RU2475529C2 - INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus - Google Patents
INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2475529C2 RU2475529C2 RU2011109550/10A RU2011109550A RU2475529C2 RU 2475529 C2 RU2475529 C2 RU 2475529C2 RU 2011109550/10 A RU2011109550/10 A RU 2011109550/10A RU 2011109550 A RU2011109550 A RU 2011109550A RU 2475529 C2 RU2475529 C2 RU 2475529C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fungus
- extract
- influenza
- inhibitor
- virus
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 241001313695 Phallus impudicus Species 0.000 title claims abstract description 21
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 5
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 claims 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 abstract 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 3
- 241000123249 Inonotus hispidus Species 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- QDVIEIMMEUCFMW-QXYPORFMSA-N (3z,5e)-6-(3,4-dihydroxyphenyl)-4-hydroxyhexa-3,5-dien-2-one Chemical compound CC(=O)\C=C(/O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QDVIEIMMEUCFMW-QXYPORFMSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241001275954 Cortinarius caperatus Species 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 102000027549 TRPC Human genes 0.000 description 2
- 108060008648 TRPC Proteins 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- QDVIEIMMEUCFMW-UHFFFAOYSA-N hispolone Natural products CC(=O)C=C(O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QDVIEIMMEUCFMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 2
- 241000960391 Boletales Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241001480610 Ganoderma pfeifferi Species 0.000 description 1
- AOXXVRDKZLRGTJ-ZNWNZREOSA-N Ganodermadiol Natural products OC/C(=C\CC[C@@H](C)[C@@H]1[C@]2(C)[C@](C)(C=3C([C@]4(C)[C@@H](C(C)(C)[C@@H](O)CC4)CC=3)=CC2)CC1)/C AOXXVRDKZLRGTJ-ZNWNZREOSA-N 0.000 description 1
- AVYUIGCRCPQERA-RVFLQCAWSA-N Ganoderol B Natural products C[C@H](CC=CC(CO)CO)[C@H]1CC[C@@]2(C)C3=CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)C3=CC[C@]12C AVYUIGCRCPQERA-RVFLQCAWSA-N 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 240000000588 Hericium erinaceus Species 0.000 description 1
- 235000007328 Hericium erinaceus Nutrition 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000295597 Phallaceae Species 0.000 description 1
- 241000959233 Phallales Species 0.000 description 1
- 241000222355 Trametes versicolor Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- AOXXVRDKZLRGTJ-AZIDVCJLSA-N ganoderol B Chemical compound CC1(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)C3=CC[C@]4(C)[C@@H]([C@@H](CC\C=C(/C)CO)C)CC[C@@]4(C)C3=CC[C@H]21 AOXXVRDKZLRGTJ-AZIDVCJLSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- SGJNQVTUYXCBKH-HNQUOIGGSA-N hispidin Chemical compound O1C(=O)C=C(O)C=C1\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 SGJNQVTUYXCBKH-HNQUOIGGSA-N 0.000 description 1
- SGJNQVTUYXCBKH-UHFFFAOYSA-N hispidin Natural products O1C(=O)C=C(O)C=C1C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 SGJNQVTUYXCBKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- APTZNLHMIGJTEW-UHFFFAOYSA-N pyraflufen-ethyl Chemical compound C1=C(Cl)C(OCC(=O)OCC)=CC(C=2C(=C(OC(F)F)N(C)N=2)Cl)=C1F APTZNLHMIGJTEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 235000013522 vodka Nutrition 0.000 description 1
- 239000001052 yellow pigment Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к противовирусным средствам, в частности к ингибитору репродукции вируса гриппа человека и птиц типа А, и может быть использовано в медицине, вирусологии и фармакологии.The invention relates to antiviral agents, in particular to an inhibitor of the reproduction of human and avian influenza virus type A, and can be used in medicine, virology and pharmacology.
Вирус гриппа А вызывает инфекционные заболевания верхних дыхательных путей. Ежегодно эпидемии гриппа в мире приводят к 3,5 миллионам случаев тяжелых заболеваний и к 300-500 тыс. случаев со смертельным исходом [CDC 2005. Centers for Disease Control. Prevention and control of influenza recommendations of the advisory committee on immunization practices (ACIP) // MMWR. - 2005. - V.54 (RR08). - P.1-40. Available from URL: http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/rr5408a1.html].Influenza A virus causes infectious diseases of the upper respiratory tract. Every year, global influenza epidemics result in 3.5 million cases of serious illness and 300-500 thousand deaths [CDC 2005. Centers for Disease Control. Prevention and control of influenza recommendations of the advisory committee on immunization practices (ACIP) // MMWR. - 2005 .-- V.54 (RR08). - P.1-40. Available from URL: http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/rr5408a1.html].
