RU2324494C2 - Новое применение эритропоэтина при сердечных заболеваниях - Google Patents
Новое применение эритропоэтина при сердечных заболеваниях Download PDFInfo
- Publication number
- RU2324494C2 RU2324494C2 RU2005119649/15A RU2005119649A RU2324494C2 RU 2324494 C2 RU2324494 C2 RU 2324494C2 RU 2005119649/15 A RU2005119649/15 A RU 2005119649/15A RU 2005119649 A RU2005119649 A RU 2005119649A RU 2324494 C2 RU2324494 C2 RU 2324494C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- erythropoietin
- protein
- conjugate
- group
- polyethylene glycol
- Prior art date
Links
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 title claims description 130
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 title claims description 130
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 85
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 title claims description 66
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 70
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 35
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 101000920686 Homo sapiens Erythropoietin Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 59
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 45
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 27
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 14
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 14
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 7
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 abstract description 6
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 abstract description 6
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 abstract description 4
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 abstract description 4
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 abstract description 4
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 abstract description 4
- 108010002601 epoetin beta Proteins 0.000 abstract description 4
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010003211 Arteriosclerosis coronary artery Diseases 0.000 abstract description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 208000026758 coronary atherosclerosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 2
- 241000046053 Betta Species 0.000 abstract 1
- 206010007556 Cardiac failure acute Diseases 0.000 abstract 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 22
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 14
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 13
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 10
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 10
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 9
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 9
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 8
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 8
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 8
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 6
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 6
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 description 4
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- DFQUBYCHLQAFOW-IHWYPQMZSA-N (z)-4-(methylamino)-4-oxobut-2-enoic acid Chemical compound CNC(=O)\C=C/C(O)=O DFQUBYCHLQAFOW-IHWYPQMZSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 0 CC(C)(CCOC(C)(C)CCNC(CCN(C(CC1SCIC(NC(*)(*)P)=O)=O)C1=O)=O)O* Chemical compound CC(C)(CCOC(C)(C)CCNC(CCN(C(CC1SCIC(NC(*)(*)P)=O)=O)C1=O)=O)O* 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 3
- FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-acetylsulfanylacetate Chemical compound CC(=O)SCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRTJVRDXVSDKPX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-acetylsulfanylpropanoate Chemical group CC(=O)SCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZRTJVRDXVSDKPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical compound CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical compound CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 description 2
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960004579 epoetin beta Drugs 0.000 description 2
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 2
- BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N (2s)-1-[2-[[(2s)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H]1NCCC1 BRPMXFSTKXXNHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010022971 Iron Deficiencies Diseases 0.000 description 1
- XWEVVRRSIOBJOO-SRVKXCTJSA-N Leu-Pro-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O XWEVVRRSIOBJOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N Pro-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O SNGZLPOXVRTNMB-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700031620 S-acetylthiorphan Proteins 0.000 description 1
- WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N Ser-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)CCCN=C(N)N WDXYVIIVDIDOSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N Ser-Ser-Ser-Ser Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(O)=O JURQXQBJKUHGJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 108010057760 hepatic sialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010438 iron metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004960 subcellular localization Effects 0.000 description 1
- 150000003459 sulfonic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Предложено применение человеческого эритропоэтина альфа или бета либо его конъюгата для приготовления лекарственного средства для лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях, способ соответствующего лечения и лекарственное средство. Показано улучшение нарушенного распределения железа по показателям С-реактивного белка, ферритина и рецептора растворимого трансферрина у больных ишемической болезнью сердца, атеросклерозом, коронарным атеросклерозом, острым коронарным синдромом, сердечной недостаточностью под действием рекормона. 3 н. и 10 з.п. ф-лы.
Description
Настоящее изобретение относится к новому применению эритропоэтина, в частности к лечению нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях.
Известны различные заболевания, при которых метаболизм железа не является нормальным. При анемии не может образовываться достаточное количество крови из-за полного недостатка железа в организме. Другим метаболическим состоянием, связанным с железом, является гемохроматоз, при котором общая концентрация железа в организме выше нормальной, что приводит к различным состояниям, как, например, деструкция органов.
Нарушения распределения железа отличаются от описанных выше анемии и гемохроматоза, потому что общая концентрация железа в организме нормальная. С одной стороны, железо аккумулируется в различных органах и может привести к повреждениям и даже деструкции этих органов. С другой стороны, применение железа, которое присутствует в нормальных количествах при кроветворении, является нарушенным, что приводит к побочным эффектам, сравнимым с таковыми при анемии.
До настоящего времени не было известно, что больные, страдающие сердечными заболеваниями, имеют большую возможность быть подверженными воздействию нарушений распределения железа. Нарушения распределения железа могут диагностироваться с помощью различных параметров, которые обычно используются для диагностики содержания железа. Основываясь на измерениях ферритина и рецептора растворимого трансферрина, возможно оценить, является ли нормальной общая концентрация железа у больного, страдающего сердечными заболеваниями. Если дело в этом, тогда пониженная концентрация гемоглобина в ретикулоцитах является индикатором нарушений распределения железа. Другим индикатором является постоянная затянувшаяся повышенная концентрация С-реактивного белка (CRP) у больных, страдающих сердечными заболеваниями и у которых наблюдается нормальная общая концентрация железа. Способ диагностики нарушений распределения железа описан Р.Lehmann, M.Volkmann, J.Lotz, A.Baldauf, R.Roeddiger, постер, представленный на конференции AACC/CSCC, ежегодная конференция, 29 июля - 2 августа, 2001, Чикаго, Иллинойс.
До сих пор, однако, никакого лечения не было предложено больным с сердечными заболеваниями, страдающим от нарушений распределения железа. Проблема, лежащая в основе настоящего изобретения, состоит поэтому в обеспечении лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях для минимизации или подавления вышеуказанных неблагоприятных явлений. Неожиданно было обнаружено, что эритропоэтин оказывает благоприятный эффект на нарушения распределения железа при сердечных заболеваниях. Проблема, таким образом, решается согласно настоящему изобретению путем обеспечения эритропоэтина для применения при лечении нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях.
Если не указано иначе, следующие определения представлены для иллюстрации и определения значения и области различных терминов, используемых для описания представленного здесь изобретения.
Термин "низший алкил", как это используется в контексте, означает алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от одного до шести атомов углерода. Примеры низших алкильных групп включают метил, этил и изопропил, предпочтительно метил.
Термин "(низш.)алкокси", как это используется в контексте, означает группу R'-O-, где R' является низшим алкилом, как описано выше.
Термин "нарушения распределения железа при сердечных заболеваниях" относится к нарушению распределения железа, которое встречается у больных, страдающих сердечными заболеваниями. Нарушение распределения железа может, например, быть охарактеризовано, как описано выше. В частности, нарушение распределения железа характеризуется следующими параметрами: концентрация рецептора растворимого трансферрина [мг/л], разделенная на log(концентрация ферритина [мкг/л]), меньше 3,5 и одновременно концентрация С-реактивного белка выше 5 мг/л.
Термин "эритропоэтин" или "эритропоэтиновый белок" относится к белку с in vivo биологической активностью, побуждающей клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, который выбирается из группы, состоящей из человеческого эритропоэтина и аналогов, определенных ниже.
Термин "модифицированный полиэтиленгликолем эритропоэтин (Peg-EPO или PEG-EPO)" относится к эритропоэтиновому белку, ковалентно связанному с 1-3 производными полиэтилена, как описано ниже.
Описание чертежей:
Фигура 1: Первичная структура человеческого эритропоэтина (ЕРО) (165 аминокислот) (Последовательность №1 / Посл. №1/).
Фигура 2: Первичная структура человеческого эритропоэтина (ЕРО) (166 аминокислот) (Последовательность №2 / Посл. №2/).
Более подробно настоящее изобретение относится к применению эритропоэтина для приготовления лекарственного средства для лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях. Примерами сердечных заболеваний являются, например, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз, коронарный атеросклероз, острый коронарный синдром, сердечная недостаточность, застойная сердечная недостаточность и/или сердечная недостаточность. В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к применению, как указано выше, когда сердечным заболеванием является сердечная недостаточность.
