RU2302632C2 - Способ определения гистамина в плазме крови - Google Patents
Способ определения гистамина в плазме крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2302632C2 RU2302632C2 RU2005114081/15A RU2005114081A RU2302632C2 RU 2302632 C2 RU2302632 C2 RU 2302632C2 RU 2005114081/15 A RU2005114081/15 A RU 2005114081/15A RU 2005114081 A RU2005114081 A RU 2005114081A RU 2302632 C2 RU2302632 C2 RU 2302632C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acetonitrile
- histamine
- blood plasma
- eluent
- chromatographic column
- Prior art date
Links
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 42
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 title claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940018489 pronto Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 abstract 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к патофизиологии, фармакологии и токсикологии, и может быть использовано для определения гистамина в плазме крови у больных в условиях различных неблагоприятных воздействий, включая побочное действие лекарственных средств. Сущность способа: определение гистамина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) осуществляют в надосадочной жидкости, полученной в результате осаждения белков плазмы ацетонитрилом. Для осуществления ВЭЖХ используют хроматографическую колонку Pronto SIL-120-5-C18AQ 2×75 мм с размером частиц 5 мкм, в качестве элюэнта используют смесь 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия и ацетонитрила при градиенте концентрации последнего от 0 до 50%, при скорости подачи потока элюента 90 мкл/мин, объеме элюирования 1500 мкл, температура хроматографической колонки 35°С, причем детекцию проводят при длине волны 210 нм. Использование способа позволяет повысить точность определения гистамина в плазме крови за счет определения количественных и качественных характеристик гистамина в плазме крови. 1 табл., 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к патофизиологии, фармакологии и токсикологии, и может быть использовано для определения гистамина в плазме крови больных в условиях различных неблагоприятных воздействий, включая побочное действие лекарственных средств.
В настоящее время существует несколько способов определения гистамина в биологических пробах, однако использование этих способов сопряжено с рядом недостатков, что делает процедуру определения длительной, а данные количественного определения неточными.
Известен способ определения гистамина в плазме крови, основанный на реакции образования с о-фталиевым альдегидом сильно флюоресцирующего соединения, которое определяют на спектрофлюориметре при длине волны 450 нм и возбуждении при 365 нм (Shore P.A., Burkhalter A., Cohn V.H., Jr., J. Pharmcol. Exp. Ther. - 1959. - V.127. - P.182).
Недостатками известного способа являются трудоемкость, связанная с многостадийностью и рядом последовательно проводимых химических реакций и физико-химических определений, а также высокая стоимость применяемых химических реактивов.
Наиболее близким по достигаемому техническому результату является способ определения гистамина в плазме крови путем тонкослойной хроматографии (Степанова Н.В., Яременко Е.Е., Петренко В.В. // Лабораторное дело. - 1989. - №7. - С.28-30).
Однако известный способ малоэффективен, так как имеет низкую точность количественного определения.
Авторы предлагают высокоэффективный способ, позволяющий быстро и высокоточно определять качественные и количественные характеристики гистамина в биологических пробах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Техническим результатом заявляемого способа является повышение эффективности за счет точного и быстрого определения качественных и количественных характеристик гистамина в плазме крови.
Технический результат достигается тем, что используют жидкостную хроматографию, в качестве элюэнта - смесь 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия и ацетонитрила при градиенте концентрации последнего от 0 до 50% и скорости подачи потока элюента 90 мкл/мин, объеме элюирования 1500 мкл, температура хроматографической колонки 35°С, детекцию проводят при длине волны 210 нм.
Способ проиллюстрирован фигурами 1, 2 и таблицей.
Способ осуществляют поэтапно следующим образом:
1. Забор крови.
Для определения используют венозную кровь, которую забирают из локтевой вены широкой сухой иглой в стеклянную пробирку, куда предварительно добавлен в качестве антикоагулянта гепарин из расчета 1,75 мл гепарина на 17 мл забираемой венозной крови. Покачиванием или легким встряхиванием пробирки кровь перемешивают с антикоагулянтом.
2. Подготовка пробы.
Для определения используют венозную кровь, консервированную гепарином. Кровь центрифугируют при 8000 об/мин в течение 20 минут для осаждения форменных элементов. Затем к 1 мл полученной плазмы добавляют 2 мл 100% ацетонитрила для осаждения белков плазмы. Полученную суспензию сразу тщательно перемешивают стеклянной палочкой для формирования равномерного осадка. Затем пробу центрифугируют при 8000 об/мин в течение 15 минут для формирования плотного осадка. Для исследования забирают надосадочную жидкость.
3. Хроматографирование пробы.
Полученную надосадочную жидкость хроматографируют, используя в качестве подвижной фазы (элюэнта) смесь 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия и ацетонитрила при градиенте концентрации последнего от 0 до 50%. Скорость подачи потока элюэнта составляет 90 мкл/мин, объем элюирования 1500 мкл, температура хроматографической колонки 35°С. Детекцию проводят при длине волны 210 нм.
Используемое оборудование.
