RU2469084C2 - Штамм микроорганизма corynebacterium ammoniagenes, продуцирующий инозин, и способ получения инозина с его использованием - Google Patents
Штамм микроорганизма corynebacterium ammoniagenes, продуцирующий инозин, и способ получения инозина с его использованием Download PDFInfo
- Publication number
- RU2469084C2 RU2469084C2 RU2010132638/10A RU2010132638A RU2469084C2 RU 2469084 C2 RU2469084 C2 RU 2469084C2 RU 2010132638/10 A RU2010132638/10 A RU 2010132638/10A RU 2010132638 A RU2010132638 A RU 2010132638A RU 2469084 C2 RU2469084 C2 RU 2469084C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inosine
- strain
- medium
- corynebacterium ammoniagenes
- microorganism
- Prior art date
Links
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 title claims abstract description 68
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 title claims abstract description 68
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 35
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 10
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 46
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 24
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 24
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 20
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 16
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N Inosinic acid Natural products OC1C(O)C(COP(O)(O)=O)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 235000013902 inosinic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 3
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000894568 Catharanthus roseus Catharanthine synthase Proteins 0.000 description 2
- 101000658635 Catharanthus roseus Tabersonine synthase Proteins 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfide Chemical compound CCSCC LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241001644925 Corynebacterium efficiens Species 0.000 description 1
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-CTWWJBIBSA-L calcium;3-[[(2s)-2,4-dihydroxy-3,3-dimethylbutanoyl]amino]propanoate Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-CTWWJBIBSA-L 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- H—ELECTRICITY
- H02—GENERATION; CONVERSION OR DISTRIBUTION OF ELECTRIC POWER
- H02B—BOARDS, SUBSTATIONS OR SWITCHING ARRANGEMENTS FOR THE SUPPLY OR DISTRIBUTION OF ELECTRIC POWER
- H02B1/00—Frameworks, boards, panels, desks, casings; Details of substations or switching arrangements
- H02B1/01—Frameworks
- H02B1/014—Corner connections for frameworks
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2497—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing N- glycosyl compounds (3.2.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/02—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2) hydrolysing N-glycosyl compounds (3.2.2)
- C12Y302/02001—Purine nucleosidase (3.2.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/02—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2) hydrolysing N-glycosyl compounds (3.2.2)
- C12Y302/02008—Ribosylpyrimidine nucleosidase (3.2.2.8)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Power Engineering (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Prostheses (AREA)
Abstract
Представленные изобретения относятся к области биотехнологии и касаются штамма Corynebacterium ammoniagenes, продуцирующего инозин и способа получения инозина при использовании такого штамма. Описанный штамм депонирован в КССМ под номером 10905 и имеет блокированный каскад реакций катаболизма инозина, вследствие инактивации генов, кодирующих рибонуклеозид-гидролазу 1 и 2. Способ получения инозина включает культивирование такого штамма с последующим извлечением. Представленная группа изобретений позволяет получать инозин с высоким выходом и в высокой концентрации. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относятся к продуцирующим инозин микроорганизмам, принадлежащим к роду Corynebacterium, и способу получения инозина, включающему культивирование микроорганизмов, продуцирующих инозин.
Предшествующий уровень техники
Инозин является жизненно важным веществом, участвующим в химическом синтезе и катализируемом ферментами синтеза 5'-инозиновой кислоты, который привлекает усиленное внимание как острая приправа. Кроме того, инозин, который является промежуточным соединением в каскаде реакций биосинтеза нуклеиновой кислоты, играет физиологически значимую роль в организмах животных и растений и широко используется в различных областях, включая пищевую и медицинскую промышленность.
Инозин обычно получают ферментацией с использованием микроорганизмов, таких как Bacillus (Agric. Biol. Chem., 46, 2347 (1992); патент Кореи №27280) или Corynebacterium ammoniagenus (Agric. Biol. Chem., 42, 399 (1978)), или термическим разложением 5'-инозиновой кислоты (патентная публикация с открытой выкладкой №43-3320, Япония). Однако в случае термического разложения 5'-инозиновой кислоты для разложения 5'-инозиновой кислоты требуется большое количество тепла, и поэтому такой способ трудно применять на практике. Для прямой ферментации разработаны и исследованы различные штаммы Е.coli (Biosci. Biotechnol. Biochem., 2001, Mar, 65(3): 570-8). Однако титр продуцирующих инозин штаммов низкий, и поэтому затраты на получение инозина являются высокими. Кроме того, поиск путей получения инозина сосредоточен на штаммах Bacillus и Е.coli.
