RU2476883C1 - Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease - Google Patents
Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2476883C1 RU2476883C1 RU2011131413/15A RU2011131413A RU2476883C1 RU 2476883 C1 RU2476883 C1 RU 2476883C1 RU 2011131413/15 A RU2011131413/15 A RU 2011131413/15A RU 2011131413 A RU2011131413 A RU 2011131413A RU 2476883 C1 RU2476883 C1 RU 2476883C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- treatment
- heart disease
- cholesterol
- hdl
- blood
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 title abstract 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 76
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 37
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims description 36
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 abstract description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 102000057248 Lipoprotein(a) Human genes 0.000 abstract 1
- 108010033266 Lipoprotein(a) Proteins 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 71
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 71
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 37
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 37
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 27
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 27
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 13
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 13
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 11
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 9
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 3
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 102100040214 Apolipoprotein(a) Human genes 0.000 description 2
- 101710115418 Apolipoprotein(a) Proteins 0.000 description 2
- 101100177544 Arabidopsis thaliana FC2 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010003211 Arteriosclerosis coronary artery Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000006 Nitroglycerin Substances 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 208000026758 coronary atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229960003711 glyceryl trinitrate Drugs 0.000 description 2
- 208000020346 hyperlipoproteinemia Diseases 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 102000002572 Alpha-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010068307 Alpha-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000018616 Apolipoproteins B Human genes 0.000 description 1
- 108010027006 Apolipoproteins B Proteins 0.000 description 1
- 102000006734 Beta-Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010087504 Beta-Globulins Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150042233 Chm gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- USYLIGCRWXYYPZ-UHFFFAOYSA-N [Cl].[Fe] Chemical compound [Cl].[Fe] USYLIGCRWXYYPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000013103 analytical ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000036523 atherogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000005830 nonesterified fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002186 septum of brain Anatomy 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 210000001562 sternum Anatomy 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в кардиологии и терапии.The invention relates to medicine and can be used in cardiology and therapy.
Известны способы разделения на фракции липопротеинов (ЛП) крови методом аналитического ультрацентрифугирования крови (А.Н.Климова, Н.Г.Никульчева. "Липиды, липопротеины и атеросклероз", 1995, Питер, пресс, с.98-102) и разделения на фракции ЛП в полиакриламидном геле (Н.Н.Шацкая "Биохимические исследования в оценке состояния сердечнососудистой системы." В кн. "Методы исследований в профпатологии", М., 1988, с.95-97).Known methods of separation into blood lipoprotein (LP) fractions by the method of analytical ultracentrifugation of blood (A. N. Klimova, N. G. Nikulcheva. "Lipids, lipoproteins and atherosclerosis", 1995, Peter, press, pp. 98-102) and separation into fraction of LP in polyacrylamide gel (N.N. Shatskaya "Biochemical studies in assessing the state of the cardiovascular system." In the book. "Research Methods in Occupational Pathology", M., 1988, pp. 95-97).
Известны также способы разделения на фракции ЛП путем электрофореза в геле агарозы (Фенотипирование гиперлипопротеинемий на основе электрофореза липопротеинов в геле агарозы, Лаб. Дело, 1980, №5, с.287-290);There are also known methods of separation into LP fractions by agarose gel electrophoresis (Phenotyping of hyperlipoproteinemia based on agarose gel electrophoresis of lipoproteins, Lab. Delo, 1980, No. 5, p. 287-290);
RU 2099693 C1, 20.12.1997. RU 2102767 C1, 20.01.1998. SU 1334087 A1, 30.08.1987. US 5547873 A, 20.08.1996.RU 2099693 C1, 12.20.1997. RU 2102767 C1, 01.20.1998. SU 1334087 A1, 08.30.1987. US 5547873 A, 08.20.1996.
Недостатком данных способов является то, что они не позволяют выявить все фракции ЛП крови, включая ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП и ЛП (а), а служат для разделения на фракции ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП от комплекса альбумина с неэтерифицированными жирными кислотами.The disadvantage of these methods is that they do not allow to identify all fractions of blood LP, including HM, HDL, LDL, VLDL and LP (a), but serve to separate the fractions of HM, HDL, LDL, VLDL from the complex of albumin with non-esterified fatty acids .
Известен также способ определения фракций липопротеинов крови у больных ишемической болезнью сердца (RU №2200950 С2 G01N 33/49, 20.03.2003, Бюл.№8.)There is also a method of determining the fractions of blood lipoproteins in patients with coronary heart disease (RU No. 2200950 C2 G01N 33/49, 03.20.2003, Bull. No. 8.)
Данный способ является наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.This method is the closest to the proposed technical essence and the achieved result and is selected as a prototype.
Недостатком способа-прототипа является малая точность, так как он не позволяет выявить минорные фракции ЛП. Важно, что для ранней диагностики заболевания необходимо выявление минорной фракции ЛП (а).The disadvantage of the prototype method is the low accuracy, since it does not allow to identify minor fractions of the drug. It is important that for the early diagnosis of the disease, the identification of the minor fraction of the LP (a) is necessary.
Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и чувствительности способа.The task of the invention is to increase the accuracy and sensitivity of the method.
Указанная задача решается разделением на фракции липопротеинов крови у больных ишемической болезнью сердца (ИБС) электрофорезом в геле агарозы, путем исследования сыворотки крови до и после лечения, отличающегося тем, что определяют уровень ЛП (а) с помощью дополнительной обработки 0,3 мл сыворотки крови 0,1 мл 0,1% раствора Тритона Х-100 и инкубации 15 минут при 20°С, перемешивают смесь методом встряхивания 120 раз в 1 мин, дезинтеграцией, последующей инкубацией сыворотки крови больного с раствором судана Б в течение 1 ч в темном термостате при 40°С, и затем внесения пробы в лунку в геле агарозы с помощью основания 4×20 мм для электрофореза ЛП и последующей фиксацией электрофореграмм, их высушиванием, денситометрией и при снижении уровня ЛП (а) на 30% и более по сравнению с исходным уровнем, увеличением уровня ЛПВП на 30% и более, холестерина ЛПВП с 0,8 до 1,6 ммоль/л и более оценивают лечение ишемической болезни сердца как эффективное.This problem is solved by separation of blood lipoproteins into fractions in patients with coronary heart disease (IHD) by agarose gel electrophoresis, by examining blood serum before and after treatment, characterized in that the level of LP (a) is determined by additional treatment with 0.3 ml of blood serum 0.1 ml of a 0.1% solution of Triton X-100 and incubation for 15 minutes at 20 ° C, mix the mixture by shaking 120 times in 1 min, disintegration, followed by incubation of the patient's blood serum with Sudan B solution for 1 hour in a dark thermostat at 40 ° C then making a sample in a well in an agarose gel using a 4 × 20 mm base for electrophoresis of the drug and subsequent fixation of the electrophoregrams, their drying, densitometry and with a decrease in the level of drug (a) by 30% or more compared to the initial level, increase in the level of HDL by 30% or more, HDL cholesterol from 0.8 to 1.6 mmol / L or more evaluate the treatment of coronary heart disease as effective.