Новые эпидемичные штаммы вируса гриппа А возникают каждые 1-2 года в результате точечных мутаций в двух поверхностных гликопротеинах - гемагглютинине (НА) и нейраминидазе (NA). Используя разнообразие и изменчивость антигенной структуры вирионов, вирус гриппа способен обходить защитные механизмы иммунитета человека и, поэтому длительного иммунитета против вируса нет ни после естественной инфекции, ни после вакцинации. До настоящего времени не существует достаточно эффективных средств предотвращения распространения данной инфекции. В настоящее время борьба с инфекцией, вызываемой вирусом гриппа, основывается на лечении гриппа с применением этиотропных, патогенетических и симптоматических средств. Поиск новых эффективных в отношении гриппа лекарственных веществ является одной из приоритетных задач здравоохранения.New epidemic strains of influenza A virus occur every 1-2 years as a result of point mutations in two surface glycoproteins - hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). Using the diversity and variability of the antigenic structure of virions, the influenza virus is able to bypass the protective mechanisms of human immunity and, therefore, there is no long-term immunity against the virus either after a natural infection or after vaccination. To date, there are no sufficiently effective means to prevent the spread of this infection. Currently, the fight against infection caused by the influenza virus is based on the treatment of influenza using etiotropic, pathogenetic and symptomatic agents. The search for new flu-effective drugs is one of the health priorities.
Веселка обыкновенная (Phallus impudicus L.: Pers.) является представителем гастеромицетов, относится к порядку Веселковые (Phallales), семейству Веселковые (Phallaceae), роду Веселка (Phallus). Народное название «чертово яйцо», «громовая стрела» и др. отражают способность гриба из стадии яйца стремительно превратиться в плодовое тело, напоминающее фаллос. Используя математическую модель и анализ, ученые рассчитали, что сила, выталкивающая гриб вверх, такова, что три таких гриба могут поднять массу приблизительно 400 кг [Niksic M., Hadzic I. and Glisic M. Is Phallus impudicus a mycological giant? // Micologist, 2004. - Vol.18. - P.21-22].Veselka vulgaris (Phallus impudicus L .: Pers.) Is a representative of Gasteromycetes, belongs to the order Veselkovye (Phallales), the family Veselkovye (Phallaceae), the genus Veselka (Phallus). The popular name "bloody egg", "thunderbolt" and others reflect the ability of the fungus from the stage of the egg to rapidly turn into a fruiting body resembling a phallus. Using a mathematical model and analysis, the scientists calculated that the force pushing the fungus up is such that three of these fungi can lift a mass of approximately 400 kg [Niksic M., Hadzic I. and Glisic M. Is Phallus impudicus a mycological giant? // Micologist, 2004 .-- Vol. 18. - P.21-22].
В народной медицине гриб издавна использовали как средство против ревматизма и подагры. В традиционной медицине гриб используется как противоопухолевое средство, например применяется вместе с химическими препаратами при раке молочной железы [Kuznecova G., Kuznecovs I., Legina K., Kuznecovs S. Lymphederma prevention and management with Phallus impudicus: six years survey after breast cancer treatment // European Journal of Cancer Supplements, 2007. - Vol. 5. - P. 457; Kuznecova G., Kuznecovs I., Legina K., Kuznecovs S. Phallus impudicus in tromboprophylaxis in breast cancer patients undergoing chemotherapy and hormonal treatment // The Breast. Prima. ry therapy of early breast cancer. 10th International conference, 2007. - Vol.16. - S56]. Phallus impudicus обладает антиоксидантной активностью [Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Филимонова Т.В., Рожкова З.А., Поединок Н.Л., Трухоновец В.В., Осадчая О.В. Phallus impudicus (L.: Pers.), Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers. и Trametes versicolor (Fr.) Quel. - Перспективные объекты биотехнологии // Успехи медицинской микологии. Под редакцией академика РАЕН Ю.В. Сергеева. Материалы четвертого всероссийского конгресса по медицинской микологии. - М., 2006. - Т.7. - С.220-222].In folk medicine, the mushroom has long been used as a remedy against rheumatism and gout. In traditional medicine, the fungus is used as an antitumor agent, for example, it is used together with chemicals for breast cancer [Kuznecova G., Kuznecovs I., Legina K., Kuznecovs S. Lymphederma prevention and management with Phallus impudicus: six years survey after breast cancer treatment // European Journal of Cancer Supplements, 2007. - Vol. 5. - P. 457; Kuznecova G., Kuznecovs I., Legina K., Kuznecovs S. Phallus impudicus in tromboprophylaxis in breast cancer patients undergoing chemotherapy and hormonal treatment // The Breast. Prima. ry therapy of early breast cancer. 10 th International conference, 2007. - Vol.16. - S56]. Phallus impudicus has antioxidant activity [Babitskaya VG, Shcherba VV, Filimonova TV, Rozhkova ZA, Duel NL, Trukhonovets VV, Osadchaya OV Phallus impudicus (L .: Pers.), Hericium erinaceus (Bull .: Fr.) Pers. and Trametes versicolor (Fr.) Quel. - Promising objects of biotechnology // Successes of medical mycology. Edited by Academician of the Russian Academy of Natural Sciences Yu.V. Sergeeva. Materials of the Fourth All-Russian Congress on Medical Mycology. - M., 2006 .-- T.7. - S.220-222].
