RU2330676C1 - Method of agaricic acid production - Google Patents
Method of agaricic acid production Download PDFInfo
- Publication number
- RU2330676C1 RU2330676C1 RU2007100417/15A RU2007100417A RU2330676C1 RU 2330676 C1 RU2330676 C1 RU 2330676C1 RU 2007100417/15 A RU2007100417/15 A RU 2007100417/15A RU 2007100417 A RU2007100417 A RU 2007100417A RU 2330676 C1 RU2330676 C1 RU 2330676C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acid
- ethanol
- agaricic acid
- raw materials
- agaricic
- Prior art date
Links
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 95
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract 3
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 28
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 24
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 17
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 claims abstract description 9
- 241000408172 Fomitopsis officinalis Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 14
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 abstract 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 29
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical group ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000218652 Larix Species 0.000 description 4
- 235000005590 Larix decidua Nutrition 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091068592 Fungi family Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102000004482 ATP Translocases Mitochondrial ADP Human genes 0.000 description 1
- 108010017236 ATP Translocases Mitochondrial ADP Proteins 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000208365 Celastraceae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001480537 Fomitopsis Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000000336 Solanum dulcamara Nutrition 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 210000002311 liver mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 238000001208 nuclear magnetic resonance pulse sequence Methods 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000037050 permeability transition Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способам выделения биологически активных веществ из растительного сырья, в частности к технологии получения агарициновой кислоты. Она используется для проведения анализа и получения лекарственных препаратов [Garcia, N. Agaric acid induces mitochondrial permeability transition through its interaction with the adenine nucleotide translocase. Its dependence on membrane fluidity. / Garcia N., Zazueta C., Pavon N., Chavez E. // Mitochondrion. - 2005. - V.5. - Is. 4. - P.272-281; Chavez, E. The effect of agaric on citrate transport in rat liver mitochondria. / Chavez E., Chavez R., Carrasco N. // Life Sciences. - 1978. - V.23. - Is. 14. - P.1423-1429].The invention relates to the pharmaceutical industry, and in particular to methods of isolating biologically active substances from plant materials, in particular to a technology for producing agaricin acid. It is used to analyze and obtain drugs [Garcia, N. Agaric acid induces mitochondrial permeability transition through its interaction with the adenine nucleotide translocase. Its dependence on membrane fluidity. / Garcia N., Zazueta C., Pavon N., Chavez E. // Mitochondrion. - 2005. - V.5. - Is. 4. - P.272-281; Chavez, E. The effect of agaric on citrate transport in rat liver mitochondria. / Chavez E., Chavez R., Carrasco N. // Life Sciences. - 1978. - V.23. - Is. 14. - P.1423-1429].
Известен способ получения агарициновой кислоты из гриба трутовика (Fomitopsis of ficinalis Will. Bond. Et Sing.) (Патент RU 2257222 C1 от 02.07.2004, A61K 35/84 Комплексная переработка гриба трутовика лекарственного, авторы Ушанова В.М., Ооржак У.С., Канзай В.И.), который принят за прототип. Способ основан на том, что сырье сначала экстрагируют сжиженным диоксидом углерода с выделением углекислотного экстракта, содержащего эфирное масло, жирные ненасащенные кислоты, каротиноиды, витамины Е, А и стерины, затем остаток экстрагируют диэтиловым эфиром при температуре 34-36°С в течение 2-3 часов с выделением экстракта, содержащего агарициновую кислоту и липидно-каротиноидный комплекс.A known method of producing agaricic acid from fungus tinder fungus (Fomitopsis of ficinalis Will. Bond. Et Sing.) (Patent RU 2257222 C1 dated 07/02/2004, A61K 35/84 Complex processing of fungus tinder fungus, authors Ushanova V.M., Oorzhak U. S., Kanzai V.I.), which is taken as a prototype. The method is based on the fact that the raw material is first extracted with liquefied carbon dioxide with the release of a carbon dioxide extract containing essential oil, unsaturated fatty acids, carotenoids, vitamins E, A and sterols, then the residue is extracted with diethyl ether at a temperature of 34-36 ° C for 2- 3 hours with the release of an extract containing agaricic acid and a lipid-carotenoid complex.
