RU2498995C2 - Пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis - Google Patents
Пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2498995C2 RU2498995C2 RU2010144778/10A RU2010144778A RU2498995C2 RU 2498995 C2 RU2498995 C2 RU 2498995C2 RU 2010144778/10 A RU2010144778/10 A RU 2010144778/10A RU 2010144778 A RU2010144778 A RU 2010144778A RU 2498995 C2 RU2498995 C2 RU 2498995C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- formula
- alkyl
- alkylene
- labyrinthopeptin
- Prior art date
Links
- 241001065356 Actinomadura namibiensis Species 0.000 title claims abstract description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 111
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims abstract description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract 3
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 19
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 108010088622 labyrinthopeptin A2 Proteins 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 claims description 11
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 24
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 12
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 11
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 10
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 7
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000937413 Axia Species 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- -1 alkyl compound Chemical class 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 4
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N propylphosphonic anhydride Substances CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- RZYHXKLKJRGJGP-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoro-n,n-bis(trimethylsilyl)acetamide Chemical compound C[Si](C)(C)N([Si](C)(C)C)C(=O)C(F)(F)F RZYHXKLKJRGJGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine Chemical compound COC1=NC(Cl)=NC(OC)=N1 GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150109698 A2 gene Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010007577 Exodeoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 2
- 102000008779 Exonuclease 1 Human genes 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 2
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N oxybenzone Chemical compound OC1=CC(OC)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 DXGLGDHPHMLXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- GLBZTEXOKUGEES-UHFFFAOYSA-N CC(C(CC(O)=O)N)=O Chemical compound CC(C(CC(O)=O)N)=O GLBZTEXOKUGEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 230000010777 Disulfide Reduction Effects 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241001468239 Streptomyces murinus Species 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001351 alkyl iodides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2,7, Chemical compound [Co+3].N#[C-].C1([C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)[N-]\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O FDJOLVPMNUYSCM-UVKKECPRSA-L 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 150000008050 dialkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004141 dimensional analysis Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 1
- DWRKFAJEBUWTQM-UHFFFAOYSA-N etaconazole Chemical compound O1C(CC)COC1(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1N=CN=C1 DWRKFAJEBUWTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019249 food preservative Nutrition 0.000 description 1
- 239000005452 food preservative Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биохимии. Предложены соединения лабиринтопептинов А1, А2, или А3 формулы (I), где {A}, {B}, {C}, R1-R6, m и n имеют значения, указанные в формуле изобретения. Соединения получают при ферментации штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования одного или нескольких соединений формулы (I). Предложены ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А2, и ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А1, а также препролабиринтопептины А1 и А2, пролабиринтопептины А1 и А2. Лабиринтопептины формулы (I) применяют для лечения инфекций, вызываемых грамположительными бактериями, вирусных инфекций и/или невропатической боли, вызываемой воспалением. 11 н. и 13 з. п. ф-лы, 4 табл., 20 пр.
Description
В научной литературе описано несколько пептидов с большим числом мостиковых связей, таких как, например, конопептиды, выделяемые из брюхоногих моллюсков с колпачковидной раковиной (см., например, публикацию Terlau & Olivera, Physiol. Rev. 2004, 84, 41-68), или так называемые лантибиотики (Chatterjee et al., Chem. Rev. 2005, 105, 633-683), выделяемые из грамположительных бактерий. Указанные пептиды имеют разные применения. Лантибиотик низин, например, в течение многих лет используется в качестве консерванта для пищевых продуктов.
Конопептиды могут быть использованы для лечения боли, диабета, рассеянного склероза и сердечно-сосудистых заболеваний и в настоящее время проходят преклинические или клинические испытания. Примерами конопептидов являются α-GI (последовательность: ECCNPACGRHYSC*, *амидированная, связность: 1-3, 2-4) и α-GID (последовательность: IRγCCSNPACRVNNOHVC, связность: 1-3, 2-4), где О/Hyp означает гидроксипролин, и связность определяет положение цистеина в конкретных дисульфидных связях, например первый - третий и второй - четвертый, как в α-GID:
(α-GI),
(α-GID).
Недавно была обнаружена новая группа пептидов с большим числом мостиковых связей, получивших название лабиринтопептины (заявка на европейский патент ЕР06020980.6). Так называемые лабиринтопептины содержат уникальный мостиковый фрагмент в пептидной цепи, иллюстрируемый соединением нижеследующей формулы:
В настоящее время установлено, что другие пептиды с большим числом мостиковых связей, относящиеся к классу лабиринтопептинов, могут быть выделены из штамма микроорганизмов Actinomadura namibiensis (DSM 6313). Указанные соединения существенно отличаются от производных лабиринтопептинов, описанных в заявке на патент ЕР 06020980.6.
Объектом настоящего изобретения является соединение формулы (I)
где
{A} означает группу, выбираемую из
{B} означает группу, выбираемую из
{C} означает группу, выбираемую из
R1 означает группу R1' или группу
где R1' означает Н, С (О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил;
R3 и R4 независимо означают Н, (C1-C6)алкил, (C1-C6)алкилен-С(О)NH2, (С1-С6)алкилен-С(О)NH(С1-С4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2, либо R3 и R4 вместе с атомами S, к которым они присоединены, образуют дисульфидную группу S-S;
R5 и R6 независимо означают Н или ОН, либо R5 и R6 вместе означают = О;
m и n независимо равны 0, 1 или 2;
при условии, что если
{A} означает
{B} означает
{C} означает
R3 и R4 не могут образовывать дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены;
которое имеет любую стереохимическую форму или представляет собой смесь любых стереохимических форм в любом соотношении либо является его физиологически приемлемой солью.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения
{A} означает
{B} означает
{C} означает
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения
{A} означает
{B} означает
{C} означает
R1 предпочтительно означает группу R1'.
R1' предпочтительно означает Н.
R2 предпочтительно означает ОН.
R3 и R4 предпочтительно независимо означают Н, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилен-С (О)NH2 или образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены. Более предпочтительно R3 и R4 означают Н или образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены. Наиболее предпочтительно R3 и R4 образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены.
R5 и R6 предпочтительно означают Н или ОН, при этом если R5 означает ОН, тогда R6 означает Н, и если R5 означает Н, тогда R6 означает ОН, или R5 и R6 вместе означают =О. Более предпочтительно R5 означает ОН и R6 означает Н или R5 означает Н и R6 означает ОН.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение (I) является соединением формулы (II)
в котором R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С (О) - (С1-С6)алкил или С (О)- О- (С1-С6)алкил, предпочтительно Н.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение (I) является соединением формулы (III)
в котором R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С (О) - (С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил, предпочтительно Н;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил, R2 предпочтительно означает Н; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2.
Соединения формул (II) и (III), где R1 означает R1', далее именуются лабиринтопептинами А1 .
Соединения формул (II) и (III), где R1 означает группу
далее именуются лабиринтопептинами А3.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения соединение (I) является соединением формулы (IV)
в котором R1 означает Н, С (О) - (С1-С6)алкил или С (О) - О -(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2.
Соединения формулы (IV) именуются лабиринтопептинами А 2.
В соединениях формулы (I) предпочтительно m и n оба равны 0, или m и n оба равны 2, или m равно 0 и n равно 2, или m равно 2 и n равно 0. Наиболее предпочтительно m и n оба равны 0.
Настоящее изобретение далее относится ко всем очевидным химическим эквивалентам соединений формулы (I) по настоящему изобретению. Такие эквиваленты являются соединениями, которые имеют лишь незначительные отличия в химической структуре и оказывают такое же фармакологическое действие или могут быть превращены в соединения по настоящему изобретению в мягких условиях. Указанные эквиваленты включают также, например, соли, продукты восстановления, продукты окисления, сложные эфиры, полученные в результате частичного гидролиза, простые эфиры, ацетали или амиды соединений формулы (I), а также эквиваленты, которые специалист может получить стандартными методами, и, помимо этого, все оптические изомеры, диастереомеры и все стереоизомерные формы.
За исключением особо оговоренных случаев хиральные центры в соединениях формулы (I) могут находиться в R-конфигурации или S-конфигурации. Настоящее изобретение относится как к оптически чистым соединениям, так и к смесям стереоизомеров, таким как смеси энантиомеров и смеси диастереомеров.
Физиологически переносимые соли соединений формулы (I) являются их органическими и неорганическими солями, описанными в публикации Remington's Pharmaceutical Sciences (17th edition, page 1418 (1985)). Благодаря их физической и химической стойкости и растворимости предпочтительными являются, среди прочего, соли натрия, калия, кальция и аммония, при наличии кислотных групп; соли хлористоводородной кислоты, серной кислоты или фосфорной кислоты, карбоновых или сульфоновых кислот, таких как уксусная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота и паратолуолсульфоновая кислота, среди прочего, являются предпочтительными при наличии основных групп.