Известны природные соединения, оказывающие ингибирующее действие на вирус гриппа. Например, известно использование водного экстракта гриба Rozites caperata в качестве антивирусного лекарственного средства белковой природы, препятствующее процессу репликации вируса гриппа типа A [Piraino F. F. The Development of the Antiviral Drug RC 28 from Rozites caperata (Pers.: Fr.) P. Karst. (Agaricomycetideae) // International Journal of Medicinal Mushrooms. Vol.7 (2005), p.356].Known natural compounds that have an inhibitory effect on the influenza virus. For example, it is known to use an aqueous extract of the fungus Rozites caperata as an antiviral drug of a protein nature that impedes the replication of type A influenza virus [Piraino F. F. The Development of the Antiviral Drug RC 28 from Rozites caperata (Pers .: Fr.) P. Karst. (Agaricomycetideae) // International Journal of Medicinal Mushrooms. Vol. 7 (2005), p. 356].
Известна антивирусная активность экстракта Ganoderma pfeifferi против вируса гриппа типа А и вируса простого герпеса 1 типа. Основным антивирусным компонентом экстракта были тритерпеноиды: ганодермадиол, луцидодиол, апланоксиновая кислота G [Mothana R.A.A., Awadh Аli N.A., Jansen R., Wegner U., Mentel R., Lindequist U. Antiviral lanostanoid triterpenes from the fungus Ganoderma preifferi // Fitoterapia. - 74 (2003).-P. 177-180].The antiviral activity of the extract of Ganoderma pfeifferi against influenza virus type A and herpes simplex virus type 1 is known. The main antiviral components of the extract were triterpenoids: ganodermadiol, lucidodiol, aplanoxic acid G [Mothana R.A.A., Awadh Ali N.A., Jansen R., Wegner U., Mentel R., Lindequist U. Antiviral lanostanoid triterpenes from the funma geriferi ganiferi ganiferi inferiiferi gerferfus genteriferi genteriferi ganiferiiferi inferiferi geriferi genti. - 74 (2003) .- P. 177-180].
Известны вещества хиспидин и хисполон, имеющие изопреноидную природу и найденные в этанольном экстракте гриба Inonotus hispidus, которые проявляют антивирусную активность против вируса гриппа типа А и типа В. Антивирусную активность проявляли как экстракты плодовых тел, так и мицелиальные экстракты [Ali N.A.A., Jansen R., Pilgrim H., Liberra K., Lindequist U. Hispolon, a yellow pigment from Inonotus hispidus // Phytochemistry. 1996. - V.41, I.3, P.927-929; Awadh Ali N.A., Mothana R.A.A., Lesnau A., Pilgrim H., Lindequist. Antiviral activity of Inonotus hispidus // Fitoterapia. - 74 (2003). - P.483-485].The known substances are hispidin and hispolon, which have an isoprenoid nature and are found in the ethanolic extract of the fungus Inonotus hispidus, which exhibit antiviral activity against influenza virus type A and type B. Antiviral activity was shown by both extracts of fruiting bodies and mycelial extracts [Ali NAA, Jansen R. , Pilgrim H., Liberra K., Lindequist U. Hispolon, a yellow pigment from Inonotus hispidus // Phytochemistry. 1996.- V.41, I.3, P.927-929; Awadh Ali N.A., Mothana R.A.A., Lesnau A., Pilgrim H., Lindequist. Antiviral activity of Inonotus hispidus // Fitoterapia. - 74 (2003). - P.483-485].
