RU2475537C2 - Способы визуализации и композиции, содержащие флюоресцентные красители, связанные с вирусными компонентами для визуализации нервов - Google Patents
Способы визуализации и композиции, содержащие флюоресцентные красители, связанные с вирусными компонентами для визуализации нервов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2475537C2 RU2475537C2 RU2011111077/10A RU2011111077A RU2475537C2 RU 2475537 C2 RU2475537 C2 RU 2475537C2 RU 2011111077/10 A RU2011111077/10 A RU 2011111077/10A RU 2011111077 A RU2011111077 A RU 2011111077A RU 2475537 C2 RU2475537 C2 RU 2475537C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- dye
- neurotropic
- viral
- nerve
- Prior art date
Links
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 title claims abstract description 96
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 title claims abstract description 54
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000012800 visualization Methods 0.000 title abstract description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 101
- 230000002276 neurotropic effect Effects 0.000 claims abstract description 48
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 74
- 229960004657 indocyanine green Drugs 0.000 claims description 45
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 36
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 claims description 35
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 29
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 25
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 24
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 18
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 claims description 16
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 11
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 5
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 4
- 108010053210 Phycocyanin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010004469 allophycocyanin Proteins 0.000 claims description 3
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091005948 blue fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 201000006082 Chickenpox Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 claims description 2
- 206010046980 Varicella Diseases 0.000 claims description 2
- BDBMLMBYCXNVMC-UHFFFAOYSA-O 4-[(2e)-2-[(2e,4e,6z)-7-[1,1-dimethyl-3-(4-sulfobutyl)benzo[e]indol-3-ium-2-yl]hepta-2,4,6-trienylidene]-1,1-dimethylbenzo[e]indol-3-yl]butane-1-sulfonic acid Chemical group OS(=O)(=O)CCCCN1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC=CC1=[N+](CCCCS(O)(=O)=O)C2=CC=C(C=CC=C3)C3=C2C1(C)C BDBMLMBYCXNVMC-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims 2
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 claims 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 abstract 1
- MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M indocyanine green Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCCN1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC=CC1=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=C(C=CC=C3)C3=C2C1(C)C MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 41
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 39
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 28
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 22
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 22
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 13
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 10
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 10
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 9
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 108010041388 Ribonucleotide Reductases Proteins 0.000 description 6
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 6
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 102000000505 Ribonucleotide Reductases Human genes 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 4
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000003752 saphenous vein Anatomy 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 3
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000007794 visualization technique Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 2
- 201000001881 impotence Diseases 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000011471 prostatectomy Methods 0.000 description 2
- 238000011472 radical prostatectomy Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229910001218 Gallium arsenide Inorganic materials 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 description 1
- 208000037319 Hepatitis infectious Diseases 0.000 description 1
- 101100427508 Human cytomegalovirus (strain AD169) UL39 gene Proteins 0.000 description 1
- VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-M Kainate Chemical compound CC(=C)[C@H]1C[NH2+][C@H](C([O-])=O)[C@H]1CC([O-])=O VLSMHEGGTFMBBZ-OOZYFLPDSA-M 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N Perchloroethylene Chemical compound ClC(Cl)=C(Cl)Cl CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000229231 Phage E Species 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 101150093191 RIR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150030723 RIR2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 101150100826 UL40 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010046543 Urinary incontinence Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124925 Zostavax Drugs 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003872 anastomosis Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000001444 catalytic combustion detection Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000002594 fluoroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940026063 imovax Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000000431 third toe Anatomy 0.000 description 1
- 210000002972 tibial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- -1 without limitation Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/763—Herpes virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
- A61K49/0034—Indocyanine green, i.e. ICG, cardiogreen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0045—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent agent being a peptide or protein used for imaging or diagnosis in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0063—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres
- A61K49/0069—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form
- A61K49/0097—Cells, viruses, ghosts, red blood cells, viral vectors, used for imaging or diagnosis in vivo
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицине. В настоящей заявке описаны композиции и способы визуализации нервных клеток. Композиция содержит вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки, где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса. Изобретение может быть использовано для снижения риска ятрогенного повреждения нервов в медицине. 5 н. и 14 з.п. ф-лы, 23 ил., 1 табл., 5 пр.
Description
Родственная заявка
В соответствии с § 119(e) 35 Свода Законов США, по данной заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на патент США № 61/127659, поданной 14 мая 2008 г, и предварительной заявкой на патент США № 61/082981, поданной 23 июля 2008 г, описания которых включены в данное описание путем ссылки.
Область, к которой относится изобретение
В настоящей заявке описаны композиции и способы, относящиеся к области медицинской визуализации.
Предпосылки изобретения
Ятрогенное повреждение нервов может привести к инвалидизирующей потере функции у людей. Обычные причины ятрогенного повреждения нервов включают повреждения, вызванные неудачными хирургическими вмешательствами, вытяжением или сдавливанием, гематомой или неадекватным положением пациента (Fercan Komurcu, MD et al., 2005, Annals of Plastic Surgery, 54(2):135-139).
Например, нервы часто визуализируются во время процедур простатэктомии. В качестве предпосылки, рак предстательной железы представляет собой наиболее распространенный тип рака у американских мужчин. Одним обычным вариантом лечения является удаление раковой ткани предстательной железы (т.е. простатэктомии) перед тем, как рак распространится местно, и перед метастазированием. Осложнения радикальной простатэктомии включают недержание мочи и импотенцию. У значительного процента мужчин, подвергающихся радикальной простатэктомии, возникает импотенция вследствие повреждения кавернозных нервов во время операции.
Риск ятрогенного повреждения нервов может быть снижен избеганием повреждения нервных пучков, которые проходят вдоль поверхности предстательной железы и необходимы для эрекции. Однако успешного сохраняющего нервы хирургического вмешательства часто трудно достичь ввиду трудности дифференцировки ткани предстательной железы и иннервирующей нервной ткани.
Существует потребность в усовершенствованных способах визуализации и композициях для визуализации нервов.
Краткое описание сущности изобретения
В настоящей заявке описаны композиции и способы для визуализации нервов. Нервы могут локализоваться в различных областях тела индивида.
В настоящей заявке также описано открытие того, что связывание флюоресцентного красителя с вирусным компонентом (например, вирусом, вирусными белками, капсидами), способным проникать в нервные аксоны, может образовывать комплекс красителя/вирусного компонента, который может проникать в аксоны нервов, таким образом, обеспечивая возможность улучшенной визуализации нервных клеток. Один вариант осуществления относится к композиции, содержащей:
флюоресцентный краситель; и
вирусный компонент, выбранный из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
где флюоресцентный краситель связан с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента, который способен проникать в нервные клетки.
В этом и других вариантах осуществления, описанных в настоящей заявке, нейротропные репликационно-дефектные вирусы могут представлять собой, например, ослабленные или инактивированные вирусные компоненты, которые способны проникать в нервные клетки. В другом варианте осуществления композиция может представлять собой вакцину, содержащую флюоресцентный краситель и вирусный компонент, выбранный из нейротропного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса. Соответственно, другой вариант осуществления относится к вакцине, содержащей:
флюоресцентный краситель; и
вирусный компонент, выбранный из нейротропного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
где флюоресцентный краситель связан с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента, который способен проникать в нервные клетки.
Другой вариант осуществления относится к способу получения композиции, включающему:
комбинирование флюоресцентного красителя с вирусным компонентом, выбранным из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
обеспечение возможности связывания флюоресцентного красителя с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента, который способен проникать в нервные клетки.
Другой вариант осуществления относится к способам визуализации нервов и/или диагностики аномалий и/или состояний нервов. Способы включают стадии (a) введения описанной в настоящей заявке композиции индивиду, (b) предоставления возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки, (c) подачи достаточного количества энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя, (d) интраоперационного получения изображения флюоресценции индивида. Способ может включать стадию осмотра изображения флюоресценции для обозрения одного или нескольких нервов у индивида, или осмотра изображения флюоресценции для определения того, пересечен ли один или более нервов.
Соответственно, другой вариант осуществления относится к способу снижения ятрогенного повреждения у индивида во время хирургической процедуры, включающему:
(a) введение композиции индивиду, причем композиция содержит:
флюоресцентный краситель; и
вирусный компонент, выбранный из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
где флюоресцентный краситель связан с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента;
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачу достаточного количества энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции индивида;
(e) осмотр изображения флюоресценции для обозрения одного или нескольких нервов у индивида.
Другой вариант осуществления относится к способу диагностики состояния нерва, включающему:
(a) введение композиции индивиду, причем композиция содержит:
флюоресцентный краситель; и
вирусный компонент, выбранный из нейротропного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
где флюоресцентный краситель связан с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента;
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачу достаточного количества энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции индивида; и
(e) осмотр изображения флюоресценции для определения того, пересечен ли нерв.
Один вариант осуществления относится к набору, содержащему композиции, описанные в настоящей заявке, наряду с инструкциями по применению композиции в соответствии с одним или более способов, описанных в настоящей заявке. В других вариантах осуществления набор включает один или более ингредиентов, красителей, вирусов, предшественников или других инструментов, которые могут использоваться для получения композиций, описанных в настоящей заявке, наряду с инструкциями по применению композиции в соответствии с одним или более способов, описанных в настоящей заявке.
На фиг.1 схематически изображена система для медицинской визуализации;
Фиг.2 представляет собой блок-схему, изображающую алгоритмы для медицинской визуализации, которая может выполняться программным обеспечением, установленным на процессор компьютера;
На фиг.3А показано изображение флюоресценции спины мыши из примера 3.
Фиг.3B представляет собой полученное видимым (белым) светом изображение той же спины мыши, показанной фиг.3A, но без флюоресцентной визуализации;
Фиг.3C представляет собой изображение флюоресценции с некоторым освещением видимым светом обнаженного спинного мозга мыши из примера 3;
Фиг.3D представляет собой изображение флюоресценции того же спинного мозга ближе к голове мыши с нервами, входящими в спинной мозг, не меченными ICG/PBS/HSV-2 ΔRR;
На фиг.4A показана флюоресценция ICG/PBS/HSV-2ΔRR (комплекса красителя/вирусного компонента) в виде с вентральной стороны тела мыши из примера 4;
Фиг.4B представляет собой изображение, показывающее спину (вид со спины) мыши из примера 4, с рассечением тканей для показа позвоночника и флюоресцирующего нерва от левой стопы при использовании визуализации флюоресцентным и белым светом;
Фиг.4C представляет собой изображение флюоресценции той же мыши, что и на фиг.4B;
Фиг.4D представляет собой флюоресцентные изображения (i) отпрепарированного флюоресцирующего дорзального корневого ганглия с левой стороны позвоночника мыши из примера 4 только в белом свете с коротким сегментом его аксонов с правой стороны ганглия, и (ii) соответствующего ганглия с правой стороны позвоночника, где не производилась инъекция в аксоны правой подушечки лапы.