Более предпочтительно соединения формул (I)-(IV) характеризуются стереохимией, показанной для соединения формулы (V), которое является соединением формулы (I), в котором
{A} означает
{B} означает
{C} означает
R1 означает
где R1' означает Н;
R2 означает Н;
R3 и R4 вместе с атомами S, к которым они присоединены, образуют дисульфидную группу S-S;
R5 означает Н;
R6 означает ОН; и
m и n равны 0:
наиболее предпочтительно стереохимией, представленной в формуле (VI)
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (I), имеющему формулу (VII),
предпочтительно формулу (VIII)
при этом формулы (V) и (VI) относятся к лабиринтопептину А3, и формулы (VII) и (VIII) относятся к лабиринтопептину А1.
Для дальнейшего исследования соединений по настоящему изобретению пептидные остатки были превращены в их вероятные предшественники, получаемые в результате синтеза пептидов на рибосомах. В научной литературе отсутствует описание альфа, альфа-дизамещенных аминокислот в положении остатков 4 и 13. Указанные аминокислоты могут быть описаны на основании остатка Ser, в котором замещена гидроксильная группа в бета-положении, как показано ниже для соединений формул (II) и (III):
(SEQ ID NO:1).
В предшествующей заявке на европейский патент, относящейся к лабиринтопептину А2 (ЕР06020980.6), при отсутствии знаний о биосинтезе была представлена следующая последовательность предшественника, синтезируемого на рибосомах:
(SEQ ID NO:2).
С учетом новых знаний о биосинтезе лабиринтопептинов (см. ниже) биосинтетический предшественник соединений формулы (IV) представлен следующим образом:
(SEQ ID NO:3).
Настоящее изобретение относится также к способу получения соединения формулы (I) по пункту 1, который включает:
а) ферментацию штамма Actinomadura namibiensis (DSM 6313) или одного из его вариантов и/или мутантов в приемлемых условиях в культуральной среде до образования одного или нескольких соединений формулы (I) в указанной культуральной среде;
b) выделение соединения формулы (I) из культуральной среды;
с) модификацию, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), и/или превращение, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), или производного соединения, выделенного на стадии b), в физиологически переносимую соль.
Соединение, выделенное на стадии b), предпочтительно имеет формулу (II), где m и n оба равны 0,
R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, и
R2 означает ОН.
Соединение, выделенное на стадии b), более предпочтительно является лабиринтопептином А2, который затем превращают на стадии с) в соединение формулы (IV), где m и n оба равны 0,
R1 означает Н,
R2 означает ОН, и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилен-С (О)NH2, (С1-С6)алкилен-С (О)NH(C1-C4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2.
Культуральная среда является питательным раствором или плотной средой, содержащей по меньшей мере один обычный источник углерода и по меньшей мере один источник азота, а также одну или несколько обычных неорганических солей.
Способ по настоящему изобретению может быть использован для ферментации в лабораторных условиях (в диапазоне от миллилитров до литров) и для ферментации в промышленном масштабе (в диапазоне кубических метров).
Приемлемыми источниками углерода для ферментации являются ассимилируемые углеводы и сахарные спирты, такие как глюкоза, лактоза, сахароза или D-маннит, а также углеводсодержащие природные продукты, такие как солодовый экстракт или дрожжевой экстракт. Примерами азотсодержащих питательных веществ являются аминокислоты; пептиды и белки, а также их продукты распада, например казеин, пептоны или триптоны; мясные экстракты; дрожжевые экстракты; глютен; семена, например, кукурузы, пшеницы, фасоли, сои или хлопчатника; остатки после дистилляции при получении спирта; мясо; дрожжевые экстракты; соли аммония; нитраты. Предпочтительным является источник азота, представляющий собой один или несколько пептидов, полученных путем синтеза или биосинтеза. Примерами неорганических солей являются хлориды, карбонаты, сульфаты или фосфаты щелочных металлов, щелочноземельных металлов, железа, цинка, кобальта и марганца. Примерами следовых элементов являются кобальт и марганец.
Лабиринтопептины по настоящему изобретению получают в нижеследующих особенно приемлемых условиях: 0,05-5%, предпочтительно 0,1-2,5% дрожжевого экстракта; 0,2-5,0%, предпочтительно 0,1-2% казитона; 0,02-1,0%, предпочтительно 0,05-0,5% CaCl2 × 2H2O; 0,02-1,5%, предпочтительно 0,05-0,7% MgSO4 × 7H2O и 0,00001-0,001% витамина В12. Указанные процентные значения приведены в расчете на массу всего питательного раствора.
Указанный микроорганизм культивируют в аэробных условиях, то есть, например, в состоянии погружения в питательную среду при встряхивании или перемешивании во встряхиваемых колбах или ферментерах либо на плотной среде при подаче воздуха или кислорода. Указанный микроорганизм можно культивировать в температурном интервале от около 18°С до 35°С, предпочтительно от около 20°С до 32°С, в частности от 27°С до 30°С. Показатель рН должен находиться в пределах от 4 до 10, предпочтительно от 6,5 до 7,5. Микроорганизм обычно культивируют в указанных условиях в течение 2-10 дней, предпочтительно от 72 до 168 часов. Микроорганизм предпочтительно культивируют в несколько стадий, то есть сначала получают одну или несколько предварительных культур в жидкой питательной среде, после чего указанные предварительные культуры инокулируют в стандартную производственную питательную среду, то есть основную культуру, например, в объемном отношении от 1:10 до 1:100. Предварительную культуру получают, например, путем инокуляции штамма в виде растительных клеток или спор в питательный раствор и выращивания в течение 20-120 часов, предпочтительно 48-96 часов. Растительные клетки и/или споры можно получить, например, выращивая штамм в течение примерно 1-15 дней, предпочтительно 4-10 дней на плотном или жидком питательном субстрате, таком как агар с дрожжевым экстрактом.
Производные лабиринтопептинов могут быть выделены из культуральной среды и очищены известными методами с учетом химических, физических и биологических свойств природных веществ. Концентрации соответствующих производных лабиринтопептинов в культуральной среде или на отдельных стадиях выделения определяют при помощи ВЭЖХ, при этом количество образованного вещества сравнивают с калибровочным раствором.
Для выделения продукта культуральный бульон или культуру вместе с плотной средой необязательно лиофилизуют и производные лабиринтопептинов экстрагируют из лиофилизата, используя органический растворитель или смесь воды и органического растворителя, предпочтительно содержащую 50-90% органического растворителя. Примерами органических растворителей являются метанол и 2-пропанол. Фазу органического растворителя, содержащую природные вещества по настоящему изобретению, при необходимости концентрируют в вакууме и подвергают дальнейшей очистке.
Последующую очистку одного или нескольких соединений по настоящему изобретению производят при помощи хроматографии на приемлемых материалах, например предпочтительно на молекулярном сите, силикагеле, оксиде алюминия, ионообменных смолах, адсорбирующих смолах или обращенных фазах (RP). Указанную хроматографию используют для выделения производных лабиринтопептинов. Производные лабиринтопептинов хроматографируют, используя буферные, основные или подкисленные водные растворы или смеси водных и органических растворов.
Смеси водных или органических растворов включают все смешивающиеся с водой органические растворители, предпочтительно метанол, 2-пропанол или ацетонитрил, при концентрации органического растворителя от 5 до 99%, предпочтительно от 5 до 50% органического растворителя, или все буферные водные растворы, смешивающиеся с органическими растворителями. Используемые буферы аналогичны указанным выше.
Производные лабиринтопептинов выделяют с учетом их разной полярности при помощи хроматографии с обращенной фазой, например, на MCl (адсорбирующая смола, Mitsubishi, Japan), амберлите XAD (TOSOHAAS) или других гидрофобных материалах, например на фазах RP-8 или RP-18. Кроме того, могут быть выделение можно осуществить при помощи хроматографии с нормальной фазой, например, на силикагеле, оксиде алюминия и подобных веществах.
Буферные, основные или подкисленные водные растворы, например, представляют собой воду, фосфатный буфер, аммоний-ацетатный и цитратный буфер, в концентрации до 0,5 М, а также муравьиную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, аммиак и триэтиламин или все коммерчески доступные кислоты и основания, известные специалисту, предпочтительно в концентрации до 1%. В случае буферных водных растворов особенно предпочтительным является 0,1% ацетат аммония.
Хроматография может быть выполнена в градиенте, начиная со 100% воды и кончая 100% органического растворителя; хроматографию предпочтительно выполняют в линейном градиенте от 5 до 95% ацетонитрила.
Альтернативно может быть выполнена гель-хроматография или хроматография на гидрофобных фазах. Гель-хроматография может быть выполнена, например, на полиакриламидных гелях или сополимерных гелях. Последовательность выполнения вышеуказанных стадий хроматографии может быть изменена.
Лабиринтопептины, присутствующие в виде стереоизомеров, могут быть выделены известными методами, например путем отделения на колонке для хиральной хроматографии.