Для проведения определения используют высокоэффективный жидкостный хроматограф «Милихром А-02» (ЗАО Институт хроматографии «Эконова», Новосибирск, Россия) с УФ-детектором и хроматографической колонкой Pronto SIL-120-5-C18AQ 2×75 мм с размером частиц 5 мкм.
Для центрифугирования используют центрифугу марки "Центрифуга лабораторная медицинская ОПн-8 ШХ 2.779.040» производства АО ТНК «Дастан», г.Бишкек.
Используемые стандартные образцы и реактивы.
В качестве стандартного образца используют кристаллический порошкообразный гистамин фирмы «Fluka», USA.
В качестве элюэнта и реактива для осаждения белков использовали ацетонитрил для хроматографии фирмы «Fluka», USA.
Для приготовления фосфатного буфера использовались порошкообразные кристаллические натрия фосфат однозамещенный и калия фосфат двузамещенный химически чистые для анализа фирмы «Sigma», USA.
Гистамин в плазме идентифицируют путем сопоставления времени удерживания пика, полученного на хроматограмме анализируемой пробы, со временем удерживания стандартного образца. Для подтверждения полученных результатов добавляют стандартный раствор гистамина в анализируемую пробу и наблюдают увеличение предполагаемого пика гистамина, сравнивают спектры поглощения в УФ-области стандартного образца и обнаруженного гистамина в плазме, записанные при остановленном потоке элюэнта во время выхода вещества из колонки.
Количественное определение гистамина в плазме проводят путем построения градуировочного графика, хроматографируя серию разведений стандартного образца гистамина в воде. Концентрацию гистамина в плазме вычисляют по формуле: С=W(R)×D/V, где W(R) - вычисленное по градуировочной зависимости количество вещества в пике, D - разведение пробы, V - объем пробы (2 мкл).
Заявленный способ обладает высокой эффективностью, не требует проведения многочисленных предварительных химических реакций и не предусматривает использование большого количества химических реактивов.
Способ определения гистамина в плазме крови
| Таблица | ||
| Статистическая обработка шести параллельных определений | ||
| № пробы | Содержание гистамина в мкг/мл | Статистические показатели |
| 1 | 32,46 | S=1,21 Sx=0,49 ΔХ=1,26 а=±3,67% |
| 2 | 33,85 | |
| 3 | 35,72 | |
| 4 | 34,14 | |
| 5 | 35,53 | |
| 6 | 33,85 | |
Относительная погрешность определения гистамина в плазме крови не превысила 3,67%.
Claims (1)
- Способ определения гистамина в плазме крови путем высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), отличающийся тем, что определение гистамина проводят в надосадочной жидкости, полученной в результате осаждения белков плазмы ацетонитрилом, ВЭЖХ осуществляют на хроматографической колонке Pronto SIL-120-5-C18AQ 2×75 мм с размером частиц 5 мкм, в качестве элюэнта используют смесь 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия и ацетонитрила при градиенте концентрации последнего от 0 до 50%, при скорости подачи потока элюента 90 мкл/мин, объеме элюирования 1500 мкл, температура хроматографической колонки 35°С, детекцию проводят при длине волны 210 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005114081/15A RU2302632C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ определения гистамина в плазме крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005114081/15A RU2302632C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ определения гистамина в плазме крови |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005114081A RU2005114081A (ru) | 2006-11-20 |
| RU2302632C2 true RU2302632C2 (ru) | 2007-07-10 |
Family
ID=37501668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005114081/15A RU2302632C2 (ru) | 2005-05-11 | 2005-05-11 | Способ определения гистамина в плазме крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2302632C2 (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2392845C2 (ru) * | 2007-10-23 | 2010-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Компьютерный анализ точечных цифровых изображений гистологических препаратов для определения концентрации гистамина в биологических структурах |
| RU2629273C1 (ru) * | 2016-09-26 | 2017-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Способ экспресс-диагностики скрытых воспалительных процессов молочной железы и репродуктивных органов коров |
| RU2636231C1 (ru) * | 2016-11-17 | 2017-11-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") | Способ количественного определения 2,2,6,6-тетраметил-N-{ 1-[5-(4-метил-3-хлоранилино)-1,2,4-тиадиазол-3-ил]пропан-2-ил} пиперидин-4-амина дигидрохлорида в биологических средах |
| RU2676487C1 (ru) * | 2018-06-27 | 2018-12-29 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") | Способ количественного определения 8-(трифторметил)бензо[f][1,2,3,4,5]пентатиепин-6-амина гидрохлорида в биологических средах |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021160696A1 (en) | 2020-02-10 | 2021-08-19 | Immundiagnostik Ag | In-vitro diagnosis of histamine intolerance syndrome |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2244307C2 (ru) * | 2003-02-19 | 2005-01-10 | Подковкин Владимир Георгиевич | Способ определения концентрации серотонина и гистамина в биологической жидкости |
