RU2306950C2 - Complex autological vaccine against hiv infection and aids - Google Patents
Complex autological vaccine against hiv infection and aids Download PDFInfo
- Publication number
- RU2306950C2 RU2306950C2 RU2005130373/13A RU2005130373A RU2306950C2 RU 2306950 C2 RU2306950 C2 RU 2306950C2 RU 2005130373/13 A RU2005130373/13 A RU 2005130373/13A RU 2005130373 A RU2005130373 A RU 2005130373A RU 2306950 C2 RU2306950 C2 RU 2306950C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hiv
- matrix
- peptide
- vaccine
- complex
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 19
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 48
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 102100037593 Retinal rod rhodopsin-sensitive cGMP 3',5'-cyclic phosphodiesterase subunit delta Human genes 0.000 claims description 8
- 229940037642 autologous vaccine Drugs 0.000 claims description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 abstract description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 abstract description 5
- JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N norbornene Chemical compound C1[C@@H]2CC[C@H]1C=C2 JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N 0.000 abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 12
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 7
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 7
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 6
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 6
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 6
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 6
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 5
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 150000008064 anhydrides Chemical group 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- -1 chlorotrityl Chemical group 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Chemical group CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 229920005646 polycarboxylate Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N adamantane Chemical compound C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 2
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical class C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 2
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N methyl cyclopropanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC1 PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 150000003385 sodium Chemical class 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000587556 Homo sapiens Metallothionein-4 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000010630 human metallothionein-4 Human genes 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000000639 membranetropic effect Effects 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N methyl monoether Natural products COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, фармакологии, иммунологии и может быть использовано для профилактики и лечения ВИЧ-инфекции и СПИД, а также в исследовательской работе для конструирования новых комплексных препаратов, изучения многоточечного воздействия лекарственного средства на иммунокомпетентные клетки, формирование эффективного иммунного ответа в макроорганизме и его протективных особенностей.The invention relates to medicine, pharmacology, immunology and can be used for the prevention and treatment of HIV infection and AIDS, as well as in research work for the construction of new complex drugs, the study of the multipoint effect of a drug on immunocompetent cells, the formation of an effective immune response in a macroorganism and its protective features.
Известен целый ряд профилактических антиВИЧ вакцин, сконструированных на основе основных антигенных детерминант структурных белков ВИЧ-1/2, получаемых генно-инженерным способом в бактериях продуцентах (патент РФ №2194075, МПК С12N 15/51, опубл. 10.12.2002; патент РФ №2223784, МПК А61К 39/385, опубл. 20.02.2004). Известны также вакцинные препараты, изготовленные на основе синтетических пептидов, имитирующих некоторые иммуногенные эпитопы ключевых протективных антигенов ВИЧ-1/2 (Патент РФ №2179980, МПК С07К 7/00, опубл. 27.02.2002).A number of prophylactic anti-HIV vaccines are known that are designed on the basis of the main antigenic determinants of the structural proteins of HIV-1/2, obtained by genetic engineering in bacteria producing (RF patent No. 2194075, IPC C12N 15/51, publ. 10.12.2002; RF patent No. 2223784, IPC A61K 39/385, publ. 02.20.2004). Vaccine preparations made on the basis of synthetic peptides that mimic some immunogenic epitopes of key protective antigens HIV-1/2 are also known (RF Patent No. 2179980, IPC С07К 7/00, published on February 27, 2002).
Однако ни одна из выше описанных вакцин против ВИЧ/СПИД не имеет терапевтического действия и не обладает протективным эффектом против различных субтипов ВИЧ-1/2, а оказывает лишь профилактическое действие на ограниченное количество штаммов ВИЧ в пределах одного субтипа. Учитывая высокий потенциал мутационной изменчивости ВИЧ-1/2, появление "нового" варианта, устойчивого к вакцине штамма вируса, может возникать в течение первых трех месяцев после ее применения. Также вышеуказанные вакцины против ВИЧ/СПИД пригодны лишь для профилактического использования и не могут оказывать лечебный эффект на уже зараженных ВИЧ индивидуумах, что резко снижает их потенциальные возможности. Кроме того, ни одна из предложенных антиВИЧ вакцин не оказывает химиотерапевтического действия на течение ВИЧ-инфекции (тем более на резистентные к азидотимидину штаммы) и не обладает эффектом подавления репродукции вируса иммунодефицита в пермиссивных клетках и ингибирования экспрессии специфических белков ВИЧ-1/2 в случае инфицированности пациента.However, none of the above HIV / AIDS vaccines has a therapeutic effect and does not have a protective effect against various HIV-1/2 subtypes, but only has a preventive effect on a limited number of HIV strains within a single subtype. Given the high potential for mutational variability of HIV-1/2, the emergence of a “new” variant resistant to the vaccine of a strain of the virus may occur during the first three months after its use. Also, the above HIV / AIDS vaccines are suitable only for prophylactic use and cannot have a therapeutic effect on individuals already infected with HIV, which dramatically reduces their potential. In addition, none of the proposed anti-HIV vaccines has a chemotherapeutic effect on the course of HIV infection (especially on azidothymidine-resistant strains) and has the effect of suppressing the reproduction of the immunodeficiency virus in permissive cells and inhibiting the expression of specific HIV-1/2 proteins in the case of infection of the patient.
Известен комплекс антиВИЧ соединений, включающий в свой состав полианионную матрицу и химически с ней связанный синтетический фармакофор модификатор, например Норборнен (Kolocouris N., Foscolos G.B., Kolocouris A. et al. - Synthesis and antiviral activity evaluation of some new aminoadamantane derivatives. J Med Chem 1994; 37: 2896-2902; Сербин А.В., Стойкая Л.Л., Кренцель Б.А. и др. Сополимеры на основе фурана и малеинового ангидрида и перспективы их использования в медицине. Сб. Полимеры медицинского назначения. М.: ИНХС 1988; 127-152; Тимофеев Д.И., Перминова Н.Г., Сербии А.В. и др. Мембранотропные соединения и препараты, воздействующие на ранние стадии ВИЧ-инфекции. Антибиотики и химиотерапия 2003; 48: 2: 29-41).A complex of anti-HIV compounds is known that includes a polyanionic matrix and a chemically bonded synthetic pharmacophore modifier, for example, Norbornen (Kolocouris N., Foscolos GB, Kolocouris A. et al. - Synthesis and antiviral activity evaluation of some new aminoadamantane derivatives. J Med Chem 1994; 37: 2896-2902; Serbin A.V., Stoykaya L.L., Krenzel B.A. et al. Copolymers based on furan and maleic anhydride and prospects for their use in medicine. Sat Medical polymers. M .: INHS 1988; 127-152; Timofeev D.I., Perminova N.G., Serbia A.V. et al. Membranotropic compounds and preparations, in acting on the early stage of HIV infection Antibiotics and Chemotherapy 2003; 48:. 2: 29-41).
