RU2490634C1 - Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars - Google Patents
Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars Download PDFInfo
- Publication number
- RU2490634C1 RU2490634C1 RU2012102882/15A RU2012102882A RU2490634C1 RU 2490634 C1 RU2490634 C1 RU 2490634C1 RU 2012102882/15 A RU2012102882/15 A RU 2012102882/15A RU 2012102882 A RU2012102882 A RU 2012102882A RU 2490634 C1 RU2490634 C1 RU 2490634C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- boars
- sperm
- chlamydia
- chlamydial infection
- producers
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 241000282887 Suidae Species 0.000 title claims abstract description 7
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title claims abstract description 4
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 title claims description 9
- 201000000902 chlamydia Diseases 0.000 title claims description 9
- 208000012538 chlamydia trachomatis infectious disease Diseases 0.000 title claims description 9
- 229920003319 Araldite® Polymers 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- HOQPTLCRWVZIQZ-UHFFFAOYSA-H bis[[2-(5-hydroxy-4,7-dioxo-1,3,2$l^{2}-dioxaplumbepan-5-yl)acetyl]oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HOQPTLCRWVZIQZ-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims abstract description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 claims abstract description 4
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 4
- 241000498849 Chlamydiales Species 0.000 claims description 4
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 3
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N osmium atom Chemical compound [Os] SYQBFIAQOQZEGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 3
- 238000003325 tomography Methods 0.000 claims 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 abstract description 15
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000010755 BS 2869 Class G Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к инфекционной патологии животных и может использоваться в ветеринарной практике для диагностики хламидиоза у хряков-производителей.The invention relates to veterinary medicine, in particular to the infectious pathology of animals and can be used in veterinary practice for the diagnosis of chlamydia in boars-producers.
Основные диагностические тесты направлены на выявление хламидий или их антигенов в клиническом материале от больных животных. Известен способ диагностики хламидиоза у хряков-производителей. Сущность способа состоит в том, что проводят серологическое исследование сыворотки крови и определяют титр антител к этой инфекции [1]. Известно применение антигенов для обнаружения антител к хламидиям в сыворотке крови больных с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ). Антиген представляет собой полисахаридно-белковый комплекс в рабочей концентрации 5-15 мкг/мл адсорбционного буфера. Набор содержит также хламидийную (положительную) и нормальную (отрицательную) контрольные сыворотки в разведении 1:50-1:150 в инкубационном буфере и коньюгат антивидового иммуноглобулина класса G с пероксидазой (патент РФ 2156620, 1998).The main diagnostic tests are aimed at identifying chlamydia or their antigens in clinical material from sick animals. A known method for the diagnosis of chlamydia in boars-producers. The essence of the method lies in the fact that conduct serological testing of blood serum and determine the titer of antibodies to this infection [1]. It is known to use antigens for detecting antibodies to chlamydia in the blood serum of patients using an enzyme-linked immunosorbent assay (RIF). The antigen is a polysaccharide-protein complex in a working concentration of 5-15 μg / ml adsorption buffer. The kit also contains chlamydial (positive) and normal (negative) control sera at a dilution of 1: 50-1: 150 in the incubation buffer and a conjugate of antiviral immunoglobulin class G with peroxidase (RF patent 2156620, 1998).
Недостатком известных способов является недостаточная информативность диагностики хламидиозов, в частности отрицательный результат при персистентной форме инфекции.A disadvantage of the known methods is the lack of information content in the diagnosis of chlamydia, in particular a negative result with a persistent form of infection.
Целью изобретения является разработка способа диагностики хламидийной инфекции у хряков - производителей, обеспечивающего достоверную информативность, в том числе и у животных, имеющих персистентную форму инфекции.The aim of the invention is to develop a method for the diagnosis of chlamydial infection in boars - producers, which provides reliable information content, including in animals having a persistent form of infection.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является более достоверная (100%) диагностика хламидийной инфекции у хряков-производителей.The technical result of the invention is a more reliable (100%) diagnosis of chlamydial infection in boars-producers.
Поставленная цель достигается тем, что при диагностике хламидиоза у хряков-производителей проводят исследование спермы на хламидийную инфекцию методом электронной микроскопии.This goal is achieved by the fact that in the diagnosis of chlamydia in boars-producers, sperm are examined for chlamydial infection by electron microscopy.
Взятие спермы у хряков-производителей осуществляют мануальным способом. Концентрат спермы получают путем центрифугирования, фиксируют 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывают в фосфатном буфере и обрабатывают осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производят заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу [2], просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко [3].Sperm collection from boars-producers is carried out in a manual way. Sperm concentrate is obtained by centrifugation, fixed with 2.5% glutaraldehyde, for 4-6 hours. Next, lumps of sperm are washed in phosphate buffer and treated with osmium fixative for 1.5-2 hours at a temperature of + 4 degrees. Then, identical firms are poured into araldite and epon. Slices were obtained on an LKB-III ultratome, concentrated with a 2% alcohol solution of uranyl acetate for 15 minutes and lead citrate according to Reynolds [2], viewed in an EMV-100BR electron microscope at an accelerating voltage of 75K. Search and indication of lesions is carried out by the method of targeted ultramicrorotomization by obtaining semi-thin sections and staining them with toluidine blue according to the recipe A.I. Lysenko [3].