Недостатками способа являются: использование экстракции диоксидом углерода, требующей сложного герметичного оборудования, использование дорогостоящего диэтилового эфира в качестве растворителя, получение готового продукта с примесью липидно-каротиноидного комплекса.The disadvantages of the method are: the use of extraction with carbon dioxide, which requires complex sealed equipment, the use of expensive diethyl ether as a solvent, the preparation of the finished product with an admixture of lipid-carotenoid complex.
Задачей предлагаемого изобретения является упрощение способа с одновременным сокращением до минимума потерь агарициновой кислоты в процессе выделения, получение чистого, без примесей других веществ вещества, а также: замена более токсичного органического растворителя (диэтиловый эфир) на менее токсичный (95% этанол), удешевление способа за счет использования более дешевого экстрагента (95% этанола) и более дешевого оборудования.The objective of the invention is to simplify the method while minimizing the loss of agaricic acid during the isolation process, to obtain a pure, without impurities of other substances substances, as well as: replacing a more toxic organic solvent (diethyl ether) with a less toxic (95% ethanol), cheaper method due to the use of cheaper extractant (95% ethanol) and cheaper equipment.
Отличительными существенными признаками являются использование 95% этанола в качестве растворителя на стадии первичной экстракции и очистки, одновременность осуществления процесса разделения и очистки.Distinctive essential features are the use of 95% ethanol as a solvent at the stage of primary extraction and purification, the simultaneous implementation of the separation and purification process.
Экстракция исходного растительного сырья 95% этанолом с нагреванием с последующей перекристаллизацией агарициновой кислоты позволяет:Extraction of the original plant material with 95% ethanol with heating followed by recrystallization of agaricic acid allows:
- увеличить выход агарициновой кислоты;- increase the yield of agaricin acid;
- получить агарициновую кислоту в чистом виде без примеси липидов и каротиноидов.- get agaricic acid in its pure form without the admixture of lipids and carotenoids.
Применение 95% этанола позволяет осуществить процесс выделения агарициновой кислоты без стадии экстракции сырья диоксидом углерода и последующей экстракции диэтиловым эфиром.The use of 95% ethanol allows the process of separation of agaricic acid without the stage of extraction of the feed with carbon dioxide and subsequent extraction with diethyl ether.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
100,0 г гриба трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis Will. семейства трутовиковых - Polyporaceae, класса базидиомицетов - Basidiomycetes), измельченного не более 3 мм, экстрагируют в аппарате Сокслета 95%-ным этанолом при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:25 при нагревании на водяной бане при температуре +78°С до истощения сырья.100.0 g of medicinal fungus mushroom (Fomitopsis officinalis Will. Tinder fungi family - Polyporaceae, class of basidiomycetes - Basidiomycetes), crushed no more than 3 mm, are extracted in a Soxhlet apparatus with 95% ethanol with a total ratio of raw material and extractant 1:25 when heated to water bath at a temperature of + 78 ° C until depletion of raw materials.
Полноту извлечения агарициновой кислоты контролируют хроматографическим методом. Раствор выделенного вещества наносят на пластинки «Сорбфил ПТСХ-А-УФ». Система для хроматографии - хлороформ : уксусная кислота : вода 13:2,5:1. Пятна рассматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. При полном извлечении агарициновой кислоты должно отсутствовать пятно с Rf=0,67±0,02.The completeness of the extraction of agaricic acid is controlled by chromatographic method. A solution of the isolated substance is applied to Sorbfil PTX-A-UV plates. The chromatography system is chloroform: acetic acid: water 13: 2.5: 1. The spots are examined in UV light at a wavelength of 365 nm. With the complete extraction of agaricic acid, there should be no stain with Rf = 0.67 ± 0.02.
