RU2467329C1 - Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока - Google Patents
Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока Download PDFInfo
- Publication number
- RU2467329C1 RU2467329C1 RU2011108037/15A RU2011108037A RU2467329C1 RU 2467329 C1 RU2467329 C1 RU 2467329C1 RU 2011108037/15 A RU2011108037/15 A RU 2011108037/15A RU 2011108037 A RU2011108037 A RU 2011108037A RU 2467329 C1 RU2467329 C1 RU 2467329C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aneuploidy
- block
- blood lymphocytes
- culture
- degree
- Prior art date
Links
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 231100001075 aneuploidy Toxicity 0.000 title claims abstract description 18
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 210000005104 human peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 4
- 230000002548 cytokinetic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 6
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 title abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 39
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 6
- 231100000722 genetic damage Toxicity 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 abstract description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 17
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 4
- 208000037280 Trisomy Diseases 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000003491 array Methods 0.000 description 3
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000007491 morphometric analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002706 AlOOH Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 description 1
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- 201000006360 Edwards syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000031448 Genomic Instability Diseases 0.000 description 1
- 238000011869 Shapiro-Wilk test Methods 0.000 description 1
- 208000007159 Trisomy 18 Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000026928 Turner syndrome Diseases 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- ZCHPKWUIAASXPV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;methanol Chemical compound OC.CC(O)=O ZCHPKWUIAASXPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 1
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000036462 frequency of sister chromatid exchange Diseases 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000030454 monosomy Diseases 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 201000003738 orofaciodigital syndrome VIII Diseases 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 206010053884 trisomy 18 Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике, и может быть использовано для экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока. Для этого культивируют лимфоциты крови человека в условиях цитокинетического блока в присутствии изучаемого вещества. Фиксируют клетки. Приготавливают и окрашивают цитогенетические препараты. Далее после окраски для каждого препарата при помощи светового микроскопа со встроенной цифровой камерой при увеличении 10×40 проводят регистрацию изображений 100 клеток, содержащих два отдельно лежащих ядра и не имеющих видимых, в т.ч. генетических, повреждений. По этим изображениям вычисляют сумму и отношение площадей ядер в каждой такой клетке. На основании полученных данных вычисляются медианы, верхний и нижний квартили, их отношение и разность. Проводят статистическое сравнение препаратов по этим параметрам. В случае обнаружения значимых различий при уровне значимости p≤0.05, а также при обнаружении дозовой зависимости делают вывод о способности изучаемого вещества индуцировать анеуплоидию, которая ассоциируется с потенциальной генотоксической активностью. Изобретение обеспечивает сокращение времени и упрощение процедуры оценки степени анеуплоидии в системе анализа генотоксической активности факторов любой природы. 7 ил., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно - к области цитогенетического анализа - оценке анеуплоидии при определении генотоксических эффектов.
Анеуплоидия - изменение количества генетического материала в клетке по сравнению с нормой, возникающее при неравновесном делении - аномальной репликации целой хромосомы, как, например, при синдроме Дауна, либо при утрате одной или нескольких хромосом.
Морфометрия - количественная характеристика формы (длина, площадь, объем и т.д.).
Доза - количество вещества (фактора среды), введенное или попавшее в исследуемый объект, выражается в весовых, объемных или условных (биологических) единицах.
Из литературы известны следующие цитогенетические методы оценки генотоксических эффектов:
- микроядерный тест на клетках, культивированных в присутствии цитохалазина В, оценивающий частоту двуядерных клеток с микроядрами (Fenech, Morley, 1985; Yager et al., 1988; Pascoe, Stemp, 1990; Kocisova, Sram, 1990; Fenech et al., 2003);
- модифицированный микроядерный тест (микроядерный тест на клетках, культивированных в присутствии цитохалазина В, оценивающий - дополнительно к частоте двуядерных клеток с микроядрами - частоту делящихся клеток с микроядрами и нуклеоплазменными мостами, а также степень асимметрии деления клеток, особенности пролиферации клеток в культуре и частоту апоптоза) (Ингель, 2006; Ингель и др., 2006);
- метод оценки частоты хромосомных аберраций (изменения структуры хромосом, вызванные их разрывами, с последующим перераспределением, утратой или удвоением генетического материала). (Agence Internationale de l'Energie Atomique, 1984; Doloy, Malarbet, Guedency et al., 1991; Ludwików, Yun Xiao, Hoebe et al., 2002);
- метод оценки частоты сестринских хроматидных обменов (Tucker, Ashworth, Johnson et al., 1988; Sonmez, Kaya, Aktas et al., 1998; Lei, Hwang, Chang et al., 2002).