Новым в предлагаемом изобретении является дополнительная инкубация 0,3 мл пробы сыворотки крови пациента с 0,1 мл 0,1% раствора детергента тритона Х-100 при 20°С в течение 15 мин, перемешивание смеси методом встряхивания 120 раз в 1 мин, дезинтеграция, что позволяет лучше выявлять минорные фракции ЛП крови, ЛПВП, холестерина ЛПВП и исследовать их в динамике до и после лечения.New in the invention is the additional incubation of 0.3 ml of a patient’s blood serum sample with 0.1 ml of a 0.1% solution of X-100 triton detergent at 20 ° C for 15 minutes, mixing the mixture by shaking 120 times in 1 minute, disintegration that allows you to better identify minor fractions of blood LP, HDL, HDL cholesterol and study them in the dynamics before and after treatment.
Исследование ЛП разных классов при диагностике ишемической болезни сердца (ИБС) рекомендовано Всероссийским научным обществом кардиологов согласно положению рекомендаций Европейского общества по изучению атеросклероза - «Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза» (г.Москва, 2005 г.; Клиническая лабораторная диагностика, №10, 2008 г., с.21-32).The study of drugs of different classes in the diagnosis of coronary heart disease (CHD) is recommended by the All-Russian Scientific Society of Cardiology according to the provisions of the recommendations of the European Society for the Study of Atherosclerosis - "Diagnosis and correction of lipid metabolism disorders for the prevention and treatment of atherosclerosis" (Moscow, 2005; Clinical laboratory diagnostics, No. 10, 2008, p.21-32).
В настоящее время перспективными являются методы исследования липидов с детергентами /Тритон Х-100 и др./ В лабораторной практике все больше используются прямые или гомогенные методы определения липопротеинов (ЛП) и их липидов. Такие методы основаны на использовании различных детергентов, способных блокировать или солюбилизировать классы ЛП для специфического выделения ЛПВП, ЛПНП и других фракций ЛП.At present, lipid studies with detergents are promising / Triton X-100 et al. / In laboratory practice, direct or homogeneous methods for determining lipoproteins (LPs) and their lipids are increasingly being used. Such methods are based on the use of various detergents that can block or solubilize classes of drugs for the specific isolation of HDL, LDL and other fractions of the drug.
При использовании таких методов изоляция других классов ЛП не требует дополнительных операций, и концентрацию холестерина (ХС) в классах ЛП можно определить напрямую в сыворотке крови общепринятыми ферментными методами в той же кювете («Клиническая лабораторная диагностика», №10, 2008 г., с.21-32).Using these methods, isolation of other classes of drugs does not require additional operations, and the concentration of cholesterol (cholesterol) in classes of drugs can be determined directly in blood serum by conventional enzyme methods in the same cuvette (Clinical Laboratory Diagnostics, No. 10, 2008, p. .21-32).
Увеличение концентрации ЛП abnormal или ЛП (а) в крови считают независимым фактором риска атеросклероза. При содержании в крови ЛП (а) более 300 мкг/мл при норме 0-300 мкг/мл риск возникновения коронарного атеросклероза увеличивается вдвое, а при одновременном повышении уровня ЛП (а) ХС и ХС ЛПНП - в 5 раз (J.A. M.A. - 2001. - Vol.285. - p.2486-2497, Eur. Heart. J. - 2003. - Vol.24, - p.1601-1610).An increase in the concentration of abnormal LP or LP (a) in the blood is considered an independent risk factor for atherosclerosis. With a blood content of LP (a) of more than 300 μg / ml at a rate of 0-300 μg / ml, the risk of coronary atherosclerosis is doubled, and with a simultaneous increase in the level of LP (a) of cholesterol and LDL cholesterol - by 5 times (JAMA - 2001. - Vol. 285. - p. 2486-2497, Eur. Heart. J. - 2003. - Vol.24, - p. 1601-1610).
Итак, в настоящее время особое внимание уделяется исследованию ЛП (а), в связи с чем разрабатываются способы лабораторной диагностики, позволяющие исследовать этот липопротеин крови. Он относится к апо-B-содержащим липопротеинам, богатым холестеролом (ХС). ЛП(а) идентичен "тонущим" пре-β-ЛП (sinking pre-p-Lp), имеющим при электрофорезе подвижность пре-β-ЛП. ЛП (а) содержат 27% белка, 8% углеводов и 65% липидов, из которых ЭХС составляют 59%, НЭХС - 14%, ФЛ - 14%.So, at present, special attention is paid to the study of LP (a), in connection with which laboratory diagnostic methods are being developed to study this blood lipoprotein. It belongs to apo-B-containing lipoproteins rich in cholesterol (cholesterol). LP (a) is identical to sinking pre-β-LP (sinking pre-p-Lp), which has the mobility of pre-β-LP during electrophoresis. PL (a) contains 27% protein, 8% carbohydrates and 65% lipids, of which ECS make up 59%, NEHS - 14%, and PL - 14%.
Белковым компонентом ЛП (а) является высокогликозилированный полипептид - апо (а), имеющий близкое структурное сродство к плазминогену - одному из факторов системы свертывания-противосвертывания крови. При росте концентрации ЛП (а) в крови нарушаются процессы микроциркуляции в кровеносных артериях с возможным образованием микротромбов.The protein component of LP (a) is a highly glycosylated polypeptide - apo (a), which has a close structural affinity for plasminogen, one of the factors of the coagulation-anticoagulation system. With an increase in the concentration of LP (a) in the blood, the microcirculation processes in the blood arteries are disrupted with the possible formation of microthrombi.