Группу ОН превращают в сложноэфирное или простое эфирное производное при помощи известных методов (J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th edition, 1992), например, в результате осуществления взаимодействия с ангидридом кислоты, диалкилкарбонатом или диалкилсульфатом. Группу СООН превращают в сложноэфирное или амидное производное известными методами (J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th edition, 1992), например, в результате осуществления взаимодействия с аммиаком с образованием соответствующей группы CONH2, или с необязательно активированным алкильным соединением с образованием соответствующего сложного алкилового эфира. Группы -СН2-S-CH2- можно окислить в группу -СН2-S(O)-CH2- или -СН2-S(O)2-CH2-, подвергая соответствующее производное лабиринтопептина воздействию кислорода или воздуха. Восстановление дисульфидов, необязательно с последующим алкилированием свободных групп SH, выполняют известными методами (A. Henschen, Analysis of cyst(e)ine residues, disulfide bridges, and sulfhydryl groups in proteins, in: B. Wittmann-Liebold, J. Salnikov, V.A. Erdman (Eds.), Advanced Methods in Protein Microsequence Analysis, Springer, Berlin, 1986, pp. 244-255), например, путем восстановления дитиотреитом и алкилирования с использованием алкилиодидов. Восстановление сульфида в соединении формулы (I), где R3 и R4 означают Н, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилен-С(О)NH2, (C1-C6)алкилен-С(О)NH(C1-C4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2, может быть произведено путем осуществления взаимодействия соединения формулы (I), где R3 и R4 образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены, с (С1-С6)алкилгалогенидом или галоген(С1-С6)алкилен-С(О)NH2, галоген(С1-С6)алкилен-С(О)NH(C1-C4)алкилом или галоген-(С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2 в присутствии дитиотреита (общая литература). Галоген является F, Cl, Br или I.
Штамм микроорганизмов Actinomadura namibiensis был депонирован Hoechst AG., Франкфурт, Германия, под идентифицирующим номером FH-A 1198 в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen [Германская коллекция микроорганизмов и культур клеток] GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg 1B (2008: Inhoffenstr. 7 B), 38124 Braunschweig, Germany, согласно положениям Будапештского соглашения от 23.01.1991 под следующим номером: DSM 6313. Штамм микроорганизмов Actinomadura namibiensis описан в публикации Wink et al. in International Journal of Systematic and Evolutionary Mictobiology 2003, 53, 721-724.
Вместо штамма Actinomadura namibiensis (DSM 6313) можно также использовать его мутанты и/или варианты, синтезирующие одно или несколько соединений по настоящему изобретению.
Мутант является микроорганизмом, в котором изменен один или несколько генов в геноме, при этом ген или гены, определяющие способность организма продуцировать соединение по настоящему изобретению, остаются функциональными и наследуемыми.
Такие мутанты могут быть получены известными методами с использованием физических средств, например облучения ультрафиолетовыми или рентгеновскими лучами, или химических мутагенов, таких как этилметансульфонат (EMS), 2-гидрокси-4-метоксибензофенон (МОВ) или N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин (MNNG), или методами, описанными в публикации Brock et al. in “Biology of Microorganisms”, Prentice Hall, pages 238-247 (1984).
Вариант является фенотипом микроорганизма. Микроорганизмы обладают способностью адаптироваться к окружающей среде и поэтому характеризуются высокоразвитой физиологической гибкостью. Все клетки микроорганизма участвуют в фенотипической адаптации, при этом характер изменения генетически не закреплен и может быть обратимым в изменившихся условиях (H. Stolp, Mictobial ecology: organism, habitats, activities. Cambridge University Press, Cambridge, GB, page 180, 1988).
Скрининг мутантов и/или вариантов, синтезирующих одно или несколько соединений по настоящему изобретению, производят путем необязательной лиофилизации ферментационной среды, экстракции лиофилизата или ферментационного бульона органическим растворителем или вышеуказанной смесью воды и органического растворителя и анализа методом ВЭЖХ или ТСХ или исследования биологической активности.
Условия ферментации аналогичны для Actinomadura namibiensis (DSM 6313), его мутантов и/или вариантов.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I) для лечения бактериальных инфекций, в частности бактериальных инфекций, вызываемых грамположительными бактериями, для лечения вирусных инфекций и/или для лечения боли, в частности невропатической боли или боли, вызываемой воспалением.
Вышеописанное лекарственное средство (именуемое также фармацевтическим препаратом или фармацевтической композицией) содержит эффективное количество по меньшей мере одного соединения формулы (I) в любой стереохимической форме или в виде смеси любых стереохимических форм в любом соотношении, его физиологически переносимой соли или химического эквивалента и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, предпочтительно один или несколько фармацевтически приемлемых носителей (или сред) и/или добавок (или наполнителей).
Лекарственное средство можно вводить перорально, например, в форме пилюль, таблеток, глазурованных таблеток, таблеток с покрытием, гранул, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, сиропов, эмульсий, суспензий или аэрозольных смесей. Однако указанное лекарственное средство можно также вводить ректально, например, в форме суппозиториев, или парентерально, например, внутривенно, внутримышечно или подкожно, в виде инъекционных растворов или растворов для вливаний, микрокапсул, имплантов или стержней, чрескожно или местно, например, в форме мазей, растворов или настоек, либо другими способами, например, в виде аэрозолей или растворов, распыляемых в нос.
Лекарственные средства по настоящему изобретению получают методами, хорошо известными специалисту в данной области, при этом помимо соединений формулы (I) в любой стереохимической форме или в виде смеси любых стереохимических форм в любом соотношении, физиологически переносимой соли или химического эквивалента, используют фармацевтически приемлемые инертные неорганические и/или органические носители и/или добавки. Для получения пилюль, таблеток, таблеток с покрытием и твердых желатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или их производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и т.д. Носителями для мягких желатиновых капсул и суппозиториев являются, например, жиры, воски, полутвердые и жидкие полиолы, природные или отвержденные масла и т.д. Приемлемыми носителями для получения растворов, например инъекционных растворов, эмульсий или сиропов, являются, например, вода, физиологический раствор, спирты, глицерин, полиолы, сахароза, инвертированный сахар, глюкоза, растительные масла и т.д. Приемлемые носители для микрокапсул, имплантов или стержней включают, например, сополимеры гликолевой кислоты и молочной кислоты. Фармацевтические препараты обычно содержат примерно 0,5-90% масс. соединения формулы (I) и/или его физиологически приемлемых солей и/или пролекарств. Количество активного ингредиента формулы (I) в любой стереохимической форме или в виде смеси любых стереохимических форм в любом соотношении, его физиологически переносимой соли или химического эквивалента в лекарственных средствах обычно составляет от около 0,5 до около 1000 мг, предпочтительно от около 1 до около 500 мг.
Помимо активных ингредиентов формулы (I) в любой стереохимической форме или в виде смеси любых стереохимических форм в любом соотношении, физиологически переносимой соли или химического эквивалента и носителей, фармацевтические препараты могут содержать одну или несколько добавок, таких как, например, наполнители, дезинтеграторы, связывающие вещества, смазывающие вещества, смачивающие вещества, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, подсластители, красители, вкусовые вещества, ароматизаторы, загустители, разбавители, буферы, растворители, солюбилизаторы, вещества для достижения пролонгированного действия, соли для изменения осмотического давления, покрывающие вещества или антиоксиданты. Указанные препараты могут также содержать два или более соединений формулы (I) в любой стереохимической форме или в виде смеси любых стереохимических форм в любом соотношении, физиологически переносимую соль или химический эквивалент. В том случае если фармацевтический препарат содержит два или более соединений формулы (I), выбор отдельных соединений может быть направлен на достижение специфического общего фармакологического профиля фармацевтического препарата. Например, сильнодействующее соединение менее продолжительного действия может быть объединено с менее активным соединением длительного действия. Гибкость, допускаемая при выборе заместителей в соединениях формулы (I), позволяет контролировать в широких пределах биологические и физико-химические свойства указанных соединений и таким образом позволяет выбирать требуемые соединения. Кроме того, помимо по меньшей мере одного соединения формулы (I) фармацевтические препараты могут также содержать один или несколько других терапевтически или профилактически активных ингредиентов.
При использовании соединений формулы (I) доза лекарственного средства, которая может изменяться в широких пределах и в соответствии с обычной практикой, известной лечащему врачу, должна быть определена в зависимости от состояния субъекта в каждом конкретном случае. Например, доза зависит от используемого соединения, характера и тяжести заболевания, подлежащего лечению, способа и схемы введения, острого или хронического заболевания или применения данного лекарственного средства для профилактики. Соответствующая доза может быть определена в результате клинических испытаний, хорошо известных в данной области медицины. Как правило, суточная доза, необходимая для достижения требуемого результата у взрослого с массой тела примерно 75 кг, составляет от около 0,01 до около 100 мг/кг, предпочтительно от около 0,1 до около 50 мг/кг, в частности от около 0,1 до около 10 мг/кг (во всех случаях в мг на кг массы тела). Суточная доза может быть разделена на несколько частей, например на 2, 3 или 4 части, особенно в случае введения относительно больших количеств. Как правило, в зависимости от состояния субъекта суточная доза может быть увеличена или уменьшена по сравнению с указанной дозой.