Нарушения числа хромосом могут быть выражены отсутствием одной из пары гомологичных хромосом (моносомия) или появлением добавочной, третьей, хромосомы (трисомия). Общее количество хромосом в кариотипе в этих случаях отличается от модального числа и для человека равняется 45 или 47.
Оценка степени анеуплоидии производится путем:
- подсчета количества хромосом на рутинно окрашенных метафазных пластинках, полученных в результате культивирования митогенстимулированных клеток крови с последующим накоплением клеток на стадии метафазы в присутствии колхицина (Agence Internationale de l'Energie Atomique, 1984; Doloy, Malarbet, Guedeney et. al., 1991; Ludwików, Yun Xiao, Hoebe et al., 2002). Недостаток метода связан с методикой приготовления цитогенетических препаратов - клетки, набухшие в гипотоническом растворе хлорида калия, фиксируют и раскапывают на влажные стекла. При этом цитоплазма лопается, в результате чего возможна потеря одной или нескольких хромосом из клеток, находящихся в стадии метафазы. Поэтому анеуплоидия в этом методе определяется только как увеличение числа хромосом по сравнению с модальным;
- подсчета количества люминесцирующих маркеров целых хромосом или центромерных районов хромосом с использованием FISH-окраски (fluorescence in situ hybridization; Y.B.Yurov, S.G.Vorsanova, I.Y.Iourov, I.A.Demidova, A.K.Beresheva, V.S.Kravetz, V.V.Monakhov, A.D.Kolotii, V.Y.Voinova-Ulas, N.L.Gorbachevskaya; Unexplained autism is frequently associated with low-level mosaic aneuploidy. J. Med. Genet., 2007; v.44, P.521-525). В рутинных медико-генетических исследованиях метод используется для оценки небольшого количества хромосом, являющихся маркерами определенных синдромов (например, синдрома Дауна - трисомия по 21 хромосоме, синдром Эдвардса - трисомия по 18 хромосоме, или синдром Тернера - генотип Х0, при котором в клетке присутствует 45 хромосом). Недостатком метода является невозможность определять весь хромосомный набор без использования сложной и дорогой техники и дорогих маркеров.
Из уровня техники наиболее близкого аналога предлагаемому техническому решению не выявлено.
Технической задачей предлагаемого способа является сокращение времени и упрощение процедуры оценки степени анеуплоидии в системе анализа генотоксической активности факторов любой природы (физических, химических, биологических), включая наноматериалы и воду с измененной структурой.
Технический результат достигается тем, что в способе экспресс-оценки потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока, включающем в себя культивирование лимфоцитов крови человека в условиях цитокинетического блока в присутствии изучаемого вещества, фиксацию клеток, приготовление и окраску цитогенетических препаратов, на которых после окраски для каждого препарата при помощи светового микроскопа со встроенной цифровой камерой при увеличении 10×40 проводится регистрация изображений 100 клеток, содержащих два отдельно лежащих ядра и не имеющих видимых, в т.ч. генетических, повреждений, по этим изображениям вычисляется сумма и отношение площадей ядер в каждой такой клетке. На основании полученных данных вычисляются медианы, верхний и нижний квартили, их отношение и разность, проводится статистическое сравнение препаратов по этим параметрам, в случае обнаружения значимых различий при уровне значимости р≤0,05, а также при обнаружении дозовой зависимости делается вывод о способности изучаемого вещества индуцировать анеуплоидию, которая ассоциируется с потенциальной генотоксической активностью.
Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.