Заявляемый способ диагностики хламидиоза хряков-производителей является новым и в литературе не описан.The inventive method for the diagnosis of chlamydia of boars-producers is new and is not described in the literature.
Сущность изобретения поясняется следующим примером.The invention is illustrated by the following example.
Для обоснования информативности заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей было использовано 95 хряков-производителей, принадлежащих СЗПК «Русь» Пермского района Пермского края и 25 голов, принадлежащих свинокомплексу «Рощинский» Республики Башкортостан. Взятие спермы у хряков-производителей осуществляли мануальным способом. Диагностику хламидийной инфекции у хряков-производителей проводили известным способом с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ) и заявляемым способом. Для осуществления заявляемого способа, путем центрифугирования получали концентрат спермы, который сразу же фиксировали 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производили заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB-Ш, концентрировали 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу.To substantiate the informativeness of the proposed method for the diagnosis of chlamydia of boars-producers, 95 boars-producers belonging to SZPK “Rus” of the Perm region of the Perm Territory and 25 heads belonging to the “Roshchinsky” pig complex of the Republic of Bashkortostan were used. Sperm collection from boars-producers was carried out manually. Diagnosis of chlamydial infection in breeding boars was carried out in a known manner using an enzyme-linked immunosorbent assay (RIF) and the claimed method. To implement the proposed method, by centrifugation, a sperm concentrate was obtained, which was immediately fixed with 2.5% glutaraldehyde for 4-6 hours. Next, the lumps of sperm were washed in phosphate buffer and treated with osmium fixative for 1.5-2 hours at a temperature of + 4 degrees. Then, identical firms were poured into araldite and epon. Slices were obtained on an LKB-III ultratome, concentrated with a 2% alcohol solution of uranyl acetate for 15 minutes and lead citrate according to Reynolds.
Полученные срезы просматривали в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляли методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко.The obtained sections were viewed in an EMV-100BR electron microscope at an accelerating voltage of 75K. Search and indication of lesions was carried out by the method of targeted ultramicrorotomization by obtaining semi-thin sections and staining them with toluidine blue according to the recipe A.I. Lysenko.
Результаты сравнительного исследования известного способа и заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей представлены в таблице.The results of a comparative study of the known method and the proposed method for the diagnosis of chlamydia of boars-producers are presented in the table.
При использовании заявляемого способа, в 52 срезах (40,6%) нативной спермы хряков-производителей обнаружили ретикулярные тельца хламидий. Хламидии имели различную форму: округлую, овальную, неправильную, с неравномерно плотной мембраной, ограничивающей мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс. Встречались одиночные ретикулярные тельца хламидий или неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких шаровидных или овальных структур. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. При изучении ультраструктуры сперматозоидов наблюдалось разрежение и деформация ядра головки и шейки. Отмечалось нарушение клеточной оболочки по всему телу, что выражалось в отслаивании, лизисе и обволакивании тела вокруг гомогенной массой (фиг.1, 2, 3).When using the proposed method, in 52 sections (40.6%) of the native sperm of the boars-producers, reticular chlamydial bodies were found. Chlamydia had a different shape: round, oval, irregular, with an unevenly dense membrane bounding a fine-grained matrix with fibrillar structures. There were single reticular chlamydial bodies of indefinite shape with rounded contours, in the cytoplasm of which, against the background of a rarefaction of the matrix, there were many small spherical or oval structures. Some reticular bodies were stuffed with “daughter” bodies and membrane destruction and lysis were observed in places of their accumulation with the release of these structures into the extracellular space. When studying the ultrastructure of sperm, rarefaction and deformation of the nucleus of the head and neck were observed. There was a violation of the cell membrane throughout the body, which was expressed in exfoliation, lysis and enveloping the body around a homogeneous mass (Fig. 1, 2, 3).
При этом, при использовании общеизвестного способа хламидийная инфекция диагностировалась только у 43 животных (32,9%).Moreover, when using the well-known method, chlamydial infection was diagnosed only in 43 animals (32.9%).
Таким образом, предлагаемый способ значительно повышает достоверность диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей.Thus, the proposed method significantly increases the reliability of the diagnosis of chlamydial infection in boars-producers.
Источники информацииInformation sources
1. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней (эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика и меры борьбы). Автореф. дисс.… доктора ветеринарных наук. Казань, 1991. - 40 с.1. Khamadeev R.Kh. Chlamydia of cattle and pigs (epizootology, diagnosis, specific prevention and control measures). Abstract. diss. ... doctors of veterinary sciences. Kazan, 1991 .-- 40 p.
2. Б. Уикли Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. - 324 с.2. B. Wickley Electron microscopy for beginners. M.: Mir, 1975 .-- 324 p.
