[go: up one dir, main page]

RU2470668C2 - Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами - Google Patents

Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами Download PDF

Info

Publication number
RU2470668C2
RU2470668C2 RU2008110495/15A RU2008110495A RU2470668C2 RU 2470668 C2 RU2470668 C2 RU 2470668C2 RU 2008110495/15 A RU2008110495/15 A RU 2008110495/15A RU 2008110495 A RU2008110495 A RU 2008110495A RU 2470668 C2 RU2470668 C2 RU 2470668C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
linkers
drugs
linker
cells
drug delivery
Prior art date
Application number
RU2008110495/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2008110495A (ru
Inventor
Ионтчо Радославов Влахов
Кристофер Пол Лимон
Original Assignee
Эндосайт, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эндосайт, Инк. filed Critical Эндосайт, Инк.
Publication of RU2008110495A publication Critical patent/RU2008110495A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2470668C2 publication Critical patent/RU2470668C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается конъюгата для доставки лекарственного средства. Изобретение касается также фармацевтической композиции для устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине, включающей указанное соединение; а также способа устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине. Изобретение обеспечивает повышенную активность заявленного конъюгата по сравнению с конъюгатами, известными из уровня техники. 3 н.п. ф-лы, 14 пр., 15 ил., 4 табл.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ
По данной заявке испрашивается приоритет согласно 35 U.S.C. § 119(e) по предварительной патентной заявке США с серийным номером № 60/709950, поданной 19 августа 2005 года, и предварительной патентной заявке с серийным номером № 60/787558, поданной 30 марта 2006 года, описания которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к композициям и способам для применения для направленной доставки лекарственного средства. В частности, настоящее изобретение относится к конъюгатам лиганда, включающим два или более лекарственных средств и их аналогов и производных, таким как конъюгаты связывающих рецептор для витамина соединений и двух или более лекарственных средств.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Иммунная система млекопитающих обладает средствами для распознавания и устранения опухолевых клеток, других патогенных клеток и проникающих чужеродных патогенов. Несмотря на то что в норме иммунная система обеспечивает интенсивную защиту, существует много примеров, когда опухолевые клетки, другие патогенные клетки или инфекционные агенты не поддаются иммунному ответу хозяина и пролиферируют или персистируют с сопутствующей патогенностью для хозяина. Для устранения, например, воспроизводящихся новообразований были разработаны химиотерапевтические средства и лучевая терапия. Однако многие из имеющихся в настоящее время химиотерапевтических средств и схем лучевой терапии обладают неблагоприятными побочными эффектами, поскольку они действуют не только посредством уничтожения патогенных клеток, но также они повреждают нормальные клетки организма-хозяина, такие как клетки кроветворной системы. Неблагоприятные побочные эффекты этих лекарственных средств против злокачественной опухоли демонстрируют необходимость в разработке новых лекарственных средств против патогенных популяций клеток, обладающих сниженной токсичностью для хозяина.
Исследователи разработали терапевтические протоколы для уничтожения патогенных клеток посредством нацеливания на такие клетки цитотоксических соединений. Во многих из этих протоколов с целью минимизировать доставку токсина к нормальным клеткам применяют токсины, конъюгированные с антителами, которые связываются с антигенами, присущими только патогенным клеткам или сверхэспрессирующимися ими. С использованием этого подхода были разработаны определенные иммунотоксины, состоящие из антител, направленных на определенные антигены на патогенных клетках, где антитела связаны с токсинами, такими как рицин, экзотоксин Pseudomonas, дифтерийный токсин и фактор некроза опухоли. Эти иммунотоксины нацелены на патогенные клетки, такие как опухолевые клетки, обладающие определенными антигенами, распознаваемыми антителом (Olsnes S., Immunol. Today, 10, p. 291-295, 1989; Melby EL., Cancer Res., 53(8), p. 1755-1760, 1993; Better M.D., международная публикация PCT № WO 91/07418, опубликованная 30 мая 1991).
Другим подходом для нацеливания на популяции патогенных клеток, таких как злокачественные клетки или чужеродные патогены, в организме-хозяине является повышение иммунного ответа хозяина против патогенных клеток для избежания необходимости введения соединений, которые также могут обладать независимой токсичностью для хозяина. Одной описанной стратегией для иммунотерапии является связывание антител, например, полученных способами генетической инженерии мультимерных антител, с поверхностью опухолевых клеток для экспонирования константного участка антител на клеточной поверхности и, таким образом, для индукции уничтожения опухолевых клеток различными опосредуемыми иммунной системой процессами (De Vita V.T., Biologic Therapy of Cancer, 2d ed. Philadelphia, Lippincott, 1995; Soulillou J.P., патент США № 5672486). Однако эти подходы были осложнены трудностями, связанными с определением опухолеспецифических антигенов.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем описании описаны конъюгаты лиганда с лекарственными средствами и их аналоги и производные. Конъюгаты включают связывающие клеточный рецептор лиганды, которые ковалентно связаны с двумя или более лекарственными средствами, которые могут быть нацелены на клетки. Конъюгаты, описанные в настоящем описании, также могут включать поливалентный линкер для присоединения лигандов к лекарственным средствам.
В одном варианте осуществления описан связывающий рецептор конъюгат лекарственного средства. Конъюгат для доставки лекарственного средства включает лиганд для рецептора клеточной поверхности, два или более лекарственных средств или их аналоги или производные и необязательно поливалентный линкер, который, главным образом, может быть представлен формулой
(B)-(L)-(D)n
где (В) представляет собой связывающую рецептор группу; (D) представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное, подлежащее нацеливанию на клетку с помощью связывающей рецептор группы; (L) представляет собой поливалентный линкер и n представляет собой число, большее 1. Поливалентный линкер (L) может содержать несколько линкеров, ковалентно связанных друг с другом. Например, поливалентный линкер (L) может содержать один или несколько спейсерных линкеров (lS) и/или высвобождаемых линкеров (lr), где они соединены друг с другом и с лигандом и с лекарственным средством посредством одного или нескольких линкеров с гетероатомами (lн). Эти различные линкеры можно выбирать и размещать в любом порядке для конструирования поливалентного линкера (L). В качестве примера, поливалентный линкер (L) можно конструировать из одного или нескольких из следующих двухвалентных линкеров:
Figure 00000001
Figure 00000002
где а, b, с, d и e представляют собой целые числа, такие как числа из диапазона от 0 до приблизительно 4, и (lS), (lн) и (lr) представляют собой спейсерные линкеры, высвобождаемые линкеры, линкеры с гетероатомами соответственно. Дополнительные иллюстративные примеры двухвалентных линкеров, которые можно использовать для конструирования поливалентных линкеров, описанных в настоящем описании, описаны в патентной заявке США с серийным № 10/765336 (также встречающейся как публикация патентной заявки США № US 2005/0002942 А1) и международной публикации РСТ № WO 2006/012527, описания которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Следует понимать, что поливалентные линкеры могут соединять связывающую рецептор группу с двумя или более лекарственными средствами в виде множества структурных конфигураций, включая, но не ограничиваясь ими, следующие иллюстративные общие формулы:
Figure 00000003
где В представляет собой связывающий рецептор лиганд, каждый из (L1), (L2) и (L3) представляет собой поливалентный линкер, сконструированный из одного или нескольких спейсерных линкеров, высвобождаемых линкеров или линкеров с гетероатомами, и каждый из (D1), D2 и D3 представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное. Также в настоящем описании рассматривают другие варианты, включающие дополнительные лекарственные средства или их аналоги или производные, дополнительные линкеры и дополнительные конфигурации по расположению каждого из (В), (L) и (D).
В одном варианте в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, включено более одного связывающего рецептор лиганда, включая, но не ограничиваясь ими, следующие иллюстративные общие формулы:
Figure 00000004
Figure 00000005
где каждый В представляет собой связывающий рецептор лиганд, каждый из (L1), (L2) и (L3) представляет собой поливалентный линкер, сконструированный из одного или нескольких спейсерных линкеров, высвобождаемых линкеров и/или линкеров с гетероатомами, и каждый из (D1), D2 и D3 представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное. Также в настоящем описании рассматривают другие варианты, включающие дополнительные лекарственные средства или их аналоги или производные, дополнительные линкеры и дополнительные конфигурации по расположению каждого из (В), (L) и (D). В одном варианте связывающие рецептор лиганды предназначены для одного и того же рецептора, и в другом варианте связывающие рецептор лиганды предназначены для различных рецепторов.
В одном иллюстративном варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, поливалентный линкер включает по меньшей мере один высвобождаемый линкер (lr). В другом иллюстративном варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, поливалентный линкер включает по меньшей мере два высвобождаемых линкера (lr)2. В другом иллюстративном аспекте поливалентный линкер (L) включает по меньшей мере один высвобождаемый линкер (lr), который представляет собой не дисульфидный высвобождаемый линкер. В другом иллюстративном аспекте поливалентный линкер (L) обладает по меньшей мере двумя высвобождаемыми линкерами (lr)2, где один высвобождаемый линкер представляет собой не дисульфидный высвобождаемый линкер. Понятно, что, когда в поливалентный линкер включено более одного высвобождаемого линкера, эти высвобождаемые линкеры могут быть соседними. Далее, понятно, что, когда в поливалентном линкере два высвобождаемых линкера являются соседними, два высвобождаемых линкера могут совместно обеспечивать высвобождение лекарственного средства.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает по меньшей мере один спейсерный линкер, который представляет собой пептид, образованный из аминокислот. В одном аспекте пептид включает встречающиеся в природе аминокислоты и их стереоизомеры. В другом аспекте пептид образован только из встречающихся в природе аминокислот и их стереоизомеров.
Лиганды, описанные в настоящем описании, как правило, включают лиганды рецепторов клеточной поверхности. Иллюстративные лиганды, пригодные в конъюгатах, описанных в настоящем описании, включают, но не ограничиваются ими, витамины и другие группы, которые связываются с рецептором для витамина, переносчиком или другим представленным на поверхности белком, который специфично связывает витамины или их аналоги или производные, пептидные лиганды, идентифицированные посредством скрининга библиотеки, специфичные в отношении опухолевых клеток пептиды, специфичные в отношении опухолевых клеток аптамеры, специфичные в отношении опухолевых клеток углеводы, специфичные в отношении опухолевых клеток моноклональные или поликлональные антитела. Fab или scFv (т.е. одноцепочечный вариабельный участок) фрагменты антител, например, такие как Fab-фрагмент антитела, направленный против EphA2 или других белков, специфично экспрессируемых или доступных только на метастазирующих злокачественных клетках, низкомолекулярные органические молекулы, образованные из комбинаторных библиотек, факторы роста, такие как EGF, FGF, инсулин и инсулинподобные факторы роста, и гомологичные полипептиды, соматостатин и его аналоги, трансферрин, комплексы липопротеинов, соли желчных кислот, селектины, стероидные гормоны, содержащие Arg-Gly-Asp пептиды, ретиноиды, различные галектины, лиганды δ-опиодиных рецепторов, лиганды рецептора для холицистокинина А, лиганды, специфичные для рецепторов для ангиотензина AT1 или АТ2, лиганды для пероксисомных пролифератор-активируемых рецепторов λ, β-лактамные антибиотики, такие как пенициллин, низкомолекулярные органические молекулы, включающие противомикробные лекарственные средства, и другие молекулы, которые специфично связываются с рецептором, предпочтительно экспрессируемым на поверхности опухолевых клеток или на инфекционном организме, противомикробные и другие лекарственные средства, разработанные для встраивания в связывающий карман конкретного рецептора, на основе кристаллической структуры рецептора или другого белка клеточной поверхности, лиганды опухолевых антигенов или другие молекулы, предпочтительно экспрессируемые на поверхности опухолевых клеток, или фрагменты любой из этих молекул.
Опухолеспецифические антигены, которые могут функционировать в качестве участка для связывания для конъюгатов лиганд-лекарственное средство, включают внеклеточные эпитопы членов семейства белков эфринов, таких как EphA2. Экспрессия EphA2 в нормальных клетках ограничена областями соединения клеток, однако в метастазирующих опухолевых клетках EphA2 распределен по всей поверхности клеток. Таким образом, EphA2 на метастазирующих клетках может быть доступным для связывания, например, с Fab-фрагментом антитела, конъюгированным с лекарственным средством, или его аналогом или производным, в то время как на нормальных клетках белок не является доступным для связывания с Fab-фрагментом, что приводит к тому, что конъюгат лиганд-лекарственное средство является специфичным в отношении метастазирующих злокачественных клеток.
Лекарственные средства и их различные аналоги и производные, описанные в настоящем описании, главным образом, представляют собой лекарственные средства для устранения, уничтожения, препятствования росту и/или снижения роста популяции патогенных клеток, включающих инфекционных агентов, злокачественные опухоли, опухоли и т.п. Кроме того, лекарственные средства и их различные аналоги и производные, пригодные в конъюгатах, описанных в настоящем описании, могут обладать широким множеством механизмов действия, включая, но не ограничиваясь ими, алкилирующие средства, ингибиторы микротрубочек, включающие ингибиторы, которые стабилизируют и/или дестабилизируют образование микротрубочек, включая средства на основе бета-тубулина, ингибиторы циклинзависимых киназ (CDK), такие как CDKN1a, CDKN1b и т.п., ингибиторы топоизомеразы, ингибиторы белкового синтеза, ингибиторы протеинкиназ, включающие ингибиторы Ras, Raf, РКС, PI3K и т.п., ингибиторы транскрипции, антифолаты, блокаторы белков теплового шока и т.п.
В другом варианте осуществления описана фармацевтическая композиция. Фармацевтическая композиция содержит конъюгат для доставки лекарственного средства, описанный в настоящем описании, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем и/или разбавителем для него.
В другом варианте осуществления описан способ устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине. В одном иллюстративном аспекте члены патогенной клеточной популяции обладают доступным участком для связывания связывающей рецептор группы или ее аналога или производного, и этот участок связывания экспрессируется только патогенными клетками, сверхэкспрессируется или предпочтительно экспрессируется ими. Способ включает стадию введения хозяину конъюгата для доставки лекарственного средства, описанного в настоящем описании, или его фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
На ФИГ.1А представлена относительная аффинность связывания соединения примера 9 (■, 0,24) относительно фолиевой кислоты (●, 1,0) с рецептором фолиевой кислоты.
На ФИГ.1В представлена активность соединения примера 9 в отношении включения 3H-тимидина в клетки KB при избытке фолиевой кислоты (о) и без него (●); IC50 соединения примера 2 составляет приблизительно 58 нМ.
На ФИГ.2 представлена относительная аффинность связывания соединения примера 11 (■, 0,21) относительно фолиевой кислоты (●, 1,0) с рецепторами фолиевой кислоты.
На ФИГ.3 представлена активность соединения примера 11 (конъюгат с несколькими лекарственными средствами) в отношении включения 3H-тимидина при избытке фолиевой кислоты (о) и без него (●); IC50 соединения примера 11=5 нМ.
На ФИГ.4 представлена цитотоксическая активность соединения примера 11 in vitro (а) в отношении трех различных опухолевых клеточных линий (KB, 4T-1c12 и ID8-C115) по сравнению с соединением примера 11+ избыток фолиевой кислоты (b).
На ФИГ.5А представлена активность соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW (6 доз) (●) и 2 мкмоль/кг TIW (6 доз) (▼) в отношении FR-положительных опухолей М109 у мышей Balb/c относительно контролей без введения (■).
На ФИГ.5В представлено отсутствие эффекта соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW (6 доз) (●) и 2 мкмоль/кг TIW (6 доз) (▼) на массу мышей Balb/c относительно контролей без введения (■).
На ФИГ.6 представлена активность соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель (6 доз) на FR-положительные опухоли KB с 40 мкмоль/кг ЕС20 (комплекс рения) (□) и без него (■) относительно контролей без введения (●); соединение примера II отдельно показало 5/5 полных ответов; соединение примера 11+ЕС20 показали 0/5 полных ответов.
На ФИГ.7 представлено отсутствие эффекта соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель (6 доз) на массу мышей nu/nu с 40 мкмоль/кг ЕС20 (комплекс рения) (D) и без него (■) относительно контролей без введения (●).
На ФИГ.8 представлена активность соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель (6 доз) в отношении подкожных ксенотрансплантатов опухолей KB человека, имплантированных мышам nude с 40 мкмоль/кг ЕС20 (комплекс рения) (b) и без него (с) относительно контролей без введения (а); соединение примера 11 отдельно показало 5/5 полных ответов; соединение примера 11+ЕС20 показали 0/5 полных ответов.
На ФИГ.9 представлено отсутствие эффекта соединения примера 11 при 1 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель (6 доз) на массу мышей nude с 40 мкмоль/кг ЕС20 (комплекс рения) (b) и без него (с) относительно контролей без введения (а).
На ФИГ.10 представлена активность соединения примера 11 при 2 мкмоль/кг TIW (е) на положительные в отношении рецептора для фолата опухоли человека у мышей nude по сравнению со смесью неконъюгированных основных лекарственных средств, митомицином С и дезацетилвинбластином моногидразидом при 0,5 мкмоль/кг TIW (b), 1 мкмоль/кг TIW (с) и 2 мкмоль/кг TIW (d) и по сравнению с контролями без введения (а).
На ФИГ.11 представлено отсутствие эффекта соединения примера 11 при 2 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель (е) на массу мышей nude по сравнению с контролями (а). Снижение массы происходило при всех трех дозах смеси неконъюгированных основных лекарственных средств, митомицина С и дезацетилвинбластина моногидразида (0,5 мкмоль/кг TIW (b), 1 мкмоль/кг TIW (с), 2 мкмоль/кг TIW (d)). Введение высокой дозы (d) прекратили ранее 20 суток.
На ФИГ.12 представлена активность соединения примера 11 в отношении крупных опухолей KB трех размеров, 250 мм3 (b), 500 мм3 (с) и 750 мм3 (d) у мышей nu/nu при 2 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель по сравнению с контролями (а).
На ФИГ.13 представлена активность соединения примера 11 (е) по сравнению с конъюгатами только одного лекарственного средства митомицина С (b), дезацетилвинбластина моногидразида (с) или смеси этих двух конъюгатов с одним лекарственным средством (d) по сравнению с контролями (а).
На ФИГ.14 представлено отсутствие активности соединения примера 11 (b) при введении 2 мкмоль/кг TIW в течение двух недель в отношении отрицательных по рецептору для фолата опухолей 4Т1 у мышей Ваblb/с по сравнению с контролями (а). Данные на ФИГ.14 показывают, что соединение примера 11 (b) не обладает никаким эффектом на опухоли по сравнению с контролями (а) вследствие отсутствия рецепторов для фолата на этих опухолях.
На ФИГ.15 представлена активность соединения примера 12 в отношении включения 3H-тимидина в FR-положительные клетки КВ.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
В настоящем описании описаны конъюгаты лиганда с лекарственными средствами, и их аналогами и производными. Конъюгаты включают связывающие клеточный рецептор лиганды, включая лиганды для рецепторов клеточной поверхности, которые ковалентно присоединены к двум или более лекарственным средствам, которые могут быть нацелены на клетки, включая патогенные клетки. Конъюгаты, описанные в настоящем описании, также могут включать поливалентный линкер для присоединения лигандов к лекарственным средствам.
Описаны связывающие рецептор конъюгаты для доставки лекарственного средства, содержащие связывающую рецептор группу (В), поливалентный линкер (L) и два или более лекарственных средств, или аналогов лекарственных средств, или производных лекарственных средств, (D)n, где n больше или равно 2. В конъюгатах для доставки, описанных в настоящем описании, каждый из связывающей рецептор группы (В) и двух или более лекарственных средств (D)n связаны с поливалентным линкером (L) через независимо выбранный линкер с гетероатомом (lн). Поливалентный линкер (L) содержит один или несколько спейсерных линкеров, линкеров с гетероатомом и высвобождаемых линкеров и их сочетания в любом порядке.
В одном варианте осуществления описан связывающий рецептор конъюгат для доставки лекарственного средства. Конъюгат для доставки лекарственного средства содержит лиганд, такой как лиганд для рецептора клеточной поверхности, два или более лекарственных средств или их аналогов или производных и необязательно поливалентный линкер, который, главным образом, может быть представлен формулой
(B)-(L)-(D)n
где (В) представляет собой связывающую рецептор группу; (D) представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное, подлежащее нацеливанию на клетку посредством связывающей рецептор группы; (L) представляет собой поливалентный линкер и n представляет собой целое число, большее 1. Поливалентный линкер (L) может содержать несколько линкеров, ковалентно связанных друг с другом. Например, поливалентный линкер (L) может содержать один или несколько спейсерных линкеров (lS) и/или высвобождаемых линкеров (lr), где все они соединены другим с другом и с лигандом и лекарственном средством посредством одного или нескольких линкеров с гетероатомом (lH). Для конструирования поливалентного линкера (L) эти различные линкеры можно выбирать и располагать в любом порядке.
В качестве иллюстративного примера поливалентный линкер (L) может быть сконструирован из одного или нескольких из следующих двухвалентных линкеров:
Figure 00000006
Figure 00000007