Наиболее близким аналогом (прототипом) является препарат из водочной настойки веселки, которую авторы и волонтеры употребляли как профилактическое средство перед эпидемиями гриппа, при простудных заболеваниях, вызывает практически 100%-ный эффект защиты [Бабаянц О.В., Бушулян М.А., Залогина М.А. Phallus impudicus L.: Pers. - Перспективы использования в медицине // Успехи медицинской микологии под редакцией академика РАЕН Ю.В. Сергеева. Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии. М., 2005. - Т.5. - С.240-242].The closest analogue (prototype) is a preparation from vodka tincture of Veselka, which the authors and volunteers used as a prophylactic against flu epidemics, for colds, causes almost 100% protection effect [Babayants OV, Bushulyan MA, Zalogina M.A. Phallus impudicus L .: Pers. - Prospects for use in medicine // Successes in medical mycology edited by academician of the Russian Academy of Natural Sciences Yu.V. Sergeeva. Materials of the Third All-Russian Congress on Medical Mycology. M., 2005 .-- T.5. - S.240-242].
Однако в вышеуказанном аналоге не приведены дозы препарата (концентрация экстракта из плодовых тел веселки в растворе), а также схема применения препарата, основанная на результатах научных исследований, подтверждающих противогриппозную активность экстракта гриба Phallus impudicus в зависимости от концентрации экстрактивных веществ гриба Phallus impudicus.However, the above analogue does not show the dose of the drug (the concentration of the extract from the fruit bodies of the fungus in the solution), as well as the scheme of the drug, based on the results of scientific studies confirming the anti-influenza activity of the extract of Phallus impudicus fungus depending on the concentration of the extractives of Phallus impudicus fungus.
Техническим результатом заявленного технического решения является обеспечение возможности получения средства на основе водного экстракта базидиального гриба Phallus impudicus или полисахарида из указанного экстракта, обладающего ингибирующим действием в отношении вируса гриппа типа А.The technical result of the claimed technical solution is to provide the possibility of obtaining funds based on an aqueous extract of the basidiomycephalus Phallus impudicus or polysaccharide from the specified extract, which has an inhibitory effect against influenza virus type A.
Указанный технический результат достигается тем, что ингибитор репродукции вируса гриппа А, представляющий собой водный экстракт базидиального гриба Phallus impudicus, получают путем экстракции измельченного гриба водой при соотношении 1:5 с последующим удалением из экстракта нерастворимого осадка.The specified technical result is achieved in that the inhibitor of the reproduction of influenza A virus, which is an aqueous extract of the basidiomycephalus Phallus impudicus, is obtained by extraction of the ground fungus with water at a ratio of 1: 5, followed by removal of the insoluble sediment from the extract.
Измельченный базидиальный гриб Phallus impudicus получают из плодовых тел указанного гриба или из мицелия указанного гриба путем культивирования биомассы из плодового тела гриба, находящегося в стадии яйца, в жидкой питательной среде на основе овсяно-кукурузного отвара.The crushed basidiomycete Phallus impudicus is obtained from the fruiting bodies of the specified fungus or from the mycelium of the specified fungus by culturing biomass from the fruiting body of the fungus that is in the egg stage in a liquid nutrient medium based on oat-corn broth.
Ниже приведены примеры 1-2 получения экстрактивных веществ из плодовых тел и мицелия гриба Phallus impudicus.Below are examples 1-2 of obtaining extractive substances from fruiting bodies and mycelium of the Phallus impudicus fungus.
Пример 1. Получение экстракта из плодовых тел. 12 г измельченного замороженного плодового тела суспендировали в 60 мл стерильной дистиллированной воды и обрабатывали на ультразвуковом дезинтеграторе (MSE, Англия) в течение 20 мин при амплитуде 24 мкм. Осадок отделяли центрифугированием на центрифуге J-2-21 (Beckman, США) в течение 20 мин при 10000 об/мин. Готовый экстракт заморозили при -20°С. Содержание сухих веществ составляло 5 мг/мл (образец 09-90).Example 1. Obtaining extract from fruiting bodies. 12 g of the crushed frozen fruit body was suspended in 60 ml of sterile distilled water and processed on an ultrasonic disintegrator (MSE, England) for 20 min at an amplitude of 24 μm. The precipitate was separated by centrifugation on a J-2-21 centrifuge (Beckman, USA) for 20 minutes at 10,000 rpm. The finished extract was frozen at -20 ° C. The solids content was 5 mg / ml (sample 09-90).