Фиг.4E представляет собой изображения (i) ганглия, показанного на фиг.4D(i), и (ii) ганглия, показанного на фиг.4D(ii);
Фиг.4F представляет собой увеличенное изображение ганглия, показанного на фиг.4E(i);
На фиг.5A показан рисунок, представляющий анатомическое строение левой конечности кролика, для сравнения с изображением флюоресценции;
Фиг.5B представляет собой изображение флюоресценции, показывающее, что комплекс ICG/HSV-2ΔRR прошел из участка инъекции в пальцевую подушечку вверх в верхний подошвенный нерв;
На фиг.5C показан рисунок, представляющий анатомическое строение правой конечности кролика, для сравнения с изображением флюоресценции;
Фиг.5D представляет собой изображение изолированного сегмента подкожной вены в видимом белом свете;
Фиг.5E представляет собой изображение флюоресценции, показывающее изолированный сегмент подкожной вены с помощью флюоресценции комплекса ICG/HSV-2ΔRR;
Фиг.5F и 5H представляют собой изображения флюоресценции, показывающие соответственно иссеченный сегмент подкожной вены предыдущих двух рамок (фиг.5F) и нерв in situ (фиг.5H);
Фиг.5G и 5I представляют собой изображения флюоресценции, показывающие иссеченный сегмент подкожной вены, показанный на фиг.5F, но окрашенный на наличие гена LacZ инактивированного УФ вируса ICG/PBS/HSV-2ΔRR;
На фиг.5J показан рисунок, представляющий анатомическое строение левой конечности кролика, для сравнения с изображением флюоресценции; и
Фиг.5K представляет собой изображение флюоресценции дорзальной стороны левой задней конечности кролика из примера 5.
Детальное описание
Один вариант осуществления относится к композициям для визуализации нервов.
В одном варианте осуществления композиция включает краситель, такой как флюоресцентный краситель, используемый для медицинской визуализации. Однако многие красители не подходят для визуализации определенных частей тела, таких как нервы, поскольку красители обычно не способны проникать в нервные клетки. В настоящей заявке описано обнаруженное явление, состоящее в том, что нейротропный вирусный компонент, т.е. вирусный компонент, способный проникать в нервные клетки, может использоваться для аксонального переноса красителя через части или всю сеть нервов. Это может быть достигнуто образованием комплекса красителя, связанного с вирусным компонентом.
Красители
Используемый в настоящем описании термин «флюоресцентный краситель» или «краситель» означает маленькую молекулу или белок, или другой полимер, или макромолекулу, которая флюоресцирует испусканием света в видимом или близком к инфракрасному диапазоне длины волн после возбуждения энергией светового излучения соответствующей длины волн.
Подходящие флюоресцентные красители включают любой нетоксичный краситель, который флюоресцирует при воздействии на него энергии излучения, например света. В определенных вариантах осуществления краситель представляет собой флюоресцентный краситель, который испускает свет в спектре, близком к инфракрасному спектру. В некоторых вариантах осуществления краситель может не быть растворимым в липидах, тогда как в других вариантах осуществления он может быть растворимым в липидах. В определенных вариантах осуществления краситель представляет собой трикарбоцианиновый краситель, такой как индоцианин зеленый (ICG), выпускаемый компанией Akorn, Inc. (Buffalo Grove, IL). Краситель ICG утвержден FDA (Администрацией пищевых продуктов и лекарственных средств США) для использования у людей. В других вариантах осуществления краситель представляет собой инфрацианин зеленый. В других вариантах осуществления краситель выбран из флюоресцеина изотиоцианата, родамина, фикоэритрина, фикоцианина, аллофикоцианина, о-фтальдегида, флуоресцамина, розового бенгальского, трипана синего, флуорозолота, 3-индоцианина зеленого-ацил-1,3-тиазолидинтиона, зеленого флюоресцентного белка, красного флюоресцентного белка, желтого флюоресцентного белка, синего флюоресцентного белка и других флюоресцентных белков. Красители могут смешиваться или комбинироваться. В некоторых вариантах осуществления могут применяться аналоги красителей. «Аналог красителя» представляет собой краситель, который был химически модифицирован, но все же сохраняет свою способность флюоресцировать при воздействии на него энергии излучения соответствующей длины волн.
В одном варианте осуществления краситель представляет собой флюоресцентный белок, такой как зеленый флюоресцентный белок, ковалентно связанный с белком в вирусном капсиде, сконструированном замещением гена вирусного белка таким же геном вирусного белка, но слитым с геном зеленого флюоресцентного белка. В одном варианте осуществления зеленый флюоресцентный белок ковалентно связан с белком нейротропного вируса, который проникает в нервные клетки.
Вирусные компоненты
В одном варианте осуществления вирусный компонент выбран из вируса, вирусных белков и капсид. В одном варианте осуществления вирусный белок представляет собой капсид или капсидный белок. В одном варианте осуществления вирусный белок представляет собой аналог вирусного белка. В одном варианте осуществления вирусные белки и аналоги способны проникать в нервную клетку самостоятельно, не являясь частью вирусного капсида или цельного вируса. В другом варианте осуществления вирусные белки и аналоги могут быть частью вирусного капсида или цельного вируса, который сам проникает в нервную клетку. Аналоги имеют другую структуру нуклеиновой кислоты, что приводит к консервативным аминокислотным изменениям, которые хотя и изменяют первичную последовательность белка или пептида, обычно не изменяют его функцию. Консервативные аминокислотные замещения обычно включают замещения внутри следующих групп:
глицин, аланин;
валин, изолейцин, лейцин;
аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота;
аспарагин, глутамин;
серин, треонин;
лизин, аргинин;
фенилаланин, тирозин.
В одном варианте осуществления вирусный белок и его аналоги могут быть выделены перед тем, как краситель связывается с ними.
Ввиду того, что он используется в медицинских заявках, данный компонент является невирулентным или «репликационно-дефектным». Используемый в настоящем описании термин «репликационно-дефектный» означает не образующий вирусных частиц (вирусного потомства) в клетке-мишени (нервной клетке). В одном варианте осуществления «репликационно-дефектный» относится к неспособности к репродукции. «Репликационно-дефектный» вирус может также относиться к ослабленному вирусу. В одном варианте осуществления ослабленные вирусы представляют собой живые вирусы, которые имеют низкую вирулентность. В одном варианте осуществления ослабленные вирусы не реплицируются. В другом варианте осуществления они могут экспрессировать вирусные антигены в инфицированных клетках без репликации. В другом варианте осуществления ослабленные вирусы медленно реплицируются и продуцируют потомство ослабленного вируса.
В одном варианте осуществления вирусный компонент не является нейровирулентным.
В одном варианте осуществления, вирусу придается свойство репликационной дефектности посредством мутации или инактивации нагреванием, светом (например, УФ светом) или химической обработкой. Дозировка и длины волн ультрафиолетового («УФ») света для уничтожения определенных вирусов хорошо известны. Например, на сайте http://www.americanairandwater.com/uv-faccts/uv-dosage.htm перечисляется дозировка УФ света, которая ингибирует образование колоний определенных вирусов, представлена ниже в таблице 1:
| Таблица 1 | ||
| Вирус | Дозировка энергии ультрафиолетового излучения (доза УФ) в мкВтс/см2, требуемой для уничтожения фактора | |
| 90% (снижение на 1 логарифм) | 99% (снижение на 1 логарифм) | |
| Бактериофаг - E. Coli | 2600 | 6600 |
| Инфекционный гепатит | 5800 | 8000 |
| Грипп | 3400 | 6600 |
| Полиовирус - полиомиелит | 3150 | 6600 |
| Мозаика табака | 240000 | 440000 |
В одном варианте осуществления мутация может быть осуществлена удалением или инактивацией вирусного генетического материала (такого как РНК для РНК вирусов, или ДНК для ДНК вирусов) или белков, требуемых для вирусной репликации, цитопатическими воздействиями или лизисом клеток. В одном варианте осуществления вирус представляет бой мутант вируса бешенства, например Imovax (Sanofi Pasteur SA).
В другом варианте осуществления репликационно-дефектный вирус представляет собой вакцину. Используемый в настоящем описании термин «вакцина» относится к невирулентной композиции (содержащей один или более вирусных компонентов), которая улучшает иммунитет в отношении заболевания. В другом варианте осуществления вакцина может использоваться в качестве вирусного компонента, такая как вакцина Zostavax® (Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, NJ). Соответственно, другой вариант осуществления относится к вакцине, содержащей:
флюоресцентный краситель; и
вирусный компонент, выбранный из нейропатического вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
где флюоресцентный краситель связан с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента, который способен проникать в нервные клетки.
Вирусный компонент является нейротропным в том, что он проникает в клетки нервной системы (например, двигательные нервы и/или сенсорные нервы). В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой тот, который переносится по аксонам нервной системы. Он должен быть безопасным для применения у людей. Таким образом, в определенных вариантах осуществления может использоваться любой вирусный компонент, который способен проникать в нервную клетку и связываться с красителем, пока он не является литическим, и предпочтительно пока он не вызывает цитопатический эффект.
Нейротропное свойство вирусного компонента используется для визуализации путем обеспечения возможности связывания флюоресцентного красителя с этим компонентом, посредством этого образуя комплекс красителя/вирусного компонента, который также является нейротропным, т.е. способным проникать в клетки нервной системы. Связывание между красителем и вирусными белками может происходить посредством взаимодействий ван-дер-Вальса, междипольных взаимодействий, катион-пи взаимодействий, водородного связывания, ионного связывания, ковалентного связывания или любого другого типа связывания, достаточного для того, чтобы краситель вошел в нервную клетку с вирусом или вирусной частицей. В некоторых вариантах осуществления краситель и вирус или вирусные белки могут связываться непосредственно, и это означает, что они не связываются или ассоциируются промежуточным, вставленным линкером между красителем и его ассоциированным вирусом или вирусными частицами.
