RU2465009C2 - Комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты - Google Patents
Комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2465009C2 RU2465009C2 RU2010123168/15A RU2010123168A RU2465009C2 RU 2465009 C2 RU2465009 C2 RU 2465009C2 RU 2010123168/15 A RU2010123168/15 A RU 2010123168/15A RU 2010123168 A RU2010123168 A RU 2010123168A RU 2465009 C2 RU2465009 C2 RU 2465009C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- composition
- delivery
- cell
- delivering
- Prior art date
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 260
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 260
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 260
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 100
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 46
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims abstract description 33
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims abstract description 33
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 23
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 18
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 150000003139 primary aliphatic amines Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 51
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 29
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 27
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 25
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 108
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 48
- -1 for example Proteins 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 18
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 17
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 17
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 16
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 13
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 9
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 9
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 9
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 8
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 description 4
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 4
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 4
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- KWVJHCQQUFDPLU-YEUCEMRASA-N 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KWVJHCQQUFDPLU-YEUCEMRASA-N 0.000 description 3
- BSTPEQSVYGELTA-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethanol;hydrobromide Chemical compound [Br-].C[NH+](C)CCO BSTPEQSVYGELTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N Spermidine Natural products NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 3
- QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N (z)-octadec-9-en-1-amine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCN QGLWBTPVKHMVHM-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N bis(3-aminopropyl)amine Chemical compound NCCCNCCCN OTBHHUPVCYLGQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000010628 chamomile oil Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-M cyclohexanecarboxylate Chemical compound [O-]C(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000010408 film Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000010502 orange oil Substances 0.000 description 2
- 229960004692 perflenapent Drugs 0.000 description 2
- 229960004624 perflexane Drugs 0.000 description 2
- WTWWXOGTJWMJHI-UHFFFAOYSA-N perflubron Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)Br WTWWXOGTJWMJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001217 perflubron Drugs 0.000 description 2
- ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N perfluorohexane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F ZJIJAJXFLBMLCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N perfluoropentane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F NJCBUSHGCBERSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVZRBWKZFJCCIB-UHFFFAOYSA-N perfluorotributylamine Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)N(C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F RVZRBWKZFJCCIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 235000005713 safflower oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003813 safflower oil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZLVZIFMYXDKCN-QJWFYWCHSA-N 1,2-di-O-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC LZLVZIFMYXDKCN-QJWFYWCHSA-N 0.000 description 1
- IJFVSSZAOYLHEE-SSEXGKCCSA-N 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCC IJFVSSZAOYLHEE-SSEXGKCCSA-N 0.000 description 1
- 108090000344 1,4-alpha-Glucan Branching Enzyme Proteins 0.000 description 1
- 102000003925 1,4-alpha-Glucan Branching Enzyme Human genes 0.000 description 1
- NSTKRJHWBSUWDK-UHFFFAOYSA-N 1-(9H-carbazol-1-yl)dodecan-1-one hydrobromide Chemical compound Br.N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C(=O)CCCCCCCCCCC)=CC=C2 NSTKRJHWBSUWDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USIFBQFEYZQLGM-JDVCJPALSA-N 3,4-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]butyl-dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CCN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC USIFBQFEYZQLGM-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- SBAJRGRUGUQKAF-UHFFFAOYSA-N 3-(2-cyanoethylamino)propanenitrile Chemical compound N#CCCNCCC#N SBAJRGRUGUQKAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCGCVHFFAFSSCW-RTFZCPRASA-N 3-aminopropanoic acid (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol 2-(2-hydroxyethylamino)ethanol Chemical compound NCCC(O)=O.OCCNCCO.C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 BCGCVHFFAFSSCW-RTFZCPRASA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 4-[5-[3-(carboxymethoxy)phenyl]-3-(4,5-dimethyl-1,3-thiazol-2-yl)tetrazol-3-ium-2-yl]benzenesulfonate Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=C(OCC(O)=O)C=CC=2)=NN1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 240000003538 Chamaemelum nobile Species 0.000 description 1
- 235000007866 Chamaemelum nobile Nutrition 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 244000183685 Citrus aurantium Species 0.000 description 1
- 235000007716 Citrus aurantium Nutrition 0.000 description 1
- 244000168525 Croton tiglium Species 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 239000001293 FEMA 3089 Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 1
- 235000019501 Lemon oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 235000019502 Orange oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000011203 Origanum Nutrition 0.000 description 1
- 240000000783 Origanum majorana Species 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N Squalamine Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2O)[C@@H](NCCCNCCCCN)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CC[C@H](C(C)C)OS(O)(=O)=O)[C@@]2(C)CC1 UIRKNQLZZXALBI-MSVGPLKSSA-N 0.000 description 1
- UIRKNQLZZXALBI-UHFFFAOYSA-N Squalamine Natural products OC1CC2CC(NCCCNCCCCN)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(C(C)C)OS(O)(=O)=O)C1(C)CC2 UIRKNQLZZXALBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- PLZVEHJLHYMBBY-UHFFFAOYSA-N Tetradecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCN PLZVEHJLHYMBBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009470 Theobroma cacao Nutrition 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- VJLOFJZWUDZJBX-UHFFFAOYSA-N bis(2-hydroxyethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].OCC[NH2+]CCO VJLOFJZWUDZJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N butylazanide Chemical compound CCCC[NH-] MSZJEPVVQWJCIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000010495 camellia oil Substances 0.000 description 1
- 239000010624 camphor oil Substances 0.000 description 1
- 229960000411 camphor oil Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000010627 cedar oil Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 235000019480 chamomile oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000010630 cinnamon oil Substances 0.000 description 1
- 239000001926 citrus aurantium l. subsp. bergamia wright et arn. oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- TUTWLYPCGCUWQI-UHFFFAOYSA-N decanamide Chemical compound CCCCCCCCCC(N)=O TUTWLYPCGCUWQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M didodecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCC XRWMGCFJVKDVMD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium;hydrochloride Chemical compound Cl.CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N dodecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCN JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000010642 eucalyptus oil Substances 0.000 description 1
- 229940044949 eucalyptus oil Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000010643 fennel seed oil Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000001760 fusel oil Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 239000010649 ginger oil Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008173 hydrogenated soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000008172 hydrogenated vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000171 lavandula angustifolia l. flower oil Substances 0.000 description 1
- 239000010501 lemon oil Substances 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000001525 mentha piperita l. herb oil Substances 0.000 description 1
- 239000001683 mentha spicata herb oil Substances 0.000 description 1
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 1
- 125000001419 myristoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- DDBRXOJCLVGHLX-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylmethanamine;propane Chemical compound CCC.CN(C)C DDBRXOJCLVGHLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019477 peppermint oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000010665 pine oil Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000010734 process oil Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N protonated dimethyl amine Natural products CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000019719 rose oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000010666 rose oil Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019721 spearmint oil Nutrition 0.000 description 1
- 229950001248 squalamine Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005856 steroid saponins Chemical class 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000010497 wheat germ oil Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
- A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине и предоставляет комплекс нуклеиновой кислоты и сильно разветвленного циклического декстрина, представляющий собой глюкан со степенью полимеризации 50-5000, включающий внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент, образованный альфа-1,4-глюкозидными связями и как минимум одной альфа-1,6-глюкозидной связью, и внешний разветвленный структурный фрагмент, связанный с внутренним разветвленным циклическим структурным фрагментом. Группа изобретений включает также композицию, состоящую из комплекса, диацилфосфатидилхолина, как минимум одного соединения, выбранного из холестерина, и первичный алифатический амин, а также применение и способ доставки к клетке. Группа изобретений обеспечивает низкую токсичность и высокую степень безопасности, способность устойчиво поддерживать содержание нуклеиновой кислоты в клетке. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 ил., 6 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к комплексу нуклеиновой кислоты, который способен устойчиво находиться в клетке, обладая при этом низкой токсичностью и высокой степенью безопасности, а также к композиции для доставки нуклеиновой кислоты.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
С развитием биотехнологии в последние годы был обнаружен целый ряд нуклеиновых кислот, проявляющих физиологическую активность в клетках. Например, известно, что siRNA (малая интерферирующая РНК) вызывает разрушение mRNA целевого гена в клетке и подавляет экспрессию целевого гена (РНК-интерференция). Ингибирующее действие на экспрессию целевых генов вследствие РНК-интерференции применимо для облегчения или лечения симптомов заболеваний, вызванных аномальной экспрессией определенных генов или кластеров генов, и ожидается разработка терапевтических агентов, в которых применяется siRNA. Однако, поскольку нуклеиновые кислоты являются растворимыми в воде макромолекулами, несущими отрицательный заряд, эффективность их доставки к внутриклеточным генам является чрезвычайно низкой, что приводит к неэффективности генной терапии с применением siRNA.
Было известно, что эффективной доставке генов в клетки способствует применение носителя (вектора). Векторы включают вирусные векторы и невирусные векторы. Вирусные векторы проявляют высокую эффективность при введении нуклеиновых кислот в клетку; однако имеются различные неизвестные аспекты безопасности, включающие патогенность, иммуногенность и цитотоксичность. Следовательно, для клинических приложений желательно применение невирусных векторов.
