RU2393866C2 - Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection - Google Patents
Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2393866C2 RU2393866C2 RU2007138396/15A RU2007138396A RU2393866C2 RU 2393866 C2 RU2393866 C2 RU 2393866C2 RU 2007138396/15 A RU2007138396/15 A RU 2007138396/15A RU 2007138396 A RU2007138396 A RU 2007138396A RU 2393866 C2 RU2393866 C2 RU 2393866C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mta
- treatment
- eae
- disease
- autoimmune diseases
- Prior art date
Links
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 5'-S-methyl-5'-thioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 0.000 title claims description 117
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 49
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 11
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 title description 19
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims abstract description 20
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000001934 delay Effects 0.000 claims abstract 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 4
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 19
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 abstract 1
- 101710201354 Metallothionein A Proteins 0.000 description 106
- 238000012012 milestone trend analyses Methods 0.000 description 106
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 46
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 21
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 20
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 20
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 18
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 15
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010076864 Nitric Oxide Synthase Type II Proteins 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 7
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 7
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 7
- 102000011779 Nitric Oxide Synthase Type II Human genes 0.000 description 7
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 7
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 6
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 5
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 5
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- -1 for example Chemical class 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100034187 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Human genes 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 4
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 4
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 3
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 3
- MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N S-adenosyl-L-methioninate Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C[S+](CC[C@H](N)C([O-])=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 MEFKEPWMEQBLKI-AIRLBKTGSA-N 0.000 description 3
- 101710136206 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960001570 ademetionine Drugs 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 208000012997 experimental autoimmune encephalomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 206010033892 Paraplegia Diseases 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000003633 gene expression assay Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 4-(3,4-diaminophenyl)benzene-1,2-diamine;hydron;tetrachloride Chemical compound Cl.Cl.Cl.Cl.C1=C(N)C(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C(N)=C1 KJDSORYAHBAGPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010034457 5'-methylthioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 241000070918 Cima Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000001640 Fibromyalgia Diseases 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101150109636 Inos gene Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- LUWJPTVQOMUZLW-UHFFFAOYSA-N Luxol fast blue MBS Chemical compound [Cu++].Cc1ccccc1N\C(N)=N\c1ccccc1C.Cc1ccccc1N\C(N)=N\c1ccccc1C.OS(=O)(=O)c1cccc2c3nc(nc4nc([n-]c5[n-]c(nc6nc(n3)c3ccccc63)c3c(cccc53)S(O)(=O)=O)c3ccccc43)c12 LUWJPTVQOMUZLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241001049988 Mycobacterium tuberculosis H37Ra Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010033885 Paraparesis Diseases 0.000 description 1
- 241000721454 Pemphigus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001018322 Sus scrofa Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- 229940125716 antipyretic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- VERAMNDAEAQRGS-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-disulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCCS(O)(=O)=O VERAMNDAEAQRGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003210 demyelinating effect Effects 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- LEUIUWYZAHKPSE-UHFFFAOYSA-L disodium;butane-1,4-disulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCCS([O-])(=O)=O LEUIUWYZAHKPSE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000000212 effect on lymphocytes Effects 0.000 description 1
- 239000002662 enteric coated tablet Substances 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000004730 hepatocarcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000011486 lichen planus Diseases 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960001810 meprednisone Drugs 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000019639 protein methylation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Область применения данного изобретенияThe scope of this invention
Данное изобретение, в целом, относится к применению 5'-метилтиоаденозина (МТА), его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств для предотвращения и/или лечения аутоиммунных заболеваний, а также для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата и, в частности, для предотвращения и/или лечения рассеянного склероза (РС).This invention, in General, relates to the use of 5'-methylthioadenosine (MTA), its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs for the prevention and / or treatment of autoimmune diseases, as well as for the prevention and / or treatment of transplant rejection and, in particular, prevention and / or treatment of multiple sclerosis (MS).
Предпосылки создания изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION
Аутоиммунные заболевания представляют собой тяжелые заболевания, являющиеся причиной значительных проблем со здоровьем и проблем личностного характера, и в настоящее время представляют собой четвертую по значимости проблему со здоровьем в промышленно развитых странах. В качестве примера, рассеянный склероз (РС) является аутоиммунным заболеванием, требующим значительной медицинской помощи, что является причиной значительных осложнений. Подобным образом, отторжение трансплантата является конкретным примером аутоиммунной реакции, при которой активирование антиген-специфических Т-лимфоцитов трансплантата приводит к удалению их из организма, что представляет собой значительное осложнение для пациентов, получающих трансплантат, с высокой персональной и социальной ценой.Autoimmune diseases are serious diseases that cause significant health problems and personality problems, and are currently the fourth most important health problem in industrialized countries. As an example, multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease that requires significant medical attention, which causes significant complications. Similarly, transplant rejection is a specific example of an autoimmune reaction in which activation of antigen-specific transplant T lymphocytes removes them from the body, which is a significant complication for patients receiving the transplant with high personal and social costs.
Благодаря своим специфическим характеристикам (механизмы и реакции на лечение), аутоиммунные заболевания формируют специфическую подгруппу в группе воспалительных заболеваний. Как хорошо известно, воспалительными заболеваниями являются такие заболевания, при которых преобладает врожденное воспаление или при которых лечение направлено на борьбу с врожденным воспалением. Однако аутоиммунные заболевания представляют собой другую форму воспалительных заболеваний, при которых преобладает воспаление в результате искусственного иммунитета (лимфоциты); следовательно, классические противовоспалительные методы лечения, нацеленные на модуляцию врожденного воспаления, являются неэффективными при лечении аутоиммунных заболеваний, по-видимому, вследствие того, что для контролирования затяжного процесса аутоиммунного заболевания необходимо, в дополнение к подавлению местного воспаления, модулировать активность лимфоцитов посредством иммуномодуляторов.Due to its specific characteristics (mechanisms and reactions to treatment), autoimmune diseases form a specific subgroup in the group of inflammatory diseases. As is well known, inflammatory diseases are those diseases in which congenital inflammation predominates or in which treatment is aimed at combating congenital inflammation. However, autoimmune diseases are another form of inflammatory disease in which inflammation as a result of artificial immunity (lymphocytes) predominates; therefore, classical anti-inflammatory treatments aimed at modulating congenital inflammation are ineffective in the treatment of autoimmune diseases, apparently due to the fact that in order to control the protracted process of autoimmune disease, it is necessary, in addition to suppressing local inflammation, to modulate the activity of lymphocytes through immunomodulators.
Лечение аутоиммунных заболеваний представляет собой серьезную проблему, поскольку многие схемы лечения являются симптоматическими, и способы лечения, которые смягчают течение данного заболевания, имеют частичную эффективность и побочные эффекты, а также значительную стоимость. Контролирование состояния при аутоиммунном заболевании базируется, главным образом, на модулировании активации Т-лимфоцитов посредством иммуносупрессантов или иммуномодуляторов; по этой причине классические противовоспалительные методы лечения являются неэффективными.The treatment of autoimmune diseases is a serious problem, because many treatment regimens are symptomatic, and treatment methods that alleviate the course of the disease have partial effectiveness and side effects, as well as significant cost. Monitoring the condition of an autoimmune disease is based mainly on modulating the activation of T-lymphocytes through immunosuppressants or immunomodulators; for this reason, classic anti-inflammatory treatments are ineffective.
В настоящее время при лечении аутоиммунных заболеваний и отторжения трансплантата обычно применяют три вида терапий, все они сконцентрированы на ограничении активации и действия аутореактивных Т-лимфоцитов:Currently, three types of therapies are usually used in the treatment of autoimmune diseases and transplant rejection, all of which are focused on limiting the activation and action of autoreactive T-lymphocytes:
а) с одной стороны, введение кортикоидов (например, преднизона, 5'-метилпреднизона и АКТГ, среди прочего), либо перорально, подкожно или внутривенно и в виде болюсов, в течение короткого периода времени или в течение неопределенного периода времени, может облегчить некоторые из этих патологических состояний, хотя всегда частично и со значительными длительными побочными эффектами, что ограничивает их применение;a) on the one hand, the administration of corticoids (e.g. prednisone, 5'-methylprednisone and ACTH, among others), either orally, subcutaneously or intravenously and in the form of boluses, for a short period of time or for an indefinite period of time, may facilitate some from these pathological conditions, although always partially and with significant long-term side effects, which limits their use;
b) с другой стороны, применение иммуносупрессантов (например, циклофосфамида, митоксантрона, метотрексата, азатиоприна и циклоспорина А, среди прочего), перорально или внутривенно, улучшает контроль над многими из этих заболеваний, хотя они имеют потенциально опасные или даже смертельные побочные эффекты, что значительно ограничивает их применение; иb) on the other hand, the use of immunosuppressants (e.g. cyclophosphamide, mitoxantrone, methotrexate, azathioprine and cyclosporin A, among others), orally or intravenously, improves control of many of these diseases, although they have potentially dangerous or even fatal side effects, which significantly limits their use; and
c) с другой стороны, введение иммуномодуляторов (например, интерферона-бета, интерферона-альфа, глатирамера ацетата, анти-CD20 или анти-TNFα моноклональных антител, среди прочего) улучшает контроль над этими заболеваниями, хотя частично имеются присущие побочные эффекты и высокая стоимость, поскольку они являются биотехнологическими продуктами.c) on the other hand, administration of immunomodulators (e.g., interferon-beta, interferon-alpha, glatiramer acetate, anti-CD20 or anti-TNFα monoclonal antibodies, among others) improves control of these diseases, although partially there are inherent side effects and high cost as they are biotechnological products.
Таким образом, чрезвычайный интерес представляет новый доступный способ лечения, который эффективно предотвращает активацию лимфоцитов и предотвращает или уменьшает интенсивность аутоиммунных заболеваний или отторжения трансплантата, с ограниченными побочными эффектами.Thus, of extreme interest is a new affordable treatment method that effectively prevents the activation of lymphocytes and prevents or reduces the intensity of autoimmune diseases or transplant rejection, with limited side effects.
Было обнаружено, что 5'-метилтиоаденозин (МТА) можно применять для предотвращения и/или лечения аутоиммунных заболеваний, а также для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата, в частности для предотвращения и/или лечения рассеянного склероза (РС).It has been found that 5'-methylthioadenosine (MTA) can be used to prevent and / or treat autoimmune diseases, as well as to prevent and / or treat transplant rejection, in particular to prevent and / or treat multiple sclerosis (MS).