Благодаря наличию в структуре апо (а) сиаловых кислот, ЛП (а) более отрицательно заряжен по сравнению с β-ЛП в электрическом поле, лучше растворим в воде, может взаимодействовать с ионами металлов (кальция). Этот липопротеин гетерогенен. Все это свидетельствует об особой роли ЛП (а) в атерогенезе.Due to the presence of sialic acids in the apo (a) structure, PL (a) is more negatively charged compared to β-PL in an electric field, it is better soluble in water, and can interact with metal ions (calcium). This lipoprotein is heterogeneous. All this indicates the special role of LP (a) in atherogenesis.
ЛП (а) могут взаимодействовать с ЛПНП-рецепторами, оказывая слабое влияние на активность ГМК-КоА редуктазы, на этерификацию ХС. Период полураспада ЛП (а) длинее, чем у ЛПНП, и составляет 3,3 сут. Содержание ЛП (а) в крови в норме не превышает 30 мг/л. При высокой концентрации в крови ЛП (а) выявляется в местах поражения сосудов в области скопления фибриногена. Повышенная концентрация ЛП (а) часто сочетается с IIа, IIб типами гиперлипопротеинемий. Поэтому в клинической практике крайне важно определение ЛП (а), одновременно с определением белков острой фазы воспаления. Установлено, что большинство гиполипидемических препаратов не влияет на повышенный уровень ЛП (а). Мировые популяционные исследования показали, что ЛП (а) представляет собой самостоятельный и независимый фактор риска ИБС - наиболее тяжелого проявления атеросклероза.LP (a) can interact with LDL receptors, exerting a weak effect on the activity of GMK-CoA reductase, on the esterification of cholesterol. The half-life of the drug (a) is longer than that of LDL, and is 3.3 days. The content of LP (a) in the blood normally does not exceed 30 mg / L. At a high concentration in the blood, PL (a) is detected at the sites of vascular damage in the area of accumulation of fibrinogen. An increased concentration of LP (a) is often combined with II a , II b types of hyperlipoproteinemia. Therefore, in clinical practice, the determination of LP (a) is extremely important, simultaneously with the determination of proteins of the acute phase of inflammation. It was found that most lipid-lowering drugs do not affect elevated levels of LP (a). World population studies have shown that LP (a) is an independent and independent risk factor for coronary artery disease - the most severe manifestation of atherosclerosis.
Фракция ЛП (а) гетерогенна. Установлено, что при электрофорезе ЛП (а) находятся в области β-глобулинов, но до 5% ЛП (а) при этом могут выявляться в области α-глобулинов.The LP (a) fraction is heterogeneous. It was established that during electrophoresis, the drugs (a) are in the region of β-globulins, but up to 5% of the drugs (a) can be detected in the region of α-globulins.
По причине такой выраженной гетерогенности достаточно сложно оценить при электрофорезе всю фракцию ЛП (а), а тем более ее минорные подфракции, которые могут остаться на линии старта, если размер их частиц достаточно велик. Поэтому использование общепринятого в исследованиях последнего пятидесятилетия детергента Тритон Х-100 для обработки сыворотки крови, а именно липопротеинов крови, ведущее к частичной делипидизации ЛП и увеличению их подвижности при электрофорезе, позволяет выявить минорные фракции ЛП (а). Поскольку ЛП (а) наиболее атерогенен, очень важно на ранних стадиях заболевания выявлять максимальное содержание ЛП (а) в крови каждого пациента. Это позволяет диагностировать ИБС еще до стадии значительных изменений других клинико-лабораторных показаний, повышает точность диагностики заболевания. В свою очередь таким пациентам рано назначается патогенетически обоснованная терапия. Не менее важно выявление минорных фракций ЛП (а) для оценки эффективности терапии заболевания и прогнозирования течения ИБС.Due to such pronounced heterogeneity, it is quite difficult to evaluate the whole fraction of LP (a) during electrophoresis, and even less its minor subfractions, which can remain on the start line if their particle size is large enough. Therefore, the use of the Triton X-100 detergent commonly used in studies of the last fifty years for the treatment of blood serum, namely blood lipoproteins, leading to partial delipidization of drugs and an increase in their mobility during electrophoresis, makes it possible to identify minor fractions of drugs (a). Since LP (a) is the most atherogenic, it is very important in the early stages of the disease to identify the maximum content of LP (a) in the blood of each patient. This allows you to diagnose coronary heart disease before the stage of significant changes in other clinical and laboratory indications, improves the accuracy of the diagnosis of the disease. In turn, pathogenetically substantiated therapy is prescribed to such patients early. Equally important is the identification of minor LP fractions (a) to assess the effectiveness of the treatment of the disease and to predict the course of IHD.
Все сказанное свидетельствует о крайней важности разработки способов лабораторной диагностики, позволяющих наиболее полно выявлять ЛП (а), включая и минорные фракции ЛП (а) как предиктора атеросклероза, инфаркта миокарда и ишемического инсульта.All of the above indicates the extreme importance of developing laboratory diagnostic methods that allow for the most complete detection of LP (a), including minor fractions of LP (a) as a predictor of atherosclerosis, myocardial infarction and ischemic stroke.
Существенные признаки, характеризующие изобретение, проявили в заявляемой совокупности новые свойства, явным образом не вытекающие из уровня техники в данной области и неочевидные для специалиста.The essential features characterizing the invention showed in the inventive combination new properties that are not explicitly derived from the prior art in this field and are not obvious to a specialist.
Идентичной совокупности признаков не обнаружено при изучении патентной и научно-медицинской литературы. Данное изобретение может быть использовано в практическом здравоохранении для повышения точности диагностики у больных ИБС.An identical set of features was not found in the study of patent and medical literature. This invention can be used in medical practice to improve the accuracy of diagnosis in patients with coronary artery disease.
Таким образом, следует считать данное техническое решение соответствующим условиям патентоспособности: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость». Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных рисунков.Thus, this technical solution should be considered relevant to the conditions of patentability: “Novelty”, “Inventive step”, “Industrial applicability”. The invention will be clear from the following description and the attached drawings.