Пример 1. Получение криокультуры Actinomadura namibiensis (DSM 6313)
Штамм Actinomadura namibiensis (DSM 6313) высевали в 100 мл культуральной среды (10 г крахмала, 2 г дрожжевого экстракта, 10 г глюкозы, 10 г глицерина, 2,5 г порошкообразного кукурузного экстракта, 2 г пептона, 1 г NaCl, 3 г СаСО3 в 1 л водопроводной воды, рН 7,2 до стерилизации) в стерильной 500 мл колбе Эрленмейера и инкубировали в течение 72 часов при 27°С на шейкере со скоростью вращения 120 об/мин. Затем 1 мл культуры смешивали с 1 мл стерильного консервирующего раствора (20 г глицерина, 10 г сахарозы, 70 мл деионизированной воды) и хранили при -80°С. Альтернативно небольшие части хорошо проросшей культуры на агаре переносили в криопробирки® (Vangard International) с 1,5 мл 50% стерильного раствора глицерина и хранили при -196°С в жидком азоте.
Пример 2. Получение лабиринтопептинов
В стерильную 500 мл колбу Эрленмейера, содержащую 100 мл культуральной среды, описанной в примере 1, высевали культуру Actinomadura namibiensis (DSM 6313), которую выращивали на агаровой пластинке и инкубировали при 27°С на шейкере со скоростью вращения 120 об/мин. Через 72 часа в другие колбы Эрленмейера, содержащие такую же культуральную среду в таком же количестве, высевали 2 мл указанной прекультуры и инкубировали в аналогичных условиях в течение 168 часов. Альтернативно культуру Actinomadura namibiensis (DSM 6313) высевали в 300 мл колбу Эрленмейера, содержащую 100 мл культуральной среды, описанной в примере 1, и инкубировали при 25°С со скоростью вращения 180 об/мин. Через 72 часа в другие колбы Эрленмейера, содержащие такую же культуральную среду в таком же количестве, высевали 5 мл прекультуры и инкубировали в аналогичных условиях в течение 168 часов.
Пример 3. Твердофазная экстракция лабиринтопептинов
После окончания ферментации 40 л Actinomadura namibiensis (DSM 6313) культуральный бульон фильтровали. Фильтрат культуры (примерно 30 л) вводили в колонку (размер: 160×200 мм), заполненную примерно 3 л материала СНР-20Р. Соединения элюировали со скоростью потока 250 мл/мин в градиенте от 5% до 95% изопропанола в воде. Фракции собирали через каждые 4 минуты в течение 45 минут. Фракции, содержащие лабиринтопептины, объединяли и лиофилизовали (фракция 8: молекулярная масса = 2190 Да; фракция 9: молекулярная масса = 2190 и 2074 Да; фракции 10-12: молекулярная масса = 2074 Да).
Пример 4. Предварительная очистка лабиринтопептина А1 при помощи хроматографии с обращенной фазой 18
Фракции 10-12 (670 мг), полученные в примере 3, растворяли в 500 мл метанола и вводили в колонку 10 мк С18 (2) Phenomenex Luna® (размер: 50 мм × 250 мм), включающую предварительную колонку 10 мк С18 (2) Phenomenex Luna® (размер: 21,2 мм × 60 мм). Соединения элюировали в градиенте от 5% до 75% ацетонитрила в воде в течение 40 минут со скоростью потока 190 мл/мин (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 9,0, доведенный до требуемого значения 30% водным раствором аммиака). Фракции собирали каждую минуту. Фракции 21-22 содержали требуемый лабиринтопептин (молекулярная масса = 2074 Да). После лиофилизации было получено 322 мг неочищенного продукта.
Пример 5. Конечная очистка лабиринтопептина А1
Фракции 21-22, полученные в примере 4 (60 мг), растворяли в 50 мл метанола и вводили в колонку 5 мк С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 30 мм × 100 мм), включающую предварительную колонку 10 мк С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19×10 мм). Соединения элюировали в градиенте от 5% до 75% ацетонитрила в воде в течение 40 минут со скоростью потока 70 мл/мин (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 4,6, доведенный до требуемого значения водным раствором уксусной кислоты). Элюенты собирали в виде 10 мл фракций, производя детекцию с помощью УФ-излучения. Фракции, содержащие лабиринтопептин (фракции 9-12), объединяли. После лиофилизации было получено 17 мг лабиринтопептина А1.
Пример 6. Предварительная очистка лабиринтопептина А3 при помощи хроматографии с обращенной фазой 18
Фракцию 8 (~850 мг), полученную в примере 3, растворяли в 500 мл метанола и вводили в колонку 10 мк С18(2) Phenomenex Luna® (размер: 50 мм × 250 мм), включающую предварительную колонку 10 мк С18 (2) Phenomenex Luna® (размер 21,2 мм × 60 мм). Соединения элюировали в градиенте от 5% до 75% ацетонитрила в воде в течение 40 минут (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 7,0) со скоростью потока 190 мл/мин. Фракции собирали каждую минуту. Фракция 19 содержала требуемый лабиринтопептин (молекулярная масса 2190 Да). После лиофилизации было получено 48 мг неочищенного продукта.
Пример 7. Конечная очистка лабиринтопептина А3
Фракцию 19, полученную в примере 6 (48 мг), растворяли в 50 мл метанола и вводили в колонку 5 мк С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 30 мм × 100 мм), включающую предварительную колонку 10 мк С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19 мм × 10 мм). Соединения элюировали в градиенте от 5% до 75% ацетонитрила в воде в течение 40 минут со скоростью потока 70 мл/мин (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 9,0, доведенный до требуемого значения 30% водным раствором аммиака). Элюенты собирали в виде фракций, производя детекцию с помощью УФ-излучения. Фракции, содержащие лабиринтопептин (фракции 9-12), объединяли. После лиофилизации было получено 12 мг лабиринтопептина А3.
Пример 8. Исследование лабиринтопептинов А1 и А3 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с обнаружением при помощи диодной матрицы и масс-спектрометрии (ВЭЖХ-DAD-MS)
Лабиринтопептины А1 и А3 анализировали в системе UPLC Waters Acquity, оснащенной пробоотборником, бинарным устройством управления растворителем и PDA (детектор на основе фотодиодной матрицы). В качестве колонки для UPLC была использована колонка С18 UPLC BEH Waters Acquity (1,7 мк; 2,1×100 мм), и элюирование производили со скоростью потока 0,6 мл/мин в градиенте вода:ацетонитрил (9:1) в течение 15 минут до 100% ацетонитрила, при этом во все растворители добавляли 6,5 мМ ацетата аммония до рН 4,6. Ультрафиолетовые спектры регистрировали детектором PDA при длинах волн от 200 до 600 нм. Масс-спектры регистрировали при помощи масс-спектрометра для жидкостной хроматографии µTOF Bruker, используя ортогональную электрораспылительную ионизацию, при частоте отбора проб 0,5 Гц и пределе обнаружения 150-1500 атомных единиц массы.
Пример 9. Исследование лабиринтопептинов А1
Лабиринтопептин А1 элюирован в момент времени, равный 5,46 мин (PDA). Ультрафиолетовый спектр выражен в виде λmax при длине волны 218 нм (сдвиг) и 279 нм.
Двухзарядные молекулярные ионы были обнаружены при m/z (I): 1035,87 (4539), 1036,37 (5566), 1036,87 (4086), 1037,37 (2296), 1037,87 (1034) и 1038,37 (280) в отрицательной моде. В положительной моде были обнаружены двухзарядные молекулярные ионы m/z (I): 1037,88 (2925), 1038,38 (3252), 1038,88 (2492), 1039,38 (1396) и 1039,88 (623).
Исследование лабиринтопептина А1 методом масс-спектрометрии с высоким разрешением ESI-FTICR: раствор лабиринтопептина А1 в метаноле (с=0,2 мг/мл) подавали при помощи шприца-насоса со скоростью потока 2 мкл/мин в масс-спектрометр FTICR Bruker Apex III (магнит 7Т), оснащенный источником электрораспыления. Спектры регистрировали в положительной моде, используя внешнюю калибровку.
| m/z, определенная в Да (z=2, M+2Na+ ион) | 1059,8693 |
| Точная масса нейтрального моноизотопа [M] | 2073,7592 |
| Теоретическая масса [M] C92H119N23O25S4 | 2073,7630 |
| Молекулярная формула | C92H119N23O25S4 |
Пример 10. Исследование лабиринтопептина А3
Лабиринтопептин А1 элюирован в момент времени, равный 4,79 мин (PDA). Ультрафиолетовый спектр выражен в виде λmax при длине волны 218 нм (сдвиг) и 274 нм (сдвиг).
Двухзарядные молекулярные ионы были обнаружены при m/z (I): 1093,38 (1262), 1093,88 (1587), 1094,39 (1201), 1094,89 (686) и 1095,38 (195) в отрицательной моде. В положительной моде были обнаружены двухзарядные молекулярные ионы m/z (I): 1095,40 (365), 1095,91 (433) и 1096,41 (294).