MTA представляет собой гидрофобный аденин серосодержащий нуклеозид, в котором гидроксильная группа в рибозе в положении 5' заменена метилтио-группой. MTA обнаружен в небольших количествах во всех типах клеток, в том числе у прокариот, дрожжей, растений и высших эукариот, и, согласно наблюдениям, присутствует во всех тканях млекопитающих. MTA представляет собой хорошо изученную молекулу, имеющую очень разнообразные свойства для контроля злокачественного новообразования, а также для регенерации и врожденного воспаления.MTA is a hydrophobic adenine sulfur-containing nucleoside in which the hydroxyl group in ribose at position 5 'is replaced by a methylthio group. MTA is found in small amounts in all types of cells, including prokaryotes, yeasts, plants, and higher eukaryotes, and is observed to be present in all mammalian tissues. MTA is a well-studied molecule that has very diverse properties for controlling cancer, as well as for regeneration and congenital inflammation.
В патенте США № 4454122 описано применение MTA в качестве противовоспалительного, аналгетического и жаропонижающего агента; в частности применение МТА при лечении врожденного воспаления. Данное противовоспалительное действие анализировали посредством супрессии врожденной иммунной реакции в моделях отека, плеврита и гранулемы, обусловленной инородным телом. Роль МТА в подавлении активации лимфоцитов не исследована, так же как и его роль в качестве иммуномодулятора при аутоиммунных заболеваниях или отторжении трансплантата.US Pat. No. 4,454,122 describes the use of MTA as an anti-inflammatory, analgesic, and antipyretic agent; in particular, the use of MTA in the treatment of congenital inflammation. This anti-inflammatory effect was analyzed by suppressing the innate immune response in models of edema, pleurisy, and granuloma caused by a foreign body. The role of MTA in suppressing lymphocyte activation has not been investigated, as well as its role as an immunomodulator in autoimmune diseases or transplant rejection.
Также изучены эффекты МТА на злокачественное новообразование. Известно, что во многих злокачественных клетках отсутствует активность МТАР (5'-метилтиоаденозин фосфорилаза) и что в культуре эти клетки с дефицитом МТАР секретируют МТА, вместо того, чтобы метаболизировать его. В качестве примера, в международной патентной заявке WO2004/074325 раскрыто применение соединения, которое ингибирует фермент МТАР, при лечении злокачественного новообразования. В экспериментальных моделях индуцированного химическим веществом гепатоканцерогенеза, при котором наблюдается снижение уровней МТА, применение МТА индуцирует дозозависимое ингибирование предракового повреждения печени и синтеза ДНК.The effects of MTA on malignant neoplasms have also been studied. It is known that many malignant cells lack MTAP activity (5'-methylthioadenosine phosphorylase) and that in culture, these MTAP deficient cells secrete MTA instead of metabolizing it. As an example, international patent application WO2004 / 074325 discloses the use of a compound that inhibits the MTAP enzyme in the treatment of malignant neoplasms. In experimental models of chemical-induced hepatocarcinogenesis, in which there is a decrease in MTA levels, the use of MTA induces a dose-dependent inhibition of precancerous damage to the liver and DNA synthesis.
С другой стороны, считают, что функция и пролиферация Т-лимфоцитов чрезвычайно чувствительны к ингибированию посредством МТА. Это соединение ингибирует в обратимой, нетоксичной и дозозависимой манере пролиферацию митоген-стимулированных лимфоидных клеточных линий крыс и периферических лимфоцитов человека. Среди эффектов МТА, которые могут препятствовать клеточной пролиферации, можно отметить ингибирование метилирования белка или ингибирование активности фосфодиэстеразы. Авторы данного изобретения в статье «A Methylation-Inhibitor Suppresses T Cell Activation and Prevents Experimental Autoimmune Encephalomyelitis», опубликованной в материалах 7th Meeting of the International Society of Neuroimmunology, Venice, September 2004 [абстракт опубликован в Journal of Neuroimmunology 2004, Vol. 154, numbers 1-2, page 85] объявили об эффективности МТА в качестве мощного ингибитора реакций метилирования, что предотвращает развитие аутоиммунной реакции в модели на животных экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ), состоящей из крыс Льюиса, иммунизированных основным миелиновым белком (MBP).On the other hand, it is believed that the function and proliferation of T-lymphocytes is extremely sensitive to inhibition by MTA. This compound inhibits in a reversible, non-toxic and dose-dependent manner the proliferation of mitogen-stimulated lymphoid cell lines of rats and human peripheral lymphocytes. Among the effects of MTA that can inhibit cell proliferation, inhibition of protein methylation or inhibition of phosphodiesterase activity can be noted. The authors of this invention in the article "A Methylation-Inhibitor Suppresses T Cell Activation and Prevents Experimental Autoimmune Encephalomyelitis" published in 7th Meeting of the International Society of Neuroimmunology, Venice, September 2004 [abstract published in Journal of Neuroimmunology 2004, Vol. 154, numbers 1-2, page 85] announced the efficacy of MTA as a potent inhibitor of methylation reactions, which prevents the development of an autoimmune reaction in an animal model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) consisting of Lewis rats immunized with basic myelin protein (MBP).
Краткое изложение сущности изобретенияSummary of the invention
Неожиданно было обнаружено, что МТА способен оказывать модулирующее действие на активацию Т-лимфоцитов, что обеспечивает возможность модулировать воспаление при аутоиммунных заболеваниях и отторжении трансплантата, и, таким образом, его можно использовать для предотвращения и/или лечения аутоиммунных заболеваний, а также для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата, в частности предотвращения и/или лечения РС. В этом отношении, в данном изобретении МТА действует как иммуномодулирующий агент, поскольку он, в частности, оказывает влияние на лимфоциты.Unexpectedly, it was found that MTA is able to exert a modulating effect on the activation of T-lymphocytes, which makes it possible to modulate inflammation in autoimmune diseases and transplant rejection, and thus, it can be used to prevent and / or treat autoimmune diseases, as well as to prevent and / or treating transplant rejection, in particular preventing and / or treating MS. In this regard, in the present invention, MTA acts as an immunomodulatory agent, since it, in particular, has an effect on lymphocytes.
Это новое применение МТА основано на исследовании, проведенном авторами данного изобретения на экспериментальных моделях на животных острого ЭАЭ и хронически текущего ЭАЭ, в которых использовали МТА; обнаружили, что у тех животные, которые получали МТА, либо не обнаруживали никаких клинических признаков данного заболевания, либо, если заболевание уже было выявлено, наблюдали значительное ослабление течения заболевания.This new application of MTA is based on a study conducted by the authors of the present invention on experimental animal models of acute EAE and chronically current EAE in which MTA was used; found that in those animals that received MTA, either did not show any clinical signs of the disease, or if the disease was already detected, a significant weakening of the disease was observed.
Поэтому в одном аспекте данное изобретение относится к использованию МТА при изготовлении лекарственного средства, предназначенного для (i) предотвращения и/или лечения аутоиммунного заболевания или (ii) для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата. В определенном варианте осуществления этим аутоиммунным заболеванием является РС.Therefore, in one aspect, the invention relates to the use of MTA in the manufacture of a medicament for (i) preventing and / or treating an autoimmune disease or (ii) for preventing and / or treating transplant rejection. In a specific embodiment, the autoimmune disease is MS.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения аутоиммунного заболевания у индивидуума, страдающего аутоиммунным заболеванием, который включает введение терапевтически эффективного количества МТА указанным индивидуумам. В определенном варианте осуществления этим аутоиммунным заболеванием является РС.In another aspect, the invention relates to a method for preventing and / or treating an autoimmune disease in an individual suffering from an autoimmune disease, which comprises administering a therapeutically effective amount of MTA to said individuals. In a specific embodiment, the autoimmune disease is MS.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата у индивидуума, получившего трансплантат, или того, который собирается получить трансплантат, который включает введение терапевтически эффективного количества МТА указанным индивидуумам.In another aspect, this invention relates to a method for preventing and / or treating transplant rejection in an individual who has received a transplant, or one who is about to receive a transplant, which comprises administering a therapeutically effective amount of MTA to said individuals.
Применение МТА для предотвращения и/или лечения аутоиммунных заболеваний, в частности РС, и отторжения трансплантата является эффективным способом избежать проблемы, определенные современными терапевтическими стратегиями, такие как отдаленные побочные эффекты кортикоидов, иммуносупрессантов и иммуномодуляторов, используемых при лечении аутоиммунных заболеваний и отторжения трансплантата.The use of MTAs to prevent and / or treat autoimmune diseases, in particular MS, and transplant rejection is an effective way to avoid the problems identified by current therapeutic strategies, such as the long-term side effects of corticoids, immunosuppressants and immunomodulators used in the treatment of autoimmune diseases and transplant rejection.
Краткое описание фигурBrief Description of the Figures
На Фигуре 1 представлен иллюстративный график индукции ЭАЭ у крыс Льюиса, иммунизированных MBP68-82 морской свинки. Среднее значение ежедневной оценки клинических показателей +S.E.M. представлено для каждой группы крыс, где (*) означает статистически значимое различие c р<0,05 по сравнению с лечением посредством МТА, и (**) означает статистически значимое различие с р<0,005 по сравнению с лечением посредством МТА. Эти данные получены в 3 отдельных экспериментах.The Figure 1 presents an illustrative graph of the induction of EAE in Lewis rats immunized with guinea pig MBP 68-82 . The average daily clinical score + SEM is presented for each group of rats, where (*) means a statistically significant difference with p <0.05 compared with treatment with MTA, and (**) means a statistically significant difference with p <0.005 compared with treatment with MTA. These data were obtained in 3 separate experiments.
На Фигуре 2 представлен иллюстративный график индукции хронически-протекающего ЭАЭ у крыс линии DA, иммунизированных посредством rMOG. Среднее значение ежедневной оценки клинических показателей +S.E.M. представлено для каждой группы крыс, где (*) означает статистически значимое различие c р<0,005, по сравнению с лечением посредством МТА.The Figure 2 presents an illustrative graph of the induction of chronic-flowing EAE in rats of the DA line immunized with rMOG. Average daily clinical score + S.E.M. presented for each group of rats, where (*) means a statistically significant difference with p <0.005, compared with treatment with MTA.