Известно другое комплексное анти-ВИЧ соединение, включающее в свой состав полианионную матрицу и химически с ней связанный псевдолиганд для gp120 ВИЧ-1/2. Псевдолиганд для gp120 ВИЧ-1/2 представляет собой синтетический фармакофор модификатор, например Адамантан (Патент США №5880154, МПК C08F 22/06, опубл. 09.03.1999).Another complex anti-HIV compound is known, comprising a polyanionic matrix and chemically bonded pseudoligand for gp120 HIV-1/2. The pseudo-ligand for gp120 HIV-1/2 is a synthetic pharmacophore modifier, for example Adamantan (US Patent No. 5880154, IPC C08F 22/06, published 09.03.1999).
Однако данные высокомолекулярные соединения оказывают только противовирусное действие и являются антиВИЧ соединениями, которые не обеспечивают стимуляции клеток киллеров, модуляции В-, Т- клеточного звеньев иммунитета и не оказывают стимулирующего действия на выработку антител, обладающих нейтрализующими свойствами в отношении вируса иммунодефицита человека.However, these high molecular weight compounds have only antiviral effects and are anti-HIV compounds that do not stimulate killer cells, modulate B-, T-cell immunity and do not stimulate the production of antibodies that have neutralizing properties against the human immunodeficiency virus.
Наиболее близким аналогом (прототипом) является другое комплексное соединение, включающее в свой состав полимерную матрицу, выполненную в виде наночастиц, на поверхности которых нанесены путем пассивной адсорбции пептиды, представляющие собой моноклональные антиСD4-антитела (Международная заявка (WO) 94/24168, МПК С07К 17/08, опубл. 27.10.1994). Указанное комплексное соединение может быть использовано для производства лекарственного средства с целью профилактики/лечения патологических состояний, связанных с ВИЧ-инфекцией.The closest analogue (prototype) is another complex compound comprising a polymer matrix made in the form of nanoparticles, on the surface of which peptides are applied by passive adsorption, which are monoclonal anti-CD4 antibodies (International Application (WO) 94/24168, IPC С07К 17/08, publ. 10/27/1994). The specified complex compound can be used for the manufacture of a medicinal product for the prevention / treatment of pathological conditions associated with HIV infection.
Однако оно не может оказывать иммуномодулирующее воздействие на специфическое и неспецифическое звено иммунитета, вызывать протективный клеточный и/или гуморальный иммунный ответ и стимулировать образование нейтрализующих (защитных) антиВИЧ антител. Кроме того, недостатком вышеуказанных соединений-аналогов, в том числе и прототипа, является наличие только антиВИЧ активности и относительно узкий спектр потенциальных мишеней в многоэтапном процессе взаимодействия вируса ВИЧ-1/2 - чувствительная клетка. Взаимодействие препарата может происходить помимо целевых агентов с биологически важными соединениями и структурами, не задействованными в развитии ВИЧ инфекции и СПИДа. Кроме того, эти соединения за счет неспецифического связывания фармакофора с биологически активными веществами могут приводить к их инактивации и развитию за счет этого токсических проявлений. Таким образом, данные химические соединения не могут полноценно блокировать ВИЧ инфекцию в организме человека.However, it cannot have an immunomodulatory effect on a specific and nonspecific immunity, cause a protective cellular and / or humoral immune response and stimulate the formation of neutralizing (protective) anti-HIV antibodies. In addition, the disadvantage of the above analog compounds, including the prototype, is the presence of only anti-HIV activity and a relatively narrow range of potential targets in the multi-stage process of interaction of the HIV-1/2 virus - a sensitive cell. The interaction of the drug can occur in addition to the target agents with biologically important compounds and structures that are not involved in the development of HIV infection and AIDS. In addition, these compounds due to nonspecific binding of the pharmacophore to biologically active substances can lead to their inactivation and development due to this toxic manifestations. Thus, these chemical compounds cannot fully block HIV infection in the human body.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание более эффективных и менее токсичных комплексных биохимических соединений, обладающих свойствами аутологичной терапевтической вакцины, индуцирующих образование специфического гуморального ответа со стимуляцией клеточного иммунитета и обеспечивающих адресную доставку комплексного препарата к месту репродукции ВИЧ-1/2 с подавлением специфической вирусной инфекции как на начальных ее этапах, так и в процессе ее развития, а также обеспечивающих стимуляцию продукции цитокинов лимфоидными клетками, их активацию (включая Т-хелперы, специфические цитотоксические лимфоциты и клетки-киллеры), и образование специфических антиВИЧ нейтрализующих антител.The technical result of the invention is the creation of more effective and less toxic complex biochemical compounds with the properties of an autologous therapeutic vaccine, inducing the formation of a specific humoral response with stimulation of cellular immunity and providing targeted delivery of the complex drug to the site of HIV-1/2 reproduction with the suppression of specific viral infection as at its initial stages, and in the process of its development, as well as providing stimulation of products itokinov lymphoid cells, their activation (including T-helper cells, specific cytotoxic lymphocytes, and killer cells) and the production of specific anti-HIV neutralizing antibodies.
Указанный технический результат достигается тем, что в комплексной аутологичной вакцине против ВИЧ-инфекции и СПИД, включающей полимерную матрицу и химически с ней связанный пептид, согласно изобретения, она дополнительно содержит фармакофор Норборнен, химически связанный с полимерной матрицей, в качестве полимерной матрицы вакцина содержит полианионную матрицу, в качестве пептида - пептид-имитатор химерного домена, представляющий собой пептидный фрагмент структурного белка р17/18/5 5 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4, а полианионная матрица и химически связанные с ней фармакофор Норборнен и пептидный фрагмент имеют следующую формулу:The specified technical result is achieved by the fact that in a complex autologous vaccine against HIV infection and AIDS, including a polymer matrix and a chemically linked peptide, according to the invention, it further comprises a pharmacophore Norbornen chemically associated with a polymer matrix, as a polymer matrix, the vaccine contains polyanionic a matrix, as a peptide - a peptide-simulator of a chimeric domain, which is a peptide fragment of the structural protein p17 / 18/5 5 HIV-1/2 with a cellular receptor CD4, and the polyanionic matrix TSA and the pharmacophore Norbornen chemically associated with it and the peptide fragment have the following formula:
Причем пептидный фрагмент химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4 имеет следующую формулу аминокислотной последовательности:Moreover, the peptide fragment of the chimeric domain of the structural protein p17 / 18/55 HIV-1/2 with the cellular receptor CD4 has the following amino acid sequence formula:
KEAKDTKEALDKIEEEQNEQELLELDKWASLWNKEAKDTKEALDKIEEEQNEQELLELDKWASLWN
Пептид-имитатор химерного домена можно получить как путем химического органического синтеза, так и путем химического и биохимического синтеза фрагмента кодирующей последовательности гена с последующим клонированном в составе векторной плазмиды и продукции в клетках про- и эукариот.A peptide that imitates a chimeric domain can be obtained both by chemical organic synthesis and by chemical and biochemical synthesis of a fragment of a gene coding sequence, followed by cloning of a vector plasmid and production of pro- and eukaryotes in cells.