Примеры невирусных векторов включают Lipofectamin™2000, который в настоящее время является коммерчески доступным. Далее, сообщалось о катионных липидах с особой структурой (см. патентный документ 1) и композиции (см. патентный документ 2), содержащей амфифильное соединение и поликатион. Внутриклеточную доставку нуклеиновых кислот с применением невирусного вектора проводят, смешивая на первой стадии нуклеиновую кислоту, доставку которой предполагается осуществить, с этим невирусным вектором для образования комплекса, и затем приводя этот комплекс в контакт с целевой клеткой. Если невирусный вектор может образовать липосому, этот вектор вводят в клетку с нуклеиновой кислотой, заключенной в липосому, тем самым осуществляя внутриклеточную доставку нуклеиновой кислоты.
Однако такие нуклеиновые кислоты, как siRNA, обладают специфической особенностью, которая заключается в низкой стабильности и значительном электрическом заряде. Поэтому при смешивании с невирусным вектором уменьшение стабильности нуклеиновой кислоты становится проблемой, которая препятствует непрерывному поступлению нуклеиновой кислоты в клетку. Хотя был известен пример, в котором нуклеиновая кислоты была захвачена липосомой за счет формирования комплекса siRNA и катионного полимера (см. непатентный документ 1), это неприменимо на практике из-за цитотоксичности катионного полимера. Далее, даже если может образоваться стабильный комплекс известного невирусного вектора и нуклеиновой кислоты, этот комплекс может обладать невысокой способностью проникать в клетку или же может быстро доставляться в клетку. Следовательно, такие известные невирусные векторы не могут обеспечить устойчивое наличие нуклеиновой кислоты в клетке, что не позволяет сохранять желаемые результаты, получаемые от действия нуклеиновой кислоты.
С точки зрения известного уровня техники желательна разработка методик для эффективной доставки нуклеиновых кислот (например, siRNA) в клетку и для устойчивого поддержания наличия в клетке этих нуклеиновых кислот, имеющих низкую токсичность и высокую безопасность.
Патентный документ 1: Japanese Unexamined Patent Publication No. 2002-529439
Патентный документ 2: Japanese Unexamined Patent Publication No. 2005-508394
Непатентный документ 1: Kentaro Kogure et al., Development of a non-viral-multifunctional-envelope-type nano device by a novel lipid film hydration method, J. Control. Release, 98 (2004) 317-323
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Проблемы, решаемые настоящим изобретением
Задача настоящего изобретения заключается в решении проблем известного уровня техники. Конкретно, задача настоящего изобретения заключается в предоставлении комплекса нуклеиновой кислоты, обладающего низкой токсичностью и высокой степенью безопасности, который способен устойчиво обеспечивать наличие нуклеиновой кислоты, например, siRNA или аналогичной, в клетке; а также композиции для доставки нуклеиновой кислоты, которая способна эффективно доставлять комплекс нуклеиновой кислоты в клетку. Другой задачей настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции, включающей композицию для доставки нуклеиновой кислоты, а также способа доставки нуклеиновой кислоты в клетку, путем приведения в контакт композиции для доставки нуклеиновой кислоты с клеткой.
Средства решения указанных проблем
Авторы настоящего изобретения провели обширные исследования для решения указанных выше проблем и обнаружили, что комплекс нуклеиновой кислоты, обладающий низкой токсичностью и высокой степенью безопасности, который способен устойчиво обеспечивать наличие нуклеиновой кислоты в клетке, может быть получен путем образования комплекса нуклеиновой кислоты, которую предполагается ввести в клетку, и сильно разветвленного циклического декстрина. Авторы настоящего изобретения обнаружили далее, что безопасность и эффективность внутриклеточной доставки, а также внутриклеточная устойчивость нуклеиновой кислоты могут быть дополнительно улучшены применением, в качестве носителя для доставки комплекса нуклеиновой кислоты в клетку, носителя, включающего (A) диацилфосфатидилхолин, (B) холестерин и/или его производное и (C) первичный алифатический амин. Работа над изобретением была завершена проведением дополнительных исследований на основе этих данных.
Сущность настоящего изобретения может быть изложена в следующих абзацах.
Абзац 1. Комплекс нуклеиновой кислоты, включающий нуклеиновую кислоту и сильно разветвленный циклический декстрин.
Абзац 2. Комплекс нуклеиновой кислоты согласно абзацу, где количество сильно разветвленного циклического декстрина составляет от 1 до 4000 массовых частей на одну массовую часть нуклеиновой кислоты.
Абзац 3. Комплекс нуклеиновой кислоты согласно абзацу 1 или 2, где нуклеиновая кислота представляет собой siRNA.
Абзац 4. Комплекс нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 1-3, где сильно разветвленный циклический декстрин представляет собой глюкан со степенью полимеризации 50-5000, включающий внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент, образованный α-1,4-глюкозидными связями и как минимум одной α-1,6-глюкозидной связью, и внешний разветвленный структурный фрагмент, связанный с внутренним разветвленным циклическим структурным фрагментом.
Абзац 5. Комплекс нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 1-4, который представляет собой агрегат, полученный смешиванием нуклеиновой кислоты с сильно разветвленным циклическим декстрином в водном растворе.
Абзац 6. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты, включающая комплекс нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 1-5 и носитель для доставки нуклеиновой кислоты.
Абзац 7. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 6, где носитель для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой композицию, включающую (A) диацилфосфатидилхолин, (B) как минимум одно соединение, выбранное из холестерина и его производных и (C) первичный алифатический амин.
Абзац 8. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 7, где компонент (A) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой диацилфосфатидилхолин, в котором ацильный фрагмент включает от 4 до 23 атомов углерода.
Абзац 9. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 7, где компонент (B) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой холестерин.
Абзац 10. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 7, где компонент (C) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой алкиламин, включающий от 10 до 20 атомов углерода.
Абзац 11. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 7, где мольное соотношение компонентов (A):(B):(C) составляет 5-9:1-5:1.
Абзац 12. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты согласно абзацу 7, где носитель для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой липосомальный препарат, в котором оболочка липосом образована компонентами (A)-(C).
Абзац 13. Фармацевтическая композиция, включающая композицию для доставки нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 6-12.
Абзац 14. Фармацевтическая композиция согласно абзацу 13, где нуклеиновая кислота представляет собой siRNA.
Абзац 15. Применение композиции для доставки нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 6-12 для получения фармацевтического средства для доставки нуклеиновой кислоты в клетку.
Абзац 16. Применение согласно абзацу 15, где нуклеиновая кислота представляет собой siRNA.
Абзац 17. Способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку, где указанный способ включает стадию приведения композиции для доставки нуклеиновой кислоты согласно любому из абзацев 6-12 в контакт с клеткой.
Абзац 18. Способ согласно абзацу 17, где нуклеиновая кислота представляет собой siRNA.
Эффекты изобретения
Комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению получают из нуклеиновой кислоты и сильно разветвленного циклического декстрина, что дает возможность получить комплекс нуклеиновой кислоты с высокой степенью безопасности и постоянно поддерживать присутствие нуклеиновой кислоты в клетке в течение длительного периода времени так, чтобы мог устойчиво проявляться полезный эффект от действия нуклеиновой кислоты. Далее, комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть легко превращен в комплекс с носителем для доставки нуклеиновой кислоты и может быть даже легко инкапсулирован в носитель для доставки нуклеиновой кислоты в липосомальной форме. Следовательно, комплекс по настоящему изобретению обладает отличными характеристиками с точки зрения легкости включения в состав композиции для доставки нуклеиновых кислот. Кроме того, композиция для доставки нуклеиновых кислот по настоящему изобретению обладает способностью вводить комплекс нуклеиновой кислоты в клетку.
Для доставки комплекса нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению в клетку применение носителя, включающего (A) диацилфосфатидилхолин, (B) холестерин и/или его производное и (C) первичный алифатический амин, в качестве носителя для внутриклеточной доставки, может увеличить эффективность внутриклеточной доставки комплекса нуклеиновой кислоты, а также способно дополнительно улучшить стабильность и безопасность такой внутриклеточной доставки.
Как указано выше, комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут демонстрировать полезные результаты благодаря эффективности, устойчивости и высокой степени безопасности; следовательно, указанные комплекс и композиция особенно применимы в качестве лекарственных средств для генной терапии. Таким образом, фармацевтическая композиция или способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку по настоящему изобретению способны обеспечить более эффективную доставку нуклеиновой кислоты в клетку.
Лучшие варианты осуществления настоящего изобретения
Далее по тексту настоящее изобретение описано более подробно.
(1) Комплекс нуклеиновой кислоты
Комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению включает нуклеиновую кислоту и сильно разветвленный циклический декстрин.