На Фигуре 3 представлен иллюстративный график кривой выживаемости крыс DA, иммунизированных посредством MOG, до тех пор, пока они не достигнут умеренного нарушения функций (клинический показатель=3,5) (p<0,001 по критерию Бреслоу) [Фигура 3A], и кривой выживаемости крыс DA, иммунизированных посредством MOG, до тех пор, пока не наступит смерть (клинический показатель=5) (p=0,02 по критерию Бреслоу) [Фигура 3B].Figure 3 presents an illustrative graph of the survival curve of DA rats immunized with MOG until they achieve moderate dysfunction (clinical score = 3.5) (p <0.001 by Breslow test) [Figure 3A], and survival curve DA rats immunized with MOG until death occurs (clinical score = 5) (p = 0.02 by Breslow test) [Figure 3B].
На Фигуре 4 представлена гистограмма, на которой показан MBP-специфический ответ T-лимфоцитов на 16 день после иммунизации у крыс Льюиса, иммунизированных посредством MBP. Данные результаты выражены как среднее значение индекса стимуляции, где (*) означает статистически значимое различие с р<0,05, по сравнению с использованием плацебо.Figure 4 is a bar graph showing the MBP-specific response of T lymphocytes on
На Фигуре 5 представлена гистограмма, на которой показан характер экспрессии мРНК IL-2, IFN-γ, TNF, IL-10 и iNOS в спленоцитах крыс с ЭАЭ. Эти данные выражены относительно уровня 18S рРНК конститутивного гена, где (*) означает статистически значимое различие с р<0,05, по сравнению с использованием MTA.The Figure 5 presents a histogram showing the expression pattern of mRNA of IL-2, IFN-γ, TNF, IL-10 and iNOS in splenocytes of rats with EAE. These data are expressed relative to the level of the 18S rRNA of the constitutive gene, where (*) means a statistically significant difference with p <0.05, compared with the use of MTA.
На Фигуре 6 представлена гистограмма, на которой показаны гистологические показатели воспаления и демиелинизирующих повреждений, где (*) означает статистически значимое различие с р<0,05, по сравнению с использованием MTA.Figure 6 is a bar graph showing histological indicators of inflammation and demyelinating lesions, where (*) means a statistically significant difference with p <0.05 compared to using MTA.
Подробное описание данного изобретенияDetailed Description of the Invention
В одном аспекте данное изобретение относится к применению МТА,In one aspect, the invention relates to the use of MTA,
его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств, при изготовлении лекарственного средства, предназначенного для (i) предотвращения и/или лечения аутоиммунного заболевания или (ii) для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата.its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, in the manufacture of a medicament for (i) preventing and / or treating an autoimmune disease or (ii) for preventing and / or treating transplant rejection.
Используемый термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к любой соли МТА, которую можно использовать при изготовлении лекарственного средства. Природа соли не важна, при условии, если она фармацевтически приемлема. К фармацевтически приемлемым солям МТА относятся кислотно-аддитивные соли, которые могут быть получены из органических и неорганических кислот посредством стандартных методов, хорошо известных специалисту из уровня техники, посредством проведения реакции соответствующей кислоты с МТА в соответствующем стехиометрическом количестве. Иллюстративные примеры кислот, которые можно использовать для получения этих кислотно-аддитивных солей, включают, но не ограничиваются ими, органические кислоты, такие как, например, аскорбиновая кислота, лимонная кислота, 1,4-бутандисульфоновая кислота, р-толуолсульфоновая кислота, и тому подобное, или неорганические кислоты, такие как, например, соляная кислота, серная кислота, и тому подобное. В качестве иллюстрации, например, гидрохлорид МТА можно использовать в композициях для инъекций; гидрохлорид МТА, сульфат МТА, цитрат МТА, аскорбат МТА, 1,4-бутандисульфонат МТА (таблетка с энтеросолюбильным покрытием), п-толуолсульфонат МТА можно использовать в пероральных композициях.As used herein, “pharmaceutically acceptable salts” refers to any MTA salt that can be used in the manufacture of a medicament. The nature of the salt is not important, provided that it is pharmaceutically acceptable. Pharmaceutically acceptable salts of MTA include acid addition salts that can be prepared from organic and inorganic acids by standard methods well known to those skilled in the art by reacting the corresponding acid with MTA in an appropriate stoichiometric amount. Illustrative examples of acids that can be used to prepare these acid addition salts include, but are not limited to, organic acids such as, for example, ascorbic acid, citric acid, 1,4-butanedisulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, and similar, or inorganic acids, such as, for example, hydrochloric acid, sulfuric acid, and the like. By way of illustration, for example, MTA hydrochloride can be used in injection compositions; MTA hydrochloride, MTA sulfate, MTA citrate, MTA ascorbate, MTA 1,4-butanedisulfonate (enteric-coated tablet), MTA p-toluenesulfonate can be used in oral compositions.
Кроме того, в диапазон данного изобретения включены пролекарства МТА. Термин «пролекарство» включает в себя любое соединение, полученное из МТА, например эфир, амид и тому подобное, которое при введении индивидууму, способно доставить МТА, напрямую или опосредованно, в организм указанного индивидуума. Предпочтительно указанным производным является соединение, которое повышает биологическую доступность МТА при введении индивидууму или которое стимулирует высвобождение МТА из биологического компартмента. Происхождение указанного производного непринципиально, при условии, что его можно вводить в организм индивидуума и что оно обеспечивает МТА в биологическом компартменте. Изготовление указанного пролекарства можно осуществить посредством стандартных способов, известных специалисту в уровне техники.In addition, MTA prodrugs are included in the range of this invention. The term “prodrug” includes any compound derived from MTA, for example, ether, amide, and the like, which, when administered to an individual, is capable of delivering MTA, directly or indirectly, to the body of the indicated individual. Preferably, said derivative is a compound that increases the bioavailability of MTA when administered to an individual, or which stimulates the release of MTA from the biological compartment. The origin of the specified derivative is unprincipled, provided that it can be introduced into the body of the individual and that it provides MTA in the biological compartment. The manufacture of this prodrug can be carried out by standard methods known to the person skilled in the art.
MTA является коммерческим продуктом, который может быть поставлен фирмой Sigma. Альтернативно, указанное соединение может быть получено известными способами, например из S-аденозилметионина (SAM), с последующей обработкой, описанной у Schlenk F. et al., Arch. Biochem. Biophys., 1964, 106:95-100, как указано в примере, который включен в данное описание.MTA is a commercial product that can be supplied by Sigma. Alternatively, said compound can be prepared by known methods, for example, from S-adenosylmethionine (SAM), followed by the treatment described by Schlenk F. et al., Arch. Biochem. Biophys., 1964, 106: 95-100, as indicated in the example, which is included in this description.
Для введения в качестве предотвращения и/или лечения аутоиммунного заболевания, например РС, или предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата, из МТА, его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств, должны быть получены соответствующие фармацевтические композиции, в терапевтически эффективном количестве, совместно с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, адъювантами или инертными наполнителями.In order to administer as an prevention and / or treatment of an autoimmune disease, such as MS, or to prevent and / or treat transplant rejection, from MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, appropriate pharmaceutical compositions must be prepared in a therapeutically effective amount, together with one or more pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants or excipients.
Примеры фармацевтических композиций включают любую твердую (например, таблетки, капсулы, гранулы и тому подобное) или жидкую композицию (например, растворы, суспензии, эмульсии и тому подобное) для применения посредством соответствующего пути введения, например перорально, подкожно, внутрибрюшинно, внутривенно, и тому подобное; обычно, посредством перорального пути введения, по причине хронического течения заболевания, подвергающегося лечению.Examples of pharmaceutical compositions include any solid (e.g., tablets, capsules, granules and the like) or liquid composition (e.g., solutions, suspensions, emulsions and the like) for use via an appropriate route of administration, e.g., orally, subcutaneously, intraperitoneally, intravenously, and the like; usually via the oral route of administration, due to the chronic course of the disease being treated.
В конкретном варианте осуществления указанные фармацевтические композиции могут быть в форме для перорального применения, либо в твердой, либо в жидкой форме. Примеры фармацевтических форм для перорального применения включают в себя таблетки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии и тому подобное и могут содержать в себе традиционные инертные наполнители, например связывающие, разбавляющие, дизентегрирующие вещества, смазывающее вещество, увлажняющие вещества, и тому подобное, наполнители, и могут быть получены посредством стандартных способов. Данные фармацевтические композиции также могут быть адаптированы для парентерального введения, в форме, например, растворов, суспензий или стерильных, лиофилизированных продуктов, в соответствующей лекарственной форме; в этом случае указанные фармацевтические композиции должны включать в себя соответствующие наполнители, такие как буферы, поверхностно-активные соединения и тому подобное. В любом случае, данные наполнители должны быть выбраны исходя из выбранного пути введения данной фармацевтической формы. Ознакомиться с различными фармацевтическими формами для применения лекарственного средства и их изготовлением можно в книге «Tratado de Farmacia Galenica», de C. Fauli i Trillo, 10th Edition, 1993, Luzan 5, S.A. de Ediciones.In a specific embodiment, said pharmaceutical compositions may be in oral form, either in solid or liquid form. Examples of pharmaceutical forms for oral administration include tablets, capsules, granules, solutions, suspensions and the like, and may contain conventional inert excipients, for example binders, diluents, disintegrating agents, a lubricant, wetting agents, and the like, excipients, and can be obtained by standard methods. These pharmaceutical compositions can also be adapted for parenteral administration, in the form of, for example, solutions, suspensions or sterile, lyophilized products, in an appropriate dosage form; in this case, said pharmaceutical compositions should include appropriate excipients, such as buffers, surfactants and the like. In any case, these excipients should be selected based on the chosen route of administration of this pharmaceutical form. You can familiarize yourself with the various pharmaceutical forms for the use of the drug and their manufacture in the book "Tratado de Farmacia Galenica", de C. Fauli i Trillo, 10th Edition, 1993,
Для его применения при лечении МТА предпочтительно должен находиться в фармацевтически приемлемой или по существу чистой форме, а именно МТА должен иметь фармацевтически приемлемый уровень чистоты, исключая фармацевтически приемлемые наполнители и не включая вещество, являющееся токсическим при нормальных уровнях дозировки. Уровни чистоты МТА предпочтительно составляют выше 50%, более предпочтительно выше 70%, более предпочтительно выше 90%. В предпочтительном варианте осуществления они составляют более 95% МТА.For its use in the treatment of MTA, it should preferably be in a pharmaceutically acceptable or substantially pure form, namely, MTA should have a pharmaceutically acceptable level of purity, excluding pharmaceutically acceptable excipients and not including a substance that is toxic at normal dosage levels. MTA purity levels are preferably above 50%, more preferably above 70%, more preferably above 90%. In a preferred embodiment, they comprise more than 95% MTA.