Исследование лабиринтопептина А3 методом масс-спектрометрии с высоким разрешением ESI-FTICR (метод, описанный в примере 9):
| m/z, определенная в Да (z=2, M+2Na+ ион) | 1117,3847 |
| Точная масса нейтрального моноизотопа [M] | 2188,7900 |
| Теоретическая масса [M] C96H124N24O28S4 | 2188,7900 |
| Молекулярная формула | C96H124N24O28S4 |
Пример 11. Аминокислотный анализ лабиринтопептина А1
Гидролиз. Лабиринтопептин А1 (0,05 мг) гидролизовали в атмосфере азота с 6 н. раствором HCl, 5% фенола при 110°С в течение 24 часов. Гидролизат сушили в потоке азота.
Ахиральная газовая хроматография - масс-спектрометрия (GC-MS): Гидролизат нагревали со смесью бис(триметилсилил)трифторацетамид (BSTFA)/ацетонитрил (1:1) при 150°С в течение 4 часов. Для выполнения экспериментов методом GC-MS использовали капилляр из кварцевого стекла DB5 (l=15 м × 0,25 мкм, кварцевое стекло, покрытое диметил(5%-фенилметил)полисилоксаном, df=0,10 мкм; температурная программа: Т=65°/3 мин/6/280°С).
Хиральная GC-MS: Гидролизат этерифицировали 200 мкл 2 н. раствора HCl в этаноле при 110°С в течение 30 минут и сушили. Затем смесь ацилировали 25 мкл ангидрида трифторуксусной кислоты (TFAA) в 100 мкл дихлорметана при 110°С в течение 10 минут и сушили. Для выполнения GC-MS использовали капилляр из кварцевого стекла (l=22 м × 0,25 мкм, кварцевое стекло, покрытое хиразил-S-Val (Machery-Nagel), df=0,13 мкм; температурная программа: Т=55°/3 мин/3,2/180°С).
| Конфигурация | ||
| Аминокислоты | 1 Ala, 1 Thr, 1 Asx, 2 Cys, 1 Phe, 1 Glx, 2 Trp, 1 Glu, 2 Val, 1 Pro = 13 AS | Все аминокислоты в S-конфигурации за исключением 2 остатков Cys в R-конфигурации |
Пример 12. Идентификация структурных генов для лабиринтопептинов А1 и А3
Банк космид микроорганизма Actinomaduta namibiensis (DSM 6313) был создан компанией Agowa GmbH, Берлин, на основе космидного вектора pWEB (Epicentre Biotechnologies, Madison, USA). Фильтры были созданы в компании RZPD GmbH, Берлин, методом, описанным в публикации Zehetner & Schäfer, Methods Mol. Biol. 2001, 175, 169-188.
На основе известной структуры лабиринтопептина А2 из N-конца и С-конца были созданы удлиненные вырожденные затравки (верхняя затравка: 5'-CAGGAAACAGCTATGACCGAYTGGWSNYTNTGGG-3' (SEQ ID NO:4); нижняя затравка: 5'-TGTAAAACGACGGCCAGTRCANGANGCRAANARRC-3' (SEQ ID NO:5); Dabard et al., Appl. Environ. Microbiol. 2001, 4111-4118). 5'-Концевое удлинение затравок было предназначено для увеличения длины предполагаемого продукта ПЦР с целью лучшего обнаружения и манипуляции (условия выполнения ПЦР: 3 минуты 95°С; 30×(60 секунд 95°С; 30 секунд 50°С; 60 секунд 72°С) 7 минут 72°С; Taq-полимераза). Продукт ПЦР очищали на геле и клонировали в вектор pDrive (Qiagen). В результате секвенирования была обнаружена последовательность длиной 18 нуклеотидов в середине гена А2 (AGTGCTGTAGCACGGGAA, SEQ ID NO:6). На основе указанной известной последовательности длиной 18 нуклеотидов в результате выполнения двухстадийной ПЦР была получена дополнительная информация о последовательности. На первой стадии выполнения ПЦР с одной специфической затравкой использовали вырожденную нижнюю (rev) затравку С-конца А2 (5'-RCARCANGCRAANARRCTTCC-3', SEQ ID NO:7) и неспецифическую верхнюю (fw) затравку (5'-CACGGTACCTAGACTAGTGACCAAGTGCGCCGGTC-3', SEQ ID NO:8) (условия выполнения ПЦР: 3 минуты 95°С; 10×(45 секунд 95°С; 45 секунд 38°С; 3,5 минуты 72°С); 30×(45 секунд 95°С; 45 секунд 52°С; 3,5 минуты 72°С) 5 минут 72°С; Taq-полимераза). После расщепления затравок экзонуклеазой-1 (5 мкл образца продукта ПЦР + 0,5 мкл экзонуклеазы-1 (20 ед/мкл); 15 минут 37°С; тепловая инактивация 15 минут 80°С) образец продукта ПЦР использовали в качестве матрицы для второй ПЦР (условия выполнения ПЦР: 3 минуты 95°С; 30×(45 секунд 95°С; 45 секунд 56°С; 3,5 минуты 72°С) 5 минут 72°С; Taq-полимераза). Вторую ПЦР выполняли в виде вложенной ПЦР, используя пару затравок, состоящую из неспецифической верхней затравки, полученной в первой ПЦР, и специфической нижней затравки, включающей 18 известных нуклеотидов (5'-CTTCCCGTGCTACAGCACTCCC-3', SEQ ID NO:9). Продукт длиной 0,4 т.п.о. очищали на геле и клонировали в вектор pDrive. При выполнении секвенирования была обнаружена предполагаемая аминокислотная последовательность С-конца А2. Из указанной последовательности длиной 0,4 т.п.о. при помощи ПЦР был создан Dig-меченый зонд (верхняя затравка: 5'-ATGGACCTCGCCACGGGCTC-3', SEQ ID NO:10; 5'-CTTCCCGTGCTACAGCACTCCC-3', SEQ ID NO:11). Указанный Dig-меченый зонд использовали для скрининга фильтров путем гибридизации и обнаружения при помощи антитела против Dig, меченного щелочной фосфатазой. Таким образом была получена и секвенирована одна положительная космида.
Данные последовательности анализировали при помощи локального программирования и построения графика. В результате выполнения анализа была получена открытая рамка считывания (orf), которая включала структурный ген лабиринтопептина А2:
Приведенная ниже последовательность, находящаяся внутри указанной открытой рамки считывания, представляет собой структурный ген препролабиринтопептина А2 (за лидерной последовательностью следует кодирующая пропептид последовательность и затем терминирующий кодон TGA):
Трансляция последовательности ДНК, приведенной в SEQ ID NO:13, позволила получить следующую аминокислотную последовательность препролабиринтопептина А2 (SEQ ID NO:14) и пролабиринтопептина А2 (SEQ ID NO:15):
Пропептидная последовательность трансформируется в лабиринтопептин А2 в результате посттрансляционных модификаций микроорганизма Actinomadura namibiensis (DSM 6313) ферментами.
Пример 13. Определение структуры лабиринтопептинов А1 и А3
В верхней области гена А2 находится еще одна небольшая открытая рамка считывания, которая высоко гомологична структурному гену лабиринтопептина А2. Указанная открытая рамка считывания (orf) включает структурный ген лабиринтопептина А1 и А3. Данная открытая рамка считывания лабиринтопептина А1 имеет следующую последовательность гена:
Приведенная ниже последовательность, находящаяся внутри указанной открытой рамки считывания, представляет собой структурный ген препролабиринтопептина А1 и А3 (за лидерной последовательностью следует кодирующая пропептид последовательность и затем терминирующий кодон TGA):
Трансляция последовательности ДНК, приведенной в SEQ ID NO:17, позволила получить следующую аминокислотную последовательность препролабиринтопептина А1 (SEQ ID NO:18) и пролабиринтопептина А1 (SEQ ID NO:19):
Указанная аминокислотная последовательность соответствовала предполагаемому составу аминокислот лабиринтопептина А1 по результатам аминокислотного анализа и масс-спектрометрии лабиринтопептина А1 (см. выше). Было установлено, что посттрансляционные модификации боковых цепей аналогичны модификациям лабиринтопептина А2. Стереохимия аминокислот была определена путем аминокислотного анализа (пример 11). И наконец, в результате дегидрирования остатка треонина (Thr) была получена дегидромасляная кислота, которая соответствовала эмпирической молекулярной формуле, вычисленной по результатам масс-спектрометрии высокого разрешения. На основе стереохимии аминокислоты, подвергнутой посттрансляционной модификации, аналогичного лабиринтопептина А2 была выведена формула (VIII) для лабиринтопептина А1.
Ранее выполненный анализ массы позволил предположить, что разницу между лабиринтопептинами А1 и А3 определяет остаток Asp. Данное предположение было подтверждено кодированной последовательностью, которая включала остаток Asp в положении -1 перед сайтом расщепления протеазой лабиринтопептина А1. Согласно предположению, что лабиринтопептины А1 и А3 кодированы одним и тем же геном и отличаются только сайтом расщеплением протеазой лидерной последовательности, дополнительный остаток Asp находится у N-конца лабиринтопептина А3. Таким образом, была выведена формула (V) для лабиринтопептина А3. На основе стереохимии аминокислоты, подвергнутой посттрансляционной модификации, аналогичного лабиринтопептина А2 была выведена формула (VI) для лабиринтопептина А3.