Нуклеиновая кислота, входящая в комплекс по настоящему изобретению, не ограничена по типу или структуре, если только существует необходимость доставить ее в клетку. Конкретные примеры таких нуклеиновых кислот включают siRNA, mRNA, tRNA, rRNA, cDNA, miRNA (микроРНК), рибозимы, антисмысловые олигонуклеотиды, олигонуклеотидные ловушки, плазмидные ДНК, пептид-нуклеиновые кислоты, триплекс-образующие олигонуклеотиды (TFOs), аптамеры, гены и т.д., причем среди перечисленных примеров предпочтительными являются siRNA. Недостаток siRNA заключается в низкой стабильности в присутствии известных ранее невирусных векторов, но если превратить siRNA в комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, она приобретает способность непрерывно доставляться в клетку, как если бы она имела прекрасную стабильность. Нуклеиновая кислота, применяемая в комплексе нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, может быть получена из организмов людей, животных, растений, бактерий, вирусов и т.п., или может быть синтезирована химическим путем. Эти нуклеиновые кислоты могут быть однонитевыми, двухнитевыми или трехнитевыми и не ограничены по молекулярной массе. Кроме того, в настоящем изобретении могут применяться нуклеиновые кислоты, модифицированные химическими реагентами, ферментами или пептидами. Помимо этого в настоящем изобретении нуклеиновые кислоты могут применяться по отдельности или в виде комбинации двух или большего числа кислот.
Сильно разветвленный циклический декстрин, применяемый в комплексе нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, получают действием ветвящего фермента на сахарид, включающий α-1,4-гликозидные связи и как минимум одну α-1,6-гликозидную связь, например амилопектин, и он представляет собой глюкан со степенью полимеризации от 50 до 5000, содержащий внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент и внешний разветвленный структурный фрагмент. Внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент представляет собой циклический структурный фрагмент, образованный α-1,4-гликозидными связями и как минимум одной α-1,6-гликозидной связью; и внешний разветвленный структурный фрагмент представляет собой нециклический структурный фрагмент, связанный с внутренним разветвленным циклическим структурным фрагментом. Внешний разветвленный структурный фрагмент связан со внутренним разветвленным циклическим структурным фрагментом как минимум одной α-1,6-гликозидной связью. Предпочтительные формы сильно разветвленного циклического декстрина включают упомянутый выше глюкан, в котором внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент имеет степень полимеризации от 10 до 100, упомянутый выше глюкан, в котором внешний разветвленный структурный фрагмент имеет степень полимеризации 40 или выше, и упомянутый выше глюкан, в котором отдельные цепи внешнего разветвленного структурного фрагмента имеют среднюю степень полимеризации от 10 до 20. Сильно разветвленный циклический декстрин может, например, представлять собой молекулу, показанную на фиг.1, в которой внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент помечен символом (i) и внешний разветвленный структурный фрагмент помечен символом (ii).
Степень полимеризации можно определить способом гель-фильтрации с использованием дифференциального рефрактометра исходя из положения вещества с известной степенью полимеризации. При этих измерениях, показания дифференциального рефрактометра пропорциональны концентрации глюкана, и показания фотометра рассеяния лазерного излучения под малыми углами пропорциональны степени полимеризации продукта и концентрации глюкана. Следовательно, степень полимеризации глюкана можно определить измерением соотношения показаний двух указанных приборов, т.е. дифференциального рефракторметра и фотометра рассеяния лазерного излучения под малыми углами. Конкретные условия описаны в US 6248566 B1 (патент Японии №3107358).
Сильно разветвленный циклический декстрин и способ его получения описаны в US 6248566 B1 (патент Японии №3107358), причем сильно разветвленный циклический декстрин продается под зарегистрированной товарной маркой “Cluster Dextrin” компанией Ezaki Glico Co., Ltd.
В комплексе нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению соотношение сильно разветвленного циклического декстрина и нуклеиновой кислоты не ограничено, но, как правило, оно составляет от 1 до 4000 массовых частей, предпочтительно от 10 до 1000 массовых частей и более предпочтительно от 100 до 400 массовых частей сильно разветвленного циклического декстрина на одну часть нуклеиновой кислоты. В величинах мольных соотношений, приведенные выше соотношения составляют, например, от 0,1 до 1000 молей, предпочтительно от 1 до 100 молей и более предпочтительно от 10 до 20 молей сильно разветвленного циклического декстрина на моль нуклеиновой кислоты. Соответствие приведенным выше соотношениям дает возможность добиться еще более выдающейся непрерывности внутриклеточной доставки нуклеиновой кислоты с помощью носителя для доставки нуклеиновой кислоты и ее безопасности.
Средний диаметр частиц комплекса нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, как правило, составляет от 6 до 60 нм, предпочтительно от 8 до 30 нм и более предпочтительно от 10 до 20 нм. Средний диаметр частиц комплекса нуклеиновой кислоты измеряют как среднеобъемный диаметр частиц с применением способа динамического рассеяния лазерного излучения.
Комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению представляет собой комплекс, образованный путем агрегации нуклеиновой кислоты и сильно разветвленного циклического декстрина. Комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению получают смешиванием нуклеиновой кислоты и сильно разветвленного циклического декстрина в растворе, в котором можно устойчиво диспергировать два этих вещества. Конкретные примеры растворов, в которых можно устойчиво диспергировать нуклеиновую кислоту и сильно разветвленный циклический декстрин, включают буферные растворы, такие как Tris и т.п. Эти буферные растворы могут содержать хелатирующие средства, например этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТУ) и т.п. Условия смешивания нуклеиновой кислоты и сильно разветвленного циклического декстрина, как в случае упомянутого выше раствора, могут быть, например, следующими: примерно 0,1 мкМ - 100 мкМ, предпочтительно примерно 1 мкМ - 10 мкМ нуклеиновой кислоты смешивают с примерно 1 мкМ - 1000 мкМ и предпочтительно примерно 10 мкМ - 100 мкМ сильно разветвленного циклического декстрина, при комнатной температуре в течение примерно 1-100 минут и предпочтительно от примерно 5 до примерно 10 минут. Полученный таким образом комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению образуется в виде дисперсии в растворе. Эта дисперсия может быть непосредственно или, при необходимости, после разбавления или концентрирования, смешана с носителем для доставки нуклеиновой кислоты.
(2) Композиция для доставки нуклеиновой кислоты
Комплекс нуклеиновой кислоты вводят в носитель для доставки нуклеиновой кислоты путем смешивания с этим носителем, и за счет этого появляется возможность доставки нуклеиновой кислоты в клетку. Т.е. в настоящем изобретении разработана также композиция для доставки нуклеиновой кислоты, включающая комплекс нуклеиновой кислоты и носитель для доставки нуклеиновой кислоты.
Носитель для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой невирусный вектор, применяемый в качестве носителя нуклеиновой кислоты для доставки (введения) нуклеиновой кислоты в клетку. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой композицию, применяемую для приведения нуклеиновой кислоты в контакт с клеткой, в которую предполагается доставить нуклеиновую кислоту, с целью введения содержащейся в композиции нуклеиновой кислоты в клетку.
Состав носителя для доставки нуклеиновой кислоты
Состав носителя для доставки нуклеиновой кислоты, применяемого в композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, не имеет ограничений, при условии, что он способен вводить нуклеиновую кислоту в клетку. Примеры применимых носителей для доставки нуклеиновых кислот включают известные носители, например Lipofectamine™ 2000 и т.п.
С точки зрения дальнейшего улучшения внутриклеточной устойчивости нуклеиновой кислоты, содержащейся в комплексе нуклеиновой кислоты, и дополнительного улучшения эффективности и безопасности внутриклеточной доставки предпочтительно применять, например, носитель, включающий (A) диацилфосфатидилхолин, (B) холестерин и/или его производное и (C) первичный алифатический амин (далее по тексту именуемый «носитель 1»).
На диацилфосфатидилхолин (далее по тексту иногда именуемый «Компонент (A)»), применяемый в носителе 1, не накладывается никаких ограничений, если он является фармакологически приемлемым, и он может представлять собой, например, диацилфосфатидилхолин, в котором ацильный фрагмент содержит от 4 до 23 атомов углерода. Число атомов углерода в двух ацильных группах, входящих в диацилфосфатидилхолин, может быть одинаковым или различным.
Конкретные примеры диацилфосфатидилхолинов включают дилауроилфосфатидилхолин, димиристоилфосфатидилхолин, дипальмитоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин, диолеоилфосфатидилхолин, дилинолеоилфосфатидилхолин, миристоилпальмитоилфосфатидилхолин, миристоилстеароилфосфатидилхолин, пальмитоилстеароилфосфатидилхолин, дибутилоилфосфатидилхолин, дигексаноилфосфатидилхолин, дигептаноилфосфатидилхолин, дидеканоилфосфатидилхолин, дифтаноилфосфатидилхолин, дидодецилфосфатидилхолин, диэйкозаноилфосфатидилхолин, дигенэйкозаноилфосфатидилхолин, диэрукоилфосфатидилхолин, диарахидоноилфосфатидилхолин, бис(трикозадиноил)фосфатидилхолин и т.д. Предпочтительные примеры из числа перечисленных соединений включают диацилфосфатидилхолины, в которых ацильный фрагмент включает от 12 до 18 атомов углерода; более предпочтительные примеры включают димиристоилфосфатидилхолин, дипальмитоилфосфатидилхолин, дистеароилфосфатидилхолин, миристоилпальмитоилфосфатидилхолин, миристоилстеароилфосфатидилхолин, пальмитоилстеароилфосфатидилхолин и подобные диацилфосфатидилхолины, в которых ацильный фрагмент включает от 13 до 17 атомов углерода; особенно предпочтительные примеры включают димиристоилфосфатидилхолин, дипальмитоилфосфатидилхолин и дистеароилфосфатидилхолин; и наиболее предпочтительным примером является дистеароилфосфатидилхолин. Перечисленные диацилфосфатидилхолины могут применяться по отдельности или в комбинации из двух или нескольких соединений.