Настоящее изобретение особенно полезно для приготовления фармацевтических композиций, включающих эритропоэтин в качестве фармацевтически активного ингредиента. Термин "эритропоэтин", или "эритропоэтиновый белок", или "ЕРО" означает следующее: в частности, термины относятся к гликопротеину, например к человеческому эритропоэтину, например имеющему аминокислотную последовательность, представленную в (Посл. №1) или (Посл. №2), или аминокислотную последовательность, в основном гомологичную указанной, биологические свойства которого связаны со стимуляцией продуцирования эритроцитов и со стимуляцией деления и дифференциации коммитированных эритроидных клеток-предшественников в костном мозге. Как это используется в контексте, эти термины включают такие протеины, сознательно модифицированные, например, путем направленного мутагенеза, или случайно путем мутаций. Эти термины также включают аналоги с 1-6 дополнительными сайтами для гликозилирования, аналоги, содержащие, как минимум, одну дополнительную аминокислоту при концевом карбоксиле гликопротеина, где дополнительная аминокислота включает, как минимум, один сайт гликозилирования, и аналоги с аминокислотной последовательностью, включающей перегруппировку, как минимум, одного сайта для гликозилирования. Эти термины включают как природный, так и рекомбинантно продуцированный человеческий эритропоэтин. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения эритропоэтиновым белком является человеческий эритропоэтин.
Как в деталях представлено ниже, получение и очистка эритропоэтина хорошо известны в данной области. Под эритропоэтином подразумевается природный или рекомбинантный белок, предпочтительно человеческий; например эпоэтин альфа или эпоэтин бета, полученный из любого обычного источника, как, например, ткани, путем синтеза белка, из культуры клеток с природными и рекомбинантными клетками. Охватывается любой белок с активностью эритропоэтина, как, например, мутеины или иным путем модифицированные белки. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения эритропоэтиновым белком является эпоэтин альфа или эпоэтин бета. Рекомбинантный эритропоэтин может быть получен путем экспрессии в СНО-, ВПК- или HeLa-клеточных линиях по технологии с рекомбинантной ДНК или путем эндогенной активации гена. Экспрессия белков, включающая экспрессию путем эндогенной активации гена, хорошо известна в данной области и раскрывается, например, в патентах США №№5733761, 5641670 и 5733746 и в международных заявках на патенты WO 93/09222, WO 94/12650, WO 95/31560, WO 90/11354, WO 91/06667 и WO 91/09955, содержание каждой из которых включено в контекст в виде ссылок. Предпочтительно применение, как определено выше, когда эритропоэтиновый белок экспрессируется путем эндогенной активации гена. Предпочтительными видами эритропоэтина для получения эритропоэтиновых гликопротеиновых продуктов являются виды человеческого эритропоэтина. Более предпочтительными видами эритропоэтина является человеческий эритропоэтин с аминокислотной последовательностью, представленной в SEQ IN NO: 1 или SEQ IN NO: 2 более предпочтительна аминокислотная последовательность Посл. №1. Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится поэтому к описанному выше применению, где эритропоэтиновый белок имеет аминокислотную последовательность SEQ IN NO: 1 или SEQ IN NO: 2.
Кроме того, эритропоэтин может быть аналогом гликопротеина с 1-6 дополнительными сайтами для гликозилирования. Поэтому настоящее изобретение также относится к применению, как описано выше, где эритропоэтиновый белок имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированного добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования. Гликозилирование белка с одной или несколькими олигосахаридными группами происходит по специфическим локализациям вдоль полипептидного остова и в высокой степени влияет на физические свойства белка, как, например, стабильность белка, секреция, субклеточная локализация, и на биологическую активность. Гликозилирование обычно бывает двух типов.
Связанные с атомом кислорода олигосахариды присоединяются к остаткам серина или треонина, а связанные с атомом азота олигосахариды присоединяются к остаткам аспарагина. Одним видом олигосахарида, обнаруженного как в связанных с азотом, так и в связанных с кислородом олигосахаридах, является N-ацетилнейраминовая кислота (сиаловая кислота), представляющая семейство аминосахаров, содержащих 9 или более атомов углерода. Сиаловая кислота является обычно терминальным остатком как в случае связанных с азотом олигосахаридов, так и в случае связанных с кислородом олигосахаридов, и, поскольку она несет отрицательный заряд, придает кислотные свойства гликопротеину. Человеческий эритропоэтин, имеющий 165 аминокислот, содержит три связанные с азотом и одну связанную с кислородом олигосахаридные цепи, которые составляют около 40% общей молекулярной массы гликопротеина. Гликозилирование с образованием связи по атому азота происходит при аспарагиновых остатках, расположенных в положениях 24, 38 и 83, и гликозилирование с образованием связи по атому кислорода происходит при остатке серина, расположенном в положении 126. Олигосахаридные цепи модифицируются с помощью терминальных остатков сиаловой кислоты. Ферментативное удаление всех остатков сиаловой кислоты с гликозилированного эритропоэтина приводит к потере активности in vivo, но не in vitro активности, поскольку сиалилирование эритропоэтина предотвращает его связывание и последующий клиренс печеночным связывающим белком.
Термин "эритропоэтин" включает аналоги человеческого эритропоэтина с одним или несколькими изменениями в аминокислотной последовательности человеческого эритропоэтина, которые обеспечивают в результате увеличение числа сайтов для присоединения сиаловой кислоты. Такие гликопротеиновые аналоги могут быть генерированы путем сайт-направленного мутагенеза, включающего добавления, делеции или замещения аминокислотных остатков, которые увеличивают или изменяют сайты, доступные для гликозилирования. Аналоги гликопротеина с уровнями сиаловой кислоты, большими, чем обнаруживаемые в человеческом эритропоэтине, генерируются путем добавления сайтов гликозилирования, которые не нарушают вторичную или третичную конформацию, требующуюся для биологической активности. Гликопротеины по настоящему изобретению также включают аналоги с повышенными уровнями присоединения углеводов при сайте гликозилирования, которые обычно включают замещение одной или нескольких аминокислот в непосредственной близости к связанному с азотом или кислородом сайту. Гликопротеины по настоящему изобретению также включают аналоги, содержащие одну или несколько аминокислот, тянущиеся от карбоксильного конца эритропоэтина и обеспечивающие, как, минимум, один дополнительный углеводный сайт. Эритропоэтиновые белки настоящей композиции также включают аналоги, имеющие аминокислотную последовательность, которая включает перегруппировку, как минимум, одного сайта для гликозилирования. Такая перегруппировка сайта гликозилирования включает делецию одного или нескольких сайтов гликозилирования в человеческом эритропоэтине и добавление одного или нескольких не встречающихся в природе сайтов гликозилирования. Увеличение числа углеводных цепей в эритропоэтине и, следовательно, числа сиаловых кислот на молекулы эритропоэтина может придать полезные свойства, как, например, повышенную растворимость, большую устойчивость к протеолизу, уменьшенную иммуногенность, повышенное время полужизни сыворотки, и повышенную биологическую активность. Аналоги эритропоэтина с дополнительными сайтами гликозилирования раскрываются более подробно в заявке на европейский патент 640619, опубликованной Elliot, 1 марта, 1995.
В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция по настоящему изобретению включает эритропоэтиновые белки с аминокислотной последовательностью, которая включает, как минимум, один дополнительный сайт для гликозилирования, как, например, но не ограничивая этим, эритропоэтины, включающие последовательность человеческого эритропоэтина, видоизмененную путем модификации, выбранную из следующих последовательностей:
Asn30Thr32;
Asn51Thr53;
Asn57Thr59;
Asn69;
Asn69Thr71;
Ser68Asn69Thr71;
Val87Asn88Thr90;
Ser87Asn88Thr90;
Ser87Asn88Gly89Thr90;
Ser87Asn88Thr90Thr92;
Ser87Asn88Thr90Ala162;
Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90;
Asn30Thr32Ser87Val87Thr90;
Asn89Ile90Thr91;
Ser87Asn89Ile90Thr91;
Asn136Thr138;
Asn138Thr140;
Thr125 и
Pro124Thr125.