В целом, вводимое терапевтически эффективное количество МТА должно зависеть, среди прочих факторов, от принимающего лечение индивидуума, тяжести заболевания, которым страдает данный индивидуум, выбранного способа применения, и тому подобного. Ввиду этого, дозы, упомянутые в данном изобретении, должны рассматриваться исключительно в качестве ориентира для специалиста в уровне техники, и последний должен скорректировать данные дозы на основании указанных параметров. Тем не менее, МТА можно применять один или несколько раз в день, например 1, 2, 3 или 4 раза в день, обычное суммарное суточное количество составляет от 25 до 75 мг/кг/день.In general, the therapeutically effective amount of MTA administered should depend, among other factors, on the individual receiving the treatment, the severity of the disease that the individual is suffering from, the chosen route of administration, and the like. In view of this, the doses mentioned in this invention should be considered solely as a guide for a person skilled in the art, and the latter should adjust these doses based on these parameters. However, MTA can be used once or several times a day, for example 1, 2, 3 or 4 times a day, the usual total daily amount is from 25 to 75 mg / kg / day.
МТА, его фармацевтически приемлемые соли и/или пролекарства и фармацевтические композиции, в которых они содержатся, можно применять в сочетании с другими дополнительными лекарственными средствами, которые применяются для предотвращения и/или лечения аутоиммунных заболеваний или отторжения трансплантата, например кортикоидами, иммуносупрессантами, иммуномодуляторами, и тому подобным, для обеспечения комбинированного лечения. Указанные дополнительные лекарственные средства могут являться частью той же фармацевтической композиции или, альтернативно, могут быть в составе отдельной композиции для одновременного или неодновременного введения с фармацевтической композицией, в состав которой входит МТА, или его пролекарство, или его фармацевтически приемлемая соль.MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs and the pharmaceutical compositions in which they are contained can be used in combination with other additional drugs that are used to prevent and / or treat autoimmune diseases or transplant rejection, for example, corticoids, immunosuppressants, immunomodulators, and the like, to provide combination treatment. These additional drugs may be part of the same pharmaceutical composition or, alternatively, may be in a separate composition for simultaneous or non-simultaneous administration with a pharmaceutical composition comprising MTA, or a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Используемое в описании выражение «аутоиммунное заболевание» означает заболевание, которое развивается в ответ на триггерные или агрессивные действия в защите пациента (иммунная система) по отношению к ее/его собственным тканям организма. Конкретнее, аутоиммунные заболевания характеризуются тем, что преобладает воспаление в результате приобретенного иммунитета (также называемое специфический или искусственный иммунитет), где иммунитет стимулируется после воздействия инфекционных агентов, и его главными компонентами являются лимфоциты. Перечень аутоиммунных заболеваний можно найти на Web-сайте Американского Общества по Аутоиммунным Заболеваниям [http://www.aarda.org]. Примеры аутоиммунных заболеваний включают в себя, но не ограничиваются: РС, болезнь Крона, ревматоидный артрит, сахарный диабет I типа, псориаз, волчанку, язвенный колит, витилиго, целиакия, васкулит, дерматомиозит, полимиозит, тироидит (Хашимото, болезнь Грейвса), миастению гравис, синдром Джулиана-Барре, увеит, плоский лишай, височный артериит, саркоидоз, сухой синдром (синдром Шегрена), бронхиальную астму, пемфигус, анкилозирующий спондилит, склеродермию, фибромиалгию, ревматический полиартрит и тому подобное.The expression “autoimmune disease” as used herein means a disease that develops in response to trigger or aggressive actions in protecting a patient (immune system) with respect to her / his own body tissues. More specifically, autoimmune diseases are characterized by the fact that inflammation predominates as a result of acquired immunity (also called specific or artificial immunity), where immunity is stimulated after exposure to infectious agents, and its main components are lymphocytes. A list of autoimmune diseases can be found on the American Autoimmune Disease Society Web site [http://www.aarda.org]. Examples of autoimmune diseases include, but are not limited to: MS, Crohn's disease, rheumatoid arthritis, type I diabetes, psoriasis, lupus, ulcerative colitis, vitiligo, celiac disease, vasculitis, dermatomyositis, polymyositis, thyroiditis (Hashimoto, Graves disease), myasthenia gravis gravis, Julian-Barre syndrome, uveitis, lichen planus, temporal arteritis, sarcoidosis, dry syndrome (Sjogren's syndrome), bronchial asthma, pemphigus, ankylosing spondylitis, scleroderma, fibromyalgia, rheumatic fever and the like.
В определенном варианте осуществления данное изобретение относится к применению МТА, его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств, при изготовлении лекарственного средства, предназначенного для предотвращения и/или лечения РС, в частности для лечения РС, более конкретно для предотвращения и/или лечения РС для предотвращения появления последующих вспышек или прогрессирования данного заболевания (прогрессирующая фаза) у индивидуума, страдающего РС, то есть после того, как РС уже развился. Испытания, проведенные авторами данного изобретения, в дополнение к предотвращающему действию МТА на развитие аутоиммунности, наблюдаемой при предотвращении ЭАЭ у крыс Льюиса, иммунизированных с помощью МВР (модель острого ЭАЭ), показали, что МТА также имеет лечебный эффект при хронической аутоиммунности, поскольку лечение с помощью МТА привело к улучшению клинических проявлений и выживаемости, когда заболевание (РС) уже развилось, что было выявлено в модели ХР-ЭАЭ на крысах линии DA, иммунизированных с помощью rMOG. Этот аспект является высоко значимым, поскольку в настоящее время, если болезнь уже развилась, можно использовать только иммуномодулирующие схемы лечения, невозможно проводить профилактическое лечение, поскольку не существует пресимптоматических маркеров.In a specific embodiment, the invention relates to the use of MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, in the manufacture of a medicament for the prevention and / or treatment of MS, in particular for the treatment of MS, more particularly for the prevention and / or treatment of MS for preventing the occurrence of subsequent outbreaks or the progression of the disease (progressive phase) in an individual suffering from MS, that is, after MS has already developed. Tests conducted by the authors of this invention, in addition to the preventive effect of MTA on the development of autoimmunity observed in the prevention of EAE in Lewis rats immunized with MBP (acute EAE model), showed that MTA also has a therapeutic effect in chronic autoimmunity, since treatment with using MTA led to an improvement in clinical manifestations and survival when the disease (MS) had already developed, which was identified in the XP-EAE model in DA line rats immunized with rMOG. This aspect is highly significant, because at present, if the disease has already developed, it is possible to use only immunomodulating treatment regimens, it is impossible to carry out preventive treatment, since there are no asymptomatic markers.
В другом специфическом варианте осуществления данное изобретение относится к применению МТА, его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств, при изготовлении лекарственного средства, предназначенного для предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата. MTA, его фармацевтически приемлемые соли и/или пролекарства можно применять для предотвращения и/или лечения отторжения практически любого трансплантата. Примеры таких трансплантатов включают в себя, но не ограничиваются: почки, печень, сердце, легкие, кишечник, гематопоэтический и костный мозг, кожу, конечности, роговицу, поджелудочную железу, стволовые клетки и клеточную терапию, импланты или биоматериалы и тому подобное.In another specific embodiment, the invention relates to the use of MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, in the manufacture of a medicament for the prevention and / or treatment of transplant rejection. MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, can be used to prevent and / or treat rejection of virtually any transplant. Examples of such grafts include, but are not limited to: kidneys, liver, heart, lungs, intestines, hematopoietic and bone marrow, skin, limbs, cornea, pancreas, stem cells and cell therapy, implants or biomaterials and the like.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения аутоиммунного заболевания у индивидуума, страдающего аутоиммунным заболеванием, который включает в себя введение терапевтически эффективного количества МТА, или одной из его фармацевтически приемлемых солей или пролекарства, в организм указанного индивидуума. Аутоиммунные заболевания, которые можно лечить, определены выше, поскольку имеют особенности введения фармацевтической композиции и терапевтически эффективного количества МТА. В определенном варианте осуществления указанным аутоиммунным заболеванием является РС. MTA, его фармацевтически приемлемые соли и/или пролекарства, в определенном варианте осуществления, можно применять для предотвращения появления последующих вспышек у индивидуума, страдающего РС, или замедления прогрессирования РС (прогрессирующая фаза) у индивидуума, страдающего РС.In another aspect, this invention relates to a method for preventing and / or treating an autoimmune disease in an individual suffering from an autoimmune disease, which comprises administering a therapeutically effective amount of MTA, or one of its pharmaceutically acceptable salts or prodrugs, to the body of said individual. Autoimmune diseases that can be treated are defined above, since they have the particularities of administering a pharmaceutical composition and a therapeutically effective amount of MTA. In a specific embodiment, said autoimmune disease is MS. MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, in a specific embodiment, can be used to prevent the occurrence of subsequent outbreaks in an individual suffering from MS, or to slow the progression of MS (progressive phase) in an individual suffering from MS.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения отторжения трансплантата у индивидуума, который собирается получить трансплантацию или кто уже получил трансплантацию, который включает в себя введение в организм указанного индивидуума терапевтически эффективного количества МТА, или одной из его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств. Примеры трансплантатов, не ограниченные, отторжение которых можно предотвратить или лечить с помощью МТА, его фармацевтически приемлемых солей и/или пролекарств, уже упомянуты, поскольку имеют особенности введения фармацевтической композиции и терапевтически эффективного количества МТА. Указанную фармацевтическую композицию можно применять либо до, либо после трансплантации (то есть для профилактических или терапевтических целей), или иначе, до или после трансплантации, даже если изначально нет признаков отторжения (то есть для профилактических целей).In another aspect, the invention relates to a method for preventing and / or treating transplant rejection in an individual who is about to receive a transplant or who has already received a transplant, which comprises administering to the body of said individual a therapeutically effective amount of MTA, or one of its pharmaceutically acceptable salts, and / or prodrugs. Examples of transplants, not limited to, the rejection of which can be prevented or treated with MTA, its pharmaceutically acceptable salts and / or prodrugs, are already mentioned because they have the features of the introduction of the pharmaceutical composition and a therapeutically effective amount of MTA. The specified pharmaceutical composition can be used either before or after transplantation (i.e. for prophylactic or therapeutic purposes), or otherwise, before or after transplantation, even if initially there are no signs of rejection (i.e. for prophylactic purposes).