Выбор холестерина и/или его производного (далее по тексту иногда именуемому «компонентом B»), применяемого в носителе 1, не ограничен, в случае если они являются фармакологически приемлемыми. Производными холестерина являются катионные липиды со скелетом холестерина, и их конкретные примеры включают 3β-[N-(N',N'-диметиламиноэтан)-карбамоил]холестерин (DC-Chol), 3β-[N',N',N'-триметиламиноэтан]холестерина йодид (TC-Chol), бис(гуанидиний)-трен-холестерин (BGTC), N-холестерилоксикарбонил-3,7-диазанонан-1,9-диамин, β-аланин-диэтаноламин-холестерин, N4-спермин холестерил карбамат (GL-67), N[N4-3-аминопропилспермидин]холестерил карбамат (GL-78), N4-спермин холестерил карбоксамид (GL-90), N1,N8-бис(аргинин карбоксамид)-N4-спермидин холестерил карбамат (GL-95) и N-[N1,N4,N8-трис(3-аминопропил)спермидин]холестерил карбамат (GL-96). Предпочтительные примеры компонента (B) включают холестерин. В носителе 1 холестерин и его производные могут применяться в качестве компонента (B) по отдельности или в виде комбинации из двух или более соединений.
Выбор первичного алифатического амина (далее по тексту иногда называемого «компонентом (C)»), применяемого в носителе 1, не ограничен, в случае если он является фармакологически приемлемым, и этот амин может представлять собой, например, алкиламин, в котором алкильный фрагмент включает от 10 до 20 атомов углерода.
Конкретные примеры первичных алифатических аминов включают лауриламин, миристиламин, пальмитиламин, стеариламин, олеиламин, деканоиламин, фтаноиламин и т.д. Среди перечисленных предпочтительными являются алкиламины, в которых алкильный фрагмент включает от 12 до 18 атомов углерода; более предпочтительными являются стеариламин, олеиламин и пальмитоиламин; и особенно предпочтительным является стеариламин. Эти первичные алифатические амины могут применяться по отдельности или в комбинации из двух или более соединений.
Носитель 1 включает комбинацию компонентов (A)-(C), описанных выше. Для дальнейшего улучшения эффективности внутриклеточной доставки нуклеиновой кислоты и дальнейшего снижения токсичности предпочтительными являются следующие комбинации:
(A) диацилфосфатидилхолин, в котором ацильный фрагмент содержит от 4 до 23 атомов углерода, (B) холестерин и/или его производное и (C) C10-20 алкиламин; и более предпочтительно (A) димиристоилфосфатидилхолин, дипальмитоилфосфатидилхолин и/или дистеароилфосфатидилхолин, (B) холестерин и (C) стеариламин.
В носителе 1 соотношение компонентов (A)-(C) не ограничивается, и, например, мольное соотношение компонентов (A):(B):(C) может составлять 5-9:1-5:1, предпочтительно 6-9:1-4:1 и более предпочтительно 7-8:2-3:1. Соответствие этим соотношениям делает возможным добиться внутриклеточной доставки нуклеиновой кислоты с наиболее высокой эффективностью и меньшей токсичностью.
Общее количество компонентов (A)-(C) по отношению к общей массе носителя 1 составляет, например, от 1 до 100 мас.%, предпочтительно от 20 до 90 мас.% и более предпочтительно от 30 до 70 мас.%.
Помимо компонентов (A)-(C), носитель 1 может содержать другие катионные липиды. Конкретные примеры применимых катионных липидов включают скваламин, 3a,7a,12a-трис(3-аминопропокси)-5β-холан-24-(N,N-бис(3-аминопропил)амин), 3a,7a,12a-трис(3-аминопропокси)-5β-холан-24-(N-(N-(3-аминопропил))-3-аминопропил)амин, 3a,7a,12a-трис(3-азидопропокси)-5β-холан-24-(N,N-бис(2-цианоэтил)амин), 3a,7a,12a-трис(3-азидопропокси)-5β-холан-24-(N-(бензилоксикарбонил)-N-(3-гидроксипропил)амин) и подобные катионные липиды, с которыми связаны стероиды; «молекулярные зонтики», являющиеся конъюгатами спермина, и подобные катионные липиды, с которыми связана холевая кислота; катионные липиды, с которыми связан гликозид стерина; катионные липиды, с которыми связан стероид сапонин; диметилдиоктадециламмония бромид (DDAB), 1,2-димиристоил-3-триметиламмоний пропан, 1,2-диолеоил-3-триметиламмоний пропан (DOTAP), 1,2-диолеоил-3-триметиламмоний пропан метилсульфат, 1,2-дипальмитоил-3-триметиламмоний пропан, 1,2-дистеароил-3-триметиламмоний пропан, N-(1-(2,3-бис(олеоилокси)пропил)-N,N,N-триметиламмония гидрохлорид (DOTMA), соль димиристоилоксипропил диметилгидроксиэтиламмония бромид (DMRIE), диолеоилоксипропил диметилгидроксиэтиламмония бромид (DORIE), диметилдидодециламмония бромид, N-(a-триметиламмонийацетил)додецил-D-глутамина гидрохлорид, N-(a-триметиламмонийацетил)-O,O'-бис-(1H,1H,2H,2H-перфтордецил)-L-глутамина гидрохлорид, O,O'-дидодеканоил-N-(a-триметиламмонийацетил)диэтаноламина гидрохлорид, метилаллил дидодецил аммония бромид, N-{p-(w-триметиламмонийбутилокси)бензоил}дидодецил-L-глутамина гидрохлорид, 9-(w-триметиламмонийбутил)-3,6-бис(додеканоил)карбазола бромид, диметилдиоктадецил аммония гидрохлорид, N-w-триметиламмонийдеканоил-дигексадецил-D-глутамина бромид, N-{p-(w-триметиламмонийгексилокси)бензоил}дитетрадецил-L-глутамина бромид, p-(w-триметиламмонийдецилокси)-p'-октилоксиазобензола бромид (MC-1-0810), p-{w-(b-гидроксиэтил)диметиламмонийдецилокси}-p'-октилоксиазобензола бромид (MC-3-0810), O,O',O''-тридодеканоил-N-(w-триметиламмонийдодеканоил)-трис(гидроксиметил)аминометана бромид (TC-1-12), 1,2-дилаурил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-димиристоил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-дипальмитоил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-дистеароил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1,2-диолеоил-глицеро-3-этилфосфохолин, 1-пальмитоил-2-олеоил-глицеро-3-этилфосфохолин и подобные катионные липиды, включающие четвертичные аммониевые соли.
Если носитель 1 содержит катионный липид, отличающийся от компонентов (A)-(C), доля этого катионного липида не ограничена, до тех пор пока не нарушается эффект от настоящего изобретения, и эта доля может составлять, например, от 1 до 10 частей по массе, предпочтительно от 2 до 8 частей по массе и более предпочтительно от 4 до 6 частей по массе, на 100 частей по массе компонентов (A)-(C) в совокупности.
Далее, носитель 1 может при необходимости включать масляную основу. Добавление масляной основы позволяет использовать ее способность регулировать эффективность введения нуклеиновой кислоты при участии носителя 1. Например, если масляную основу добавляют для того, чтобы отрегулировать удельный вес носителя 1, можно управлять контактом клетки с носителем 1, тем самым улучшая эффективность введения in vitro. Далее, например, если добавляют масляный носитель с функцией температурной чувствительности, ядро носителя, содержащее нуклеиновую кислоту, может разрушиться в заранее определенных температурных условиях, вызвав неоднородности на клеточной поверхности и улучшив, тем самым эффективность введения нуклеиновой кислоты. Кроме того, например, если добавлена масляная основа, которая обладает способностью разрушаться при внешних воздействиях, ядро носителя 1 может быть разрушено этими внешними воздействиями, вызвав появление неоднородностей на клеточной поверхности, что улучшает эффективность введения нуклеиновой кислоты.
Примеры масляных основ, которые могут быть добавлены к носителю 1, включают перфторуглерод, перфторпентан, перфтороктил бромид, перфторгексан, перфтортрибутиламин, соевое масло, рафинированное соевое масло, гидрированное соевое масло, неомыленное соевое масло, сквален, касторовое масло, гвоздичное масло, сорбитана триолеат, терпентиновое масло, сафлоровое масло, жирные кислоты сафлорового масла, олеиновую кислоту, пальмовое масло, рапсовое масло, сивушное масло, оливковое масло, льняное масло, кунжутное масло, хлорофилльное масло, кротоновое масло, масло бергамота, кедровое масло, апельсиновое масло, фенхелевое масло, эвкалиптовое масло, кукурузное масло, лавандовое масло, майорановое масло, лимонное масло, хлопковое масло, кокосовое масло, масло яичных желтков, розовое масло, хвойное масло, миндальное масло, арахисовое масло, масло камелии, очищенное камфорное масло, масло ромашки обыкновенной, коричное масло, масло мяты перечной, этерифицированное кукурузное масло, имбирное масло, масло римской ромашки, масло горца змеиного, масло мяты кудрявой, подсолнечное масло, какао-масло, масло проростков пшеницы, масло с оксидом цинка, гидрированные масла, гидрированные растительные масла, легкий жидкий парафин, жидкий парафин, триглицериды жирных кислот со средней длиной цепи, молочный жир, горькое апельсиновое масло, полиоксиэтилен касторовое масло, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 10, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 100, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 20, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 40, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 5, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло 50, полиоксиэтилен гидрированное кастровое масло 60, полиоксил 35 касторовое масло, технологические масла и т.д. Среди перечисленных масляных основ перфторпентан является чувствительным к температуре и имеет свойство закипать при температуре 29,5°C, превращаясь в газ. Кроме того, перфторгексан, перфтороктилбромид и перфтортрибутиламин обладают способностью разрушаться при внешних воздействиях и имеют свойство вызывать образование пор в ядре носителя 1 и разрушать его при получении внешнего сигнала, а именно ультразвукового воздействия.
