[go: up one dir, main page]

RU2314528C1 - Способ определения глюкозы в ротовой жидкости - Google Patents

Способ определения глюкозы в ротовой жидкости Download PDF

Info

Publication number
RU2314528C1
RU2314528C1 RU2006141466/15A RU2006141466A RU2314528C1 RU 2314528 C1 RU2314528 C1 RU 2314528C1 RU 2006141466/15 A RU2006141466/15 A RU 2006141466/15A RU 2006141466 A RU2006141466 A RU 2006141466A RU 2314528 C1 RU2314528 C1 RU 2314528C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
oral fluid
glucose
glucose content
blood
drops
Prior art date
Application number
RU2006141466/15A
Other languages
English (en)
Inventor
Тать на Ивановна Смирнова (RU)
Татьяна Ивановна Смирнова
Александр Васильевич Каргаполов (RU)
Александр Васильевич Каргаполов
Елена Владимировна Битюкова (RU)
Елена Владимировна Битюкова
Ирина Александровна Рощина (RU)
Ирина Александровна Рощина
Original Assignee
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" filed Critical Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"
Priority to RU2006141466/15A priority Critical patent/RU2314528C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2314528C1 publication Critical patent/RU2314528C1/ru

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, к области лабораторной диагностики. Сущность способа: к 1 мл свежеотобранной ротовой жидкости добавляют 1 мл дистиллированной воды, 2 капли 2N раствора КОН и 3 капли 0,1% раствора метиленового синего; содержимое перемешивают встряхиванием и нагревают на водяной бане до 80°С. При сохранении синей окраски индикатора делают вывод о том, что содержание глюкозы в ротовой жидкости соответствует норме и не превышает 0,12%; при полном исчезновении синей окраски индикатора - о превышении нормального значения содержания глюкозы. Способ доступен и прост в исполнении. Использование способа позволяет в короткие сроки определить повышенное содержание глюкозы (>0,12%) в пробе ротовой жидкости объемом 1 мл.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и биоорганической химии.
Глюкоза в организмах человека и животных - основной представитель углеводов, входящий в состав важнейших биологических жидкостей: крови, мочи, слюны.
В клинической практике для диагностики патологических состояний используются результаты анализов крови и мочи «на сахар», т.е. содержание глюкозы.
Содержание глюкозы в крови здорового человека колеблется от 0,8 до 1,2 г/л [Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. /Под ред. проф. Т.Т.Березова. М., Медицина. 1976 г. с.138]. При некоторых заболеваниях содержание сахара в крови возрастает (гипергликемия) и может достигать в тяжелых случаях 50-80 г/л. Параллельно увеличивается содержание глюкозы в ротовой жидкости [Денисов А.Б. Слюнные железы. Слюна. М., Изд. РАМН, 2005 г. с.53] и сахар обнаруживается в моче. Понижение содержания сахара в крови (гипогликемия) наблюдается реже и связано с нарушением функций печени и поджелудочной железы.
Методы определения глюкозы в водных растворах и крови человека весьма многочисленны [Камышников B.C. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика. Справочник в двух томах. Том II, с.10] и делятся на ферментативные и неферментативные.
Аналогом заявленного способа авторы предлагают наиболее распространенный ферментативный метод определения глюкозы в крови с помощью препарата, содержащего ферменты, глюкозооксидазу и пероксидазу (по В.К.Городецкому) [Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. /Под ред. проф. Т.Т.Березова. М.: Медицина, 1976 г. с.141], отличается высокой специфичностью, но позволяет определять глюкозу в исследуемой жидкости только при содержании от 0,2 до 4,0 г/л. Он включает 3 ступени биохимических превращений и 4- чисто химическую: окисление о-толуидина с последующим фотоколориметрическим определением окисленной формы красителя методом калибровочного графика.
Использование четырехступенчатой цепочки превращений с применением рабочего раствора, содержащего два ферментативных препарата, усложняет технику выполнения анализа и увеличивает вероятность ошибки эксперимента. Нельзя не отметить, что применение в лабораторной практике ароматического амина о-толуидина влечет за собой опасность канцерогенеза.
Прототипом заявленного способа авторы считают неферментативное определение глюкозы по Хагедорну-Иенсену в безбелковом фильтрате крови [Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии /Под ред. проф. Т.Т.Березова. М., Медицина, 1976 г. с.138]. Метод основан на восстановлении железа (III) в составе гексацианоферрата (III) калия (красной кровяной соли) до железа (II) с получением желтой кровяной соли K4[Fe(CN)6] при нагревании в щелочной среде Избыток красной кровяной соли определяется иодометрическим титрованием. Свободный иод, выделившийся в количестве, эквивалентном избытку K3[Fe(CN)6], оттитровывается раствором Na2S2O3.