На фиг.1 представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови: а - в группе контроля способом-прототипом, 6 - в группе контроля предлагаемым способом;Figure 1 presents the results of electrophoretic separation into fractions of LP serum: a - in the control group by the prototype method, 6 - in the control group of the proposed method;
На фиг.2 (а, б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови больных ИБС до лечения (I группа);Figure 2 (a, b) presents the results of electrophoretic separation into LP fractions of the blood serum of patients with coronary artery disease before treatment (group I);
На фиг.3 (а, б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП сыворотки крови больного ИБС по способу-прототипу, а на фиг.4 (а, б) представлены результаты через 24 дня после лечения ИБС у пациентов I группы (фракции ЛПНП и ЛПОНП были менее интенсивны).Figure 3 (a, b) presents the results of electrophoretic separation into LP fractions of the blood serum of a patient with coronary artery disease according to the prototype method, and figure 4 (a, b) presents the results 24 days after treatment of coronary artery disease in patients of group I (LDL fractions and VLDL were less intense).
На фиг.5 (а, б) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП крови больного ИБС по способу-прототипу и предлагаемому способу.Figure 5 (a, b) presents the results of electrophoretic separation into fractions of the LP of the blood of a patient with coronary artery disease according to the prototype method and the proposed method.
На фиг.6 (а, б, в) представлены результаты электрофоретического разделения на фракции ЛП крови больного ИБС по способу-прототипу и предлагаемому способу до и после лечения.Figure 6 (a, b, c) presents the results of electrophoretic separation into blood drug fractions of the blood of a patient with coronary artery disease according to the prototype method and the proposed method before and after treatment.
Способ осуществляется следующим образом поэтапно:The method is as follows in stages:
1) приготовление раствора судана Б: 400 мг судана Б растворяют в 20 мг этиленгликоля на кипящей водяной бане в течение 50 минут, фильтруют, хранят в стеклянной посуде;1) preparation of a solution of Sudan B: 400 mg of Sudan B is dissolved in 20 mg of ethylene glycol in a boiling water bath for 50 minutes, filtered, stored in a glass dish;
2) приготовление геля агарозы: 320 мг агарозы А фирмы "Sigma" растворяют в 20 мл воды для кипячения, затем помещают в термостат при 55°С; добавляют 20 мл раствора альбумина (1 г альбумина в 200 мл вероналмединалового буфера, рН 8,6). 3 мл геля агарозы наносят на обезжиренное горизонтально установленное предметное стекло, помещают металлический стальной стержень-брусок 4×20 мм (высотой 10 мм), который после застывания геля убирают магнитом;2) preparation of agarose gel: 320 mg of Sigma A agarose A is dissolved in 20 ml of boiling water, then placed in a thermostat at 55 ° C; add 20 ml of albumin solution (1 g of albumin in 200 ml of veronalmedinal buffer, pH 8.6). 3 ml of agarose gel is applied to a fat-free horizontally mounted glass slide, a metal steel rod-bar 4 × 20 mm (10 mm high) is placed, which, after gel setting, is removed with a magnet;
3) к 0,3 мл пробы сыворотки крови пациента добавляют 0,1 мл 0,1% раствора тритона Х-100, инкубируют 15 мин при 20°С, перемешивают смесь методом встряхивания 120 раз в 1 мин, добавляют 0,15 мл раствора судана Б, помещают на 1 час в темный термостат при 40°С, затем добавляют 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, подогревают при 55°С и подогретым вносят в лунку геля агарозы размером 4×20×10 мм;3) 0.1 ml of a 0.1% solution of Triton X-100 is added to 0.3 ml of a patient’s blood serum sample, incubated for 15 min at 20 ° С, the mixture is stirred by shaking 120 times in 1 min, 0.15 ml of solution is added Sudan B, placed for 1 hour in a dark thermostat at 40 ° C, then add 0.2 ml of a hot agarose gel solution, mix, warm at 55 ° C and make 4 × 20 × 10 mm agarose gel in a well;
4) предметное стекло помещают в камеру для электрофореза слоем агарозы вниз, электрофорез проводят в холодильной камере при температуре 4°С при напряжении 100 В и силе тока 40-45 мА;4) a slide is placed in an electrophoresis chamber with an agarose layer down, electrophoresis is carried out in a refrigerator at a temperature of 4 ° C at a voltage of 100 V and a current of 40-45 mA;
5) электрофореграмму фиксируют в 5% растворе уксусной кислоты в течение одного часа, затем высушивают между листами фильтровальной бумаги, непрерывно смачивая 96% этиловым спиртом;5) the electrophoregram is fixed in a 5% solution of acetic acid for one hour, then dried between sheets of filter paper, continuously wetting with 96% ethyl alcohol;
6) денситометрию проводят на микрофотометре МФ-4;6) densitometry is carried out on an MF-4 microphotometer;
7) проводится спектрофотометрическое определение холестерина ЛПВП:7) a spectrophotometric determination of HDL cholesterol is performed:
принцип метода: гепарин в присутствии ионов двухвалентного марганца вызывает осаждение пре β- и β-липопротеинов, α-липопротеины остаются в растворе.principle of the method: heparin in the presence of divalent manganese ions causes precipitation of pre β- and β-lipoproteins, α-lipoproteins remain in solution.
Реактивы:Reagents:
1. Хлористый марганец: марка 4, каталожный номер 120123.1. Manganese chloride: grade 4, catalog number 120123.
2. Гепарин, фармакопейный, 5000 ед/мл.2. Heparin, pharmacopeia, 5000 units / ml.
3. Изопропиловый спирт, Ч, 150157.3. Isopropyl alcohol, Ch, 150157.
4. Уксусная кислота ледяная, ХЧ, 190023.4. Acetic acid glacial, ChP, 190023.
5. Серная кислота, ХЧ, 170212.5. Sulfuric acid, ChP, 170212.
6. Ортофосфорная кислота. Ч, 200200.6. Phosphoric acid. H, 200200.
7. Хлорное железо, ХЧ, 070105.7. Chlorine iron, ChC, 070105.
8. Стандартный холестерин.8. Standard cholesterol.
Приготовление реактивовReagent Preparation
Раствор хлорида марганца 2 М:39,58 г MnCl2×4H2O растворить в 100 мл дистиллированной воды. Раствор стабилен в течение длительного времени.Manganese chloride solution 2 M: 39.58 g of MnCl 2 × 4H 2 O dissolved in 100 ml of distilled water. The solution is stable for a long time.
