RU2496518C1 - Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов - Google Patents
Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2496518C1 RU2496518C1 RU2012118212/10A RU2012118212A RU2496518C1 RU 2496518 C1 RU2496518 C1 RU 2496518C1 RU 2012118212/10 A RU2012118212/10 A RU 2012118212/10A RU 2012118212 A RU2012118212 A RU 2012118212A RU 2496518 C1 RU2496518 C1 RU 2496518C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rabbits
- hemorrhagic disease
- cultures
- escherichiosis
- salmonellosis
- Prior art date
Links
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 title claims abstract description 56
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 30
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 title claims abstract description 29
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 10
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 claims abstract description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 10
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 24
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 abstract 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 10
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 9
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000700110 Myocastor coypus Species 0.000 description 5
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010034107 Pasteurella infections Diseases 0.000 description 4
- 241000714203 Rabbit hemorrhagic disease virus Species 0.000 description 4
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 201000005115 pasteurellosis Diseases 0.000 description 4
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000700562 Myxoma virus Species 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010046861 Vaccination complication Diseases 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010014889 Enterococcal infections Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 241000577483 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Paratyphi B Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000120569 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000001977 bismuth sulfite agar Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- ZUJIHUXXWRPGPY-UHFFFAOYSA-H dibismuth;trisulfite Chemical compound [Bi+3].[Bi+3].[O-]S([O-])=O.[O-]S([O-])=O.[O-]S([O-])=O ZUJIHUXXWRPGPY-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается способа изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. При осуществлении способа проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды. Выделяют чистые культуры возбудителей болезни. Отдельно выращивают культуру Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3. Затем заражают кроликов вирусом геморрагической болезни с активностью не менее 103 ЛД50/см3 и из печени павших кроликов готовят 10-15%-ную суспензию. Раздельно инактивируют культуры возбудителей болезней формалином до конечной концентрации не более 0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°C в течение не более 4-х суток, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант, в качестве которого используют гель гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, перед фасовкой тщательно смешивают конечный продукт. Представленное изобретение позволяет получить безвредную, высокоиммуногенную вакцину ассоциированную против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, стабильную при хранении и может быть использовано при конструировании биопрепаратов. 1 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся разработкой и конструированием вакцинных препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.
Известен способ получения поливалентной вакцины против кишечных инфекций (патент РФ на изобретение №2080875 от 18.03.92, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ получения поливалентной вакцины включает раздельное выращивание культур Salmonella typhi, Salmonella paratyphi B, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, отделение биомассы от питательной среды, экстракцию антигенов проводят водно-солевым раствором при шуттелировании в присутствии антибиотика и мелкораздробленного стекла в течение 1-1,5 ч, полученные экстракты центрифугируют, очистке подвергают супернатанты и после смешивания получают целевой продукт в виде смеси клеточных стенок, содержащих О-антигены используемых культур, со жгутиками, содержащими Н-антигены, и растворимыми Vi-антигенами сальмонелл. Технология получения данной вакцины очень сложная и для профилактики инфекционных болезней кроликов не рекомендуется.
Известен способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099083 от 30.09.94, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ предусматривает раздельное выращивание в жидкой питательной среде с добавлением глюкозы штаммов Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в течение 18-24 часов, полученные культуральные среды подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкие фракции, инактивируют 0,3-0,4%-ным раствором формалина, объединяют их в равных соотношениях по объему и последовательно вносят гидроокись алюминия. Данный способ позволяет получать вакцину против стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Технология получения данной вакцины сложная, после введения животным вызывает поствакцинальные осложнения (воспаление, абсцессы, хромоту).
Известен способ изготовления бивалентной вакцины против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (патент РФ на изобретение №2064304 от 27.07.96, МКИ A61K 39/275). Данный способ заключается в том, что раздельно выращивают вакцинный вирус миксоматоза кроликов в культуре клеток куриных фибробластов с активностью не ниже 104 ИД50/см3, замораживают-оттаивают, смешивают с инактивированной суспензией печени кроликов, зараженной вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, в соотношении 1:1, стабилизируют полученную смесь защитной средой при соотношении 10:1, фасуют и лиофилизируют после замораживания при минус 55±5°C в течение 10±2 ч путем выдерживания материала при температуре от минус 50±5°C до 0°C в течение 31±1 ч и затем от 0°C до плюс 20±1°C в течение 6±1 ч при вакууме 10±0,5 Па и досушивают в течение 3±1 ч. Данный способ позволяет получать бивалентную вакцину против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Технология получения данной вакцины очень сложная.
Техническим результатом изобретения является получение безвредной, специфичной, высокоиммуногенной ассоциированной вакцины для защиты кроликов против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни путем введения новых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияние.