Пример 2. Получение экстракта из мицелия. Phallus impudicus был выделен в чистую культуру из плодового тела гриба, находящегося в стадии яйца. Биомасса мицелия получена в результате культивирования на овсяно-кукурузном отваре в течение 30 сут в стационарных условиях. 5 г измельченной замороженной биомассы суспендировали в 25 мл стерильной.Example 2. Obtaining extract from mycelium. Phallus impudicus was isolated in a pure culture from the fruiting body of a fungus in the egg stage. The mycelium biomass was obtained as a result of cultivation on oat-corn broth for 30 days under stationary conditions. 5 g of ground frozen biomass was suspended in 25 ml of sterile.
Пример 3. Определение противовирусной эффективности образцов гриба Phallus impudicus на культуре клетокExample 3. Determination of the antiviral efficacy of samples of Phallus impudicus fungus in cell culture
Культура клеток. Для тестирования противовирусной активности препаратов использовали перевиваемую культуру клеток MDCK, полученных из коллекции культур клеток ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». Клеточная культура MDCK поступает из лаборатории в виде суспензии с указанной концентрацией. В стерильных условиях суспензию разводили предварительно подогретой до температуры +37°С средой RPMI-1640, содержащей 5% сыворотки крови плодов коровы, до концентрации 1,0-1,5×105 клеток/мл. По 100 мкл суспензии клеток MDCK вносили в 96-луночные планшеты 12-канальной автоматической пипеткой. Планшеты с клетками помещали в термостат при температуре +37°С, 5% СО2 и 100% влажности на 2-3 сут до образования клеточного монослоя.Cell culture. To test the antiviral activity of the preparations, a transplantable culture of MDCK cells obtained from the collection of cell cultures of the Federal State Pedagogical Research Center of the World Bank “Vector” was used. The MDCK cell culture comes from the laboratory as a suspension with the indicated concentration. Under sterile conditions, the suspension was diluted with RPMI-1640 medium pre-heated to a temperature of + 37 ° C, containing 5% blood serum of cow fruits, to a concentration of 1.0-1.5 × 10 5 cells / ml. 100 μl of a suspension of MDCK cells was dispensed into 96-well plates with a 12-channel automatic pipette. Tablets with cells were placed in a thermostat at a temperature of + 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity for 2-3 days before the formation of a cell monolayer.
Определение токсичности образца. Для определения токсических доз препаратов экстракты разводили в несколько раз и оценивали наличие токсического действия в монослоях культуры клеток MDCK с помощью инвертированного микроскопа. Для этого делали разведения исходного препарата в 5 раз, в 10, 100, 1000, 10000, 100000, 1000000 раз средой RPMI-1640, содержащей 5% сыворотки крови плодов коровы, вносили по 150 мкл в соответствующие лунки планшета и ставили в термостат при температуре +37°С, 5% СО2 и 100% влажности на 2 сут. Через 2 сут с помощью инвертированного микроскопа оценивали наличие токсического действия в монослоях клеток MDCK, инкубированных с разными концентрациями грибных препаратов.Determination of sample toxicity. To determine the toxic doses of the preparations, the extracts were diluted several times and the presence of toxic effects in monolayers of the MDCK cell culture was assessed using an inverted microscope. To do this, dilutions of the initial preparation were made 5 times, 10, 100, 1000, 10,000, 100,000, 1,000,000 times with RPMI-1640 medium containing 5% blood serum of cow fruits, 150 μl were added to the corresponding wells of the plate and placed in a thermostat at a temperature + 37 ° C, 5% CO 2 and 100% humidity for 2 days. After 2 days, the presence of a toxic effect in monolayers of MDCK cells incubated with different concentrations of fungal preparations was evaluated using an inverted microscope.
В опытах по определению противовирусной активности грибных препаратов использовали предварительно определенные максимально переносимые концентрации (МПК).In experiments to determine the antiviral activity of fungal preparations, predefined maximum tolerated concentrations (MIC) were used.