200 мкл цельной венозной крови человека культивируется стандартным образом в условиях цитокинетического блока в присутствии цитохалазина В, что приводит к образованию лимфоцитов, содержащих два и более ядра. Через 24 часа от начала культивирования в культуру добавляется исследуемое вещество или оказывается воздействие изучаемым фактором. Всего исследуются не менее пяти культур, в четыре из них добавляется исследуемое вещество в разных концентрациях, а одна культура используются для контроля. Цитохалазин В добавляется в каждую культуру на 44 часу от начала культивирования до конечной концентрации 6 мкг/мл. Еще через 28 часов культивирования клетки крови стандартно фиксируются в холодной смеси метанол-уксусная кислота (3:1). Затем нанесением нескольких капель суспензии зафиксированных клеток на сухие охлажденные предметные стекла стандартно готовятся цитогенетические препараты, которые рутинно окрашиваются азур-эозином по методу Романовского. Далее при помощи светового микроскопа со встроенной цифровой камерой при увеличении 10×40 или более на каждом препарате выбираются и фотографируются 100 двуядерных лимфоцитов без видимых, в т.ч. генетических, повреждений с отдельно лежащими четко очерченными ядрами. Полученные изображения анализируются на персональном компьютере: для каждой двуядерной клетки вычисляются сумма ([∑S]=S1+S2) и отношение (S1/S2) площадей ядер. Затем для каждого препарата формируются массивы значений этих параметров (т.о. каждой дозе и контролю соответствует два массива данных по 100 значений в каждом). Массивы значений соответствующих параметров статистически сравниваются при помощи методов непараметрического анализа (Н критерий Краскела-Уоллеса). В случае обнаружения статистически значимых различий между опытом и контролем (уровень значимости p≤0,05), а также при обнаружении дозовой зависимости исследуемое вещество (фактор) признается обладающим потенциальной генотоксической активностью. Также для указанных параметров вычисляются медианы (Med[∑S], Med[S1/S2]), верхний (75‰) и нижний (25‰) квартили, их отношение (75‰/25‰) и разность (75‰-25‰). В случае обнаружения зависимости этих параметров от дозы вещества или обнаружения различий с контролем, превышающих погрешности измерения, исследуемое вещество (фактор) признается обладающим потенциальной генотоксической активностью.
Примеры реализации способа
1. При исследовании генотоксической активности N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина (МННГ, Aldrich) - соединения, обладающего мутагенной и канцерогенной активностями, которое используется в экспериментах как стандартный мутаген (индуктор нестабильности генома) (Рис.1 - Рис.3)
Проверка распределения морфометрических данных на нормальность критерием Шапиро-Уилка показала, что распределения отличаются от нормального с максимальным уровнем значимости р=0,01097. Методом Краскела-Уоллеса выявлено, что существуют статистически значимые различия между морфометрическими показателями, вычисленными для разных доз МННГ. При этом для Med[∑S] уровень значимости р=0,0000, а для Med[S1/S2] р=0,0031. С ростом дозы МННГ наблюдается стабильное уменьшение значений Med[S1/S2] и Med[∑S]norm (Рис.1). Цитогенетический анализ выявил выраженное дозозависимое снижение % 2-ядерных клеток в пролиферативном пуле и спектре делящихся клеток, а также рост % 1-ядерных клеток. Ярко выражены индукция МЯ в 2-ядерных клетках с увеличением дозы МННГ (характерный признак генотоксической активности), снижение % клеток в состоянии апоптоза (закрепление генетических повреждений). Проявляются эффекты увеличения асимметрии деления во 2-м митозе (увеличение частоты 3-ядерных клеток - маркер анеуплоидии), а также снижение % клеток в состоянии митоза. Эти результаты демонстрируют связь размеров и функционального состояния клеточного ядра и позволяют рассматривать морфометрию клеточных ядер как перспективный метод экспресс-оценки генотоксической активности веществ, в т.ч. - анеуплоидии.