Поставленная задача достигается тем, что в способе изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, включающем раздельное выращивание антигенов, смешивание культур в равных соотношениях, фасовку, согласно изобретению проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию и делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей, отдельно выращивают культуры Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3, затем заражают кроликов вирусом геморрагической болезни с активностью не менее 103 ЛД50/см3 и из печени павших кроликов готовят 10-15% ную суспензию, после этого раздельно инактивируют возбудителей болезней формалином до конечной концентрации не более 0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°C, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант, в качестве которого используют гель гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, перед фасовкой тщательно перемешивают конечный продукт.
Новизна заявляемого изобретения обусловлена тем, что в отличие от известных способов проводят отбор пораженных органов павших кроликов в период заболевания, гибели их от сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, приготавливают суспензию, выделают чистые культуры возбудителей посевом на дифференциально-диагностические среды. Используют при раздельном выращивании чистой культуры Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2% и получают концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 см3. Для получения специфичного вирусного сырья кроликов заражают вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, проводят экстрагирование вируса из 10-15%-ной суспензии печени павших кроликов при температуре 4-6°C в течение 10-12 часов при периодическом перемешивании и освобождение от клеточного детрита фильтрованием через два слоя марли, что позволяет увеличить выход вирусного сырья в два-три раза. Инактивируют культуры возбудителей раздельно формалином до 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°C в течение 4 суток и смешивают инактивированные культуры в равных соотношениях, что позволяет полностью подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Добавление гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему культуры позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 обеспечить у привитых кроликов формирование напряженного иммунитета против трех инфекций.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины поливалентной гидроокисьалюминиевой против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, утвержденной ГУВ МСХ СССР 26.04.1984 г.; ассоциированная вакцина против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (СТО 00495549-0044-2007); ассоциированная вакцина против пастереллеза и вирусной геморрагической болезни кроликов (ТУ утверждены 30.09.94 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена 27.05.94 г.); ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины, утвержденная Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против геморрагической болезни кроликов тканевая инактивированная гидроокисьалюминиевая СТО 00495549-0005-2006.
Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Москва, ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва - Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.722-233.
Методы выделения чистой культуры возбудителя колибактериоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва - Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.219-222.
Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88 г.; в книге «Вирусная геморрагическая болезнь кроликов» авторы: Шевченко А.А., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Власова Г.А. М.: «Две Короны», 1995, 48 с.; в книге «Болезни кроликов», авторы: Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. М.: «Аквариум», 2002, стр.42-57.
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей инфекционных болезней сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно выращивают чистые культуры Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3, а вирусом геморрагической болезни кроликов заражают кроликов, которые погибают через 48-72 ч. Затем приготавливают 10-15%-ную суспензию из печени павших кроликов, зараженных вирусом геморрагической болезни кроликов, инактивируют раздельно путем внесения формалина до конечной концентрации 0,4%-ной, выдерживают при температуре 37°C в течение 48-96 часов, смешивают инактивированные культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.
Пример конкретного осуществления способа изготовления вакцины.
Для изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их сальмонеллезом, эшерихиозом и вирусной геморрагической болезнью, из которых приготавливают суспензию, и проводят лабораторные исследования с целью выделения чистых культур возбудителей.
Для определения морфологии и тинкюриальных свойств возбудителя сальмонеллеза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают тонкие палочки красного цвета, расположенные одиночно, характерные для рода Salmonella.
Для определения культуральных свойств возбудителя сальмонеллеза нутрий делают посевы выделенной культуры из патологического материала в мясопептонный бульон (МПБ), на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, висмутсульфитный агар), на мясопептонный агар (МПА) и инкубируют в термостате при 37°C в течение 16-24 часов. На чашках Петри с МПА вырастают гладкие, прозрачные бесцветные колонии с ровными краями. В пробирках с МПБ наблюдают диффузное помутнение питательной среды. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдают прозрачные бесцветные колонии, на среде Левина - голубоватые, на висмутсульфитном агаре - черные колонии с характерным металлическим блеском, что характерно для рода Salmonella.
При определении биохимической активности чистых культур проводят посевы на дифференциально-диагностические среды с различным набором углеводов и компонентов.
Выделенная чистая культура возбудителя сальмонеллеза характерна для представителей рода сальмонелл (ферментирует глюкозу, маннит, не утилизирует лактозу, сахарозу, не расщепляет мочевину, не образует индол, не разжижает желатину).
Патогенность чистой выделенной культуры определяют путем внутрибрюшинного заражения белых мышей массой 14-18 г. Через 2-4 суток наблюдения все зараженные лабораторные животные погибают при 100% сохранности в контроле. Для подтверждения специфичности гибели белых мышей из паренхиматозных органов павших мышей готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании под иммерсионной системой микроскопа наблюдают тонкие палочки красного цвета, расположенные одиночно, характерные для рода Salmonella.
