (SEQ ID No:2);
(d) фрагмента ДНК, который кодирует белок с аминокислотной последовательностью, которая содержит замену, делецию, вставку, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No:2; и
(e) фрагмента ДНК, который кодирует белок с аминокислотной последовательностью, которая по крайней мере на 98% гомологична аминокислотной последовательности SEQ ID No:2.7. A DNA fragment encoding a protein having L-isoleucine dioxygenase activity selected from the group consisting of:
(a) a DNA fragment comprising the nucleotide sequence shown in the List of sequences under the number 1 (SEQ ID No: 1);
(b) a DNA fragment that hybridizes under stringent conditions with a DNA fragment having a nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of SEQ ID No: 1;
(c) a DNA fragment that encodes a protein comprising the amino acid sequence shown in the List of sequences under number 2 (SEQ ID No: 2);
(d) a DNA fragment that encodes a protein with an amino acid sequence that contains the substitution, deletion, insertion, addition or inversion of one or more amino acid residues in the amino acid sequence of SEQ ID No: 2; and
(e) a DNA fragment that encodes a protein with an amino acid sequence that is at least 98% homologous to the amino acid sequence of SEQ ID No: 2. 8. Рекомбинантный экспрессирующийся фрагмент ДНК, полученный путем лигирования фрагмента ДНК по п.7 в ДНК вектора.8. Recombinant expressed DNA fragment obtained by ligation of the DNA fragment according to claim 7 in the DNA of the vector. 9. Бактериальная клетка, трансформированная рекомбинантным фрагментом ДНК по п.8 и обладающая способностью к продукции L-изолейциндиоксигеназы по п.5.9. A bacterial cell transformed with the recombinant DNA fragment of claim 8 and having the ability to produce L-isoleucine dioxygenase according to claim 5. 10. Способ получения белка, обладающего активностью L-изолейциндиоксигеназы, включающий: выращивание клеток по п.9 в питательной среде; и накопление белка, обладающего активностью L-изолейциндиоксигеназы, в культуральной среде, в клетках, либо в них обоих.10. A method of producing a protein having L-isoleucine dioxygenase activity, comprising: growing cells according to claim 9 in a nutrient medium; and accumulation of a protein having L-isoleucine dioxygenase activity in the culture medium, in the cells, or in both of them. 11. Белок, обладающий активностью L-изолейциндиоксигеназы, выбранный из группы, состоящей из:
(h) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No:2;
(i) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, вставку, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No:2,; и
(j) белка, который по крайней мере на 98% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No:2.11. A protein having L-isoleucine dioxygenase activity selected from the group consisting of:
(h) a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID No: 2;
(i) a protein having an amino acid sequence that contains the substitution, deletion, insertion, addition or inversion of one or more amino acid residues in the amino acid sequence of SEQ ID No: 2 ,; and
(j) a protein that is at least 98% homologous to the amino acid sequence of SEQ ID No: 2. 12. Способ получения (2S,3R,4S)-4-гидpoкcи-L-изoлeйцинa или его соли, включающий стадии;
взаимодействия L-изолейцина в водном растворе в присутствии по крайней мере одной L-изолейциндиоксигеназы, выбранной из группы, состоящей из:
(f) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21;
(g) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, вставку, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21, и обладающего активностью L-изолейциндиоксигеназы; и (h) белка, который по крайней мере на 70% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21, и обладает активностью L-изолейциндиоксигеназы; и
выделения полученного (2S,3R,4S)-4-гидрокси-L-изолейцина.12. A method for producing (2S, 3R, 4S) -4-hydroxy-L-isoleucine or a salt thereof, comprising the steps of:
the interaction of L-isoleucine in an aqueous solution in the presence of at least one L-isoleucine dioxygenase selected from the group consisting of:
(f) a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21;
(g) a protein having an amino acid sequence that contains the substitution, deletion, insertion, addition or inversion of one or more amino acid residues in the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21, and having L-isoleucine dioxygenase activity; and (h) a protein that is at least 70% homologous to the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21, and has L-isoleucine dioxygenase activity; and