Таким образом, для получения заявляемой аутологичной вакцины выбирают и синтезируют адресные антиВИЧ соединения на основе пептида-имитатора химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4, которые химически связаны с полианионной матрицей в комплексный препарат, обеспечивающий высокий уровень защиты ВИЧ-инфицированных клеток.Thus, to obtain the claimed autologous vaccine, targeted anti-HIV compounds are selected and synthesized based on a peptide-simulator of the chimeric domain of the structural protein p17 / 18/55 HIV-1/2 with the cellular receptor CD4, which are chemically linked to the polyanionic matrix in a complex preparation that provides high level of protection for HIV-infected cells.
Пептиды-имитаторы химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4 с заявляемой аминокислотной последовательностью KEAKDTKEALDKIEEEQNEQELLELDKWASLWN играют ключевую роль при индукции специфического ответа цитотоксических клеток и образовании нейтрализующих антител, которые способны оказывать ингибирующее действие на инфекцию ВИЧ-1/2.HIV-1/2 structural protein p17 / 18/55 chimeric domain peptides with a CD4 cell receptor with the claimed amino acid sequence KEAKDTKEALDKIEEEQNEQELLELDKWASLWN play a key role in the induction of a specific cytotoxic cell response and the formation of neutralizing antibodies that can inhibit HIV infection 1 / 2.
Существенными отличительными признаками изобретения являются:Salient features of the invention are:
- дизайн и синтез фрагментов оригинальных пептидов-имитаторов химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4;- design and synthesis of fragments of original peptides imitators of the chimeric domain of the structural protein p17 / 18/55 HIV-1/2 with the cellular receptor CD4;
использование в препарате полианионной матрицы молекулярной массой 23КД с целью повышения заряда и гидрофильности комплексного соединения.the use in the preparation of a polyanionic matrix with a molecular weight of 23 KD in order to increase the charge and hydrophilicity of the complex compound.
- объединение в единый макромолекулярный комплекс пептидов-имитаторов химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 и V1 клеточного рецептора CD4 и полианионной матрицы.- combining into a single macromolecular complex mimetic peptides of the chimeric domain of the structural protein p17 / 18/55 HIV-1/2 and V1 of the cellular receptor CD4 and polyanionic matrix.
объединение в единый макромолекулярный комплекс фармакофора Норборнена и полианионной матрицы.Association in a single macromolecular complex of the Norbornen pharmacophore and the polyanionic matrix.
Данный комплекс химической и пространственной структуры макромолекулярного соединения неизвестен из доступных источников информации, что подтверждает соответствие технического решения критерию изобретатаельский уровень.This complex of the chemical and spatial structure of the macromolecular compound is unknown from available sources of information, which confirms the compliance of the technical solution with the inventive step criterion.
Пример 1. Синтез пептидных фрагментовExample 1. The synthesis of peptide fragments
Синтез пептид-имитаторов химерного домена структурного белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с клеточным рецептором CD4 и полианионной матрицы осуществляют твердофазным методом на колонке с хлортритильным полимером с использованием щелочелабильной 2-(4-нитрофенилсульфонил) этоксикарбонильной (Nsc) группы для временной защиты N-конца (более подробно в: патент РФ №2079491, МПК С07С 317/48, опубл. 20.05.1997). Твердофазный синтез широко применяется для получения биологически активных пептидов, используемых в медицине, ветеринарии, биотехнологии и научных исследованиях. Сущность твердофазного синтеза пептидов состоит в ступенчатом наращивании пептидной цепи посредством повторяющихся циклов химических реакций, начиная с С-концевой аминокислоты, закрепленной на нерастворимом носителе. При этом целевые продукты всех реакций в процессе синтеза остаются связанными с носителем, а избыточные реагенты и побочные продукты удаляются фильтрованием и промыванием носителя.The synthesis of peptide mimetics of the chimeric domain of the p17 / 18/55 HIV-1/2 structural protein with the CD4 cell receptor and polyanionic matrix is carried out by the solid phase method on a column of a chlorotrityl polymer using an alkali labile 2- (4-nitrophenylsulfonyl) ethoxycarbonyl (Nsc) group for a temporary protection of the N-end (in more detail in: RF patent No. 2079491, IPC С07С 317/48, publ. 05/20/1997). Solid-phase synthesis is widely used to obtain biologically active peptides used in medicine, veterinary medicine, biotechnology and scientific research. The essence of solid-phase synthesis of peptides consists in the stepwise growth of the peptide chain through repeated cycles of chemical reactions, starting with the C-terminal amino acid attached to an insoluble carrier. In this case, the target products of all reactions in the synthesis process remain bound to the carrier, and excess reagents and by-products are removed by filtration and washing of the carrier.
Для проведения твердофазного синтеза пептида С-концевую аминокислоту целевой аминокислотной последовательности, защищенную по α-аминогруппе, через α-карбоксильную группу ковалентно связывают с нерастворимым полимерным носителем путем образования амидной или эфирной связи. Затем с полученного N α-защищенного аминоацил-полимера отщепляют N α-защитную группу и получают аминоацил-полимер со свободной α-аминогруппой. Далее этот полимер ацилируют следующей аминокислотой, защищенной по α-аминогруппе, и получают N α-защищенный дипептидил-полимер. Синтетические циклы, состоящие из стадий отщепления N α-защитной группы и ацилирования свободной аминогруппы пептидил-полимера последующей аминокислотой, защищенной по α-аминогруппе, повторяют до тех пор, пока не будет собрана полная аминокислотная последовательность целевого пептида.To conduct solid-phase synthesis of the peptide, the C-terminal amino acid of the target amino acid sequence protected by the α-amino group is covalently linked to the insoluble polymer carrier via the α-carboxyl group by formation of an amide or ether bond. Then, from the obtained N α-protected aminoacyl polymer, the N α-protective group is cleaved to obtain an aminoacyl polymer with a free α-amino group. Next, this polymer is acylated with the following amino acid protected at the α-amino group, and an N α-protected dipeptidyl polymer is obtained. Synthetic cycles consisting of the steps of cleaving the N α-protecting group and acylating the free amino group of the peptidyl polymer with the next amino acid protected by the α-amino group are repeated until the complete amino acid sequence of the target peptide has been assembled.