где а, b, с, d и е представляют собой целые числа, такие как числа из диапазона от 0 до приблизительно 4, и (lS), (lн) и (lr) представляют собой спейсерные линкеры, высвобождаемые линкеры, линкеры с гетероатомом соответственно. Дополнительные иллюстративные примеры двухвалентных линкеров, которые можно использовать для конструирования поливалентных линкеров, описанных в настоящем описании, описаны в патентной заявке США с серийным № 10/765336 (также встречающейся как публикация патентной заявки США № US 2005/0002942 А1) и в международной публикации РСТ № WO 2006/012527, описание которых включено в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме.
Следует понимать, что поливалентные линкеры могут соединять связывающую рецептор группу с двумя или более лекарственными средствами в виде разнообразных структурных конфигураций, включая, но не ограничиваясь ими, следующие иллюстративные общие формулы:
Figure 00000008
где В представляет собой связывающий рецептор лиганд, каждый из (L1), (L2) и (L3) представляет собой поливалентный линкер, сконструированный из одного или нескольких спейсерных линкеров, высвобождаемых линкеров и/или линкеров с гетероатомами, и каждый из (D1), D2 и D3 представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное. Также в настоящем описании рассматривают другие варианты, включая дополнительные лекарственные средства или их аналоги или производные, дополнительные линкеры и дополнительные конфигурации по расположению каждого из (В), (L) и (D).
В одном варианте в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, включено более одного связывающего рецептор лиганда, включая, но не ограничиваясь ими, следующие иллюстративные общие формулы:
Figure 00000009
где каждый В представляет собой связывающий рецептор лиганд, каждый из (L1), (L2) и (L3) представляет собой поливалентный линкер, сконструированный из одного или нескольких спейсерных линкеров, высвобождаемых линкеров и/или линкеров с гетероатомами, и каждый из (D1), D2 и D3 представляет собой лекарственное средство или его аналог или производное. Также в настоящем описании рассмотрены другие варианты, включающие дополнительные лекарственные средства или их аналоги или производные, дополнительные линкеры и дополнительные конфигурации по расположению каждого из (В), (L) и (D). В одном варианте связывающие рецептор лиганды представляют собой лиганды для одного и того же рецептора, и в другом варианте связывающие рецептор лиганды представляют собой лиганды для различных рецепторов. Понятно, и как показано выше в формулах, что в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, может быть включено более одного поливалентного линкера. Понятно, что в одном аспекте количество линкеров выбирают в зависимости от конфигурации связывающих рецептор лигандов и лекарственных средств.
Например, в одном иллюстративном варианте осуществления способа, посредством которого ковалентно связывают линкеры для образования поливалентного линкера, или части поливалентного линкера, линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры соединяют с образованием поливалентной группы формулы:
Figure 00000010
где формула также может быть изображена как
Figure 00000011
где (ls)1 представляет собой трипептид Asp-Asp-Asp, (lS)2  представляет собой Cys, (lr)1 представляет собой S-S, (lS)3 представляет собой СН2СН2, (lн)1 представляет собой О, (lr)2 представляет собой C(O)NHNH, (lS)4 представляет собой o-Lys, (lS)5 представляет собой С(O)СН2СН2, (lr)3 представляет собой S-S и (lS)6 представляет собой CH2CH2.
Лиганды для рецепторов клеточной поверхности, пригодные для описанных в настоящем описании конъюгатов, включают, но не ограничиваются ими, витамины и другие группы, которые связываются с рецептором для витамина, переносчиком или другим представленным на поверхности белком, который специфично связывает витамины или их аналоги или производные, пептидные лиганды, идентифицированные посредством скрининга библиотек, специфичные в отношении опухолевых клеток пептиды, специфичные в отношении опухолевых клеток аптамеры, специфичные в отношении опухолевых клеток углеводы, специфичные в отношении опухолевых клеток моноклональные или поликлональные антитела, фрагменты антител Fab или scFv (т.е. одноцепочечный вариабельный участок) например, такой как Fab-фрагмент антитела, направленного на ЕрhА2 или другие белки, специфично экспрессируемые или имеющиеся только на метастазирующих злокачественных клетках, низкомолекулярные органические молекулы, образованные из комбинаторных библиотек, факторы роста, такие как EGF, FGF, инсулин и инсулиноподобные факторы роста, и гомологичные полипептиды, соматостатин и его аналоги, трансферрин, комплексы липопротеинов, соли желчных кислот, селектины, стероидные гормоны, содержащие пептиды Arg-Gly-Asp, ретиноиды, различные галектины, лиганды δ-опиодного рецептора, лиганды рецептора для холицистокинина А, лиганды, специфичные для рецепторов для ангиотензина AT1 или АТ2, лиганды для пероксисомных пролифератор-активируемых рецепторов λ, β-лактамные антибиотики, такие как пенициллин, низкомолекулярные органические молекулы, включающие противомикробные лекарственные средства, и другие молекулы, которые специфично связываются с рецептором, предпочтительно экспрессируемым на поверхности опухолевых клеток или на инфекционном организме, противомикробные и другие лекарственные средства, разработанные для встраивания в связывающий карман конкретного рецептора, на основе кристаллической структуры рецептора или другого белка клеточной поверхности, лиганды опухолевых антигенов или другие молекулы, предпочтительно экспрессируемые на поверхности опухолевых клеток, или фрагменты любой из этих молекул. Пример опухолеспецифического антигена, который может функционировать в качестве участка для связывания для конъюгатов лиганд-лекарственное средство, включает внеклеточные эпитопы члена семейства белков эфринов, такого как EphA2. Экспрессия EphA2 в нормальных клетках ограничена областями соединения клеток, однако EphA2 распределен по всей поверхности клеток в метастазирующих опухолевых клетках. Таким образом, EphA2 на метастазирующих клетках может быть доступным для связывания, например, с Fab-фрагментом антитела, конъюгированным с лекарственным средством или его аналогом или производным, в то время как белок не является доступным для связывания с Fab-фрагментом на нормальных клетках, что приводит к тому, что конъюгат лиганд-лекарственное средство является специфичным в отношении метастазирующих злокачественных клеток.
В одном варианте осуществления связывающая рецептор группа представляет собой витамин или связывающий рецептор для витамина его аналог или производное, такой как витамины и их аналоги и производные, которые способны связывать рецепторы для витаминов.
Витамины, которые можно использовать в соответствии со способами и соединениями, описанными в настоящем описании, включают карнитин, инозитол, липоевую кислоту, пиридоксаль, аскорбиновую кислоту, ниацин, пантотеновую кислоту, фолиевую кислоту, рибофлавин, тиамин, биотин, витамин В12, витамины A, D, Е и K, другие сходные молекулы витаминов, их аналоги и производные и их сочетания. Эти витамины и их связывающие рецептор аналоги и производные представляют собой иллюстративные группы для нацеливания, которые можно присоединять к соединениям лекарственного средства или их аналогам или производным, посредством поливалентных линкеров (L), описанных в настоящем описании, для получения конъюгатов для доставки лекарственного средства.
В одном иллюстративном аспекте витамин может представлять собой фолиевую кислоту, аналог фолиевой кислоты или другую связывающую рецептор для фолата молекулу. Иллюстративные примеры аналогов фолата, которые можно использовать, включают фолиновую кислоту, птероилполиглутаминовую кислоту, птероевую кислоту и другие их аминокислотные производные и связывающие рецептор для фолата птеридины, такие как тетрагидроптерины, дигидрофолаты, тетрагидрофолаты, и их деаза- и дидеаза-аналоги. Термины "деаза"- и "дидеаза"-аналоги относится к известным в данной области аналогам, имеющим атом углерода, замещенный одним или двумя атомами азота во встречающейся в природе структуре фолиевой кислоты. Например, деаза-аналоги включают 1-деаза-, 3-деаза-, 5-деаза-, 8-деаза- и 10-деаза-аналоги. Дидеаза-аналоги включают, например, 1,5-дидеаза-, 5,10-дидеаза-, 8,10-дидеаза- и 5,8-дидеаза-аналоги. Указанные выше аналоги фолиевой кислоты обычно называют "фолатами", что отражает их способность связываться с рецепторами для фолата. Другие связывающие рецептор для фолата аналоги включают аминоптерин, аметоптерин (метотрексат), N10-метилфолат, 2-дезаминогидроксифолат, деаза-аналоги, такие как 1-деазаметоптерин или 3-деазаметоптерин и 3',5'-дихлор-4-амино-4-дезокси-N10-метилптероилглутаминовая кислота (дихлорметотрексат). Другие пригодные лиганды, способные связываться с рецепторами для фолата для запуска опосредуемого рецептором эндоцитозного транспорта конъюгата для доставки лекарственного средства, включают антитела к рецептору для фолата. Таким образом, в одном иллюстративном аспекте для запуска трансмембранного транспорта комплекса можно использовать соединение барвинка в комплексе с антителом к рецептору для фолата.
Иллюстративные варианты осуществления аналогов и/или производных витаминов также включают аналоги и производные биотина, такие как биоцитин, биотина сульфоксид, оксибиотин и другие связывающие рецептор для биотина соединения и т.п. Понятно, что также в настоящем описании рассматривают аналоги и производные других витаминов, описанных в настоящем описании.
В настоящем описании рассматривают любую форму описанных конъюгатов, и она определяется тем, каким образом соединены лекарственные средства, связывающая рецептор группа и различные поливалентные линкеры. В одном аспекте общая трехмерная форма описанных в настоящем описании конъюгатов является линейной. В другом аспекте общая трехмерная форма описанных в настоящем описании конъюгатов представляет собой форму "Y" или "Т". В другом аспекте общая форма описанных в настоящем описании конъюгатов представляют собой форму "X" или форму креста.
В одном иллюстративном варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, поливалентный линкер включает по меньшей мере один высвобождаемый линкер (lr). В другом иллюстративном варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, поливалентный линкер включает по меньшей мере два высвобождаемых линкера (lr)2. В другом иллюстративном аспекте поливалентный линкер (L) включает по меньшей мере один высвобождаемый линкер (lr), который представляет собой не дисульфидный высвобождаемый линкер. В другом иллюстративном аспекте поливалентный линкер (L) обладает по меньшей мере двумя высвобождаемыми линкерами (lr)2, где один высвобождаемый линкер представляет собой не дисульфидный высвобождаемый линкер. Понятно, что, когда в поливалентный линкер включено более одного высвобождаемого линкера, эти высвобождаемые линкеры могут быть соседними. Далее, понятно, что, когда два высвобождаемых линкера являются соседними в поливалентном линкере, два высвобождаемых линкера могут совместно обеспечивать высвобождение лекарственного средства. Как используют в настоящем описании, термин "высвобождаемый линкер" и также известный как "расщепляемый линкер" относится к линкеру, который включает по меньшей мере одну связь, которая может разрушаться в физиологических условиях (например, рН-лабильную, неустойчивую к кислотам, неустойчивую к окислению или неустойчивую к ферментам связь). Следует понимать, что такие физиологические условия, приводящие к разрушению связи, включают стандартные реакции химического гидролиза, которые проходят, например, при физиологических значениях рН или в результате компартментализации в клеточной органелле, такой как эндосома, имеющей более низкие значения рН, чем цитозольные значения рН.
Понятно, что расщепляемая связь может соединять два соседних атома в высвобождаемом линкере, и/или она может соединять другие линкеры или (В) и/или (D), как описано в настоящем описании, на любом или обоих концах высвобождаемого линкера. В случае когда расщепляемая связь соединяет два соседних атома в высвобождаемом линкере, после разрушения связи высвобождаемый линкер разделяется на два или более фрагментов. Альтернативно в случае, если расщепляемая связь расположена между высвобождаемым линкером и другой группой, такой как линкер с гетероатомом, спейсерный линкер, другой высвобождаемый линкер, лекарственное средство или его аналог или производное или витамин или его аналог или производное, то после разрушения связи высвобождаемый линкер отделяется от другой группы.
Лабильность расщепляемой связи можно корректировать, например, посредством замещения в расщепляемой связи или рядом с ней, такого как включение альфа-ветвления рядом с расщепляемой дисульфидной связью, повышение гидрофобности заместителей на оксиде кремния в группе, имеющей связь оксид кремния-кислород, которая может быть гидролизована, получение гомологов алкоксигрупп, которые могут образовывать часть кеталя или ацеталя, которая может быть гидролизована и т.п.
Иллюстративные механизмы для расщепления двухвалентных линкеров, описанных в настоящем описании, включают следующие механизмы 1,4- и 1,6-фрагментации
Figure 00000012
где Х представляет собой экзогенный или эндогенный нуклеофил, глутатион или биологический восстановитель и т.п. и каждый из Z или Z' представляет собой витамин или его аналог или производное, или лекарственное средство или его аналог или производное, или группу витамина или лекарственного средства, соединенную с другой частью поливалентного линкера. Следует понимать, что, несмотря на то что указанные выше механизмы фрагментации изображены в качестве согласованных механизмов, для достижения окончательной фрагментации поливалентного линкера до представленных конечных продуктов может быть проведено любое количество отдельных стадий. Например, следует понимать, что расщепление связи также может происходить посредством катализируемого кислотой удаления группы карбамата, которому может анхимерно способствовать стабилизация, обеспечиваемая либо арильной группой бета-серы, либо дисульфидом, иллюстрированными в представленных выше примерах. В таких вариантах этого варианта осуществления высвобождаемый линкер представляет собой группу карбамата. Альтернативно фрагментация может быть запущена нуклеофильной атакой на дисульфидную группу, вызывающей расщепление с образованием тиолята. Тиолят может внутримолекулярно вытеснять группу угольной кислоты или карбаминовой кислоты и образовывать соответствующий тиациклопропан. В случае содержащих бензил поливалентных линкеров после иллюстративного расщепления дисульфидной связи полученный фенилтиолят далее может быть фрагментирован с высвобождением группы угольной кислоты или карбаминовой кислоты посредством образования промежуточного соединения со стабилизированным резонансом. В любом из этих случаев высвобождаемый характер иллюстративных поливалентных линкеров, описанных в настоящем описании, может быть реализован любым механизмом, который может быть связан с имеющимися химическими, метаболическими, физиологическими или биологическими условиями.
Другие иллюстративные механизмы для расщепления связи высвобождаемого линкера включают расщепление при помощи оксония следующим образом:
Figure 00000013
где Z представляет собой витамин или его аналог или производное или лекарственное средство или его аналог или производное или каждый из них представляет собой группу витамина или лекарственного средства совместно с другими частями поливалентного линкера, такую как группа лекарственного средства или витамина, включающая один или несколько спейсерных линкеров, линкеров с гетероатомом и/или других высвобождаемых линкеров. В этом варианте осуществления катализируемое кислотой удаление карбамата приводит к высвобождению СО2 и содержащей азот группы, присоединенной к Z, и образованию катиона бензила, который может улавливаться водой, или любого другого основания Льюиса.
Другой иллюстративный механизм включает расположение высвобождаемого линкера, спейсерного линкера и линкера с гетероатомом таким образом, чтобы после расщепления связи в поливалентном линкере высвобождаемые функциональные группы химически способствовали разрушению или расщеплению дополнительных связей, также называемому расщеплением или разрушением при помощи анхимерного эффекта. Иллюстративный вариант осуществления такого поливалентного линкера или его части включает соединения формулы:
Figure 00000014
где Х представляет собой гетероатом, такой как азот, кислород или сера, n представляет собой целое число, выбранное из 0, 1, 2 и 3, R представляет собой водород или заместитель, включающий заместитель, способный стабилизировать положительный заряд индуктивно или посредством резонанса на арильном кольце, такой как алкокси и т.п., и каждый из Z или Z' представляет собой витамин или его аналог или производное, или лекарственное средство или его аналог или производное, или группу витамина или лекарственного средства совместно с другими частями поливалентного линкера. Понятно, что на арильном кольце, углероде бензила, азоте карбамата, алкановой кислоте или метиленовом мостике могут быть представлены другие заместители, включая, но не ограничиваясь ими, гидрокси, алкил, алкокси, алкилтио, галоген и т.п. Расщепление под воздействием может включать механизмы, вовлекающие промежуточные соединения бензилия, промежуточные соединения бензина, циклизацию лактона, промежуточные соединения оксония, бета-отщепление и т.п. Далее, понятно, что в дополнение к фрагментации после расщепления высвобождаемого линкера первоначальное расщепление высвобождаемого линкера можно облегчать посредством вспомогательного анхимерного механизма.
В этом варианте осуществления гидроксиалкановая кислота, которая может осуществлять циклизацию, способствует расщеплению метиленового мостика, например, посредством иона оксония и способствует расщеплению связи или последующей фрагментации после расщепления связи высвобождаемого линкера. Альтернативно катализируемое кислотой расщепление метиленового мостика при помощи иона оксония может запускать каскад фрагментации этого иллюстративного поливалентного линкера или его фрагмента. Альтернативно, катализируемый кислотой гидролиз карбамата может способствовать бета-отщеплению гидроксиалкановой кислоты, которая может осуществлять циклизацию, и способствовать расщеплению метиленового мостика, например, посредством иона оксония. Понятно, что такой каскад фрагментации могут запускать другие химические механизмы разрушения или расщепления связи в метаболических, физиологических или клеточных условиях, описанные в настоящем описании.
В одном варианте осуществления поливалентные линкеры, описанные в настоящем описании, представляют собой соединения следующей формулы
Figure 00000015
где n представляет собой целое число, выбранное от 1 до приблизительно 4; каждый Ra и Rb независимо выбран из группы, состоящей из водорода и алкила, включая низший алкил, такой как С1-С4-алкил, который является необязательно разветвленным; или R8 и R13 совместно с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют карбоциклическое кольцо; R представляет собой необязательно замещенную алкильную группу, необязательно замещенную ацильную группу или пригодную выбранную защитную группу азота; и (*) указывает на положения для присоединения лекарственного средства, витамина, радиофармацевтического средства, диагностического средства, других поливалентных линкеров или других частей конъюгата.
В другом варианте осуществления поливалентные линкеры, описанные в настоящем описании, включают соединения следующих формул
Figure 00000016
где m представляет собой целое число, выбранное от 1 до приблизительно 4; R представляет собой необязательно замещенную алкильную группу, необязательно замещенную ацильную группу или пригодную выбранную защитную группу азота; и (*) указывает на положение для присоединения лекарственного средства, витамина, радиофармацевтического средства, диагностического средства, других поливалентных линкеров или других частей конъюгата.
В другом варианте осуществления поливалентные линкеры, описанные в настоящем описании, включают соединения следующих формул
Figure 00000017
где m представляет собой целое число, выбранное от 1 до приблизительно 4; R представляет собой необязательно замещенную алкильную группу, необязательно замещенную ацильную группу или пригодную выбранную защитную группу азота; и (*) указывает на положения для присоединения лекарственного средства, витамина, радиофармацевтического средства, диагностического средства, других поливалентных линкеров или других частей конъюгата.
В другом варианте осуществления высвобождаемый линкер, спейсерный линкер и линкер с гетероатомом может быть расположен таким образом, чтобы после расщепления связи в поливалентном линкере высвобождаемые функциональные группы химически способствовали разрушению или расщеплению дополнительных связей, также называемому разрушением или расщеплением при помощи анхимерного эффекта. Иллюстративный вариант осуществления такого поливалентного линкера или его части включает соединения формулы:
Figure 00000018
где Х представляет собой гетероатом, такой как азот, кислород или сера, n представляет собой целое число, выбранное из 0, 1, 2 и 3, R представляет собой водород или заместитель, включающий заместитель, способный стабилизировать положительный заряд индуктивно или посредством резонанса на арильном кольце, такой как алкокси и т.п., и символом (*) показаны положения для присоединения дополнительного спейсерного линкера, линкера с гетероатомом или высвобождаемого линкера, образующих поливалентный линкер, или альтернативно для присоединения лекарственного средства или его аналога или производного или витамина или его аналога или производного. Понятно, что на арильном кольце, углероде бензила, алкановой кислоте или метиленовом мостике могут быть представлены другие заместители, включая, но не ограничиваясь ими, гидрокси, алкил, алкокси, алкилтио, галоген и т.п. Расщепление под воздействием может включать механизмы, вовлекающие промежуточные соединения бензилия, промежуточные соединения бензина, циклизацию лактона, промежуточные соединения оксония, бета-отщепление и т.п. Далее, понятно, что в дополнение к фрагментации после расщепления высвобождаемого линкера первоначальное расщепление высвобождаемого линкера можно облегчать посредством вспомогательного анхимерного механизма.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливолентной группы 3-тиосукцинимид-1-илалкилоксиметилокси, иллюстрируемой следующей формулой
Figure 00000019
где n представляет собой целое число от 1 до 6, алкильная группа является необязательно замещенной и метил необязательно замещен дополнительным алкилом или необязательно замещен арильной группой, каждый из которых представлен независимо выбранной группой R. Символами (*) указаны положения для присоединения фрагмента поливалентного линкера к другим частям конъюгатов, описанных в настоящем описании.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 3-тиосукцинимид-1-илалкилкарбонила, иллюстрируемой следующей формулой
Figure 00000020
где n представляет собой целое число от 1 до 6 и алкильная группа является необязательно замещенной. Символами (*) указаны положения для присоединения фрагмента поливалентного линкера к другим частям конъюгатов, описанных в настоящем описании. В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 3-тиоалкилсульфонилалкил(дизамещенный силил)окси, где дизамещенный силил замещен алкилом и/или необязательно замещен арильными группами.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы дитиоалкилкарбонилгидразида или поливалентной группы 3-тиосукцинимид-1-илалкилкарбонилгидразида, иллюстрируемыми следующими формулами