Если масляная основа включена в состав носителя, ее доля не ограничена до тех пор пока это не препятствует получению эффекта настоящего изобретения, и эта доля может составлять, например, от 0,1 до 50 частей по массе, предпочтительно от 1 до 30 частей по массе и более предпочтительно от 5 до 20 частей по массе на 100 частей совокупной массы компонентов (A)-(C).
Далее, носитель 1 при необходимости может включать мембранно-фузогенный липид (вспомогательный липид). При наличии мембранно-фузогенного липида эффективность внутриклеточной доставки с участием носителя 1 дополнительно улучшается. Примеры таких мембранно-фузогенных липидов включают диолеоилфосфатидилэтаноламин, диолеоилфосфатидилхолин, трансфосфатидилфосфатидилэтаноламин, 1,2-бис-(10,12-трикозадиноил)фосфоэтаноламин, 1,2-диэлаидоилфосфоэтаноламин, 1,2-дигексадецилфосфоэтаноламин, 1,2-дигексаноилфосфоэтаноламин, 1,2-дилауроилфосфоэтаноламин, 1,2-дилинолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-димиристоилфосфоэтаноламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-дипальмитолеоилфосфоэтаноламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин, 1,2-дифитаноилфосфоэтаноламин, 1,2-дистеароилфосфоэтаноламин, 1-пальмитоил-2-олеоилфосфоэтаноламин, 1-пальмитоил-2-(10,12-трикозадиноил)фосфоэтаноламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-капроиламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-капроиламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N,N-диметил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N,N-диметил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-додеканоил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-додеканоил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-додеканиламин, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-додеканиламин, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-глутарил, 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-глутарил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-лактозу, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[4-(p-малеимидметил)циклогексанкарбоксилат], дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[4-(p-малеимидметил)циклогексанкарбоксилат], 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[4-(p-малеимидфенил)бутиламид], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[4-(p-малеимидфенил)бутират], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-метил, дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-метил, 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-[3-(2-пиридилдитио)пропионат], 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-[3-(2-пиридилдитио)пропионат], 1,2-диолеоилфосфоэтаноламин-N-(сукцинил), 1,2-дипальмитоилфосфоэтаноламин-N-(сукцинил) и т.д. Среди перечисленных липидов в носителе 1 может преимущественно применяться диолеоилфосфатидилэтаноламин.
Если указанный мембранно-фузогенный липид включен в состав носителя 1, его доля не ограничена до тех пор, пока это не препятствует получению эффекта настоящего изобретения, и эта доля может составлять, например, от 1 до 500 частей по массе, предпочтительно от 10 до 250 частей по массе и более предпочтительно от 25 до 100 частей по массе на 100 частей совокупной массы компонентов (A)-(C).
Носитель 1 может содержать различные добавки, например средства для придания изотоничности, наполнители, разбавители, загустители, стабилизаторы, буферы, консерванты и т.д.; и/или водные носители, например очищенную воду, растворы сахара в воде, буферные растворы, физиологический солевой раствор, водные растворы полимеров, воду, не содержащую РНКазу, и т.д.; в соответствии с формой применения. Количества таких добавок и водных носителей могут быть выбраны надлежащим образом в зависимости от формы применения носителя для доставки нуклеиновых кислот.
Форма носителя для доставки нуклеиновой кислоты
Форма носителя для доставки нуклеиновой кислоты не ограничена, если только в этот носитель может быть инкапсулирована нуклеиновая кислота, которую предполагается доставить в клетку, но предпочтительно носитель имеет форму липосомы. Например, если носитель 1 имеет форму липосомы, компоненты (A)-(C) и другие необязательно применяемые липиды образуют оболочку липосомы.
Если носитель для доставки нуклеиновой кислоты имеет форму липосомы, он может представлять собой малую однослойную везикулу (SUV), большую однослойную везикулу (LUV) или многослойную везикулу (MLV). Диаметр частицы носителя для доставки нуклеиновой кислоты может быть выбран в соответствии с типом клетки, в которую доставляют нуклеиновую кислоту, и может составлять, например, от примерно 20 нм до примерно 100 нм для SUV, от примерно 200 нм до примерно 1000 нм для LUV и от примерно 400 нм до примерно 3500 нм для MLV. Диаметр липосом измеряют с применением методики динамического рассеяния лазерного излучения.
Для получения липосом и регулирования их диаметра можно применять способы, известные в технике. Например, в случае носителя 1, липосомы могут быть получены способом тонкой пленки, способом выпаривания в обращенной фазе, способом впрыскивания раствора в эфире, способом удаления ПАВ и нагреванием или подобными способами, с применением масляной фазы, содержащей компоненты (A)-(C) и водной фазы (водного носителя). Диаметр частиц может быть отрегулирован способом экструзии, с применением пресса Френча, способом гомогенизации или подобными способами.
Форма, состав и способ применения композиции для доставки нуклеиновых кислот
Если носитель для доставки нуклеиновой кислоты имеет форму липосомы, комплекс нуклеиновой кислоты в композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может быть инкапсулирован во внутренней водной фазе липосомы или может быть связан со внутренней или внешней поверхностью оболочки липосомы ионной или гидрофобной связью. Если носитель для доставки нуклеиновой кислоты имеет форму, отличную от липосомы, комплекс нуклеиновой кислоты в композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению образует комплекс с компонентами носителя для доставки нуклеиновой кислоты за счет образования ионной или гидрофобной связи.
Композицию для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению получают смешиванием комплекса нуклеиновой кислоты с носителем для доставки нуклеиновой кислоты и превращением смеси в желаемую форму, или смешиванием компонентов комплекса нуклеиновой кислоты и композиции для доставки нуклеиновой кислоты в произвольном порядке и превращением этой смеси в желаемую форму.
В композиции для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению соотношение комплекса нуклеиновой кислоты и носителя для доставки нуклеиновой кислоты зависит от типа комплекса нуклеиновой кислоты, типа носителя для доставки нуклеиновой кислоты и типа клетки, в которую доставляют нуклеиновую кислоту и т.д. Это соотношение может составлять, например, от 1 до 100 частей по массе, предпочтительно от 10 до 100 частей по массе и более предпочтительно от 20 до 100 частей по массе комплекса нуклеиновой кислоты на 100 массовых частей общего количества носителя для доставки нуклеиновой кислоты. Более конкретно, если в качестве носителя для доставки нуклеиновой кислоты применяют носитель 1, соотношение может составлять, например, от 1 до 100 частей по массе, предпочтительно от 10 до 100 частей по массе и более предпочтительно от 20 до 100 частей по массе комплекса нуклеиновой кислоты на 100 массовый частей общего количества компонентов (A)-(C), содержащихся в носителе 1.
Далее, если носитель 1 применяют в качестве носителя для доставки нуклеиновой кислоты, общее количество компонентов (A)-(C), содержащихся в носителе 1, может составлять, например, от 10 до 90 мас.%, предпочтительно от 30 до 80 мас.% и более предпочтительно от 40 до 60 мас.%, по отношению к общему количеству композиции для доставки нуклеиновой кислоты.
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может содержать различные добавки, например средства для придания изотоничности, наполнители, разбавители, загустители, стабилизаторы, буферы, консерванты и т.д.; и/или водные носители, например очищенную воду, водные растворы глюкозы, буферные растворы, физиологический солевой раствор, т.д.; в соответствии с формой применения. Количества таких добавок и водных носителей могут быть выбраны надлежащим образом в зависимости от формы применения композиции для доставки нуклеиновой кислоты.
Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может применяться сама по себе в качестве лекарственного средства для генной терапии, т.е. в качестве фармацевтической композиции. Если композицию для доставки нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению применяют в качестве фармацевтической композиции, выбирают носитель для доставки нуклеиновой кислоты, основу, носитель и т.п., которые являются фармакологически приемлемыми. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно превращать в различные фармацевтические формы. Примеры форм фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают жидкие препараты, например растворы (включая сиропы и т.п.), капли, препараты для инъекций и т.п.; и твердые препараты, например таблетки, пилюли, порошки, гранулы, капсулы (включая мягкие капсулы) и т.п. Если фармацевтическая композиция по настоящему изобретению является жидким препаратом, ее можно законсервировать путем заморозки, лиофилизации или подобного способа удаления воды. Лиофилизованные препараты, сухие сиропы и т.д. могут быть повторно растворены в момент применения в дистиллированной воде для инъекций, стерилизованной воде и т.д. Если фармацевтическая композиция по настоящему изобретению является твердым препаратом, ее можно повторно растворить в момент применения в дистиллированной воде для инъекций, стерилизованной воде и т.д.