Для установления серотиповой принадлежности выделенной чистой культуры Salmonella ставят реакцию агглютинации (РА) на стекле по общепринятой методике. Выделенную чистую культуру проверяют с О-комплексными и монорецепторными O- и H-агглютинирующими сыворотками в реакции агглютинации. Для этого выделенную чистую культуру выращивают на скошенном МПА в течение 18-24 ч при температуре 37°C. PA на стекле ставят с каждой из O- и H-комплексных сывороток последовательно до получения положительного результата с двумя сыворотками. Положительный результат PA наблюдают в виде с трудом разбивающихся хлопьев с выделенной культурой Salmonella typhimurium.
Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя эшерихиоза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий путем прикосновения обезжиренным стеклом к свежему разрезу пораженной ткани и последующей фиксацией над пламенем спиртовки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают толстые палочки с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, что характерно для Escherichia coli.
Для определения культуральных свойств возбудителя эшерихиоза кроликов Escherichia coli делают посевы выделенной культуры из патологического материала в мясопептонный бульон (МПБ), на среду Эндо, на мясопептонный агар (МПА) и инкубируют в термостате при 37°С в течение 16-24 часов. На чашках Петри с МПА выростают влажные колонии с ровными краями и гладкой поверхностью серого цвета. В пробирках с МПБ наблюдали равномерное помутнение питательной среды с небольшим осадком, разбивающимся при встряхивании. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдают рост колоний малиново-красного цвета с розовыми ободками диаметром 2-3 мм, что характерно для Escherichia coli.
При определении биохимической активности чистых баккультур проводят посевы на дифференциально-диагностичские среды с различным набором компонентов. Для Escherichia coli характерно расщепление глюкозы и лактозы с образованием кислоты и газа, выделение индола, отсутствие уреазы.
Патогенность чистых выделенных культур определяют путем внутрибрюшинного заражения белых мышей массой 14-18 г. Через 2-4 суток наблюдения все зараженные лабораторные животные погибают при 100% сохранности в контроле. Для подтверждения специфичности гибели мышей из паренхиматозных органов павших мышей приготавливают мазки-отпечатки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании под иммерсионной системой микроскопа в препаратах видны толстые палочки с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, характерные для Escherichia coli. Серологическую типизацию кишечной палочки проводят в реакции агглютинации с набором типоспецифических сывороток по общепринятой методике в пробирках.
В реакции агглютинации исследуемая культура кишечной палочки реагирует с колисывороткой и виден хлопьевидный осадок (положительный результат) при отрицательном контроле.
Выращивание чистой культуры возбудителя проводят в мясопептонном бульоне. Для заражения берут 1-2 см3 культуры Escherichia coli, засевают 80-100 мл жидкой питательной среды и выращивают при 37°C в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту мутности и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 4-5 млрд. в 1 см3.
Для получения вирусного сырья при изготовлении вакцины используют не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов массой не менее 1,5 кг, заражают их вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл. Через 48-72 часа кролики погибают, от павших берут печень в целлофановые пакеты, замораживают, измельчают ножницами и на гомогенизаторе. Полученное сырье доводят физраствором (рН 7,2) до 10-15%-ной суспензии, затем экстрагируют вирус при температуре 4-6°C в течение 10-12 часов, периодически перемешивая, декантируют надосадочную жидкость, к осадку добавляют физраствор 1:1, перемешивают. Для освобождения от клеточного детрита проводили фильтрование через два слоя стерильной марли. Затем отфильтрованное биосырье сливают в емкость и проводят инактивацию внесением формалина 0,1-0,4%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°C в течение 48-96 часов при периодическом перемешивании, затем смешивают инактивированные антигены в равных соотношениях, вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему и тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.
Таким образом, использование для изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов чистых культур возбудителей Salmonella typhimurium, Escherichia coli и вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага, позволяет получать специфичную, высокоиммуногенную ассоциированную вакцину для защиты от этих двух опасных инфекционных болезней эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Раздельное выращивание возбудителей позволяет получать концентрацию Salmonella typhimurium, Escherichia coli не менее 4 млрд. в 1 см3 в течение 12-14 часов инкубирования и вируса геморрагической болезни кроликов с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл. Использование формалина для инактивации в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации позволяет в течение 48-96 часов при температуре 37°C подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность в течение 12 месяцев хранения. Вакцина, полученная заявляемым способом, прошла апробацию. Кроликам вводили однократно в дозе 1 см3 полученную вакцину, и через 12-15 суток у привитых кроликов происходит формирование напряженного иммунитета против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Однократное введение кроликам внутримышечно не вызывает у них поствакцинальных осложнений (см. таблицу).