Полученный экстракт упаривают до суммарного соотношения сырье и экстракт 1 мас.ч. сырья : 6 об.ч. экстракта, оставляют при температуре -4°С - -5°С, на 12 часов до образования осадка. Осадок отделяют и промывают на фильтре 95% этанолом при суммарном соотношении сырье : этанол 95% 1 мас.ч. осадка : 0,5 об.ч. этанола (температура этанола не более +5°С), получают техническую агарициновую кислоту.The resulting extract is evaporated to a total ratio of raw materials and
Техническую агарициновую кислоту растворяют при нагревании, при +50 - +55°С, в 95% этаноле, взятом в соотношении агарициновая кислота : растворитель 1:10, охлаждают, выдерживают при -4°С - -5°С в течение 2 часов, отделяют осадок фильтрованием через стеклянный фильтр. Перекристаллизацию повторяют еще четыре раза - получают очищенную агарициновую кислоту. Полученный продукт высушивают в сушильном шкафу до постоянной массы при +50°С - +55°С. Взвешивают. Выход 9,5%-14,2% в пересчете на абсолютно сухое сырье.Technical agaricic acid is dissolved by heating, at +50 - + 55 ° C, in 95% ethanol, taken in the ratio agaricic acid: solvent 1:10, cooled, kept at -4 ° C - -5 ° C for 2 hours, separating the precipitate by filtration through a glass filter. Recrystallization is repeated four more times to obtain purified agaricinic acid. The resulting product is dried in an oven to constant weight at + 50 ° C - + 55 ° C. Weigh. The yield of 9.5% -14.2% in terms of absolutely dry raw materials.
Пример 1.Example 1
Аналитическую пробу сырья гриба трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis Will. семейства трутовиковых - Polyporaceae, класса базидиомицетов - Basidiomycetes) измельчают до размера частиц не более 3 мм. Около 100 г (точная навеска) сырья упаковывают в патрон из фильтровальной бумаги и загружают в аппарат Сокслета, заливают 95%-ным этанолом при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:25, экстрагируют при нагревании на водяной бане при температуре +78°С до истощения сырья. Полноту извлечения агарици новой кислоты контролируют хроматографическим методом, как описано выше. Параллельно определяют влажность сырья. Все измерения проводят с точностью до 0,0001 г.An analytical sample of the raw material of the fungus tinder fungus (Fomitopsis officinalis Will. Tinder fungi family - Polyporaceae, class of basidiomycetes - Basidiomycetes) is crushed to a particle size of not more than 3 mm. About 100 g (accurately weighed) of the raw material is packed in a filter paper cartridge and loaded into a Soxhlet apparatus, filled with 95% ethanol with a total ratio of raw material to extractant 1:25, extracted by heating in a water bath at a temperature of + 78 ° C until depleted raw materials. The completeness of agaric acid extraction was monitored by chromatography as described above. In parallel, determine the moisture content of the raw materials. All measurements are carried out with an accuracy of 0.0001 g.
Полученный экстракт упаривают до суммарного соотношения сырье и экстракт 1 мас.ч. сырья : 6 об. ч. экстракта, оставляют при температуре -4°С - -5°С, на 12 часов до образования осадка. Надосадочную жидкость сливают, остаток фильтруют через стеклянный фильтр, осадок промывают на фильтре 95% этанолом при суммарном соотношении сырье: этанол 95% 1 мас.ч. осадка : 0,5 об.ч. этанола (температура этанола не более +5°С), получают техническую агарициновую кислоту.The resulting extract is evaporated to a total ratio of raw materials and
Техническую агарициновую кислоту растворяют при нагревании, при +50 - +55°С, в 95% этаноле, взятом в соотношении агарициновая кислота : растворитель 1:10, охлаждают, выдерживают при -4°С - -5°С в течение 12 часов, отделяют осадок фильтрованием через стеклянный фильтр. Осадок опять растворяют при нагревании, при +50 - +55°С, в 95% этаноле, взятом в соотношении агарициновая кислота : растворитель 1:10, охлаждают, выдерживают при -4°С - -5°С в течение 12 часов, отделяют осадок фильтрованием через стеклянный фильтр. Данную операцию повторяют еще три раза, получают очищенную агарициновую кислоту.Technical agaricic acid is dissolved by heating, at +50 - + 55 ° C, in 95% ethanol, taken in the ratio agaricic acid: solvent 1:10, cooled, kept at -4 ° C - -5 ° C for 12 hours, separating the precipitate by filtration through a glass filter. The precipitate is again dissolved by heating, at +50 - + 55 ° С, in 95% ethanol taken in the ratio agaricic acid: solvent 1:10, cooled, kept at -4 ° С - -5 ° С for 12 hours, separated precipitate by filtration through a glass filter. This operation is repeated three more times to obtain purified agaricic acid.