В настоящем изобретении не накладывается ограничений на клетки, в которые доставляются нуклеиновые кислоты, т.е. клетки, к которым применяется фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, и эти клетки могут являться клеточной культурой, клетками, изолированными из организма (включая устойчивые клеточные линии), клетками in vivo и т.д., и могут быть человеческими клетками или клетками животных, не являющихся человеком. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут применяться либо in vitro, либо in vivo.
В настоящем изобретении нуклеиновая кислота может быть доставлена в клетку через стадию приведения в контакт фармацевтической композиции по настоящему изобретению с клеткой. Способ приведения фармацевтической композиции в контакт с клеткой не ограничивается, при условии, что достаточное количество композиции для доставки нуклеиновой кислоты приведено в контакт с клеткой, в которую предполагается ввести нуклеиновую кислоту. Например, это может быть один из способов, известных к настоящему времени в генной терапии, и это же относится к количеству композиции, приводимому в контакт: выбирают подходящие способ и количество. Так, применение фармацевтической композиции по настоящему изобретению к клетке облегчает внутриклеточную доставку нуклеиновой кислоты и способствует устойчивому и постоянному пребыванию кислоты в клетке.
Например, для приведения фармакологической композиции по настоящему изобретению в контакт с клеткой in vitro, клетку можно культивировать в присутствии подходящего количества указанной фармацевтической композиции. Для приведения фармацевтической композиции по настоящему изобретению в контакт in vitro с культивированной клеткой или клеткой, изолированной из организма, контакт можно осуществлять в присутствии сыворотки крови. Если фармацевтическую композицию по настоящему изобретению приводят в контакт с клеткой in vivo, это можно осуществить, например, с помощью непосредственной инъекции в ткань; внутривенной, подкожной, внутримышечной, интраперитонеальной или внутриглазной инъекции или введения в пищеварительный тракт, зуб и т.п.; введения с помощью ингаляции в полость носа, полость рта, легкие и т.п.; перорального введения; трансдермального введения; трансмукозального введения через слизистую оболочку рта, слизистую оболочку влагалища, слизистую оболочку глаза, слизистую оболочку прямой кишки или слизистую оболочку матки; и т.п.
При необходимости, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармакологически приемлемый носитель или основу. Выбор этого носителя или основы не ограничен, при условии, что они не оказывают отрицательного влияния на эффект от настоящего изобретения, и можно выбрать подходящий носитель в соответствии с формой применения. Примеры включают указанные выше носители и основы. В этом случае соотношения фармацевтической композиции, носителя и основы также не ограничиваются, при условии, что сохраняется эффект от настоящего изобретения, и имеется возможность выбрать подходящие соотношения в зависимости от формы применения.
При применении фармацевтической композиции по настоящему изобретению применяется эффективное количество этой композиции. Например, фармацевтическую композицию применяют в таком количестве, чтобы количество комплекса нуклеиновой кислоты, входящего в композицию, составляло от 0,001 до 10 пМ, предпочтительно от 0,001 до 1 пМ и более предпочтительно от 0,01 до 0,1 пМ на клетку.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению способна доставлять в клетку конкретную нуклеиновую кислоту. Т.е. фармацевтическая композиция по настоящему изобретению эффективна при доставке в клетку конкретной нуклеиновой кислоты, которая входит в состав фармацевтической композиции и которая образует комплекс нуклеиновой кислоты, при приведении фармацевтической композиции в контакт с клеткой.
Кроме того, в настоящем изобретении разработан способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку. Способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку по настоящему изобретению включает стадию приведения в контакт с клеткой описанных выше комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты. Этот контакт между комплексом нуклеиновой кислоты или композицией для доставки нуклеиновой кислоты и клеткой не ограничивается, при условии, что подходящее количество комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты приведено в контакт с клеткой, в которую вводится нуклеиновая кислота. Например, этот контакт может быть осуществлен теми способами, которые известны к настоящему времени в генной терапии, и то же самое относится к количеству, которое необходимо привести в контакт: способ контакта и количество выбирают подходящим образом.
При приведении в контакт с клеткой комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты описанным выше образом, нуклеиновая кислота может устойчиво и постоянно находиться в клетке. Для контакта с клеткой комплекс нуклеиновой кислоты может быть применен сам по себе или в комбинации с носителем или основой, как описано выше. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты также может применяться сама по себе или в комбинации с носителем или основой, как описано выше. Для более эффективной внутриклеточной доставки нуклеиновой кислоты предпочтительно приводить в контакт с клеткой композицию для доставки нуклеиновой кислоты.
В настоящем изобретении, как указано выше, клетки, в которые доставляются нуклеиновые кислоты, не ограничиваются, и они могут являться культивированными клетками, клетками, изолированными из организма (включая устойчивые клеточные линии), клетками in vivo и т.п., и они могут быть человеческими клетками или клетками животных, не являющихся человеком. Упомянутый выше контакт может осуществляться in vitro или in vivo.
Например, для приведения в контакт с клеткой in vitro комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты, клетку можно культивировать в присутствии подходящего количества комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты. Для приведения комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты в контакт с культивированной клеткой или клеткой, изолированной из организма, in vitro, контакт можно осуществлять в присутствии сыворотки крови. Если комплекс нуклеиновой кислоты или композицию для доставки нуклеиновой кислоты приводят в контакт с клеткой in vivo, это можно осуществить, например, с помощью непосредственной инъекции в ткань; внутривенной, подкожной, внутримышечной, интраперитонеальной или внутриглазной инъекции или введения в пищеварительный тракт, зуб и т.п.; введения с помощью ингаляции в полость носа, полость рта, легкие и т.п.; перорального введения; трансдермального введения; трансмукозального введения через слизистую оболочку рта, слизистую оболочку влагалища, слизистую оболочку глаза, слизистую оболочку прямой кишки или слизистую оболочку матки; и т.п.
В способе доставки нуклеиновой кислоты в клетку по настоящему изобретению эффективное количество комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты вводят в контакт с клеткой с целью введения нуклеиновой кислоты в клетку. Например, количество комплекса нуклеиновой кислоты или композиции для доставки нуклеиновой кислоты, которое необходимо ввести, выбирают таким образом, чтобы было введено от 0,001 до 10 пМ, предпочтительно от 0,001 до 1 пМ и более предпочтительно от 0,01 до 0,1 пМ комплекса нуклеиновой кислоты на клетку.
Способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку по настоящему изобретению может быть реализован путем приведения фармацевтической композиции в контакт с клеткой. При применении фармацевтической композиции способ по настоящему изобретению может быть воплощен таким же образом, как описано выше.
ПРИМЕРЫ
Далее по тексту настоящее изобретение будет описано более подробно с привлечением примеров разного типа, но изобретение не ограничено этими примерами. В приведенных ниже примерах и тестовых примерах в качестве siRNA использовали GL3-siRNA (siRNA люциферазы жука-светляка; Dharmacon Research, Inc., (Boulder, CO), USA; смысловая последовательность: 5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAdTdT, антисмысловая последовательность 5'-UCGAAGUACUCAGCGUAAGdTdT). В качестве сильно разветвленного циклического декстрина использовали продукт под торговой маркой “Cluster dextrin” (Ezaki Glico Co., Ltd.).
Пример 1
Получение комплекса, содержащего siRNA, и сильно разветвленный циклический декстрин
Раствор, содержащий siRNA в концентрации 2 мкМ (раствор siRNA), готовили с использованием буферного раствора Tris-EDTA (TE) (производимого Fluka Co., Ltd.). Затем готовили раствор, содержащий сильно разветвленный циклический декстрин, в концентрации 25 мкМ (раствор сильно разветвленного циклического декстрина) с использованием буферного раствора Tris-EDTA (TE) (производимого Fluka). Равные количества этих растворов смешивали в течение 1 минуты, получая комплекс siRNA. В таблице 1 показаны свойства полученного комплекса siRNA.
| Таблица 1 | ||
| Диаметр частиц (нм) | Дзета-потенциал (мВ) | |
| Комплекс | 31,1 | -42,9 |
* Указанный размер частиц являлся средним диаметром частиц (нм), измеренным с использованием прибора ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT) (объемный средний диаметр частиц измеряли способом дифракции лазерного излучения). Дзета-потенциал измеряли с использованием прибора ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT).