Figure 00000021
где n представляет собой целое число от 1 до 6, алкильная группа является необязательно замещенной и гидразид образует гидразон с (В), (D) или другой частью поливалентного линкера (L). Символами (*) указаны положения для присоединения фрагмента поливалентного линкера к другим частям конъюгатов, описанных в настоящем описании.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 3-тиосукцинимид-1-илалкилоксиалкилоксиалкилидена, иллюстрируемой следующей формулой
Figure 00000022
где каждый n представляет собой независимо выбранное целое число от 1 до 6, каждая алкильная группа является независимо выбранной и необязательно замещена, например, алкилом или представляет собой необязательно замещенный арил и где алкилиден образует гидразон с (В), (D) или другой частью поливалентного линкера (L). Символами (*) указаны положения для присоединения фрагмента поливалентного линкера к другим частям конъюгатов, описанных в настоящем описании.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 3-тио- или 3-дитиоарилалкилоксикарбонила, группы 3-тио- или 3-дитиоарилалкиламинокарбонила, поливалентного 3-тио- или 3-дитиоалкилоксикарбонила или поливалентного 3-тио- или 3-дитиоалкиламинокарбонила, где алкилкарбонил образует карбонат, карбамат или мочевину с (В), (D) или другой частью поливалентного линкера (L). В качестве иллюстративного примера алкильная группа представляет собой этил.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 3-дитиоалкиламино, где амино образует винилогический амид с (В), (D) или с другой частью поливалентного линкера (L). В качестве иллюстративного примера алкильная группа представляет собой этил.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает линкеры с гетероатомом, спейсерные линкеры и высвобождаемые линкеры, соединенные с образованием поливалентной группы 1-алкоксициклоалкиленокси, поливалентной группы алкиленаминокарбонил(дикарбоксиларилен)карбоксилата, поливалентной группы 3-дитиоалкилоксикарбонила, поливалентной группы 3-дитиоалкилоксикарбонилгидразида, поливалентной.
В другом варианте осуществления поливалентный линкер включает по меньшей мере один спейсерный линкер, который представляет собой пептид, образованный из аминокислот. В одном аспекте пептид включает встречающиеся в природе аминокислоты и их стереоизомеры. В другом аспекте пептид образован только из встречающихся в природе аминокислот и их стереоизомеров.
Дополнительные иллюстративные примеры спейсерных и высвобождаемых линкеров представлены в таблицах 1 и 2, где (*) указывает на положение для присоединения другого линкера, алкалоида барвинка или его аналога или производного или связывающей рецептор группы.
Таблица 1
Рассматриваемые спейсерные линкеры и линкеры с гетероатомами и их сочетания
Figure 00000023
Figure 00000024
Таблица 2
Рассматриваемые высвобождаемые линкеры и линкеры с гетероатомами и их сочетания
Figure 00000025
В конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, может быть включено лекарственное средство любого типа. В одном иллюстративном варианте осуществления лекарственные средства выбирают исходя из активности в отношении одной или нескольких популяций патогенных клеток. В одном аспекте эти патогенные клетки представляют собой клетки злокачественной опухоли, включая солидные опухоли.
В другом иллюстративном варианте осуществления выбирают лекарственные средства исходя из активности в отношении одной или нескольких популяций патогенных клеток с конкретным механизмом действия. Иллюстративные механизмы действия включают алкилирующие средства, ингибиторы микротрубочек, включая ингибиторы, которые стабилизируют и/или дестабилизируют образование микротрубочек, включая средства на основе бета-тубулина, ингибиторы циклинзависимых киназ (CDK), ингибиторы топоизомеразы, ингибиторы белкового синтеза, ингибиторы протеинкиназ, включая Ras, Raf, PKC, PI3K, и сходные ингибиторы, ингибиторы транскрипции, антифолаты, блокаторы теплового шока и т.п.
Иллюстративные алкилирующие средства включают, но не ограничиваются ими, митомицины CBI и т.п. Иллюстративные ингибиторы циклинзависимых киназ (CDK) включают, но не ограничиваются ими, CYC202, селициклиб, R-росковитин, AGM-1470, и т.п. Иллюстративные ингибиторы топоизомеразы включают, но не ограничиваются ими, доксорубицин, другие антрациклины и т.п. Иллюстративные ингибиторы белкового синтеза включают, но не ограничиваются ими, бруцеантин и т.п. Иллюстративные ингибиторы протеинкиназ, включающие ингибиторы Ras, Raf, PKC, PI3K и т.п., включают, но не ограничиваются ими, L-779,450, R115777 и т.п. Иллюстративные ингибиторы транскрипции включают, но не ограничиваются ими, α-амантин, актиномицин и т.п. Иллюстративные антифолаты включают, но не ограничиваются ими, метотрексат и т.п. Иллюстративные блокаторы теплового шока включают, но не ограничиваются ими, гелданамицин и т.п.
Иллюстративные ингибиторы микротрубочек, включающие ингибиторы, которые стабилизируют и/или дестабилизируют образование микротрубочек, включают средства на основе β-тубулина, токсичные для микротрубочек средства и т.п. Иллюстративные токсичные для микротрубочек средства, которые связываются с выбранными рецепторами, включают, но не ограничиваются ими, ингибиторы, связывающиеся с участком для связывания соединения барвинка, такие как аренастатин, доластатин, халихондрин B, майтанзин, фомопсин A, ризоксин, устилоксин, винбластин, винкристин и т.п., стабилизаторы, связывающиеся с участком для связывания таксола, такие как дискодермалид, эпотилон, таксол, паклитаксол и т.п., ингибиторы, связывающиеся с участком для связывания колхицина, такие как колхицин, комбретастатин, курацин A, подофиллотоксин, стеганацин и т.п., и другие средства, связывающиеся с неизвестными участками, такие как криптофицин, тубулизины и т.п.
В одном варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, по меньшей мере одно из лекарственных средств представляет собой ингибитор микротрубочек или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств представляет собой алкилирующее ДНК средство. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств представляет собой алкилирующее ДНК средство и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств представляет собой ингибитор микротрубочек. Алкалоиды, описанные в настоящем описании, включают все члены индол-дигидроиндолового семейства алкалоидов барвинка, таких как, но не ограничиваясь ими, виндезин, винбластин, винкристин, катарнитин, виндолин, леурозин, винорелбин, имидокарб, сибутамин, толтразурил, винбластиновая кислота и т.п., и их аналоги и производные.
В другом варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, по меньшей мере одно из лекарственных средств представляет собой ингибитор P-гликопротеина (PGP). В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор PGP, и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, представляет собой субстрат PGP. В качестве иллюстративного примера в этом последнем варианте осуществления субстрат PGP представляет собой алкилирующее ДНК средство. В отношении этого варианта осуществления понятно, что спаривание ингибитора PGP с субстратом PGP, таким как алкилирующее ДНК средство, включая, но не ограничиваясь ими, любой из митомицинов, такой как митомицин C, митомицин A и т.п., может улучшать общее действие лекарственного средства, которое иначе представляет собой субстрат PGP. В конъюгатах с высвобождением, описанных в настоящем описании, как лекарственное средство на основе ингибитора PGP, так и лекарственное средство на основе субстрата PGP высвобождаются в клетке после эндоцитоза. Таким образом, лекарственное средство на основе ингибитора PGP может повышать общую эффективность и/или активность лекарственного средства на основе субстрата PGP. Кроме того, ингибитор PGP может снижать экспрессию PGP, что, в свою очередь, снизит выход из патогенной клетки одного или нескольких лекарственных средств, включенных в конъюгаты с несколькими лекарственными средствами, описанные в настоящем описании. Понятно, что митомицины или их аналоги или производные, такие как митомицин C, могут действовать в качестве ингибитора PGP или отрицательного регулятора PGP. Далее, понятно, что алкалоид барвинка или его аналог или производное, такой как аналоги и производные винбластина, могут представлять собой субстрат PGP, который защищен от выхода из патогенной клетки посредством ингибитора или отрицательного регулятора PGP.
В другом варианте осуществления конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, по меньшей мере одно из лекарственных средств представляет собой алкалоид барвинка или его аналог или производное. Алкалоиды барвинка, описанные в настоящем описании, включают все члены индол-дигидроиндольного семейства алкалоидов барвинка, такие как, но не ограничиваясь ими, виндезин, винбластин, винкристин, катарантин, виндолин, леурозин, винорелбин, имидокарб, сибутрамин, толтразурил, винбластиновая кислота и т.п., и их аналоги и производные.
Как упомянуто в настоящем описании, лекарственные средства на основе барвинка, пригодные в конъюгатах, описанных в настоящем описании, включают все члены индол-дигидроиндольного семейства алкалоидов барвинка, такие как виндезин, винбластин, винкристин, катарантин, виндолин, леурозин, винорелбин, имидокарб, сибутрамин, толтразурил, винбластиновая кислота и т.п., и их аналоги и производные. В качестве иллюстративного примера такие аналоги и производные включают 3-карбоксазиды, описанные в патенте США № 4203898; N2-алкил- и другие производные 4-дезацетилвинбластин-3-карбоксигидразида, описанные в патенте США № 4166810; гидразид леурозина, описанный в Neuss et al. Tetrahedron Lett. 783 (1968); производные гидразида, описанные в Barnett et al. J. Med. Chem. 21:88 (1978); производные сложного эфира C-4, описанные в патентах США № 3392173 и 3387001; производные дикарбоновой кислоты, полученные посредством окисления, описанного в Langone et al. Anal. Biochem. 95:214 (1979); и гидразиды алкалоидов барвинка, описанные в EP 0247792 A2. Все упомянутые выше патенты и публикации включены в настоящее описание в качестве ссылок в отношении всех описаний способов синтеза и условий реакции для получения соединений барвинка.
В одном иллюстративном варианте осуществления лекарственные средства на основе алкалоидов барвинка представляют собой соединения формулы
Figure 00000026
где:
один из R1 и R2 представляет собой H, а другой представляет собой этил и R3 представляет собой H или R1 представляет собой этил;
R2 и R3 вместе образуют -O-;
каждый R4, R7 и R8 независимо выбран из H, алкила и ацила,
каждый R5 и R6 независимо выбран из алкила;
R9 представляет собой группу -NHNHR, где R представляет собой H, алкил или ацил;
R10 представляет собой H или ацил и
R11 представляет собой этил.
В одном аспекте лекарственные средства на основе алкалоидов барвинка представляют собой соединения указанной выше формулы, где каждый из R4 и R8 представляет собой H и каждый из R5, R6, R9 и R10 представляет собой метил.
В другом варианте осуществления описан связывающий рецептор конъюгат для доставки лекарственного средства, содержащий связывающую рецептор группу, поливалентный линкер (L), лекарственное средство на основе алкалоида барвинка или его аналог или производное и другое лекарственное средство или его аналог или производное, где каждый из связывающей рецептор группы, алкалоида барвинка и другого лекарственного средства связаны с поливалентным линкером (L) через линкер с гетероатомом (lн). Поливалентный линкер (L) содержит один или несколько спейсерных линкеров, линкеров с гетероатомом и высвобождаемых линкеров и их сочетание в любом порядке.
В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой акламицин или его аналог или производное. Возможно, акламицины и их аналоги и производные представляют собой субстраты для выкачивающего насоса для PGP. В одном аспекте по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой алкилирующее ДНК средство, такое как митомицин или его аналог или производное.
В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор синтеза ДНК или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор образования веретена деления или его аналог или производное. В одном аспекте по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор синтеза ДНК или его аналог или производное и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор образования веретена деления или его аналог или производное.
В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой стабилизатор микротрубочек или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор синтеза микротрубочек или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой дестабилизирующее микротрубочки средство или его аналог или производное.
В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой индуцирующее апоптоз средство или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой таксол или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой антифолат или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой метотрексат или его аналог или производное. В одном аспекте по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой антифолат или его аналог или производное, такой как метотрексат, и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой таксол или его аналог или производное.
В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой фолат или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор рецептора эпидермального фактора роста-2 человека (HER-2) или его аналог или производное. В другом варианте осуществления по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой меченное радиоактивной меткой химиотерапевтическое средство, такое как цисплатин и т.п. В одном аспекте по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой антифолат или его аналог или производное, такой как метотрексат, и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой фолат или его аналог или производное. В другом аспекте по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой таксол или его аналог или производное, и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор HER-2 или его аналог или производное. В другом аспекте по меньшей мере одно из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой таксол или его аналог или производное, по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой меченное радиоактивной меткой химиотерапевтическое средство, такое как цисплатин, и по меньшей мере одно другое из лекарственных средств, включенных в конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, представляет собой ингибитор HER-2 или его аналог или производное.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно получать общепринятыми способами синтеза. Способы синтеза выбирают в зависимости от выбора линкеров с гетероатомом и функциональных групп, представленных на спейсерных линкерах и высвобождаемых линкерах. Как правило, соответствующие реакции образования связей описаны в Richard С.Larock, "Comprehensive Organic Transformations, a guide to functional group preparations," VCH Publishers, Inc. New York (1989), и в Theodora E. Greene & Peter G.M. Wuts, "Protective Groups ion Organic Synthesis", 2d edition, John Wiley & Sons, Inc. New York (1991), описания которых включены в настоящее описание в качестве ссылок в полном объеме. Дополнительные способы синтеза и условия реакции описаны в публикации патентной заявки США № US 2005/0002942 A1.
В качестве иллюстративного примера конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно получать с использованием как линейных, так и конвергентных способов синтеза. Иллюстративные промежуточные соединения, пригодные в таких способах, включают промежуточные соединения, содержащие поливалентный линкер, который включает группу для присоединения на каждом конце, пригодную для ковалентного присоединения к связывающей рецептор группе или ее аналогу или производному и к алкалоиду барвинка или его аналогу или производному. Другие иллюстративные промежуточные соединения, пригодные в таких способах, включают промежуточные соединения, содержащие связывающую рецептор группу или ее аналог или производное, присоединенную к поливалентному линкеру, который включает группу для присоединения. Другие иллюстративные промежуточные соединения, пригодные в таких способах, включают промежуточные соединения, содержащие алкалоид барвинка или его аналог или производное, присоединенный к поливалентному линкеру, который включает группу для присоединения. В любом случае группа для присоединения может представлять собой нуклеофил, электрофил или их предшественника.
В одном иллюстративном варианте осуществления синтетических промежуточных соединений группа для присоединения представляет собой акцептор Михаэля и поливалентный линкер включает высвобождаемый линкер, имеющий формулу -C(O)NHN=, -NHC(O)NHN= или -СН2С(O)NHN=. В одном иллюстративном аспекте группа для присоединения и поливалентный линкер вместе образуют соединение формулы:
Figure 00000027
или его защищенное производное, где (D) представляет собой алкалоид барвинка или его аналог или производное, способный образовывать гидразон, как представлено в настоящем описании; и n представляет собой целое число, такое как 1, 2, 3 или 4. В другом иллюстративном аспекте промежуточного соединения связывающего рецептор конъюгата для доставки лекарственного средства, описанного в настоящем описании, второй линкер ковалентно присоединен к представленной выше формуле через алкилтиольный нуклеофил, включенный во второй линкер. В другом иллюстративном аспекте связывающая рецептор группа или ее аналог или производное ковалентно присоединена к представленной выше формуле через алкилтиольный нуклеофил, включенный в эту группу.
В другом иллюстративном варианте осуществления группа для присоединения представляет собой гетероатом, такой как азот, кислород или сера, и поливалентный линкер включает один или несколько линкеров с гетероатомом и один или несколько спейсерных линкеров, ковалентно соединяющих связывающую рецептор группу с группой для присоединения. В одном иллюстративном аспекте промежуточное соединение, описанное в настоящем описании, включает соединение формулы:
Figure 00000028
или его защищенное производное, где X представляет собой кислород, азот или серу и m представляет собой целое число, такое как 1, 2 или 3, и где (B), lS и lH являются такими, как определено в настоящем описании. В одном иллюстративном аспекте lH представляет собой -NH- и m представляет собой 1. В другом иллюстративном аспекте lH представляет собой -NH-, m представляет собой 1 и X представляет собой -S-.
В другом иллюстративном варианте осуществления промежуточное соединение, описанное в настоящем описании, включает соединение формулы:
Figure 00000029
или его защищенное производное, где Y представляет собой H или заместитель, в качестве иллюстративного примера электрон-акцепторный заместитель, включая, но не ограничиваясь ими, нитро, циано, галоген, алкилсульфонил, производное карбоновой кислоты и т.п., и где (B) и lS являются такими, как определено в настоящем описании. В другом иллюстративном варианте осуществления промежуточного соединения, описанного в настоящем описании, группа для присоединения представляет собой акцептор Михаэля и поливалентный линкер включает один или несколько линкеров с гетероатомом и один или несколько спейсерных линкеров, ковалентно соединяющих связывающую рецептор группу с группой для присоединения. В одном иллюстративном аспекте группа для присоединения и поливалентный линкер вместе образуют соединение формулы:
Figure 00000030
или его защищенное производное, где X представляет собой кислород, азот или серу и m и n представляют собой независимо выбранные целые числа, такие как 1, 2 или 3, и где (B), lS и lH являются такими, как определено в настоящем описании. В другом иллюстративном аспекте алкалоид барвинка или его аналог или производное ковалентно присоединен к представленной выше формуле через алкилтиольный нуклеофил, включенный в алкалоид барвинка.
В другом иллюстративном аспекте промежуточное соединение включает соединения формул:
Figure 00000031
или их защищенные производные, где AA представляет собой одну или несколько аминокислот, в качестве иллюстративного примера выбранную из встречающихся в природе аминокислот, или их стереоизомеров, X представляет собой азот, кислород или серу, Y представляет собой водород или заместитель, в качестве иллюстративного примера электронно-акцепторный заместитель, включая, но не ограничиваясь ими, нитро, циано, галоген, алкилсульфонил, производное карбоновой кислоты и т.п., n и m представляют собой независимо выбранные целые числа, такие как 1, 2 или 3, и p представляет собой целое число, такое как 1, 2, 3, 4 или 5.
AA также может представлять собой любую другую аминокислоту, такую как любая аминокислота общей формулы:
Figure 00000032
где R представляет собой водород, алкил, ацил или пригодную защитную группу азота, R' и R" представляют собой водород или заместитель, каждый из которых в каждом случае выбран независимо, и t представляет собой целое число, такое как 1, 2, 3, 4 или 5. В качестве иллюстративного примера R' и/или R" независимо соответствуют, но не ограничиваются ими, водороду или боковым цепям, представленным на встречающихся в природе аминокислотах, таким как метил, бензил, гидроксиметил, тиометил, карбоксил, карбоксилметил, гуанидинопропил и т.п., и их производных и защищенных производных. Описанная выше формула включает все стереоизомерные варианты. Например, аминокислота может быть выбрана из аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутаминовой кислоты, лизина, глутамина, аргинина, серина, орнитина, треонина и т.п. В другом иллюстративном аспекте промежуточного соединения связывающего рецептор для витамина конъюгата для доставки лекарственного средства, описанного в настоящем описании, лекарственное средство или его аналог или производное включает алкилтиольный нуклеофил.
Каждое из представленных выше промежуточных соединений можно получать с использованием общепринятых способов синтеза. Дополнительные способы синтеза и условия реакций описаны в публикации патентной заявки США № US 2005/0002942 A1 и международной публикации PCT № WO 2006/012527.
Представленные выше иллюстративные варианты осуществления предназначены для иллюстрации этого изобретения, описанного в настоящем описании, и их не следует понимать или толковать как ограничивающие каким-либо образом это изобретение, как описано в настоящем описании. Например, для включения в это изобретение предназначены соединения, главным образом, соответствующие следующим иллюстративным промежуточным соединениям конъюгатов витамин-лекарственное средство, как описано в настоящем описании,
Figure 00000033
где каждый из R1 и R2 независимо представляет собой водород или алкил, такой как метил; и lH представляет собой гетероатом, такой как кислород, сера, необязательно замещенный азот или необязательно защищенный азот и т.п. Два или более лекарственных средств и необязательно дополнительные связывающие рецептор лиганды, такие как фолаты и их аналоги и производные, могут быть ковалентно присоединены к (lH) или к любой другой представленной функциональной группе, такой как азот амида или карбонил, карбоксилат кислоты или аминогруппа гуанидина, этого иллюстративного промежуточного соединения.