Используемый здесь термин «индивидуум» означает любое млекопитающее, в том числе, но, не ограничиваясь этим, домашних животных, грызунов, приматов и человека. Предпочтительно указанным индивидуумом является человек, мужчина или женщина, любого возраста или расы.As used herein, the term "individual" means any mammal, including, but not limited to, domestic animals, rodents, primates, and humans. Preferably, said individual is a person, man or woman, of any age or race.
В специфическом варианте осуществления данного изобретения МТА вводят отдельно или в комбинации с другими схемами лечения, или другими лекарственными средствами, в форме комбинированной терапии.In a specific embodiment of the invention, MTAs are administered alone or in combination with other treatment regimens, or other drugs, in the form of combination therapy.
Следующий пример иллюстрирует данное изобретение и не должен рассматриваться как ограничивающий его диапазон.The following example illustrates the invention and should not be construed as limiting its range.
ПримерExample
Начиная с 1970-х годов считают, что модель острого Экспериментального Аутоиммунного Энцефаломиелита (ЭАЭ) была моделью для Рассеянного Склероза (РС) и что, таким образом, эффективные способы лечения острого ЭАЭ также должны быть эффективными для РС. Тем не менее, проверили сотни соединений, которые были эффективны при остром ЭАЭ, но не при РС (Hohlfeld R. & Wekerle H. Proceeding National Academy of Sciences USA, October 2004, Vol. 101, Suppl. 2, page 14, 599, heading: MS and EAE, paragraph 3). В свете этого, кроме демонстрации эффективности для предотвращения острого ЭАЭ, необходимо доказать эффективность при лечении хронически рецидивирующего ЭАЭ (модель РС в целом). В этом отношении, в данном примере использовали две экспериментальные модели на животных, не являющихся человеком, для доказательства эффективности МТА при лечении аутоиммунного заболевания и, в особенности, РС; в частности, (i) острый ЭАЭ у крыс Льюиса, иммунизированных с помощью MBP [модель вспышки РС и Острого Рассеянного Энцефаломиелита (ОРЭ)], и (ii) хронически рецидивирующий ЭАЭ (ХР-ЭАЭ) у крыс линии Dark Agouti (DA), иммунизированных с помощью MOG [модель РС].Since the 1970s, it has been believed that the Acute Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) model has been a model for Multiple Sclerosis (MS) and that, therefore, effective treatments for acute EAE should also be effective for MS. However, hundreds of compounds that were effective in acute EAE but not in MS were tested (Hohlfeld R. & Wekerle H. Proceeding National Academy of Sciences USA, October 2004, Vol. 101, Suppl. 2,
I. Материалы и МетодыI. Materials and Methods
ЖивотныеAnimals
Для модели острого ЭАЭ, вызванного посредством иммунизации с помощью основного миелинового белка (MBP), использовали Charles River самок крыс Льюиса в возрасте 6-8 недель, с массой тела 175-200 грамм.For the model of acute EAE induced by immunization with basic myelin protein (MBP), Charles River female Lewis rats aged 6-8 weeks old were used, weighing 175-200 grams.
Для модели хронически рецидивирующего ЭАЭ, вызванного посредством иммунизации с помощью гликопротеина олигодендроцитов (MOG), использовали крыс линии Dark Agouti (DA) с массой тела приблизительно 200 грамм.Dark Agouti (DA) rats with a body weight of approximately 200 grams were used to model a chronically recurring EAE caused by immunization with oligodendrocyte glycoprotein (MOG).
Животных содержали в пластиковых клетках в комнате с натуральным освещением и их обеспечивали кормом и водой исходя из дневной нормы.The animals were kept in plastic cages in a room with natural light and were provided with food and water based on the daily allowance.
Индукция и оценка ЭАЭEAE Induction and Assessment
Крыс Льюиса иммунизировали с помощью 100 мкл эмульсии, содержащей в себе физиологический раствор и неполный адъювант Фрейнда (IFA) с 75 мкг MBP (фрагмент 68-82 основного миелинового белка морской свинки (Sigma), в одинаковых объемах, и дополненной 4 мг/мл Mycobacterium tuberculosis H37RA (Difco). Вакцинацию проводили в основания обеих задних конечностей.Lewis rats were immunized with 100 μl of emulsion containing saline and incomplete Freund's adjuvant (IFA) with 75 μg MBP (fragment 68-82 of guinea pig myelin protein (Sigma), in equal volumes, and supplemented with 4 mg / ml Mycobacterium tuberculosis H37RA (Difco): Vaccination was performed on the bases of both hind limbs.
Крыс DA иммунизировали с помощью 100 мкл эмульсии, содержащей в себе физиологический раствор и неполный адъювант Фрейнда (IFA) с 75 мкг rMOG [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806] (очищенный в лаборатории авторов изобретения) в одинаковых объемах и также дополненной 4 мг/мл Mycobacterium tuberculosis. Вакцинацию проводили в основания обеих задних конечностей, как и в случае крыс Льюиса.DA rats were immunized with 100 μl of emulsion containing saline and Freund's incomplete adjuvant (IFA) with 75 μg rMOG [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806 ] (purified in the laboratory of the inventors) in equal volumes and also supplemented with 4 mg / ml Mycobacterium tuberculosis. Vaccination was carried out at the base of both hind limbs, as in the case of Lewis rats.
Данных животных взвешивали и ежедневно проверяли клинические симптомы ЭАЭ посредством слепой оценки результатов лечения. Тяжесть ЭАЭ оценивали, используя следующую шкалу: 0 = норма; 1 = вялый хвост; 2 = легкий парапарез задних конечностей, нестабильная локомоция; 3 = параплегия; 4 = тетрапарез; 5 = смерть.These animals were weighed and the clinical symptoms of EAE were monitored daily by blindly evaluating treatment outcomes. The severity of EAE was assessed using the following scale: 0 = normal; 1 = flaccid tail; 2 = mild paraparesis of the hind limbs, unstable locomotion; 3 = paraplegia; 4 = tetraparesis; 5 = death.
ЛечениеTreatment
Крыс Льюиса, иммунизированных с помощью MBP, случайным образом делили на 2 группы. Одну группу лечили с помощью МТА (концентрация 100 мкМ) в дозе 4,3 мг/животное (эквивалент 28,6 мкг/кг массы тела). Данный МТА синтезировали из SAM (Europharma, Madrid (Spain)), в соответствии процедурам, описанным у Schlenk F. et al., Arch. Biochem. Biophys., 1964, 106: 95-100, в отделе Гепатологии и Генной терапии Факультета Внутренних Болезней, CIMA, Университета г.Наварра, восстанавливали в 10% диметилсульфоксиде (DMSO), а другую группу, получавшую плацебо, обрабатывали физиологическим раствором в 10% DMSO посредством внутрибрюшинной инъекции (в/б) ежедневно после иммунизации.Lewis rats immunized with MBP were randomly divided into 2 groups. One group was treated with MTA (concentration 100 μM) at a dose of 4.3 mg / animal (equivalent to 28.6 μg / kg body weight). This MTA was synthesized from SAM (Europharma, Madrid (Spain)), in accordance with the procedures described by Schlenk F. et al., Arch. Biochem. Biophys., 1964, 106: 95-100, in the Department of Hepatology and Gene Therapy, Faculty of Internal Medicine, CIMA, University of Navarra, was restored in 10% dimethyl sulfoxide (DMSO), and the other placebo group was treated with saline in 10% DMSO by intraperitoneal injection (ip) daily after immunization.
Крыс DA, иммунизированных с помощью rMOG, также случайным образом делили на две группы, одну из которых обрабатывали, используя 100 мкМ MTA, восстановленного в 300 мМ Трис pH 7,8, а другую группу, получавшую плацебо, обрабатывали, используя только 300 мМ Трис. Данные обработки начинали на 15 день после иммунизации, и проводили ежедневно посредством инъекций в/б. Оценку проводили вслепую на всем протяжении болезни.RMOG DA rats were also randomly divided into two groups, one of which was treated using 100 μM MTA reconstituted in 300 mM Tris pH 7.8, and the other placebo group was treated using only 300 mM Tris . Processing data began on
Образцы тканейTissue samples
На 16 день болезни крысам Льюиса из двух групп давали анестезию и посредством внутрисердечной инъекции вводили 4% параформальдегид в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,6). Извлекали головной мозг и шейный, грудной и поясничный сегменты спинного мозга и фиксировали в течение всей ночи при 4°C. После фиксации данные ткани пропитывали парафином для гистопатологического и иммуногистохимического исследования.On
На 35 день после иммунизации крысам DA из двух групп также давали анестезию и проводили инъекцию согласно тому же протоколу. Ткани также обрабатывали тем же способом для гистопатологического и иммуногистохимического исследования.On
Также от каждого животного получали селезенку, печень и образцы крови. Селезенки и печени быстро замораживали в жидком азоте и хранили по частям при -80°C для обеспечения возможности изучения посредством ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией). Кровь центрифугировали при 800 об/мин в течение 10 минут для получения сыворотки, которую хранили при -80°C.Also, spleen, liver and blood samples were obtained from each animal. Spleen and liver were rapidly frozen in liquid nitrogen and stored in portions at -80 ° C to allow study by RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction). Blood was centrifuged at 800 rpm for 10 minutes to obtain serum, which was stored at -80 ° C.