Таким образом, все еще существует потребность в создании штаммов микроорганизмов, способных продуцировать инозин с высоким выходом и накапливать инозин в высокой концентрации, и способе получения инозина с использованием таких штаммов.
Поэтому авторы продолжили исследование способа получения инозина с высоким выходом/в высокой концентрации, сконцентрировавшись на прямой ферментации с использованием микроорганизмов, и в результате как настоящее изобретение создали микроорганизм, продуцирующий инозин с высоким выходом/в высокой концентрации.
Сущность изобретения
Одно или несколько воплощений настоящего изобретения относятся к микроорганизму рода Corynebacterium, который продуцирует инозин с высоким выходом/в высокой концентрации, в котором путь катаболизма инозина блокируется, и микроорганизм является «текучим» (leaky) ауксотрофом по аденину и также текучим ауксотрофом по гуанину.
Одно или несколько воплощений настоящего изобретения относятся к способу получения инозина с высоким выходом/в высокой концентрации, включающему культивирование микроорганизма.
Краткое описание фигур
Вышеуказанные и другие особенности и преимущества настоящего изобретения станут более явными из подробного описания примеров его воплощения со ссылкой на прилагаемые чертежи, из которых:
на фиг.1 показана схема конструирования вектора pDZmrih1 для разрыва структуры гена, кодирующего рибонуклеозид-гидролазу 1; и
на фиг.2 показана схема конструирования вектора pDZmrih2 для разрыва структуры гена, кодирующего рибонуклеозид-гидролазу 2.
Подробное описание изобретения
Теперь настоящее изобретение будет описываться подробно со ссылками на прилагаемые чертежи.
Настоящее изобретение относится к микроорганизму рода Corynebacterium, имеющему способность продуцировать инозин с высоким выходом/в высокой концентрации, в котором путь катаболизма инозина блокируется, и микроорганизм имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину. Микроорганизм также может иметь текучий ауксотрофный фенотип по гуанину.
В микроорганизме рода Corynebacterium, продуцирующем инозин, каскад реакций катаболизма инозина блокируется генетической рекомбинацией. Иными словами, ген, кодирующий рибонуклеозид-гидролазу (rih) 1, и ген, кодирующий rih 2, инактивируются вариацией последовательности, вызванной встраиванием, делецией или заменой основания. В то же время микроорганизм рода Corynebacterium может иметь текучий ауксотрофный фенотип по аденину и/или текучий ауксотрофный фенотип по гуанину, отобранные искусственным мутагенезом.
Примеры микроорганизма рода Corynebacterium включают Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium efficiens, Corynebacterium diphtheriae и Corynebacterium ammoniagenes. Предпочтительно микроорганизм рода Corynebacterium может представлять собой Corynebacterium ammoniagenes, предпочтительнее, Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027, происходящий от Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872. Родительский штамм Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872, который является штаммом Corynebacterium ammoniagenes дикого типа, предоставляемым Американской коллекцией типовых культур, не продуцирует инозин.
Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 (KCCM 10905) может накапливать инозин в высокой концентрации с высоким выходом непосредственно в культуре, так как он имеет разорванный ген rih1, кодирующий rih1, и ген rih2, кодирующий rih2, причем посредством этого блокируется путь, разрушающий инозин, и в то же время имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину и текучий ауксотрофный фенотип по гуанину.
Среда, используемая для культивирования микроорганизма рода Corynebacterium, которая описана в подробном описании, включающем примеры, может представлять собой питательную среду, минимальную среду, посевную среду или среду для ферментации в колбах, и пример состава такой среды показан ниже в таблице 1. Однако состав среды не ограничивается примерами, приведенными в таблице 1, и может соответствовать любой среде для культивирования, подходящей для использования при культивировании микроорганизма рода Corynebacterium, которую можно использовать.