В одном варианте осуществления может использоваться капсид нейтротропного вируса со связанным флюоресцентным красителем.
В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой герпесвирус и может представлять собой вирус простого герпеса 2 типа (HSV-2) или его мутант. HSV-2 инфицирует клетки нервной системы. Ген ICP10 HSV-2 кодирует фермент рибонуклеотид-редуктазу (RR), состоящий из двух субъединиц, именуемых большой и маленькой субъединицами, кодируемыми соответственно генами UL39 и UL40. Ген ICP10 HSV-2 (GeneBank No. M 12700) описан в патентах США №№ 6013265, 6054131 и 6207168.
В одном примере мутанта HSV-2 имеется делеция домена репликационно-дефектного (RR) из ICP10. Устранение этого домена может быть полезно в том, что полученный мутант становится репликационно-дефектным.
В одном варианте осуществления вирус представляет собой мутантную форму HSV-2, обозначенную ICP10ΔRR, в которой домен репликационно-дефектного ICP10 замещен геном, кодирующим LacZ. Вирус ICP10ΔRR известен в данной области (Peng et al., 1996, Virology, 216:184-196; LacZ-specific staining facilitates detection of cells that are infected with the mutant virus). ICP10ΔRR может также иметь делецию гена RR, без добавления гена LacZ. Ген LacZ может быть замещен любым геном, представляющим интерес. Может использоваться любой мутант HSV-2, в котором имеется делеция или инактивация домена RR. Мутант ICP10ΔRR HSV-2 в настоящем описании именуется HSV-2 ΔRR.
В другом варианте осуществления вирус может представлять собой вирус ветряной оспы (вирус опоясывающего герпеса).
Для получения подходящих вирусов могут использоваться стандартные процедуры молекулярной биологии, известные в данной области. Иллюстративные процедуры описаны в публикации Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), в публикации Ausubel et al. (1997, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York) и в публикации Gerhardt et al. (eds., 1994, Methods for General and Molecular Bacteriology, American Society for Microbiology, Washington, D. C).
Композиции
Как описано выше, в некоторых вариантах осуществления композиция включает краситель, связанный с репликационно-дефектным вирусным компонентом. В определенных вариантах осуществления композиция включает краситель, связанный с вирусным белком или инактивированным вирусом, как далее описано в настоящей заявке. Композиции могут вводиться индивиду для визуализации нервов.
Соответственно, другой вариант осуществления относится к способу получения композиции, включающему:
комбинирование флюоресцентного красителя с вирусным компонентом, выбранным из нейротропного репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса,
предоставление возможности флюоресцентному красителю связаться с вирусным компонентом для образования комплекса красителя/вирусного компонента, который способен проникать в нервные клетки.
В некоторых вариантах осуществления композиция содержит небольшое количество или не содержит краситель, который не связан с вирусом или вирусным белком. Например, количество красителя, используемого для получения композиции, может титроваться до используемого количества вируса или вирусного белка. Аналогичным образом, посторонний (несвязанный) краситель может быть удален из композиции посредством диализа или использования градиента сахарозы.
В настоящей заявке также описывается получение и применение композиций, раскрытых в настоящей заявке. Такая композиция может состоять из одного активного ингредиента в форме, подходящей для введения индивиду, или композиция может содержать активный ингредиент и один или более фармацевтически приемлемых носителей, один или более дополнительных ингредиентов или некоторую их комбинацию. Активный ингредиент может присутствовать в композиции в форме физиологически приемлемого сложного эфира или соли, например, в комбинации с физиологически приемлемым катионом или анионом, как хорошо известно в данной области.
Используемый в настоящем описании термин «активный ингредиент» означает вирусный компонент, такой как нейротропный вирус, вирусный капсид или вирусный белок, с которым связан флюоресцентный краситель.
Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает химическую композицию, с которой активный ингредиент может комбинироваться и которая после объединения может использоваться для введения индивиду активного ингредиента.
Используемый в настоящем описании термин «физиологически приемлемый» означает сложный эфир или соль активного ингредиента, которые совместимы с любыми другими ингредиентами композиции и которые не оказывают вредного воздействия на индивида, которому вводится композиция.
Составы композиций, описанных в настоящей заявке, могут быть получены любым способом, известным или тем, который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с носителем или одним или более других вспомогательных ингредиентов, а затем, если необходимо или желательно, профилирование или упаковку продукта в желательную одно- или многодозовую стандартную лекарственную форму.
Хотя описания композиций, представленные в настоящей заявке, в основном, направлены на композиции, которые подходят для введения людям, специалистам в данной области будет понятно, что такие композиции, в целом, подходят для введения животным всех видов. Модификация композиций, подходящих для введения человеку, с целью придания композиции пригодности для введения различным животным, хорошо известны, и средний специалист в области ветеринарной фармакологии может сконструировать и выполнить такую модификацию, если потребуется, просто обычным экспериментированием. Индивиды, которым предусмотрено введение композиций, включают, без ограничения, людей, нечеловекообразных обезьян и других животных.
Композиции могут быть получены, упакованы или поставлены для продажи в препаративных формах, подходящих для парентерального, внутривенного, внутриглазного, подоболочечного или любого другого пути введения.
Композиции могут быть получены, упакованы или поставлены для продажи насыпью, в виде одной стандартной дозы или в виде множества стандартных доз. Используемый в настоящем описании термин «стандартная доза» представляет собой любое дискретное количество композиции, содержащее заданное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента, в целом, равно дозировке активного ингредиента, которое должно вводиться индивиду, или подходящей фракции такой дозировки, такой как, например, половина или одна треть такой дозировки.
Используемый в настоящем описании термин «парентеральное введение» композиции включает любой путь введения, характеризуемый физическим нарушением целостности ткани индивида и введением композиции через брешь в ткани. Таким образом, парентеральное введение включает без ограничения введение композиции инъекцией, путем применения композиции посредством проникновения в ткань нехирургической раны и тому подобным путем. В частности, предусматривается, что парентеральное введение включает без ограничения подкожную, внутрибрюшинную, внутримышечную, внутристернальную инъекцию и методики гемодиализных вливаний при почечной недостаточности.
Препаративные формы композиций, подходящих для парентерального введения, включают активный ингредиент в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как стерильная вода или стерильный изотонический солевой раствор. Такие препаративные формы могут быть получены, упакованы или поступать в продажу в форме, подходящей для болюсного введения или для непрерывного введения. Инъецируемые препаративные формы могут быть получены, упакованы или поступать в продажу в стандартной лекарственной форме, такой как ампулы или многодозовые контейнеры, содержащие консервант. Препаративные формы для парентерального введения включают без ограничения суспензии, растворы, эмульсии в масляных или водных носителях, пасты и имплантируемые препаративные формы длительного высвобождения или биологически разлагаемые препаративные формы. Такие препаративные формы могут, кроме того, содержать один или более дополнительных ингредиентов, включая без ограничения суспендирующие, стабилизирующие или диспергирующие агенты. В одном варианте осуществления препаративной формы для парентерального введения активный ингредиент представлен в сухой форме (т.е. порошкообразной, гранулярной или лиофилизированной) для восстановления влагосодержания подходящим носителем (например, стерильной апирогенной водой) перед парентеральным введением композиции с восстановленным влагосодержанием.
Дозы, которые могут вводиться животному, например, человеку, находятся в диапазоне от примерно 102 до примерно 108 или от примерно 102 до примерно 104, или от примерно 103 до примерно 108 бляшкообразующих единиц (pfu) вируса на грамм массы тела. В другом варианте осуществления доза находится в диапазоне, например, от примерно 104 мг до примерно 2×103 мг красителя/г массы тела. Например, эксперименты на животных, описанные ниже в экспериментальном разделе, выполнялись с красителем ICG и следующим количеством вируса: (a) 4,2×104 pfu вируса на грамм массы тела для мышей, и (b) 972,8 pfu на грамм массы тела для кроликов.
Способы визуализации
Один вариант осуществления относится к способу визуализации по меньшей мере одного нерва индивида. Изображение может быть получено интраоперационно. Таким образом, область, где предстоит проведение хирургического вмешательства, или соседние области, могут быть открыты для доступа. Способ включает: (a) введение композиции, описанной в настоящей заявке, для образования комплекса красителя/вирусного компонента, (b) обеспечения возможности проникновения комплекса красителя/вирусного компонента в нервные клетки; (c) подачи достаточного количества энергии излучения на область с тем, чтобы происходила флюоресценция красителя, (d) интраоперационного получения изображения флюоресценции и (e) осмотра изображения флюоресценции для определения присутствия или отсутствия по меньшей мере одного нерва на изображении флюоресценции.
В одном варианте осуществления «осмотр изображения флюоресценции» может относиться к осмотру фиксированного изображения (печатного или на экране) или в реальном масштабе времени на видеомониторе, в дополнение к другим способам осмотра изображений. В одном варианте осуществления отдельные изображения нервов (т.е. карты нервов), возможность получения которых была обеспечена связыванием флюоресцентного красителя с вирусным компонентом (например, вирусным вектором), могут использоваться для диагностических целей и для документации локализации нерва. В одном варианте осуществления одно применение картирования нервов не целесообразно. Предусматривается, что данная технология может использоваться для мечения нервов красителем для использования при флюороскопии, методике визуализации, обычно используемой врачами для получения в реальном масштабе времени подвижных изображений внутренних структур тела пациента. Например, интраоперационная визуализация хирургического поля обозрения любыми доступными обычными средствами может происходить так, что определение локализации и/или распознавания нервов - особенно их мелких ветвей - не адекватно для обеспечения хирургического вмешательства с сохранением нервов. В таких ситуациях интраоперационное флюороскопическое применение настоящей технологической инновации будет иметь решающее значение для успешных исходов.