2. При исследовании потенциальной генотоксической активности нановолокон гидроксида алюминия (AHN) (тип материала - IPC (AlOOH - 55%, Al(ОН)3 - 33%, Al2O3 - 5%, Al≤5%, H2O≤2%, другие компоненты <0,55%), изготовлен ООО «Передовые порошковые технологии», РФ) (Рис.4 - Рис.6)
Проверка распределения морфометрических данных на нормальность критерием Шапиро-Уилка показала, что распределения отличаются от нормального с максимальным уровнем значимости р=0,04633. Методом Краскела-Уоллеса выявлены статистически значимые различия между показателями Med[∑S], вычисленными для разных доз AHN (р=0,0000). Различий по показателям Med[S1/S2] обнаружено не было (р=0,2467). С ростом дозы AHN наблюдается увеличение значений Med[∑S] и (75‰-25‰)∑[S], со скачком на малой дозе (Рис.4, Рис.5). В целом морфометрический анализ показывает тенденцию к увеличению размеров клеточных ядер и доли 2-ядерных клеток с асимметричными ядрами с увеличением дозы AHN. Цитогенетический анализ в модифицированном микроядерном тесте лимфоцитов крови из тех же культур выявил дозозависимое увеличение % 2-ядерных клеток в пролиферативном пуле и спектре делящихся клеток, а также снижение % 3- и 4-ядерных клеток. Наблюдается тенденция к дозозависимому снижению уровня повреждений во всех типах клеток, снижению % клеток в состоянии апоптоза и митоза. Проявляются эффекты снижения асимметрии деления во 2-м митозе (маркер анеуплоидии) и снижения % 3-ядерных клеток с микроядрами. То есть результаты цитогенетических исследований во всем диапазоне доз противоположны результатам морфометрии. В то же время цитогенетические эффекты минимальной из использованных доз AHN демонстрируют повышение генотоксичности по сравнению с контролем практически по всем параметрам (что полностью соответствуют данным морфометрии). При больших уровнях воздействия AHN наблюдаются цитотоксические эффекты, связанные с гибелью - в первую очередь - поврежденных клеток, что статистически проявляется в снижении генотоксических эффектов. Таким образом, результаты морфометрического анализа не противоречат данным цитогенетических исследований.
3. Исследование влияния нано- и микрочастиц диоксида титана на морфометрические показатели и показатели микроядерного теста на культуре цельной крови человека (Рис.7)
Исследования проводили на крови двух доноров. Нано-ДТ вызывал дозозависимое увеличение асимметрии ядер в двуядерных клетках культур обоих доноров. При этом между морфометрическими показателями и несколькими показателями цитогенетического анализа выявлены значимые (p≤0,05) корреляции. Это доказывает перспективность использования морфометрии ядер для предварительного скрининга генотоксических эффектов в микроядерном тесте с цитохалазином В. Асимметрия ядер в двуядерных клетках может свидетельствовать о наличии анеуплоидии либо о различиях в компактности хроматина, возникших в результате экспозиции ДТ. Индукция любого из этих событий указывает на наличие генотоксической активности у изучаемого фактора.
В качестве примера на рисунке (Рис.7) для обоих доноров приведена динамика соотношения площадей ядер в двуядерных клетках по сравнению с изменением частоты 3-ядерных клеток с микроядрами (r2=0,988, p≤0,05).
Claims (1)
- Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока, включающий в себя культивирование лимфоцитов крови человека в условиях цитокинетического блока в присутствии изучаемого вещества, фиксацию клеток, приготовление и окраску цитогенетических препаратов, на которых после окраски для каждого препарата при помощи светового микроскопа со встроенной цифровой камерой при увеличении 10×40 проводится регистрация изображений 100 клеток, содержащих два отдельно лежащих ядра и не имеющих видимых, в т.ч. генетических повреждений, по этим изображениям вычисляется сумма и отношение площадей ядер в каждой такой клетке, на основании полученных данных вычисляются медианы, верхний и нижний квартили, их отношение и разность, проводится статистическое сравнение препаратов по этим параметрам, в случае обнаружения значимых различий при уровне значимости p≤0,05, а также при обнаружении дозовой зависимости делается вывод о способности изучаемого вещества индуцировать анеуплоидию, которая ассоциируется с потенциальной генотоксической активностью.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011108037/15A RU2467329C1 (ru) | 2011-03-03 | 2011-03-03 | Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2011108037/15A RU2467329C1 (ru) | 2011-03-03 | 2011-03-03 | Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2011108037A RU2011108037A (ru) | 2012-09-10 |
| RU2467329C1 true RU2467329C1 (ru) | 2012-11-20 |
Family
ID=46938525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2011108037/15A RU2467329C1 (ru) | 2011-03-03 | 2011-03-03 | Способ экспресс-оценки степени потенциальной генотоксической активности веществ и факторов среды по наличию анеуплоидии в лимфоцитах периферической крови человека, образовавшихся в результате культивирования в условиях цитокинетического блока |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2467329C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2054176C1 (ru) * | 1992-08-21 | 1996-02-10 | Фирма "Информ Инженеринг" | Способ идентификации физиологических систем |