| Таблица | |||
| Сравнительная характеристика изготовления вакцины по предлагаемому способу и прототипу | |||
| № п/п | Отличительные признаки | Прототип | Предлагаемый способ |
| 1. | Возбудители | Вирус миксомы и штамм «B-87» вируса вирусной геморрагической болезни кроликов | Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации и вирус вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенный из эпизоотического очага |
| 2. | Сырье | Вирус миксомы с активностью не менее 104 ИД50/см3 и 10-20%-ная суспензия печени с вирусом геморрагической болезни кроликов с активностью не менее 103 ЛД50/см3 |
Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0.2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 и вирус вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенный из эпизоотического очага в виде 10-15%-ной суспензии печени с активностью не менее 103 ЛД50/см3 |
| 3. | Стабилизация | Полученную смесь стабилизируют защитной средой при соотношении 10:1 | Нет |
| 4. | Инактивация | Формальдегид 0,1-0,14% в течение 3-4 суток при 27-28°C | Формальдегид 0,1-0,4% в течение 48-96 часов при температуре 37°C |
| 5. | Лиофилизация | После замораживания при минус 55±5°C в течение 10±2 ч путем выдерживания материала при температуре от минус 50±5°C до 0°C в течение 31±1 ч и затем от 0°C до плюс 20±1°C в течение 6±1 ч при вакууме 10±0,5 Па и досушивают в течение 3±1 ч | Нет |
| 6. | Адъювант | Нет | Гель гидроокиси алюминия 20% |
| 7. | Длительность иммунитета | 9 мес. | 12 мес. |
Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.
Claims (1)
- Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, включающий раздельное выращивание антигенов, смешивание культур в равных соотношениях, инактивацию формальдегидом, фасовку, отличающийся тем, что проводят отбор пораженных органов павших кроликов из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию и делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей, отдельно выращивают культуру Salmonella typhimurium, Escherichia coli в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3, затем заражают кроликов вирусом геморрагической болезни с активностью не менее 103 ЛД50/см3 и из печени павших кроликов готовят 10-15%-ную суспензию, после этого раздельно инактивируют культуры возбудителей формалином до конечной концентрации не более 0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°C в течение 48-96 часов, затем в смесь инактивированных культур вносят адъювант, в качестве которого используют гель гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, перед фасовкой тщательно смешивают конечный продукт.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012118212/10A RU2496518C1 (ru) | 2012-05-03 | 2012-05-03 | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012118212/10A RU2496518C1 (ru) | 2012-05-03 | 2012-05-03 | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2496518C1 true RU2496518C1 (ru) | 2013-10-27 |
Family
ID=49446605
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012118212/10A RU2496518C1 (ru) | 2012-05-03 | 2012-05-03 | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2496518C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2231365C1 (ru) * | 2002-11-18 | 2004-06-27 | Кубанский государственный аграрный университет | Способ изготовления вакцины против вирусной гемморрагической болезни кроликов |
| EP1970449A1 (en) * | 1998-09-04 | 2008-09-17 | Emergent Product Development UK Limited | Attenuated salmonella SPI2 mutants as antigen carriers |
| RU2392003C2 (ru) * | 2008-04-02 | 2010-06-20 | ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова | Способ получения сальмонеллезной вакцины |
| RU2429880C1 (ru) * | 2010-04-12 | 2011-09-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов |
-
2012
- 2012-05-03 RU RU2012118212/10A patent/RU2496518C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1970449A1 (en) * | 1998-09-04 | 2008-09-17 | Emergent Product Development UK Limited | Attenuated salmonella SPI2 mutants as antigen carriers |
| RU2231365C1 (ru) * | 2002-11-18 | 2004-06-27 | Кубанский государственный аграрный университет | Способ изготовления вакцины против вирусной гемморрагической болезни кроликов |
| RU2392003C2 (ru) * | 2008-04-02 | 2010-06-20 | ФГОУ ВПО Курская государственная сельскохозяйственная академия им. профессора И.И. Иванова | Способ получения сальмонеллезной вакцины |
| RU2429880C1 (ru) * | 2010-04-12 | 2011-09-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2429012C1 (ru) | Способ изготовления ассоциированной вакцины против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2388489C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2043771C1 (ru) | Вакцина против эшерихиоза животных | |
| RU2496518C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
| RU2538158C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
| RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
| RU2429880C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
| RU2443774C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
| RU2288002C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2406532C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота | |
| RU2301077C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий | |
| RU2338554C2 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2098127C1 (ru) | Ассоциированная вакцина "нековак" против некробактериоза крупного рогатого скота | |
| RU2292915C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий | |
| RU2404801C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против колибактериоза кроликов | |
| RU2301078C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2429879C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
| RU2288005C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против колибактериоза нутрий | |
| RU2406530C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза, псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2301076C1 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2553557C2 (ru) | Способ изготовления вакцины, ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов | |
| RU2099081C1 (ru) | Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий | |
| RU2292914C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140504 |