Полученный продукт (образец 1) высушивают в сушильном шкафу до постоянной массы при 50°С. Взвешивают. Выход очищенной агарициновой кислоты в пересчете на абсолютно сухое сырье составляет 14,2%.The resulting product (sample 1) is dried in an oven to constant weight at 50 ° C. Weigh. The yield of purified agaricic acid in terms of absolutely dry raw materials is 14.2%.
Пример 2.Example 2
Аналитическую пробу сырья гриба трутовика лекарственного (Fomitopsis officinalis Will. семейства трутовиковых - Polyporaceae, класса базидиомицетов - Basidiomycetes) измельчают до размера частиц не более 3 мм. Около 100 г (точная навеска) сырья упаковывают в патрон из фильтровальной бумаги и загружают в аппарат Сокслета, заливают 95%-ным этанолом при суммарном соотношении сырья и экстрагента 1:25, экстрагируют при нагревании на водяной бане при температуре +78°С до истощения сырья. Полноту извлечения агарициновой кислоты контролируют хроматографическим методом, как описано выше. Параллельно определяют влажность сырья. Все измерения проводят с точностью до 0,0001 г. Полученный экстракт упаривают до суммарного соотношения сырье и экстракт 1 мас.ч. сырья: 6 об. ч. экстракта, оставляют при температуре -4°С - -5°С, на 12 часов до образования осадка. Надосадочную жидкость сливают, остаток фильтруют через стеклянный фильтр, осадок промывают на фильтре 95% этанолом при суммарном соотношении сырье : этанол 95% 1 мас.ч. осадка : 0,5 об.ч. этанола (температура этанола не более +5°С), получают техническую агарициновую кислоту.An analytical sample of the raw material of the fungus tinder fungus (Fomitopsis officinalis Will. Tinder fungi family - Polyporaceae, class of basidiomycetes - Basidiomycetes) is crushed to a particle size of not more than 3 mm. About 100 g (accurately weighed) of the raw material is packed in a filter paper cartridge and loaded into a Soxhlet apparatus, filled with 95% ethanol with a total ratio of raw material to extractant 1:25, extracted by heating in a water bath at a temperature of + 78 ° C until depleted raw materials. The completeness of the extraction of agaricic acid is controlled by chromatographic method, as described above. In parallel, determine the moisture content of the raw materials. All measurements are carried out with an accuracy of 0.0001 g. The resulting extract is evaporated to a total ratio of raw materials and
Техническую агарициновую кислоту растворяют при нагревании, при +50° - +55°С, в 95% этаноле, взятом в соотношении агарициновая кислота : растворитель 1:10, охлаждают, выдерживают при -4°С - -5°С в течение 12 часов, отделяют осадок фильтрованием через стеклянный фильтр. Осадок повторно растворяют при нагревании, при +50 - +55°С, в 95% этаноле, взятом в соотношении агарициновая кислота : растворитель 1:10, охлаждают, выдерживают при -4°С - -5°С в течение 12 часов, отделяют осадок фильтрованием через стеклянный фильтр. Данную операцию повторяют еще три раза, получают очищенную агарициновую кислоту.Technical agaricic acid is dissolved by heating, at + 50 ° - + 55 ° C, in 95% ethanol, taken in the ratio agaricic acid: solvent 1:10, cooled, kept at -4 ° C - -5 ° C for 12 hours separate the precipitate by filtration through a glass filter. The precipitate is redissolved when heated, at +50 - + 55 ° С, in 95% ethanol, taken in the ratio agaricic acid: solvent 1:10, cooled, kept at -4 ° С - -5 ° С for 12 hours, separated precipitate by filtration through a glass filter. This operation is repeated three more times to obtain purified agaricic acid.