isolating the resulting (2S, 3R, 4S) -4-hydroxy-L-isoleucine. 13. Способ получения (2S,3R,4S)-4-гидрокси-L-изолейцина или его соли, включающий стадии:
взаимодействия L-изолейцина в водном растворе в присутствии бактерии, содержащей L-изолейциндиоксигеназу, выбранную из группы, состоящей из:
(f) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21;
(g) белка, имеющего аминокислотную последовательность, которая содержит замену, делецию, вставку, добавление или инверсию одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21, и обладающего активностью L-изолейциндиоксигеназы; и (h) белка, который по крайней мере на 70% гомологичен аминокислотной последовательности SEQ ID No:2, 8, 13, 17, или 21, и обладает активностью L-изолейциндиоксигеназы;
и выделения полученного (2S,3R,4S)-4-гидрокси-L-изолейцина.13. A method of obtaining (2S, 3R, 4S) -4-hydroxy-L-isoleucine or its salt, comprising the steps of:
the interaction of L-isoleucine in an aqueous solution in the presence of a bacterium containing L-isoleucine dioxygenase selected from the group consisting of:
(f) a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21;
(g) a protein having an amino acid sequence that contains the substitution, deletion, insertion, addition or inversion of one or more amino acid residues in the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21, and having L-isoleucine dioxygenase activity; and (h) a protein that is at least 70% homologous to the amino acid sequence of SEQ ID No: 2, 8, 13, 17, or 21, and has L-isoleucine dioxygenase activity;
and isolating the resulting (2S, 3R, 4S) -4-hydroxy-L-isoleucine. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что бактерия модифицирована таким образом, что активность L-изолейциндиоксигеназы в такой бактерии увеличена.14. The method according to item 13, wherein the bacterium is modified so that the activity of L-isoleucine dioxygenase in such a bacterium is increased. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что активность L-изолейциндиоксигеназы увеличена путем усиления экспрессии гена, кодирующего указанную L-изолейциндиоксигеназу.15. The method according to 14, characterized in that the activity of L-isoleucine dioxygenase is increased by enhancing the expression of a gene encoding the specified L-isoleucine dioxygenase. 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что экспрессия L-изолейциндиоксигеназы усилена путем изменения последовательности, контролирующей экспрессию гена, кодирующего L-изолейциндиоксигеназу, или путем увеличения количества копий гена, кодирующего L-изолейциндиоксигеназу.16. The method according to clause 15, wherein the expression of L-isoleucine dioxygenase is enhanced by changing the sequence that controls the expression of the gene encoding L-isoleucine dioxygenase, or by increasing the number of copies of the gene encoding L-isoleucine dioxygenase. 17. Способ по п.13, отличающийся тем, что бактерия принадлежит к роду Escherichia, Pseudomonas, Corynebacterium, Arthrobacter, Aspergillus или Bacillus.17. The method according to item 13, wherein the bacterium belongs to the genus Escherichia, Pseudomonas, Corynebacterium, Arthrobacter, Aspergillus or Bacillus. 18. Способ по п.17, отличающийся тем, что указанной бактерией является бактерия Escherichia coli, Arthrobacter simplex, Corynebacterium glutamicum, Arthrobactor globiformis, Arthrobactor sulfureus, Arthrobactor viscosus или Bacillus subtilis.18. The method according to 17, characterized in that the bacterium is the bacterium Escherichia coli, Arthrobacter simplex, Corynebacterium glutamicum, Arthrobactor globiformis, Arthrobactor sulfureus, Arthrobactor viscosus or Bacillus subtilis. 19. Способ по п.13, отличающийся тем, что бактерией является культура бактериальных клеток, бактериальные клетки, обработанные бактериальные клетки или клеточный лизат. 19. The method according to item 13, wherein the bacterium is a culture of bacterial cells, bacterial cells, treated bacterial cells or cell lysate.
RU2007135817/10A 2006-09-28 2007-09-27 Method of producing 4-hydroxy-l-isoleucine RU2402608C2 (en)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2006265452 2006-09-28
JPJP2006-265452 2006-09-28
JP2006345461 2006-12-22
JPJP2006-345461 2006-12-22