Определение сахара производят в безбелковом фильтрате крови, поэтому необходимо предварительно осадить белки крови. Для этого берут 2 пронумерованные пробирки, в каждую из них наливают из бюретки по 5 мл 0,45% раствора сернокислого цинка и по 1 мл 0,1 н. NaOH. Образуется студенистый осадок гидроксида цинка.
В микропипетку, предварительно сполоснутую раствором оксалата натрия, набирают 0,1 мл крови. Пипетку с кровью погружают до дна в пробирку 1 с гидроксидом цинка, осторожно выдувают кровь и промывают пипетку 2-3 раза путем втягивания и выпускания верхнего слоя жидкости. Таким же образом сухой пипеткой (или той же самой, сполоснутой раствором оксалата натрия) набирают кровь в пробирку 2. Пробирки 3 и 4 - контрольные (без крови). Затем все четыре пробирки помещают в кипящую водяную баню на 3 мин и по истечении этого времени вынимают и ставят в штатив.
Жидкость во всех четырех пробирках фильтруют в заранее пронумерованные сахарные стаканчики через вату, которая кладется в виде маленького плотного кусочка в конус воронок. Вату предварительно промывают дистиллированной горячей водой 3 раза, при этом каждый раз отжимают ее, надавливая ладонью на края воронки. Пробирки, в которых нагревалась кровь, и воронки с ватой после того, как отфильтрована вся жидкость, промывают 3 раза горячей дистиллированной водой по 1-3 мл (вату каждый раз отжимают указанным выше способом).
К фильтрату в каждый стаканчик прибавляют по 2 мл щелочного раствора железосинеродистого калия и пробы нагревают в кипящей водяной бане точно 15 мин (за это время глюкоза полностью окисляется). После охлаждения к жидкости добавляют 3 мл тройного раствора (смесь растворов ZnSO4, NaCI, KI). Содержимое стаканчиков перемешивают взбалтыванием и подкисляют 2 мл 3% уксусной кислоты. Выделившийся иод оттитровывают тиосульфатом натрия (Na2S2O3), используя в качестве индикатора 2 капли 1% раствора крахмала; титруют до исчезновения синей краски.
Чтобы предотвратить образование железосинеродистого калия из железистосинеродистого калия, последний выводится из сферы реакции с помощью сернокислого цинка. Добавление сернокислого цинка приводит к образованию нерастворимой комплексной соли.
Количество сахара в крови вычисляют по данным титрования с помощью эмпирически составленной авторами метода таблицы.
Ввиду того, что ряд соединений неуглеводного характера (мочевая кислота, глютатион и др.) обладают наряду с глюкозой способностью восстанавливать ионы тяжелых и переходных металлов, результаты анализа оказываются завышенными. Ошибка может достигать 10-20%.
Четырехэтапное определение глюкозы с предварительным осаждением белков крови и приготовлением достаточно большого количества титрованных растворов требуют от аналитика значительных затрат времени на подготовку и проведение анализа.
Авторы предлагают быстрый и доступный метод определения глюкозы в ротовой жидкости, имеющий определенные преимущества по сравнению с описанными выше классическими методами.
При значительном сокращении времени проведения анализа для его осуществления не требуется каких-либо редких реактивов и специальных приборов. Анализ выполняют следующим образом:
оборудование и реактивы: водяная баня, лабораторный термометр на 100°С, 2N раствор КОН, 0,1% р-р метиленового синего, градуированные термостойкие пробирки (по числу проб ротовой жидкости), неградуированные пипетки - 2 шт., дистиллированная вода.
Ход определения:
в пробирку набирают 1 мл свежеотобранной ротовой жидкости, добавляют 1 мл дистиллированной воды, 2 капли 2N раствор КОН и 3 капли 0,1%-ного р-ра метиленового синего. Перемешивают встряхиванием и нагревают на водяной бане до ~80°С (±2°С).
При содержании глюкозы в анализируемом образце>0,12% наблюдается полное исчезновение синей окраски индикатора. При меньшем содержании глюкозы окраска сохраняется.
Заявленным способом было протестировано 50 образцов ротовой жидкости (смешанной слюны), взятых у пациентов стоматологической поликлиники с жалобами на состояние пародонта. Ротовая жидкость собиралась натощак после тщательного прополаскивания ротовой полости дистиллированной водой. Содержание глюкозы, превышающее 0,12%, было обнаружено в смешанной слюне шести пациентов, у которых в дальнейшем при обследовании были обнаружены нарушения функции поджелудочной железы.
Клинический пример №1
Амбулаторная карта №76278. Пациентка Н., 56 лет, обратилась в стоматологическую поликлинику в сентябре 2006 г. с жалобами на состояние пародонта. В образце ротовой жидкости предложенными авторами способом обнаружено повышенное содержание глюкозы (>0,12%).
При дальнейшем обследовании у эндокринолога и в крови пациента было обнаружено содержание сахара, превышающее норму.
Клинический пример №2
Амбулаторная карта №69179. Пациент Т., 47 лет, обратился в стоматологическую поликлинику в сентябре 2006 г. с жалобами на состояние пародонта. Предложенным авторами способом в образце ротовой жидкости не обнаружено превышения содержания глюкозы. Анализ крови, выполненный параллельно с анализом ротовой жидкости, также показал содержание глюкозы в пределах нормы.