Полученный продукт (образец 2) высушивают в сушильном шкафу до постоянной массы при 50°С. Взвешивают. Выход очищенной агарициновой кислоты в пересчете на абсолютно сухое сырье составляет 9,5%.The resulting product (sample 2) is dried in an oven to constant weight at 50 ° C. Weigh. The yield of purified agaricic acid in terms of absolutely dry raw materials is 9.5%.
Физические и физико-химические свойства выделенного вещества (образец 1 и образец 2) сравнивали со свойствами достоверного стандартного образца агарициновой кислоты (получен по каталогу фирмы «Sigma-Aldrich» №666-99-9). Исследование показало, что это - кристаллические порошки белого цвета с легким желтоватым оттенком, без запаха, горько-сладкого вкуса, практически не растворимые в воде, очень мало растворимые в 1 моль/л растворе натрия гидроксида, растворимые при нагревании в этаноле 95% в соотношении 1:10, в этаноле 95% при температуре +5°С в соотношении 1:130, спирте изопропиловом, диметилсульфоксиде.The physical and physico-chemical properties of the isolated substance (
Затем с целью идентификации полученного вещества как агарициновой кислоты были определены: его температура плавления, Rf, УФ-спектр, ИК-спектр, ЯМР-спектр.Then, in order to identify the obtained substance as agaricic acid, its melting point, Rf, UV spectrum, IR spectrum, and NMR spectrum were determined.
Температура плавления выделенного вещества (образец 1 и образец 2) составила 134°С - 136°С, температура плавления достоверного образца агарициновой кислоты - 134-136°С, температура плавления пробы смешения выделенного вещества с достоверным образцом агарициновой кислоты - 134-136°С, (т.е. депрессии температуры плавления не произошло). Таким образом, можно сделать вывод об идентичности стандарта агарициновой кислоты (SIGMA ALDRICH) и вещества, полученной из лиственничной губки.The melting point of the isolated substance (
0,5% раствор выделенного вещества (образец 1 и образец 2), раствор достоверного стандартного образца агарициновой кислоты (каталог «Sigma» № 666-99-9 FC № 211-566-5), раствор из смеси равных количеств выделенного вещества и достоверного стандартного образца наносили на пластинки «Сорбфил ПТСХ-А-УФ» в количестве 5 мкл. Система для хроматографии - хлороформ : уксусная кислота : вода 13:2,5:1. Пятна рассматривали в УФ-свете при длине волны 365 нм. В результате анализа, на хроматограмме выделенного вещества было обнаружено одно пятно с Rf=0,67±0,02, достоверный стандартный агарициновой кислоты дал одно пятно с Rf=0,67±0,02, проба смешения выделенного вещества и достоверного стандартного образца дала одно пятно с Rf=0,67±0,02. Это подтверждает идентичность стандарта агарициновой кислоты (SIGMA ALDRICH) и вещества, полученного из лиственничной губки.0.5% solution of the isolated substance (
УФ-спектры 0,05% растворов выделенного вещества (образец 1 и образец 2) и достоверного стандартного образца агарициновой кислоты в 95% этаноле измеряли на саморегистрирующем спектрофотометре СФ-56 в области 200-350 нм. Максимум светопоглощения всех образцов находился в области 206±2 нм. УФ-спектры представлены на фиг.1.UV spectra of 0.05% solutions of the isolated substance (
Подготовку проб веществ для снятия ИК-спектра осуществляли в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания [Государственная фармакопея СССР. - М.: Медицина, 1987. - Вып.1. - С.37]. Навески веществ (выделенного и достоверного стандартного образца агарициновой кислоты) массой по 15 мг измельчали в агатовой ступке и растирали с 1-2 каплями вазелинового масла качества для ПК - спектроскопии. Полученную пасту наносили между двумя пластинками из калия бромида (KBr) и измеряли ИК - спектр образца.The preparation of samples of substances for recording the IR spectrum was carried out in accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia of the XIth edition [State Pharmacopoeia of the USSR. - M .: Medicine, 1987. -