| Таблица 1 | |
| Состав среды | |
| Тип среды | Состав среды |
| Питательная | 1% пептона, 1% мясного экстракта, 0,25% хлорида натрия, 1% дрожжей, 2% глюкозы, 0,3% сульфата натрия, 0,1% KH2PO4, 0,3% K2HPO4, 0,3% MgSO4, 10 мг/л сульфата железа, 1 мг/л ZnSO4, 3,6 мг/л MnCl2, 20 мг/л L-цистеина, 10 мг/л пантотената кальция, 5 мг/л гидрохлорида тиамина, 30 мкг/л биотина, 20 мг/л аденина, 20 мг/л гуанина, 2% агара, рН 7,2 |
| Посевная среда | 5% глюкозы, 0,5% пептона, 0,5% мясного экстракта, 0,25% хлорида натрия, 1% дрожжевого экстракта, 100 мг/л аденина, 100 мг/л гуанина, рН 7,2 |
| Среда для ферментации в колбах | 0,1% глутамата натрия, 1% хлорида аммония. 1,2% MgSO4, 0,01% CaCl2, 20 мг/л сульфата железа, 20 мг/л MgSO4, 20 мг/л ZnSO4, 5 мг/л CuSO4, 23 мг/л L-цистеина, 24 мг/л аланина, 8 мг/л никотиновой кислоты, 45 мкг/л биотина, 5 мг/л гидрохлорида тиамина, 50 мг/л аденина, 30 мг/л гуанина, 1,9% - 85% фосфорной кислоты, 6% редуцирующего сахара, полученного смешиванием фруктозы, глюкозы и мелассы, рН 7,2 |
Микроорганизм рода Corynebacterium может представлять собой мутантный штамм с усиленной продуктивностью инозина, полученный способом, в котором структуры генов rih1 и rih2, которые кодируют, соответственно, rih1 и rih2, разорваны с целью блокирования пути катаболизма инозина и накопления инозина в культуре организма; к микроорганизму применяют искусственный мутагенез для того, чтобы отобрать текучий ауксотроф по аденину, и затем подтверждают текучий ауксотроф по гуанину.
Микроорганизм рода Corynebacterium может представлять собой рекомбинантный штамм Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872, который получают трансформацией с помощью рекомбинантного вектора, несущего гены rih1 и rih2, которые уже опубликованы одним из специалистов в данной области техники, которым принадлежит настоящее изобретение, с преждевременной мутацией терминации, созданной встраиванием, делецией или заменой основания, где трансляция генов rih1 и rih2 осуществлена не должным образом, что ведет к инактивации рибонуклеозид-гидролазы 1 и рибонуклеозид-гидролазы 2, ферменты rih1 и rih2 инактивируются, и таким образом блокируется путь катаболизма инозина.
В рекомбинантном штамме, в котором каскад реакций катаболизма инозина блокирован, гены rih1 и rih2, которые инактивированы из-за вариации последовательностей, могут иметь последовательность, показанную SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10, соответственно.
В воплощении настоящего изобретения, кроме того, к рекомбинантному штамму, в котором каскад реакций разрушения инозина блокирован текучим ауксотрофным фенотипом по аденину, можно применить рентгеновское или УФ-излучение или химический мутаген, такой как N-метил-N-нитроN-нитрозогуанин, диэтилсульфид или этиламин. После обработки рекомбинантного штамма химическим мутагеном штамм высевают на минимальную среду состава, показанного в таблице 1, и отбирают отдельные колонии, показывающие текучий ауксотрофный фенотип по аденину, которые растут в среде без аденина, но растут быстрее в среде, включающей аденин. Затем каждую отдельную колонию культивируют в питательной среде с последующим культивированием в посевной среде в течение 24 часов и затем культивируют в среде для ферментации в течение 5-6 суток, и из полученных штаммов штамм с наивысшей продуктивностью по инозину, накопленному в ферментационной культуре, можно отобрать как текучий ауксотрофный штамм по аденину, в котором путь катаболизма инозина блокирован.
Кроме того, отобранный штамм с текучим ауксотрофным фенотипом по аденину можно подвергнуть мутагенезу, описанному выше, в котором штамм обрабатывают химическим мутагеном, причем отбирают штаммы, показывающие текучий ауксотрофный фенотип по гуанину, каждый штамм культивируют в питательной среде, посевной среде и среде для ферментации, и затем штамм с наивысшей продуктивностью по инозину, накопленному в ферментационной культуре, отбирают как продуцирующий инозин микроорганизм с текучим ауксотрофным фенотипом по аденину и гуанину, в котором блокирован путь катаболизма инозина.