Так как в процессе твердофазного синтеза применяются большие молярные избытки ацилирующих реагентов (2-10-кратные по отношению к свободным аминогруппам), все реакционноспособные группы в боковых радикалах аминокислот, в частности амино-, карбокси-, гидрокси-, меркапто-, гуанидино-группы, должны быть блокированы защитными группами. Защитные группы для этой цели подбирают таким образом, чтобы, с одной стороны, обеспечить полную и постоянную защиту боковых радикалов аминокислот в условиях реакций ацилирования пептидил-полимера и отщепления временной N-α защитной группы и, с другой стороны, иметь возможность количественно и без повреждения структуры синтезированного пептида отщепить эти защитные группы в одну или две стадии.Since in the process of solid phase synthesis large molar excesses of acylating reagents (2-10-fold with respect to free amino groups) are used, all reactive groups in the side radicals of amino acids, in particular amino, carboxy, hydroxy, mercapto, guanidino groups must be blocked by protective groups. The protective groups for this purpose are selected in such a way as to ensure, on the one hand, full and constant protection of the side radicals of amino acids under the conditions of acylation of the peptidyl polymer and cleavage of the temporary N-α protective group and, on the other hand, be able to quantitatively and without damage structures of the synthesized peptide to cleave these protective groups in one or two stages.
Очистку синтезированных пептидов осуществляют препаративной ВЭЖХ (Altex, USA) на колонке 10×250 мм с фазой SynChropak RPP 100, 10 мкм (Eichrom Ind., USA) при скорости потока 4 мл/мин в линейном градиенте элюэнтов от А до В за 2 ч (элюэнт А - 0.1% ТФУ в воде; элюэнт В - 0.1% ТФУ в 60% растворе ацетонитрила). На выходе получали пептиды с 90-98% чистоты по данным аналитической ВЭЖХ. С N-концевого фрагмента пептида вводят аминокислоту лизин, имеющую стерически доступную для химической модификации аминогруппу с целью осуществления последующего химического связывания пептидов с поликарбоксилатной матрицей.The synthesized peptides were purified by preparative HPLC (Altex, USA) on a 10 × 250 mm column with a SynChropak RPP 100, 10 μm phase (Eichrom Ind., USA) at a flow rate of 4 ml / min in a linear gradient of eluents from A to B in 2 h (Eluent A — 0.1% TFA in water; Eluent B — 0.1% TFA in 60% acetonitrile solution). At the output, peptides with 90-98% purity were obtained according to analytical HPLC. An amino acid lysine is introduced from the N-terminal fragment of the peptide, which has an amino group sterically accessible for chemical modification with the aim of subsequent chemical binding of the peptides to the polycarboxylate matrix.
Пример 2. Получение полимерной матрицы и аутологичной ВИЧ/СПИД вакциныExample 2. Obtaining a polymer matrix and an autologous HIV / AIDS vaccine
Этап 1. Для получения вакцины берут поликарбоксилатную матрицу следующей формулы:Stage 1. To obtain the vaccine take the polycarboxylate matrix of the following formula:
сокращенная формула:abbreviated formula:
Для модификации матрицы используют ее ангидридную форму, реакционно активную в отношении синтетических пептидов. Суммарную степень модификации матрицы ограничивали пределом не более 20% для сохранения необходимого количества немодифицированных карбоксильных групп матрицы, ответственных за обеспечение отрицательного заряда и ее специфических адъювантных свойств.To modify the matrix, its anhydride form is used, which is reactive with respect to synthetic peptides. The total degree of matrix modification was limited to no more than 20% to maintain the required number of unmodified carboxyl groups of the matrix, which are responsible for providing a negative charge and its specific adjuvant properties.
Ниже приведена схема трехстадийного синтеза поликарбоксилатной матрицы из малеинового ангидрида (более подробное описание синтеза в: Патент США №5880154, А. МПК C08F 22/06, опубл. 09.03.1999), а также схема ковалентного присоединения пептидного фрагментаBelow is a diagram of the three-stage synthesis of a polycarboxylate matrix from maleic anhydride (for a more detailed description of the synthesis see: US Patent No. 5880154, A. IPC C08F 22/06, published 09.03.1999), as well as a scheme for covalent attachment of a peptide fragment
Указанные карбоксильные группы получали после предварительных стадий модификации пептидными фармакофорами по вышеприведенной схеме путем исчерпывающего гидролиза оставшихся немодифицированными ангидридных циклов матрицы. Продукты гидролиза очищали от остатков органических растворителей и непрореагировавших реагентов методом ультрафильтрации водных растворов с применением мембраны проницаемостью 3KD. Конечные продукты в форме натриевой полусоли выделяли лиофильной сушкой.These carboxyl groups were obtained after preliminary steps of modification with peptide pharmacophores according to the above scheme by exhaustive hydrolysis of the remaining unmodified anhydride matrix cycles. The hydrolysis products were purified from residues of organic solvents and unreacted reagents by ultrafiltration of aqueous solutions using a 3KD membrane permeability. The final products in the form of a sodium hemisphere were isolated by freeze drying.
Этап 2. Далее приведена процедура (схема 1) синтеза аутологичной вакцины (химических конъюгатов аминопроизводных норборнена и реакционно активной ангидридной формой полианионной матрицы с конъюгированным пептидом-имитатором.Step 2. The following is the procedure (Scheme 1) for the synthesis of an autologous vaccine (chemical conjugates of amino derivatives of norbornene and a reactive anhydride form of a polyanionic matrix with a conjugated mimic peptide.
Суммарную степень модификации матрицы ограничивали пределом не более 20% для сохранения необходимого количества немодифицированных карбоксильных групп матрицы, ответственных за обеспечение отрицательного заряда и ее специфических адъювантных свойств. Указанные карбоксильные группы получали после предварительных стадий модификации пептидными и химическим фармакофором норборненом путем исчерпывающего гидролиза оставшихся немодифицированными ангидридных циклов матрицы. Продукты гидролиза очищали от остатков органических растворителей и непрореагировавших реагентов методом ультрафильтрации водных растворов с применением мембраны проницаемостью 3KD. Конечные продукты в форме натриевой полусоли выделяли лиофильной сушкой.The total degree of matrix modification was limited to no more than 20% to maintain the required number of unmodified carboxyl groups of the matrix, which are responsible for providing a negative charge and its specific adjuvant properties. These carboxyl groups were obtained after preliminary stages of modification with peptide and chemical pharmacophore norbornene by exhaustive hydrolysis of the remaining unmodified anhydride matrix cycles. The hydrolysis products were purified from residues of organic solvents and unreacted reagents by ultrafiltration of aqueous solutions using a 3KD membrane permeability. The final products in the form of a sodium hemisphere were isolated by freeze drying.