| RU2223494C1 (ru) * | 2002-07-15 | 2004-02-10 | Научно-исследовательский институт медицинской генетики ТНЦ СО РАМН | Способ оценки мутагенных воздействий |
| WO2005121365A2 (en) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Reliance Life Sciences Pvt Ltd | Identifying chromosomal abnormalities in cells obtained from follicular fluid |
-
2011
- 2011-03-03 RU RU2011108037/15A patent/RU2467329C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2054176C1 (ru) * | 1992-08-21 | 1996-02-10 | Фирма "Информ Инженеринг" | Способ идентификации физиологических систем |
| RU2223494C1 (ru) * | 2002-07-15 | 2004-02-10 | Научно-исследовательский институт медицинской генетики ТНЦ СО РАМН | Способ оценки мутагенных воздействий |
| WO2005121365A2 (en) * | 2004-06-11 | 2005-12-22 | Reliance Life Sciences Pvt Ltd | Identifying chromosomal abnormalities in cells obtained from follicular fluid |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ИНГЕЛЬ Ф.И. Перспективы использования микроядерного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока // Экологическая генетика, 2006, №3, т. IV, с.7-19. АВТАНДИЛОВ Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. // М.: Медицина, 1990, с.139-149, с.248-268, с.342-351. КРУГЛОВА З.Ф. Генотоксический потенциал сточных вод и осадков как составная часть их токсикологической характеристики: Автореферат диссертации на соискание научной степени кандидат биологических наук, 2002. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2011108037A (ru) | 2012-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nicholson et al. | Chromosome mis-segregation and cytokinesis failure in trisomic human cells | |
| Harley et al. | Transcription factors operate across disease loci, with EBNA2 implicated in autoimmunity | |
| Hortigon-Vinagre et al. | The use of ratiometric fluorescence measurements of the voltage sensitive dye Di-4-ANEPPS to examine action potential characteristics and drug effects on human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes | |
| Cimini et al. | Merotelic kinetochore orientation versus chromosome mono-orientation in the origin of lagging chromosomes in human primary cells | |
| Robson et al. | Constrained release of lamina-associated enhancers and genes from the nuclear envelope during T-cell activation facilitates their association in chromosome compartments | |
| Montaño et al. | Measuring cell-type specific differential methylation in human brain tissue | |
| Gagliano et al. | Genomics implicates adaptive and innate immunity in Alzheimer's and Parkinson's diseases | |
| Gerlitz et al. | Efficient cell migration requires global chromatin condensation | |
| Mitra et al. | A hyperfused mitochondrial state achieved at G1–S regulates cyclin E buildup and entry into S phase | |
| Asare et al. | Coupling organelle inheritance with mitosis to balance growth and differentiation | |
| Rosin et al. | Chromosome territory formation attenuates the translocation potential of cells | |
| Dellaire et al. | Mitotic accumulations of PML protein contribute to the re-establishment of PML nuclear bodies in G1 | |
| Bull et al. | Folate deficiency is associated with the formation of complex nuclear anomalies in the cytokinesis‐block micronucleus cytome assay | |
| Bannik et al. | Are mouse lens epithelial cells more sensitive to γ-irradiation than lymphocytes? | |
| Iancu et al. | On the relationships in rhesus macaques between chronic ethanol consumption and the brain transcriptome | |
| Roci et al. | Metabolite profiling and stable isotope tracing in sorted subpopulations of mammalian cells | |
| McKenna et al. | Use of the comet-FISH assay to demonstrate repair of the TP53 gene region in two human bladder carcinoma cell lines | |
| Ptasinski et al. | Modeling fibrotic alveolar transitional cells with pluripotent stem cell-derived alveolar organoids | |
| Dahl et al. | The reconstructed skin micronucleus assay (RSMN) in EpiDerm™: detailed protocol and harmonized scoring atlas | |
| Smilenov et al. | A microbeam study of DNA double-strand breaks in bystander primary human fibroblasts | |
| Guertler et al. | The WST survival assay: an easy and reliable method to screen radiation-sensitive individuals | |
| Huang et al. | The fate of micronucleated cells post X-irradiation detected by live cell imaging | |
| Pendina et al. | DNA methylation patterns of metaphase chromosomes in human preimplantation embryos | |
| Quinsgaard et al. | Single-cell tracking as a tool for studying EMT-phenotypes | |
| Yamada et al. | Single-cell transcriptional analysis reveals developmental stage-dependent changes in retinal progenitors in the murine early optic vesicle |