3. Лысенко А.И. Методы ориентирования и прицельно ультратомирования ткани для электронной микроскопии // Архив патологии. - 1973. №5. - С.68-72.3. Lysenko A.I. Methods of orientation and aiming ultratomization of tissue for electron microscopy // Archive of Pathology. - 1973. No. 5. - S.68-72.
4. Патент РФ, 2156620, 1998.4. Patent of the Russian Federation, 2156620, 1998.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012102882/15A RU2490634C1 (en) | 2012-01-27 | 2012-01-27 | Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012102882/15A RU2490634C1 (en) | 2012-01-27 | 2012-01-27 | Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2490634C1 true RU2490634C1 (en) | 2013-08-20 |
Family
ID=49162942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012102882/15A RU2490634C1 (en) | 2012-01-27 | 2012-01-27 | Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2490634C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005015207A2 (en) * | 2003-08-05 | 2005-02-17 | Istituto Nazionale Per Le Malattie Infettive 'lazzaro Spallanzani' Irccs | Method and diagnostic tests based on flow cytometric analysis of antigen-specific t lymphocytes |
| US20050090656A1 (en) * | 1999-12-03 | 2005-04-28 | Institut Pasteur | Cloning, sequencing and expresssion of a gene encoding an eukaryotic amino acid racemase, and diagnostic, therapeutic, and vaccination applications of parasite and viral mitogens |
-
2012
- 2012-01-27 RU RU2012102882/15A patent/RU2490634C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050090656A1 (en) * | 1999-12-03 | 2005-04-28 | Institut Pasteur | Cloning, sequencing and expresssion of a gene encoding an eukaryotic amino acid racemase, and diagnostic, therapeutic, and vaccination applications of parasite and viral mitogens |
| WO2005015207A2 (en) * | 2003-08-05 | 2005-02-17 | Istituto Nazionale Per Le Malattie Infettive 'lazzaro Spallanzani' Irccs | Method and diagnostic tests based on flow cytometric analysis of antigen-specific t lymphocytes |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ХАМАДЕЕВ Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней (эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика и меры борьбы). Автореф. дисс. доктора ветеринарных наук. - Казань, 1991, 40, с. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brodersen | Immunohistochemistry used as a screening method for persistent bovine viral diarrhea virus infection | |
| Koziol-White et al. | Precision cut lung slices: an integrated ex vivo model for studying lung physiology, pharmacology, disease pathogenesis and drug discovery | |
| IL276613A (en) | Identifying status of male fertility by determining sperm capacitation | |
| Albayrak et al. | Molecular detection of pestiviruses in aborted foetuses from provinces in northern Turkey | |
| Ghodasara et al. | Comparison of Rose Bengal plate agglutination, standard tube agglutination and indirect ELISA tests for detection of Brucella antibodies in cows and buffaloes | |
| Sharma et al. | Visualizing macrophage extracellular traps using confocal microscopy | |
| RU2490634C1 (en) | Method to diagnose chlamydial infection in breeding boars | |
| CN105388300A (en) | Tuberculosis Immunodiagnostic Molecular Marker and Its Vaccine Application | |
| RU2425377C1 (en) | Method to diagnose leukosis in cattle | |
| Mohamed et al. | Human cystic echinococcosis in the nalut district of western libya: a clinico-epidemiological study | |
| Zhou et al. | Myeloid-derived suppressor cells exert immunosuppressive function on the T helper 2 in mice infected with Echinococcus granulosus | |
| Baake et al. | Detection of intraocular leptospiral DNA, antibodies and Leptospira spp. in horses with equine recurrent uveitis in different laboratories | |
| RU2525688C2 (en) | METHOD FOR PRODUCING PURIFIED SOMATIC ANTIGEN OF Dirofilaria immitis | |
| RU2687553C1 (en) | Method of lifetime differential diagnosis of bovine tuberculosis and mycobacterioses | |
| RU2264628C2 (en) | Method for predicting leukosis in cattle | |
| RU2640192C1 (en) | Elisa test system for segological diagnostics of cattle nodulous dermatitis - dermatitis nodularis bovum | |
| Babić et al. | Comparison of Cytology and Cultural Examination and Intradermal Test Results in Atopic Dogs with Evidence of Malassezia Pachydermatis. | |
| RU2820960C1 (en) | Method of analyzing blood serum or milk samples for detecting antibodies to bovine leukaemia virus (blv) | |
| Verma et al. | Seroprevalence of brucellosis in buffaloes of Malwa region of Madhya Pradesh | |
| Jensen et al. | Laboratory animal pathology in relation to spontaneous infections | |
| CN112305225A (en) | Anti-human AQPs autoantibody detection kit and preparation method thereof | |
| Alaraji et al. | Serological study of toxoplasmosis in domestic pigeon Colombia Livia in Babylon province | |
| Alhussen et al. | Bovine mycoplasmosis occurrence on livestock farms in the Russian Federation for 2015–2018 | |
| de Araújo Teixeira et al. | Risk factors and detection of brucella ovis in naturally infected rams and ewes | |
| Abo-Aziza | Advances and prospective in diagnosis of hydatidosis in farm animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140128 |