Основной раствор хлорного железа: 25 г FeCl3 x 6H2O растворяют при нагревании на водяной бане с температурой 80°С в 80 мл концентрированной ортофосфорной кислоты, охлаждают и доводят объем ортофосфорной кислоты до 100 мл. Хранят в посуде из темного стекла длительное время. Рабочий раствор хлорного железа: 8 мл основного раствора осторожно смешивают с 80 мл концентрированной серной кислоты и охлажденную смесь доводят серной кислотой до объема 100 мл. Раствор стабилен в течение месяца. Стандарт холестерина: 50 мг кристаллического холестерина растворяют в 100 мл изопропилового спирта; стандарт стабилен в течение длительного времени при хранении в холодильнике.Basic solution of ferric chloride: 25 g of FeCl 3 x 6H 2 O are dissolved in 80 ml of concentrated phosphoric acid in a water bath at 80 ° C, cooled and the volume of phosphoric acid is adjusted to 100 ml. Store in a glass dish for a long time. Working solution of ferric chloride: 8 ml of the main solution is carefully mixed with 80 ml of concentrated sulfuric acid and the cooled mixture is made up with sulfuric acid to a volume of 100 ml. The solution is stable for a month. Cholesterol standard: 50 mg of crystalline cholesterol is dissolved in 100 ml of isopropyl alcohol; The standard is stable for a long time when stored in the refrigerator.
Ход определенияDefinition Progress
В пробирки помещают 1 мл сыворотки крови, добавляют 40 мл раствора гепарина и перемешивают, после этого приливают 50 мкл раствора хлорида марганца, тщательно перемешивают и помещают в лед на 30 мин.1 ml of blood serum is placed in test tubes, 40 ml of heparin solution are added and mixed, then 50 μl of manganese chloride solution is added, mixed thoroughly and placed on ice for 30 minutes.
Далее пробы центрифугируют в течение 10 мин при 2500 об/мин 200 мкл супернатанта переносят в пробирки, добавляют по 2,0 мл изопропилового спирта, встряхивают и для экстракции холестерина оставляют стоять 10 мин при температуре 20-25°С, затем центрифугируют 10 мин при 2500 об/мин. В пробирки переносят 600 мкл супернатанта, добавляют 1,2 мл ледяной уксусной кислоты и 1,2 мл рабочего раствора хлорного железа. Пробы инкубируют в течение 15 мин в водяной бане при температуре 37°С. Оптическую плотность проб измеряют при λ 540-560 нм против воды. В каждой серии определений ставят стандарт холестерина: 200 мкл стандартного раствора холестерина обрабатывают также, как и сыворотку. Контроль качества проводят с использованием контрольной сыворотки.Next, the samples are centrifuged for 10 minutes at 2500 rpm. 200 μl of the supernatant are transferred into test tubes, 2.0 ml of isopropyl alcohol are added, shaken and left to stand for 10 minutes at 20–25 ° С, then centrifuged for 10 minutes at 2500 rpm 600 μl of supernatant are transferred into the tubes, 1.2 ml of glacial acetic acid and 1.2 ml of working solution of ferric chloride are added. Samples are incubated for 15 min in a water bath at a temperature of 37 ° C. The optical density of the samples is measured at λ 540-560 nm against water. In each series of determinations, a cholesterol standard is set: 200 μl of a standard cholesterol solution is treated in the same way as serum. Quality control is carried out using control serum.
Расчет концентрации холестерина ЛПВП проводят на основании стандарта.The calculation of HDL cholesterol concentration is based on the standard.
Нормальный уровень холестерина ЛПВП 0,88-2,09 ммоль/л.The normal level of HDL cholesterol is 0.88-2.09 mmol / L.
Усовершенствование способа касается механического встряхивания пробы с частотой 120 раз в 1 мин на лабораторном встряхивателе для приготовления реактивов фирмы «Immunotech a.s.», Чехия. Более частое или длительное встряхивание ведет к повышению температуры пробы и появлению рекомбинантных форм липопротеинов крови, что препятствует дальнейшему проведению исследования и искажает результат электрофоретического анализа пробы. Менее короткий период встряхивания, равный 30 сек не позволяет улучшить результат исследования.The improvement of the method relates to mechanical shaking of the sample with a frequency of 120 times per 1 min on a laboratory shaker for the preparation of reagents of the company "Immunotech a.s.", Czech Republic. More frequent or prolonged shaking leads to an increase in the temperature of the sample and the appearance of recombinant forms of blood lipoproteins, which impedes further research and distorts the result of electrophoretic analysis of the sample. A shorter shaking period of 30 seconds does not improve the result of the study.
Далее сыворотку крови в течение 1 мин обрабатывают дезинтегратором "Microsonic ТМ" для полной дезинтеграции липопротеинов крови. Дезинтеграцию липопротеинов осуществляют Ultrasonic cell Disruptor производства Heat System YWC, 1938, New York 11735, Model Xh 2005, Serial NO, работающий с характеристикой электрического тока 50 вольт/ампер, мощностью 50 ватт, частотой тока 20 кГц.Then, the blood serum is treated with a Microsonic TM disintegrator for 1 min to completely disintegrate the blood lipoproteins. Lipoproteins are disintegrated by an Ultrasonic cell Disruptor manufactured by Heat System YWC, 1938, New York 11735, Model Xh 2005, Serial NO, operating with an electric current characteristic of 50 volts / amperes, 50 watts, and a current frequency of 20 kHz.
При проведении повторного исследования после лечения величина фракции ЛП (а) до лечения принимается за 100% и рассчитывается процентное значение величины снижения фракции ЛП (а) после проведенной терапии ИБС и определяется процентное увеличение ЛПВП и холестерина ЛПВП после проведенной терапии.When conducting a second study after treatment, the magnitude of the LP fraction (a) before treatment is taken as 100% and the percentage value of the decrease in the fraction of LP (a) after IHD is calculated and the percentage increase in HDL and HDL cholesterol after therapy is determined.
В группе контроля в случае использования способа-прототипа (n=10) выявлены ХМ, ЛПНП, ЛПОНП и ЛПВП (фиг.1а и б).In the control group, in the case of using the prototype method (n = 10), CI, LDL, VLDL and HDL were detected (Figs. 1a and b).