В работе использовали спектрофотометр инфракрасный ИКС - 40 (ОАО «Ломо», Россия). Параметры записи спектров: диапазон 4000-400 см-1, шаг дискретизации 2,7 см-1, скорость сканирования 225 см-1/мин, коэффициент щели - 1, аподизация стандартная. Фоновый спектр (воздух) получали непосредственно перед записью каждого спектра испытуемой субстанции. Управление прибором и обработку спектров осуществляли с использованием программы на языке ФОРТ, поставляемую вместе с комплексом. Полученные данные свидетельствуют о том, что два образца, выделенных из лиственничной губки (образец 1 и образец 2) и стандарт агарициновой кислоты (SIGMA), полностью идентичны.We used an infrared spectrophotometer IKS - 40 (OAO Lomo, Russia). Spectrum recording parameters: range 4000-400 cm -1 , sampling step 2.7 cm -1 , scanning speed 225 cm -1 / min, slit coefficient - 1, standard apodization. The background spectrum (air) was obtained immediately before recording each spectrum of the test substance. Instrument control and spectral processing were carried out using the FORT language program, supplied with the complex. The data obtained indicate that the two samples isolated from the larch sponge (
На фиг.2,3 представлены ИК-спектры стандарта агарициновой кислоты и этой же кислоты, выделенной гриба трутовика (образец 1 и образец 2). Анализ спектров стандартного образца и выделенного вещества показал их идентичность.Figure 2.3 shows the IR spectra of a standard agaricic acid and the same acid isolated fungus fungus (
На фиг.4 и 5 представлены ЯМР-спектры стандарта агарициновой кислоты и этой же кислоты, выделенной гриба трутовика.Figures 4 and 5 show the NMR spectra of a standard agaricinic acid and the same acid isolated from a fungus fungus.
Образец выделенного вещества и достоверный стандартный образец агарициновой кислоты исследовали с помощью одномерной ЯМР 1H и 13С-спектроскопии. Спектр ЯМР 1Н стандарта агарициновой кислоты (фиг.4) и агарициновой кислоты, полученной из двух партий лиственничной губки, в области резонанса атомов углерода содержал три интенсивных (260,51; 367,59 и 746,88) и двадцать минорных сигналов (253,48-879,44). Так как при данном методе использовали такой растворитель как диметилсульфоксид (ДМСО), то сразу исключаем пик этого растворителя (746,88). Наиболее интенсивными сигналами в спектре были пики от СН3- и (CH2)n-групп (при соответственно 260,51 и 367,59), что свидетельствует о наличии в молекуле агарициновой кислоты длинной углеродной цепи (C18H40O7). Спектры ЯМР - снимали на спектрометре UNITY - 300 выпуск 1990 г, фирмы «VARIAN» США. Для получения 1Н спектров ЯМР использовали стандартную 2-импульсную последовательность с последующим Фурье преобразованием. Химические сдвиги ЯМР сигналов определялись относительно сигнала остаточных протонов соответствующего дейтеро-растворителя (ДМСО - d6). Спектры ЯМР 1Н растворов указанных образцов с концентрацией веществ 10% регистрировали на спектрометре высокого разрешения WP-200 (50,3 МГц) с сверх проводящим магнитом и широкополостным датчиком 1Н/13С в режиме полного подавления спин-спинового взаимодействия ядер углерода 13С с протонами.A sample of the isolated substance and a reliable standard sample of agaricinic acid were studied using 1 H NMR and 13 C spectroscopy. The 1 H NMR spectrum of the agaricic acid standard (FIG. 4) and agaricic acid obtained from two batches of larch sponge contained three intense (260.51; 367.59 and 746.88) and twenty minor signals (253 , 48-879.44). Since a solvent such as dimethyl sulfoxide (DMSO) was used in this method, we immediately exclude the peak of this solvent (746.88). The most intense signals in the spectrum were peaks from the CH 3 and (CH 2 ) n groups (at 260.51 and 367.59, respectively), which indicates the presence of a long carbon chain (C 18 H 40 O 7 ) in the agaricin acid molecule . NMR spectra were recorded on a UNITY 300 spectrometer, 1990 issue, 1990, manufactured by VARIAN USA. To obtain 1 H NMR spectra, a standard 2-pulse sequence followed by Fourier transform was used. The chemical shifts of the NMR signals were determined relative to the signal of the residual protons of the corresponding deutero solvent (DMSO - d 6 ). NMR spectra of 1 H solutions of these samples with a concentration of 10% were recorded on a WP-200 high-resolution spectrometer (50.3 MHz) with a superconducting magnet and a 1 H / 13 C wide-band sensor in the mode of complete suppression of the spin-spin interaction of 13 C carbon nuclei with protons.