Пример 2
Получение композиции для доставки нуклеиновой кислоты, содержащей комплекс siRNA
Отвешивали дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), холестерин и стариламин, так чтобы их мольное соотношение составляло 7:3:1, и растворяли соединения в хлороформе, используя колбу в форме баклажана (регенерирующую колбу). Раствор упаривали досуха при пониженном давлении с использованием роторного испарителя, получая тонкий слой липидной пленки. К полученному тонкому слою липидной мембраны добавляли раствор, содержащий 0,028 мг/мл комплекса siRNA, полученного в примере 1, в таком количестве, чтобы концентрация DSPC в растворе составляла 30 мг/мл, и затем перемешивали. После этого регулировали диаметр частиц в растворе пропусканием через мембраны, имеющие диаметр пор 800 нм и 200 нм, с использованием экструдера, получая композицию для доставки siRNA в форме катионных липосом. Полученная композиция для доставки siRNA имела диаметр частиц примерно 200 нм и находилась в липосомальной форме, причем все частицы имели приблизительно одинаковый размер. Дзета-потенциал композиции составлял примерно 50 мВ. Указанный диаметр частиц являлся средним диаметром частиц (нм), измеренным с использованием прибора ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT) (объемный средний диаметр частиц измеряли способом дифракции лазерного излучения). Дзета-потенциал измеряли с использованием прибора ZETASIZER 3000HSA (MALVERN INSTRUMENT).
Пример 3
Получение композиции для доставки нуклеиновой кислоты, содержащей комплекс siRNA
Композицию для доставки нуклеиновой кислоты в форме катионных липосом получали способом, аналогичным способу примера 2, за исключением того, что соотношение DSPC, холестерина и стеариламина составляло 7:3:2. Как и в примере 2, полученная композиция для доставки siRNA имела диаметр частиц примерно 200 нм и имела липосомальную форму, где размер частиц был приблизительно одинаковым. Дзета-потенциал композиции составлял примерно 50 мВ.
ТЕСТОВЫЙ ПРИМЕР 1
Оценка эффективности включения siRNA в липосомы
Комплекс siRNA, меченый FITC, получали тем же способом, что и выше в примере 1, используя siRNA, предварительно меченую FITC. Используя комплекс siRNA, меченый FITC, получали композицию для доставки нуклеиновой кислоты в условиях примеров 2 и 3. Сразу же после получения композицию для доставки siRNA осаждали центрифугированием (при 75000 об/мин в течение 1 часа) и измеряли интенсивность флуоресценции меченого FITC комплекса siRNA в надосадочной жидкости для расчета эффективности включения siRNA в липосомы (доля в (%) siRNA, включенной в липосомы по отношению к общему количеству siRNA).
В результате был продемонстрирован максимальный уровень эффективности включения siRNA в липосомы, равный 97,2% при получении композиции в условиях примера 2, и 99,8% при получении композиции в условиях примера 3. Это показывает, что комплекс нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению обладает способностью эффективно включаться в носитель для доставки нуклеиновой кислоты в липосомальной форме. Хотя ограничивающая интерпретация этого факта нежелательна, предположительно это происходит из-за того, что сильно разветвленный циклический декстрин образует компактный комплекс с siRNA.
ТЕСТОВЫЙ ПРИМЕР 2
Тест по оценке безопасности для клеток композиции для доставки нуклеиновой кислоты
Оценку безопасности композиции проводили с использованием анализа MTS. Для анализа MTS использовали колориметрический набор CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay, выпускаемый Promega Corporation. Конкретно, клетки A594 (ATCC, USA) высевали в 96-луночный планшет в количестве 3,16×104 клеток/лунку в 200 мкл среды Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 10 об.% сыворотки телят (FBS) и инкубировали при 37°C в течение 24 часов. После трехкратного промывания сбалансированным солевым раствором Хэнка (HBSS) среду меняли на DMEM без FBS. Каждую из композиций для доставки нуклеиновых кислот добавляли в количестве 20 мкл на лунку и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение 4 часов. Далее культуральный супернатант в лунках меняли на DMEM с 10 об.% FBS и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение еще 20 часов. В каждую лунку добавляли двадцать мкл реагента MTS (тетразолиевой соли) и 100 мкл среды DMEM с 10 об.% FBS и инкубировали в течение двух часов. Затем определяли поглощение при 492 нм и рассчитывали выживаемость клеток. Выживаемость клеток рассчитывали, принимая за 100% поглощение при 492 нм, зафиксированное для клеток без добавления композиции для доставки нуклеиновой кислоты, которые инкубировали в указанных выше условиях.
Результаты теста показаны на фиг.2. Из фиг.2 видно, что все композиции для доставки нуклеиновой кислоты примеров 2 и 3 имеют низкую цитотоксичность и высокую степень безопасности. В частности, подтверждено, что композиции для доставки нуклеиновой кислоты примеров 2 и 3 имеют весьма высокий уровень безопасности.
ТЕСТОВЫЙ ПРИМЕР 3
Тест для оценки эффективности доставки siRNA в клетки
Эффективность введения siRNA в клетки оценивали путем измерения интенсивности флуоресценции меченой FITC siRNA с использованием поточной цитометрии. В этом тесте использовали композицию для доставки нуклеиновой кислоты, полученную на основе siRNA, заранее меченой FITC. Конкретно, клетки A594 (ATCC, USA) высевали в 24-луночный планшет в количестве 5×105 клеток/лунку в 500 мкл среды DMEM, содержащей 10 об.% FBS и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение 24 часов. После трехкратного промывания HBSS, добавляли 0,95 мл среды DMEM, не содержавшей FBS. Затем в каждую лунку добавляли 0,05 мл каждой из композиций для доставки нуклеиновых кислот примеров 1 и 2 и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение 4 часов. Далее культуральный супернатант в лунках меняли на DMEM с 10 об.% FBS и инкубировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение еще 20 часов. Каждую лунку один раз промывали HBSS и добавляли 0,2 мл CellScrubBuffer (выпускаемого Gene Therapy Systems, Inc.), осуществляли инкубирование при 37°C в атмосфере 5% CO2 в течение 15 минут. Опять дважды промывали лунки HBSS, клетки, прикрепленные к дну лунки, отделяли с использованием трипсина и осаждали клетки центрифугированием. Полученные клетки суспендировали в HBSS. Суспензию фильтровали через мембрану с диаметром пор 41 мкм. Интенсивность флуоресценции клеток измеряли способом поточной цитометрии через 2 часа, 12 часов и 24 часа после добавления композиции для доставки нуклеиновой кислоты. В качестве контрольного эксперимента измеряли интенсивность флуоресценции клеток, обработанных по описанной выше методике, с использованием контрольной композиции для доставки нуклеиновой кислоты, полученной смешиванием раствора Lipofectamine 2000™ (выпускаемого Invitrogen Corporation), часто применяемого в качестве коммерчески доступного генного вектора, разбавленного средой OptiMEM до концентрации 0,1 мг/мл, и раствора siRNA, в котором siRNA был разбавлен буфером TE до концентрации 2 мкМ, в соотношении объемов 1:1.
Полученные результаты показаны на фиг.3. Эти результаты подтверждают, что при применении композиций для доставки нуклеиновых кислот примеров 1 и 2 siRNA устойчиво находится в клетках, причем ее концентрация в клетке остается постоянной. В противоположность этому, контрольные композиции для доставки нуклеиновых кислот продемонстрировали не только низкую эффективность первоначальной доставки siRNA в клетки, но также уменьшение содержания siRNA в клетках со временем, что приводит к недостаточным количествам siRNA в клетках через 12 и 24 часа после добавления композиции.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА
На фиг.1 показан пример сильно разветвленного циклического декстрина.
На фиг.2 показаны результаты Тестового Примера 2, т.е. результаты оценки безопасности для клетки композиций для доставки нуклеиновой кислоты.
На фиг.3 показаны результаты оценки введения siRNA в клетки с помощью композиций для доставки нуклеиновой кислоты в Тестовом Примере 3. Значения по оси ординат на фиг.3 показывают среднюю интенсивность флуоресценции на одну клетку.
Claims (14)
1. Комплекс нуклеиновой кислоты, включающий нуклеиновую кислоту и сильно разветвленный циклический декстрин, где сильно разветвленный циклический декстрин представляет собой глюкан со степенью полимеризации 50-5000, включающий внутренний разветвленный циклический структурный фрагмент, образованный α-1,4-глюкозидными связями и как минимум одной α-1,6-глюкозидной связью, и внешний разветвленный структурный фрагмент, связанный с внутренним разветвленным циклическим структурным фрагментом.
2. Комплекс нуклеиновой кислоты по п.1, где количество сильно разветвленного циклического декстрина составляет от 1 до 4000 массовых частей на одну массовую часть нуклеиновой кислоты.
3. Комплекс нуклеиновой кислоты по п.1 или 2, где нуклеиновая кислота представляет собой siRNA.
4. Комплекс нуклеиновой кислоты по п.1 или 2, который представляет собой агрегат, полученный смешиванием нуклеиновой кислоты с сильно разветвленным циклическим декстрином в водном растворе.
5. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты, включающая комплекс нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-4 и носитель для доставки нуклеиновой кислоты.
6. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.5, где носитель для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой композицию, включающую (А) диацилфосфатидилхолин, (В) как минимум одно соединение, выбранное из холестерина и катионных липидов со скелетом холестерина, и (С) первичный алифатический амин.
7. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.6, где компонент
(A) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой диацилфосфатидилхолин, в котором ацильный фрагмент включает от 4 до 23 атомов углерода.
(A) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой диацилфосфатидилхолин, в котором ацильный фрагмент включает от 4 до 23 атомов углерода.
8. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.6, где компонент
(B) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой холестерин.
(B) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой холестерин.
9. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.6, где компонент (C) носителя для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой алкиламин, включающий от 10 до 20 атомов углерода.
10. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.6, где мольное соотношение компонентов (А):(В):(С) составляет 5-9:1-5:1.
11. Композиция для доставки нуклеиновой кислоты по п.6, где носитель для доставки нуклеиновой кислоты представляет собой липосомальный препарат, в котором оболочка липосом образована компонентами (А)-(С).
12. Фармацевтическая композиция для доставки нуклеиновой кислоты в клетку, включающая композицию по любому из пп.5-11.
13. Применение композиции для доставки нуклеиновой кислоты по любому из пп.5-11 для получения фармацевтического средства для доставки нуклеиновой кислоты в клетку.
14. Способ доставки нуклеиновой кислоты в клетку, включающий стадию приведения композиции по любому из пп.5-11 в контакт с клеткой.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007291317 | 2007-11-08 | ||
| JP2007-291317 | 2007-11-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010123168A RU2010123168A (ru) | 2011-12-20 |
| RU2465009C2 true RU2465009C2 (ru) | 2012-10-27 |
Family
ID=40303461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010123168/15A RU2465009C2 (ru) | 2007-11-08 | 2008-11-06 | Комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8338584B2 (ru) |
| EP (1) | EP2217208B1 (ru) |
| JP (1) | JP5340282B2 (ru) |
| KR (1) | KR101567108B1 (ru) |
| CN (1) | CN101854918B (ru) |
| AR (1) | AR069224A1 (ru) |
| AT (1) | ATE522201T1 (ru) |
| AU (1) | AU2008325504B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0819187A2 (ru) |
| CA (1) | CA2704236C (ru) |
| CO (1) | CO6280469A2 (ru) |
| CY (1) | CY1112029T1 (ru) |
| DK (1) | DK2217208T3 (ru) |
| ES (1) | ES2369869T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20110698T1 (ru) |
| IL (1) | IL205237A0 (ru) |
| MX (1) | MX2010005094A (ru) |
| MY (1) | MY149917A (ru) |
| NZ (1) | NZ584841A (ru) |
| PL (1) | PL2217208T3 (ru) |
| PT (1) | PT2217208E (ru) |
| RU (1) | RU2465009C2 (ru) |
| SI (1) | SI2217208T1 (ru) |
| TW (1) | TWI426922B (ru) |
| UA (1) | UA97559C2 (ru) |
| WO (1) | WO2009061003A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA201002845B (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI428135B (zh) | 2007-03-26 | 2014-03-01 | Hirofumi Takeuchi | And a carrier composition for quick-acting nucleic acid delivery |
| AR083445A1 (es) | 2010-10-14 | 2013-02-27 | Univ Mie | siARN CONTRA LA FIBROSIS |
| RU2582235C2 (ru) | 2010-12-29 | 2016-04-20 | Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг | Низкомолекулярные конъюгаты для внутриклеточной доставки нуклеиновых кислот |
| AU2013231561B2 (en) * | 2012-03-15 | 2017-06-08 | Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco A.C.R.A.F. S.P.A. | Glycogen-based cationic polymers |
| JPWO2019131727A1 (ja) * | 2017-12-27 | 2021-02-12 | コニカミノルタ株式会社 | 医薬の評価方法 |
| WO2025029927A1 (en) * | 2023-07-31 | 2025-02-06 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Lipid nanoparticle |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004033620A2 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-22 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
| US20060228420A1 (en) * | 2005-03-15 | 2006-10-12 | Queen Mary & Westfield College | Pharmaceutical compositions comprising microparticles for delivery into neurons |
| RU2289585C2 (ru) * | 2002-02-04 | 2006-12-20 | Корикса Корпорейшн | Новые аминоалкилглюкозаминидфосфатные соединения, иммуностимулирующая фармацевтическая композиция, их содержащая, и способ индуцирования иммунного ответа |
| US20070085059A1 (en) * | 2004-02-23 | 2007-04-19 | Texas A&M University System | Bioactive Complexes Compositions and Methods of Use Thereof |
| US20080153166A1 (en) * | 1995-01-23 | 2008-06-26 | Leaf Huang | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01238537A (ja) * | 1988-03-18 | 1989-09-22 | Toyo Jozo Co Ltd | 肝障害治療剤 |
| JP3150266B2 (ja) * | 1994-04-01 | 2001-03-26 | 江崎グリコ株式会社 | 環状構造を有するグルカンおよびその製造方法 |
| JP3107358B2 (ja) | 1994-09-13 | 2000-11-06 | 江崎グリコ株式会社 | 環状構造を有するグルカンおよびその製造方法 |
| US6248566B1 (en) * | 1994-09-13 | 2001-06-19 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Glucan having cyclic structure and method for producing the same |
| US5827697A (en) | 1995-03-31 | 1998-10-27 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Process for preparing glucans having a cyclic structure |
| US20030092180A1 (en) | 2001-08-27 | 2003-05-15 | David Lewis | Inhibition of gene expression by delivery of small interfering RNA to post-embryonic animal cells in vivo |
| JPH11292795A (ja) | 1998-04-02 | 1999-10-26 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | Ｈｉｖコファクター抑制剤 |
| EP1129064B1 (en) | 1998-11-12 | 2008-01-09 | Invitrogen Corporation | Transfection reagents |
| US20040204420A1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-10-14 | Rana Tariq M. | Compounds for modulating RNA interference |
| US20060030578A1 (en) * | 2002-08-20 | 2006-02-09 | Neopharm, Inc. | Pharmaceutically active lipid based formulation of irinotecan |
-
2008
- 2008-06-11 UA UAA201007049A patent/UA97559C2/ru unknown
- 2008-11-05 TW TW097142679A patent/TWI426922B/zh not_active IP Right Cessation
- 2008-11-06 HR HR20110698T patent/HRP20110698T1/hr unknown
- 2008-11-06 BR BRPI0819187 patent/BRPI0819187A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-11-06 MY MYPI2010001775A patent/MY149917A/en unknown
- 2008-11-06 AU AU2008325504A patent/AU2008325504B2/en not_active Ceased
- 2008-11-06 EP EP08848047A patent/EP2217208B1/en active Active
- 2008-11-06 ES ES08848047T patent/ES2369869T3/es active Active
- 2008-11-06 PL PL08848047T patent/PL2217208T3/pl unknown
- 2008-11-06 KR KR1020107012581A patent/KR101567108B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-06 SI SI200830383T patent/SI2217208T1/sl unknown
- 2008-11-06 CN CN2008801151656A patent/CN101854918B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-06 PT PT08848047T patent/PT2217208E/pt unknown
- 2008-11-06 MX MX2010005094A patent/MX2010005094A/es active IP Right Grant
- 2008-11-06 CA CA2704236A patent/CA2704236C/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-06 AT AT08848047T patent/ATE522201T1/de active
- 2008-11-06 NZ NZ584841A patent/NZ584841A/en not_active IP Right Cessation
- 2008-11-06 US US12/741,457 patent/US8338584B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-06 RU RU2010123168/15A patent/RU2465009C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-11-06 JP JP2010517212A patent/JP5340282B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-11-06 DK DK08848047.0T patent/DK2217208T3/da active
- 2008-11-06 WO PCT/JP2008/070642 patent/WO2009061003A2/en not_active Ceased
- 2008-11-07 AR ARP080104877A patent/AR069224A1/es unknown
-
2010
- 2010-04-22 ZA ZA2010/02845A patent/ZA201002845B/en unknown
- 2010-04-22 IL IL205237A patent/IL205237A0/en unknown
- 2010-06-08 CO CO10068754A patent/CO6280469A2/es active IP Right Grant
-
2011
- 2011-11-14 CY CY20111101091T patent/CY1112029T1/el unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080153166A1 (en) * | 1995-01-23 | 2008-06-26 | Leaf Huang | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production |
| WO2004033620A2 (en) * | 2001-11-02 | 2004-04-22 | Insert Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for therapeutic use of rna interference |
| RU2289585C2 (ru) * | 2002-02-04 | 2006-12-20 | Корикса Корпорейшн | Новые аминоалкилглюкозаминидфосфатные соединения, иммуностимулирующая фармацевтическая композиция, их содержащая, и способ индуцирования иммунного ответа |
| US20070085059A1 (en) * | 2004-02-23 | 2007-04-19 | Texas A&M University System | Bioactive Complexes Compositions and Methods of Use Thereof |
| US20060228420A1 (en) * | 2005-03-15 | 2006-10-12 | Queen Mary & Westfield College | Pharmaceutical compositions comprising microparticles for delivery into neurons |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Kogure K et al.; Development of non-viral multifunction envelope-type nano device by a novel lipid film hydration method.;. J. Control Release, 2004, Aug 11; 98(2):317-23, PMID:15262422, реферат. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104922676B (zh) | 聚胺衍生物 | |
| RU2465009C2 (ru) | Комплекс нуклеиновой кислоты и композиция для доставки нуклеиновой кислоты | |
| EP2140870B1 (en) | Prompt nucleic acid delivery carrier composition | |
| JP5808246B2 (ja) | 核酸複合体、及び核酸送達用組成物 | |
| HK1142278B (en) | Nucleic acid complex and nucleic acid delivery composition | |
| HK1139041B (en) | Prompt nucleic acid delivery carrier composition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161107 |