На основании описанных ниже экспериментов, по оценке, флюоресценция красителя может перемещаться ретроградным образом через нервы со скоростью примерно 2 см/ч или быстрее. Эта высокая скорость потока красителя может обеспечить возможность введения композиций за несколько часов (или дольше) до выполнения визуализации. Композиция, включающая краситель, может вводиться за достаточное время до визуализации с тем, чтобы краситель поступил в область, подлежащую визуализации, и присутствовал в такой области во время визуализации. Требуемое количество времени может зависеть от применения визуализации нервов и участка введения. В качестве примера, композиция может вводиться за 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 часов или менее до визуализации в определенных процедурах, например, на основании расстояния, которое должен пройти краситель до участка визуализации. В одном варианте осуществления композиция вводится не более чем за 1, 2 или 3 часа до визуализации.
Путем осмотра изображения флюоресценции хирургическая бригада может определить отсутствие или присутствие нерва на изображении. Часто нервы могут быть идентифицированы по их размеру, форме и макроскопической локализации с использованием обычного освещения операционного поля видимым светом. Однако часто контраст между нервами - особенно их мелкими ветвями - и подлежащими тканями настолько слабый, что без значительного контраста, обеспечиваемого флюоресценцией нервов, их вообще невозможно визуально обнаружить. Хирургическая бригада может, кроме того, определить локализацию одного или более определенного нерва (нервов) путем осмотра изображения флюоресценции. Таким образом, хирургическая бригада может использовать информацию о присутствии/отсутствии или локализации одного или более нервов для определения того, как они выполнят хирургическую процедуру. Например, на основании информации, полученной посредством использования описанных способов, хирургическая бригада может принять решение произвести разрез в точке на теле индивида, где менее вероятно нечаянное пересечение или хирургический контакт с определенным нервом на основании установленного отсутствия нерва в данной области.
Другие варианты осуществления предусматривают получение множества изображений. Множество изображений может сравниваться друг с другом для определения того, что нерв не был поврежден, например, нечаянно рассечен.
Информация, полученная по полученным изображениям, может помочь при трансплантации концов нервов, если они пересечены. В случае пересечения трансплантаты нервов могут накладываться непосредственно на концы для содействия прорастанию регенеративных нервных волокон. В этом случае свет, видимый в результате флюоресценции концов пересеченных нервов, обеспечивает мишень для направления наложения анастомозов нервов нервным трансплантатом.
Способ диагностики
Другой вариант осуществления относится к способу диагностики состояния нерва, например, был ли нерв поврежден или пересечен, или успешно резецирован, например, во время хирургической процедуры. В одном варианте осуществления способ диагностики включает стадии (a) введения индивиду композиции, описанной в настоящей заявке; (b) предоставления возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки; (c) подачу достаточного количества энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя; (d) интраоперационного получения изображения флюоресценции индивида; и (e) осмотра изображения флюоресценции или для осмотра одного или более нервов у индивида и/или определения того, пересечен ли один или более нервов.
Таким образом, путем осмотра изображения нерва пользователь может определить, был ли пересечен определенный нерв. В некоторых вариантах осуществления изображение используется для определения того, был ли корригирован (т.е. резецирован) пересеченный нерв.
Изображения, полученные указанными способами, могут использоваться для содействия направлению трансплантации нерва, когда происходят непреднамеренные пресечения нервов, или когда их невозможно избежать иным образом. В некоторых вариантах осуществления изображение осматривается после выполнения трансплантации нерва для подтверждения того, что нерв был успешно резецирован.
Опытный практикующий врач сможет путем осмотра изображения, полученного в соответствии с описанными способами, определить, пересечен ли нерв. Например, неровные зазубренные линии могут указывать на пересечение. Аналогичным образом, если нерв представляется более длинным или широким на первом изображении, чем на более позднем изображении, то это может также указывать на то, что нерв был пересечен. Напротив, если нерв представляется более длинным или широким на более позднем изображении, чем на более раннем изображении, то это может указывать на то, что он был резецирован. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления способ предусматривает получение множества изображений.
Устройства для визуализации
После введения флюоресцентный краситель в композиции возбуждается для флюоресценции, и испускаемый им свет улавливается камерой. Подходящим устройством является система SPY (Novadaq Technologies Inc., Mississauga, Canada), или как описано в патенте США № 6915154.
В целом, подходящее устройство имеет источник света, способного возбуждать флюоресцентный краситель, и камеру, способную улавливать испускаемую красителем флюоресценцию.
На фиг.1 иллюстрируется пример системы, подходящей для возбуждения и получения изображения флюоресцентного красителя. В определенных вариантах осуществления источник питания 110 подает энергию на термоэлектрический радиатор и регулятор 120, источник световой энергии 130 и электрическую цепь регулятора/таймера 140. Регулятор 120 регулирует температуру источника световой энергии 130. Например, температура диодного лазера воздействует на его рабочую длину волн (например, сдвиг 0,3 нм на градус Цельсия). В некоторых вариантах осуществления, как описано в настоящей заявке, источник световой энергии 130 может не представлять собой диодный лазер и, следовательно, регулятор 120 может не требоваться. Электрическая цепь регулятора/таймера 140 определяет время воздействия источника световой энергии 130 на детектор/камеру 100 через компьютер 150. Он также включает программное обеспечение обработки изображения на считываемом компьютером 150 носителе. Компьютер 150 находится в электрическом сообщении с камерой 100 и дисплеем 160. Дисплей 160 принимает данные изображения из компьютера 150 и представляет его на дисплее. Как описано выше, в некоторых вариантах осуществления источник световой энергии 130 представляет собой лазер. Он имеет волокно 170, через которое передается световая энергия. Волокно 170 проводит свет к линзе освещения 180, через которую свет проходит по направлению к полю-мишени обозрения, когда открывается механическая заслонка 180. Барьерный фильтр 210 может использоваться для фильтрации света, исходящего из поля зрения, в диапазоне длины волн выше или ниже той, при которой возбуждается флюоресцентный краситель. В других вариантах осуществления источник световой энергии 130 может представлять собой LED (светоизлучающий диод). Он должен непосредственно освещать представляющую интерес ткань в поле зрения (т.е. может не потребоваться волокно 170). Камера 100 улавливает излучение, испускаемое красителем, после того как он возбуждается и передает выявленные данные изображения к компьютеру 150. Линза 180, волокно 170 и камера 100 представляют собой часть головки 230 для получения изображения. Головка 230 может представлять собой шарнирно соединенную головку. В некоторых вариантах осуществления головка 230, кроме того, включает дистанционный датчик/индикатор фокуса 220. Компоненты систем дополнительно описаны в настоящей заявке.
В определенных вариантах осуществления энергия излучения подается на представляющую интерес ткань в количестве, достаточном для вызова флюоресценции флюоресцентного красителя, посредством этого обеспечивая возможность визуализации представляющей интерес ткани. В некоторых вариантах осуществления источником световой энергии является лазер. Лазер может включать привод и диод. Предпочтительно, лазер представляет собой лазерный диод высокой мощности (HPLDs). Примеры HPLDs включают лазеры AIInGaAsP и лазеры GaAs, которые хорошо известны в данной области. Такие источники могут представлять собой одиночные диоды (одиночные излучатели), или диодно-лазерные стержни, которые изготовлены из полупроводниковых чипов с краевым излучением. Возможно включение в лазер фильтра, например, полосового фильтра, для обеспечения того, чтобы испускаемое излучение имело по существу однородную длину волн. Лазер может содержать оптику для отклонения пучка лазерных лучей. Регулируемая оптика может также использоваться для обеспечения равномерного освещения по данной площади (например, полю обозрения).
В некоторых вариантах осуществления излучение источника является непрерывным или квази-непрерывным. В других вариантах осуществления излучение лазера является импульсным. Импульсное излучение может быть синхронизировано с получением изображения путем использования импульсного генератора. В некоторых вариантах осуществления лазерный импульс может длиться по меньшей мере в течение 3 фемтосекунд. В некоторых вариантах осуществления лазерное излучение длится в течение примерно 30 с. В других вариантах осуществления лазерное излучение длится в течение от примерно 0,5 с до примерно 60 с. Подходящая частота повторений для импульсного лазера может находиться в диапазоне любых из следующих величин: от примерно 1 Гц до примерно 80 Гц, от примерно 10 Гц до примерно 100 Гц, от примерно 100 Гц до примерно 1 кГц, от примерно 1 кГц до примерно 100 кГц, от примерно 100 кГц до примерно 80 МГц. В некоторых вариантах осуществления лазер может работать при выходной мощности примерно 1,8, примерно 2,2, или примерно 2,5 ватт. В других вариантах осуществления лазер может работать при выходной мощности в диапазоне от примерно 1 до примерно 4 ватт. В еще одних вариантах осуществления средняя мощность составляет менее чем 5 ватт.
В некоторых вариантах осуществления источником энергии является свет ламп накаливания с соответствующим фильтром с тем, чтобы обеспечить подходящую длину волн света для вызова флюоресценции флюоресцентного красителя. В еще одних вариантах осуществления источником света является светоизлучающий диод (LED).
В некоторых вариантах осуществления энергия излучения может иметь длину волн в диапазоне от 150 нм до 1500 нм. Энергия может состоять из инфракрасного света. В некоторых вариантах осуществления свет возбуждения может иметь длину волн примерно 805 нм. В определенных вариантах осуществления свет возбуждения имеет длину волн в диапазоне примерно от 805 нм до 850 нм. В одном варианте осуществления возбуждающая световая энергия подается при длине волн, которая короче, чем испускаемая длина волн, т.е. длина волн выявления. Возбуждающая световая энергия может подаваться диффузно, с тем, чтобы не повредить облучаемую ткань. В некоторых вариантах осуществления свет возбуждения подается на область примерно 7,5 см x 7,5 см. В других вариантах осуществления свет подается на площадь в диапазоне от примерно 1 см x 1 см до примерно 20 см x 20 см. В одном варианте осуществления площадь составляет примерно от 25 до 100 см2. Как описано выше, множественные красители могут использоваться в некоторых вариантах осуществления. В этих вариантах осуществления могут использоваться множественные источники света, например, первый лазер для возбуждения первого красителя и второй лазер для возбуждения второго красителя. Специалисту в данной области будет понятно, что источник света должен выбираться или конфигурироваться для возбуждения определенного красителя. В других вариантах осуществления один источник света может быть сконфигурирован для возбуждения множественных красителей, например, чередованием длины волн, при которой излучается энергия.