Пример 14. Расщепление дисульфидного мостика лабиринтопептина А1 и последующее алкилирование метилиодидом
Лабиринтопептин А1 (50 мг, 0,024 ммоль) растворяли в метаноле (3 мл) и добавляли раствор дитиотреита при комнатной температуре (1 мл, только что полученный из 75 мг дитиотреита в растворе 40 мг NaHCO3 в 1 мл воды). Смесь перемешивали в течение 1 часа при 60°С. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли метилиодид (50 мкл, 0,80 ммоль). Смесь выдерживали в течение 4 часов при комнатной температуре, фильтровали и очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя колонку 5 мкм С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 100 мм × 30 мм), включающую предварительную колонку 10 мкм С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19 мм × 10 мм). Элюирование выполняли в градиенте от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 30 минут (буфер: рН 2,0, доведенный до требуемого значения муравьиной кислотой). Скорость потока была равна 60 мл/мин, и пики фракционировали с помощью УФ-излучения. Фракции 12 и 13 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 23,1 мг (45,5%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=5,46 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 217 нм (сдвиг), 279 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1050,894
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2103,802
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C94H125N23O25S4: 2103,810
Молекулярная формула: C94H125N23O25S4
Химическая молекулярная масса = 2105,44.
Пример 15. Расщепление дисульфидного мостика лабиринтопептина А1 и последующее алкилирование иодацетамидом
Лабиринтопептин А1 (50 мг, 0,024 ммоль) растворяли в метаноле (3 мл) и добавляли раствор дитиотреита при комнатной температуре (1 мл, только что приготовленный из 70 мг дитиотреита в растворе 40 мг NaHCO3 в 1 мл воды). Смесь перемешивали в течение 1 часа при 60°С. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли иодацетамид (40 мг, 0,216 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Раствор фильтровали и очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя колонку 5 мкм С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 100 мм × 30 мм), включающую преколонку 10 мкм С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19 мм × 10 мм). Элюирование выполняли в градиенте от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 30 минут (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 4,6, доведенный до требуемого значения уксусной кислотой). Скорость потока была равна 60 мл/мин, и пики фракционировали с помощью УФ-излучения. Были получены следующие соединения;
Бисацетамидированный лабиринтопептин А1:
Фракции 7 и 8 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 13,3 мг (25,2%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=5,09 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 218 нм (сдвиг), 280 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1093,9022
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2189,819
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C96H127N25O27S4: 2189,822
Молекулярная формула: C96H127N25O27S4
Химическая молекулярная масса = 2191,49.
Моноацетамидированный лабиринтопептин А1:
Фракции 10 и 11 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 5,3 мг (10,3%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=5,31 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 217 нм (сдвиг), 280 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1065,390
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2132,794
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C94H124N24O26S4: 2132,800
Молекулярная формула: C94H124N24O26S4
Химическая молекулярная масса = 2134,44.
Пример 16. Синтез Вос-защищенного лабиринтопептина А1
К раствору лабиринтопептина А1 (50 мг, 0,024 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (11 мг, 0,048 ммоль) и н-этилдиизопропиламин (6 мг, 0,048 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем смесь очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя колонку 5 мкм С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 100 мм × 30 мм), включающую предварительную колонку 10 мкм С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19 мм × 10 мм). Элюирование выполняли в градиенте от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 30 минут (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 7,0). Скорость потока была равна 60 мл/мин, и пики фракционировали с помощью УФ-излучения. Фракции 4-7 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 21,4 мг (40,8%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=5,30 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 219 нм (сдвиг), 278 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1085,895
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2173,805
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C97H127N23O27S4: 2173,815
Молекулярная формула: C97H127N23O27S4
Химическая молекулярная масса = 2174,49.
Пример 17. Бензильные производные лабиринтопептина А1
К раствору лабиринтопептина А1 (50 мг, 0,024 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (10 мг, 0,046 ммоль) и н-этилдиизопропиламин (7 мг, 0,054 ммоль) при комнатной температуре. Смесь выдерживали в течение 1 часа при комнатной температуре, в результате чего лабиринтопептин А1 полностью исчезал. Добавляли бензиламин (6,8 мг, 0,063 ммоль) и ангидрид н-пропилфосфоновой кислоты (Т3Р®, 50 мкл, 0,072 ммоль¸ 50% раствор в ДМФА). Смесь перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем смесь очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя колонку 5 мкм С18 (2) Axia Phenomenex Luna® (размер: 100 мм × 30 мм), включающую предварительную колонку 10 мкм С18 Prep MS Waters XTerra® (размер: 19 мм × 10 мм). Элюирование выполняли в градиенте от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 30 минут (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 7,0). Скорость потока была равна 60 мл/мин, и пики фракционировали с помощью УФ-излучения (220 нм). Были получены два следующих соединения:
Монобензильное производное лабиринтопептина А1:
Фракции 7 и 8 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 10,4 мг (19,1%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=7,03 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 217 нм (сдвиг), 275 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1130,427
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2262,868
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C104H134N24O26S4: 2262,878
Молекулярная формула: C104H134N24O26S4
Химическая молекулярная масса = 2264,63.
Бисбензильное производное лабиринтопептина А1:
Фракции 13 и 14 объединяли и лиофилизовали, получая при этом 9,9 мг (17,5%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=8,31 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 214 нм (сдвиг), 276 нм
ESI-MS (положительная мода): [M+2(NH4)]2+=1194,002
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2351,937
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C111H141N25O25S4: 2351,941
Молекулярная формула: C111H141N25O25S4
Химическая молекулярная масса = 2353,77.
Пример 18. Реакции ацилирования у N-конца лабиринтопептина А1
К раствору 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазина (CDMT, 5 мг, 0,028 ммоль) в диметилформамиде (2 мл) добавляли н-метилморфолин (8,6 мг, 0,085 ммоль) при комнатной температуре. Смесь выдерживали в течение 1 часа при комнатной температуре и добавляли н-гексанкарбоновую кислоту (3,3 мг, 0,028 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 минут, добавляли лабиринтопептин А1 (50 мг, 0,024 ммоль) и продолжали перемешивать смесь в течение 2 часов при комнатной температуре. Смесь очищали ВЭЖХ с обращенной фазой, используя колонку 5 мкм С18 Waters XBridge Shield® (размер: 100 мм × 30 мм), включающую предварительную колонку 10 мкм С18 Waters XBridge Shield® (размер: 19 мм × 10 мм). Элюирование выполняли в градиенте от 5% до 95% ацетонитрила в воде в течение 30 минут (буфер: 0,1% ацетата аммония, рН 7,0). Скорость потока была равна 60 мл/мин, и пики фракционировали с помощью УФ-излучения (220 нм). Фракцию 39 лиофилизовали, получая при этом 2,0 мг (3,8%) требуемого соединения. Продукт исследовали при помощи УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии (Bruker Daltonics MicroTof).
RTmin=5,41 минуты (PDA; метод ЖХ, описанный в примере 8)
УФ (λmax): 216 нм (сдвиг), 266 нм
ESI-MS (отрицательная мода): [M-2H]2-=1084,906
Масса нейтрального моноизотопа, установленная экспериментально, [M]=2171,827
Масса нейтрального моноизотопа, вычисленная для C98H129N23O26S4: 2171,836
Молекулярная формула: C98H129N23O26S4
Химическая молекулярная масса = 2173,52.
Пример 19. Антибактериальная активность лабиринтопрептинов и производных
Соединения растворяли в воде с 10% МеОН до конечной концентрации, равной 1 мг/мл. Для выполнения биоанализа использовали стерильные пластинки Nunc размером 24×24 см. На каждую пластинку наносили 200 мл агара. Агар выдерживали в автоклаве до 55°С, охлаждали и добавляли 2-4 мл взвеси культуры испытуемого организма до культивирования. На каждую пластинку помещали 64 фильтровальные пластинки с диаметром 6 мм.