В другом варианте осуществления описано промежуточное соединение фолатного лиганда следующей формулы
Figure 00000034
где m, n и q представляют собой целые числа, которые независимо выбраны из диапазона от 0 до приблизительно 8; AA представляет собой аминокислоту, R1 представляет собой водород, алкил или защитную группу азота и лекарственные средства необязательно присоединены к атомам (*). В одном аспекте AA представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту природной или неприродной конфигурации. В другом аспекте одна или несколько из AA во фрагменте (-NH-AA-C(O)-)n представляют собой гидрофильную аминокислоту. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте (-NH-AA-C(O)-)n представляют собой Asp и/или Arg. В другом аспекте целое число o представляет собой 1 или более. В другом аспекте целое число m представляет собой 2 или более. Лекарственные средства или их аналоги или производные и необязательно дополнительные линкеры и дополнительные связывающие рецептор лиганды могут быть соединены с представленной выше формулой в области трех свободных боковых цепей NH фрагментов 2,ω-диаминоалкановой кислоты или в области концевого карбоксилата, как показано посредством свободных валентностей в них.
В другом варианте осуществления описано промежуточное соединение фолатного лиганда следующей формулы
Figure 00000035
где m, n, q и p представляют собой целые числа, которые независимо выбраны из диапазона от 0 до приблизительно 8; AA представляет собой аминокислоту, R1 представляет собой водород, алкил или защитную группу азота и лекарственные средства необязательно присоединены к атомам (*). В одном аспекте AA представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту либо природной, либо неприродной конфигурации. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте (-NH-AA-C(O)-)n представляет собой гидрофильную аминокислоту. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте (-NH-AA-C(O)-)n представляет собой Asp и/или Arg. В другом аспекте целые числа o и p представляют собой 1 или более. В другом аспекте целое число m представляет собой 2 или более. Лекарственные средства или их аналоги или производные и необязательно дополнительные линкеры и дополнительные связывающие рецептор лиганды могут быть присоединены к указанной выше формуле в области свободных боковых цепей NH фрагментов 2,ω-диаминоалкановой кислоты, в области тиольных групп цистеинила или в области концевого карбоксилата, как указано посредством свободных валентностей в них.
В другом варианте осуществления описано промежуточное соединение фолатного лиганда следующей формулы
Figure 00000036
где m, n, q, p и r представляют собой целые числа, которые независимо выбраны из диапазона от 0 до приблизительно 8; AA представляет собой аминокислоту, R1 представляет собой водород, алкил или защитную группу азота и лекарственные средства необязательно присоединены к атомам (*). В одном аспекте AA представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту либо природной, либо неприродной конфигурации. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагмент (-NH-AA-C(O)-)n представляет собой гидрофильную аминокислоту. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте (-NH- AA-C(O)-)n представляет собой Asp и/или Arg. В другом аспекте целые числа o, p и r представляют собой 1 или более. В другом аспекте целое число m представляет собой 2 или более. Лекарственные средства или их аналоги или производные и необязательно дополнительные линкеры и дополнительные связывающие рецептор лиганды могут быть присоединены к указанной выше формуле в области свободных боковых цепей фрагментов NH 2,ω-диаминоалкановой кислоты, в области тиольных групп цистеинила, гидроксигрупп серинила или концевого карбоксилата, как указано посредством свободных валентностей в них.
В другом варианте осуществления описано промежуточное соединение фолатного лиганда, которое включает митомицин в качестве одного из лекарственных средств, имеющее следующую формулу
Figure 00000037
где m, n и q представляют собой целые числа, которые независимо выбраны из диапазона от 0 до приблизительно 8; и AA представляет собой аминокислоту. В одном аспекте AA представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту либо природной, либо неприродной конфигурации. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте (-NH-AA-C(O)-)n представляет собой гидрофильную аминокислоту. В другом аспекте одна или несколько AA во фрагменте
(-NH-AA-C(O)-)n представляет собой Asp и/или Arg. В другом аспекте целое число o представляет собой 1 или более. В другом аспекте целое число m представляет собой 2 или более. Лекарственные средства или их аналоги или производные и необязательно дополнительные линкеры и дополнительные связывающие рецептор лиганды могут быть соединены к представленной выше формуле в области дополнительных свободных боковых цепей NH фрагментов 2,ω-диаминоалкановой кислоты или в области концевого карбоксилата, как указано посредством свободных валентностей в них.
В другом варианте осуществления описан конъюгат фолатного лиганда и нескольких лекарственных средств, который включает митомицин и алкалоид барвинка, имеющий следующую формулу
Figure 00000038
В другом варианте осуществления описан конъюгат фолатного лиганда и нескольких лекарственных средств, который включает митомицин, акламицин и алкалоид барвинка, имеющий следующую формулу
Figure 00000039
В другом варианте осуществления описана фармацевтическая композиция. Фармацевтическая композиция содержит конъюгат для доставки лекарственного средства, описанный в настоящем описании, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем и/или разбавителем для него.
В другом варианте осуществления описан способ устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине, обладающем популяцией патогенных клеток. В одном иллюстративном аспекте члены популяции патогенных клеток обладают участком для связывания, доступным для связывающей рецептор группы или ее аналога или производного, и этот участок для связывания экспрессируется только патогенными клетками, сверхэкспрессируется или предпочтительно экспрессируется ими. Способ включает стадию введения хозяину конъюгата для доставки лекарственного средства, описанного в настоящем описании, или его фармацевтической композиции, как описано в настоящем описании.
Популяции патогенных клеток, против которых можно проводить лечение с использованием способов, описанных в настоящем описании, включают, но не ограничиваются ими, злокачественные опухоли, такие как эпителиальные злокачественные опухоли яичника, молочной железы, толстого кишечника, легкого, носа, горла, головного мозга и другие типы опухолевых клеток, инфекционные агенты, активированные макрофаги, активированные моноциты и т.п.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно использовать как для клинической медицины человека, так и для ветеринарных способов применения. Таким образом, животное-хозяин, которое имеет популяцию патогенных клеток и которое лечат конъюгатами для доставки лекарственного средства, может представлять собой человека или в случае ветеринарных способов применения может представлять собой лабораторное, сельскохозяйственное, домашнее или дикое животное. Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно вводить животным-хозяевам, включая, но не ограничиваясь ими, человека, лабораторных животных, таких как грызуны (например, мыши, крысы, хомяки и т.д.), кролики, обезьяны, шимпанзе, домашние животные, такие как собаки, кошки и кролики, сельскохозяйственные животные, такие как коровы, лошади, свиньи, овцы, козы, и дикие животные в неволе, такие как медведи, панды, львы, тигры, леопарды, слоны, зебры, жирафы, гориллы, дельфины и киты.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно использовать для лечения множества патологий и патогенных клеток в животном-хозяине. Как используют в настоящем описании, "патогенные клетки" означают злокачественные клетки, инфекционные агенты, такие как бактерии и вирусы, инфицированные бактериями или вирусами клетки, активированные макрофаги, способные вызывать болезненное состояние, и любой другой тип патогенных клеток, которые единственные экспрессируют, предпочтительно экспрессируют или сверхэкспрессируют рецепторы для лигандов, такие как рецепторы для витаминов или рецепторы, которые связывают аналоги или производные витаминов. Патогенные клетки также могут включать любые клетки, вызывающие болезненное состояние, лечение которого посредством конъюгатов для доставки лекарственного средства приводит к снижению симптомов заболевания. Патогенные клетки также могут представлять собой клетки-хозяева, которые являются патогенными в некоторых условиях, такие как клетки иммунной системы, которые ответственны за реакцию "трансплантат против хозяина", но не являются патогенными в других условиях.
Таким образом, популяция патогенных клеток может представлять собой популяцию злокачественных клеток, которые вызывают опухоли, включая доброкачественные опухоли и злокачественные опухоли, или они могут представлять собой не вызывающие опухоли клетки. Популяция злокачественных клеток может возникать спонтанно или при помощи таких процессов, как мутации, имеющиеся в эмбриональных клетках животного-хозяина, или соматические мутации, или они могут быть индуцированными химически, вирусами или облучением. Это изобретение можно применять для лечения таких злокачественных опухолей, как карциномы, саркомы, лимфомы, болезнь Ходжкина, меланомы, мезотелиомы, лимфома Беркитта, носоглоточные карциномы, лейкозы и миеломы. Популяция злокачественных клеток может включать, но не ограничиваться ими, злокачественную опухоль ротовой полости, щитовидной железы, эндокринной системы, кожи, желудка, пищевода, гортани, поджелудочной железы, толстого кишечника, мочевого пузыря, кости, яичника, шейки матки, матки, молочной железы, яичка, предстательной железы, прямой кишки, почки, печени и легкого.
В вариантах осуществления, где популяция патогенных клеток представляет собой популяцию злокачественных клеток, эффект введения конъюгата для доставки лекарственного средства представляет собой терапевтический ответ, определяемый снижением или устранением опухолевой массы или ингибированием пролиферации опухолевых клеток. В случае опухоли устранение может представлять собой устранение клеток первичной опухоли или клеток, которые метастазировали или находятся в процессе диссоциации от первичной опухоли. Также предусмотрено профилактическое лечение конъюгатом для доставки лекарственного средства для предотвращения повторного возникновения опухоли после ее удаления посредством любого терапевтического подхода, включающего хирургическое удаление опухоли, лучевую терапию, химиотерапию или биологическую терапию. Профилактическое лечение может представлять собой первоначальное лечение конъюгатом для доставки лекарственного средства, такое как лечение по схеме с несколькими дозами в сутки, и/или оно может представлять собой вспомогательное лечение или серию лечений после интервала, составляющего сутки или месяцы после исходного лечения(ий). Таким образом, устранение любой из популяций патогенных клеток, описанных выше, включает снижение количества патогенных клеток, ингибирование пролиферации патогенных клеток, профилактическое лечение, которое предотвращает повторное возникновение патогенных клеток, или лечение против патогенных клеток, которое приводит к уменьшению симптомов заболевания.
В случаях когда устранению подлежат клетки злокачественной опухоли, описанный в настоящем описании способ можно использовать в сочетании с хирургическим удалением опухоли, лучевой терапией, химиотерапией или биологическими способами терапии, такими как другие способы иммунотерапии, включая, но не ограничиваясь ими, терапию моноклональными антителами, лечение иммуномодулирующими средствами, адоптивный перенос иммунных эффекторных клеток, лечение гемопоэтическими факторами роста, цитокинами и вакцинация.
Способ, описанный в настоящем описании, также является применимым в отношении популяций патогенных клеток, которые вызывают множество инфекционных заболеваний. Например, настоящее изобретение является применимым для таких популяций патогенных клеток, как бактерии, грибы, включая дрожжи, вирусы, инфицированные вирусом клетки, микоплазму и паразиты. Инфекционные организмы против которых можно проводить лечение посредством конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, представляют собой любые известные в данной области инфекционные организмы, которые приводят к патогенезу у животного, включая такие организмы, как бактерии, которые представляют собой грамотрицательные или грамположительные кокки или бациллы. Например, с помощью конъюгатов для доставки лекарственного средства можно проводить лечение от видов Proteus, видов Klebsiella, видов Providencia, видов Yersinia, видов Erwinia, видов Enterobacter, видов Salmonella, видов Serratia, видов Aerobacter, видов Escherichia, видов Pseudomonas, видов Shigella, видов Vibrio, видов Aeromonas, видов Campylobacter, видов Streptococcus, видов Staphylococcus, видов Lactobacillus, видов Micrococcus, видов Moraxella, видов Bacillus, видов Clostridium, видов Corynebacterium, видов Eberthella, видов Micrococcus, видов Mycobacterium, видов Neisseria, видов Haemophilus, видов Bacteroides, видов Listeria, видов Erysipelothrix, видов Acinetobacter, видов Brucella, видов Pasteurella, видов Vibrio, видов Flavobacterium, видов Fusobacterium, видов Streptobacillus, видов Calymmatobacterium, видов Legionella, видов Treponema, видов Borrelia, видов Leptospira, видов Actinomyces, видов Nocardia, видов Rickettsia и любого другого бактериального вида, который вызывает заболевание в животном-хозяине.
Особый интерес представляют бактерии, которые являются устойчивыми к антибиотикам, такие как устойчивые к антибиотикам виды Streptococcus и виды Staphlococcus, или бактерии, которые являются чувствительными к антибиотикам, но вызывают рекуррентные инфекции, которые лечат антибиотиками, так что в итоге развиваются устойчивые организмы. Для избежания развития этих устойчивых к антибиотикам штаммов лечение против бактерий, которые являются чувствительными к антибиотикам, но вызывают рекуррентные инфекции, которые лечат антибиотиками, так что в итоге развиваются устойчивые организмы, можно проводить посредством описанных в настоящем описании конъюгатов для доставки лекарственного средства в отсутствие антибиотиков или в сочетании с более низкими дозами антибиотиков, чем обычно вводят животному-хозяину.
Заболевания, вызываемые вирусами, такими как ДНК- и РНК-вирусы, также можно лечить посредством конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании. Такие вирусы включают, но не ограничиваются ими, ДНК-вирусы, такие как вирусы папилломы, парвовирусы, аденовирусы, герпес-вирусы и вирусы коровьей оспы и РНК-вирусы, такие как аренавирусы, коронавирусы, риновирусы, респераторные синцитиальные вирусы, вирусы гриппа, пикорнавирусы, парамиксовирусы, реовирусы, ретровирусы, лентивирусы и рабдовирусы.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, также можно использовать для лечения заболеваний, вызываемых любыми грибами, включая дрожжи, виды микоплазмы, паразиты или другие инфекционные организмы, которые вызывают заболевание у животных. Примеры грибов, от которых можно лечить посредством способа и конъюгатов для доставки лекарственного средства, описанных в настоящем описании, включают грибы, которые растут в виде плесени или являются дрожжеподобными, включая, например, грибы, которые вызывают заболевания, такие как стригущий лишай, гистоплазмоз, бластомикоз, аспергиллез, криптококкоз, споротрихоз, кокцидиоидомикоз, паракокцидиоидомикоз, мукормикоз, хромобластомикоз, дерматофитоз, прототекоз, фузариоз, питириоз, мицетома, паракокцидиоидомикоз, феогифомикоз, псевдаллешериоз, споротрихоз, трихоспороз, инфекция Pneumocystis и кандидоз.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, также можно использовать для лечения паразитарных инфекций, включая, но не ограничиваясь ими, инфекции, вызываемые гельминтами, такими как виды Taenia, Hymenolepsis, Diphyllobothrium и Echinococcus, трематодами, такими как виды Fasciolopsis, Heterophyes, Metagonimus, Clonorchis, Fasciola, Paragonimus и Schitosoma, круглыми червями, такими как виды Enterobius, Trichuris, Ascaris, Ancylostoma, Necator, Strongyloides, Trichinella, Wuchereria, Brugia, Loa Onchocerca и Dracunculus, амебами, такими как виды Naegleria и Acanthamoeba, и простейшими, такими как виды Plasmodium, Trypanosoma, Leishmania, Toxoplasma, EntamoeIba, Giardia, Isospora, Cryptospondium и Enterocytozoon.
Патогенные клетки, на которые направлены конъюгаты для доставки лекарственного средства, также могут представлять собой клетки, обладающие эндогенными патогенами, такими как клетки, инфицированные вирусами, микоплазмой, паразитами или бактериями, если эти клетки предпочтительно экспрессируют рецепторы для лигандов, такие как рецепторы для витаминов или их аналоги или производные.
В одном варианте осуществления конъюгаты для доставки лекарственного средства могут интернализовываться в патогенные клетки-мишени при связывании лиганда с рецептором, переносчиком или другим представленным на поверхности белком, который специфично связывает лиганд и который предпочтительно экспрессируется на патогенных клетках. Такая интернализация может происходить, например, посредством опосредуемого рецептором эндоцитоза. Если конъюгат для доставки лекарственного средства содержит высвобождаемый линкер, то лиганд и соединение барвинка могут диссоциировать внутриклеточно и соединение барвинка может действовать на его внутриклеточную мишень.
В другом иллюстративном варианте осуществления лиганд конъюгата для доставки лекарственного средства может связываться с патогенной клеткой, обеспечивая расположение соединения барвинка близко к поверхности патогенной клетки.
Затем соединение барвинка может высвобождаться посредством расщепления высвобождаемого линкера. Например, соединение барвинка может высвобождаться посредством протеиндисульфидизомеразы, если высвобождаемый линкер представляет собой дисульфидную группу. Соединение барвинка может захватываться патогенной клеткой, с которой связался связывающий рецептор конъюгат для доставки лекарственного средства, или соединение барвинка может захватываться другой патогенной клеткой, расположенной вблизи к ней. Альтернативно соединение барвинка может высвобождаться посредством протеиндисульфидизомеразы внутри клетки, где высвобождаемый линкер представляет собой дисульфидную группу. Соединение барвинка также может высвобождаться посредством механизма гидролиза, такого как катализируемый кислотой гидролиз, как описано выше для определенных механизмов бета-отщепления, или посредством расщепления с помощью анхимерного эффекта через механизм образования иона оксония или иона лактония. Выбор высвобождаемого линкера или линкеров будет определять механизм, посредством которого соединение барвинка высвобождается из конъюгата. Понятно, что такой выбор может быть предварительно определен условиями, в которых будет использоваться конъюгат для доставки лекарственного средства.
В другом иллюстративном варианте осуществления, где линкер не содержит высвобождаемого линкера, группа лиганда конъюгата для доставки лекарственного средства может связываться с патогенной клеткой, обеспечивая расположение соединения барвинка на поверхности патогенной клетки для нацеливания на патогенную клетку атаки другими молекулами, способными связываться с соединением барвинка. Альтернативно в этом варианте осуществления конъюгаты для доставки лекарственного средства могут при связывании интернализовываться в клетки-мишени, и группа лиганда и соединение барвинка может оставаться связанным внутриклеточно с соединением барвинка, оказывающим свои эффекты без диссоциации от группы лиганда.
В другом варианте осуществления или в сочетании с описанными выше вариантами осуществления, где конъюгат для доставки лекарственного средства связывает рецептор для витамина или рецептор для другого лиганда, конъюгат может связываться с растворимыми рецепторами для витаминов, имеющимися в сыворотке, или с сывороточными белками, такими как альбумин, что приводит к пролонгированной циркуляции конъюгатов относительно неконъюгированного соединения барвинка и повышенной активности конъюгатов в отношении популяции патогенных клеток относительно неконъюгированного соединения барвинка.
Участок для связывания лиганда, такого как витамин, может включать рецепторы для лиганда, способные специфично связывать лиганд, где рецептор или другой белок экспрессируется только популяцией патогенных клеток, сверхэкспрессируется или предпочтительно экспрессируется ей. Представленный на поверхности белок, экспрессируемый только патогенными клетками, сверхэкспрессируемый или предпочтительно экспрессируемый ими, как правило, представляет собой рецептор, который либо не представлен на непатогенных клетках, либо представлен на них в более низких концентрациях, что обеспечивает способ для селективного устранения патогенных клеток. Конъюгаты для доставки лекарственного средства могут быть способны к связыванию с высокой аффинностью с рецепторами на злокачественных клетках или других типах патогенных клеток. Связывание с высокой аффинностью может быть присущим лиганду, или аффинность связывания можно повышать посредством применения химически модифицированного лиганда.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, описанные в настоящем описании, можно вводить в качестве комбинированной терапии с любым другим известным средством независимо от того, является ли дополнительное лекарственное средство нацеленным. Иллюстративные дополнительные лекарственные средства включают, но не ограничиваются ими, пептиды, олигопептиды, ретро-инверсо-олигопептиды, белки, аналоги белков, в которых по меньшей мере одна непептидная связь заменяет пептидную связь, апобелки, гликопротеины, ферменты, коферменты, ингибиторы ферментов, аминокислоты и их производные, рецепторы и другие мембранные белки, антигены и антитела к ним, гаптены и антитела к ним, гормоны, липиды, фосфолипиды, липосомы, токсины, антибиотики, обезболивающие средства, бронходилятаторы, бета-блокаторы, противомикробные средства, антигипертензивные средства, сердечно-сосудистые средства, включающие антиаритмические средства, сердечные гликозиды, антиангинальные средства, вазодилятаторы, средства для центральной нервной системы, включая стимуляторы, психотропные средства, средства против маний и деперессанты, противовирусные средства, антигистамины, лекарственные средства против злокачественной опухоли, включая химиотерапевтические средства, транквилизаторы, антидепрессанты, антагонисты H-2, противосудорожные препараты, средства против тошноты, простагландины и аналоги простагландинов, мышечные релаксанты, противовоспалительные вещества, стимуляторы, противоотечные средства, противорвотные средства, диуретики, спазмолитические средства, противоастматические средства, средства против болезни Паркинсона, отхаркивающие средства, подавляющие кашель средства, муколитические средства и минеральные и питательные добавки.