Анализ ЯМР-спектров стандартного образца и выделенного вещества показал их идентичность.Analysis of the NMR spectra of the standard sample and the isolated substance showed their identity.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007100417/15A RU2330676C1 (en) | 2007-01-09 | 2007-01-09 | Method of agaricic acid production |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007100417/15A RU2330676C1 (en) | 2007-01-09 | 2007-01-09 | Method of agaricic acid production |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2330676C1 true RU2330676C1 (en) | 2008-08-10 |
Family
ID=39746335
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007100417/15A RU2330676C1 (en) | 2007-01-09 | 2007-01-09 | Method of agaricic acid production |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2330676C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2603487C1 (en) * | 2015-06-29 | 2016-11-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for preparing agent having hepato-protective effect |
| RU2707541C2 (en) * | 2017-12-25 | 2019-11-27 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет) | Method for preparing immobilized mycelium of basidiomycete fomitopsis officinalis |
| RU2708034C1 (en) * | 2019-03-11 | 2019-12-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр биоразнообразия наземной биоты Восточной Азии" Дальневосточного отделения Российской академии наук (ФНЦ Биоразнообразия ДВО РАН) | Method of producing agaricic acid from a mycelium of a fomes fomentarius |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1813446A1 (en) * | 1990-10-08 | 1993-05-07 | Mi G Med Inst | Agent increasing stability against stress |
| US6852484B2 (en) * | 2001-12-10 | 2005-02-08 | Icoria, Inc. | Methods for the identification of inhibitors of asparagine synthase as antibiotics |
| RU2257222C1 (en) * | 2004-07-02 | 2005-07-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный технологический университет" | Complex processing medicinal fungus polyporus (fomitopsis officinalis (vill.: fr.) bond. et sing.) |
| US20060171958A1 (en) * | 2004-01-06 | 2006-08-03 | Paul Stamets | Antiviral activity from medicinal mushrooms |
-
2007
- 2007-01-09 RU RU2007100417/15A patent/RU2330676C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1813446A1 (en) * | 1990-10-08 | 1993-05-07 | Mi G Med Inst | Agent increasing stability against stress |
| US6852484B2 (en) * | 2001-12-10 | 2005-02-08 | Icoria, Inc. | Methods for the identification of inhibitors of asparagine synthase as antibiotics |
| US20060171958A1 (en) * | 2004-01-06 | 2006-08-03 | Paul Stamets | Antiviral activity from medicinal mushrooms |
| RU2257222C1 (en) * | 2004-07-02 | 2005-07-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Сибирский государственный технологический университет" | Complex processing medicinal fungus polyporus (fomitopsis officinalis (vill.: fr.) bond. et sing.) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2603487C1 (en) * | 2015-06-29 | 2016-11-27 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for preparing agent having hepato-protective effect |
| RU2707541C2 (en) * | 2017-12-25 | 2019-11-27 | федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский университет) | Method for preparing immobilized mycelium of basidiomycete fomitopsis officinalis |
| RU2708034C1 (en) * | 2019-03-11 | 2019-12-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр биоразнообразия наземной биоты Восточной Азии" Дальневосточного отделения Российской академии наук (ФНЦ Биоразнообразия ДВО РАН) | Method of producing agaricic acid from a mycelium of a fomes fomentarius |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Banu et al. | General techniques involved in phytochemical analysis | |