На каждый фильтр наносили 20 мкл испытуемого раствора и инкубировали в течение 1-3 дней при 28°С или 37°С. Определяли зону ингибирования в мм. Для ознакомления с подробным описанием указанных методов см. публикации Bauer et al., Amer. J. Clin. Pathol. 1966, 45, 493-496; Müller & Melchinger, Methoden in der Mikrobiologie, Franckhsche Verlagshandlung, Stuttgart (1964); Mueller & Hinton, Proc. Soc. Expt. Biol. Med. 1941, 48, 330-333.
| Испытуемое соединение | Streptomyces murinus (DSM 40091) 28°С |
Bacillus subtilis (ATCC 6633) 37°С |
| Лабиринтопептин А1, пример 7 | 13 | 16,5 |
| Производное лабиринтопептина А1, пример 16 | 0 | 9 |
| Производное лабиринтопептина А1, пример 18 | 7 | 8 |
| Бисбензильное производное лабиринтопептина А1, пример 17 | 7 | 9 |
| Тетрациклин (контрольное вещество, 1 мг/мл) |
24 | 32 |
Пример 20. Активность против невропатической боли
Лабиринтопептин А1 исследовали в мышиной модели невропатической боли, вызываемой устойчивым повреждением нерва (SNI), для подтверждения воздействия на тактильную аллодинию. У взрослых самцов мышей С57В6 (масса тела: 22,8 г ± 0,35 стандартная ошибка среднего (SEM)) под общим наркозом лигировали и рассекали два основных ответвления седалищного нерва, не повреждая при этом нерв икроножной области. Тактильную аллодинию определяли при помощи испытания фон Фрея, выполняемого в автоматическом режиме: на кожу подошвы задних лап воздействовали палочкой с выдвигаемой иглой, увеличивая давление до 5 г. Усилие в граммах, на которое животное реагировало, отдергивая заднюю лапу, использовали в качестве показателя тактильной аллодинии. Исследование выполняли через 7 дней после повреждения нерва в течение 6 часов, и производили дополнительное измерение через 24 часа. В течение двух дней после рассечения нерва полностью развивалась тактильная аллодиния, которая оставалась устойчивой на протяжении по меньшей мере двух недель. Соединение вводили внутривенно в виде однократной инъекции (3 мг/кг). В качестве наполнителя для внутривенной инъекции использовали смесь этанол:солютол:физиологический раствор с фосфатным буфером в соотношении 1:1:18.
Порог отдергивания лапы (PWT) измеряли для определения эффекта лечения и вычисления площади под кривой (AUC) в течение контрольного периода времени (6 часов) и последующих вычислений процентного значения благоприятного воздействия. Значения PWT, полученные для одной и той же стороны задних лап, использовали для статистического анализа двумя способами: во-первых, при выполнении двумерного анализа ANOVA на основании значений PWT для определенных периодов времени (в течение 24 часов) и, во-вторых, при выполнении одномерного анализа ANOVA в отношении нетрансформированных дельта-значений AUC [AUC 1-6 часов].
Двумерный дисперсионный анализ с повторяющимися измерениями (повторяющийся фактор: ВРЕМЯ, переменная анализа: PWT) с последующим выполнением дополнительного анализа (влияние фактора ГРУППА на каждый уровень фактора ВРЕМЯ (анализ Вайнера), переменная анализа: PWT) и анализа Даннетта для фактора ЛЕЧЕНИЕ для каждого уровня фактора ВРЕМЯ (двухстороннее сравнение относительно уровня, определяемого как НАПОЛНИТЕЛЬ) позволил выявить весьма существенные отличия от группы, которой вводили наполнитель, в течение 1-6 часов после внутривенной инъекции каждого соединения. Воздействие прекращалось через 24 часа после введения. Одномерный анализ ANOVA с использованием дельта-значений [AUC 1-6 часов] позволил получить значение р<0,0001. В результате выполнения анализа Даннетта был выявлено значительное лечебное воздействие лабиринтопептина А1. Процентное значение благоприятного воздействия лечения определяли с использованием значений {AUC 1-6 часов], полученных для той же стороны в группе, которой вводили наполнитель (0% благоприятное воздействие), и всех значений [AUC 1-6 часов], полученных для противоположных сторон во всех трех группах (100% благоприятное воздействие = максимально возможный эффект). При сравнении с указанными пределами лабиринтопептин А1 обеспечивал достижение 95% благоприятного воздействия.
В заключение следует отметить, что соединения формулы (I) значительно уменьшают тактильную аллодинию в мышиной модели невропатической боли, вызываемой устойчивым повреждением нерва (SNI).
Claims (24)
1. Соединение формулы (I)
где
{A} означает группу, выбираемую из
{B} означает группу, выбираемую из
{C} означает группу, выбираемую из
R1 означает группу R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил;
R3 и R4 независимо означают Н, (C1-C6)алкил, (C1-C6)алкилен-С(О)NH2, (С1-С6)алкилен-С(О)NH(С1-С4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2, либо R3 и R4 вместе с атомами S, к которым они присоединены, образуют дисульфидную группу S-S;
R5 и R6 независимо означают Н или ОН, либо R5 и R6 вместе означают =О;
m и n независимо означают 0, 1 или 2;
при условии, что, если
{A} означает
{B} означает
{C} означает
R3 и R4 не могут образовывать дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены;
или соединение формулы (IV), именуемое лабиринтопептином А2,
где
R1 означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2;
m и n независимо означают 0, 1 или 2;
которое имеет любую стереохимическую форму или представляет собой смесь любых стереохимических форм в любом соотношении, либо является его физиологически переносимой солью.
где
{A} означает группу, выбираемую из
{B} означает группу, выбираемую из
{C} означает группу, выбираемую из
R1 означает группу R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил;
R3 и R4 независимо означают Н, (C1-C6)алкил, (C1-C6)алкилен-С(О)NH2, (С1-С6)алкилен-С(О)NH(С1-С4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2, либо R3 и R4 вместе с атомами S, к которым они присоединены, образуют дисульфидную группу S-S;
R5 и R6 независимо означают Н или ОН, либо R5 и R6 вместе означают =О;
m и n независимо означают 0, 1 или 2;
при условии, что, если
{A} означает
{B} означает
{C} означает
R3 и R4 не могут образовывать дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены;
или соединение формулы (IV), именуемое лабиринтопептином А2,
где
R1 означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2;
m и n независимо означают 0, 1 или 2;
которое имеет любую стереохимическую форму или представляет собой смесь любых стереохимических форм в любом соотношении, либо является его физиологически переносимой солью.
2. Соединение формулы (I) по п.1, где
{A} означает
{B} означает
{C} означает
{A} означает
{B} означает
{C} означает
3. Соединение формулы (I) по п.1, где
{A} означает
{B} означает
и {C} означает
и R1 предпочтительно означает группу R1'.
{A} означает
{B} означает
и {C} означает
и R1 предпочтительно означает группу R1'.
4. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, где R1' означает Н.
5. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3 или соединение формулы (IV) по п.1, где R2 означает ОН.
6. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, где R3 и R4 независимо означают Н, (C1-C6)алкил, (C1-C6)алкилен-С(О)NH2 или образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены.
7. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, где R3 и R4 означают Н или образуют дисульфидную группу S-S вместе с атомами S, к которым они присоединены.
8. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, где R5 и R6 означают Н или ОН, при этом если R5 означает ОН, тогда R6 означает Н, и если R5 означает Н, тогда R6 означает ОН, либо R5 и R6 вместе означают =О.
9. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, где R5 означает ОН и R6 означает Н, R5 означает Н и R6 означает ОН.
10. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, имеющее формулу (II), именуемое лабиринтопептином А1 или А3:
где R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил, предпочтительно Н.
где R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил, предпочтительно Н.
11. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, имеющее формулу (III), именуемое лабиринтопептином А1 или А3:
где R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил, предпочтительно Н;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил, предпочтительно R2 означает OН; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2.
где R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н, С(О)-(С1-С6)алкил или С(О)-О-(С1-С6)алкил, предпочтительно Н;
R2 означает ОН, NH2, NH-(C1-C6)алкил, N[(C1-C6)алкил]2, NH-(C1-C4)алкиленфенил или NH-(C1-C4)алкиленпиридил, предпочтительно R2 означает OН; и
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил или (С1-С4)алкилен-С(О)NH2.
12. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, или соединение формулы (IV) по п.1 или п.5, где m и n равны 0; или m и n равны 2; или m равно 0 и n равно 2, или m равно 2 и n равно 0.
13. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, или соединение формулы (IV) по любому из пп.1, 5 или 12, где m и n равны 0.
14. Способ получения соединения формулы (I) по п.1, который включает:
а) ферментацию штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования одного или нескольких соединений формулы (I) в указанной культуральной среде;
b) выделение соединения формулы (I) из культуральной среды; и
с) модификацию, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), и/или превращение, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), или производного соединения, выделенного на стадии b), в физиологически переносимую соль.
а) ферментацию штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования одного или нескольких соединений формулы (I) в указанной культуральной среде;
b) выделение соединения формулы (I) из культуральной среды; и
с) модификацию, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), и/или превращение, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), или производного соединения, выделенного на стадии b), в физиологически переносимую соль.
15. Способ по п.14, где соединение, выделенное на стадии b), имеет формулу (II):
где m и n равны 0,
R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н и
R2 означает ОН.
где m и n равны 0,
R1 означает R1' или группу
где R1' означает Н и
R2 означает ОН.
16. Способ получения соединения по п.1, где соединение имеет формулу (IV):
где m и n оба равны 0,
R1 означает Н,
R2 означает ОН,
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилен-С(О)NH2, (С1-С6)алкилен-С(О)NH(C1-C4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2,
включающий
а) ферментацию штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования соединения лабиринтопептина А2 в указанной культуральной среде;
b) выделение соединения лабиринтопептина А2 из культуральной среды; и
с) модификацию, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), и/или превращение, при необходимости, производного соединения, выделенного на стадии b), в физиологически переносимую соль.