В другом иллюстративном аспекте дополнительное лекарственное средство может быть выбрано из соединения, способного стимулировать эндогенный иммунный ответ. Пригодные соединения включают, но не ограничиваются ими, цитокины или факторы роста иммунных клеток, такие как интерлейкины 1-18, фактор стволовых клеток, основной FGF, EGF, G-CSF, GM-CSF, лиганд FLK-2, HILDA, MTP-1α, TGF-α, TGF-β, M-CSF, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, растворимый CD23, LIF, и их сочетания.
Можно использовать терапевтически эффективные сочетания этих иммуностимулирующих факторов. В одном варианте осуществления совместно с конъюгатами для доставки лекарственного средства можно использовать, например, терапевтически эффективные количества IL-2, например, в количествах в диапазоне от приблизительно 0,1 ММЕ/м2/доза/сутки до приблизительно 15 ММЕ/м2/доза/сутки по схеме с несколькими дозами в сутки, и IFN-α, например, в количествах в диапазоне от приблизительно 0,1 ММЕ/м2/доза/сутки до приблизительно 7,5 ММЕ/м2/доза/сутки по схеме с несколькими дозами в сутки, для устранения, снижения или нейтрализации патогенных клеток в животном-хозяине, обладающем патогенными клетками (ММЕ = миллионов международных единиц; м2 = приблизительная площадь поверхности тела среднего человека). В другом варианте осуществления IL-12 и IFN-α можно использовать в терапевтически эффективных количествах, описанных выше для интерлейкинов и интерферонов, и в другом варианте осуществления IL-15 и IFN-α можно использовать в терапевтически эффективных количествах, описанных выше для интерлейкинов и интерферонов. В альтернативном варианте осуществления IL-2, IFN-α или IFN-γ и GM-CSF можно использовать в сочетании в описанных выше терапевтически эффективных количествах. Также можно использовать любое другое эффективное сочетание цитокинов, включая сочетания других интерлейкинов и интерферонов и колониестимулирующих факторов.
Кроме того, дополнительное лекарственное средство может представлять собой любое лекарственное средство, известное в данной области, которое является цитотоксическим или цитостатическим, повышает проницаемость опухоли, ингибирует пролиферацию опухолевых клеток, запускает апоптоз, снижает антиапоптотическую активность в клетках-мишенях, которое применяют для лечения заболеваний, вызываемых инфекционными агентами, повышения эндогенного иммунного ответа, направленного против патогенных клеток, или является пригодным для лечения болезненного состояния, вызываемого любым типом патогенных клеток. Иллюстративные пригодные дополнительные лекарственные средства включают адренокортикоиды и кортикостероиды, алкилирующие средства, антиандрогены, антиэстрогены, андрогены, акламицин и производные акламицина, эстрогены, антиметаболиты, такие как цитозин-арабинозид, аналоги пуринов, аналоги пиримидинов и метотрексат, бисульфан, карбоплатин, хлорамбуцил, цисплатин и другие соединения платины, тамоксифен, таксол, паклитаксел, производные паклитаксела, Таксотер®, циклофосфамид, дауномицин, ризоксин, токсин T2, алкалоиды растений, преднизон, гидроксимочевину, тенипозид, митомицины, дискодермолиды, не относящиеся к алкалоидам барвинка ингибиторы микротрубочек, эпотилоны, тубулизин, циклопропил бенз[e]индолон, секо-циклопропил-бенз[e]индолон, O-Ac-секо-циклопропил бенз[e]индолон, блеомицин и любой другой антибиотик, азотистые иприты, нитрозомочевины, колхицин, производные колхицина, аллоколхицин, тиоколхицин, тритил-цистеин, халикондрин B, доластатины, такие как доластатин 10, аманитины, такие как α-аманитин, камптотецин, иринотекан и другие производные камптотецина, гелданамицин и производные гелданамицина, эстрамустин, нокодазол, MAP4, колцемид, виндезин, винбластин, винкристин, катарантин, виндолин, леурозин, винорелбин, имидокарб, сибутрамин, толтразурил, винбластиновую кислоту, майтанзины и их аналоги и производные, гемцитабин, воспалительные и провоспалительные средства, пептиды и пептидомиметики ингибиторов передачи сигнала, и другое известное в данной области лекарственное средство или токсин. Другие лекарственные средства, которые можно использовать в способах комбинированной терапии, включают пенициллины, цефалоспорины, ванкомицин, эритромицин, клиндамицин, рифампин, хлорамфеникол, аминогликозидные антибиотики, гентамицин, амфотерицин B, ацикловир, трифлуридин, ганцикловир, зидовудин, амантадин, рибавирин и любое другое известное в данной области противомикробное соединение. Также в способах комбинированной терапии можно использовать аналоги или производные любого из описанных выше дополнительных лекарственных средств.
В другом иллюстративном варианте осуществления предусмотрены фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции содержат количество конъюгата для доставки лекарственного средства, эффективное для устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине при введении в виде одной или нескольких доз. Конъюгат для доставки лекарственного средства предпочтительно вводят животному-хозяину парентерально, например внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно или интратекально. Альтернативно конъюгат для доставки лекарственного средства можно вводить животному-хозяину другим пригодным с медицинской точки зрения способом, таким как оральный способ, и можно использовать любую эффективную дозу и пригодную терапевтическую дозированную форму, включая дозированные формы с замедленным высвобождением. Иллюстративные наполнители, пригодные для оральных дозированных форм, включают, но не ограничиваются ими, кукурузный крахмал, желатин, лактозу, стеарат магния, бикарбонат натрия, производные целлюлозы и натрия крахмала гликолят.
Примеры парентеральных дозированных форм включают водные растворы активного вещества в изотоническом физиологическом растворе, 5% растворе глюкозы или других хорошо известных фармацевтически приемлемых жидких носителях, таких как жидкие спирты, гликоли, сложные эфиры и амиды. Парентеральная дозированная форма в соответствии с этим изобретением может находиться в форме подлежащего растворению лиофилизата, содержащего дозу конъюгата для доставки лекарственного средства. В одном аспекте данного варианта осуществления можно вводить любую из множества дозированных форм для замедленного высвобождения, известных в данной области, например, такую как биологически деградируемые углеводные матрицы, описанные в патентах США № 4713249; 5266333 и 5417982, описания которых включены в настоящее описание в качестве ссылок, или альтернативно можно использовать медленный дозатор (например, осмотический дозатор).
Дополнительное лекарственное средство в комбинированной терапии можно вводить животному-хозяину до, после или одновременно с конъюгатами для доставки лекарственного средства и дополнительное лекарственное средство можно вводить как часть единой композиции, содержащей конъюгат для доставки лекарственного средства, или как часть композиции, отличающейся от композиции конъюгата для доставки лекарственного средства. Можно использовать любую такую комбинированную терапию с эффективной дозой дополнительного лекарственного средства.
В другом иллюстративном аспекте можно использовать более одного типа конъюгата для доставки лекарственного средства. Например, животное-хозяина можно лечить с помощью протокола совместного дозирования конъюгатами с различными лигандами, такими как, например, конъюгаты фолат-алкалоид барвинка и витамин B12-алкалоид барвинка в сочетании и т.п. В другом иллюстративном варианте осуществления животное-хозяина можно лечить конъюгатами, содержащими более одного лиганда, например, как в случае нескольких молекул фолата или нескольких молекул витамина B12 в одном конъюгате или сочетаний лигандов в одном конъюгате, таких как соединение барвинка, конъюгированное как с лигандом в виде фолата, так и с лигандом в виде витамина B12. Более того, можно использовать конъюгаты для доставки лекарственного средства с различными типами соединений барвинка в отдельных конъюгатах для доставки лекарственного средства.
Однократная суточная дозировка конъюгата для доставки лекарственного средства может значительно варьировать в зависимости от состояния организма хозяина, подлежащего лечению болезненного состояния, молекулярной массы конъюгата, способа его введения и его распределения в тканях и возможности совместного применения других терапевтических способов лечения, таких как лучевая терапия или дополнительные лекарственные средства в комбинированных способах терапии. Эффективное количество, подлежащее введению животному-хозяину, основано на площади поверхности, массе и оценке врачом состояния пациента. Эффективные дозы могут варьировать, например, от приблизительно 1 нг/кг до приблизительно 1 мг/кг, от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 500 мкг/кг и от приблизительно 1 мкг/кг до приблизительно 100 мкг/кг.
Можно использовать любую эффективную схему введения конъюгатов для доставки лекарственного средства. Например, конъюгаты для доставки лекарственного средства можно вводить в качестве однократных доз или их можно разделять и вводить по схеме с многократными дозами в сутки. Кроме того, можно использовать смещенную схему, например, от одних до трех суток в неделю в качестве альтернативы введению каждые сутки, и для целей определения этого изобретения такая прерывающаяся или смещенная суточная схема предусмотрена и ее рассматривают как эквивалентную введению каждые сутки. В одном иллюстративном варианте осуществления животное-хозяина лечат многократными инъекциями конъюгата для доставки лекарственного средства для устранения популяции патогенных клеток. В одном варианте осуществления хозяину проводят несколько инъекций (предпочтительно приблизительно от 2 вплоть до приблизительно 50 раз) конъюгата для доставки лекарственного средства, например, с интервалами 12-72 часов или с интервалами 48-72 часов. Дополнительные инъекции конъюгата для доставки лекарственного средства можно проводить животному-хозяину с интервалом, составляющим сутки или месяцы, после исходной инъекции(ий), и дополнительные инъекции могут предотвращать повторное возникновение болезненного состояния, вызываемого патогенными клетками.
В одном иллюстративном аспекте витамины или их аналоги или производные, которые можно использовать в конъюгатах для доставки лекарственного средства, включают витамины или их аналоги или производные, которые связываются с рецепторами, экспрессируемыми специфично на активированных макрофагах, такими как рецептор для фолата, который связывает фолат, или его аналог или производное. Связанные с фолатом конъюгаты, например, можно использовать для уничтожения или подавления активности активированных макрофагов, которые вызывают болезненные состояния в организме-хозяине. Такие нацеленные на макрофаги конъюгаты при введении животному-хозяину, страдающему опосредуемым активированными макрофагами болезненным состоянием, действуют посредством концентрирования и ассоциации конъюгированных соединений барвинка с популяцией активированных макрофагов, уничтожая активированные макрофаги или подавляя функции макрофагов. Устранение, снижение или дезактивация популяции активированных макрофагов действует посредством остановки или снижения характерных признаков опосредуемого активированными макрофагами патогенеза болезненного состояния, подлежащего лечению. Иллюстративные примеры заболеваний, известных как опосредуемые активированными макрофагами, включают ревматоидный артрит, язвенный колит, болезнь Крона, псориаз, остеомиелит, рассеянный склероз, атеросклероз, фиброз легких, саркоидоз, системную склеродермию, отторжение трансплантата органа (РТПХ) и хроническое воспаление. Введение конъюгата для доставки лекарственного средства, как правило, продолжают до тех пор, пока не произойдет снижение или устранение симптомов болезненного состояния.
Конъюгаты для доставки лекарственного средства, вводимые для уничтожения активированных макрофагов или подавления функции активированных макрофагов, также можно вводить животному-хозяину парентерально, например внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или внутривенно, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем. Альтернативно конъюгаты для доставки лекарственного средства можно вводить животному-хозяину другими пригодными с медицинской точки зрения способами и эффективные дозы можно вводить в стандартных дозированных формах или дозированных формах с замедленным высвобождением. Терапевтический способ можно использовать отдельно или в сочетании с другими терапевтическими способами, известными для лечения болезненных состояний, опосредуемых активированными макрофагами.
Представленные ниже иллюстративные варианты осуществления не предназначены для ограничения, и их не следует толковать как ограничивающие. Например, в каждом соединении, представленном в настоящем описании, стереохимия аминокислот, используемых для образования ликера, может быть необязательно выбрана из природной L-конфигурации или неприродной D-конфигурации. Каждый пример был охарактеризован посредством ЯМР, МС и/или УФ-спектроскопии и/или ВЭЖХ, как указано; выбранные характерные сигналы указаны соответствующим образом.
ПРИМЕРЫ СПОСОБОВ
ПРИМЕР СПОСОБА 1. Ингибирование роста опухоли у мышей. Противоопухолевую активность соединений, описанных в настоящем описании, при введении внутривенно (i.v.) имеющим опухоль животным оценивали у мышей Balb/c, имеющих подкожные опухоли M 109. Приблизительно через 11 суток после инокуляции опухоли в подкожный слой правой подмышечной впадины посредством 1×106 клеток M109 (средний объем опухоли при to=60 мм3) мышам (5/группа) проводили внутривенные инъекции три раза в неделю (TIW) в течение 3 недель посредством 1500 нмоль/кг конъюгата для доставки лекарственного средства или эквивалентного объема дозы PBS (контроль). Рост опухоли измеряли с использованием штангенциркуля с интервалами 2 суток или 3 суток в каждой группе по введению. Объемы опухолей вычисляли с использованием выражения V = a×b2/2, где "a" представляет собой длину опухоли и "b" представляет собой ширину, выраженную в миллиметрах.
ПРИМЕР СПОСОБА 2. Ингибирование роста опухоли у мышей. Противоопухолевую активность соединений, описанных в настоящем описании, при введении внутривенно (i.v.) имеющим опухоль животным оценивали у мышей nu/nu, имеющих подкожные опухоли KB. Приблизительно через 8 суток после инокуляции опухоли в подкожный слой правой подмышечной впадины посредством 1×106 клеток KB (средний объем опухоли при to = 50-100 мм3) мышам (5/группа) проводили внутривенные инъекции три раза в неделю (TIW) в течение 3 недель посредством 5 мкмоль/кг конъюгата для доставки лекарственного средства или эквивалентного объема дозы PBS (контроль). Рост опухоли измеряли с использованием штангенциркуля с интервалами 2 суток или 3 суток в каждой группе по введению. Объемы опухолей вычисляли с использованием выражения V = a×b2/2, где "a" представляет собой длину опухоли и "b" представляет собой ширину, выраженную в миллиметрах.
ПРИМЕР СПОСОБА 3. Ингибирование клеточного синтеза ДНК.
Соединения, описанные в настоящем описании, оценивали с использованием анализа цитотоксичности in vitro, который предсказывает способность лекарственного средства ингибировать рост положительных в отношении рецептора для фолата клеток KB. Соединения состояли из фолата, связанного с соответствующим химиотерапевтическим лекарственным средством, как получали в соответствии с протоколами, описанными в настоящем описании. Клетки KB подвергали воздействию указанных концентраций конъюгата фолат-лекарственное средство в течение вплоть до 7 ч при 37°C в отсутствие или в присутствии по меньшей мере 100-кратного избытка фолиевой кислоты. Затем клетки промывали один раз свежей культуральной средой и инкубировали в свежей культуральной среде в течение 72 часов при 37°C. Жизнеспособность клеток оценивали с использованием анализа включения 3H-тимидина.
Как представлено в настоящем описании на фигурах, зависимая от дозы цитотоксичность была измеримой, и в большинстве случаев значения IC50 (концентрации конъюгата лекарственного средства, требуемой для снижения включения 3H-тимидина во вновь синтезируемую ДНК, на 50%) находились в низком наномолярном диапазоне. Более того, цитотоксичность этих конъюгатов была снижена в присутствии избытка фолиевой кислоты, указывая на то, что наблюдаемое уничтожение клеток было опосредовано рецептором для фолата.
ПРИМЕР СПОСОБА 4. Анализ относительного связывания. Аффинность рецепторов для фолата (FR) в отношении фолата определяли в соответствии с описанным ранее способом (Westerhof G.R., J.H. Schornagel et al. (1995) Mol. Pharm. 48: 459-471) с небольшой модификацией. В кратком изложении, FR-положительные клетки KB плотно высевали в 24-луночные планшеты для культивирования клеток и позволяли прикрепляться к пластмассе в течение 18 ч. Использованную среду для инкубации заменяли в исследуемых лунках не содержащей фолата RPMI (FFRPMI), дополненной 100 нМ 3H-фолиевой кислотой в отсутствие и присутствии возрастающих концентраций тестируемого образца или фолиевой кислоты. Клетки инкубировали в течение 60 мин при 37°C, а затем промывали 3 раза посредством PBS, pH 7,4. В каждую лунку добавляли пятьсот микролитров 1% SDS в PBS, pH 7,4. Затем клеточные лизаты собирали и добавляли в отдельные флаконы, содержащие 5 мл сцинтилляционной смеси, а затем подсчитывали радиоактивность. Пробирки с отрицательным контролем содержали только 3H-фолиевую кислоту в FFRPMI (без конкурента). Пробирки с положительным контролем содержали конечную концентрацию фолиевой кислоты 1 мМ, и из всех образцов вычитали CPM, измеренные в этих образцах (соответствующие неспецифичному связыванию метки). Следует отметить, что относительную аффинность определяли как обратное молярное соотношение для соединения, требуемого для вытеснения 50% 3H-фолиевой кислоты, связанной с FR на клетках KB, и относительной аффинности фолиевой кислоты для FR было присвоено значение 1.
СПОСОБ ПРИМЕРА 5. Анализ объема опухоли 4T-1. От шести до семи мышей в возрасте одной недели (самки линии Balb/c) получали от Harlan, Inc., Indianapolis, IN. Мышей содержали на не содержащем фолата корме Harlan всего в течение трех недель до начала и в ходе этого эксперимента. Отрицательные в отношении рецептора для фолата опухолевые клетки 4T-1 (1×106 клеток на животного) инокулировали в подкожный слой правой подмышечной области. Приблизительно через 5 суток после инокуляции опухоли, когда средний объем опухоли 4T-1 составлял ~100 мм3, мышам (5/группа) проводили внутривенную инъекцию три раза в неделю (TIW), в течение 3 недель, 3 мкмоль/кг конъюгата для доставки лекарственного средства или эквивалентного объема дозы PBS (контроль). Рост опухоли определяли с использованием штангенциркуля с интервалами 2 суток или 3 суток в каждой группе по введению. Объемы опухолей вычисляли с использованием выражения V = a×b2/2, где "a" представляет собой длину опухоли и "b" представляет собой ширину, выраженную в миллиметрах.
ПРИМЕР СПОСОБА 6. Определение массы. Процентное изменение массы мышей определяли у мышей (5 мышей/группа) на указанные сутки после инокуляции опухоли (PTI), как представлено на графике для образцов, описанных в связанном с этим способом анализе объема опухоли.
ПРИМЕР СПОСОБА 7. Общий способ получения линкеров фолат-пептиды. Линкеры, описанные в настоящем описании, которые включают пептид, получают с помощью последовательного подхода с полимерной основой с использованием стандартных способов, таких как стратегия Fmoc на чувствительной к кислоте смоле Fmoc-AA-Wang. В качестве иллюстративного примера фолатсодержащий пептидильный фрагмент Pte-Glu-(AA)n-NH(CHR2)CO2H (3) получают способом, представленным на схеме 1, из смолы Wang с прикрепленными аминокислотами и защищенным Fmoc синтезом аминокислот.
Схема 1
Figure 00000040
(a) 20% пиперидин/DMF; (b) Fmoc-AA-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (c) Fmoc-Glu-O-t-Bu или Fmoc-Glu(γ-O-t-Bu)-OH, PyBop, DIPEA, DMF; (d) N10(TFA)-Pte-OH; PyBop, DIPEA, DMSO; (e) TFAA, (CH2SH)2, i-Pr3SiH; (f) NH4OH, pH 9-10.
В этом иллюстративном варианте осуществления процесса, описанного в настоящем описании, R1 представляет собой Fmoc, R2 представляет собой требуемую пригодным образом защищенную боковую цепь аминокислоты, Wang представляет собой 2-хлортритил-смолу и DIPEA представляет собой диизопропилэтиламин. Используют стандартные способы присоединения, такие как PyBOP и другие способы, описанные в настоящем описании или известные в данной области, где средство для присоединения, в качестве иллюстративного примера, применяют в качестве активирующего реагента для обеспечения эффективного присоединения. Защитные группы Fmoc удаляют после каждой стадии присоединения в стандартных условиях, таких как обработка пиперидином, фторидом тетрабутиламмония (TBAF) и т.п. Используют соответствующим образом защищенные аминокислотные структурные элементы, такие как Fmoc-Glu-OtBu, N10-TFA-Pte-OH и т.п., как описано в схеме 1 и представлено на стадии (b) как Fmoc-AA-OH. Таким образом, AA относится к любому исходному веществу на основе аминокислот, которое является соответствующим образом защищенным. Следует понимать, что под термином "аминокислота", как используют в настоящем описании, подразумевают любой реагент, имеющий функциональную группу как амина, так и карбоновой кислоты, разделенные одним или несколькими атомами углерода, и он включает встречающиеся в природе альфа- и бета-аминокислоты, а также аминокислотные производные и аналоги этих аминокислот. В частности, аминокислоты, имеющие защищенные боковые цепи, такие как защищенный серин, треонин, цистеин, аспартат и т.п., также можно использовать в синтезе фолат-пептида, описанном в настоящем описании. Кроме того, также в синтез фолат-пептида, описанный в настоящем описании, можно также включать в качестве исходных веществ гамма-, дельта- или более длинные гомологичные аминокислоты. Кроме того, аналоги аминокислот, имеющие гомологичные боковые цепи или чередующиеся ветвящиеся структуры, такие как норлейцин, изовалин, β-метилтреонин, β-метилцистеин, β,β-диметилцистеин и т.п., также могут быть включены в качестве исходных веществ в синтез фолат-пептида, описанный в настоящем описании.
Последовательность присоединения (стадии (a) и (b)), включающую Fmoc-защищенные аминокислоты (AA) формулы Fmoc-AA-OH, проводят "n" раз для получения пептида на твердой подложке (2), где n представляет собой целое число и может составлять от 0 до приблизительно 100. После последней стадии присоединения остающуюся группу Fmoc удаляют (стадия (a)) и пептид последовательно присоединяют к производному глутамата (стадия (c)), удаляют защитную группу и присоединяют к TFA-защищенной птероевой кислоте (стадия (d)). Затем пептид отщепляют от полимерной подложки посредством обработки трифторуксусной кислотой, этандитиолом и триизопропилсиланом (стадия (e)). Эти условия реакции приводят к одновременному удалению защитных групп t-Bu, t-Boc и Trt, которые могут образовывать часть соответствующим образом защищенных боковых цепей аминокислот. Защитную группу TFA удаляют посредством обработки основанием (стадия (f)) с получением содержащего фолат пептидильного фрагмента (3).
ПРИМЕРЫ СОЕДИНЕНИЙ
ПРИМЕР 1
Figure 00000041