Выделение РНК и синтез кДНКRNA isolation and cDNA synthesis
Фрагменты тканей селезенки и печени гомогенизировали в лизирующем буфере для выделения РНК с 2% β-меркаптэтанола, используя ручной гомогенизатор. Общую РНК выделяли, используя мини-набор Rneasy Mini Kit (Quiagen), следуя инструкциям фирмы-производителя. Во время очистки РНК ДНК удаляли посредством обработки ДНазой. Концентрацию РНК и ее чистоту определяли посредством измерения поглощения при 260 нм и 280 нм на спектрофотометре (Eppendorf). Обратную транскрипцию общей РНК проводили, используя набор High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems). Реакцию обратной транскрипции проводили при 25°C в течение 10 минут, 37°C в течение 2 часов и в заключение хранили при 4°C.Fragments of spleen and liver tissue were homogenized in lysis buffer to isolate RNA with 2% β-mercaptanol using a manual homogenizer. Total RNA was isolated using the Rneasy Mini Kit (Quiagen), following the manufacturer's instructions. During RNA purification, DNA was removed by treatment with DNase. The concentration of RNA and its purity were determined by measuring the absorption at 260 nm and 280 nm on a spectrophotometer (Eppendorf). Reverse transcription of total RNA was performed using the High Capacity cDNA Archive Kit (Applied Biosystems). The reverse transcription reaction was carried out at 25 ° C for 10 minutes, 37 ° C for 2 hours and finally stored at 4 ° C.
Конструкция праймеров и зондовPrimer and probe design
Использовали флуоресцентно меченные Taqman последовательности праймеров и специфические зонды (Taqman Gene Expression Assays) (Applied Biosystems) для 18S рРНК эукариот, интерферона-гамма (IFN-γ), интерлейкина 2 (IL-2), фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), интерлейкина 10 (IL-10) и индуцируемой синтазы оксида азота (iNOS).Used fluorescently labeled Taqman primer sequences and specific probes (Taqman Gene Expression Assays) (Applied Biosystems) for 18S rRNA of eukaryotes, interferon-gamma (IFN-γ), interleukin 2 (IL-2), tumor necrosis factor alpha (TNF-α) interleukin 10 (IL-10) and inducible nitric oxide synthase (iNOS).
Количественная ПЦР в режиме реального времениReal-time quantitative PCR
Для количественной ПЦР использовали универсальную смесь TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems). Амплификацию кДНК проводили в 96-луночных планшетах (MJ Research, Inc.) на системе, работающей в режиме реального времени Opticon 2 (MJ Research). Реакцию проводили в конечном объеме реакционной смеси 25 мкл, состоящей из 1-кратной универсальной смеси Taqman Universal Master Mix, 1-кратной реакционной смеси TaqMan Gene Expression Assay Mix (по 0,9 мкМ каждого праймера и 0,25 мкМ зонда) и 20 нг кДНК, растворенной в воде, свободной от РНаз и ДНаз.For quantitative PCR, the TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems) was used. Amplification of cDNA was carried out in 96-well plates (MJ Research, Inc.) on a real-time system Opticon 2 (MJ Research). The reaction was carried out in a final volume of a reaction mixture of 25 μl consisting of a 1-fold Taqman Universal Master Mix, a 1-fold TaqMan Gene Expression Assay Mix (0.9 μM each primer and 0.25 μM probe) and 20 ng cDNA dissolved in water free of RNase and DNase.
Условия реакции были следующие: 2 мин при 50°C, 10 мин при 95°C и 40 15-с циклов при 95°C и 1 мин при 60°C. Каждый образец нагружали в трех повторах на каждый планшет и бланк, и эндогенный контроль амплифицировали в отдельных лунках.The reaction conditions were as follows: 2 min at 50 ° C, 10 min at 95 ° C and 40 15-s cycles at 95 ° C and 1 min at 60 ° C. Each sample was loaded in triplicate on each plate and blank, and the endogenous control was amplified in separate wells.
Уровни экспрессии мРНК IL-2, IFN-γ, TNF-α, IL-10 и iNOS количественно определяли по отношению к 18S рРНК конститутивного гена.The levels of IL-2, IFN-γ, TNF-α, IL-10 and iNOS mRNA expression were quantified with respect to the 18S rRNA of the constitutive gene.
Гистопатология, воспаление и демиелинизацияHistopathology, inflammation and demyelination
Проводили гистопатологическую оценку срезов головного мозга и спинного мозга, заключенных в парафин. Эти срезы окрашивали с помощью гематоксилин-эозина (ГЭ) и Люксола быстрого голубого, для оценки тканевого воспаления и демиелинизации. Для каждой крысы исследовали 24-30 сагиттальных срезов. Слепую полуколичественную гистологическую оценку воспаления и демиелинизации проводили, как описано ранее [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806].A histopathological evaluation of sections of the brain and spinal cord enclosed in paraffin was performed. These sections were stained with hematoxylin-eosin (HE) and Luxol fast blue to evaluate tissue inflammation and demyelination. For each rat, 24-30 sagittal sections were examined. Blind semi-quantitative histological evaluation of inflammation and demyelination was performed as described previously [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806].
ИммуногистохимияImmunohistochemistry
Иммуногистохимические процедуры проводили на 10 мкм срезах головного мозга и спинного мозга, заключенных в парафин. Эндогенную пероксидазную активность инактивировали посредством 0,3% H2O2 в метаноле в течение 20 мин.Immunohistochemical procedures were performed on 10 μm sections of the brain and spinal cord, enclosed in paraffin. Endogenous peroxidase activity was inactivated by 0.3% H 2 O 2 in methanol for 20 minutes.
Данные срезы инкубировали в течение 30 мин в PBS с 0,5% Tween® 20 и 10% козьей или лошадиной сыворотки (Vector Laboratorios) и в течение 2 часов в PBS с 0,5% Tween® 20 и первичными антителами в следующих разведениях: поликлональное кроличье антитело к глиальному фибриллярному кислому белку (GFAP), 1:1000 (Dakocytomation); мышиное антитело к белку-предшественнику бета-амилоида (APP), 1:100 (Zymed Laboratorios); анти-IgA антитело мыши (OX-6), 1:200 (Serotec); анти-CD8 антитело крысы, 1:250 (Serotec); антитело анти-iNOS II типа, 1:250 (Serotec); анти-CD68 антитело крысы (ED1), 1:200 (Serotec) и анти-CD43 антитело крысы (W3/13), 1:50 (Serotec). Далее, срезы отмывали с помощью PBS и инкубировали в течение 45 мин при комнатной температуре с соответствующим биотинилированным вторичным IgG антителом (1:100 в PBS; Vector Laboratorios), с последующими несколькими отмывками с помощью PBS/Tween® и 45-минутным инкубированием при комнатной температуре с авидин-биотиновым пероксидазным комплексом (ABC, Vector Laboratorios).These sections were incubated for 30 min in PBS with 0.5
После отмывок с помощью PBS/Tween® выявляли иммунологическую реактивность, используя 0,5 мг/мл 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорида (DAB; Sigma). Специфичность иммунной реакции определяли в результате инкубирования данных срезов без первичного антитела. Используя оптический микроскоп получали изображения.After washes using PBS / Tween ® immunological reactivity was detected using 0.5 mg /
Анализ пролиферации лимфоцитовLymphocyte Proliferation Analysis
Спленоциты, полученные от крыс с ЭАЭ и неиммунизированных крыс, очищали посредством центрифугирования в градиенте плотности фикол-гипака. Анализ пролиферации лимфоцитов проводили таким же способом, как описано ранее [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806].Splenocytes obtained from rats with EAE and non-immunized rats were purified by centrifugation in a density gradient of ficol-hypak. Analysis of lymphocyte proliferation was carried out in the same manner as previously described [Villoslada, P., et al., J. Exp Med, 2000. 191 (10): 1799-806].
Вкратце, спленоциты помещали в концентрации 2 × 106/мл в среду для культивирования RPMI 1640, дополненную 10% эмбриональной сывороткой теленка и пенициллином/стрептомицином, в присутствии или отсутствие фитогемагглютинина (ФГА, 5 мкг/мл), MBP (10 мкг/мл), MTA (100 мкМ) и DMSO. Данные культуры инкубировали в течение 5 дней в 96-луночных круглодонных планшетах (0,2 мл/лунку) при 37°C. Данные лунки бомбардировали 0,5 мкКи [3Н]TdR в течение 18 часов. Считывание показателей осуществляли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. Результаты выражены как среднее значение индекса стимуляции, полученное из трех определений.Briefly, splenocytes were placed at a concentration of 2 × 10 6 / ml in RPMI 1640 culture medium supplemented with 10% fetal calf serum and penicillin / streptomycin, in the presence or absence of phytohemagglutinin (PHA, 5 μg / ml), MBP (10 μg / ml ), MTA (100 μM) and DMSO. These cultures were incubated for 5 days in 96-well round-bottom plates (0.2 ml / well) at 37 ° C. These wells were bombarded with 0.5 μCi [ 3 H] TdR for 18 hours. Reading indicators was carried out using a liquid scintillation counter. The results are expressed as the average value of the stimulation index obtained from three determinations.
Статистический анализStatistical analysis
Статистическое сравнение осуществляли с использованием двустороннего критерия Манна-Уитни и кривых выживаемости. Значения p<0,05 считаются достоверными различиями. Статистическую оценку осуществляли с помощью статистической программы SPSS 11.0.Statistical comparisons were made using the bilateral Mann-Whitney test and survival curves. Values p <0.05 are considered significant differences. Statistical evaluation was performed using the statistical program SPSS 11.0.