| Su et al. | Identification of three flavan-3-ols from grapes | |
| Agnolet et al. | Comprehensive analysis of commercial willow bark extracts by new technology platform: Combined use of metabolomics, high-performance liquid chromatography–solid-phase extraction–nuclear magnetic resonance spectroscopy and high-resolution radical scavenging assay | |
| Lu et al. | An automatic on-line 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl-high performance liquid chromatography method for high-throughput screening of antioxidants from natural products | |
| Wang et al. | Microwave-assisted ionic liquid homogeneous liquid–liquid microextraction coupled with high performance liquid chromatography for the determination of anthraquinones in Rheum palmatum L. | |
| Ye et al. | Rapid determination of chemical components and antioxidant activity of the fruit of Crataegus pinnatifida Bunge by NIRS and chemometrics | |
| Abbattista et al. | Insight into the storage-related oxidative/hydrolytic degradation of olive oil secoiridoids by liquid chromatography and high-resolution Fourier transform mass spectrometry | |
| Tayana et al. | Mangiferin content in different parts of mango tree (Mangifera indica L.) in Thailand. | |
| Ghafoor et al. | Analysis of phenolic compounds in extracts of Ziziphus spina-christi using RPHPLC method | |
| Baghdikian et al. | Extraction by solvent using microwave and ultrasound-assisted techniques followed by HPLC analysis of Harpagoside from Harpagophytum procumbens and comparison with conventional solvent extraction methods | |
| Liu et al. | A qualitative, and quantitative determination and pharmacokinetic study of four polyacetylenes from Radix Bupleuri by UPLC-PDA–MS | |
| Holowinski et al. | Chlorogenic acid-water complexes in chlorogenic acid containing food products | |
| Han et al. | Phytochemical study of the rhizome of Pinellia ternata and quantification of phenylpropanoids in commercial Pinellia tuber by RP-LC | |
| RU2330676C1 (en) | Method of agaricic acid production | |
| Li et al. | Extraction and isolation of potential anti-stroke compounds from flowers of Pueraria lobata guided by in vitro PC12 cell model | |
| CN109632978B (en) | Poria cocos contrast extract as well as preparation method and application thereof | |
| Pellati et al. | Chromatographic performance of a new polar poly (ethylene glycol) bonded phase for the phytochemical analysis of Hypericum perforatum L. | |
| Basa’ar et al. | Supercritical Fluid Extraction of Cichorium intybus (L) and it’s Characterization | |
| Murugesu et al. | Exploiting column chemistry for chromatographic separation and quantification of caffeoylquinic acids in Gynura procumbens | |
| Yelugudari et al. | 9-Hexadecenoic acid rich HPLC fraction of Pithecellobium dulce methanolic seed extract exhibits potential antiinflammatory activity by inhibiting IL-8, IL-6, and PGE2: phytochemical characterization, in-vitro and in-vivo evaluation | |
| CN109142610B (en) | Method for extracting, detecting and measuring content of triterpenoids in shiny-leaved yellowhorn | |
| CN109633028A (en) | A kind of detection method of spice additive in formula food for special medical purpose | |
| Geng et al. | Simultaneous HPLC determination of five flavonoids in Flos Inulae | |
| Alperth et al. | Simple Green Purification of Spilanthol from Natural Deep Eutectic Solvent and Ethanolic Acmella oleracea (L.) RK Jansen Extracts Using Solid-Phase Extraction. | |
| Cheng et al. | Effects of deep eutectic solvent systems on the extraction of antioxidant components from peanut (Arachis hypogaea L.) hulls |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090110 |