Используемая в контексте система обозначений для модификации аминокислотной последовательности означает, что положение(я) соответствующего немодифицированного белка (например, человеческий эритропоэтин с SEQ IN NO: 1 или SEQ IN NO: 2), указанное надстрочным номером (номерами), меняется по отношению к аминокислоте (аминокислотам), которые непосредственно предшествуют соответствующему надстрочному номеру (номерам).
Эритропоэтиновый белок может также представлять аналог, содержащий, как минимум, одну дополнительную аминокислоту при карбоксильном конце гликопротеина, где дополнительная аминокислота включает, как минимум, один сайт гликозилирования. Дополнительная аминокислота может включать пептидный фрагмент, производный от концевого карбоксила человеческого хорионического гонадотропина. Предпочтительно гликопротеин является аналогом, выбранным из группы, состоящей из (а) человеческого эритропоэтина, имеющего аминокислотную последовательность, Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro IIe Leu Pro Gln, тянущуюся от карбоксильного конца; (б) аналога по (а), включающего также Ser87 Asn88 Thr90 EPO, и (в) аналога по (а), включающего, кроме того, Asn30 Thr32 Val87 Asn88 Thr90 EPO.
Эритропоэтиновый белок может также представлять аналог с аминокислотной последовательностью, который включает перегруппировку, как минимум, одного сайта для гликозилирования. Перегруппировка может включать делецию любого из связанных с атомом азота углеводных сайтов в человеческом эритропоэтине и добавление связанного с атомом азота углеводного сайта в положении 88 аминокислотной последовательности человеческого эритропоэтина. Предпочтительно гликопротеин является аналогом, выбранным из группы, состоящей из Gln24 Ser87 Asn88 Thr90 EPO; Gln38 Ser87 Asn88 Thr90 EPO и Gin83 Ser87 Asn88 Thr90 EPO. Другим аналогом является дарбэпоэтин альфа. Предпочтительным эритропоэтиновым белком при описанном ранее применении является дарбэпоэтин альфа.
В частности, эритропоэтиновый белок представленной фармацевтической композиции, как описано выше, может также включать его модифицированные полиэтиленгликолем производные. Модифицированные полиэтиленгликолем производные эритропоэтина и их получение известны в данной области и описаны, например, в международной заявке на патент WO 01/02017, заявках на европейские патенты ЕР-А-1064951, ЕР-А-539167, ЕР-А-605963, в международных заявках на патенты WO 93/25212, WO 94/20069, WO 95/11924, в патенте США №556, в заявке на европейский патент ЕР-А-584876, в международных заявках на патенты WO 92/16555, WO 94/28024. WO 97/04796, в патентах США №№5359030 и 5681811, в патенте США №4179337, в патенте Японии, в международной заявке на патент WO 98/32466, в патенте США №5324650. Предпочтительно при описанном выше применении эритропоэтиновый белок модифицирован полиэтиленгликолем. Предпочтительный вариант воплощения видов модифицированного полиэтиленгликолем эритропоэтина относится к описанным ниже производным.
Соответственно настоящее изобретение также относится к описанному выше применению, где эритропоэтиновый белок представляет конъюгат, упомянутый конъюгат включает эритропоэтиновый белок, как описано выше, содержащий, как минимум, одну свободную аминогруппу и обладающий in vivo биологической активностью, побуждающей клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, и выбирается из группы, состоящей из человеческого эритропоэтина и его аналогов, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированного прибавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой, как минимум, одного сайта гликозилирования; упомянутый эритропоэтин является ковалентно связанным с числом n полиэтиленгликольных групп формулы -СО-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, при этом -СО (т.е. карбонил) каждой полиэтиленгликольной группы образует амидную связь с одной из упомянутых аминогрупп; где R означает низший алкил; х означает число 2 или 3; m означает число примерно от 450 до 900; n означает число от 1 до 3 и n и m выбираются таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата минус эритропоэтиновый белок составляла от 20 кД до 100 кД. Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие описанные здесь конъюгаты, в которых процент конъюгатов, где n означает 1, составляет, как минимум, 90%, предпочтительно, как минимум, 92%, более предпочтительно 96% от всех конъюгатов композиции.
Более конкретно упомянутые выше конъюгаты могут быть представлены формулой (I)
где Р означает остаток эритропоэтинового белка, как здесь описано, (т.е. без амино-группы или аминогрупп, которые образуют амидную связь с карбонилом, представленном в формуле I), проявляющего in vivo биологическую активность, побуждающую клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, и где R означает низший алкил, х означает 2 или 3, m означает число от 450 до 900, n означает число от 1 до 3, и n и m выбираются таким образом, чтобы молекулярная масса конъюгата минус эритропоэтиновый гликопротеин составляла от 20 кД до 100 кД. Согласно данному изобретению R является любым низшим алкилом. Предпочтительны конъюгаты, в которых R означает метил.
Символ "m" представляет число остатков окиси этилена (ОСН2СН2) в поли-этиленоксидной группе. Одна этиленоксидная субъединица полиэтиленгликоля (PEG) имеет молекулярную массу примерно 44 Д. Таким образом, молекулярная масса конъюгата (исключая молекулярную массу ЕРО) зависит от числа "m". В конъюгатах по данному изобретению "m" составляет примерно от 450 до 900 (что соответствует молекулярной массе примерно от 20 кД до 40 кД), предпочтительно примерно от 650 до 750 (что соответствует молекулярной массе примерно 30 кД). Число m выбирают так, чтобы получающийся в результате конъюгат по изобретению обладал физиологической активностью, сравнимой с активностью немодифицированного ЕРО, активность которого может быть такой же, большей или составлять часть соответствующей активности немодифицированного эритропоэтина. Молекулярная масса, упоминаемая как "примерно" определенной величины, означает, что она находится в разумных пределах этой величины, что определяется с использованием общепринятых аналитических методик. Число "m" выбирают таким образом, что молекулярная масса каждой полиэтиленгликольной группы, ковалентно связанной с эритропоэтиновым гликопротеином, составляет примерно от 20 кД до 40 кД и предпочтительно составляет 30 кД.
В конъюгатах по данному изобретению число "n" означает число полиэтиленгликольных групп, ковалентно связанных со свободными аминогруппами (включая 8-аминогруппы лизина и/или амино-терминальную аминогруппу) эритропоэтинового белка амидной связью (связями). Конъюгат по данному изобретению может содержать одну, две или три группы PEG на молекулу ЕРО. Число "n" является целым числом от 1 до 3, предпочтительно "n" означает 1 или 2 и более предпочтительно "n" является 1. Предпочтительный конъюгат из описанных выше конъюгатов включает соединения, где х означает 2, m означает число от 650 до 750, n является 1 и R означает метил.
Соединение формулы (I) может быть получено из известного полимерного продукта:
в котором R и m являются такими, как описано выше, при конденсации соединения формулы II с эритропоэтиновым гликопротеином. Соединения формулы (II), в которых х означает 3, являются эфирами N-сукцинимидилбутирата и α-(низш.)алкокси-полиэтиленгликоля ((низш.)алкокси-PEG-SBA). Соединения формулы (II), в которых х означает 2, являются эфирами N-сукцинимидилпропионата и α-(низш.)алкокси-полиэтиленгликоля ((низш.)алкокси-PEG-SPA). Может быть применен любой общепринятый способ взаимодействия активированного сложного эфира с амином для образования амида. В реакции, описанной выше, приведенный в качестве примера сукцинимидильный сложный эфир является уходящей группой, способствующей образованию амида. Применение сложных сукцинимидильных эфиров, как, например, соединения формулы II, для получения конъюгатов с белками раскрываются в патенте США №5672662, выданном 30 сентября, 1997 (Harris и др.).