Пример 3. Исследование анти-ВИЧ активности заявляемой аутологичной ВИЧ/СПИД вакциныExample 3. The study of anti-HIV activity of the claimed autologous HIV / AIDS vaccine
Препараты. Для исследований были использованы препараты, синтезированные методами органического и полимерного синтеза. При подготовке к биологическим испытаниям препараты подвергали тщательной очистке от возможных низкомолекулярных примесей методом селективной ультрафильтрации: четырьмя циклами десятикратной промывки-концентрирования на ультрафильтрационных мембранах фирмы Sigma (США) проницаемостью до 1 или 3 KD (NMLW: 1,000 и 3,000 соответственно). Очищенные полимер-ассоциированные субстанции выделяли лиофильной сушкой в форме белых высокопористых порошков, растворимых в воде, диметилсульфоксиде и спирте.Preparations. For studies, preparations were synthesized by organic and polymer synthesis. In preparation for biological tests, the preparations were thoroughly cleaned of possible low molecular weight impurities by the method of selective ultrafiltration: four cycles of tenfold washing-concentration on ultrafiltration membranes from Sigma (USA) with a permeability of up to 1 or 3 KD (NMLW: 1,000 and 3,000, respectively). Purified polymer-associated substances were isolated by freeze drying in the form of white highly porous powders soluble in water, dimethyl sulfoxide and alcohol.
Вирус. Для оценки эффективности антиВИЧ соединений в работе использовали макрофаготропный штамм ВИЧ-1EVK (ГКВ 4005), макрофаго-Т-лимфоцитотропный R4 синцитийобразующий штамм ВИЧ-1Z.Virus. To evaluate the effectiveness of anti-HIV compounds, the macrophagotropic strain HIV-1 EVK (STB 4005) and the macrophage-T-lymphocytotropic R4 syncytium-forming HIV-1 Z strain were used.
Клеточные линии. Высокочувствительная к инфекции ВИЧ-1/2 перевиваемая культура лимфобластоидных клеток человека МТ-4 и ФГА-стимулированные мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК). Лимфобластоидные МТ-4 клетки культивировали в полной ростовой питательной среде RPMI-1640, содержащей 0,06% L-глутамина, 10% сыворотки эмбрионов коров, линкомицина (60 ед./мл) и гентамицина (100 мкг/мл) при температуре 37°С, 5% CO2 в течение 4 суток. Посевная концентрация клеток составляла 0,5×10 кл/мл. На 4 сутки культивирования учитывали количество клеток, разводили ростовой средой до посевной концентрации и культивировали вновь.Cell lines. Highly sensitive to HIV-1/2 infection, transplantable culture of human lymphoblastoid cells MT-4 and PHA-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMC). Lymphoblastoid MT-4 cells were cultured in RPMI-1640 complete growth medium containing 0.06% L-glutamine, 10% serum of cow embryos, lincomycin (60 units / ml) and gentamicin (100 μg / ml) at 37 ° C C, 5% CO 2 for 4 days. The inoculum cell concentration was 0.5 × 10 cells / ml. On the 4th day of cultivation, the number of cells was taken into account, diluted with growth medium to a seed concentration and cultured again.
ФГА-стимулированные мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) человека. МКПК выделяли из венозной крови здорового донора по методике, описанной Fotino с соавт. (Kolocouris N., Foscolos G.B., Kolocouris A. et al. - Synthesis and antiviral activity evaluation of some new aminoadamantane derivatives. J Med Chem 1994; 37: 2896-2902). Культивирование первичных лимфоцитов осуществляли в среде RPMI-1640 с добавлением 10% сыворотки эмбрионов коров, 4 мкг/мл ФГА, 5 ед./мл ИЛ-2, 60 ед./мл линкомицина и 100 мкг/мл гентамицина в 50 мм3 пластиковых матрасах при 37°С с 5% СО2 в атмосфере. После 4 дней инкубации культуры в данных условиях производили замену питательной среды новой, аналогичной по составу, но уже не содержащую ФГА. Для этого клетки осаждали центрифугированием при 200g и разводили до посевной концентрации свежей питательной средой.PHA-stimulated human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). MCPC was isolated from the venous blood of a healthy donor according to the method described by Fotino et al. (Kolocouris N., Foscolos GB, Kolocouris A. et al. - Synthesis and antiviral activity evaluation of some new aminoadamantane derivatives. J Med Chem 1994; 37: 2896-2902). The primary lymphocytes were cultured in RPMI-1640 medium supplemented with 10% serum of cow embryos, 4 μg / ml PHA, 5 units / ml IL-2, 60 units / ml lincomycin and 100 μg / ml gentamicin in 50 mm 3 plastic mattresses at 37 ° C with 5% CO 2 in the atmosphere. After 4 days of incubation of the culture under these conditions, the nutrient medium was replaced with a new one, similar in composition, but no longer containing PHA. For this, the cells were besieged by centrifugation at 200 g and diluted to inoculum concentration with fresh nutrient medium.
Анализ токсичности изучаемых соединений проводили на перевиваемой лимфобластоидной линии клеток человека МТ-4 или ФГА-стимулированных мононуклеарных клетках периферической крови человека (МКПК). О токсичности синтезированных препаратов судили по жизнеспособности клеток в присутствии тестируемых соединений в широком диапазоне концентраций, индексу пролиферации и по морфологии роста культуры. Схема эксперимента аналогична той, что приведена ниже для оценки антиВИЧ активности соединений, но без инфицирования клеток вирусом.The toxicity analysis of the studied compounds was carried out on transplanted lymphoblastoid cell line of human MT-4 or PHA-stimulated mononuclear cells of human peripheral blood (PBMC). The toxicity of the synthesized preparations was judged by cell viability in the presence of test compounds in a wide range of concentrations, proliferation index, and culture growth morphology. The experimental design is similar to that given below to evaluate the anti-HIV activity of the compounds, but without infection of the cells with the virus.
Исследование антиВИЧ активности вакцинных препаратов и их компонентов проводили по следующей схеме: раствор препарата в концентрациях от 0,1 до 200 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) вносили в клеточную культуру (МТ-4, МКПК), одновременно вносили вирус и инкубировали в течение 4-х суток. Множественность заражения составляла 0.2-1 инфекционных единицы на клетку. Культуры пермиссивных клеток инкубировали в течение 4 суток при температуре 37°С во влажной атмосфере 5% CO2. В качестве контролей служили ВИЧ-инфицированные клетки без добавления вакцинных препаратов и неинфицированные клетки.The study of the anti-HIV activity of vaccine preparations and their components was carried out according to the following scheme: a solution of the drug in concentrations from 0.1 to 200 μg / ml (three wells per concentration) was introduced into cell culture (MT-4, MCPC), the virus was simultaneously introduced and incubated for 4 days. The multiplicity of infection was 0.2-1 infectious units per cell. Permissive cell cultures were incubated for 4 days at a temperature of 37 ° C in a humid atmosphere of 5% CO 2 . HIV-infected cells without the addition of vaccines and uninfected cells served as controls.