Определение противовирусной активности образца. В работе использовали вирусы гриппа птиц (штамм A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1)) и человека (штамм A/Aichi/2/68 (H3N2)), полученные из отдела «Коллекция микроорганизмов» ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор». Наработку и титрование вирусов производили на 10-суточных развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ). Концентрации вируса в вирусаллантоисной жидкости (ВАЖ) составляли по разным экспериментам от 6,5 до 9,5 lg ЭИД50/мл (50% эмбриональных инфицирующих доз в мл).Determination of antiviral activity of the sample. In our work, we used avian influenza viruses (strain A / chicken / Kurgan / 05/2005 (H5N1)) and humans (strain A / Aichi / 2/68 (H3N2)) obtained from the Department of Microorganisms Collection of the Federal State Institution of Science and Science of the World Health Center “Vector” . The production and titration of viruses was performed on 10-day-old developing chicken embryos (RCE). The concentrations of the virus in the virus-allantoic fluid (IMPORTANT) were, according to various experiments, from 6.5 to 9.5 lg EID 50 / ml (50% of embryonic infectious doses in ml).
В опытах по определению противовирусной активности грибных препаратов готовили разведения ВАЖ каждого вируса от 1 до 8 с десятикратным шагом с использованием среды RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина. Для определения противовирусной активности препаратов в монослой культуры клеток MDCK вносили по 50 мкл выбранного разведения экстракта на среде RPMI-1640, содержащей 2 мкг/мл трипсина, и 100 мкл разведенного от 1 до 8 или неразведенного ВАЖ. В случае использования неразведенных грибных препаратов или ВАЖ трипсин вносили до конечной концентрации 2 мкг/мл поддерживающей среды в лунке 96-луночного планшета. Заражение клеточного монослоя проводили по общепринятой методике, при этом для культивирования вирусов использовали поддерживающую среду RPMI-1640 фирмы ООО «Биолот», Санкт-Петербург, содержащую 2 мкг/мл трипсина ТРСK (Sigma, США). Клетки инкубировали 2 сут при температуре +37°С в атмосфере 5% СО2 в термостате ТС-1/80 СПУ (Россия). Через 2 сут в каждой лунке с помощью инвертированного микроскопа регистрировали ЦПД в монослое клеток и определяли наличие вируса в среде культивирования по реакции гемагглютинации (РГА) с 1% эритроцитами кур.In experiments to determine the antiviral activity of fungal preparations, dilutions of the IMPORTANCE of each virus from 1 to 8 in ten-fold steps were prepared using RPMI-1640 medium containing 2 μg / ml trypsin. To determine the antiviral activity of the preparations, 50 μl of the selected dilution of the extract was added to the monolayer of the MDCK cell culture on RPMI-1640 medium containing 2 μg / ml trypsin and 100 μl diluted from 1 to 8 or undiluted IMPORTANT. In the case of using undiluted mushroom preparations or IMPORTANT, trypsin was added to a final concentration of 2 μg / ml of support medium in a well of a 96-well plate. Infection of the cell monolayer was carried out according to the generally accepted method, and virus support medium RPMI-1640 from Biolot LLC, St. Petersburg, containing 2 μg / ml TRPC trypsin (Sigma, USA) was used for virus cultivation. Cells were incubated for 2 days at a temperature of + 37 ° C in an atmosphere of 5% CO 2 in a TS-1/80 SPU thermostat (Russia). After 2 days in each well, an inverted microscope was used to record the CPD in the cell monolayer and the presence of the virus in the culture medium was determined by the hemagglutination reaction (RGA) with 1% chicken erythrocytes.
В качестве контроля использовали:As a control, we used:
1. Контроль клеток MDCK, культивируемых в питательной среде RPMI-1640 фирмы ООО «Биолот», Санкт-Петербург, содержащей 2 мкг/мл трипсина ТРСK (Sigma, США).1. Control of MDCK cells cultured in RPMI-1640 nutrient medium manufactured by Biolot LLC, St. Petersburg, containing 2 μg / ml TRPC trypsin (Sigma, USA).
2. Контроль репродукции вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2) и A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) с 1 до 8 разведения с десятикратным шагом без внесения препаратов грибных экстрактов.2. Control of the reproduction of the influenza virus A / Aichi / 2/68 (H3N2) and A / chicken / Kurgan / 05/2005 (H5N1) from 1 to 8 dilutions in ten-fold increments without adding mushroom extract preparations.