В соответствии с общим способом примера способа 7 (схема 1) связанный со смолой Wang 4-метокситритил (MTT)-защищенный CyS-NH2 подвергали реакции в соответствии со следующей последовательностью: 1) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 2) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 3) a. Fmoc-Arg(Pbf)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 5) a. Fmoc-Glu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 6) N10-TFA-птероевая кислота, PyBOP, DIPEA. Защитные группы MTT, tBu и Pbf удаляли посредством TFA/H2O/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5) и защитную группу TFA удаляли посредством водного раствора NH4OH при pH 9,3. Выбранные данные 1H-ЯМР (D2O) δ (м.д.) 8,68 (с, 1H, FA H-7), 7,57 (д, 2H, J=8,4 Гц, FA H-12 и 16), 6,67 (д, 2H, J=9 Гц, FA H-13 и 15), 4,40-4,75 (м, 5H), 4,35 (м, 2H), 4,16 (м, 1H), 3,02 (м, 2H), 2,55-2,95 (м, 8H), 2,42 (м, 2H), 2,00-2,30 (м, 2H), 1,55-1,90 (м, 2H), 1,48 (м, 2H); МС (ESI, m+H+) 1046.
ПРИМЕР 2
Figure 00000042
В соответствии с общим способом примера способа 7 (схема 1) связанный со смолой Wang 4-метокситритил (MTT)-защищенный CyS-NH2 подвергали реакции в соответствии со следующей последовательностью: 1) a. Fmoc-β-аминоаланин(NH-MTT)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 2) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 3) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 5) a. Fmoc-Glu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 6) N10-TFA-птероевая кислота, PyBOP, DIPEA. Защитные группы MTT, tBu и TFA удаляли посредством a. 2% гидразин/DMF; b. TFA/H2O/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5).
Для получения использовали реагенты, представленные в приведенной ниже таблице:
Реагент (Ммоль) Эквиваленты Количество
H-Cys(4-метокситритил)-2- хлортритил-смола (дозировка 0,56 ммоль/г) 0,56 1 1,0 г
Fmoc-β-аминоаланин(NH-MTT)-OH 1,12 2 0,653 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Glu-OtBu 1,12 2 0,477 г
N10TFA-птероевая кислота (растворенная в 10 мл ДМСО) 0,70 1,25 0,286 г
DIPEA 2,24 4 0,390 мл
PyBOP 1,12 2 0,583 г
Стадию присоединения проводили следующим образом: в емкость для пептидного синтеза добавляют смолу, добавляют раствор аминокислоты, DIPEA и PyBOP. В течение 1 ч барботируют аргоном и промывают 3X посредством DMF и IPA. Перед присоединением каждой аминокислоты для удаления защитной группы Fmoc используют 20% пиперидин в DMF 3X (10 мин). Продолжают до завершения всех 6 стадий присоединения. В конце смолу промывают 2% гидразином в DMF 3X (5 мин) для отщепления защитной группы TFA на птероевой кислоте.
Пептидный аналог отщепляют от смолы с использованием следующего реагента: 92,5% (50 мл) TFA, 2,5% (1,34 мл) H2O, 2,5% (1,34 мл) триизопропилсилан, 2,5% (1,34 мл) этандитиол, стадию отщепления проводят следующим образом: добавляют 25 мл реагента для отщепления и барботируют в течение 1,5 ч, высушивают и промывают 3X посредством оставшегося реагента. Выпаривают до приблизительно 5 мл и осаждают в этиловом эфире. Центрифугируют и высушивают. Очистку проводят следующим образом: Column-Waters NovaPak C18 300×19 мм; буфер A = 10 мМ ацетат аммония, pH 5; B=CAN; от 1%B до 20%B в течение 40 минут при 15 мл/мин, с получением 350 мг (64%); ВЭЖХ - RT 10,307 мин, 100% чистота, спектр 1H-ЯМР согласуется с указанной структурой, и MS (ES-): 1624,8, 1463,2, 1462,3, 977,1, 976,2, 975,1, 974,1, 486,8, 477,8.
ПРИМЕР 3
Figure 00000043
В соответствии с общим способом примера способа 7 (схема 1) связанный со смолой Wang 4-метокситритил (MTT)-защищенный CyS-NH2 подвергали реакции в соответствии со следующей последовательностью: 1) a. Fmoc-1β-аминоаланин(NH-IvDde)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 2) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 3) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 5) a. Fmoc-Glu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 6) N10-TFA-птероевая кислота, PyBOP, DIPEA. Защитные группы MTT, tBu и TFA удаляли посредством a. 2% гидразин/DMF; b. TFA/H2O/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5).
Для получения использовали реагенты, представленные в приведенной ниже таблице:
Реагент (Ммоль) Эквиваленты Количество
H-Cys(4-метокситритил)-2- хлортритил-смола (дозировка 0,56 ммоль/г) 0,56 1 1,0 г
Fmoc-β-аминоаланин(NH-IvDde)-OH 1,12 2 0,596 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Asp(OtBu)-OH 1,12 2 0,461 г
Fmoc-Glu-OtBu 1,12 2 0,477 г
N10TFA-птероевая кислота (растворенная в 10 мл ДМСО) 0,70 1,25 0,286 г
Fm-Тиопропионовая кислота 0,70 1,25 199,08
DIPEA 2,24 4 0,390 мл
PyBOP 1,12 2 0,583 г
Стадию присоединения проводили следующим образом: в емкость для пептидного синтеза добавляют смолу, добавляют раствор аминокислоты в DMF, DIPEA и PyBOP. В течение 1 ч барботируют аргоном и промывают 3X10 мл посредством DMF и IPA. Перед присоединением каждой аминокислоты для удаления защитной группы Fmoc используют 20% пиперидин в DMF, 3X10 мл (10 мин). Продолжают до завершения 6 стадий присоединения. В конце смолу промывают 2% гидразином в DMF 3X10 мл (5 мин) для отщепления защитной группы TFA на птероевой кислоте и защитной группы IvDde на β-аминоаланине. В завершение, к свободному амину β-аминоаланина присоединяют Fmoc-тиопропионовую кислоту в DMF с использованием DIPEA и PyBop. Барботируют аргоном в течение 1 ч и промывают 3X10 мл посредством DMF и IPA. Сушат смолу в атмосфере аргона в течение 30 мин.
Отщепляют пептидный аналог от смолы с использованием следующего реагента, 92,5% (50 мл) TFA, 2,5% (1,34 мл) H2O, 2,5% (1,34 мл) триизопропилсилан, 2,5% (1,34 мл) этандитиол, стадию отщепления проводят следующим образом: добавляют 25 мл реагента для отщепления и барботируют в течение 1,5 ч, сушат и промывают 3X оставшимся реагентом. Выпаривают до приблизительно 5 мл и осаждают в этиловом эфире. Центрифугируют и сушат. Очистку проводили следующим образом: Column-Waters NovaPak C18 300×19 мм; буфер A = 10 мМ ацетат аммония, pH 5; B= CAN; от 1%B до 20%B в течение 40 минут при 15 мл/мин, с получением 450 мг (65%); спектр 1H-ЯМР согласуется с указанной структурой.
ПРИМЕР 4
Figure 00000044
В соответствии с общим способом примера способа 7 (схема 1) связанный со смолой Wang (MTT)-защищенный CyS-NH2 подвергали реакции в соответствии со следующей последовательностью: 1) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 2) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 3) a. Fmoc-Arg(Pbf)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 4) a. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 5) a. Fmoc-Glu(γ-OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 6) N10-TFA-птероевая кислота, PyBOP, DIPEA. Защитные группы MTT, tBu и Pbf удаляли посредством TFA/H2O/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5) и защитную группу TFA удаляли посредством водного раствора NH4OH при pH 9,3. Спектр 1H-ЯМР соответствовал указанной структуре.
ПРИМЕР 5
Figure 00000045
В соответствии с общим способом примера способа 7 (Схема 1) связанный со смолой Wang MTT-защищенный D-CyS-NH2 подвергали реакции в соответствии со следующей последовательностью: 1) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 2) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 3) a. Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 4) a. Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 5) a. Fmoc-D-Glu-OtBu, PyBOP, DIPEA; b. 20% пиперидин/DMF; 6) N10-TFA-птероевая кислота, PyBOP, DIPEA. Защитные группы MTT, tBu и Pbf удаляли посредством TFA/H2O/TIPS/EDT (92,5:2,5:2,5:2,5) и защитную группу TFA удаляли посредством водного раствора NH4OH при pH 9,3. Спектр 1H-ЯМР соответствовал указанной структуре.
ПРИМЕР 6
Figure 00000046
К раствору гидразида дезацетилвинбластина (668 мг) в 5 мл DCM последовательно добавляли 2-[(бензотриазол-1-ил)-(оксикарбонилокси)этилдисульфанил]пиридин HCl (601 мг) и 378 мкл DIPEA при 0°C. Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 часов. TLC (15% MeOH в DCM) показал полное превращение. Смесь очищали посредством хроматографии на силикагеле (1:9 MeOH/DCM). Объединенные фракции выпаривали, повторно растворяли в DCM и промывали посредством 10% Na2CO3, солевого раствора, сушили (MgSO4) и выпаривали до 550 мг (80%); ВЭЖХ - RT 12,651 мин, 91% чистота, спектр 1H-ЯМР соответствует указанной структуре, и МС (ESI+): 984,3, 983,3, 982,4, 492,4, 491,9, 141,8. Дополнительное подробное описание этого процесса описано в публикации патентной заявки США № US 2005/0002942 A1, включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
ПРИМЕР 7
Митомицин C-этилдисульфидпропионовую кислоту получали в соответствии со следующей схемой
Figure 00000047
(a) диизопропилэтиламин (DIPEA), MeOH.
К раствору аминоэтилдисульфидпропионовой кислоты (81 мг, 0,372 ммоль) в 2 мл метанола (MeOH) добавляли DIPEA (0,13 мл, 0,746 ммоль). К этому раствору медленно добавляли митомицин-A (100 мг, 0,286 ммоль) в MeOH (3,0 мл). Полученному раствору позволяли перемешаться в течение 3 ч. Анализ TLC (20% MeOH в CHCl3) показал, что реакция завершилась. Растворитель удаляли при пониженном давлении и осадок очищали с использованием колонки с диоксидом кремния. Градиентное элюирование (от 10% до 20% MeOH в CHCl3/0,5% TEA) привело к очищенным фракциям продукта (110 мг, 77%). Выбранные сигналы 1H-ЯМР (CDCl3) δ (м.д.) 3,50 (д, 1H), 3,56 (дд, 1H), 3,90 (т, 2H), 4,15 (д, 1H), 4,25 (т, 1H), 4,68 (дд, 1H).
ПРИМЕР 8
Figure 00000048
Получали в соответствии с процессом примера 7.
ПРИМЕР 9
Figure 00000049
Во флаконе для центрифугирования из полипропилена в 5 мл воды растворяли вещество примера 2 (82 мг, 0,084 ммоль) и барботировали аргоном в течение 10 мин. В другом флаконе барботировали аргоном 0,1 Н раствор NaHCO3 в течение 10 мин. pH раствора линкера доводили приблизительно до 6,9 с использованием 0,1 Н раствора NaHCO3. К указанному выше раствору медленно добавляли производное гидразида винбластина (вещество примера 6, 91 мг, 0,092 мМ) в 5 мл тетрагидрофурана (THF). Полученный прозрачный раствор перемешивали в атмосфере аргона в течение от 15 мин до 1 ч. Мониторинг хода реакции проводили посредством аналитической ВЭЖХ (10 мМ ацетат аммония, pH 7,0 и ацетонитрил). THF выпаривали и водный раствор фильтровали и инъецировали в колонку для препаративной ВЭЖХ (XTerra Column, 19×300 мМ). Элюирование посредством 1 мМ фосфата натрия, pH 7,0, и ацетонитрила приводило к очищенным фракциям, содержащим продукт, который выделяли после лиофилизации в течение 48 ч (78 мг, 50%); C83H103N19O26S2; точная масса: 1845,68; ММ: 1846,95; ВЭЖХ - RT 15,113 мин, 100% чистота, спектр 1H-ЯМР соответствовал указанной структуре, и МС (ES-): 1846,6, 1845,5, 933,3, 924,2, 923,3, 922,5, 615,6, 614,7, 525,0.
На ФИГ. 1A и 1B представлена относительная аффинность связывания для фолата относительно вещества примера 9 и эффекты вещества примера 9 на включение 3H-тимидина, IC50 конъюгата (58 нМ) и что фолат конкурирует с конъюгатом за связывание с рецептором для фолата, показывая специфичность связывания конъюгата. Анализы проводили в соответствии с примерами способов 4 и 3 соответственно.
На ФИГ. 1B представлена активность вещества примера 9 в отношении включения 3H-тимидина в клетках KB с избытком фолиевой кислоты (○) и без него (●); IC50 примера 9 составляет приблизительно 58 нМ.
ПРИМЕР 10
Figure 00000050
Во флаконе для центрифугирования из полипропилена в 7,5 мл воды растворяли вещество примера 3 (56 мг) и барботировали аргоном в течение 10 мин. В другом флаконе 0,1 Н раствор NaHCO3 барботировали аргоном в течение 10 мин. pH раствора вещества примера 3 доводили до 6,9 с использованием 0,1 Н раствора NaHCO3. К раствору вещества примера 3 медленно добавляли вещество примера 6 (44 мг) в 7,5 мл тетрагидрофурана (THF). Полученный прозрачный раствор перемешивали в атмосфере аргона в течение от 15 мин до 1 ч. Мониторинг хода реакции проводили посредством аналитической ВЭЖХ (10 мМ ацетат аммония, pH 7,0 и ацетонитрил). THF выпаривали и водный раствор фильтровали и очищали посредством препаративной ВЭЖХ. Элюирование посредством 1 мМ фосфата натрия, pH 7,0, и ацетонитрила привело к очищенным фракциями которые объединяли, выпаривали при температуре окружающей среды, и полученный водный раствор доводили до pH 4,0 с использованием 0,1 Н HCl. Вещество примера 10 выделяли после лиофилизации в течение 48 ч (61 мг, 64%). Спектр 1H-ЯМР и данные LCMS соответствовали указанной структуре.
ПРИМЕР 11
Figure 00000051
Способ A. Вещество примера 11 получали в соответствии со следующим процессом:
Figure 00000052
(a) представляет собой DCC, DIPEA, THF; и (b) представляет собой смесь вода/THF при pH 8,5.
Митомицин C-этилдисульфидпропионовую кислоту (34,4 мг, 0,069 ммоль) растворяли в сухом THF (1 мл) в атмосфере аргона. Добавляли N-гидроксисукцинамид (7,9 мг, 0,069 ммоль), а затем дициклогексилкарбодиимид (14,2 мг, 0,069 ммоль). Добавляли диизопропилэтиламин (0,024 мл, 0,138 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение 3 ч. Во флаконе для центрифугирования из полипропилена в 3 мл воды растворяли винбластин-фолат (пример 9,26 мг, 0,014 ммоль). pH раствора медленно доводили до 8,5 с использованием 0,1 Н NaHCO3. К раствору фолата добавляли активированное производное митомицина C, полученное, как описано в настоящем описании, в качестве раствора в 3 мл THF. Полученный раствор перемешивали в атмосфере аргона в течение от 15 мин до 1 ч, где мониторинг хода реакции проводили посредством аналитической ВЭЖХ (10 мМ ацетат аммония и ацетонитрил, pH 7,0). THF удаляли при пониженном давлении и водный раствор фильтровали и инъецировали в колонку для препаративной ВЭЖХ (X-terra Column, 19×300 мм). Элюирование посредством 1 мМ фосфата натрия (pH 7,0) и ацетонитрила приводило к очищенным фракциям, которые выпаривали и лиофилизировали в течение 48 ч с получением 12 мг (50% исходя из выделенного исходного вещества). Данные 1H-ЯМР и масс-спектрометрии подтвердили указанную структуру, как представлено на ФИГ. 9 и 10 соответственно. C103H127N23O32S4; Точная масса 2325,79; ММ 2327,51. ВЭЖХ - RT 20,054 мин, 99% чистота, спектр 1H-ЯМР соответствует указанной структуре, и МС (ES+): 1552,5, 116,0, 1165,3, 1164,3, 1148,4, 744,9, 746,4, 745,6.
Способ B: Безводный DMF (4,5 мл) впрыскивали в смесь вещества примера 10 (103 мг, 48,7 мкмоль) и вещества примера 8 (NO2-PySSCH2CH2-MMC, 33,4 мг, 1,25 экв.) при комнатной температуре в атмосфере аргона. В полученный раствор последовательно впрыскивали DIPEA (84,9 мкл, 10 экв.) и DBU (72,9 мкл, 10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 20 минут, затем переносили в перемешиваемый диэтиловый эфир (50 мл). Полученную суспензию центрифугировали, осадок промывали диэтиловым эфиром (15 мл×2), затем растворяли в фосфатном буфере (9 мл, 1,25 мМ, pH 6,8) и подвергали препаративной ВЭЖХ (Колонка: Waters XTerra RP18, 7 мкм, 19×300 мм; подвижные фазы: A = 1,25 мМ фосфатный буфер, pH 6,8, B = ацетонитрил; Способ: от 10%B до 40%B в течение 25 мин при 25 мл/мин). Фракции через 11,72-13,88 минут собирали и лиофилизировали с получением 105,8 мг вещества, содержащего 99,2 мг и 6,6 мг фосфатных солей.
Способ C. Вещество примера 11 получали в соответствии со следующим процессом с выходом 34%:
Figure 00000053
(a) NHS, DCC-Смола, DIPEA, THF; (b) Пример 7, DIPEA, DMSO.
На ФИГ. 2 представлена относительная аффинность связывания для фолиевой кислоты (●, 1,0) относительно вещества примера 11 (■, 0,21). Данные на ФИГ. 2 показывают, что конъюгат обладает высоким относительным связыванием с рецептором для фолата. Анализ проводили в соответствии с примером способа 4.
На ФИГ. 1B и 3 представлены эффекты веществ примеров 9 (имеющее одно лекарственное средство) и 11 (имеющее два лекарственных средства) соответственно на включение 3H-тимидина, IC50 конъюгатов вещества примера 9 (58 нМ) и вещества примера 11 (5 нМ). Данные на ФИГ. 1B и 3 также показывают, что фолиевая кислота конкурирует с конъюгатами за связывание с рецептором для фолата, демонстрируя специфичность связывания конъюгата. Анализ проводили в соответствии с примером способа 3. Кроме того, вещество примера 11, имеющее два лекарственных средства, показало эффективность, более чем в 10 раз превышающую эффективность в отношении рецептора для фолата, чем вещество примера 9, имеющее только одно лекарственное средство.
На ФИГ. 4 представлена цитотоксическая активность in vitro вещества примера 11 (a) на три различные опухолевые клеточные линии (KB, 4T-1cl2 и ID8-cl15). Кроме того, на ФИГ. 4 показано, что цитотоксическая активность вещества примера 11 снижается в присутствии избытка фолиевой кислоты (b), указывая на то, что вещество примера 11 действует на рецептор для фолата.
На ФИГ. 5A и 5B представлена активность вещества примера 11 в двух различных дозах (1 мкмоль/кг и 2 мкмоль/кг) в отношении опухолей рака легкого M109 у мышей Balb/c и массы мышей Balb/c (Balb/c использовали для анализа объема опухоли M109). Анализы проводили в соответствии с примерами способов 1 и 6 соответственно. Вещество примера 11 ингибировало рост солидных опухолей, но оказывало небольшой эффект на массу мышей в обеих дозах. Кроме того, более высокая доза (2 мкмоль/кг) показала сильное ингибирование роста опухоли даже после завершения дозирования на 20 сутки. Вертикальная линия соответствует последним суткам дозирования (20 сутки). Тестировали пять животных, и при более высокой дозе, составляющей 2 мкмоль/кг, у всех пяти мышей был выявлен полный ответ.
На ФИГ. 6 представлена активность вещества примера 11 в дозе 1 мкмоль/кг TIW в течение 2 недель в отношении FR-положительных опухолей KB с 40 мкмоль/кг EC20 (комплекс рения) (b) и без него (c) по сравнению с контролями (a). Вертикальной пунктирной линией указаны последние сутки дозирования. На фигурах показано, что вещество примера 11 ингибирует рост солидных опухолей и что ингибиторный эффект предотвращается (происходит конкуренция) посредством комплекса рения EC20. Кроме того, на фигурах показано, что введение вещества примера 11 не оказывает значительного влияния на массу тестируемого животного по сравнению с контролями. EC20 (комплекс рения) представляет собой соединение формулы
Figure 00000054
хелатированное с рением. Получение EC20 описано в публикации патентной заявки США № US 2004/0033195 A1, описание процесса синтеза которой включено в настоящее описание в качестве ссылки. Анализ проводили в соответствии с примером способа 2. EC20 действует в качестве конкурента вещества примера 11 на рецепторы для фолата, и результаты показывают специфичность эффектов вещества примера 11.
На ФИГ. 8 представлена активность вещества примера 11 в дозе 1 мкмоль/кг TIW в отношении положительных по рецептору для фолата подкожно имплантированных ксенотрансплантированных опухолей KB с добавлением 40 мкмоль/кг EC20 (комплекс рения) (b) и без него (c) у мышей nude. Данные на ФИГ. 8 показывают, что вещество примера 11 ингибирует рост солидных опухолей и что ингибиторный эффект предотвращается посредством комплекса рения EC20 (происходит конкуренция с ним), (b) относительно (c). Кроме того, данные на ФИГ. 8 показывают, что введение вещества примера 11 не оказывает значительного влияния на массу тестируемых в модели на животных мышей nude по сравнению с контролями (a).
На ФИГ. 10 представлена активность вещества примера 11 в дозе 2 мкмоль/кг TIW (e) в отношении положительных по рецептору для фолата опухолей человека у мышей nude по сравнению со смесью неконъюгированных основных лекарственных средств, митомицина C и дезацетилвинбластина моногидразида в дозе 0,5 мкмоль/кг TIW (b), 1 мкмоль/кг TIW (c) и 2 мкмоль/кг TIW (d) по сравнению с необработанными контролями (a). Данные на ФИГ. 10 показывают, что вещество примера 11 ингибирует рост солидных опухолей, и оно привело к полному ответу у пяти из пяти тестированных животных. Напротив, введение смеси основных лекарственных средств в дозе 0,5 мкмоль/кг TIW (b) или в дозе 1 мкмоль/кг TIW (c) не показало полного ответа ни у одного из пяти тестированных животных. Введение смесей основных лекарственных средств с высокими дозами в дозе 2 мкмоль/кг TIW (d) прекратили до 20 суток вследствие выявленной токсичности, как представлено на ФИГ. 11, показывающей эффект основных лекарственных средств и вещества примера 11 на массу тестированного животного.
На ФИГ. 11 представлено, что вещество примера 11 (e) не оказывает значительного влияния на массу тестируемых животных в ходе введения по сравнению с контролями (a). В противоположность веществу примера 11, данные на ФИГ. 11 показывают, что пролонгированное введение более низких доз смеси неконъюгированных основных лекарственных средств, митомицина C и дезацетилвинбластина моногидразида (0,5 мкмоль/кг TIW (b) и 1 мкмоль/кг TIW (c)) приводило к значительному снижению массы тестируемых животных по сравнению с контролями (a). Кроме того, смеси неконъюгированных основных лекарственных средств с высокими дозами (2 мкмоль/кг TIW (d)) вызывали наибольшее снижение массы, что привело к прекращению теста.
Соединения, описанные в настоящем описании, могут быть пригодными для лечения крупных или развернутых опухолей. В качестве иллюстративного примера вещество примера 11 является эффективным в отношении крупных опухолей. На ФИГ. 12 представлена активность вещества примера 11 в дозе 2 мкмоль/кг TIW, 2 недели, на крупные (250 мм3, 500 мм3 и 750 мм3) подкожные опухоли KB. Введение вещества примера 11 начинали, когда опухоли достигали одного из трех указанных объемов, как показано вертикальными стрелками, соответствующими объему опухоли. Данные на ФИГ. 12 показывают, что вещество примера 11 ингибирует рост крупных опухолей и приводит к полному ответу у тестируемых животных.
На ФИГ. 13 показана активность вещества примера 11 (e) в дозе 1 мкмоль/кг TIW в течение двух недель введения на развернутые подкожные опухоли KB по сравнению с контролями (a); каждым конъюгатом с одним лекарственным средством отдельно, конъюгатом митомицина C (b) и конъюгатом дезацетилвинбластина моногидразида (c) или смесью этих конъюгатов с одним лекарственным средством (d). Каждый конъюгат лекарственного средства дозировали на одном уровне, составляющем 1 мкмоль/кг TIW в течение двух недель введения. На фигуре показано, что вещество примера 11 действует лучше, чем каждый из конъюгатов с одним лекарственным средством или смесь обоих конъюгатов с одним лекарственным средством. Удивительно, что смесь конъюгатов с одним лекарственным средством не оказывала значительно лучшего действия, чем конъюгаты с одним лекарственным средством, которые дозировали отдельно, и ни одна из схем дозирования конъюгатов с одним лекарственным средством не отличалась статистически значимо от контролей. Только соединение примера 11 было лучше контролей. Кроме того, эти данные подтверждают синергический эффект наличия в одном конъюгате как лекарственного средства на основе алкалоида барвинка, так и лекарственного средства митомицина.
ПРИМЕРЫ с 12 по 14
Проводили в соответствии с процессами и условиями, описанными в настоящем описании, включая процессы, описанные в настоящем описании выше для вещества примера 11. Дополнительное подробное описание получения требуемого активированного тиосульфонатом или пиридилдитио винбластина и активированных малеимидом производных винбластина приведено в публикации патентной заявки США № US 2005/0002942 A1. Дополнительное подробное описание получения требуемых производных митомицина приведено в публикации патентной заявки США № US 2005/0165227 A1, описание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.
ПРИМЕР 12
Figure 00000055
На ФИГ. 15 представлена активность вещества примера 12 в концентрации 100 нМ на включение 3H-тимидина в FR-положительные клетки KB относительно периода повторения импульсов. Анализ проводили в соответствии с примером способа 3.
ПРИМЕР 13
Figure 00000056
ПРИМЕР 14
Figure 00000057