Визуализирующая головка 230 может состоять из фотодетектора, например, камеры 100. Получение изображения может достигаться с использованием любого сенсора, способного выявить флюоресцентный сигнал. Примеры включают сенсоры на основе кремния, сенсоры из композитов оксидов-полуоксидов металлов (CMOS-сенсоры) и фотографическую пленку. В одном варианте осуществления сенсор включает камеру, например, устройство, соединенное с зарядкой (CCD). Примеры CCD включают Hitachi KP-M2; KP-M3 (Hitachi, Tokyo, Japan).
Камера может включать средство для фокусировки изображения. Определенные варианты осуществления охватывают ручное средство для фокусировки изображения. Другие варианты осуществления охватывают автоматизированное средство для фокусировки изображения. Камера может, кроме того, включать систему линз, которая обеспечивает возможность увеличения поля изображения.
В некоторых вариантах осуществления относительное расположение камеры и лазера фиксировано, с тем, чтобы усилить четкость и минимизировать фоновые помехи. В этих вариантах осуществления лазер расположен под углом менее чем примерно 85° относительно осей лазера и камеры. В других вариантах осуществления лазер расположен под углом от примерно 20° до примерно 70° относительно осей лазера и камеры. В некоторых вариантах осуществления лазер расположен под углом более чем примерно 85° относительно осей лазера и камеры. Такой угол может составлять, например, 90°.
В определенных вариантах осуществления камера передает уловленное изображение на аналогово-цифровой преобразователь и затем посредством захвата изображения и программного обеспечения его обработки, осуществляемой на компьютере, изображение может храниться на любом подходящем носителе, например, жестком диске, оптическом диске, магнитной ленте. Камера может также направлять изображения на телевизор/систему VCR (кодирования ТВ сигналов) с тем, чтобы изображения могли представляться на дисплее в реальном масштабе времени, записываться и вновь проигрываться в более позднее время. Таким образом, получение изображения может выполняться в реальном масштабе времени или с задержкой.
В определенных вариантах осуществления компьютер 150 представляет собой персональный компьютер, имеющий по меньшей мере 512 мегабайт памяти случайного доступа (RAM) и запоминающее устройство емкостью по меньшей мере 10 гигабайт. В некоторых вариантах осуществления компьютер 150 может содержать процессор Pentium IV (Intel, Santa Clara, CA). В некоторых вариантах осуществления компьютер 150 может также иметь привод для CD (компакт-дисков) и DVD (цифрового многоцелевого диска). Привод может иметь функциональность считывания и записи. Система также обеспечивает программное обеспечение обработки изображения.
В определенных вариантах осуществления эндоскоп может использоваться для возбуждения флюоресцентного красителя в композиции и для выявления его флюоресценции, например, для применений при вмешательствах. Он включает датчик и источник энергии излучения. Эндоскоп может состоять из оптических волокон. В определенных других вариантах осуществления может использоваться микроскоп, содержащий датчик и источник излучения, например, хирургический микроскоп. В некоторых вариантах осуществления датчик содержит видеокамеру. В определенных других вариантах осуществления датчик может улавливать изображения со скоростью по меньшей мере 10 в секунду, по меньшей мере 15 в секунду, по меньшей мере 20 в секунду, по меньшей мере 30 в секунду или по меньшей мере 50 в секунду. Таким образом, определенные варианты осуществления предусматривают множество изображений. В других вариантах осуществления изобретение предусматривает одно изображение.
Фиг.2 иллюстрирует один вариант осуществления способа визуализации. Этот способ может проводиться запрограммированными инструкциями, хранящимися на считываемом компьютером носителе, жестких носителях или плотных носителях. (Специалисту в данной области будет понятно, что такое программное обеспечение включает инструкции, хранящиеся на считываемом компьютером носителе). При исполнении программное обеспечение подает инструкции на процессор компьютера, как описано ниже. Специалисту в данной области, кроме того, будет понятно, что компьютер сообщается с лазером, датчиком и дисплеем, как описано в настоящей заявке.
В начале (стадия 10) пользователю может быть представлено множество диалоговых окон или других обычных парадигм интерфейса пользователя. Например, пользователь может быть опрошен, желает ли он начать новое исследование (стадия 20). Если пользователь отвечает утвердительно, то он может быть проинструктирован ввести или иным образом выбрать пациента для исследования. Например, пользователю может быть дано указание выбрать имя из списка, связанного с базой данных, которая доступна для компьютера. Альтернативно, ему может быть дано указание ввести идентификатор пациента. Компьютер может затем получить доступ к базе данных для определения существования дополнительной информации, связанной с пациентом, и, предпочтительно, получить такую информацию. В предпочтительном варианте осуществления программное обеспечение требует, чтобы пользователь ввел или другим образом выбрал величины для полей Имени Пациента, Фамилии Пациента и ID номера (идентификационного номера). Наиболее предпочтительно, достаточная информация вводится или иным образом загружается, с тем, чтобы изображения могли храниться в соответствии со стандартом передачи цифровых медицинских изображений (DICOM). Стандарт DICOM представляет собой продукт Комитета по Стандартам DICOM и его многих международных рабочих групп. Повседневные работы управляются Национальной Ассоциацией Производителей Электрического оборудования (Rosslyn, VA). Стандарт общедоступен на сайте интернета http://medical.nema.org/, и он полностью включен в настоящее описание путем ссылки.
После ввода данных о пациенте монитор или другой дисплей представляет изображения, уловленные камерой или другим сенсором, сообщающимся с компьютером (стадия 40). В этот момент пользователь может изменить положение, ориентацию, увеличение или другой параметр камеры для получения желательного вида участков тела пациента.
Альтернативно, пользователь может выбрать продолжение исследования (стадия 25) в начале 10. После такого указания процесс продолжается до стадии 40.
После представления изображения на дисплее пользователю предлагается указать, желает ли он копировать последовательности (стадия 35) или получить последовательность (стадия 50). Термин «последовательности» относится к данным, связанным с изображениями в реальном масштабе времени, уловленными камерой или другим сенсором, сообщающимся с компьютером. После того, как пользователь указывает, что он хочет получить изображения от сенсора на стадии 50, компьютер вызывает включение лазера, и он сохраняет последовательность, полученную от сенсора в RAM (стадия 70). Продолжается представление на дисплее изображений в реальном масштабе времени. Затем пользователь опрашивается о том, желает ли он выключить лазер (стадия 80). Если он отвечает утвердительно, то компьютер вызывает отключение лазера (стадия 100). Альтернативно, если пользователь не указывает, что он хочет отключить лазер, то компьютер определяет, прошло ли заданное количество времени (например, 34 секунды) от стадии 60. После того, как прошло заданное количество времени, компьютер вызывает отключение лазера. Продолжается хранение видеопоследовательностей в RAM до выключения лазера. После выключения лазера пользователь опрашивается, желает ли он сохранить последовательность (стадия 105). Если он отвечает утвердительно, то последовательности хранятся на жестком диске (стадия 115) или других носителях.
Теперь, возвращаясь к стадии 40 с целью описания программного обеспечения, после представления на дисплее изображения в реальном масштабе времени, пользователь опрашивается, желает ли он копировать последовательность (стадия 35), Если пользователь отвечает положительно, то изображения, связанные с исследованием, выбираются и сохраняются на компактном диске или другом выбранном носителе (стадия 55). Альтернативно, программное обеспечение может обеспечить пользователю возможность выбора определенных изображений для хранения на выбранном носителе. Предпочтительно, изображение (изображения) хранятся в формате, который совместим с получением картины и компьютерной системой, например, в формате DICOM.
В другом варианте осуществления камера может также направлять изображения в LCD монитор или другой дисплей (например, систему кодирования ТВ сигналов и т.д.), с тем, чтобы изображение (изображения) могло быть представлено на дисплее в реальном масштабе времени и/или записано и воспроизведено в более позднее время. Поскольку изображение (изображения) может использоваться для направления всей или части хирургической процедуры, изображение (изображения) может быть представлено на дисплее в течение всей хирургической процедуры. В других вариантах осуществления изображение (изображения) может быть представлено на дисплее в течение периода, меньшего, чем вся продолжительность хирургической процедуры. В другом варианте осуществления программное обеспечение позволяет манипулировать изображениями после их получения, например, наплыв, выбор интересующей области, изменение яркости и контраста и представление на дисплее множества изображений одновременно.
В некоторых вариантах осуществления система включает стерильную драпировку. Стерильная драпировка покрывает шарнирно соединенную ручку для предотвращения или минимизации риска заражения индивида. Стерильная драпировка может иметь в ней отверстие. Отверстие может быть покрыто материалом, который способен предавать энергию излучения, например, инфракрасный свет, генерируемый лазером.
Определения
Неопределенные артикли единственного числа используются в настоящем описании для обозначения одного или более чем одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта артикля. В качестве примера, «элемент» означает один элемент или более чем один элемент. «Множество» означает по меньшей мере два.
Используемый в настоящем описании термин «индивид» относится к любому животному. Животное может представлять собой млекопитающее. Примеры подходящих млекопитающих включают без ограничения человекообразных и нечеловекообразных обезьян, собак, кошек, овец, коров, свиней, лошадей, мышей, крыс, кроликов и морских свинок.
«ICG» обозначает индоцианин зеленый, биологически совместимый, флюоресцирующий почти в инфракрасном спектре краситель, утвержденный для применения у людей.
«PBS» обозначает солевой раствор с фосфатным буфером.
«HSV-2» обозначает вирус простого герпеса 2-го типа.
«HSV-2 ICP10ΔRR»'обозначает мутантный вирус, в котором произведена делеция или инактивация домена RR в вирусе HSV-2 дикого типа.
Термин «pfu» обозначает бляшкообразующую единицу, минимальное число вирусов, требуемое для образования одной бляшки (одной инфицированной области) в системе клеточной или бактериальной культуры, подходящей для данного теста.
«S.C.» обозначает спинной мозг.
Следующие примеры приведены только в целях иллюстрации и, пока нет иных уточнений, не предназначены для ограничения. Таким образом, изобретение не следует никоим образом рассматривать как ограниченное следующими примерами, а, скорее, следует рассматривать как охватывающее любые и все варианты, которые становятся очевидными в результате представленных в настоящем описании положений.
Примеры
Пример 1: Получение мутантов вируса
Мутант HSV-2 ΔRR может быть получен, как описано в публикациях Laing, J. et al., Intranasal administration of the growth compromised HSV-2 vector ΔRR prevents kainate induced seizures and neuronal loss in rats and mice, MoI. Ther. 2006 May; 13(5): 870-881 и Peng et al., Virology 216:184 1996.