Человеческий эритропоэтин содержит девять свободных аминогрупп, амино-терминальную аминогруппу и ε-аминогруппы 8 остатков лизина. Когда реагент для модификации полиэтиленгликолем соединяли с производным N-сукцинимидил-бутирата (SBA) формулы II, было найдено, что при рН 7,5, при соотношении белок : PEG, равном 1:3, и температуре реакции 20-25°C получали смесь моно-, ди- и следовых количеств три-модифицированных полиэтиленгликолем видов. Когда реагентом для модификации полиэтиленгликолем было производное N-сукцинимидилпропионата (SPA) формулы II, при аналогичных условиях, за исключением того, что соотношение белок:PEG составляло 1:2, получали главным образом мономодифицированные полиэтиленгликолем виды. Модифицированный полиэтиленгликолем эритропоэтин может применяться в виде смеси или в виде различных разделенных с помощью катионообменной хроматографии образцов. При изменении условий реакции (например, соотношения реагентов, рН, температуры, концентрации белка, времени реакции и т.д.) относительные количества различных модифицированных полиэтиленгликолем видов могут варьироваться.
Другой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению, как определено выше, где эритропоэтиновый белок является конъюгатом, упомянутый конъюгат включает эритропоэтиновый белок, как определено выше, содержащий, как минимум, одну свободную аминогруппу и обладающий in vivo биологической активностью, побуждающей клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, и выбирается из группы, состоящей из человеческого эритропоэтинового белка и его аналогов, которые имеют первичную структуру человеческого эритропоэтинового белка, модифицированного добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования; упомянутый эритропоэтиновый белок является ковалентно связанным с 1-3 (низш.)алкоксиполиэтиленгликольными группами, каждая полиэтиленгликольная группа ковалентно связана с эритропоэтиновым белком линкером формулы -C(O)-X-S-Y-, где группа С(O) линкера образует амидную связь с одной из упомянутых аминогрупп, Х означает -(CH2)k- или -СН2(O-СН2-CH2)k-, k означает число от 1 до 10, Y является 
;
;
или 
,
средняя молекулярная масса каждой полиэтиленгликольной составляющей составляет примерно от 20 кД до 40 кД, и молекулярная масса конъюгата составляет примерно от 51 кД до 175 кД.
Такие виды эритропоэтина могут быть представлены формулой (III)
где R может быть любым низшим алкилом. Предпочтительным низшим алкилом является метил. Х может быть -(CH2)k- или -СН2(O-CH2-CH2)k-, где k является числом от 1 до примерно 10. Предпочтительно k означает число от 1 до примерно 4, более предпочтительно k означает 1 или 2. Наиболее предпочтительно Х означает -(СН2).
В формуле 1 Y означает
или ,
предпочтительно
более предпочтительно
В формуле (III) число m выбирают таким образом, чтобы в результате конъюгат формулы (III) обладал физиологической активностью, сравнимой с активностью немодифицированного эритропоэтина, активность которого может быть такой же, большей или составлять часть соответствующей активности немодифицированного эритропоэтина. Символ m означает число остатков окиси этилена в единице PEG. Одна субъединица PEG, представляющая -(ОСН2СН2)-, имеет молекулярную массу примерно 44 Д. Таким образом, молекулярная масса конъюгата (исключая молекулярную массу эритропоэтина) зависит от числа m. Молекулярная масса "примерно" такой величины означает, что она находится в разумных пределах величины, определенной с помощью обычных аналитических методик. Число m является целым, составляющим примерно от 450 до примерно 900 (что соответствует молекулярной массе от 20 до 40 кД), предпочтительно m представляет число примерно от 550 до примерно 800 (примерно от 24 до 35 кД) и наиболее предпочтительно m является числом примерно от 650 до 700 (примерно от 29 до 31 кД).
В формуле (III) число n означает число ε-аминогрупп аминокислоты лизина в эритропоэтиновом белке, ковалентно связанных с полиэтиленгликольной единицей амидной связью. Конъюгат по настоящему изобретению может содержать одну, две или три полиэтиленгликольные единицы на молекулу ЕРО. Число n является целым числом от 1 до 3, предпочтительно n означает 1 или 2 и более предпочтительно n является 1.
Предпочтительные эритропоэтиновые белки формулы (III) представлены формулами:
В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения эритропоэтиновый конъюгат представлен формулой:
где в представленной выше формуле
n является целым числом от 1 до 3;
m означает целое число от 450 до 900;
R означает низший алкил;
Х означает -(CH2)k- или -CH2(O-CH2-CH2)k- и
Р является остатком эритропоэтинового белка без аминогруппы или групп, которые образуют амидную связь с X.
Другие предпочтительные эритропоэтиновые гликопротеиновые продукты представлены формулами:
Более предпочтительные эритропоэтиновые гликопротеиновые продукты представлены формулой:
Такие эритропоэтиновые белки могут быть получены путем
(а) ковалентного связывания ε-аминогруппы аминокислоты лизина эритропоэтинового белка, представленного формулой P-[NH2]n, c бифункциональным реагентом формулы Z-CO-X-S-Q с целью образования промежуточного соединения с амидной связью, представленного формулой:
P-[NH-CO-X-S-Q]n,
где Р является эритропоэтиновым белком без аминогруппы, которая образует амидную связь; n означает целое число в диапазоне от 1 до 3; Z является реакционноспособной группой, например, сложноэфирной группой эфира N-гидроксисукцинимида и карбоновой кислоты; Х означает -(CH2)k- или -СН2(O-CH2-CH2)k-, где k означает число от 1 до примерно 10 и Q является защитной группой, подобной алканоильной, например, ацетилом.
(б) реакции с образованием ковалентной связи между промежуточным соединением с амидной связью со стадии (а) и активированным производным полиэтиленгликоля, представленным формулой W-[OCH2CH2]m-OR, для образования эритропоэтинового гликопротеинового продукта, представленного формулой:
где W является сульфгидрильной реакционноспособной формой Y; m является целым числом в диапазоне от 450 до 900; R означает низший алкил и Y является таким, как установлено выше.
В этом варианте осуществления изобретения бифункциональным реагентом является предпочтительно N-сукцинимидил-S-ацетилтиопропионат или N-сукцинимидил-5-ацетилтиоацетат, Z означает предпочтительно N-гидроксисукцинимид и активированное производное полиэтиленгликоля W-[OCH2CH2]m-OR предпочтительно выбирают из группы, состоящей из иодацетилметокси-PEG, метокси-PEG-винил-сульфона и метокси-PEG-имида малеиновой кислоты.
Если рассматривать более подробно, эритропоэтиновые белки формулы (III) могут быть получены путем ковалентного связывания тиольных групп с ЕРО ("активация") и сочетания полученного в результате активированного ЕРО с производным полиэтиленгликоля (PEG). Первая стадия получения модифицированного полиэтиленгликолем ЕРО согласно настоящему изобретению включает ковалентное связывание тиольных групп посредством NH2-групп ЕРО. Активирование ЕРО проводят с помощью бифункциональных реагентов, которые служат носителями защищенной тиольной группы и дополнительной реакционноспособной группы, как, например, активированные сложные эфиры (например, сложный сукцинимидильный эфир), ангидриды, сложные эфиры сульфокислот, галогениды карбоновых кислот и сульфокислот соответственно. Тиольную группу защищают известными в данной области группами, например ацетильными группами. Такие бифункциональные реагенты способны взаимодействовать с ε-аминогруппами лизиновых аминокислот с образованием амидной связи. Первая стадия реакции представлена ниже:
ЕРО, n и X являются такими, как указано выше, и Z является известной в данной области реакционноспособной группой, например N-гидроксисукцинимидным (NHS) заместителем формулы
В предпочтительном варианте осуществления изобретения активацию ε-аминогрупп лизина осуществляют при реакции с бифункциональными реагентами, содержащими сукцинимидильную составляющую. Бифункциональные реагенты могут служить носителями различных видов спейсеров, например составляющих -(CH2)k- или -СН2-(O-СН2-СН2-)k-, где k означает число от 1 до примерно 10, предпочтительно от 1 до примерно 4 и более предпочтительно 1 или 2, и наиболее предпочтительно 1. Примерами таких реагентов являются N-сукцинимидил-S-ацетилтиопропионат (SATP) и N-сукцинимидил-S-ацетилтиоацетат (SATA)
с k, являющимся таким, как определено выше.