Настоящее изобретение также относится к способу получения инозина, который включает культивирование микроорганизма рода Corynebacterium, в котором блокирован путь катаболизма инозина, и который имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину и гуанину и продуцирует инозин в высокой концентрации с высоким выходом, для получения инозина в микроорганизме или культуре; и извлечение инозина из микроорганизма или культуры.
В способе получения инозина микроорганизм рода Corynebacterium могут представлять собой Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 (KCCM 10905).
Способ получения инозина включает культивирование микроорганизма рода Corynebacterium для получения инозина в микроорганизме или культуре.
При культивировании микроорганизма рода Corynebacterium штамм Corynebacterium культивируют в типичной среде, содержащей соответствующие количества источника углерода, источника азота, аминокислоту, витамин или другие питательные вещества, при регулируемых температуре и рН в аэробных условиях.
В этом отношении источник углерода может представлять собой углевод, такой как глюкоза или стерилизованная предварительно обработанная меласса (т.е. меласса, превращенная в редуцирующий сахар), источник азота может представлять собой любой неорганический источник азота, такой как аммиак, хлорид аммония или сульфат аммония; или органический источник азота, такой как пептон, NZ-амин, мясной экстракт, дрожжевой экстракт, кукурузный экстракт, гидролизат казеина, рыба или продукты ее разложения или обезжиренный соевый жмых или продукты его разложения. В качестве минералов можно использовать KH2PO4, K2HPO4, сульфат магния, сульфат железа, сульфат марганца или карбонат кальция (СаСО3), и если желательно, можно добавлять витамины и основания, которые требуются для ауксотрофа.
Культивирование можно осуществлять в аэробных условиях, например, при встряхивании культуры или аэрированном перемешивании культуры при температуре в интервале 28-36°С. Во время процесса культивирования можно поддерживать рН среды при рН 6 - рН 8. Культивирование можно осуществлять в течение 5-6 суток, и инозин, накопленный прямой ферментацией, можно анализировать HPLC.
Одно или несколько воплощений настоящего изобретения теперь будут описываться полнее с обращением к следующим далее примерам. Однако указанные примеры приводятся только в целях пояснения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Пример 1. Создание штамма, в котором структура гена rih разорвана с использованием вектора pDZ для встраивания в хромосому
Для того чтобы гены, кодирующие rih1 и rih2, инактивировать, вызывая изменение последовательности в генах путем встраивания, замены или делеции так, что блокируется путь разрушения инозина, в качестве рекомбинантного вектора используют вектор pDZ, образованный от вектора pACYC177 (New England Biolab, GenBank, инвентарный №X06402), плазмидный клонирующий вектор Е.coli (публикация патента Кореи №07-94433).
На фиг.1 показана схема конструирования вектора pDZmrih1 для разрыва структуры гена, кодирующего rih1. Фиг.2 отображает процесс конструирования вектора pDZmrih2 для разрыва структуры гена, кодирующего rih2.
Для того чтобы амплифицировать ген, кодирующий rih1, и ген, кодирующий rih2, сначала осуществляют ПЦР (PCR) с использованием хромосомной ДНК Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872 в качестве матрицы и праймеров, имеющих последовательности SEQ ID NO:1-4, и праймеров, имеющих последовательности SEQ ID NO:5-8, соответственно.