Авторами обследованы 2 группы больных ИБС по 15 для способа-прототипа - I группа и 25 пациентов - II группа для проведения электрофореза ЛП с помощью предлагаемого способа.The authors examined 2 groups of patients with coronary artery disease, 15 for the prototype method - group I and 25 patients - group II for electrophoresis of drugs using the proposed method.
У пациентов I группы до лечения выявились ХМ, ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП (фиг.2а и б).Before the treatment, patients of group I revealed CI, LDL, VLDL, HDL (figa and b).
У пациентов II группы до лечения с наличием гиперхолестеролемии (ГХС) в пределах 8,0-11,0 ммоль/л холестерола в крови (среднее значение ХС 9,3±0,8 ммоль/л), кроме фракций ХМ, ЛПВП, ЛПНП, ЛПОНП в зоне между ЛПНП и ЛПОНП выявлена фракция ЛП (а).In patients of group II before treatment with the presence of hypercholesterolemia (HCS) in the range of 8.0-11.0 mmol / L cholesterol in the blood (average cholesterol 9.3 ± 0.8 mmol / L), except for fractions of ChM, HDL, LDL , VLDLP in the zone between VLDL and VLDLP revealed the fraction of LP (a).
В случае использования способа-прототипа фракция ЛП (а) не выявлялась (фиг.3а и б).In the case of using the prototype method, the LP fraction (a) was not detected (figa and b).
После лечения ИБС через 24 дня у пациентов I группы фракции ЛПНП и ЛПОНП были менее интенсивными (фиг.4а и б) при росте интенсивности ЛПВП и росте холестерина ЛПВП.After treatment of coronary heart disease after 24 days in patients of group I, the LDL and VLDL fractions were less intense (Figs. 4a and b) with an increase in HDL intensity and an increase in HDL cholesterol.
После лечения ИБС через 24 дня у пациентов II группы выявились менее интенсивно выраженные фракции ЛПНП и ЛПОНП, как и в предыдущей группе. Фракции же ЛП (а) либо полностью отсутствовала у 9 пациентов, либо ее интенсивность снижалась более чем на 35% у 16 больных ИБС этой группы (см. клинические примеры). Среднее значение снижения уровня ЛП (а) у больных ИБС этой группы после лечения по сравнению с исходным составило 45±5%, а уровень ЛПВП увеличился до 30% и более, а холестерин ЛПВП с 0,8 до 1,6 ммоль/л и более. Результаты лабораторного исследования анализировались в комплексе с клиническими данными. Заключение специалистов - лечение ИБС эффективное, о чем свидетельствуют не только данные клинического обследования пациентов, но и результаты лабораторных анализов.After treatment of coronary heart disease after 24 days, patients of group II revealed less intensively expressed fractions of LDL and VLDL, as in the previous group. The LP fraction (a) was either completely absent in 9 patients, or its intensity decreased by more than 35% in 16 patients with IHD in this group (see clinical examples). The average value of lowering the level of LP (a) in patients with coronary heart disease after treatment compared with the initial one was 45 ± 5%, and the level of HDL increased to 30% or more, and HDL cholesterol from 0.8 to 1.6 mmol / L and more. Laboratory results were analyzed in conjunction with clinical data. The expert conclusion is that the treatment of coronary artery disease is effective, as evidenced not only by the data of the clinical examination of patients, but also the results of laboratory tests.
Пример 1. Больной К., 56 лет, история болезни №38, поступил в отделение ИБС и атеросклероза НИИ кардиологии г.Томска. Жалобы при поступлении на боли в области сердца колющего характера. На ЭКГ рубцовые изменения в переднеперегородочной области. Велоэргометрия была прекращена при нагрузке 50 Вт о причине повышения артериального давления. АД 180/100 мм рт.ст., пульс в покое 68 уд. в мин. Боли купируются нитроглицерином.Example 1. Patient K., 56 years old, medical history No. 38, was admitted to the Department of IHD and Atherosclerosis of the Institute of Cardiology of Tomsk. Complaints upon receipt of pain in the area of the heart stitching. On the ECG, cicatricial changes in the anterior septal area. Bicycle ergometry was stopped at a load of 50 watts about the cause of the increase in blood pressure. HELL 180/100 mm Hg, pulse at rest 68 beats. in minutes Pain is stopped by nitroglycerin.
Результаты лабораторного исследования: ХС общий - 9,8 ммоль/л; триацилглицериды - 1,8 ммоль/л; ХС ЛПВП - 0,9 ммоль/л. Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по способу-прототипу представлены на фиг.5а, а по предлагаемому способу - на фиг.5б. Фракция ЛП (а) присутствует.Laboratory results: total cholesterol - 9.8 mmol / l; triacylglycerides - 1.8 mmol / l; HDL cholesterol - 0.9 mmol / L. The results of electrophoretic studies of blood LP in the prototype method are presented in figa, and according to the proposed method - in fig.5b. LP fraction (a) is present.
Диагноз при поступлении: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения, ФК III-II.Diagnosis at admission: coronary heart disease, angina pectoris, FC III-II.
После проведенного лечения результаты лабораторного исследования: ХС общий - 6,5 ммоль/л; триацилглицериды - 1,5 ммоль/л; ХС ЛПВП - 1,5 ммоль/л. Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу представлены на фиг.6а. Фракция ЛП (а) отсутствует, а фракции ЛПВП возрасла на 59% по сравнению с исходной, уровень холестерина ЛПВП увеличился на 66%.After the treatment, the results of a laboratory study: total cholesterol - 6.5 mmol / l; triacylglycerides - 1.5 mmol / l; HDL cholesterol - 1.5 mmol / l. The results of electrophoretic studies of blood LP according to the proposed method are presented in figa. The LP fraction (a) is absent, and the HDL fraction increased by 59% compared to the initial one, the level of HDL cholesterol increased by 66%.
Диагноз при выписке: ишемическая болезнь, стенокардия напряжения, ФК-II. Заключение: лечение эффективное.Diagnosis at discharge: coronary artery disease, angina pectoris, FC-II. Conclusion: the treatment is effective.