где m и n оба равны 0,
R1 означает Н,
R2 означает ОН,
R3 и R4 независимо означают Н, (С1-С6)алкил, (С1-С6)алкилен-С(О)NH2, (С1-С6)алкилен-С(О)NH(C1-C4)алкил или (С1-С6)алкилен-С(О)N[(C1-C4)алкил]2,
включающий
а) ферментацию штамма Actinomadura namibiensis DSM 6313 в приемлемых условиях в культуральной среде до образования соединения лабиринтопептина А2 в указанной культуральной среде;
b) выделение соединения лабиринтопептина А2 из культуральной среды; и
с) модификацию, при необходимости, соединения, выделенного на стадии b), и/или превращение, при необходимости, производного соединения, выделенного на стадии b), в физиологически переносимую соль.
17. Применение соединения по любому из пп.1-13 для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения инфекций, вызываемых грамположительными бактериями, вирусных инфекций и/или невропатической боли, вызываемой воспалением.
19. Фармацевтическая композиция для лечения инфекций, вызываемых грамположительными бактериями, вирусных инфекций и/или невропатической боли, вызываемой воспалением, включающая по меньшей мере одно соединение по любому из пп.1-13 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.
19. ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А2, имеющая последовательность нуклеиновой кислоты, представленную SEQ ID NO: 13.
20. Препролабиринтопептин А2, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 14.
21. Пролабиринтопептин А2, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 15.
22. ДНК, кодирующая препролабиринтопептин А1, имеющая последовательность нуклеиновой кислоты, представленную SEQ ID NO: 17.
23. Препролабиринтопептин А1, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 18.
24. Пролабиринтопептин А1, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 19.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP08290324.6 | 2008-04-02 | ||
| EP08290324 | 2008-04-02 | ||
| PCT/EP2009/001982 WO2009121483A1 (en) | 2008-04-02 | 2009-03-18 | Highly bridged peptides from actinomadura namibiensis |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010144778A RU2010144778A (ru) | 2012-05-10 |
| RU2498995C2 true RU2498995C2 (ru) | 2013-11-20 |
Family
ID=39730602
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010144778/10A RU2498995C2 (ru) | 2008-04-02 | 2009-03-18 | Пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20110144001A1 (ru) |
| EP (1) | EP2271665B1 (ru) |
| JP (1) | JP5653900B2 (ru) |
| KR (1) | KR101612275B1 (ru) |
| CN (1) | CN102046652B (ru) |
| AR (1) | AR071125A1 (ru) |
| AT (1) | ATE541856T1 (ru) |
| AU (1) | AU2009231118B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0910985A2 (ru) |
| CA (1) | CA2720173A1 (ru) |
| CL (1) | CL2009000791A1 (ru) |
| IL (1) | IL208239A0 (ru) |
| MX (1) | MX2010010115A (ru) |
| MY (1) | MY159790A (ru) |
| RU (1) | RU2498995C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009121483A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1908774A1 (en) * | 2006-10-06 | 2008-04-09 | sanofi-aventis | Antibacterial and antiviral peptides from Actinomadura namibiensis |
| CN102014937A (zh) | 2008-03-03 | 2011-04-13 | 迈阿密大学 | 基于异基因癌细胞的免疫治疗 |
| WO2009117116A2 (en) | 2008-03-20 | 2009-09-24 | University Of Miami | Heat shock protein gp96 vaccination and methods of using same |
| EP2607374A1 (en) * | 2011-12-21 | 2013-06-26 | Sanofi | Method for recombinant production of labyrinthopeptins and functional derivatives thereof |
| US10487124B2 (en) * | 2012-07-12 | 2019-11-26 | Naicons S.R.L. | Lantipeptide |
| EP3377519B1 (en) | 2015-11-18 | 2021-06-16 | Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH | Labyrinthopeptins as anti-viral agents |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198924C2 (ru) * | 1994-09-12 | 2003-02-20 | Хехст АГ | Премерсацидин, промерсацидин, днк (варианты), вектор (варианты), способ получения мерсацидина |
| EA200601074A1 (ru) * | 2003-12-02 | 2006-10-27 | Шварц Фарма Аг | Применение производных пептидов для лечения болей, связанных с заболеванием центральной нервной системы (центральной невропатической боли) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5942423A (en) | 1995-06-07 | 1999-08-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Conversion of compactin to pravastatin by actinomadura |
| CN100516218C (zh) * | 2006-04-30 | 2009-07-22 | 中山大学 | 一种新的线纹芋螺毒素序列、制备方法及其应用 |
| EP1908774A1 (en) * | 2006-10-06 | 2008-04-09 | sanofi-aventis | Antibacterial and antiviral peptides from Actinomadura namibiensis |
| EP2607374A1 (en) * | 2011-12-21 | 2013-06-26 | Sanofi | Method for recombinant production of labyrinthopeptins and functional derivatives thereof |
-
2009
- 2009-03-18 JP JP2011502252A patent/JP5653900B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-18 AU AU2009231118A patent/AU2009231118B2/en not_active Ceased
- 2009-03-18 BR BRPI0910985A patent/BRPI0910985A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2009-03-18 AT AT09728150T patent/ATE541856T1/de active
- 2009-03-18 RU RU2010144778/10A patent/RU2498995C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2009-03-18 KR KR1020107022012A patent/KR101612275B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-18 CA CA2720173A patent/CA2720173A1/en not_active Abandoned
- 2009-03-18 WO PCT/EP2009/001982 patent/WO2009121483A1/en not_active Ceased
- 2009-03-18 EP EP09728150A patent/EP2271665B1/en not_active Not-in-force
- 2009-03-18 CN CN200980120478.5A patent/CN102046652B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-03-18 MX MX2010010115A patent/MX2010010115A/es active IP Right Grant
- 2009-03-18 MY MYPI2010004183A patent/MY159790A/en unknown
- 2009-03-31 CL CL2009000791A patent/CL2009000791A1/es unknown
- 2009-03-31 AR ARP090101143A patent/AR071125A1/es unknown
-
2010
- 2010-09-19 IL IL208239A patent/IL208239A0/en not_active IP Right Cessation
- 2010-09-30 US US12/895,106 patent/US20110144001A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2198924C2 (ru) * | 1994-09-12 | 2003-02-20 | Хехст АГ | Премерсацидин, промерсацидин, днк (варианты), вектор (варианты), способ получения мерсацидина |
| EA200601074A1 (ru) * | 2003-12-02 | 2006-10-27 | Шварц Фарма Аг | Применение производных пептидов для лечения болей, связанных с заболеванием центральной нервной системы (центральной невропатической боли) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MARAZZI A. ET AL. Antibiotics GE23077, novel inhibitors of bacterial RNA polymerase II. Structure elucidation// J. of antibiotics, 04.04.05, v.58, № 4, pp.260-267. GOLDSTEIN B.P. ET AL. A-40926 a new glycopeptide antibiotic with anti-neisseria activity// Antimicrobial agents and chemotherapy, 1987, v. 31, № 12, pp.1961-1966. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX2010010115A (es) | 2010-09-30 |
| CA2720173A1 (en) | 2009-10-08 |
| AU2009231118A1 (en) | 2009-10-08 |
| ATE541856T1 (de) | 2012-02-15 |
| JP5653900B2 (ja) | 2015-01-14 |
| CL2009000791A1 (es) | 2009-10-09 |
| JP2011516048A (ja) | 2011-05-26 |
| KR20110014563A (ko) | 2011-02-11 |
| WO2009121483A1 (en) | 2009-10-08 |
| MY159790A (en) | 2017-01-31 |
| EP2271665A1 (en) | 2011-01-12 |
| CN102046652B (zh) | 2014-11-05 |
| EP2271665B1 (en) | 2012-01-18 |
| CN102046652A (zh) | 2011-05-04 |
| RU2010144778A (ru) | 2012-05-10 |
| US20110144001A1 (en) | 2011-06-16 |
| KR101612275B1 (ko) | 2016-04-14 |
| BRPI0910985A2 (pt) | 2019-09-24 |
| AR071125A1 (es) | 2010-05-26 |
| AU2009231118B2 (en) | 2013-06-27 |
| IL208239A0 (en) | 2010-12-30 |
| HK1155762A1 (en) | 2012-05-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fredenhagen et al. | Duramycins B and C, two new lanthionine containing antibiotics as inhibitors of phospholipase A2 structural revision of duramycin and cinnamycin | |
| RU2498995C2 (ru) | Пептиды с большим числом мостиковых связей, выделяемые из actinomadura namibiensis | |
| RU2451028C2 (ru) | Антибактериальные пептиды из actinomadura namibiensis | |
| US6331521B1 (en) | Echinocandine derivatives with antimicrobial activity | |
| JP6195618B2 (ja) | 新規ランチペプチド | |
| CA2378868A1 (en) | Process for deacylation of lipodepsipeptides | |
| JP2016501232A (ja) | 新規ランチビオティック誘導体およびその調製プロセス | |
| JP4095116B2 (ja) | スクレロデルマ・テキセンスからの抗真菌性ペプチド | |
| HK1155762B (en) | Highly bridged peptides from actinomadura namibiensis | |
| HK1135708B (en) | Antibacterial and antiviral peptides from actinomadura namibiensis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170319 |