Подробнее, осуществляют ПЦР гена, кодирующего rih1, с использованием хромосомной ДНК Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872 в качестве матрицы и праймеров, имеющих последовательности SEQ ID NO:1 и 2, и праймеров, имеющих последовательности SEQ ID NOs:3 и 4, соответственно, и получают фрагмент rih1-А и фрагмент rih1-В. Затем осуществляют ПЦР с использованием полученных фрагментов rih1-А и rihl-В в качестве матрицы и использованием праймеров SEQ ID NO:1 и 4, и получают фрагмент мутантного гена с вариацией последовательности, т.е. mrih1. Кроме того, для того, чтобы получить фрагмент мутантного гена mrih2 с изменением последовательности в rih2, осуществляют ПЦР гена, кодирующего rih2, с использованием хромосомной ДНК Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872 в качестве матрицы, и праймеров SEQ ID NO:5 и 6 и праймеров SEQ ID NO:7 и 8, соответственно, и получают фрагмент rih2-А и фрагмент rih2-B, и осуществляют ПЦР с использованием полученных фрагментов rih2-A и rih2-B в качестве матрицы и использованием праймеров SEQ ID NO: 5 и 8. Условия ПЦР, осуществляемой для получения фрагментов rih1-A, rih1-B, rih2-A и rih2-B, следующие: начальная денатурация при 94°С в течение 5 минут; 20 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжиг при 52°С в течение 30 секунд, и наращивание при 72°С в течение 1 минуты: и заключительное наращивание при 72°С в течение 7 минут. Условия ПЦР, осуществляемой для получения фрагментов мутантных генов путем комбинирования фрагментов rih1 А и В и фрагментов rih2 А и В, соответственно, следующие: начальная денатурация при 94°С в течение 5 минут; 25 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжиг при 50°С в течение 30 секунд, и наращивание при 72°С в течение 1 минуты: и заключительное наращивание при 72°С в течение 7 минут. Амплифицированные mrih1, mrih2 и вектор pDZ гидролизуют с рестриктазой Xbal и затем для получения рекомбинантного вектора pDZmrih1 и pDZmrih2 лигируют вместе лигазой Т4.
Для того чтобы мутировать последовательность гена rih2 на хромосоме Corynebacterium путем делеции основания, используют сконструированный вектор pDZmrih2 для трансформации Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872 дикого типа посредством электропорации (способ трансформации, раскрытый в Appl. Microbiol. Biotechnol. (1999), 52: 541-545). Затем трансформированные штаммы, в которых вектор pDZmrih2 встроен в хромосому посредством гомологичной рекомбинации с геном rih2, отбирают в среде для отбора, содержащей 25 мг/л канамицина. Успешное встраивание вектора pDZmrih2 в хромосому подтверждают путем оценки того, показывают ли колонии синее окрашивание на твердой среде, содержащей X-gal (5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-галактозид). Каждый штамм, в котором в хромосому посредством гомологичной рекомбинации встроен вектор pDZmrih2, культивируют при встряхивании в питательной среде при 30°С в течение 8 часов, и культивированный штамм серийно разводят от 10-4 до 10-10, и затем разведенную культуру высевают на твердую среду, содержащую X-gal. Большинство колоний показывают синий цвет, но также на небольшом уровне существуют белые колонии. В связи с этим, посредством отбора белых колоний отбирают штаммы, в которых последовательность вектора pDZmrih2 удалена из хромосомы при втором кроссинговере. В результате получают штамм, в котором делетирован 262-ой G гена rih2 в хромосоме Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872. Затем, для того, чтобы мутировать последовательность гена rih1 путем замены основания, используют вектор pDZmrih2 для трансформации штамма, полученного выше, который имеет делецию в последовательности гена rih2, и осуществляют процесс отбора с использованием того же способа, который использовали при отборе мутантного штамма гена rih2, и получают Corynebacterium ammoniagenes CN04-0092, в котором 148-ой G гена rih1 заменен на Т, посредством чего блокируется путь разрушения инозина. Отобранный штамм окончательно идентифицируют испытанием на чувствительность к канамицину и анализом последовательности гена методом ПЦР. Мутированные ген rih1 и ген rih2 штамма соответственно имеют последовательности SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10.
Пример 2. Отбор мутантного штамма CN04-0093, имеющего текучий ауксотрофный фенотип по аденину
Corynebacterium ammoniagenes CN04-0092, полученный в примере 1, суспендируют в фосфатном буфере (рН 7,0) или цитратном буфере (рН 5,5) в концентрации 107-108 клеток/мл, к полученной суспензии добавляют N-метил-N-ниро-N-нитрозогуанин до конечной концентрации 10-50 мкг/мл, и полученную смесь выдерживают при комнатной температуре или 30-32°С в течение 40-90 минут для того, чтобы вызвать мутацию. Клетки, полученные после центрифугирования, промывают три раза 0,85% солевым раствором, полученные клетки соответствующим образом разводят в минимальной среде состава, показанного в таблице 1, содержащей 2% агара, высевают и культивируют при 30-34°С в течение 4-5 суток, и получают колонии. Полученные колонии переносят в среду без аденина и среду, содержащую 100 мг/л аденина, соответственно, и культивируют в указанных средах в течение 3-4 суток, и затем отбирают колонии, которые растут в среде без аденина и быстрее растут в среде, содержащей 100 мг/л аденина. После того как отобранные колонии идентифицированы как штаммы, имеющие текучий ауксотрофный фенотип по аденину, каждую полученную колонию культивируют в питательной среде, состав которой показан в таблице 1, культивируют в посевной среде в течение 24 часов и культивируют в среде для ферментации в течение 5-6 суток. Через процесс культивирования отбирают штамм, имеющий наивысшую продуктивность по инозину, и называют его Corynebacterium ammoniagenes CN04-0093.