II. РезультатыII. results
Действие МТА на развитие модели вспышки РС (острый ЭАЭ) у крыс Льюиса, иммунизированных с помощью МВРThe effect of MTA on the development of a model of an outbreak of MS (acute EAE) in Lewis rats immunized with MBR
Начиная со дня иммунизации, крыс Льюиса случайным образом разделили на группу, получающую МТА, и группу, получающую плацебо, и в обеих группах крыс ежедневно проводили внутрибрюшинные (в/б) инъекции. У всех животных, получавших плацебо, за исключением одного, развились неврологические симптомы ЭАЭ, включающие в себя нарастающую потерю массы тела, отсутствие силы в хвосте и паралич задних конечностей или умеренную или выраженную параплегию. Первые неврологические симптомы были выявлены на 12 день, среднее начало заболевания составляет 13,6±1,2 дней (n=21). Максимальное число баллов, набранных отдельными животными на протяжении данного эксперимента, составляло 1,48±1 (Таблица 1).Starting from the day of immunization, Lewis rats were randomly divided into a group receiving MTA and a group receiving placebo, and intraperitoneal (ip) injections were performed daily in both groups of rats. With the exception of one, all animals receiving placebo developed neurological symptoms of EAE, including increasing weight loss, lack of tail strength and hind limb paralysis, or moderate or severe paraplegia. The first neurological symptoms were detected on
Напротив, у тех животных, которые получали МТА, либо не развивались никакие клинические симптомы, или же наблюдалось устойчивое ослабление течения заболевания. У тех животных, у которых развились клинические симптомы, начало заболевания было отсрочено, по сравнению с группой, получавшей плацебо (день 15±1,2). Максимальные балльные показатели наблюдаемых клинических симптомов были значительно ниже, чем таковые в группе, получавшей плацебо (0,14±0,23) (Таблица 1) (Фигура 1).In contrast, those animals that received MTA either did not develop any clinical symptoms, or there was a steady weakening of the course of the disease. In those animals that developed clinical symptoms, the onset of the disease was delayed compared with the placebo group (
Действие MTA на развитие модели РС (ХР-ЭАЭ) у крыс DA, иммунизированных с помощью MOGThe effect of MTA on the development of the PC model (XP-EAE) in DA rats immunized with MOG
После того как животные пережили первую вспышку [5 дней после начала первой вспышки (приблизительно через 15-18 дней после иммунизации)], крыс DA случайным образом делили на группу, получающую МТА, и группу, получающую плацебо, и в обеих группах крыс ежедневно проводили внутрибрюшинные (в/б) инъекции. У всех данных животных развилась вторая вспышка заболевания, но различия между двумя группами по неврологическим симптомам, тяжести второй вспышки и выживаемости были значимыми. У тех животных, которые получали МТА, начало развития второй вспышки было отсрочено по сравнению с группой, получавшей плацебо (день 23,4±6,54), хотя эти различия не были значимыми. Максимальные балльные показатели наблюдаемых клинических симптомов были значительно ниже, чем таковые в группе, получавшей плацебо (2,7±1,75) (Таблица 2) (Фигура 2). Кроме того, процент выживания был значительно выше в группе, которая получала МТА (Фигура 3).After the animals survived the first outbreak [5 days after the start of the first outbreak (approximately 15-18 days after immunization)], DA rats were randomly divided into a group receiving MTA and a group receiving placebo, and in both groups of rats daily intraperitoneal (iv) injection. All of these animals developed a second outbreak, but the differences between the two groups in terms of neurological symptoms, the severity of the second outbreak, and survival were significant. In those animals that received MTA, the onset of the second outbreak was delayed compared with the placebo group (day 23.4 ± 6.54), although these differences were not significant. The maximum scores for the observed clinical symptoms were significantly lower than those in the placebo group (2.7 ± 1.75) (Table 2) (Figure 2). In addition, the survival rate was significantly higher in the group that received MTA (Figure 3).
MTA ингибирует пролиферацию лимфоцитовMTA inhibits lymphocyte proliferation
Для определения того, модифицирует ли лечение посредством МТА ответ периферической иммунной системы на антиген, использованный при иммунизации, пролиферативные ответы, индуцированные МВР, определяли в спленоцитах животных, получавших МТА и плацебо (у крыс Льюиса). Как можно видеть на фигуре 4, МВР-специфическая пролиферативная реакция была значительно ниже у тех животных, которые получали МТА. Таким образом, индекс стимуляции в группе, получавшей МТА, составлял 1,18±0,4, а в группе, получавшей плацебо, составлял 2,13±1,09, что означает, что лечение посредством МТА влияет на Т-клеточные реакции. Следовательно, выявлено, что МТА ингибирует МВР-специфическую активацию лимфоцитов, что указывает на его иммуномодулирующее действие.To determine whether treatment with MTA modifies the response of the peripheral immune system to the antigen used in immunization, proliferative responses induced by MBP were determined in splenocytes from animals receiving MTA and placebo (in Lewis rats). As can be seen in Figure 4, the MBP-specific proliferative response was significantly lower in those animals that received MTA. Thus, the stimulation index in the group receiving MTA was 1.18 ± 0.4, and in the group receiving placebo was 2.13 ± 1.09, which means that treatment with MTA affects T-cell responses. Therefore, it was revealed that MTA inhibits MBP-specific activation of lymphocytes, which indicates its immunomodulatory effect.
MTA модифицирует экспрессию цитокинов и провоспалительных медиаторовMTA modifies the expression of cytokines and pro-inflammatory mediators
Определяли, имеет ли МТА способность модифицировать экспрессию цитокинов и других провоспалительных медиаторов. Посредством количественной ПЦР в режиме реального времени (RT-PCR) анализировали экспрессию генов IL-2, IFN-γ, TNF-α, IL-10 и iNOS. Относительные уровни мРНК этих генов, изолированных из спленоцитов крыс Льюиса, получавших плацебо, и крыс, получавших МТА, представлены на фигуре 5. При сравнении, экспрессия мРНК указанных цитокинов была ниже у животных из группы, получавшей плацебо, хотя только уровни TNF значительно различались.It was determined whether MTA has the ability to modify the expression of cytokines and other pro-inflammatory mediators. Real-time quantitative PCR (RT-PCR) analyzed the expression of the IL-2, IFN-γ, TNF-α, IL-10, and iNOS genes. The relative mRNA levels of these genes isolated from splenocytes of Lewis rats receiving placebo and rats receiving MTA are shown in Figure 5. By comparison, mRNA expression of these cytokines was lower in animals from the placebo group, although only TNF levels were significantly different.
Гистологический анализHistological analysis
Нейропатологическое исследование подтвердило наблюдаемые клинические проявления иммунитета. Исследование спинного мозга и головного мозга животных, получавших плацебо, выявило множественные очаги воспаления. Воспалительные повреждения были обнаружены и в белом и в сером веществе шейного, грудного и поясничного отделов спинного мозга и в головном мозге. У тех крыс, которые получали МТА, обнаружено, что и количество, и размер воспалительных инфильтратов были меньше (фигура 6). В отношении и тяжести, и пораженных участков центральной нервной системы (ЦНС) обнаружили значительные различия между животными, получавшими плацебо, и животными, получавшими МТА. Лечение с помощью МТА ингибирует развитие воспалительного ЭАЭ у крыс Льюиса, иммунизированных посредством МВР. Иммуногистохимическое окрашивание выявило наличие нескольких типов клеток в воспалительных инфильтратах, в том числе макрофаги и активированные микроглиальные клетки (ED1), T-лимфоциты (W3/13) и B-лимфоциты (OX-6). Число позитивных ED1 и W3/13 клеток было выше в группе, получавшей плацебо, в то время как в обеих группах животных обнаружены одинаковые соотношения позитивных ОХ-6 клеток. В обеих группах при окрашивании на APP и iNOS выявлены очень низкие пределы обнаружения.A neuropathological study confirmed the observed clinical manifestations of immunity. Examination of the spinal cord and brain of placebo animals revealed multiple foci of inflammation. Inflammatory lesions were found in both the white and gray matter of the cervical, thoracic and lumbar spinal cord and in the brain. In those rats that received MTA, it was found that both the number and size of inflammatory infiltrates were smaller (Figure 6). With respect to both severity and affected areas of the central nervous system (CNS), significant differences were found between animals treated with placebo and animals treated with MTA. MTA treatment inhibits the development of inflammatory EAE in Lewis rats immunized with MBP. Immunohistochemical staining revealed the presence of several types of cells in inflammatory infiltrates, including macrophages and activated microglial cells (ED1), T-lymphocytes (W3 / 13) and B-lymphocytes (OX-6). The number of positive ED1 and W3 / 13 cells was higher in the placebo group, while the same ratios of positive OX-6 cells were found in both groups of animals. In both groups, staining for APP and iNOS revealed very low detection limits.
III. ОбсуждениеIII. Discussion
ЭАЭ представляет собой модель аутоиммунной реакции, которая критически зависит от активации Т-клеток. MBP- или MOG-специфические CD4+ клетки, два аутоантигена ЦНС могут индуцировать ЭАЭ. Активация лимфоцитов необходима для первичного внедрения в ЦНС. Распознавание данного антигена посредством CD4+ клеток требует экспрессии молекул MHC класса II в антигенпрезентирующих клетках (АПК). В нормальных условиях экспрессия этих молекул в ЦНС очень низкая. В результате секреции IFN-γ, мощного стимулятора экспрессии молекул МНС класса II в антигенпрезентирующих клетках, присутствующих в ЦНС, таких как микроглиальные клетки и астроциты, клетки Th 1 распознают миелин. Таким образом, лечение, которое препятствует активации Т-лимфоцитов, может ингибировать развитие аутоиммунных заболеваний, например ЭАЭ.EAE is a model of an autoimmune reaction that is critically dependent on T-cell activation. MBP or MOG-specific CD4 + cells, two CNS autoantigens can induce EAE. Activation of lymphocytes is necessary for primary introduction into the central nervous system. Recognition of this antigen by CD4 + cells requires the expression of class II MHC molecules in antigen-presenting cells (APCs). Under normal conditions, the expression of these molecules in the central nervous system is very low. As a result of the secretion of IFN-γ, a potent stimulator of the expression of MHC class II molecules in antigen-presenting cells present in the central nervous system, such as microglial cells and astrocytes,
Сниженная МВР-специфическая пролиферативная реакция у крыс Льюиса, иммунизированных с помощью МВР и получавших МТА, означает, что метилирование является крайне необходимым этапом в активации лимфоцитов. Конкурентное ингибирование реактивных Т-клеток относительно МВР предотвращает активирование аутореактивных лимфоцитов и проникновение воспалительных клеток в ЦНС посредством продукции цитокинов и/или хемокинов. Как следствие, это приводит к менее тяжелому течению заболевания, что можно видеть на клиническом уровне ЭАЭ и по результатам гистологического анализа животных, получавших МТА. Совокупный балльный показатель ЭАЭ в группе, которая получала МТА, значительно ниже, чем таковой в группе, получавшей плацебо, и гистологические анализы показывают, что число воспалительных повреждений значительно снижено.A reduced MBP-specific proliferative reaction in Lewis rats immunized with MBP and treated with MTA means that methylation is an essential step in lymphocyte activation. Competitive inhibition of reactive T cells relative to MBP prevents the activation of autoreactive lymphocytes and the penetration of inflammatory cells into the central nervous system through the production of cytokines and / or chemokines. As a result, this leads to a less severe course of the disease, which can be seen at the clinical level of EAE and according to the results of histological analysis of animals treated with MTA. The total EAE score in the MTA group was significantly lower than that in the placebo group, and histological analyzes showed that the number of inflammatory lesions was significantly reduced.