Получение бифункциональных реагентов известно в данной области. Предшественники сложных эфиров 2-(ацетилтио)(этокси)kуксусной кислоты и N-гидроксисукцинимида описываются в патенте Германии DE-3924705, в то время как превращение в ацетилтиопроизводное описывается March, J., Advanced Organic Chemistry, McGraw-Hill, 1977, 375-376. SATA коммерчески доступен (Molecular Probes, Юджин, Орегон, США, и Pierce, Рокфорд, Иллинойс).
Число тиольных групп, которые следует добавить к молекуле ЕРО, можно выбрать путем регулирования параметров реакции, то есть концентрации белка (ЕРО) и соотношения белок/бифункциональный реагент. Предпочтительно ЕРО активируют путем ковалентного связывания с 1-5 тиольными группами на молекулу ЕРО, более предпочтительно с 1,5-3 тиольными группами на молекулу ЕРО. Такие диапазоны объясняют статистическим распределением тиольных групп в популяции белка ЕРО.
Реакцию проводят, например, в водном буферном растворе, рН 6,5-8,0, например, в 10 мМ фосфате калия, 50 мМ NaCl, рН 7,3. Бифункциональный реагент может добавляться в диметилсульфоксиде. После завершения реакции, предпочтительно через 30 минут, реакцию останавливают путем прибавления лизина. Избыток бифункционального реагента может быть удален известными в данной области способами, например, при диализе или фильтрации через колонку. Среднее число тиольных групп, добавленных к эритропоэтину, может быть определено фотометрическими способами, описанными, например, Grasetti, D.R. и Murray, J.F. в J. Appl. Biochem. Biotechnol., 119, 41-49 (1967).
Описанная выше реакция сопровождается ковалентным связыванием активированного производного полиэтиленгликоля. Подходящими производными полиэтиленгликоля являются активированные молекулы полиэтиленгликоля со средней молекулярной массой примерно от 20 до 40 кД, более предпочтительно примерно от 24 до 35 кД и наиболее предпочтительно примерно 30 кД.
Активированные производные PEG известны в данной области и описываются, например, Morpurgo, М. и др. в J. Bioconj. Chem., (1996) 7, с.с.363 и следующие, для PEG-винилсульфона. Типы PEG с прямой и разветвленной цепью годятся для получения соединений формулы 1. Примерами реакционноспособных реагентов PEG являются иодацетилметокси-PEG и метокси-РЕС-винилсульфон:
Применение таких активированных иодом веществ известно в данной области и описано Hermanson, G.T. в Bioconjugate Techniques, изд. Academic Press, Сан-Диего (1996), с.с.147-148.
Наиболее предпочтительно виды PEG активируются имидом малеиновой кислоты при использовании (низш.)алкокси-PEG-имида малеиновой кислоты, как, например, метокси-PEG-имид малеиновой кислоты (М.м. 30000; Shearwater Polymers, Inc.). Строение (низш.)алкокси-PEG-имида малеиновой кислоты следующее:
где R и m являются такими, как определено выше, предпочтительно
Реакция сочетания с (низш.)алкокси-PEG-имидом малеиновой килоты происходит после in situ расщепления тиольной защитной группы в водном буферном растворе, например, 10 мМ фосфат калия, 50 мМ NaCl, 2 мМ этилендиамин-тетрауксусная кислота (ЭДТК), рН 6,2. Расщепление защитной группы может быть осуществлено, например, с помощью гидроксиламина в диметилсульфоксиде при 25°C, рН 6,2 в течение примерно 90 минут. Для модификации полиэтиленгликолем молярное соотношение активированный ЕРО/(низш.)алкокси-PEG-имид малеиновой кислоты должно составлять примерно от 1:3 до примерно 1:6 и предпочтительно 1:4. Реакция может быть остановлена с помощью прибавления цистеина и реакции оставшихся тиольных (-SH) групп с N-метилимидом малеиновой кислоты или другими подходящими соединениями, способными образовывать дисульфидные связи. Из-за реакции любых оставшихся активных тиольных групп с защитной группой, как, например, N-метилимид малеиновой кислоты или другая подходящая защитная группа, эритропоэтиновые гликопротеины в конъюгатах по настоящему изобретению могут содержать такие защитные группы. Обычно описанные здесь методики приводят к смеси молекул с варьирующимися числами тиольных групп, защищенных разными числами защитных групп в зависимости от числа активированных тиольных групп в гликопротеине, которые не были конъюгированы с PEG-имидом малеиновой кислоты.
В то время как N-метилимид малеиновой кислоты образует тот же тип ковалентной связи, когда используется для блокирования оставшихся тиольных групп на модифицированном полиэтиленгликолем белке, дисульфидные соединения приведут в ходе межмолекулярной обменной реакции сульфид/дисульфид обменной реакции к связыванию блокирующего реагента с помощью дисульфидного мостика. Предпочтительными блокирующими реагентами для такого типа реакции блокирования являются окисленный глутатион (GSSG), цистеин и цистамин. В то время как с цистеином не вводится дополнительный суммарный заряд в модифицированный полиэтиленгликолем белок, применение блокирующих агентов GSSG или цистамина приводит к дополнительному отрицательному или положительному заряду.
Дальнейшая очистка соединений формулы (III), включая разделение моно-, ди- и три-модифицированных полиэтиленгликолем видов ЕРО, может быть осуществлена способами, известными в данной области, например с помощью колоночной хроматографии.
Модифицированные полиэтиленгликолем производные эритропоэтина содержат, как минимум, 90% моно-PEG-конъюгатов. Обычно моно-PEG-конъюгаты эритропоэтиновых гликопротеинов желательны, так как они обладают более высокой активностью, чем ди-PEG-конъюгаты. Процент моно-PEG-конъюгатов, а также соотношение моно- и ди-PEG-видов может регулироваться путем объединения более широких фракций вблизи пика элюирования для уменьшения процента моно-PEG-конъюгатов или более узких фракций с целью увеличения процента моно-PEG-конъюгатов в композиции. Около 90% моно-PEG-конъюгатов представляет хороший баланс выхода и активности. Иногда могут быть желательны композиции, в которых, например, как минимум, девяносто два процента или, как минимум, девяносто шесть процентов конъюгатов являются моно-PEG-видами (n равно 1). В одном варианте осуществления настоящего изобретения процент конъюгатов, где n означает 1, составляет от девяносто до девяносто шести процентов.
Фармацевтические композиции, включающие модифицированный полиэтиленгликолем эритропоэтин, известны в данной области и описываются в международной заявке на патент WO 01/87329. Композиции могут включать от 10 до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, как определено выше. Предпочтительно композиции включают от 10 до 1000 мкг, например, 10, 50, 100, 400, 800 или 2500 мкг на мл. Далее композиции могут включать от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, сульфат в концентрации 10-200 ммолей/л, фосфат в концентрации от 10 до 50 ммолей/л, рН от 6,0 до 6,5. Такая композиция может также включать метионин вплоть до 20 мМ, 1-5% полиола (мас./об.), вплоть до 0,1% плуроника F68 (мас./об.) и необязательно до 1 мМ CaCl2. Пример такой композиции включает от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, сульфат 40 ммолей/л, фосфат 10 ммолей/л, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионин, 0,01% плуроника F68 (мас./об.), рН 6,2. Альтернативно композиция может включать от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, NaCl от 10 до 100 ммолей/л, фосфат от 10 до 50 ммолей/л, рН от 6,0 до 7,0, необязательно 1-5% (мас./об.) полиола. Также такая композиция может включать метионин вплоть до 20 мМ, до 0,1% плуроника F68 (мас./об.) и необязательно CaCl2 7,5 мкмолей/л. Конкретно такая композиция может включать от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, NaCl 100 ммолей/л, 10 мМ метионин, 0,01% плуроника F68 (мас./об.) и фосфат 10 ммолей/л, рН 7,0.
Настоящее изобретение также относится к упомянутой выше композиции, включающей от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, аргинин от 10 до 50 ммолей/л, рН от 6 до 6,5, сульфат натрия от 10 до100 ммолей/л. Дополнительно такая композиция может включать метионин до 20 мМ, до 0,1% плуроника F68 (мас./об.), необязательно CaCl2 до1 ммоля/л и необязательно 1-5% (мас./об.) полиола. Конкретно, такая композиция может включать от 10 мкг до 10000 мкг эритропоэтинового белка на мл, аргинин 40 ммолей/л, рН 6,2, сульфат натрия 30 ммолей/л, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионин, 0,01% плуроника F68 (мас./об.) и необязательно CaCl2 1 ммоль/л.
Предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композициям, включающим эритропоэтин от 10 до 10000 мкг/мл, предпочтительно эритропоэтин от 25 до 2500 мкг/мл, и
а) 10 мМ фосфат натрия/калия, 100 мМ хлористый натрий, рН 7,0, или
б) 10 мМ фосфат натрия, 120 мМ сульфат натрия, рН 6,2, или
в) 10 мМ фосфат натрия, 40 мМ сульфат натрия, 3% маннита (мас./об.), рН 6,2, или
г) 10 мМ фосфат натрия, 40 мМ сульфат натрия, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионин, 0,01% плуроника F68 (мас./об.), рН 6,2, или
д) 40 мМ аргинин, 30 мМ сульфат натрия, 3% маннита (мас./об.), рН 6,2, или
е) 40 мМ аргинин, 30 мМ сульфат натрия, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионин, 0,01% плуроника F68 (мас./об.), рН 6,2.
В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения композиции включают количество эритропоэтинового белка в 50, 100, 400, 800 или 2500 мкг/мл. Наиболее предпочтительные композиции включают либо 10 мМ фосфата натрия, 40 мМ сульфата натрия, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионина, 0,01% плуроника F68 (мас./об.), рН 6,2, либо 40 мМ аргинина, 30 мМ сульфата натрия, 3% маннита (мас./об.), 10 мМ метионина, 0,01% плуроника F68 (мас./об.), рН 6,2. Другие детали таких композиций известны из международной заявки на патент WO 01/87329.
Изобретение также относится к способу лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях, включающему введение эффективного количества эритропоэтинового белка, как указано выше. Кроме того, изобретение относится к лекарственному средству для лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях, отличающемуся тем, что оно содержит эффективное количество эритропоэтинового белка. Примерами сердечных заболеваний являются, например, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз, коронарный атеросклероз, острый коронарный синдром, сердечная недостаточность, застойная сердечная недостаточность и/или сердечная недостаточность. В контексте с описанным выше способом и лекарственным средством сердечная недостаточность является предпочтительной формой сердечных заболеваний. Предпочтительными способами и лекарственными средствами, как описано выше, являются те, где эритропоэтиновый белок является таким, как определено выше.
При лечении нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях ЕРО может, например, быть введен в дозе 150 ЕД/кг массы тела дважды в неделю. Доза может варьироваться в соответствии с потребностями отдельного пациента и может также быть в пределах, например, от 100-200 ЕД/кг. В зависимости от периода полураспада используемого производного эритропоэтина доза может быть введена, например, от 1 до 3 раз в неделю. В зависимости от потребностей отдельного больного врач может также выбрать другую дозу.
Специфическая активность ЕРО или ЕРО-конъюгатов согласно настоящему изобретению может быть определена с помощью различных анализов, известных в данной области. Биологическая активность очищенных эритропоэтиновых белков по настоящему изобретению проявляется в том, что введение эритропоэтинового белка путем инъекции больным людям приводит к повышенному продуцированию в клетках костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов по сравнению с неинъецируемыми или контрольными группами субъектов. Биологическая активность эритропоэтиновых белков или их фрагментов, полученных и очищенных согласно настоящему изобретению, может быть исследована с помощью методов согласно Annable и др.. Bull. Wid. Hlth. Org. (1972) 47: 99-112, и Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio, 1997 [2]. Другой биологический анализ для определения активности эритропоэтинового белка, анализ на мышах со зрелыми эритроцитами, описывается в литературе (например, Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio, 1997 [2], и в монографии об эритропоэтине Ph. Eur. BRP).
Изобретение будет лучше понято при ссылке на следующие примеры, которые иллюстрируют, но не ограничивают описанное здесь изобретение.
Примеры
Мужчину средних лет с сердечным заболеванием исследуют после сердечного катетера на нарушения распределения железа, определяя следующие параметры - CRP (С-реактивный белок), ферритин и рецептор растворимого трансферрина - как описано Р.Lehmann, M.Volkmann, J.Lotz, A.Baldauf, R.Roeddiger, постер, представленный на конференции ААСС/CSCC, ежегодная конференция, 29 июля - 2 августа, 2001, Чикаго, Иллинойс. Результаты показывают нарушения распределения железа. Больному вводят 150 ЕД/кг подкожно рекормонТМ (коммерчески доступный эритропоэтиновый белок) дважды в неделю максимум в течение 12 недель. Затем определение описанных выше параметров указывает на улучшение нарушения недостаточности железа.
Claims (13)
1. Применение человеческого эритропоэтина альфа или бета, либо его конъюгата для лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях.
2. Применение по п.1, где сердечным заболеванием является сердечная недостаточность.
3. Применение по п.1 или 2, где эритропоэтин экспрессируется путем эндогенной активации гена.
4. Применение по п.1 или 2, где эритропоэтин имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
5. Применение по п.1 или 2, где эритропоэтин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную прибавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования.
6. Применение по п.1 или 2, где эритропоэтин представляет собой дарбэпоэтин альфа.
7. Применение по п.1 или 2, где эритропоэтин, определенный в любом из пп.3-6, подвергают модификации полиэтиленгликолем.
8. Применение по п.7, где эритропоэтин представляет собой конъюгат, указанный конъюгат включает эритропоэтиновый белок, содержащий как минимум одну свободную аминогруппу и проявляющий in vivo биологическую активность, побуждающую клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, и который выбирают из группы, состоящей из человеческого эритропоэтина и его аналогов, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированного добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой как минимум одного сайта гликозилирования; упомянутый эритропоэтиновый белок является ковалентно связанным с n полиэтиленгликольными группами формулы -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR и группа -СО каждой полиэтиленгликольной группы образует амидную связь с одной из упомянутых аминогрупп; где R означает низший алкил; х означает 2 или 3; m означает число примерно от 450 до 900; n означает число от 1 до 3 и n и m выбирают таким образом, что молекулярная масса конъюгата минус эритропоэтиновый белок составляет от 20 до 100 кД.
9. Применение по п.8, где х означает 2, m означает число от 650 до 750, n равно 1 и R означает метил.
10. Применение по п.7, где эритропоэтин представляет конъюгат, указанный конъюгат включает эритропоэтиновый белок, содержащий как минимум одну свободную аминогруппу и проявляющий in vivo биологическую активность, побуждающую клетки костного мозга увеличивать продуцирование ретикулоцитов и эритроцитов, и который выбирают из группы, состоящей из человеческого эритропоэтинового белка и его аналогов, которые имеют первичную структуру человеческого эритропоэтинового белка, модифицированного добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования; упомянутый эритропоэтиновый белок является ковалентно связанным с 1-3 (низш.) алкоксиполиэтиленгликольными группами, каждая полиэтиленгликольная группа ковалентно связана с эритропоэтиновым белком линкером формулы -C(O)-X-S-Y и группа С(O) линкера образует амидную связь с одной из упомянутых аминогрупп, Х означает (СН2)k- или -CH2(О-СН2-СН2)k-, k означает число от 1-10, Y означает
или
средняя молекулярная масса каждой полиэтиленгликольной составляющей составляет примерно от 20 до 40 кД, а средняя молекулярная масса конъюгата составляет примерно от 51 до 175 кД.
11. Применение по п.10 эритропоэтинового конъюгата формулы
где n означает целое число от 1 до 3; m означает целое число от 450 до 900; R означает низший алкил; Х означает -(CH2)k- или -СН2(O-СН2-СН2)k, k означает число от 1 до 10 и Р является остатком эритропоэтинового белка без числа n аминогрупп, которые образуют амидную связь с X.
12. Способ лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях, включающий введение эффективного количества эритропоэтина альфа или бета, либо его конъюгата.