АнтиВИЧ активность оценивали после окончании инкубации по снижению жизнеспособности культуры и по подавлению продукции вирусспецифического белка р24 ВИЧ-1. Долю жизнеспособных клеток учитывали методом исключения трипановым синим (Sigma, USA) или методом, основанном на редукции красителя МТТ (ICN, USA) с накоплением формазана в живых клетках. Количество вирусспецифического белка р24 в культуральной среде оценивали с помощью иммуноферментного анализа (тест-система "ВектоВИЧ-1 р24-антиген", чувствительность 20×10-12 г/мл, производства ЗАО "Вектор-Бест", Россия). На основе экспериментальных данных строили дозозависимые кривые и вычисляли концентрации препаратов, на 50% (ЕС50) и на 90% (ЕС90) защищающие инфицированные клетки от гибели; а также определяли концентрации препарата, на 50% (IC50) и на 90% (IC90) снижающие накопление вирусспецифического белка р24.Anti-HIV activity was evaluated after incubation to reduce the viability of the culture and to suppress the production of virus-specific p24 HIV-1 protein. The proportion of viable cells was taken into account by trypan blue exclusion (Sigma, USA) or by the MTT dye reduction method (ICN, USA) with the accumulation of formazan in living cells. The amount of virus-specific p24 protein in the culture medium was assessed using enzyme-linked immunosorbent assay (VectoVICH-1 p24-antigen test system, sensitivity 20 × 10 -12 g / ml, manufactured by Vector-Best CJSC, Russia). Based on the experimental data, dose-dependent curves were constructed and drug concentrations were calculated that protect infected cells from death by 50% (EC 50 ) and 90% (EC 90 ); and also determined the concentration of the drug, 50% (IC 50 ) and 90% (IC 90 ) reducing the accumulation of virus-specific protein p24.
Для поиска ЕС50, ЕС90, IC50, IC90 строились графики зависимости доза-эффект, и по их линейным участкам вычислялись соответствующие концентрации и погрешности по формулам обратной регрессии (Н.Дрейпер, Г.Смит, "Прикладной регрессионный анализ", М.: Финансы и статистика, 1986). Для каждого значения концентрации было проведено одновременно три различных измерения, нормальность распределения проверялась по критерию R/s, равенство дисперсий по критерию Кочрена. Сопоставление эффективности препаратов проводилось путем сравнения эффектов. При этом учитывалась ошибка воспроизводимости, оцененная по трем независимым повторам измерений.To search for the EU 50 , EU 90 , IC 50 , IC 90, dose-response curves were constructed, and the corresponding concentrations and errors were calculated from their linear sections using the reverse regression formulas (N. Draper, G. Smith, “Applied Regression Analysis”, M .: Finance and Statistics, 1986). For each concentration value, three different measurements were carried out simultaneously, the normality of the distribution was checked by the R / s criterion, and the variance was equal by the Kochren criterion. Comparison of the effectiveness of the drugs was carried out by comparing the effects. In this case, the reproducibility error estimated from three independent measurements was taken into account.
Экспериментальные данные по антиВИЧ активности отдельных компонентов вакцинных препаратов на клетках МТ-4 со штаммом ВИЧ-1Z показали, что как пептидные фрагменты, так и полианионная матрица не оказывали существенного защитного действия на инфицированные ВИЧ-1 клетки. В то время как препарат аутологичной вакцины, в котором химерный пептид-имитатор ковалентно связан с матрицей, показал наибольшую антиВИЧ активность (как на штамме ВИЧ-1Z, так ВИЧ-1evk) среди сравниваемых соединений (полианионная матрица и смесь матрицы с химерным пептидом) во всем исследованном диапазоне концентраций.Experimental data on the anti-HIV activity of individual components of vaccine preparations on MT-4 cells with the HIV-1 Z strain showed that both the peptide fragments and the polyanion matrix did not have a significant protective effect on HIV-1 infected cells. While the autologous vaccine preparation, in which the chimeric peptide imitator is covalently linked to the matrix, showed the highest anti-HIV activity (both on the HIV-1 Z strain and HIV-1evk strain) among the compared compounds (polyanion matrix and a mixture of the matrix with the chimeric peptide) in the entire studied range of concentrations.
В табл. 1 и 2 представлены результаты изучения противовирусной активности кандидатных соединений аутологичной вакцины с пептидом-имитатором химерного домена белка р17/18/55 ВИЧ-1/2 с белком клеточного рецептора CD4 и полианионной матрицей.In the table. Figures 1 and 2 present the results of a study of the antiviral activity of candidate compounds of an autologous vaccine with an HIV-1/2 p17 / 18/55 protein chimeric domain protein simulator peptide with a CD4 cell receptor protein and polyanion matrix.
Анализ антиВИЧ активности синтезированных комплексов (матрица-фармакофор; матрица-химерный пептид; матрица-фармакофор-химерный пептид), проведенный на клетках МТ-4, инфицированных ВИЧ-1Z, и ВИЧ-1evk показал их явное преимущество перед использованием монокомпонентной полианионной матрицы. Причем важно отметить, что антиВИЧ активность препарата матрица-норборнен (модификация матрицы фармакофором Норборненом) сразу же приводила к увеличению специфической антиВИЧ активности в несколько раз. Дополнительная модификация препарата матрицы химерным пептидом или их комплексом с Норборненом еще более повышала противовирусные потенции соединений (см. табл.1, 2). Причем активность комплексов возрастала по нарастающей в ряду: матрица-фармакофор, матрица-химерный пептид, матрица-фармакофор-химерный пептид.An analysis of the anti-HIV activity of the synthesized complexes (matrix-pharmacophore; matrix-chimeric peptide; matrix-pharmacophore-chimeric peptide) performed on MT-4 cells infected with HIV-1 Z and HIV-1evk showed their clear advantage over the use of the monocomponent polyanion matrix. Moreover, it is important to note that the anti-HIV activity of the drug matrix-norbornene (modification of the matrix by pharmacophore Norbornen) immediately led to an increase in specific anti-HIV activity by several times. Additional modification of the matrix preparation with a chimeric peptide or their complex with Norbornen further increased the antiviral potencies of the compounds (see Tables 1, 2). Moreover, the activity of the complexes increased in increasing order: matrix-pharmacophore, matrix-chimeric peptide, matrix-pharmacophore-chimeric peptide.