Claims (1)

  1. Способ определения глюкозы в ротовой жидкости, включающий определение содержания глюкозы в биологической жидкости, отличающийся тем, что к 1 мл свежеотобранной ротовой жидкости добавляют 1 мл дистиллированной воды, 2 капли 2 N раствора КОН и 3 капли 0,1%-ного раствора метиленового синего, перемешивают содержимое встряхиванием и нагревают на водяной бане до 80°С (±2°С) и при сохранении синей окраски индикатора говорят о нормальном содержании глюкозы в ротовой жидкости - менее 0,12%, а при полном исчезновении синей окраски индикатора делают выводы о превышении нормального значения содержания глюкозы в ротовой жидкости.
RU2006141466/15A 2006-11-23 2006-11-23 Способ определения глюкозы в ротовой жидкости RU2314528C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006141466/15A RU2314528C1 (ru) 2006-11-23 2006-11-23 Способ определения глюкозы в ротовой жидкости

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006141466/15A RU2314528C1 (ru) 2006-11-23 2006-11-23 Способ определения глюкозы в ротовой жидкости

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2314528C1 true RU2314528C1 (ru) 2008-01-10

Family

ID=39020248

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006141466/15A RU2314528C1 (ru) 2006-11-23 2006-11-23 Способ определения глюкозы в ротовой жидкости