Пример 3. Отбор мутантного штамма CN04-0027 (KCCM 10905), имеющего ликовый гуанинауксотрофный фенотип
Corynebacterium ammoniagenes CN04-0093, полученный в примере 2, суспендируют в фосфатном буфере (рН 7,0) или цитратном буфере (рН 5,5) в концентрации 107-108 клеток/мл, к полученной суспензии добавляют N-метил-N-ниро-N-нитрозогуанин до конечной концентрации 10-50 мкг/мл и выдерживают при комнатной температуре или 30-32°С в течение 40-90 минут для того, чтобы вызвать мутацию. Клетки, полученные после центрифугирования, промывают три раза 0,85% солевым раствором, полученные клетки соответствующим образом разводят в минимальной среде состава, показанного в таблице 1, содержащей 2% агара, высевают и затем культивируют при 30-34°С в течение 4-5 суток, и получают колонии. Полученные колонии переносят в среду без гуанина и среду, содержащую 100 мг/л гуанина, соответственно, и культивируют в указанных средах в течение 3-4 суток, и затем отбирают колонии, которые растут в среде без гуанина и быстрее растут в среде, содержащей 100 мг/л гуанина. Каждую полученную колонию культивируют в питательной среде, состав которой показан в таблице 1, культивируют в посевной среде в течение 24 часов и культивируют в среде для ферментации в течение 5-6 суток. Через процесс культивирования отбирают штамм, имеющий наивысшую продуктивность по инозину. Отобранный Corynebacterium ammoniagenes, в котором блокирован путь разрушения инозина, и который имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину и гуанину и продуцирует инозин в высокой концентрации с высоким выходом, называют Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027. Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 депонирован 20 декабря 2007 по Будапештскому договору в Корейском центре культур микроорганизмов, расположенном в Hongje 1-dong, Seodaemun-gu, Seoul, под инвентарным № KCCM 10905.
Пример 4. Титр после ферментации в колбе Эрленмейера
Каждые 3 мл посевной среды состава, указанного в таблице 1, помещают в пробирки диаметром 18 мм каждая и стерилизуют под давлением при 120°С в течение 10 минут. Затем Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872, Corynebacterium ammoniagenes CN04-0092, в котором разорваны гены rih1 и rih2, и который имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину, и Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027, в котором разорваны гены rih1 и rih2, и который имеет текучий ауксотрофный фенотип по аденину и гуанину, соответственно вносят в пробирки, и каждый штамм культивируют при встряхивании при 37°С в течение 24 часов для использования в качестве культуры для посева. Каждые 27 мл среды для ферментации состава, указанного в таблице 1, распределяют в 250-мл колбы Эрленмейера и стерилизуют под давлением при 120°С в течение 10 минут, и каждые 3 мл культуры для посева вносят в 250-мл колбы Эрленмейера и культивируют в них при встряхивании в течение 5-6 суток. Число оборотов используемой встряхивающей камеры составляет 220 об/мин, и встряхивающую камеру доводят до температуры 32°С и рН 7,2. В результате культивирования количество инозина, накопленного в среде исходного штамма Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872, составляет 0 г/л, и количество инозина, накопленного в среде Corynebacterium ammoniagenes CN04-0092, составляет 1 г/л. Кроме того, количество инозина, накопленного в среде Corynebacterium ammoniagenes CN04-0093 с текучим ауксотрофным фенотипом по аденину, составляет примерно на 2 г/л больше, чем в случае Corynebacterium ammoniagenes CN04-0092, и Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 с текучим ауксотрофным фенотипом по аденину и гуанину продуцирует примерно 5 г/л инозина, что примерно на 2 г/л больше, чем в случае Corynebacterium ammoniagenes CN04-0093. Продуктивность каждого штамма по инозину приводится ниже в таблице 2.
| Таблица 2 | ||
| Штамм | Инозин (г/л) | Показатель повышения концентрации (%) относительно CN04-0092 |
| АТСС 6872 | 0 | - |
| CN04-0092 | 0,9 | - |
| CN04-0093 | 2.9 | 220% |
| CN04-0027 | 5,1 | 460% |
Как описано выше, согласно одному или нескольким воплощениям настоящего изобретения, когда инозин получают с использованием Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 (КССМ 10905), высокую концентрацию инозина с высоким выходом можно получить прямой ферментацией, и затраты на получение могут быть снижены из-за снижения расхода сахаров.