Claims (3)

1. Соединение, имеющее следующую формулу:
Figure 00000058
2. Фармацевтическая композиция для устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине, обладающем популяцией патогенных клеток, включающая соединение по п.1, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель для него, или их комбинацию.
3. Способ устранения популяции патогенных клеток в животном-хозяине, обладающем популяцией патогенных клеток, где члены популяции патогенных клеток обладают доступным участком для связывания связывающей фолатный рецептор клеточной поверхности группы, и где участок для связывания экспрессируется только патогенными клетками, сверхэкспрессируется или предпочтительно экспрессируется ими, где указанный способ включает стадию введения указанному хозяину соединения по п.1, или его фармацевтической композиции.
RU2008110495/15A 2005-08-19 2006-08-18 Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами RU2470668C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US70995005P 2005-08-19 2005-08-19
US60/709,950 2005-08-19
US78755806P 2006-03-30 2006-03-30
US60/787,558 2006-03-30
PCT/US2006/032561 WO2007022494A2 (en) 2005-08-19 2006-08-18 Multi-drug ligand conjugates

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012136587/15A Division RU2012136587A (ru) 2005-08-19 2012-08-27 Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2008110495A RU2008110495A (ru) 2009-09-27
RU2470668C2 true RU2470668C2 (ru) 2012-12-27

Family

ID=37654952

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008110495/15A RU2470668C2 (ru) 2005-08-19 2006-08-18 Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами
RU2012136587/15A RU2012136587A (ru) 2005-08-19 2012-08-27 Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012136587/15A RU2012136587A (ru) 2005-08-19 2012-08-27 Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами

Country Status (11)

Country Link
US (3) US8465724B2 (ru)
EP (2) EP2374480A3 (ru)
JP (2) JP5475992B2 (ru)
KR (2) KR20130113543A (ru)
CN (2) CN103893779A (ru)
AU (1) AU2006279304A1 (ru)
BR (1) BRPI0615354A2 (ru)
CA (1) CA2617660C (ru)
ES (1) ES2468240T3 (ru)
RU (2) RU2470668C2 (ru)
WO (1) WO2007022494A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2798981C2 (ru) * 2017-08-18 2023-06-30 Байли-Байо (Чэнду) Фармасьютикал Ко., Лтд. Конъюгат антитела с аматоксином неприродного типа

Families Citing this family (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3831382A1 (de) * 1988-09-15 1990-04-12 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von 2-alkoxy-benzolsulfonamid-verbindungen
ATE427948T1 (de) * 2001-04-24 2009-04-15 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
AR042942A1 (es) 2003-01-27 2005-07-06 Endocyte Inc Conjugados de administracion de drogas de union de receptores de vitaminas
CN101098854B (zh) 2004-07-23 2012-12-05 恩多塞特公司 二价连接体及其轭合物
JP5289935B2 (ja) * 2005-03-16 2013-09-11 エンドサイト，インコーポレイテッド プテロイン酸およびその結合体の合成と精製
BRPI0615354A2 (pt) 2005-08-19 2011-05-17 Endocyte Inc conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor, composição farmacêutica que o compreende, bem como seu uso
JP2009504783A (ja) * 2005-08-19 2009-02-05 エンドサイト，インコーポレイテッド ビンカアルカロイド、類似体および誘導体のリガンド結合体
WO2008093166A2 (en) 2006-05-11 2008-08-07 Ghent University Sialoadhesin-related compositions and methods
CA2678427C (en) * 2007-02-16 2016-06-07 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Dual acting prodrugs
US20100104626A1 (en) 2007-02-16 2010-04-29 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
EP2129402A2 (en) * 2007-02-16 2009-12-09 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor and antigen targeted prodrug
WO2008112873A2 (en) * 2007-03-14 2008-09-18 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
CN101646639A (zh) 2007-04-11 2010-02-10 默克阿泼洛发股份公司 18f-标记的叶酸
EP3569251A1 (en) * 2007-06-25 2019-11-20 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
US20110262354A1 (en) 2007-07-13 2011-10-27 Emory University Cyanine-containing compounds for cancer imaging and treatment
CA2696627C (en) 2007-08-17 2016-09-27 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
WO2009055562A1 (en) 2007-10-25 2009-04-30 Endocyte, Inc. Tubulysins and processes for preparing
CN102215844A (zh) 2008-09-17 2011-10-12 恩多塞特公司 抗叶酸剂的叶酸受体结合轭合物
WO2010045584A1 (en) * 2008-10-17 2010-04-22 Endocyte, Inc. Folate targeting of nucleotides
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
EP2549276B1 (en) * 2009-08-10 2015-02-25 UCL Business PLC Reversible covalent linkage of functional molecules
JP5780961B2 (ja) * 2009-09-07 2015-09-16 ニプロパッチ株式会社 経皮吸収型製剤
WO2011069116A1 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
WO2012047525A2 (en) * 2010-09-27 2012-04-12 Endocyte, Inc. Folate conjugates for treating inflammation of the eye
AU2011348085B2 (en) * 2010-12-23 2016-12-08 Alkermes Pharma Ireland Limited Multi- API loading prodrugs
US20140243282A1 (en) * 2010-12-31 2014-08-28 Satish Reddy Kallam Methods and compositions for designing novel conjugate therapeutics
WO2013126797A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Purdue Research Foundation Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
HK1212618A1 (zh) 2012-10-16 2016-06-17 恩多塞特公司 含有非天然氨基酸的藥物遞送綴合物以及其使用方法
KR102354613B1 (ko) 2012-11-15 2022-01-21 엔도사이트, 인코포레이티드 Psma 발현 세포에 의해 야기되는 질병을 치료하기 위한 컨쥬게이트
SI2956173T1 (sl) 2013-02-14 2017-06-30 Bristol-Myers Squibb Company Spojine tubulizina, postopki pridobivanja in uporaba
HUE066137T2 (hu) 2013-10-18 2024-07-28 Novartis Ag A prosztata-specifikus membrán antigén (PSMA) jelzett inhibitorai, alkalmazásuk képalkotásban és gyógyszerkészítmények prosztatarák kezelésére
JP6464166B2 (ja) 2013-11-14 2019-02-06 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 陽電子放出断層撮影用の化合物
US10077287B2 (en) 2014-11-10 2018-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Tubulysin analogs and methods of making and use
WO2016089879A1 (en) * 2014-12-01 2016-06-09 Endocyte, Inc. Conjugates of garftase inhibitors
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
CN104569416B (zh) * 2015-01-22 2016-04-13 中国农业大学 检测稻曲菌素b的方法及其专用酶联免疫试剂盒
JP6676650B2 (ja) * 2015-03-13 2020-04-08 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 疾患を処置するためのコンジュゲート
WO2016183131A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Purdue Research Foundation Ligand ionophore conjugates
CN108135881B (zh) 2015-08-11 2020-11-13 同宜医药（苏州）有限公司 多配体药物偶联体及其用途
KR102456433B1 (ko) 2016-03-02 2022-10-19 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 에리불린-기반 항체-약물 콘주게이트 및 사용 방법
EP3429637A4 (en) * 2016-03-16 2020-03-11 Endocyte, Inc. CONJUGATES OF CARBONIC ANHYDRASE IX INHIBITORS AND USES THEREOF
JP7027325B2 (ja) 2016-03-16 2022-03-01 パーデュー・リサーチ・ファウンデイション 炭酸無水酵素ｉｘを標的とする薬剤および方法
EP3445402A4 (en) * 2016-04-21 2019-12-11 The Board Of Regents Of The University Of Texas System METHOD AND COMPOSITIONS FOR DETECTING ANEURYSMS
US20190216935A1 (en) * 2016-05-25 2019-07-18 Purdue Research Foundation Method of treating cancer by targeting myeloid-derived suppressor cells
WO2018089481A1 (en) * 2016-11-08 2018-05-17 Mallinckrodt Llc Mitomycin c prodrug liposome formulations and uses thereof
CA3097381A1 (en) 2018-04-17 2019-10-24 Endocyte, Inc. Methods of treating cancer
EP3846846A4 (en) 2018-09-06 2022-08-03 Cidara Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTION
CN120097930A (zh) 2019-05-20 2025-06-06 因多塞特股份有限公司 制备psma缀合物的方法
TWI861205B (zh) 2019-09-06 2024-11-11 美商席達拉醫療有限公司 用於治療病毒感染之組合物及方法
MX2022002842A (es) * 2019-09-09 2022-06-14 Cidara Therapeutics Inc Composiciones y metodos para el tratamiento del virus sincitial respiratorio.
JP2020117509A (ja) * 2020-03-12 2020-08-06 エンドサイト・インコーポレイテッドＥｎｄｏｃｙｔｅ， Ｉｎｃ． 疾患を処置するためのコンジュゲート
JP2024537396A (ja) * 2021-10-14 2024-10-10 シーザン ハイスーク ファーマシューティカル カンパニー リミテッド ＥｐｈＡ２の二環式ペプチドリガンド及びそのコンジュゲート