Пример 2. Больной Ж., 64 года, история болезни №107, поступил в отделение ИБС и атеросклероза НИИ кардиологии г.Томска с жалобами на боли в области сердца, иррадиирующие под лопатку. На ЭКГ значительных изменений не выявлено. ВЭМ прекращена при нагрузке 50 Вт по причине возникшей боли за грудиной. На ЭКГ появилась косовосходящая депрессия сегмента ST в отведениях V4-V6. АД 170/90 мм рт.ст., пульс в покое 68 уд. в мин. Боли купируются нитроглицерином.Example 2. Patient J., 64 years old, medical history No. 107, was admitted to the department of coronary heart disease and atherosclerosis of the Research Institute of Cardiology of Tomsk with complaints of pain in the heart, radiating under the shoulder blade. No significant changes were detected on the ECG. VEM stopped at a load of 50 watts due to pain behind the sternum. An oblique depression of the ST segment in leads V4-V6 appeared on the ECG. HELL 170/90 mm Hg, pulse at rest 68 beats. in minutes Pain is stopped by nitroglycerin.
Результаты лабораторного исследования: ХС общий - 9,2 ммоль/л; триацилглицериды - 1,8 ммоль/л; ХС ЛПВП - 1,0 ммоль/л.Laboratory results: total cholesterol - 9.2 mmol / l; triacylglycerides - 1.8 mmol / l; HDL cholesterol - 1.0 mmol / L.
Результаты электрофореза ЛП крови до лечения по предлагаемому способу представлены на фиг.6б. Результаты денситометрии ЛП: ЛПНП - 59%, ЛПОНП - 21%, ЛПВП - 13%, ЛП (а) - 7%. Диагноз при поступлении: ИБС, стенокардия напряжения, ФК-III. После проведенного лечения результаты лабораторного исследования: ХС общий - 6,0 ммоль/л; триацилглицериды - 1,4 ммоль/л; ХС ЛПВП - 1,4 ммоль/л.The results of electrophoresis of blood LP before treatment by the proposed method are presented in figb. The densitometry results of the following drugs: LDL - 59%, VLDL - 21%, HDL - 13%, LP (a) - 7%. Diagnosis at admission: CHD, angina pectoris, FC-III. After the treatment, the results of a laboratory test: total cholesterol - 6.0 mmol / l; triacylglycerides - 1.4 mmol / l; HDL cholesterol - 1.4 mmol / l.
Результаты электрофоретического исследования ЛП крови по предлагаемому способу после лечения представлены на фиг.6в.The results of electrophoretic studies of blood LP according to the proposed method after treatment are presented in figv.
Результаты денситометрии ЛП: ЛПНП - 42%, ЛПОНП - 28%, ЛПВП - 28%, ЛП (а) - 2%.The results of densitometry of drugs: LDL - 42%, VLDL - 28%, HDL - 28%, PL (a) - 2%.
Диагноз при выписке: ИБС, стенокардия напряжения, ФК II. Снижение уровня ЛП (а) более чем на 40% по сравнению с исходным, а холестерина ЛПВП на 40% свидетельствовало об эффективности лечения ИБС.Diagnosis at discharge: coronary heart disease, exertional angina, FC II. A decrease in the level of LP (a) by more than 40% compared to the initial one, and HDL cholesterol by 40% indicated the effectiveness of the treatment of coronary artery disease.
Итак, при применении способа-прототипа оценка эффективности терапии ИБС проводилась по клинической картине заболевания и уровню липидов крови, что свидетельствовало о недостаточной точности способа (см. фиг 4а и б). Оценка эффективности терапии по способу-прототипу не превышала 34%.So, when applying the prototype method, the evaluation of the effectiveness of the treatment of coronary heart disease was carried out according to the clinical picture of the disease and the level of blood lipids, which indicated a lack of accuracy of the method (see Fig. 4a and b). Evaluation of the effectiveness of therapy by the prototype method did not exceed 34%.
У 9 пациентов II группы (25 человек) ЛП (а) выявлены не были, поэтому оценка эффективности терапии проводилась по клинико-лабораторным данным общепринятым методом.In 9 patients of group II (25 people), LP (a) was not detected, therefore, the effectiveness of therapy was evaluated according to clinical and laboratory data by the generally accepted method.
У остальных 16 пациентов выявлено слабо выраженная фракция ЛП (а), установлен рост ЛПВП и холестерина ЛПВП. Точность определения эффективности лечения ИБС составила у них 100%, т.к. после лечения фракция ЛП (а) либо не выявлялась, либо значительно снижалась. Следовательно, после комплексной терапии ИБС с помощью диеты, дозированной физической нагрузки, назначения препаратов, содержащих никотиновую кислоту с витаминами, применения нитратов пролонгированного действия, физиотерапевтического лечения ЛП (а) в сыворотке крови либо значительно снижались, либо достигали исходного значения и не выявлялись при электрофоретическом исследовании ЛП крови, а уровень ЛПВП значительно возрастал до 30% и более, концентрация холестерина ЛВПВ увеличивалась с 0,8 до 1,6 ммоль/л и более. Таким образом, использование предлагаемого способа позволило выявить у больных ИБС с выраженной ГЛП наличие ЛП (а) во фракции ЛП до лечения заболевания и полное отсутствие этой фракции или ее снижение на 30 и более процентов после лечения ИБС, одновременно с увеличением ЛПВП до 30% и более и холестерина ЛПВП с 0,8 до 1,6 ммоль/л и более, что свидетельствовало о высокой эффективности проведенной терапии. Способ применен у 50 пациентов.In the remaining 16 patients, a weakly expressed fraction of LP (a) was detected, the growth of HDL and HDL cholesterol was established. The accuracy of determining the effectiveness of the treatment of coronary heart disease was 100%, because after treatment, the LP fraction (a) was either not detected or decreased significantly. Therefore, after complex treatment of coronary artery disease with diet, dosed physical activity, the use of drugs containing nicotinic acid with vitamins, the use of prolonged-action nitrates, and physiotherapeutic treatment of LP (a) in the blood serum either decreased significantly or reached the initial value and were not detected during electrophoretic the study of blood LP, and the level of HDL increased significantly to 30% or more, the concentration of HDL cholesterol increased from 0.8 to 1.6 mmol / l or more. Thus, the use of the proposed method made it possible to detect in patients with coronary artery disease with severe HFD the presence of LP (a) in the fraction of LP before treatment of the disease and the complete absence of this fraction or its decrease by 30 percent or more after treatment of coronary heart disease, simultaneously with an increase in HDL to 30% and more and HDL cholesterol from 0.8 to 1.6 mmol / l or more, which testified to the high effectiveness of the therapy. The method was applied in 50 patients.
Применение предлагаемого способа определения эффективности лечения ИБС в отличие от способа-прототипа позволило выявить дополнительную фракцию ЛП (а), оценить ее снижение после проведенной курсовой терапии заболевания и рост ЛПВП и холестерина ЛПВП, что позволило повысить точность способа. С помощью способа-прототипа такие результаты получить не удалось, т.к. фракцию ЛП (а) выявить было невозможно ни до, ни после лечения ИБС. Ложноположительных случаев оценки эффективности лечения ИБС не наблюдалось.The application of the proposed method for determining the effectiveness of the treatment of coronary heart disease, in contrast to the prototype method, made it possible to identify an additional fraction of LP (a), to evaluate its decrease after a course of treatment for the disease and the increase in HDL and HDL cholesterol, which allowed to increase the accuracy of the method. Using the prototype method, such results could not be obtained, because it was impossible to identify the LP fraction (a) either before or after treatment of coronary artery disease. False positive cases of evaluating the effectiveness of the treatment of coronary heart disease were not observed.
При этом предлагаемый способ прост в использовании и интерпретации полученных результатов и может быть внедрен в клиническую практику.Moreover, the proposed method is easy to use and interpret the results and can be implemented in clinical practice.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011131413/15A RU2476883C1 (en) | 2011-07-26 | 2011-07-26 | Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011131413/15A RU2476883C1 (en) | 2011-07-26 | 2011-07-26 | Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011131413A RU2011131413A (en) | 2013-02-10 |
| RU2476883C1 true RU2476883C1 (en) | 2013-02-27 |
Family
ID=49119318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011131413/15A RU2476883C1 (en) | 2011-07-26 | 2011-07-26 | Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2476883C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2775191C1 (en) * | 2021-11-15 | 2022-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ярославский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the effectiveness of venofer treatment in patients with chronic heart failure with iron deficiency syndrome |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2613298C1 (en) * | 2016-04-21 | 2017-03-15 | Лариса Анатольевна Хаишева | Method for therapy effectiveness prediction for patients with coronary artery disease 12 months after acute coronary syndrome |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5547873A (en) * | 1994-02-22 | 1996-08-20 | Genzyme Corporation | Compositions for stabilizing proteins for long term dry storage and methods of making and using the compositions |
| RU2400759C1 (en) * | 2009-02-02 | 2010-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of estimating efficiency of coronary heart disease treatment |
-
2011
- 2011-07-26 RU RU2011131413/15A patent/RU2476883C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5547873A (en) * | 1994-02-22 | 1996-08-20 | Genzyme Corporation | Compositions for stabilizing proteins for long term dry storage and methods of making and using the compositions |
| RU2400759C1 (en) * | 2009-02-02 | 2010-09-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Method of estimating efficiency of coronary heart disease treatment |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DE [BACKER G. et al. European guidelines on cardiovascular disease prevention in clinical practice. // Eur. Heart. J., 2003, v.24, pp.1601-1610. * |
| ТВОРОГОВА М.Г. Липиды и липопротеины. Лабораторная диагностика нарушений липидтранспортной системы // Клин. и лаб. диагностика, 2008, No.10, с.21-32. * |
| ТВОРОГОВА М.Г. Липиды и липопротеины. Лабораторная диагностика нарушений липидтранспортной системы // Клин. и лаб. диагностика, 2008, №10, с.21-32. DE [BACKER G. et al. European guidelines on cardiovascular disease prevention in clinical practice. // Eur. Heart. J., 2003, v.24, pp.1601-1610. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2775191C1 (en) * | 2021-11-15 | 2022-06-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ярославский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing the effectiveness of venofer treatment in patients with chronic heart failure with iron deficiency syndrome |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011131413A (en) | 2013-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Reganon et al. | Association between inflammation and hemostatic markers in atherothrombotic stroke | |
| Kim et al. | Adipocytokines and ischemic stroke: differential associations between stroke subtypes | |
| Papadopoulos et al. | Determination of human serum lipoprotein patterns by agarose gel electrophoresis | |
| Lillpopp et al. | Prognostic information of glycogen phosphorylase isoenzyme BB in patients with suspected acute coronary syndrome | |
| RU2398239C1 (en) | Method of predicting course of coronary heart disease | |
| RU2413952C2 (en) | Method of determining fractions of modified lipoproteins in blood | |
| RU2462718C1 (en) | Method for evaluating clinical effectiveness in lipidemia | |
| RU2400759C1 (en) | Method of estimating efficiency of coronary heart disease treatment | |
| RU2476883C1 (en) | Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease | |
| RU2360256C1 (en) | Method of determination of lipoproteins fractions of blood at patients with ischemic heart disease | |
| RU2200950C2 (en) | Method of determination of blood lipoproteid fractions in patients with heart ischemic disease | |
| Albers et al. | Evaluation of a new homogenous method for detection of small dense LDL cholesterol: comparison with the LDL cholesterol profile obtained by density gradient ultracentrifugation | |
| RU2462722C1 (en) | Method for estimating clinical effectiveness of ischemic heart disease | |
| Nakamura et al. | High serum levels of remnant lipoproteins predict ischemic stroke in patients with metabolic syndrome and mild carotid atherosclerosis | |
| RU2210075C2 (en) | Method for evaluating efficiency in treating ischemic cardiac disease | |
| RU2439582C1 (en) | Method of predicting ischemic heart disease course | |
| RU2210076C2 (en) | Method for predicting the flow of ischemic cardiac disease | |
| RU2517054C1 (en) | Method for prediction of clinical course of lipidemia | |
| Zhang et al. | Plasma phospholipids are associated with mild cognitive impairment in type 2 diabetic patients | |
| Zhang et al. | Association between fast-migrating low-density lipoprotein subfraction as characterized by capillary isotachophoresis and intima-media thickness of carotid artery | |
| RU2439576C1 (en) | Method of predicting ischemic heart disease course | |
| RU2210079C2 (en) | Method of determination of blood modified lipoprotein fractions | |
| RU2439575C1 (en) | Method of estimating efficiency of ischemic heart disease treatment | |
| RU2521322C1 (en) | Method for assessing progression of atherogenicity in ischemic heart disease | |
| RU2481580C2 (en) | Method for prediction of clinical course of ischemic heart disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130727 |