В табл.1 представлены результаты определения противовирусной активности образцов на культуре клеток в отношении штамма A/Aichi/2/68 (H3N2) вируса гриппа человека.Table 1 presents the results of determining the antiviral activity of samples on cell culture in relation to strain A / Aichi / 2/68 (H3N2) of human influenza virus.
Как видно из табл.1, экстракт из плодового тела веселки (09-90) проявил высокий антивирусный эффект в отношении вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2). Индекс нейтрализации данного штамма составил 6,3 lg. При этом наблюдалось 100%-ное подавление репродукции вируса. Экстракт из биомассы гриба, полученной в результате культивирования на питательной среде (09-84), проявил в отношении этого же штамма меньший вируснейтрализующий эффект - 2,3 lg. Это связано с меньшим содержанием сухих веществ в экстракте из мицелия, по сравнению с экстрактом из плодового тела. По результатам экспериментов, эффективная концентрация экстракта из плодового тела для полной нейтрализации вируса гриппа (штамм A/Aichi/2/68 (H3N2)) составила 0,05 мг/мл, в то время как эффективная концентрация экстракта из мицелия для нейтрализации этого же вируса на 2,3 lg составила 0,02 мг/мл.As can be seen from table 1, the extract from the fruit body of Veselka (09-90) showed a high antiviral effect against human influenza virus A / Aichi / 2/68 (H3N2). The neutralization index of this strain was 6.3 lg. In this case, 100% inhibition of virus reproduction was observed. The extract from the biomass of the fungus obtained as a result of cultivation on a nutrient medium (09-84) showed a smaller virus-neutralizing effect in relation to the same strain - 2.3 lg. This is due to the lower solids content in the extract from the mycelium, compared with the extract from the fruit body. According to the results of the experiments, the effective concentration of the extract from the fruiting body to completely neutralize the influenza virus (strain A / Aichi / 2/68 (H3N2)) was 0.05 mg / ml, while the effective concentration of the extract from the mycelium to neutralize the same virus 2.3 lg was 0.02 mg / ml.
При всех разведениях полное подавление вируса наблюдалось только у экстракта из мицелия веселки (образец 09-84). Даже в разведении 1:10, когда эффективная концентрация гриба составляла всего 0,067 мг/мл, наблюдался 100%-ный вирусингибирующий эффект, который сохранялся и при разведении 1:30. У других образцов, за исключением образца 09-90, начиная с разведения 1:5 происходило падение ингибирующей способности.With all dilutions, complete suppression of the virus was observed only in the fungus mycelium extract (sample 09-84). Even at a 1:10 dilution, when the effective concentration of the fungus was only 0.067 mg / ml, a 100% virus-inhibiting effect was observed, which was maintained at a dilution of 1:30. In other samples, with the exception of sample 09-90, starting from a 1: 5 dilution, a decrease in inhibitory capacity occurred.
Таким образом, антивирусную активность в отношении вируса гриппа типа А проявляет сложный комплекс биологически активных веществ (БАВ), имеющихся в плодовом теле и в культивируемом мицелии гриба.Thus, the antiviral activity against type A influenza virus is manifested by a complex complex of biologically active substances (BAS) that are present in the fruit body and in the cultured mycelium of the fungus.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011109550/10A RU2475529C2 (en) | 2011-03-14 | 2011-03-14 | INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011109550/10A RU2475529C2 (en) | 2011-03-14 | 2011-03-14 | INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011109550A RU2011109550A (en) | 2012-09-20 |
| RU2475529C2 true RU2475529C2 (en) | 2013-02-20 |
Family
ID=47077107
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011109550/10A RU2475529C2 (en) | 2011-03-14 | 2011-03-14 | INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2475529C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784058C1 (en) * | 2022-10-04 | 2022-11-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Нпо "Биолюкс" | Method for producing a dry extract of common stinkhorn (phallus impudicus) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU786855A3 (en) * | 1975-12-18 | 1980-12-07 | Куреха Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма) | Method of preparing polysaccharides possessing antitumor activity |
| JPS55157517A (en) * | 1978-12-29 | 1980-12-08 | Chiyokichi Iizuka | Antiviral drug and its preparation |
| US20050163800A1 (en) * | 2001-09-03 | 2005-07-28 | Medimush Aps | Production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
-
2011