13. Лекарственное средство для лечения нарушений распределения железа при сердечных заболеваниях, отличающееся тем, что оно содержит эффективное количество эритропоэтина альфа или бета, либо его конъюгата.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP02026342.2 | 2002-11-22 | ||
| EP02026342 | 2002-11-22 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005119649A RU2005119649A (ru) | 2006-03-20 |
| RU2324494C2 true RU2324494C2 (ru) | 2008-05-20 |
Family
ID=32337998
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005119649/15A RU2324494C2 (ru) | 2002-11-22 | 2003-11-17 | Новое применение эритропоэтина при сердечных заболеваниях |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7459436B2 (ru) |
| EP (1) | EP1565206B1 (ru) |
| JP (1) | JP2006512326A (ru) |
| KR (1) | KR100839302B1 (ru) |
| CN (1) | CN100531797C (ru) |
| AR (1) | AR042097A1 (ru) |
| AT (1) | ATE426411T1 (ru) |
| AU (1) | AU2003288081B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0316438C1 (ru) |
| CA (1) | CA2505524C (ru) |
| DE (1) | DE60326874D1 (ru) |
| ES (1) | ES2321928T3 (ru) |
| MX (1) | MXPA05005281A (ru) |
| PL (1) | PL210256B1 (ru) |
| RU (1) | RU2324494C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004047858A1 (ru) |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
| US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
| US20070026485A1 (en) | 2003-04-09 | 2007-02-01 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods |
| WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
| EP2281885A1 (en) * | 2003-08-27 | 2011-02-09 | Ophthotech Corporation | Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders |
| US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| SI1696947T1 (sl) * | 2003-12-19 | 2014-05-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Uporaba eritropoetina pri zdravljenju motenj porazdelitve železa pri kroničnih vnetnih črevesnih boleznih |
| US20080300173A1 (en) | 2004-07-13 | 2008-12-04 | Defrees Shawn | Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1] |
| EP2586456B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-01-20 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF) |
| JP4951527B2 (ja) | 2005-01-10 | 2012-06-13 | バイオジェネリックス アーゲー | 糖ｐｅｇ化顆粒球コロニー刺激因子 |
| US9187546B2 (en) | 2005-04-08 | 2015-11-17 | Novo Nordisk A/S | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
| US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
| EP2380435B1 (en) * | 2005-08-31 | 2016-05-25 | Kaneka Corporation | Feline-derived erythropoietin and method for production thereof |
| US20070072795A1 (en) * | 2005-09-28 | 2007-03-29 | Anton Haselbeck | Treatment of neurodegenerative disorders |
| WO2007056191A2 (en) | 2005-11-03 | 2007-05-18 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide sugar purification using membranes |
| WO2007092252A2 (en) | 2006-02-03 | 2007-08-16 | Modigene Inc | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
| US8048849B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Modigene, Inc. | Long-acting polypeptides and methods of producing same |
| US20140113860A1 (en) | 2006-02-03 | 2014-04-24 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
| US10221228B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-03-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
| US8476234B2 (en) * | 2006-02-03 | 2013-07-02 | Prolor Biotech Inc. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| US9458444B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-10-04 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| US9249407B2 (en) | 2006-02-03 | 2016-02-02 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| US10351615B2 (en) | 2006-02-03 | 2019-07-16 | Opko Biologics Ltd. | Methods of treatment with long-acting growth hormone |
| US8304386B2 (en) * | 2006-02-03 | 2012-11-06 | Prolor Biotech, Inc. | Long-acting growth hormone and methods of producing same |
| US8048848B2 (en) | 2006-02-03 | 2011-11-01 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof |
| US8946155B2 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-03 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
| US8759292B2 (en) | 2006-02-03 | 2014-06-24 | Prolor Biotech, Llc | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| US8450269B2 (en) | 2006-02-03 | 2013-05-28 | Prolor Biotech Ltd. | Long-acting growth hormone and methods of producing same |
| US20150038413A1 (en) | 2006-02-03 | 2015-02-05 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
| US20080248959A1 (en) | 2006-07-21 | 2008-10-09 | Neose Technologies, Inc. | Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences |
| JP2010505874A (ja) | 2006-10-03 | 2010-02-25 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | ポリペプチドコンジュゲートの精製方法 |
| AU2008237411B2 (en) | 2007-04-03 | 2013-10-03 | Ratiopharm Gmbh | Methods of treatment using glycopegylated G-CSF |
| WO2008154639A2 (en) | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Neose Technologies, Inc. | Improved process for the production of nucleotide sugars |
| WO2009108806A1 (en) | 2008-02-27 | 2009-09-03 | Novo Nordisk A/S | Conjugated factor viii molecules |
| US9663778B2 (en) | 2009-07-09 | 2017-05-30 | OPKO Biologies Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| US12203113B2 (en) | 2009-07-09 | 2025-01-21 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| CN101870735B (zh) * | 2010-06-02 | 2013-06-12 | 北京精益泰翔技术发展有限公司 | 一种新型高糖基化促红细胞生成素免疫融合蛋白 |
| PE20142405A1 (es) | 2012-04-19 | 2015-01-25 | Opko Biolog Ltd | Variantes de oxintomodulina de accion prolongada y metodos de produccion de las mismas |
| EP2922867B1 (en) | 2012-11-20 | 2021-07-21 | OPKO Biologics Ltd. | Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides |
| EP3019243A4 (en) | 2013-07-12 | 2017-03-15 | Ophthotech Corporation | Methods for treating or preventing ophthalmological conditions |
| US20150158926A1 (en) | 2013-10-21 | 2015-06-11 | Opko Biologics, Ltd. | Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same |
| PH12017501089B1 (en) | 2014-12-10 | 2022-06-22 | Opko Biologics Ltd | Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides |
| AU2016280867B2 (en) | 2015-06-19 | 2020-02-27 | Opko Biologics Ltd. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| KR102618424B1 (ko) | 2016-07-11 | 2023-12-26 | 옵코 바이오로직스 리미티드 | 지속성 응고 인자 vii 및 그 제조 방법 |
| US20230331798A1 (en) * | 2020-09-22 | 2023-10-19 | Jecho Laboratories, Inc. | Glycosylation-modified erythopoietin and use thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2089214C1 (ru) * | 1994-01-06 | 1997-09-10 | Научно-исследовательский центр Санкт-Петербургского медицинского института им.акад.И.П.Павлова | Средство для снижения патологической проницаемости сосудов к белкам |
| WO2001087329A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
| WO2002014356A2 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Baxter Healthcare Sa | Therapeutic use of a recombinant erythropoietin having high activity and reduced side effects |
| US6440932B1 (en) * | 1997-06-21 | 2002-08-27 | Roche Diagnostics Gmbh | Pharmaceutical combination preparations containing erythropoietin and modified haemoglobins |
Family Cites Families (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| JPS57183508A (en) * | 1981-05-07 | 1982-11-11 | Nippon Piston Ring Co Ltd | Compound valve seat |
| IL77081A (en) | 1984-12-04 | 1999-10-28 | Genetics Inst | Dna sequence encoding human erythropoietin process for the preparation thereof and a pharmaceutical composition of human erythropoietin |
| US4745099A (en) | 1985-02-06 | 1988-05-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical composition for the treatment of the anemia of malignant tumors |
| JP2858752B2 (ja) | 1987-04-10 | 1999-02-17 | オーソ・フアーマシユーチカル・コーポレーシヨン | 正常な哺乳動物のヘマトクリツト値の増大方法 |
| FR2646438B1 (fr) | 1989-03-20 | 2007-11-02 | Pasteur Institut | Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration |
| DE3924705A1 (de) | 1989-07-26 | 1991-01-31 | Boehringer Mannheim Gmbh | Heterobifunktionelle verbindungen |
| ES2127458T3 (es) | 1989-11-06 | 1999-04-16 | Cell Genesys Inc | Produccion de proteinas utilizando recombinacion homologa. |