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2314528C1 (ru)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU940020A1 (ru) * 1980-07-04 1982-06-30 Ордена Ленина Институт Химической Физики Ан Ссср Способ определени глюкозы
SU992570A1 (ru) * 1981-02-02 1983-01-30 Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича Способ определени глюкозы в растворах
SU1124228A1 (ru) * 1983-01-10 1984-11-15 Белорусский научно-исследовательский институт охраны материнства и детства Способ определени глюкозы в биологических жидкост х
US20010023324A1 (en) * 1997-11-03 2001-09-20 Allan Pronovost Glucose detector and method for diagnosing diabetes
RU2205404C2 (ru) * 2000-11-28 2003-05-27 Федоров Эдуард Левонович Способ количественного определения глюкозы в биологических и водных растворах
US20050196747A1 (en) * 2004-03-05 2005-09-08 Matthias Stiene Analyte test system for determining the concentration of an analyte in a physiological or aqueous fluid

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU940020A1 (ru) * 1980-07-04 1982-06-30 Ордена Ленина Институт Химической Физики Ан Ссср Способ определени глюкозы
SU992570A1 (ru) * 1981-02-02 1983-01-30 Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича Способ определени глюкозы в растворах
SU1124228A1 (ru) * 1983-01-10 1984-11-15 Белорусский научно-исследовательский институт охраны материнства и детства Способ определени глюкозы в биологических жидкост х
US20010023324A1 (en) * 1997-11-03 2001-09-20 Allan Pronovost Glucose detector and method for diagnosing diabetes
RU2205404C2 (ru) * 2000-11-28 2003-05-27 Федоров Эдуард Левонович Способ количественного определения глюкозы в биологических и водных растворах
US20050196747A1 (en) * 2004-03-05 2005-09-08 Matthias Stiene Analyte test system for determining the concentration of an analyte in a physiological or aqueous fluid

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии / Под ред. проф. Т.Т.Березова. - М.: Медицина, 1976, с.138. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Alamdari et al. A novel assay for the evaluation of the prooxidant–antioxidant balance, before and after antioxidant vitamin administration in type II diabetes patients
JP3698696B2 (ja) 生体試料調製方法、生体試料定量方法及び生体試料保存容器
Connor et al. The determination of the blood iodine: a useful method for the clinical laboratory
CN108152519B (zh) 用于离心式微流控芯片质量控制的血浆质控品的制备方法
EP1320751A2 (en) Method and kit for the transderaml determination of analyte concentration in blood
CN104880423A (zh) 一种人体血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性定量测定方法、试剂及试剂盒
Dima Point of care testing (POCT) present and future
RU2176790C1 (ru) Способ дифференциальной диагностики обменных нарушений
RU2314528C1 (ru) Способ определения глюкозы в ротовой жидкости
US20040029205A1 (en) Diagnostic system for differentiating sputum from saliva
KR20050024512A (ko) 말론디알데히드 검출 약제, 그것의 제조 방법 및 그것의이용을 위한 시험 키트
CN106841079B (zh) 一种测定富含还原糖的蛋白样品中蛋白质含量的方法
RU2339948C1 (ru) Способ определения суммарного количества альдоз в смешанной слюне
US3792044A (en) Method for determining glucose with o-toluidine reagent containing an arsenic compound
Whitsel et al. Renal function
Cunningham Physiological jaundice
RU2144671C1 (ru) Способ определения уровня йодного дефицита у населения
RU2244307C2 (ru) Способ определения концентрации серотонина и гистамина в биологической жидкости
CN104020165B (zh) 一种测量尿液中含铅量的试剂及其快速检测方法
CN118501431B (zh) 一种基于g4链体和血红素催化活性的上消化道出血检测试剂盒
Claycomb et al. A simple, rapid method for quantitative determination of salivary amylase
WO2024220055A1 (en) Biosensors and methods for the determination of the monkeypox and chickenpox viruses belonging to the genus orthopoxvirus
RU1770909C (ru) Способ определени глюкозы в крови
CN209264736U (zh) 便携式试纸棒
Aguiar Design and Development of a Microfluific Paper-Based Analytical Device (μPAD) for Magnesium Determination in Saliva

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20091124