- 2011-03-14 RU RU2011109550/10A patent/RU2475529C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU786855A3 (en) * | 1975-12-18 | 1980-12-07 | Куреха Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма) | Method of preparing polysaccharides possessing antitumor activity |
| JPS55157517A (en) * | 1978-12-29 | 1980-12-08 | Chiyokichi Iizuka | Antiviral drug and its preparation |
| US20050163800A1 (en) * | 2001-09-03 | 2005-07-28 | Medimush Aps | Production of fungal extracellular immune stimulating compounds |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| БАБАЯНЦ О.В. И ДР. Phallus impudicus L.: PERS. - перспективы использования в медицине. Успехи медицинской микологии. Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии. - М., 2005, т.5, с.240-242. * |
| БАБИЦКАЯ В.Г. И ДР. Phallus impudicus (L.: Pers.), Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers. и Trametes versicolor (Fr.) Quel. - перспективные объекты биотехнологии. Успехи медицинской микологии. Материалы четвертого всероссийского конгресса по медици& * |
| БАБИЦКАЯ В.Г. И ДР. Phallus impudicus (L.: Pers.), Hericium erinaceus (Bull.: Fr.) Pers. и Trametes versicolor (Fr.) Quel. - перспективные объекты биотехнологии. Успехи медицинской микологии. Материалы четвертого всероссийского конгресса по медицинской микологии. - М., 2006, т.7, с.220-222. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784058C1 (en) * | 2022-10-04 | 2022-11-23 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Нпо "Биолюкс" | Method for producing a dry extract of common stinkhorn (phallus impudicus) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011109550A (en) | 2012-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Teplyakova et al. | Antiviral activity of polyporoid mushrooms (higher Basidiomycetes) from Altai Mountains (Russia) | |
| Krupodorova et al. | Antiviral activity of Basidiomycete mycelia against influenza type A (serotype H1N1) and herpes simplex virus type 2 in cell culture | |
| CA2980173C (en) | Antiviral activity from medicinal mushrooms containing phenyl carboxylate/acrylate compounds | |
| US8765138B2 (en) | Antiviral and antibacterial activity from medicinal mushrooms | |
| US20060171958A1 (en) | Antiviral activity from medicinal mushrooms | |
| US20140105928A1 (en) | Antiviral and antibacterial activity from medicinal mushrooms | |
| Nik Ubaidillah et al. | Isolation of the intracellular and extracellular polysaccharides of Ganoderma neojaponicum (Imazeki) and characterization of their immunomodulatory properties | |
| Serkedjieva | Antiviral activity of the red marine alga Ceramium rubrum | |
| Shibnev et al. | Antiviral activity of Inonotus obliquus fungus extract towards infection caused by hepatitis C virus in cell cultures | |
| VA et al. | Antiviral activity of total polysaccharide fraction of water and ethanol extracts of Pleurotus pulmonarius against the influenza A virus | |
| Teplyakova et al. | Fungal bioactive compounds with antiviral effect | |
| Pradeep et al. | Antiviral potency of mushroom constituents | |
| Zime-Diawara et al. | The antimalarial action of aqueous and hydro alcoholic extracts of Artemisia annua L. cultivated in Benin: In vitro and in vivo studies | |
| Sangeetha et al. | Antiviral activity of basidiomycetous fungi against Groundnut bud necrosis virus in tomato | |
| Gholami-Shabani et al. | Natural product synthesis by fungi: Recent trends and future prospects | |
| CN101695511B (en) | Pomegranate rind extract and production method and application thereof | |
| RU2475529C2 (en) | INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASE ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Phallus impudicus | |
| CN106070346A (en) | A kind of have active substance and the application thereof gone out demodicid mite with drive demodicid mite effect | |
| RU2475530C2 (en) | INHIBITOR OF INFLUENZA A VIRUS REPRODUCTION BASED ON EXTRACT OF BASIDIAL FUNGUS Laetiporus sulphureus | |
| CN102755355B (en) | Pharmaceutical composition against type A influenza virus or enterovirus | |
| RU2846561C1 (en) | Antiviral agent based on cultivated mycelium extract of xylotrophic fungus-basidiomycete daetaleopsis tricolor (bulliard) bondartsev et singer | |
| Khan et al. | Biotechnological potential of secondary metabolites: Current status and future challenges | |
| RU2580305C1 (en) | ANTIVIRAL AGENT BASED ON DRY EXTRACT OF LICHEN Cetraria islandica | |
| CN103735599B (en) | Herba laggera extract and application in anti-Alphavirus flu pharmaceutical for the composition | |
| RU2283126C1 (en) | Agent for prophylaxis and treatment of viral avian influenza |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180315 |