Хотя настоящее изобретение определенно показано и описано с обращением к примерам его воплощения, специалистам в данной области техники будет понятно, что можно осуществить различные изменения в их форме и деталях без отхода от сущности и объема настоящего изобретения, определенных приведенной далее формулой изобретения.
Claims (2)
1. Штамм микроорганизма Corynebacterium ammoniagenes CN04-0027 (KCCM 10905), продуцирующий инозин.
2. Способ получения инозина, включающий культивирование микроорганизма по п.1 или 2 для получения инозина в микроорганизме или культуре и извлечение инозина из микроорганизма или культуры.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020080001441A KR100959662B1 (ko) | 2008-01-04 | 2008-01-04 | 이노신 생산능을 갖는 코리네박테리움속 미생물 및 이를이용한 이노신의 생산 방법 |
| KR10-2008-0001441 | 2008-01-04 | ||
| PCT/KR2009/000017 WO2009088184A2 (en) | 2008-01-04 | 2009-01-02 | Microorganism of the genus corynebacterium having the ability to produce inosine, and an inosine production method using the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010132638A RU2010132638A (ru) | 2012-02-10 |
| RU2469084C2 true RU2469084C2 (ru) | 2012-12-10 |
Family
ID=40853574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010132638/10A RU2469084C2 (ru) | 2008-01-04 | 2009-01-02 | Штамм микроорганизма corynebacterium ammoniagenes, продуцирующий инозин, и способ получения инозина с его использованием |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8551736B2 (ru) |
| EP (1) | EP2233563B1 (ru) |
| JP (1) | JP5377514B2 (ru) |
| KR (1) | KR100959662B1 (ru) |
| CN (1) | CN101939413B (ru) |
| BR (1) | BRPI0906487B1 (ru) |
| MX (1) | MX2010007429A (ru) |
| RU (1) | RU2469084C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009088184A2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723038C1 (ru) * | 2017-12-15 | 2020-06-08 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Продуцирующий IMP микроорганизм и способ получения IMP с его использованием |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2012157699A1 (ja) | 2011-05-18 | 2014-07-31 | 味の素株式会社 | 動物用免疫賦活剤、それを含む飼料及びその製造方法 |
| KR101916611B1 (ko) * | 2017-12-15 | 2018-11-07 | 씨제이제일제당 (주) | 신규 폴리펩타이드 및 이를 이용한 imp 생산방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002051984A1 (en) * | 2000-12-26 | 2002-07-04 | Cheil Jedang Corporation | Microorganism producing 5'-inosinic acid and process for producing 5'-inosinic acid using the same |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI222464B (en) * | 1999-02-08 | 2004-10-21 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Process for producing purine nucleotides |
| KR100397322B1 (ko) * | 2000-12-30 | 2003-09-06 | 씨제이 주식회사 | 엘-라이신의 제조방법 |
| KR100505925B1 (ko) * | 2002-12-11 | 2005-08-03 | 씨제이 주식회사 | 5’-크산틸산을 생산하는 미생물 |
| KR100882418B1 (ko) | 2007-01-15 | 2009-02-05 | 씨제이제일제당 (주) | 이노신을 생산하는 미생물 및 그를 이용한 이노신 제조방법 |
-
2008
- 2008-01-04 KR KR1020080001441A patent/KR100959662B1/ko active Active
-
2009
- 2009-01-02 RU RU2010132638/10A patent/RU2469084C2/ru active
- 2009-01-02 CN CN2009801040499A patent/CN101939413B/zh active Active
- 2009-01-02 US US12/811,778 patent/US8551736B2/en active Active
- 2009-01-02 EP EP09700802.3A patent/EP2233563B1/en active Active
- 2009-01-02 WO PCT/KR2009/000017 patent/WO2009088184A2/en not_active Ceased