Пример 2: Получение композиций
Получали два основных раствора:
(1) основной раствор ICG: 25 мг ICG в 0,8 мл H2O
(2) основной раствор вируса HSV-2 ΔRR: 107 pfu в 20 мкл солевого раствора с фосфатным буфером (PBS).
20 мкл основного раствора вируса объединяли с 20 мкл основного раствора ICG и держали в течение 1 ч при 4°C (смесь ICG/PBS/HSV-2 ΔRR).
Пример 3: Исследование на животных
Пример 3 представляет собой сравнение изображения, полученного одним флюоресцентным красителем в сравнении с флюоресцентным красителем, связанным с вирусом. Пока нет других указаний, все изображения представляют собой цифровые изображения, полученные камерой CCD.
Мышь (60 г) кратковременно наркотизировали ингаляцией галотаном. В подушечку стопы правой лапы мыши инъецировали 10 мкл ICG, солевого раствора с фосфатным буфером (PBS) и мутантом вируса, HSV-2 ΔRR (смесь «ICG/PBS/HSV-2 ΔRR»). В подушечку стопы левой лапы мыши инъецировали 10 мкл смеси ICG/PBS в качестве контроля. Одинаковая концентрация ICG присутствовала в обеих смесях.
Через 2 часа после инъекций в подушечки лап мышь наркотизировали и затем проводили эвтаназию внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала натрия. Изображения, полученные флюоресценцией ICG, получали сначала у интактной мыши, а затем на различных стадиях рассечения.
Результаты
Фиг.3A представляет собой изображение флюоресценции спины мыши из примера 3 с обнаженным позвоночником и мышцами спины. Флюоресценция левой стопы при инъекции одного ICG ограничивается самой левой стопой. Имеется флюоресценция самой правой стопы, в которую инъецировали смесь ICG/PBS/HSV-2 ΔRR, но флюоресценция распространяется вверх на позвоночник, где расположены дорзальные корневые ганглии (т.е. тельца нейронных клеток) нервов стоп. Комплекс ICG-PBS- HSV-2 ΔRR прошел вверх по аксонам от стопы до клеточных телец аксонов у позвоночника. Инъекция ICG-PBS-HSV-2 ΔRR в подушечку стопы позволила проследить ход нервов подушечки стопы вплоть до позвоночника. На фиг.3B изображен такой же вид, как на фиг.3A, но в виде изображения в видимом (белом) свете без изображения флюоресценции.
Фиг.3C представляет собой изображение флюоресценции (наряду с некоторым освещением видимым белым светом) обнаженного позвоночника мыши из примера 3. Часть флюоресцирующего нерва (в результате инъекции в подушечку стопы) около участка, где он входит в спинной мозг, указана тремя стрелками. Фиг.3D представляет собой изображение флюоресценции того же спинного мозга ближе к голове мыши при нервах, входящих в спинной мозг, не меченных ICG/PBS/HSV-2 ΔRR. На фиг.3D показано, что мечены только нервы подушечек стоп, аксоны которых захватили и перенесли флюоресцирующий вирус, как показано стрелками, а не другие, не связанные нервы. На фиг.3C и 3D метка 310 указывает положение пинцета, оттягивающего нерв от спинного мозга, указанного цифрой 312. Спинной мозг рассечен в положении 314 (только фиг.3C). Голова мыши лежит в целом по направлению к правой стороне фиг.3C, тогда как хвост мыши обращен в целом по направлению к левой стороне чертежа.
Пример 4: Исследование на животных
Пример 4 представляет собой сравнение флюоресцентного красителя, связанного с вирусом, в сравнении с инъекцией для демонстрации того, что флюоресценция ограничивается нервами, отходящими от левой стопы, которые входят в позвоночник с левой стороны.
Мышь (50 г) кратковременно анестезировали ингаляцией галотана. Мыши производили инъекцию 10 мкл смеси ICG/PBS/HSV-2 ΔRR в подушечку стопы левой лапы и ничего не инъецировали в подушечку стопы правой лапы в качестве контроля.
Через 2 часа после инъекции в подушечку стопы лапы мышь наркотизировали внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала натрия. В последующем обнажали сердце, рассекали яремную вену и медленно инъецировали 10 мл изотонического солевого раствора в воздушную камеру сердца для обескровливания и умерщвления мыши. Целью кровопускания было снижение фоновой тканевой флюоресценции в результате попадания в болюс, инъецируемый в подушечку лапы, молекул ICG, которые не были связаны с вирусом, и которые попадали в лимфатическую систему. Как и с первой мышью, сначала получали изображения флюоресценции ICG интактной мыши, а затем - на различных стадиях рассечения.
Результаты
На фиг.4A показано изображение флюоресценции ICG/PBS/HSV-2 ΔRR в вентральной проекции всего тела мыши (мышь лежит на спине). Инъекция в подушечку стопы левой лапы приводит к флюоресценции всей левой стопы и распространяется вверх в левую лапу. Подушечка правой стопы, правая стопа и лапа, в которые не проводилась инъекция, не флюоресцируют.
На фиг.4B показана спина (дорзальная проекция) мыши, отпрепарированная для демонстрации позвоночника и флюоресцирующих нервов, отходящих от стопы, с использованием флюоресцентной визуализации и визуализации в белом свете. Метка 320 указывает положение нерва, отходящего от левой стопы. Положение спинного мозга указано цифрой 322. На фиг.4C отдельно показано изображение флюоресценции у той же мыши. Флюоресценция ограничена левой стороной позвоночника при отсутствии флюоресценции с правой стороны (где не производилась инъекция в подушечку стопы).
На фиг.4D показан (i) отпрепарированнный флюоресцирующий дорзальный корневой ганглий 330 с левой стороны позвоночника мыши только в белом свете с коротким сегментом его аксонов с правой стороны ганглия, и (ii) соответствующий ганглий 332 с правой стороны позвоночника; инъекция в подушечку стопы правой лапы не производилась. На фиг.4E показано (i) изображение флюоресценции ганглия, показанного на фиг.4D(i), и (ii) изображение флюоресценции ганглия, показанного на фиг.4D(ii). На фиг.4F показано увеличенное изображение более низкой облученности ганглия, показанного на фиг.4E(i). На фиг.4D-4F показано, что инъекция в подушечку стопы левой лапы обеспечивает мечение нерва левой стопы по всему его ходу до его дорзального корневого ганглия, и что отсутствует флюоресценция в соответствующем правом дорзальном корневом ганглии ввиду отсутствия инъекции в подушечку стопы правой лапы.
Пример 5: Вирус, инактивированный УФ
Данный пример демонстрирует применение визуализации вируса, инактивированного УФ облучением, что придает ему свойство репликационно-дефектного вируса.
Основной раствор ICG получали растворением 25 мг ICG в 0,8 мл H2O. Основной раствор вируса получали 107 pfu HSV-2 ΔRR в 20 мкл PBS.
50 мкл основного раствора вируса объединяли с 50 мкл основного раствора ICG в колбе и предоставляли возможность осаждения в течение 1 ч при 4°C («смесь мICG/PBS/HSV-2 ΔRR»). Указанную выше смесь ICG/PBS/HSV-2 ΔRR инактивировали УФ облучением примерно при 350 нм в течение примерно 15 минут.
Голландского опоясанного кролика (2,57 кг) кратковременно наркотизировали ингаляцией галотана. Кролику инъецировали 100 мкл смеси ICG/PBS/HSV-2 ΔRR в среднюю пальцевую подушечку правой стопы и инъецировали 100 мкл инактивированной УФ смеси ICG/PBS/HSV-2 ΔRR в среднюю пальцевую подушечку левой стопы. Через 4,5 часа после выполнения инъекций в подушечки стоп кролика наркотизировали и затем подвергали эвтаназии внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала натрия. Сначала выполняли препарирование правой конечности, начиная примерно на 5 см выше участка инъекции ICG/PBS/HSV-2 ΔRR в пальцевую подушечку.
Фиг.5A представляет собой рисунок, изображающий анатомическое строение конечности кролика с изображением флюоресценции (Фиг.5B), и он представлен для иллюстрации положения флюоресценции ICG в среднем подошвенном нерве правой лапы, поднятом препаровочными ножницами в положении 340. Видна также флюоресценция от расположенных поблизости кровеносных сосудов. Флюоресценция в участке инъекции в пальцевую подушечку 342 видна в нижней части фиг.5B.
Фиг.5C представляет собой рисунок, показывающий анатомическое строение правой конечности кролика. Стрелка указывает на большой нерв, прилегающий к кровеносным сосудам. Такую же процедуру препарирования проводили на левой конечности, в которую инъецировали инактивированный УФ вирус ICG/HSV-2ΔRR. Изображения изолированного сегмента подкожного нерва показаны в видимом свете (фиг.5D) и с флюоресценцией ICG (Фиг.5E) с белой стрелкой, указывающей на положение нерва.
Изолированный сегмент нерва иссекали и помещали на предметное стекло микроскопа. После смачивания изотоническим солевым раствором накладывали покровное стекло. Флюоресценция ICG сегмента видна на Фиг.5F, зарегистрированная системой SPY (выпускаемой Novadaq Technologies Inc., Mississauga, Canada). Флюоресценция ICG нерва была также зарегистрирована in situ при увеличении 10X (Фиг.5H). Затем сегмент нерва окрашивали ферментом (C12-FDG), который окрашивает LacZ (ген, который заместил сегмент гена, вырезанный из вируса HSV-2, для его ослабления). Микрофотографии окрашенного нерва показаны при двух увеличениях (фиг.5G - увеличение 4X и фиг.5I - увеличение 10X), указывая на присутствие вируса в нерве.
На фиг.5K показано изображение флюоресценции дорзальной стороны левой конечности кролика из примера 5, рисунок анатомического строения которой показан на фиг.5J. Стрелка на фиг.5J указывает на большой нерв в верхней конечности. Фиг.5K демонстрирует, что ICG/PBS/HSV-2 ΔRR прошел от участка инъекции в пальцевую подушечку вверх до верхнего подошвенного нерва. Инактивированный УФ вирус, меченный ICG, переместился в мелкие ветви, которые, как предполагается, представляют собой седалищный и большеберцовый нервы (стрелки), что обеспечило возможность визуализации даже этих маленьких нервов. Стрелки находятся примерно на 11 см выше участка инъекции в пальцевую подушечку, указывая на то, что флюоресцирующий инактивированный УФ вирус прошел на 11 см выше пальцевой подушечки, обеспечивая возможность визуализации даже отдаленных нервов. На фиг.5K справа также, вероятно, показана флюоресценция кровеносных сосудов.