Антителообразующую способность комплексного препарата аутологичной вакцины оценивали по способности индуцировать образование специфических антиВИЧ антител у беспородных белых мышей весом 20-22 г после трехкратного введения данного препарата в дозе 1 мг на 1 кг веса животного (подкожно во внутреннюю поверхность задней левой конечности) с двухнедельными интервалами после каждой инъекции. Кровь иммунизированных мышей получали по обычной методике из ретроорбитального синуса после легкого эфирного наркоза. При инкубации сыворотки в течение 10 мин при комнатной температуре, а затем 20 мин в холодильнике при температуре +4-8°С происходило образование сгустка, который отделяли от сыворотки крови, затем анализировали полученные образцы сыворотки в двукратных разведениях методом ИФА на наличие специфических антиВИЧ антител (тест-система "КомбиБест анти-ВИЧ-1,2 AT/AT", ЗАО "Вектор-Бест", Новосибирск). Разведение образца, в котором оптическая плотность (ОП) превышала значение ОП контроля в 2,1 раза, принимали за титр антител в данном образце. В результате исследований уровня специфических антител, индуцированного у экспериментальных животных, были получены данные с разбросом титров специфических антител, определенных в иммуноферментном анализе от 1:640 до 1:2560. Для оценки вируснейтрализующей активности образцы сывороток подвергали термоинактивации с целью удаления неспецифических ингибиторов при температуре 56°С в течение 60 мин, затем брали фиксированную дозу ВИЧ-1 и инкубировали с различными разведениями (от 1:10 до 1:80) образца сыворотки в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем каждое разведение смеси опытных и контрольных образцов сыворотки, инкубированных с одинаковой аликвотой ВИЧ-1, вносили к пермиссивной культуре лимфобластоидных клеток МТ-4, рассеянных в пластиковые стерильные 96-луночные планшеты (Costar, Нидерланды) и инкубировали в течение последующих 4 суток при температуре 37°С во влажной атмосфере 5% СО2 с ежедневной микроскопией суспензии клеток под инвертированным микроскопом. После окончания срока инкубации оценивали жизнеспособность клеток по окраске клеток трипановым синим (общепринятой методикой) и наработку специфического р24 антигена ВИЧ-1 в культуральной среде методом ИФА. Результаты экспериментальной оценки полученных данных показали наличие вируснейтрализующей активности в опытных образцах сыворотки (разведения различных образцов от 1:20 до 1:80) и отсутствие в них вирусспецифического антигена р24 ВИЧ-1 и гибели клеток в процессе сокультивирования с клетками МТ-4, в то время как в контрольных образцах сыворотки мышей, нейтрализующей антиВИЧ активности выявлено не было. В то время как в культуральной среде сокультивата пермессивных клеток МТ-4 с контрольными сыворотками определялся антиген р24 ВИЧ-1 в ИФА и отмечалась прогрессивная гибель клеток от ВИЧ-инфекции, в процессе их сокультивирования с данными образцами.The antibody-forming ability of a complex preparation of an autologous vaccine was assessed by the ability to induce the formation of specific anti-HIV antibodies in outbred white mice weighing 20-22 g after three doses of this drug at a dose of 1 mg per 1 kg of animal weight (subcutaneously in the inner surface of the hind left limb) at two-week intervals after every injection. The blood of immunized mice was obtained according to the usual procedure from the retroorbital sinus after mild ether anesthesia. When the serum was incubated for 10 min at room temperature, and then 20 min in the refrigerator at a temperature of + 4-8 ° C, a clot formed, which was separated from the blood serum, then the obtained serum samples were double-diluted by ELISA for the presence of specific anti-HIV antibodies (test system "CombiBest anti-HIV-1,2 AT / AT", CJSC "Vector-Best", Novosibirsk). Dilution of the sample in which the optical density (OD) was 2.1 times higher than the OD value of the control was taken as the antibody titer in this sample. As a result of studies of the level of specific antibodies induced in experimental animals, data were obtained with a spread of titers of specific antibodies determined in an enzyme-linked immunosorbent assay from 1: 640 to 1: 2560. To assess the neutralizing activity, serum samples were subjected to thermal inactivation to remove non-specific inhibitors at 56 ° C for 60 min, then a fixed dose of HIV-1 was taken and incubated with various dilutions (from 1:10 to 1:80) of the serum sample for 30 min at room temperature. Then, each dilution of a mixture of experimental and control serum samples incubated with the same HIV-1 aliquot was introduced into a permissive culture of MT-4 lymphoblastoid cells scattered in sterile plastic 96-well plates (Costar, Netherlands) and incubated for 4 days at a temperature 37 ° C in a humid atmosphere of 5% CO 2 with daily microscopy of a suspension of cells under an inverted microscope. After the end of the incubation period, cell viability was assessed by staining the cells with trypan blue (a common method) and the production of specific p24 HIV-1 antigen in the culture medium by ELISA. The results of an experimental evaluation of the obtained data showed the presence of virus-neutralizing activity in experimental samples of serum (dilutions of various samples from 1:20 to 1:80) and the absence of the virus-specific p24 HIV-1 antigen in them and cell death during co-cultivation with MT-4 cells, while while in control samples of mouse serum, neutralizing anti-HIV activity was not detected. While in the culture medium of the co-cultivation of permissive MT-4 cells with control sera, the HIV-1 p24 antigen was determined in ELISA and progressive cell death from HIV infection was noted during their co-cultivation with these samples.
Таким образом, индукция специфических антиВИЧ антител у экспериментальных животных при парентеральном введении комплексных препаратов аутологичной вакцины, наличие у этих антител вируснейтрализующей активности и наличие более выраженного антиВИЧ эффекта при применении комплексных препаратов с включением ковалентно связанных химерных пептидов в отношении исследованных штаммов ВИЧ-1 позволяет сделать следующий вывод: компоненты, представляющие собой основные иммуногенные эпитопы белков р17/18/55 ВИЧ-1/2 и V1 CD4, обеспечивают эффективное ингибирование репродукции ВИЧ-1 и подавление взаимодействия вируса с клеточными рецепторами при адсорбции, что обеспечивает химиотерапевтическую эффективность патентуемых препаратов аутологичной терапевтической ВИЧ/СПИД вакцины.Thus, the induction of specific anti-HIV antibodies in experimental animals upon parenteral administration of complex preparations of an autologous vaccine, the presence of virus-neutralizing activity in these antibodies and the presence of a more pronounced anti-HIV effect when using complex drugs with the inclusion of covalently linked chimeric peptides with respect to the studied HIV-1 strains allows the following conclusion: components representing the main immunogenic epitopes of p17 / 18/55 HIV-1/2 and V1 CD4 proteins provide an effective ngibirovanie reproduction of HIV-1 and suppression of virus interaction with cell receptors during adsorption, which ensures the effectiveness of patentable chemotherapeutic drugs autologous therapeutic HIV / AIDS vaccine.