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007104645 Substitution 2006-09-28 2007-02-07

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007135817A RU2007135817A (en) 2009-04-10
RU2402608C2 true RU2402608C2 (en) 2010-10-27

Family

ID=41014380

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007135817/10A RU2402608C2 (en) 2006-09-28 2007-09-27 Method of producing 4-hydroxy-l-isoleucine

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2402608C2 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030219880A1 (en) * 2000-03-27 2003-11-27 Jamal Ouazzani Method for preparing (2s,3r,4s)-4-hydroxyisoleucine and analogues thereof
US20070043240A1 (en) * 2003-05-07 2007-02-22 Charles Mioskowski Method for the synthesis of 4-hydroxyisoleucine and the derivatives thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030219880A1 (en) * 2000-03-27 2003-11-27 Jamal Ouazzani Method for preparing (2s,3r,4s)-4-hydroxyisoleucine and analogues thereof
EP1268397B1 (en) * 2000-03-27 2007-12-05 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Method for preparing (2s,3r,4s)-4-hydroxyisoleucine and analogues thereof
US20070043240A1 (en) * 2003-05-07 2007-02-22 Charles Mioskowski Method for the synthesis of 4-hydroxyisoleucine and the derivatives thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAEFELE С et.al. Characterization of dioxygenase from Trigonella foenumgraecum involved in 4-hydroxyisoleucine biosynthesis. Phytochemistry 1997, 44(4), p.563-6. *
ЛЕНИНДЖЕР А. Основы биохимии, том 2. - М.: Мир, 1985, Глава 19. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2007135817A (en) 2009-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2008173116A5 (en)
RU2007147436A (en) BACTERIA-PRODUCER (2S, 3R, 4S) -4-HYDROXY-L-ISOLEUCIN AND METHOD FOR PRODUCTION (2S, 3R, 4S) -4-HYDROXY-L-ISOLEUCIN
Kim et al. Cloning and expression of the nitrile hydratase and amidase genes from Bacillus sp. BR449 into Escherichia coli
RU2504584C2 (en) METHOD FOR OBTAINING PYRROLOQUINOLINE QUINONE (PQQ) USING BACTERIUM OF Methylobacterium OR Hyphomicrobium TYPE
CN113969269B (en) D-amino acid oxidase mutant and application thereof in preparation of L-glufosinate
RU2014132203A (en) NEW METANOLDEHYDROGENASE ENZYMES FROM Bacillus
RU2338784C2 (en) New aldolase, dna coding aldlase, cells transformed by dna, method of aldolase obtaining and method of obtaining of 4-hydroxy-l-isoleucine (versions)
JP2008504829A (en) Novel Bacillus licheniformis gene product producing odorous substances and improved biotechnological production method based on it
Wang et al. Heterologous expression of mlrA gene originated from Novosphingobium sp. THN1 to degrade microcystin-RR and identify the first step involved in degradation pathway
CN101463358A (en) Nitrile hydratase gene cluster and use thereof
JP3154633B2 (en) Regulators for nitrilase gene expression and their genes
CN104673734B (en) Engineering bacteria for producing β-alanine and method for producing β-alanine
CN108998462B (en) Escherichia coli expression system for recombinant protein containing manganese ions and its application method
RU2402608C2 (en) Method of producing 4-hydroxy-l-isoleucine
JP2011200133A (en) Method for producing genetically modified microorganism
JP6487852B2 (en) 2-deoxy-shiro-inosose reductase
WO2006062189A1 (en) Transformant expressing nitrile hydratase
WO2018196881A1 (en) Glucose oxidase cngoda and gene and application thereof
US7989184B2 (en) Endoribonuclease
RU2007140878A (en) NEW 4-HYDROXY-L-ISOLEUCINDEHYDROGENASE AND METHOD FOR PRODUCING 2-AMINO-3-METHYL-4-KETOPENTANOATE
JP2004298185A (en) Novel thermostable protein with phosphoglycerate dehydrogenase activity
JP5354710B2 (en) Highly active catalase-producing microorganism and use thereof
Kumano et al. Nitrile-synthesizing enzyme: Gene cloning, overexpression and application for the production of useful compounds
JP4652426B2 (en) Method for producing heat-treated bacterial cell solution containing nitrile hydratase
JP2009118782A (en) Novel collagenolytic enzymes and their use