Многие модификации и изменения могут быть внесены в варианты осуществления настоящего изобретения, что будет очевидно для специалистов в данной области. Определенные варианты осуществления, описанные в настоящей заявке, предложены только в качестве примера и ни в коей мере не предназначены для ограничения. Предполагается, что описание и примеры должны рассматриваться только как иллюстративные, причем действительный объем и сущность изобретения указаны следующей формулой изобретения.
Claims (19)
1. Композиция, для применения в визуализации нервов, содержащая: вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки; где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
2. Композиция по п.1, где краситель выбран из индоцианина зеленого, инфрацианина зеленого, зеленого флюоресцентного красителя, флюоресцеина изотиоцианата, родамина, фикоэритрина, фикоцианина, аллофикоцианина, о-фтальдегида, флуоресцамина, розового бенгальского, трипана синего, флуорозолота, 3-индоцианина-зеленого-ацил-1,3-тиазолидинтиона, зеленого флюоресцентного белка, красного флюоресцентного белка, желтого флюоресцентного белка, синего флюоресцентного белка и других флюоресцентных белков.
3. Композиция по п.2, где краситель представляет собой индоцианин зеленый.
4. Композиция по п.1, где вирус представляет собой герпесвирус, или его мутант, или вариант.
5. Композиция по п.4, где герпесвирус представляет собой HSV-2.
6. Композиция по п.1, где вирус представляет собой вирус ветряной оспы - опоясывающего герпеса.
7. Композиция по п.1, где вирус представляет собой HSV-2 ICP10ΔRR.
8. Композиция по п.1, где вирусу приданы свойства репликационно-дефектного вируса УФ инактивацией, мутацией, химической обработкой или тепловой обработкой.
9. Композиция по п.1, где репликационно-дефектный вирус выбран из ослабленного вируса, мутированного вируса и вакцины.
10. Вакцина, для применения в визуализации нервов, содержащая: вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки; где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
11. Способ получения композиции для применения в визуализации нервов, включающий:
обеспечение возможности связывания флюоресцентного красителя с вирусным компонентом для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
обеспечение возможности связывания флюоресцентного красителя с вирусным компонентом для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
12. Способ по п.11, где вирусу приданы свойства репликационно-дефектного вируса мутацией, УФ инактивацией, химической обработкой или тепловой обработкой.
13. Способ мониторинга риска ятрогенного повреждения у индивида во время хирургической процедуры, включающий:
(а) введение композиции индивиду, причем композиция содержит: вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачу энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции у индивида;
(e) осмотр изображения флюоресценции для обозрения одного или нескольких нервов у индивида.
(а) введение композиции индивиду, причем композиция содержит: вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачу энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции у индивида;
(e) осмотр изображения флюоресценции для обозрения одного или нескольких нервов у индивида.
14. Способ по п.13, где краситель выбран из индоцианина зеленого, инфрацианина зеленого, зеленого флюоресцентного красителя, флюоресцеина изотиоцианата, родамина, фикоэритрина, фикоцианина, аллофикоцианина, о-фтальдегида, флуоресцамина, розового бенгальского, трипана синего, флуорозолота, 3-индоцианина-зеленого-ацил-1,3-тиазолидинтиона, зеленого флюоресцентного белка, красного флюоресцентного белка, желтого флюоресцентного белка, синего флюоресцентного белка и других флюоресцентных белков.
15. Способ по п.14, где краситель представляет собой индоцианин зеленый.
16. Способ по п.13, где композиция содержит репликационно-дефектный герпесвирус.
17. Способ по п.16, где герпесвирус представляет собой HSV-2.
18. Способ по п.16, где репликационно-дефектный вирус содержит HSV-2 ICP10ΔRR.
19. Способ диагностики состояния нерва, включающий:
(а) введение композиции индивиду, причем композиция содержит:
вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачи энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции у индивида; и
(e) осмотр изображения флюоресценции для определения того, пересечен ли нерв.
(а) введение композиции индивиду, причем композиция содержит:
вирусный компонент, связанный с флюоресцентным красителем для образования комплекса, который способен проникать в нервные клетки;
где вирусный компонент выбран из нейротропного, репликационно-дефектного вируса, вирусного белка нейротропного вируса и капсида нейротропного вируса.
(b) предоставление возможности комплексу красителя/вирусного комплекса проникнуть в нервные клетки;
(c) подачи энергии излучения на индивида с тем, чтобы произошла флюоресценция красителя;
(d) интраоперационное получение изображения флюоресценции у индивида; и
(e) осмотр изображения флюоресценции для определения того, пересечен ли нерв.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US12765908P | 2008-05-14 | 2008-05-14 | |
| US61/127,659 | 2008-05-14 | ||
| US8298108P | 2008-07-23 | 2008-07-23 | |
| US61/082,981 | 2008-07-23 | ||
| PCT/US2009/043975 WO2009140510A1 (en) | 2008-05-14 | 2009-05-14 | Imaging methods and compositions comprising fluorescent dyes associated with viral components for nerve imaging |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011111077A RU2011111077A (ru) | 2012-09-27 |
| RU2475537C2 true RU2475537C2 (ru) | 2013-02-20 |
Family
ID=40810868
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011111077/10A RU2475537C2 (ru) | 2008-05-14 | 2009-05-14 | Способы визуализации и композиции, содержащие флюоресцентные красители, связанные с вирусными компонентами для визуализации нервов |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US8361775B2 (ru) |
| EP (2) | EP3124051A1 (ru) |
| JP (2) | JP2011520907A (ru) |
| KR (2) | KR20140007976A (ru) |
| CN (2) | CN102026668A (ru) |
| BR (1) | BRPI0908612A2 (ru) |
| HK (1) | HK1212921A1 (ru) |
| MX (1) | MX2010012035A (ru) |
| RU (1) | RU2475537C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009140510A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699571C2 (ru) * | 2016-03-14 | 2019-09-06 | Дженерал Электрик Компани | Вводимый местным путем фармацевтический агент, способ визуализации посредством его введения и содержащий его набор |
| RU2721652C1 (ru) * | 2017-01-30 | 2020-05-21 | Медибикон Инк. | Способ неинвазивного мониторинга флуоресцентного индикаторного агента с меченым атомом с коррекциями диффузионного отражения |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070122344A1 (en) | 2005-09-02 | 2007-05-31 | University Of Rochester Medical Center Office Of Technology Transfer | Intraoperative determination of nerve location |
| US20080161744A1 (en) | 2006-09-07 | 2008-07-03 | University Of Rochester Medical Center | Pre-And Intra-Operative Localization of Penile Sentinel Nodes |
| US8498695B2 (en) | 2006-12-22 | 2013-07-30 | Novadaq Technologies Inc. | Imaging system with a single color image sensor for simultaneous fluorescence and color video endoscopy |
| US8406860B2 (en) | 2008-01-25 | 2013-03-26 | Novadaq Technologies Inc. | Method for evaluating blush in myocardial tissue |
| EP2268194B1 (en) | 2008-03-18 | 2016-08-31 | Novadaq Technologies Inc. | Imaging system for combined full-color reflectance and near-infrared imaging |
| US10219742B2 (en) | 2008-04-14 | 2019-03-05 | Novadaq Technologies ULC | Locating and analyzing perforator flaps for plastic and reconstructive surgery |
| EP2687235A3 (en) | 2008-05-02 | 2014-11-05 | Novadaq Technologies Inc. | Methods for production and use of substance-loaded erythrocytes (S-LES) for observation and treatment of microvascular hemodynamics |
| US8554579B2 (en) | 2008-10-13 | 2013-10-08 | Fht, Inc. | Management, reporting and benchmarking of medication preparation |
| US10492671B2 (en) | 2009-05-08 | 2019-12-03 | Novadaq Technologies ULC | Near infra red fluorescence imaging for visualization of blood vessels during endoscopic harvest |
| RU2607645C9 (ru) | 2011-03-08 | 2017-07-25 | Новадак Текнолоджис Инк. | Светодиодное осветительное устройство полного спектра |
| WO2013109957A1 (en) * | 2012-01-18 | 2013-07-25 | University Of Utah Research Foundation | Devices and systems for fluorescence imaging of tissue |
| EP2863801B8 (en) | 2012-06-21 | 2024-06-12 | Stryker Corporation | Quantification and analysis of angiography and perfusion |
| KR101623326B1 (ko) | 2012-10-26 | 2016-05-20 | 백스터 코포레이션 잉글우드 | 의료 투여분 조제 시스템을 위한 개선된 작업 스테이션 |
| BR112015009108A2 (pt) * | 2012-10-26 | 2017-07-04 | Baxter Corp Englewood | sistema para o gerenciamento da preparação de uma dose médica, e, método para processar e capturar dados de imagem de preparação de uma dose médica |
| US9040019B2 (en) | 2012-11-30 | 2015-05-26 | General Electric Company | Methods of detecting myelin basic protein |
| CN105392526B (zh) * | 2013-05-23 | 2018-01-05 | 皇家飞利浦有限公司 | 具有自适应运动反馈的皮肤护理装置 |
| US9625386B2 (en) * | 2014-09-10 | 2017-04-18 | Iwasaki Electric Co., Ltd. | Imaging system |