-
2005
- 2005-05-11 RU RU2005114081/15A patent/RU2302632C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2244307C2 (ru) * | 2003-02-19 | 2005-01-10 | Подковкин Владимир Георгиевич | Способ определения концентрации серотонина и гистамина в биологической жидкости |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АХМЕДЖАНОВА С.Б. и др. Определение гистамина и серотонина в цельной крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Лабораторное дело. 1991, №11, с.10-13. * |
| СТЕПАНОВА Н.В. и др. Хроматографический метод определения серотонина и гистамина в одной пробе биологического материала. Лабораторное дело. 1989, №7, с.28-30. LIU W. et al. Simultaneous analysis of histamine and noradrenaline in human plasma by high performance liquid chromatography/electrochemical detection. Se. Pu. 1999, Jan; 17(1), p.80-82, реф. Найдено из БД PubMed, PMID 12548839. [Найдено 19.10.2006]. [он-лайн]. HARSING L.G. Jr. et al. Determination of histamine concentrations in plasma by liquid chromatography/electrochemistry. Clin. Chem. 1986 Oct; 32(10), p.1823-1827, реф. Найдено из БД PubMed, PMID 3093119. [Найдено 19.10.2006]. [он-лайн]. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2392845C2 (ru) * | 2007-10-23 | 2010-06-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Компьютерный анализ точечных цифровых изображений гистологических препаратов для определения концентрации гистамина в биологических структурах |
| RU2629273C1 (ru) * | 2016-09-26 | 2017-08-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Способ экспресс-диагностики скрытых воспалительных процессов молочной железы и репродуктивных органов коров |
| RU2636231C1 (ru) * | 2016-11-17 | 2017-11-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") | Способ количественного определения 2,2,6,6-тетраметил-N-{ 1-[5-(4-метил-3-хлоранилино)-1,2,4-тиадиазол-3-ил]пропан-2-ил} пиперидин-4-амина дигидрохлорида в биологических средах |
| RU2676487C1 (ru) * | 2018-06-27 | 2018-12-29 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инновационные Фармакологические Разработки" (Ооо "Ифар") | Способ количественного определения 8-(трифторметил)бензо[f][1,2,3,4,5]пентатиепин-6-амина гидрохлорида в биологических средах |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2005114081A (ru) | 2006-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Koçyiğit-Kaymakçoğlu et al. | Determination and validation of ketoprofen, pantoprazole and valsartan together in human plasma by high performance liquid chromatography | |
| CN102762980A (zh) | 分析装置 | |
| JP2016538574A (ja) | ジアンヒドロガラクチトール中の不純物のｈｐｌｃ分析 | |
| CN113899843A (zh) | 一种昆仙胶囊24种成分同时定量的分析方法 | |
| Jin et al. | Determination of bromadiolone in whole blood by high-performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry | |
| CN101273267A (zh) | 样品溶液中白蛋白的分析方法 | |
| AU2018275011A1 (en) | Quantitation of tamoxifen and metabolites thereof by mass spectrometry | |
| Rodrigues et al. | Mercury speciation in whole blood by gas chromatography coupled to ICP-MS with a fast microwave-assisted sample preparation procedure | |
| CN109900841B (zh) | 一种同时测定血浆中氨基糖苷类抗生素药物浓度的hplc-ms/ms方法 | |
| Jin et al. | High‐performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry for the determination of flocoumafen and brodifacoum in whole blood | |
| Stamou et al. | Hydrophilic interaction liquid chromatography–electrospray ionization mass spectrometry combined with fabric phase sorptive extraction for therapeutic drug monitoring of pioglitazone, repaglinide, and nateglinide in human plasma | |
| RU2302632C2 (ru) | Способ определения гистамина в плазме крови | |
| CN106198784B (zh) | 一种高效、准确检测芍药中褪黑素含量的方法 | |
| CN108072712A (zh) | 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法 | |
| Mensitieri et al. | Effects of selected preanalytical variables on Dried Blood Spot (DBS) and Volumetric Adsorptive Microsampling (VAMS) based bioanalytical methods for the determination of four β-lactam antibiotics | |
| CN105092733B (zh) | Lc‑ms测试物中不挥发性缓冲盐含量的降低方法和装置 | |
| Al-Arfaj et al. | Flow-injection chemiluminometric determination of pioglitazone HCl by its sensitizing effect on the cerium-sulfite reaction | |
| RU2687493C1 (ru) | Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии | |
| CN113917008A (zh) | 质谱检测尿液中代谢物水平的产品在制备用于早期评估肠道息肉和结直肠癌产品中的应用 | |
| Magiera et al. | A rapid method for determination of 22 selected drugs in human urine by UHPLC/MS/MS for clinical application | |
| Papadoyannis et al. | A rapid and simple high pressure liquid chromatographic method for pharmacokinetic study of ciprofloxacin in human serum | |
| CN107356687B (zh) | 一种丙氨酰-酪氨酸含量的检测方法 | |
| RU2665164C1 (ru) | Способ количественного определения леводопы в плазме крови | |
| CN112213410A (zh) | 一种银杏叶的检测方法 | |
| Kozanlı et al. | Quantitative determination of rivaroxaban in pharmaceutical formulations by ultra performance liquid chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070512 |