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000066091A1 (en) * 1999-05-04 2000-11-09 Biotech Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
WO2001028592A1 (en) * 1999-10-15 2001-04-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents
WO2004069159A2 (en) * 2003-01-27 2004-08-19 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
US20050165227A1 (en) * 2002-05-15 2005-07-28 Vlahov Iontcho R. Vitamin-mitomycin conjugates

Family Cites Families (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2515483A (en) * 1946-08-10 1950-07-18 Merck & Co Inc Diacylated pteroic acid and process for preparing same
US2816110A (en) 1956-11-23 1957-12-10 Merck & Co Inc Methods for the production of substituted pteridines
US3392173A (en) * 1964-03-09 1968-07-09 Lilly Co Eli Novel acyl derivatives of desacetyl-vincaleukoblastine and processes for their preparation
US3387001A (en) * 1964-10-19 1968-06-04 Lilly Co Eli Novel aminoacyl esters of desacetyl vincaleukoblastine
US4203898A (en) * 1977-08-29 1980-05-20 Eli Lilly And Company Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids
US4166810A (en) 1978-04-20 1979-09-04 Eli Lilly And Company Derivatives of 4-desacetyl VLB C-3 carboxyhydrazide
US4337339A (en) * 1979-04-30 1982-06-29 Baker Instruments Corp. Process for preparation of folic acid derivatives
US4639456A (en) * 1980-06-10 1987-01-27 Omnichem S.A. Vinblastin-23-oyl amino acid derivatives
US4316885A (en) * 1980-08-25 1982-02-23 Ayerst, Mckenna And Harrison, Inc. Acyl derivatives of rapamycin
US4713249A (en) 1981-11-12 1987-12-15 Schroeder Ulf Crystallized carbohydrate matrix for biologically active substances, a process of preparing said matrix, and the use thereof
US5140104A (en) * 1982-03-09 1992-08-18 Cytogen Corporation Amine derivatives of folic acid analogs
US4770994A (en) * 1982-07-30 1988-09-13 Abbott Laboratories Determination of carbohydrate acceptors
EP0116208B1 (en) 1982-12-07 1988-03-30 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Mitomycin analogues
ATE64396T1 (de) * 1983-04-29 1991-06-15 Omnichem Sa Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
US4866180A (en) * 1984-02-24 1989-09-12 Bristol-Myers Company Amino disulfide thiol exchange products
JPS60255789A (ja) 1984-06-01 1985-12-17 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd マイトマイシン誘導体，その製造法および抗腫瘍剤
US5266333A (en) 1985-03-06 1993-11-30 American Cyanamid Company Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration of growth hormone
US4650803A (en) * 1985-12-06 1987-03-17 University Of Kansas Prodrugs of rapamycin
US4801688A (en) * 1986-05-27 1989-01-31 Eli Lilly And Company Hydrazone immunoglobulin conjugates
IL82579A0 (en) 1986-05-27 1987-11-30 Lilly Co Eli Immunoglobulin conjugates
EP0280741B1 (en) 1986-08-29 1994-12-07 Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha Mitomycin derivatives
US5006652A (en) 1988-08-08 1991-04-09 Eli Lilly And Company Intermediates for antibody-vinca drug conjugates
US5094849A (en) * 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5108921A (en) * 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5688488A (en) 1989-04-03 1997-11-18 Purdue Research Foundation Composition and method for tumor imaging
AU634314B2 (en) 1989-11-13 1993-02-18 Green Cross Corporation, The Chimeric mouse-human a10 antibody with specificity to a human tumor cell antigen
US5627165A (en) * 1990-06-13 1997-05-06 Drug Innovation & Design, Inc. Phosphorous prodrugs and therapeutic delivery systems using same
US5998603A (en) 1994-09-29 1999-12-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analogs, and oligomers thereof
ES2171392T3 (es) 1990-08-29 2002-09-16 Ct Hospitalier Regional De Nan Poliligandos de proteina unidos a un nucleo de proteina estable.
US5378696A (en) * 1990-09-19 1995-01-03 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5221670A (en) * 1990-09-19 1993-06-22 American Home Products Corporation Rapamycin esters
US5130307A (en) * 1990-09-28 1992-07-14 American Home Products Corporation Aminoesters of rapamycin
US5233036A (en) * 1990-10-16 1993-08-03 American Home Products Corporation Rapamycin alkoxyesters
US5120842A (en) * 1991-04-01 1992-06-09 American Home Products Corporation Silyl ethers of rapamycin
US5100883A (en) * 1991-04-08 1992-03-31 American Home Products Corporation Fluorinated esters of rapamycin
US5194447A (en) * 1992-02-18 1993-03-16 American Home Products Corporation Sulfonylcarbamates of rapamycin
US5118678A (en) * 1991-04-17 1992-06-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5138051A (en) * 1991-08-07 1992-08-11 American Home Products Corporation Rapamycin analogs as immunosuppressants and antifungals
US5118677A (en) * 1991-05-20 1992-06-02 American Home Products Corporation Amide esters of rapamycin
US5169851A (en) 1991-08-07 1992-12-08 American Home Products Corporation Rapamycin analog as immunosuppressants and antifungals
US6335434B1 (en) * 1998-06-16 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc., Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates
US5151413A (en) * 1991-11-06 1992-09-29 American Home Products Corporation Rapamycin acetals as immunosuppressant and antifungal agents
US5159079A (en) * 1991-12-20 1992-10-27 Eli Lilly And Company 2-piperidones as intermediates for 5-deaza-10-oxo- and 5-deaza-10-thio-5,6,7,8-tetrahydrofolic acids
US6004555A (en) 1992-03-05 1999-12-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for the specific coagulation of vasculature
US5302584A (en) * 1992-10-13 1994-04-12 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5258389A (en) 1992-11-09 1993-11-02 Merck & Co., Inc. O-aryl, O-alkyl, O-alkenyl and O-alkynylrapamycin derivatives
US5260300A (en) 1992-11-19 1993-11-09 American Home Products Corporation Rapamycin carbonate esters as immuno-suppressant agents
EP1181938B1 (en) * 1993-04-23 2007-11-14 Wyeth Rapamycin conjugates and antibodies
US5391730A (en) * 1993-10-08 1995-02-21 American Home Products Corporation Phosphorylcarbamates of rapamycin and oxime derivatives thereof
US5385910A (en) * 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Gem-distributed esters of rapamycin
US5385908A (en) * 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Hindered esters of rapamycin
US5385909A (en) * 1993-11-22 1995-01-31 American Home Products Corporation Heterocyclic esters of rapamycin
US5389639A (en) * 1993-12-29 1995-02-14 American Home Products Company Amino alkanoic esters of rapamycin
US5417982A (en) * 1994-02-17 1995-05-23 Modi; Pankaj Controlled release of drugs or hormones in biodegradable polymer microspheres
IL112873A (en) * 1994-03-08 2005-03-20 Wyeth Corp Rapamycin-fkbp12 binding proteins, their isolation and their use
US6171859B1 (en) * 1994-03-30 2001-01-09 Mitokor Method of targeting conjugate molecules to mitochondria
US5362718A (en) 1994-04-18 1994-11-08 American Home Products Corporation Rapamycin hydroxyesters
US5463048A (en) 1994-06-14 1995-10-31 American Home Products Corporation Rapamycin amidino carbamates
US5491231A (en) * 1994-11-28 1996-02-13 American Home Products Corporation Hindered N-oxide esters of rapamycin
US5547668A (en) * 1995-05-05 1996-08-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Conjugates of folate anti-effector cell antibodies
US6207157B1 (en) * 1996-04-23 2001-03-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for nontypeable Haemophilus influenzae
US6030941A (en) * 1996-05-01 2000-02-29 Avi Biopharma, Inc. Polymer composition for delivering substances in living organisms
EP0954340B1 (en) * 1996-05-03 2007-06-27 Immunomedics, Inc. Targeted combination immunotherapy of cancer
DE19621133A1 (de) * 1996-05-24 1997-11-27 Boehringer Mannheim Gmbh Bestimmungsverfahren mit oligomerisierten Rezeptoren
EP1007533B1 (en) * 1996-08-27 2005-06-22 University Of Utah Research Foundation Bioconjugates and delivery of bioactive agents
US6056973A (en) * 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
US6177404B1 (en) * 1996-10-15 2001-01-23 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of benign prostatic hyperplasia
US6071532A (en) * 1996-10-15 2000-06-06 Emory University Synthesis of glycophospholipid and peptide-phospholipid conjugates and uses thereof
US6291673B1 (en) * 1997-10-17 2001-09-18 Purdue Research Foundation Folic acid derivatives
GB9723669D0 (en) 1997-11-07 1998-01-07 Univ Aberdeen Skin penetration enhancing components
US6399638B1 (en) * 1998-04-21 2002-06-04 Bristol-Myers Squibb Company 12,13-modified epothilone derivatives
US6093382A (en) * 1998-05-16 2000-07-25 Bracco Research Usa Inc. Metal complexes derivatized with folate for use in diagnostic and therapeutic applications
US6291684B1 (en) * 1999-03-29 2001-09-18 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of aziridinyl epothilones from oxiranyl epothilones
EP1880736A1 (en) * 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
AUPQ071299A0 (en) 1999-06-02 1999-06-24 Access Pharmaceuticals Australia Pty Limited Vitamin directed dual targeting therapy
CA2383798A1 (en) * 1999-09-07 2001-03-15 Conjuchem Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
US7067111B1 (en) * 1999-10-25 2006-06-27 Board Of Regents, University Of Texas System Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging
CA2388063C (en) * 1999-11-24 2010-06-08 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents comprising taxanes and their therapeutic use
EP1267918A4 (en) * 2000-03-31 2007-06-27 Purdue Research Foundation METHOD OF TREATMENT USING LIGAND-IMMUNOGENE CONJUGATES
US6670355B2 (en) 2000-06-16 2003-12-30 Wyeth Method of treating cardiovascular disease
US6290929B1 (en) * 2000-07-28 2001-09-18 The Procter & Gamble Company Cancer treatment
CN100448487C (zh) * 2000-08-11 2009-01-07 惠氏公司 治疗雌激素受体阳性癌的方法
DE60136200D1 (de) * 2000-09-19 2008-11-27 Wyeth Corp Wasserlösliche rapamycin-ester
US6399625B1 (en) * 2000-09-27 2002-06-04 Wyeth 1-oxorapamycins
US6440991B1 (en) * 2000-10-02 2002-08-27 Wyeth Ethers of 7-desmethlrapamycin
US6399626B1 (en) * 2000-10-02 2002-06-04 Wyeth Hydroxyesters of 7-desmethylrapamycin
EP1356108A2 (en) 2000-11-28 2003-10-29 Wyeth Expression analysis of fkbp nucleic acids and polypeptides useful in the diagnosis and treatment of prostate cancer
US20020168737A1 (en) * 2001-01-24 2002-11-14 Cornish Virginia W. Binding and catalysis screen for high throughput determination of protein function using chemical inducers of dimerization
AR036993A1 (es) * 2001-04-02 2004-10-20 Wyeth Corp Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas
EP2388590A1 (en) * 2001-04-02 2011-11-23 Dana Farber Cancer Institute PD-1, a receptor for B7-4, and uses thereof
ATE427948T1 (de) 2001-04-24 2009-04-15 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
US7109165B2 (en) 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
JP2004532888A (ja) 2001-06-01 2004-10-28 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー エポチロン誘導体
US20040018203A1 (en) * 2001-06-08 2004-01-29 Ira Pastan Pegylation of linkers improves antitumor activity and reduces toxicity of immunoconjugates
UA77200C2 (en) * 2001-08-07 2006-11-15 Wyeth Corp Antineoplastic combination of cci-779 and bkb-569
WO2003018573A1 (en) * 2001-08-22 2003-03-06 Wyeth Rapamycin 29-enols
EP1419153A1 (en) * 2001-08-22 2004-05-19 Wyeth Rapamycin dialdehydes
JP2005523878A (ja) * 2001-09-28 2005-08-11 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション リガンド・免疫原物質複合体を用いた処置方法
GR1004163B (el) * 2001-11-01 2003-02-21 Πολυκυκλικα παραγωγα τροποποιησης των οπτικων ιδιοτητων και των ιδιοτητων αντοχης στο πλασμα των πολυμερων λιθογραφιας
US6595757B2 (en) * 2001-11-27 2003-07-22 Kuei-Hsien Shen Air compressor control system
US8043602B2 (en) * 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US7000695B2 (en) * 2002-05-02 2006-02-21 Halliburton Energy Services, Inc. Expanding wellbore junction
CN101648028B (zh) 2002-05-06 2012-11-21 恩多塞特公司 维生素-定向的显象剂
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
WO2004005327A1 (de) 2002-07-09 2004-01-15 Morphochem Ag Komb Chemie Neue tubulysinanaloga
US20040047917A1 (en) * 2002-09-06 2004-03-11 Stephen Wilson Drug delivery and targeting with vitamin B12 conjugates
AU2003300027A1 (en) 2002-10-10 2004-05-04 Wyeth Compositions, organisms and methodologies employing a novel human kinase
DE10254439A1 (de) * 2002-11-21 2004-06-03 GESELLSCHAFT FüR BIOTECHNOLOGISCHE FORSCHUNG MBH (GBF) Tubulysine, Herstellungsverfahren und Tubulysin-Mittel
CA2506633A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-10 Wyeth Composition and method for treating lupus nephritis
AR042938A1 (es) * 2003-02-06 2005-07-06 Wyeth Corp Uso del cci-779 en el tratamiento de la fibrosis hepatica
ES2702942T3 (es) * 2003-04-17 2019-03-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc Agentes de ARNi modificados
WO2004101803A2 (en) * 2003-05-12 2004-11-25 Wyeth Holdings Corporation Process for producing anticancer agent ll-d45042
EP1646635A1 (en) * 2003-07-16 2006-04-19 Wyeth Cci-779 isomer c
ATE365169T1 (de) 2003-08-07 2007-07-15 Wyeth Corp Regioselektive synthese von cci-779
US20060105975A1 (en) * 2004-04-19 2006-05-18 Shannon Pendergrast Aptamer-mediated intracellular delivery of therapeutic oligonucleotides
CN101098854B (zh) * 2004-07-23 2012-12-05 恩多塞特公司 二价连接体及其轭合物
EP2990410A1 (en) * 2004-08-10 2016-03-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
JP5289935B2 (ja) * 2005-03-16 2013-09-11 エンドサイト，インコーポレイテッド プテロイン酸およびその結合体の合成と精製
WO2006105141A1 (en) 2005-03-30 2006-10-05 Purdue Research Foundation Method for cancer prognosis using cellular folate vitamin receptor quantification
JP5175723B2 (ja) * 2005-07-05 2013-04-03 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション 単球介在性疾患を治療するための組成物の調製
BRPI0615354A2 (pt) 2005-08-19 2011-05-17 Endocyte Inc conjugado de liberação de fármaco de ligação de receptor, composição farmacêutica que o compreende, bem como seu uso
JP2009504783A (ja) 2005-08-19 2009-02-05 エンドサイト，インコーポレイテッド ビンカアルカロイド、類似体および誘導体のリガンド結合体
EP1957113A4 (en) * 2005-11-21 2011-11-09 Medivas Llc POLYMER PARTICLES FOR THE OUTPUT OF MACROMOLECULES AND METHOD OF APPLICATION THEREFOR
AR062448A1 (es) 2006-05-25 2008-11-12 Endocyte Inc Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
US20100104626A1 (en) 2007-02-16 2010-04-29 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
WO2008112873A2 (en) * 2007-03-14 2008-09-18 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US20110288152A1 (en) 2008-10-17 2011-11-24 Purdue Research Foundation Psma binding ligand-linker conjugates and methods for using
EP2515651A4 (en) 2009-12-23 2016-01-13 Endocyte Inc VITAMIN RECEPTOR-ACTIVE EXTRACTION CONJUGATES FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATION

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000066091A1 (en) * 1999-05-04 2000-11-09 Biotech Australia Pty Limited Amplification of folate-mediated targeting to tumor cells using polymers
WO2001028592A1 (en) * 1999-10-15 2001-04-26 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cobalamin conjugates useful as imaging agents and as antitumor agents
US20050165227A1 (en) * 2002-05-15 2005-07-28 Vlahov Iontcho R. Vitamin-mitomycin conjugates
WO2004069159A2 (en) * 2003-01-27 2004-08-19 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ladino CA. et al., "Folate-maytansinoids: target-selective dmgs of low molecular weight." Int J Cancer. 1997 Dec 10; 73(6):859-64. *
Дайсон Г., Мей П. Химия синтетических лекарственных веществ. Пер. с англ. - М.: Мир, 1964. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Новая волна, 2001, т.1. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2798981C2 (ru) * 2017-08-18 2023-06-30 Байли-Байо (Чэнду) Фармасьютикал Ко., Лтд. Конъюгат антитела с аматоксином неприродного типа
RU2840926C2 (ru) * 2017-08-18 2025-05-30 Байли-Байо (Чэнду) Фармасьютикал Ко., Лтд. Конъюгат антитела с аматоксином неприродного типа
RU2809116C2 (ru) * 2017-09-08 2023-12-06 Байли-Байо (Чэнду) Фармасьютикал Ко., Лтд. Конъюгат амантина с антителом

Also Published As

Publication number Publication date
JP2013079248A (ja) 2013-05-02
EP2374480A3 (en) 2013-05-01
KR20130113543A (ko) 2013-10-15
EP1948241A2 (en) 2008-07-30
EP1948241B1 (en) 2014-03-05
US20080248052A1 (en) 2008-10-09
WO2007022494A3 (en) 2007-09-07
BRPI0615354A2 (pt) 2011-05-17
ES2468240T3 (es) 2014-06-16
US20140058064A1 (en) 2014-02-27
JP2009504784A (ja) 2009-02-05
CA2617660A1 (en) 2007-02-22
CN103893779A (zh) 2014-07-02
KR20080041223A (ko) 2008-05-09
EP2374480A2 (en) 2011-10-12
CA2617660C (en) 2014-03-25
US20130184435A1 (en) 2013-07-18
RU2012136587A (ru) 2014-03-10
AU2006279304A1 (en) 2007-02-22
CN103893778A (zh) 2014-07-02
JP5475992B2 (ja) 2014-04-16
US8465724B2 (en) 2013-06-18
RU2008110495A (ru) 2009-09-27
WO2007022494A2 (en) 2007-02-22
KR101364912B1 (ko) 2014-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2470668C2 (ru) Конъюгаты лиганда с несколькими лекарственными средствами
US10738086B2 (en) Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
US9555139B2 (en) Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
EP2382995A2 (en) Ligand conjugates of Vinca alkaloids, analogs and derivatives
HK40017582A (en) Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
AU2013204293A1 (en) Multi-drug ligand conjugates
HK1174857A (en) Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150819