| AU2015327665B2 (en) | 2014-09-29 | 2018-09-27 | Stryker European Operations Limited | Imaging a target fluorophore in a biological material in the presence of autofluorescence |
| US11107574B2 (en) | 2014-09-30 | 2021-08-31 | Baxter Corporation Englewood | Management of medication preparation with formulary management |
| AU2014408488B2 (en) | 2014-10-09 | 2019-07-18 | Stryker European Operations Limited | Quantification of absolute blood flow in tissue using fluorescence-mediated photoplethysmography |
| EP3210183B1 (en) | 2014-10-24 | 2020-09-02 | Baxter Corporation Englewood | Automated exchange of healthcare information for fulfillment of medication doses |
| SG11201704359VA (en) | 2014-12-05 | 2017-06-29 | Baxter Corp Englewood | Dose preparation data analytics |
| HK1248112A1 (zh) | 2015-02-02 | 2018-10-12 | Novadaq Technologies ULC | 用於表徵受试者的组织的方法和系统 |
| US10869592B2 (en) | 2015-02-23 | 2020-12-22 | Uroviu Corp. | Handheld surgical endoscope |
| SG11201707114XA (en) | 2015-03-03 | 2017-09-28 | Baxter Corp Englewood | Pharmacy workflow management with integrated alerts |
| USD790727S1 (en) | 2015-04-24 | 2017-06-27 | Baxter Corporation Englewood | Platform for medical dose preparation |
| EP4442222A3 (en) * | 2015-11-13 | 2024-12-18 | Stryker Corporation | Systems and methods for illumination and imaging of a target |
| CA3009419A1 (en) | 2016-01-26 | 2017-08-03 | Novadaq Technologies ULC | Configurable platform |
| USD916294S1 (en) | 2016-04-28 | 2021-04-13 | Stryker European Operations Limited | Illumination and imaging device |
| CA3027592A1 (en) | 2016-06-14 | 2017-12-21 | John Josef Paul FENGLER | Methods and systems for adaptive imaging for low light signal enhancement in medical visualization |
| CN109843176A (zh) | 2016-07-29 | 2019-06-04 | 诺瓦达克技术有限公司 | 用于利用机器学习来表征受验者的组织的方法和系统 |
| CN106190841B (zh) * | 2016-08-30 | 2018-12-18 | 刘长亮 | 一种神经网络电活动检测系统以及基于此系统的神经精神类药物的筛选方法 |
| US11350816B2 (en) | 2020-09-13 | 2022-06-07 | Micron Vision Corp. | Portable and ergonomic endoscope with disposable cannula |
| US11684248B2 (en) | 2017-09-25 | 2023-06-27 | Micronvision Corp. | Endoscopy/stereo colposcopy medical instrument |
| US11832797B2 (en) | 2016-09-25 | 2023-12-05 | Micronvision Corp. | Endoscopic fluorescence imaging |
| US11330973B2 (en) | 2017-09-25 | 2022-05-17 | Micronvision Corp | Portable and ergonomic endoscope with disposable cannula |
| WO2018058013A1 (en) * | 2016-09-25 | 2018-03-29 | Xiaolong Ouyang | Endoscopic fluorescence imaging |
| KR101911725B1 (ko) * | 2017-01-16 | 2018-12-28 | 주식회사 코어파마 | 적색형광단백질을 발현하는 유전자 및 틴 에틸 에티오푸르푸린을 이용한 광역학 치료용 조성물 및 이를 이용한 광역학 치료방법 |
| WO2018145193A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | Novadaq Technologies ULC | Open-field handheld fluorescence imaging systems and methods |
| KR101970664B1 (ko) | 2017-06-12 | 2019-04-19 | (주)계림건축사사무소 | 탈부착식 패널 어셈블리 |
| US11771304B1 (en) | 2020-11-12 | 2023-10-03 | Micronvision Corp. | Minimally invasive endoscope |
| US11980342B2 (en) | 2020-11-12 | 2024-05-14 | Micronvision Corp. | Minimally invasive endoscope |
| US12268358B2 (en) | 2019-12-05 | 2025-04-08 | Uroviu Corp. | Portable endoscope with side-mountable disposable portion |
| CN109628415A (zh) * | 2018-12-13 | 2019-04-16 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 三级神经环路操纵组合物及动物三级神经环路操纵方法 |
| EP4003138A4 (en) | 2019-07-25 | 2023-08-30 | Uroviu Corp. | Disposable endoscopy cannula with integrated grasper |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1707499A1 (ru) * | 1989-06-22 | 1992-01-23 | Институт Физиологии Им.И.П.Павлова | Способ окрашивани перехватов Ранвье |
| US6399354B1 (en) * | 1998-07-31 | 2002-06-04 | President And Fellows Of Harvard College | Replication-competent virus expressing a detectable fusion protein |
| WO2002061390A2 (en) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Detection of herpes simplex virus |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3896176B2 (ja) * | 1996-05-21 | 2007-03-22 | 浜松ホトニクス株式会社 | 近赤外線蛍光トレーサーおよび蛍光イメージング方法 |
| US6013265A (en) * | 1996-10-22 | 2000-01-11 | University Of Maryland, Baltimore | Vaccine composition for herpes simplex virus and methods of using |
| US6054131A (en) | 1998-01-16 | 2000-04-25 | University Of Maryland Baltimore | Vaccine composition for herpes simplex virus and method of using |
| US6915154B1 (en) | 1999-09-24 | 2005-07-05 | National Research Council Of Canada | Method and apparatus for performing intra-operative angiography |
| WO2001069244A2 (en) * | 2000-03-10 | 2001-09-20 | Washington University | Method for labeling individual cells |
| WO2003006658A1 (en) * | 2001-07-13 | 2003-01-23 | The General Hospital Corporation | Mutant herpes simplex virus that expresses yeast cytosine deaminase |
| US20070122344A1 (en) * | 2005-09-02 | 2007-05-31 | University Of Rochester Medical Center Office Of Technology Transfer | Intraoperative determination of nerve location |
-
2009
- 2009-05-14 KR KR1020137035027A patent/KR20140007976A/ko not_active Ceased
- 2009-05-14 RU RU2011111077/10A patent/RU2475537C2/ru active
- 2009-05-14 BR BRPI0908612-9A patent/BRPI0908612A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2009-05-14 KR KR1020107027225A patent/KR101406506B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2009-05-14 CN CN2009801171315A patent/CN102026668A/zh active Pending
- 2009-05-14 MX MX2010012035A patent/MX2010012035A/es active IP Right Grant
- 2009-05-14 JP JP2011509706A patent/JP2011520907A/ja active Pending
- 2009-05-14 EP EP16183434.6A patent/EP3124051A1/en not_active Withdrawn
- 2009-05-14 WO PCT/US2009/043975 patent/WO2009140510A1/en not_active Ceased
- 2009-05-14 US US12/466,122 patent/US8361775B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2009-05-14 CN CN201510214021.8A patent/CN104800863A/zh active Pending
- 2009-05-14 EP EP09747592.5A patent/EP2285417B1/en not_active Not-in-force
-
2011
- 2011-12-08 US US13/314,418 patent/US20120078093A1/en not_active Abandoned
-
2014
- 2014-01-16 JP JP2014006203A patent/JP5806342B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-01-29 HK HK16100998.4A patent/HK1212921A1/zh unknown
- 2016-03-22 US US15/077,677 patent/US20160199515A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-07-09 US US16/030,126 patent/US20180369426A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1707499A1 (ru) * | 1989-06-22 | 1992-01-23 | Институт Физиологии Им.И.П.Павлова | Способ окрашивани перехватов Ранвье |
| US6399354B1 (en) * | 1998-07-31 | 2002-06-04 | President And Fellows Of Harvard College | Replication-competent virus expressing a detectable fusion protein |
| WO2002061390A2 (en) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Detection of herpes simplex virus |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| формула. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699571C2 (ru) * | 2016-03-14 | 2019-09-06 | Дженерал Электрик Компани | Вводимый местным путем фармацевтический агент, способ визуализации посредством его введения и содержащий его набор |
| RU2721652C1 (ru) * | 2017-01-30 | 2020-05-21 | Медибикон Инк. | Способ неинвазивного мониторинга флуоресцентного индикаторного агента с меченым атомом с коррекциями диффузионного отражения |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2009140510A1 (en) | 2009-11-19 |
| EP2285417A1 (en) | 2011-02-23 |
| KR101406506B1 (ko) | 2014-06-19 |
| BRPI0908612A2 (pt) | 2020-08-18 |
| CN102026668A (zh) | 2011-04-20 |
| US20160199515A1 (en) | 2016-07-14 |
| JP2011520907A (ja) | 2011-07-21 |
| EP2285417B1 (en) | 2016-08-10 |
| US20120078093A1 (en) | 2012-03-29 |
| KR20140007976A (ko) | 2014-01-20 |
| CN104800863A (zh) | 2015-07-29 |
| JP5806342B2 (ja) | 2015-11-10 |
| MX2010012035A (es) | 2011-02-23 |
| HK1212921A1 (zh) | 2016-06-24 |
| KR20110011655A (ko) | 2011-02-08 |
| JP2014111614A (ja) | 2014-06-19 |
| US20090285762A1 (en) | 2009-11-19 |
| US8361775B2 (en) | 2013-01-29 |
| EP3124051A1 (en) | 2017-02-01 |
| RU2011111077A (ru) | 2012-09-27 |
| US20180369426A1 (en) | 2018-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2475537C2 (ru) | Способы визуализации и композиции, содержащие флюоресцентные красители, связанные с вирусными компонентами для визуализации нервов | |
| US11806406B2 (en) | Virus-like particle conjugates for diagnosis and treatment of tumors | |
| US8948851B2 (en) | Method and apparatus for depth-resolved fluorescence, chromophore, and oximetry imaging for lesion identification during surgery | |
| US10814017B2 (en) | Multifunctional infrared-emitting composites | |
| JP2011115658A (ja) | 周辺光条件下のインビボ誘導信号の光学画像化 | |
| JP2018500338A5 (ru) | ||
| Kittle et al. | Fluorescence-guided tumor visualization using the tumor paint BLZ-100 | |
| WO2019217413A1 (en) | Photodynamic compositions and methods of use | |
| WO2013186735A2 (en) | Photothermal detection | |
| JP2025100898A (ja) | 蛍光マーカーの鼻腔内送達 | |
| Mendez et al. | Short-Wave Infrared Emitting Nanocomposites for Fluorescence-Guided Surgery | |
| CN115379864A (zh) | 包含荧光团标记的uPAR靶向肽缀合物的组合物 | |
| US20210252169A1 (en) | Multi-Functional Infrared-Emitting Composites | |
| Hale | Near infrared whole body imaging | |
| JP2015121543A (ja) | 蛍光ガイド下外科手術（ｆｇｓ）のための可搬型デジタルイメージングシステム | |
| HK1227694B (zh) | 关节软骨成像组合物 |