В дополнение к профилактическому действию МТА при развитии аутоиммунности, наблюдаемому для предотвращения ЭАЭ у крыс Льюиса, было обнаружено, что МТА также имеет лечебное действие при хронической аутоиммунности. Лечение с помощью МТА улучшает клинические проявления и выживаемость, когда заболевание уже развилось (после первой вспышки), как было проверено на модели ЭАЭ у крыс линии DA, иммунизированных с помощью MOG. В медицинском смысле этот аспект является критически значимым, поскольку иммуномодулирующие схемы лечения могут быть использованы на практике в случае, когда болезнь уже развилась, без возможности, в настоящее время, проводить профилактическое лечение, поскольку не существует пресимптоматических маркеров.In addition to the prophylactic action of MTA in the development of autoimmunity observed to prevent EAE in Lewis rats, it was found that MTA also has a therapeutic effect in chronic autoimmunity. Treatment with MTA improves clinical manifestations and survival when the disease has already developed (after the first outbreak), as was tested in the EAE model in DA rats immunized with MOG. In the medical sense, this aspect is critical, since immunomodulating treatment regimens can be used in practice when the disease has already developed, without the possibility, at present, to carry out preventive treatment, since there are no asymptomatic markers.
Цитокины, вырабатываемые Т-клетками, могут значительно влиять на течение заболевания. Как видно на фигуре 5, более низкие уровни экспрессии цитокинов обнаружены у тех крыс, которые получали МТА. Одной из характеристик ЭАЭ является активирование экспрессии iNOS в различных типах клеток. Авторы данного изобретения наблюдали, что экспрессия iNOS была более низкая в селезенках тех крыс, которые получали МТА. TNF является цитокином, который признан центральным медиатором системного воспаления и который, кроме того, способствует активированию экспрессии гена iNOS. В этой модели ЭАЭ (ХР-ЭАЭ) было обнаружено, что МТА также снижает уровни TNF-α. IL-2 является ключевым цитокином в Т-зависимых иммунных реакциях вследствие его мощной активности в качестве фактора роста для Т-клеток. Полученные результаты показывают, что МТА снижает лимфоцитарную продукцию IL-2 посредством ингибирования специфического активирования Т-клеток. Более того, эта молекула способна уменьшать продукцию IFN-γ. Все эти эффекты МТА свидетельствуют о том, что он способен изменять баланс цитокинов в сторону более противовоспалительного профиля.Cytokines produced by T cells can significantly affect the course of the disease. As can be seen in figure 5, lower levels of cytokine expression were found in those rats that received MTA. One of the characteristics of EAE is the activation of iNOS expression in various types of cells. The inventors of the present invention observed that iNOS expression was lower in the spleens of those rats that received MTA. TNF is a cytokine that is recognized as the central mediator of systemic inflammation and which, in addition, promotes the activation of iNOS gene expression. In this EAE (XP-EAE) model, MTA was also found to lower TNF-α levels. IL-2 is a key cytokine in T-dependent immune responses due to its potent activity as a growth factor for T cells. The results show that MTA reduces the lymphocyte production of IL-2 by inhibiting the specific activation of T cells. Moreover, this molecule is able to reduce the production of IFN-γ. All these effects of MTA indicate that it is able to change the balance of cytokines in the direction of a more anti-inflammatory profile.
В заключение, проведенные исследования показывают, что МТА предотвращает аутоиммунную реакцию в модели ЭАЭ на крысах Льюиса, иммунизированных с помощью МВР (острый ЭАЭ), и модифицирует или облегчает, то есть проявляет терапевтическое действие, течение заболевания в модели хронического ЭАЭ на крысах линии DA, иммунизированных с помощью rMOG (ХР-ЭАЭ). Вероятным механизмом, ответственным за эти защитные эффекты, является ингибирование МВР- или MOG-специфического активирования Т-клеток, хотя другие регуляторные пути могут участвовать в данном защитном действии. Эти находки открывают путь новым потенциальным способам лечения аутоиммунных заболеваний и отторжения трансплантата посредством использования лекарственного средства, которое легко синтезируется, эффективно и имеет малочисленные побочные действия, что представляло бы собой значительный прогресс в лечении таких заболеваний.In conclusion, studies show that MTA prevents the autoimmune response in the EAE model in Lewis rats immunized with MBP (acute EAE) and modifies or alleviates, i.e., exerts a therapeutic effect, the course of the disease in the chronic EAE model in DA rats, immunized with rMOG (XP-EAE). A likely mechanism responsible for these protective effects is the inhibition of MBP or MOG-specific activation of T cells, although other regulatory pathways may be involved in this protective effect. These findings pave the way for new potential treatments for autoimmune diseases and transplant rejection through the use of a drug that is easily synthesized, effective, and has few side effects, which would represent significant progress in the treatment of such diseases.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007138396/15A RU2393866C2 (en) | 2005-03-17 | 2005-03-17 | Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007138396/15A RU2393866C2 (en) | 2005-03-17 | 2005-03-17 | Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007138396A RU2007138396A (en) | 2009-04-27 |
| RU2393866C2 true RU2393866C2 (en) | 2010-07-10 |
Family
ID=41018422
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007138396/15A RU2393866C2 (en) | 2005-03-17 | 2005-03-17 | Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2393866C2 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998016184A2 (en) * | 1996-10-16 | 1998-04-23 | Icn Pharmaceuticals, Inc. | Purine l-nucleosides, analogs and uses thereof |
| RU2130308C1 (en) * | 1992-02-19 | 1999-05-20 | Дзе Скриппс Ресеч Инститьют | Method for treating the cases of multiple sclerosis by applying substituted adenine derivatives |
| RU2153885C2 (en) * | 1993-12-29 | 2000-08-10 | Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье | Method of realization of selective methionine cell starvation in mammal body, polynucleotide, catalytically active polypeptide of recombinant methylthioadenosine phosphorylase |
-
2005
- 2005-03-17 RU RU2007138396/15A patent/RU2393866C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2130308C1 (en) * | 1992-02-19 | 1999-05-20 | Дзе Скриппс Ресеч Инститьют | Method for treating the cases of multiple sclerosis by applying substituted adenine derivatives |
| RU2153885C2 (en) * | 1993-12-29 | 2000-08-10 | Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье | Method of realization of selective methionine cell starvation in mammal body, polynucleotide, catalytically active polypeptide of recombinant methylthioadenosine phosphorylase |
| WO1998016184A2 (en) * | 1996-10-16 | 1998-04-23 | Icn Pharmaceuticals, Inc. | Purine l-nucleosides, analogs and uses thereof |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Moreno В. et al. A Methylation-Inhibitor Suppresses T Cell Activation and Prevents Experimental Autoimmune Encephalo-myelitis, [Journal of Neuroimmunology 2004, Vol.154, numbers 1-2, page 85 абстракт N278] [on line] Найдено из интернет http//www.elsevier.com/locate/jneuroim. Руководство по медицине «THE MERCK MANUAL». - M.: Мир, 1997, т.1, с.1016-1018. ЭНЦИКЛОПЕДИЯ ЛЕКАРСТВ. - M.: РЛС, 2001, с.364, статья «интерферон альфа», с.142 статья «бетаферон». * |
| Грэхам-Смит Д.Г. и др. Оксфордский справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии. - M.: Медицина, 2000, с.25, 136-137. БЕЛОУСОВ Ю.Б. и др. Клиническая фармакология и фармакотерапия. - М.: Универсум паблишинг, 1997, с.36-38, фиг.6-9. реферат базы данных PubMed: Hevia H. et al. 5'-methylthio-adenosine modulates the inflammatory response to endotoxin in mice and in rat hepatocytes. Hepatology. 2004 Apr; 39(4): 1088-98 [on line] PMID: 15057913 [найдено 15.12.2008]. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007138396A (en) | 2009-04-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7339296B2 (en) | Enhancement of autophagy or extension of lifespan by administration of urolithins or their precursors | |
| US9795580B2 (en) | Ketone supplements for treatment of angelman syndrome | |
| Ridge et al. | Suppression of experimental allergic encephalomyelitis by mitoxantrone | |
| AU2006321165B2 (en) | Use of A3 adenosine receptor agonist in osteoarthritis treatment | |
| TWI659017B (en) | Use of indolyl and indolinyl hydroxamates for treating neurodegenerative disorders or cognitive deficits | |
| US20130035390A1 (en) | Treatment of multiple sclerosis | |
| KR20200101948A (en) | Neurological disease treatment | |
| EP1891961B1 (en) | Use of 5'-methylthioadenosine (mta) in the prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or transplant rejection | |
| Wang et al. | Spinal microglial activation promotes perioperative social defeat stress-induced prolonged postoperative pain in a sex-dependent manner | |
| EP3967302A1 (en) | Composition for preventing or treating liver diseases | |
| Hüseyin et al. | Cyclosporin treatment of anal and perianal lesions associated with Crohn’s disease | |
| RU2393866C2 (en) | Application of 5'-methylthioadenosine (mta) for prevention and/or treatment of autoimmune diseases and/or graft rejection | |
| AU758342B2 (en) | Methods of decreasing or preventing pain using spicamycin or derivatives thereof | |
| JP2008521883A (en) | Inflammation treatment | |
| TW202241415A (en) | A pathway-modulator, pharmaceutical composition comprising the same, use thereof, and method of treatment by using the same | |
| ES2259552B1 (en) | EMPLOYMENT OF 5'-METHYLTIOENENINE (MTA) IN THE PREVENTION AND / OR TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES AND / OR REPLACEMENT OF TRANSPLANTS. | |
| KR101324647B1 (en) | Composition for treating or preventing of multiple sclerosis and screening thereof | |
| EP3621628A1 (en) | Method for treating multiple sclerosis using arsenic trioxide | |
| EP4082537A1 (en) | Anti-obesity composition containing colchicine and metformin as effective agents | |
| TWI620566B (en) | Uses of a triterpenoid mixture for treating multiple sclerosis | |
| WO2024246686A1 (en) | Treatment for amyotrophic lateral sclerosis (als) | |
| CN112933097A (en) | Application of pharmaceutical composition in preparation of proinflammatory interleukin inhibitor | |
| Patton | Importance of IL-4 during acute schistosomiasis | |
| US20160120853A1 (en) | Tacrolimus and analogues thereof for medical use | |
| WO2016019296A1 (en) | Therapeutic applications of lnfpiii |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20130318 |