- 2009-01-02 JP JP2010541403A patent/JP5377514B2/ja active Active
- 2009-01-02 MX MX2010007429A patent/MX2010007429A/es active IP Right Grant
- 2009-01-02 BR BRPI0906487A patent/BRPI0906487B1/pt active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002051984A1 (en) * | 2000-12-26 | 2002-07-04 | Cheil Jedang Corporation | Microorganism producing 5'-inosinic acid and process for producing 5'-inosinic acid using the same |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HYUN-SOO KIM et al., Genes encoding ribonucleoside hyrolase 1 and 2 from Corynebacterium ammoniagenes, Microbiology, 2006, Vol.152, p.p.1169-1177. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723038C1 (ru) * | 2017-12-15 | 2020-06-08 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Продуцирующий IMP микроорганизм и способ получения IMP с его использованием |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US8551736B2 (en) | 2013-10-08 |
| WO2009088184A2 (en) | 2009-07-16 |
| BRPI0906487B1 (pt) | 2018-11-13 |
| JP2011508599A (ja) | 2011-03-17 |
| EP2233563A4 (en) | 2011-08-17 |
| BRPI0906487A2 (pt) | 2015-08-04 |
| CN101939413A (zh) | 2011-01-05 |
| MX2010007429A (es) | 2010-11-30 |
| KR100959662B1 (ko) | 2010-05-26 |
| CN101939413B (zh) | 2012-06-13 |
| EP2233563B1 (en) | 2013-11-13 |
| RU2010132638A (ru) | 2012-02-10 |
| KR20090075548A (ko) | 2009-07-08 |
| EP2233563A2 (en) | 2010-09-29 |
| US20110003342A1 (en) | 2011-01-06 |
| WO2009088184A3 (ko) | 2009-09-17 |
| JP5377514B2 (ja) | 2013-12-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101166027B1 (ko) | 5'-이노신산 생산성이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 핵산의 생산방법 | |
| CN103243042B (zh) | 具有增强的l-赖氨酸产率的棒状杆菌属微生物以及使用所述微生物生产l-赖氨酸的方法 | |
| US8058036B2 (en) | Microorganism of Corynebacterium genus having enhanced L-lysine productivity and a method of producing L-lysine using the same | |
| CN100529060C (zh) | 具有提高l-赖氨酸生产能力的棒状杆菌属微生物及使用其生产l-赖氨酸的方法 | |
| RU2276688C2 (ru) | БАКТЕРИЯ, ПРИНАДЛЕЖАЩАЯ К РОДУ Escherichia,- ПРОДУЦЕНТ L-ГИСТИДИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА | |
| CN101583709B (zh) | 产生肌苷的微生物以及使用其生产肌苷的方法 | |
| CN100519740C (zh) | 具有改善的l-赖氨酸生产力的棒杆菌属微生物和利用棒杆菌微生物生产l-赖氨酸的方法 | |
| RU2469084C2 (ru) | Штамм микроорганизма corynebacterium ammoniagenes, продуцирующий инозин, и способ получения инозина с его использованием | |
| KR101049023B1 (ko) | 5'-이노신산 생산능이 향상된 코리네박테리움암모니아게네스 및 그를 이용한 5'-이노신산의 생산방법 | |
| KR101056872B1 (ko) | 핵산계 물질의 생산성이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 그를 이용한 핵산계 물질의 생산 방법 | |
| RU2312140C2 (ru) | Штамм corynebacterium ammoniagenes - продуцент 5'-ксантиловой кислоты и способ получения 5'-ксантиловой кислоты | |
| JPH0584067A (ja) | 発酵法によるイノシンの製造法 | |
| KR100547586B1 (ko) | ｕｓｈＡ 유전자가 불활성화된 재조합 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용한 5'-구아닐산 합성효소를 배지 중에 축적시키는 방법 | |
| KR100694427B1 (ko) | 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 5'-이노신산의제조 방법 | |
| KR100964078B1 (ko) | 5'-이노신산 생산능이 향상된 코리네박테리움암모니아게네스 및 그를 이용한 5'-이노신산 생산 방법 | |
| KR100789272B1 (ko) | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는 방법 | |
| KR20100038639A (ko) | 변형된 ｐｕｒＣ 유전자를 가진 미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법 | |
| KR20100088906A (ko) | 향상된 이노신 생산성을 갖는 미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법 |