Преимущества предлагаемого способа по сравнению с известным заключаются в том, что комплексные соединения, включающие в свой состав полианионную матрицу, модификатор Норборнен/Норборнан и пептид-имитатор химерного домена белка р17/18/5 5 ВИЧ-1/2 с белком клеточного рецептора CD4, обеспечивают доставку комплексного вакцинного препарата к месту развития инфекции ВИЧ-1/2 и подавлению специфической ВИЧ-инфекции за счет включения в структуру препарата, фармакофора модификатора и химерных пептидов, которые в сравнении с прототипами вызывают модификацию основных протективных антигенов ВИЧ-1/2 и индукцию специфического иммунного ответа, а также воздействуют на репродукцию ВИЧ в пермессивных клетках и оказывают выраженный противовирусный эффект на более широкий круг вирусов-мишеней, причем включая азидотимидин резистентные штаммы ВИЧ. Данный препарат, помимо химиотерапевтического действия на течение ВИЧ-инфекции, обеспечивает стимуляцию продукции цитокинов и клеток киллеров с модуляцией В-, Т-клеточного звена иммунитета и стимуляцией выработки специфических антител, обладающих нейтрализующими свойствами в отношении вируса иммунодефицита человека.The advantages of the proposed method compared to the known one are that the complex compounds comprising a polyanionic matrix, the Norbornen / Norbornan modifier and the peptide mimic the chimeric domain of the HIV-1/2 p17 / 18/5 5 protein with the CD4 cell receptor protein, ensure the delivery of a complex vaccine preparation to the site of HIV-1/2 infection and suppression of specific HIV infection due to the inclusion in the structure of the drug, a pharmacophore modifier and chimeric peptides, which, in comparison with prototypes, cause a modifier katsiyu major protective antigens of HIV-1/2 and the induction of a specific immune response, as well as affect the reproduction of HIV in permissive cells and exert a pronounced antiviral effect for a wide range of viruses target, and including AZT resistant HIV strains. This drug, in addition to the chemotherapeutic effect on the course of HIV infection, provides stimulation of the production of cytokines and killer cells with modulation of the B-, T-cell immunity and stimulation of the production of specific antibodies that have neutralizing properties against the human immunodeficiency virus.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005130373/13A RU2306950C2 (en) | 2005-09-29 | 2005-09-29 | Complex autological vaccine against hiv infection and aids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005130373/13A RU2306950C2 (en) | 2005-09-29 | 2005-09-29 | Complex autological vaccine against hiv infection and aids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005130373A RU2005130373A (en) | 2007-04-10 |
| RU2306950C2 true RU2306950C2 (en) | 2007-09-27 |
Family
ID=37999973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005130373/13A RU2306950C2 (en) | 2005-09-29 | 2005-09-29 | Complex autological vaccine against hiv infection and aids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2306950C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475264C2 (en) * | 2010-12-29 | 2013-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства | Vaccine against hiv/aids |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5880154A (en) * | 1994-02-01 | 1999-03-09 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Polymeric adamantane analogues |
-
2005
- 2005-09-29 RU RU2005130373/13A patent/RU2306950C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5880154A (en) * | 1994-02-01 | 1999-03-09 | The Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Polymeric adamantane analogues |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KOLOCOURIS N. et al., "Synthesis and antiviral activity evaluation of some aminoadamantane derivatives", J Med Chem. 1994 Sep 2; 37(18):2896-902. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2475264C2 (en) * | 2010-12-29 | 2013-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научный центр "Институт иммунологии" Федерального медико-биологического агентства | Vaccine against hiv/aids |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005130373A (en) | 2007-04-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bokesch et al. | A potent novel anti-HIV protein from the cultured cyanobacterium Scytonema varium | |
| Mühlradt et al. | Isolation, structure elucidation, and synthesis of a macrophage stimulatory lipopeptide from Mycoplasma fermentans acting at picomolar concentration | |
| JP3587538B2 (en) | Synthetic polypeptides as inhibitors of HIV-1 | |
| CN101641372B (en) | Template-fixed peptidomimetics | |
| WO1991013088A1 (en) | Terminally blocked antiviral peptides | |
| RU2337922C2 (en) | ISOLATED POLYPEPTIDES BASED ON NEUTRALISING OF PROTEIN p17 OF HIV VIRUS, USED AS VACCINES, AND NEUTRALISING ANTI-p17-ANTIBODIES, SPECIFICALLY RECOGNISING SAID NEUTRALISING | |
| US7604804B2 (en) | Enhancing anti-HIV efficiency through multivalent inhibitors targeting oligomeric gp120 | |
| JPWO2010134305A1 (en) | HIV three-dimensional structure recognition antibody-derived peptide antigen and method for synthesis thereof | |
| Monell et al. | Structural and functional similarities between synthetic HIV gp41 peptides and defensins | |
| AU5656890A (en) | Chemically modified cd4 peptide fragments having anti-retroviral properties | |
| CN113813375A (en) | Composition of novel anti-new coronavirus compound and application of composition in medicine for preventing and treating coronavirus infection diseases | |
| RU2306950C2 (en) | Complex autological vaccine against hiv infection and aids | |
| Golding et al. | Brucella abortus conjugated with a gp120 or V3 loop peptide derived from human immunodeficiency virus (HIV) type 1 induces neutralizing anti-HIV antibodies, and the V3-B. abortus conjugate is effective even after CD4+ T-cell depletion | |
| US6200575B1 (en) | Non-toxic immunogens derived from a retroviral regulatory protein antibodies preparation process and pharmaceutical compositions comprising them | |
| US7335727B2 (en) | Pharmaceutical used for treating HIV infection, the composition and uses thereof | |
| AP502A (en) | Multiple branch peptide constructions for use against HIV. | |
| CA2535982C (en) | Uses of interferons with altered spatial structure | |
| US6827939B2 (en) | Peptide having an affinity for gp120 | |
| Hegde et al. | Structure–function relationship of novel X4 HIV‐1 entry inhibitors–L‐and D‐arginine peptide‐aminoglycoside conjugates | |
| WO1989003420A1 (en) | Anti-retroviral agent | |
| RU2270690C1 (en) | Complex anti-hiv compound | |
| KR20030034194A (en) | Ligand/receptor specificity exachangers that redirect antibodies to receptors on a pathogen | |
| Coulibaly et al. | Anti-HIV lectins and current delivery strategies | |
| AU667290B2 (en) | Peptides that block human immunodeficiency virus infections and methods of use thereof | |
| RU2315617C2 (en) | Complex of membranotropic compounds for prophylaxis and treatment of hiv-infection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140930 |