| US5272071A (en) | 1989-12-22 | 1993-12-21 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Method for the modification of the expression characteristics of an endogenous gene of a given cell line |
| RU2128227C1 (ru) | 1989-12-22 | 1999-03-27 | Апплайд Резеч Системз АРС Холдинг Н.В. (NL) (Антильские острова) | Способ активации транскрипционно-молчащего гена |
| GB9001987D0 (en) | 1990-01-29 | 1990-03-28 | Janssen Pharmaceutica Nv | Improved cyclodextrin based erythropietin formulation |
| US5324650A (en) | 1990-03-20 | 1994-06-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Situ process for production of conjugates |
| US6565841B1 (en) | 1991-03-15 | 2003-05-20 | Amgen, Inc. | Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor |
| WO1992016555A1 (en) | 1991-03-18 | 1992-10-01 | Enzon, Inc. | Hydrazine containing conjugates of polypeptides and glycopolypeptides with polymers |
| NZ244778A (en) | 1991-10-21 | 1994-03-25 | Ortho Pharma Corp | Peg imidates and protein derivatives thereof |
| PT101031B (pt) | 1991-11-05 | 2002-07-31 | Transkaryotic Therapies Inc | Processo para o fornecimento de proteinas por terapia genetica |
| US5968502A (en) | 1991-11-05 | 1999-10-19 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Protein production and protein delivery |
| US5641670A (en) | 1991-11-05 | 1997-06-24 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Protein production and protein delivery |
| ZA933926B (en) | 1992-06-17 | 1994-01-03 | Amgen Inc | Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules |
| CA2101361A1 (en) | 1992-08-27 | 1994-02-28 | Robert A. Snow | Low diol polyalkylene oxide biologically active proteinaceous substances |
| TW402639B (en) | 1992-12-03 | 2000-08-21 | Transkaryotic Therapies Inc | Protein production and protein delivery |
| NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
| US5681811A (en) | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| US5359030A (en) | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
| WO1994028024A1 (en) | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Enzon, Inc. | Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity |
| IL192290A0 (en) | 1993-08-17 | 2008-12-29 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
| US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
| US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| DE19535571A1 (de) | 1995-09-14 | 1997-03-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | Pharmazeutische Kombinationspräparate und deren Verwendung zur Behandlung von Hämodialysepatienten |
| JP2001508783A (ja) | 1997-01-29 | 2001-07-03 | ポリマスク・ファーマシューティカルズ・パブリック・リミテッド・カンパニー | Ｐｅｇ化法 |
| EP0977582B1 (de) | 1997-03-18 | 2002-08-14 | Roche Diagnostics GmbH | Pharmazeutische kombinationspräparate enthaltend erythropoietin und eisenpräparate |
| DE19734293A1 (de) | 1997-08-08 | 1999-02-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verwendung von pharmazeutischen Kombinationspräparaten enthaltend Erythropoietin und Eisenpräparate zur Behandlung von rheumatischen Erkrankungen |
| PE20010288A1 (es) | 1999-07-02 | 2001-03-07 | Hoffmann La Roche | Derivados de eritropoyetina |
| CZ299516B6 (cs) | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
| US20020065214A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Adrian Iaina | Method of treating congestive heart failure |
| JP4656814B2 (ja) | 2000-12-20 | 2011-03-23 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | エリスロポエチンコンジュゲート |
| WO2003025583A2 (en) | 2001-09-14 | 2003-03-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Differential diagnosis of disorders of iron metabolism |
-
2003
- 2003-11-12 US US10/706,701 patent/US7459436B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 AU AU2003288081A patent/AU2003288081B2/en not_active Expired
- 2003-11-17 JP JP2004554368A patent/JP2006512326A/ja active Pending
- 2003-11-17 CN CNB2003801038773A patent/CN100531797C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 KR KR1020057009185A patent/KR100839302B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 DE DE60326874T patent/DE60326874D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 AT AT03779949T patent/ATE426411T1/de active
- 2003-11-17 MX MXPA05005281A patent/MXPA05005281A/es active IP Right Grant
- 2003-11-17 ES ES03779949T patent/ES2321928T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 BR BRPI0316438A patent/BRPI0316438C1/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-11-17 CA CA2505524A patent/CA2505524C/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 RU RU2005119649/15A patent/RU2324494C2/ru active
- 2003-11-17 EP EP03779949A patent/EP1565206B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-11-17 WO PCT/EP2003/012822 patent/WO2004047858A1/en not_active Ceased
- 2003-11-17 PL PL377590A patent/PL210256B1/pl unknown
- 2003-11-20 AR ARP030104288A patent/AR042097A1/es unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2089214C1 (ru) * | 1994-01-06 | 1997-09-10 | Научно-исследовательский центр Санкт-Петербургского медицинского института им.акад.И.П.Павлова | Средство для снижения патологической проницаемости сосудов к белкам |
| US6440932B1 (en) * | 1997-06-21 | 2002-08-27 | Roche Diagnostics Gmbh | Pharmaceutical combination preparations containing erythropoietin and modified haemoglobins |
| WO2001087329A1 (en) * | 2000-05-15 | 2001-11-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate |
| WO2002014356A2 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-21 | Baxter Healthcare Sa | Therapeutic use of a recombinant erythropoietin having high activity and reduced side effects |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Патологическая физиология. /Под ред. А.Д.Адо и Л.М.Ишимовой. - М.: Медицина, 1973, с.273-275. Thomas С. et al. Biochemical markers and hematologic indices in the diagnosis of functional iron deficiency. Clin Chem. 2002 Jul; 48(7): 1066-76 [on line]. PMID: 12089176 [найдено 15.06.2006] Найдено из Интернет:<URL:http://www.clinchem.org/cgi/content/full/48/7/1066. * |
| Реферат Entrez PubMed: Goodnough LT. et al. Transfusion medicine: support of patients undergoing cardiac surgery. Am J Cardiovasc Drugs. 2001; 1(5):337-51 [on line] PMID: 14728016 [найдено 15.06.2006]. реферат БД ВИНИТИ: Sawada Yoshihide et al. Операция на открытом сердце у мальчика из секты «Свидетели Иеговы»: описание случая успешного лечения аортальной регургитации и аневризмы синуса Вальсаавы на почве инфекционного эндокардита Nihon kyobu geka gakkai zasshi = J.Jap.Thorac.Surg.1997; 45(12):96-100 [on line] № реферата: 98.09-04 М2.357 [найдено 15.06.2006]. * |
| СУМАРОКОВ А.А. и др. Клиническая кардиология. - M.: Универ-сум паблишинг, 1995, с.184, 185. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20050085091A (ko) | 2005-08-29 |
| CA2505524C (en) | 2017-02-07 |
| CN100531797C (zh) | 2009-08-26 |
| BR0316438A (pt) | 2005-10-11 |
| DE60326874D1 (de) | 2009-05-07 |
| EP1565206A1 (en) | 2005-08-24 |
| AU2003288081B2 (en) | 2007-02-01 |
| AU2003288081A1 (en) | 2004-06-18 |
| JP2006512326A (ja) | 2006-04-13 |
| MXPA05005281A (es) | 2005-07-25 |
| BRPI0316438C1 (pt) | 2021-05-25 |
| BRPI0316438B1 (pt) | 2016-08-02 |
| RU2005119649A (ru) | 2006-03-20 |
| AR042097A1 (es) | 2005-06-08 |
| CA2505524A1 (en) | 2004-06-10 |
| KR100839302B1 (ko) | 2008-06-17 |
| ATE426411T1 (de) | 2009-04-15 |
| EP1565206B1 (en) | 2009-03-25 |
| ES2321928T3 (es) | 2009-06-15 |
| BRPI0316438B8 (pt) | 2016-09-27 |
| US7459436B2 (en) | 2008-12-02 |
| CN1713919A (zh) | 2005-12-28 |
| US20040209802A1 (en) | 2004-10-21 |
| PL377590A1 (pl) | 2006-02-06 |
| WO2004047858A1 (en) | 2004-06-10 |
| PL210256B1 (pl) | 2011-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2324494C2 (ru) | Новое применение эритропоэтина при сердечных заболеваниях | |
| RU2305554C2 (ru) | Применение эритропоэтина | |
| US7459429B2 (en) | Method of treating disturbances of iron distribution in inflammatory intestinal diseases | |
| JP2003503464A (ja) | ポリエチレングリコールを有するエリスロポエチン接合体 | |
| RU2232163C2 (ru) | Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции |